JPH1067676A - 癌治療用薬剤 - Google Patents
癌治療用薬剤Info
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- JPH1067676A JPH1067676A JP8344073A JP34407396A JPH1067676A JP H1067676 A JPH1067676 A JP H1067676A JP 8344073 A JP8344073 A JP 8344073A JP 34407396 A JP34407396 A JP 34407396A JP H1067676 A JPH1067676 A JP H1067676A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 癌細胞又は腫瘍細胞を殺傷又は増殖を阻害す
る薬剤組成物を提供すること。 【解決手段】 ＳＯＭ2 ペプチドと、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ
2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1 のうち
少なくとも４つのペプチドとの薬学的に有効な組み合わ
せを含むことを特徴とする薬剤組成物。
る薬剤組成物を提供すること。 【解決手段】 ＳＯＭ2 ペプチドと、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ
2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1 のうち
少なくとも４つのペプチドとの薬学的に有効な組み合わ
せを含むことを特徴とする薬剤組成物。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はペプチド類似体の組
み合わせに関するものである。この組み合わせを、結
腸、直腸、肺、胸、及び腎臓における癌細胞の非制御的
増殖を妨げるために用いることが可能である。この組み
合わせを、結腸、直腸、肺、胸、及び腎臓における癌の
治療、並びに白血病及びリンパ腫の治療に使用すること
が可能である。本発明はまたかかる類似体の組み合わせ
を含有する薬剤組成物に関するものである。
み合わせに関するものである。この組み合わせを、結
腸、直腸、肺、胸、及び腎臓における癌細胞の非制御的
増殖を妨げるために用いることが可能である。この組み
合わせを、結腸、直腸、肺、胸、及び腎臓における癌の
治療、並びに白血病及びリンパ腫の治療に使用すること
が可能である。本発明はまたかかる類似体の組み合わせ
を含有する薬剤組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】科学文献における報告には、ＶＩＰ、ソ
マトスタチン、及びボンベシン等のペプチドに対する受
容体がある癌細胞に見いだされることが開示されてい
る。以下の表１には、ＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベ
シン、及びサブスタンスＰを分泌し、それらに対する受
容体を有する癌細胞のリストが示されている。
マトスタチン、及びボンベシン等のペプチドに対する受
容体がある癌細胞に見いだされることが開示されてい
る。以下の表１には、ＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベ
シン、及びサブスタンスＰを分泌し、それらに対する受
容体を有する癌細胞のリストが示されている。
【０００３】
【表１】
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ヒト又は他
の動物における腫瘍細胞又は癌細胞を殺傷する又は増殖
を阻害する、或いはヒト又は他の動物におけるＶＩＰ、
ソマトスタチン、ボンベシン若しくはサブスタンスＰの
過剰分泌、又はＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン若
しくはサブスタンスＰの組み合わせの過剰分泌、を防
止、阻害、又は調整するための薬剤又は薬剤組成物を提
供することを目的とする。
の動物における腫瘍細胞又は癌細胞を殺傷する又は増殖
を阻害する、或いはヒト又は他の動物におけるＶＩＰ、
ソマトスタチン、ボンベシン若しくはサブスタンスＰの
過剰分泌、又はＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン若
しくはサブスタンスＰの組み合わせの過剰分泌、を防
止、阻害、又は調整するための薬剤又は薬剤組成物を提
供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は上述のように癌
細胞と同様に腫瘍細胞を殺傷し増殖を抑制するのに有用
な薬剤組成物を提供するものである。また、かかる薬剤
組成物は、ＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン、及び
サブスタンスＰ、或いはＶＩＰ、ソマトスタチン、ボン
ベシン、又はサブスタンスＰの何れか組み合わせの過剰
分泌を妨げ、抑制し、又は調節することにも有用であ
る。かかる組成物は、ソマトスタチン、ＶＩＰ、ボンベ
シン、及びサブスタンスＰのペプチド類似体の薬学的効
果を有する組み合わせを適切に含む、又はそれらよりな
る、又は実質的にそれらからなる。ペプチド類似体につ
いては以下により詳細に記述されるが、それら特に記述
されたものと機能的に交換可能な構成成分もまた特許請
求された薬剤組成物中に使用することが可能である。よ
り詳細にはかかる薬剤組成物は、ソマトスタチンの類似
体の１つと、第一ＶＩＰ類似体、第二ＶＩＰ類似体、第
三ＶＩＰ類似体、ソマトスタチンの他の類似体、ボンベ
シン類似体、及びサブスタンスＰ類似体よりなる群から
選択される少なくとも４つのペプチドとを適切に含む、
又はそれらよりなる、又は実質的にそれらからなる。よ
り詳細には、かかる組成物は、ＳＯＭ2(ソマトスタチン
の類似体の１つ）と、以下のペプチド：ＶＩＰ1(ＶＩＰ
類似体）、ＶＩＰ2(ＶＩＰ受容体結合インヒビター）、
ＶＩＰ3(ＶＩＰ受容体アンタゴニスト）、ＳＯＭ1(ソマ
トスタチン類似体（Cys2, Tyr3, Orn5, Pen5の４つの頭
文字をとって”ＣＴＯＰ”とも略される）ＢＯＭ1(ボン
ベシン類似体) 、及びＳＰ 1(サブスタンスＰ類似体) の
うち少なくとも４つとの薬学的効果を有する組み合わせ
を適切に含む、又はそれらよりなる、又は実質的にそれ
らからなる。好ましい具体例において、薬学的に許容で
きる担体、希釈剤、又は溶剤が使用される。本発明は癌
又は他の腫瘍に冒されたヒト、ほ乳類、又は他の動物に
対する治療方法を提供する。この方法は、癌又は腫瘍細
胞を殺傷又はその増殖を阻害するように薬学的効果量の
薬剤組成物を投与することを適切に含む、又はそれらよ
りなる、又は実質的にそれらからなる。本発明の治療方
法は、結腸及び直腸の癌又は腫瘍の治療に特に有用であ
る。また、本発明はＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシ
ン、サブスタンスＰ或いはＶＩＰ、ソマトスタチン、ボ
ンベシン、又はサブスタンスＰの何れかの組み合わせの
過剰分泌に苦しむヒト、ほ乳類、又は他の動物の治療方
法を提供する。かかる方法は、ＶＩＰ、ソマトスタチ
ン、ボンベシン、サブスタンスＰ或いはＶＩＰ、ソマト
スタチン、ボンベシン、又はサブスタンスＰの何れかの
組み合わせの過剰分泌を妨げ、阻害し、又は調節するよ
うに薬学的効果量の薬剤組成物を投与することを適切に
含む、又はそれらよりなる、又は実質的にそれらからな
る。
細胞と同様に腫瘍細胞を殺傷し増殖を抑制するのに有用
な薬剤組成物を提供するものである。また、かかる薬剤
組成物は、ＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン、及び
サブスタンスＰ、或いはＶＩＰ、ソマトスタチン、ボン
ベシン、又はサブスタンスＰの何れか組み合わせの過剰
分泌を妨げ、抑制し、又は調節することにも有用であ
る。かかる組成物は、ソマトスタチン、ＶＩＰ、ボンベ
シン、及びサブスタンスＰのペプチド類似体の薬学的効
果を有する組み合わせを適切に含む、又はそれらよりな
る、又は実質的にそれらからなる。ペプチド類似体につ
いては以下により詳細に記述されるが、それら特に記述
されたものと機能的に交換可能な構成成分もまた特許請
求された薬剤組成物中に使用することが可能である。よ
り詳細にはかかる薬剤組成物は、ソマトスタチンの類似
体の１つと、第一ＶＩＰ類似体、第二ＶＩＰ類似体、第
三ＶＩＰ類似体、ソマトスタチンの他の類似体、ボンベ
シン類似体、及びサブスタンスＰ類似体よりなる群から
選択される少なくとも４つのペプチドとを適切に含む、
又はそれらよりなる、又は実質的にそれらからなる。よ
り詳細には、かかる組成物は、ＳＯＭ2(ソマトスタチン
の類似体の１つ）と、以下のペプチド：ＶＩＰ1(ＶＩＰ
類似体）、ＶＩＰ2(ＶＩＰ受容体結合インヒビター）、
ＶＩＰ3(ＶＩＰ受容体アンタゴニスト）、ＳＯＭ1(ソマ
トスタチン類似体（Cys2, Tyr3, Orn5, Pen5の４つの頭
文字をとって”ＣＴＯＰ”とも略される）ＢＯＭ1(ボン
ベシン類似体) 、及びＳＰ 1(サブスタンスＰ類似体) の
うち少なくとも４つとの薬学的効果を有する組み合わせ
を適切に含む、又はそれらよりなる、又は実質的にそれ
らからなる。好ましい具体例において、薬学的に許容で
きる担体、希釈剤、又は溶剤が使用される。本発明は癌
又は他の腫瘍に冒されたヒト、ほ乳類、又は他の動物に
対する治療方法を提供する。この方法は、癌又は腫瘍細
胞を殺傷又はその増殖を阻害するように薬学的効果量の
薬剤組成物を投与することを適切に含む、又はそれらよ
りなる、又は実質的にそれらからなる。本発明の治療方
法は、結腸及び直腸の癌又は腫瘍の治療に特に有用であ
る。また、本発明はＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシ
ン、サブスタンスＰ或いはＶＩＰ、ソマトスタチン、ボ
ンベシン、又はサブスタンスＰの何れかの組み合わせの
過剰分泌に苦しむヒト、ほ乳類、又は他の動物の治療方
法を提供する。かかる方法は、ＶＩＰ、ソマトスタチ
ン、ボンベシン、サブスタンスＰ或いはＶＩＰ、ソマト
スタチン、ボンベシン、又はサブスタンスＰの何れかの
組み合わせの過剰分泌を妨げ、阻害し、又は調節するよ
うに薬学的効果量の薬剤組成物を投与することを適切に
含む、又はそれらよりなる、又は実質的にそれらからな
る。
【０００６】我々はＶＩＰ（バソアクティブ・インテス
ティナル・ペプチド）、ソマトスタチン、ボンベシン、
及びサブスタンスＰが少なくとも幾つかのヒト腫瘍及び
癌細胞から分泌され、それらの細胞にはかかるペプチド
の結合部位が存在することを観察した。特に、間接蛍光
抗体法により研究された数多くの成長調節ペプチドの中
で、その４つのペプチド（つまり、バソアクティブ・イ
ンテスティナル・ペプチド（ＶＩＰ）、ソマトスタチ
ン、ボンベシン、及びサブスタンスＰ）が腫瘍細胞に結
合することが示された。（この明細書中、「ペプチドホ
ルモン」、「成長因子」、「成長調節ペプチド」、及び
「ペプチド」という語彙は、それぞれ、ＶＩＰ、ソマト
スタチン、サブスタンスＰ、及びボンベシンを指す）。
それは、腫瘍細胞によりペプチドが分泌される箇所には
細胞増殖のためのオートクリン(autocrine) 機構が存在
し、同じ細胞種上の特異的受容体を通して細胞増殖につ
ながる信号を転換するためかも知れない。
ティナル・ペプチド）、ソマトスタチン、ボンベシン、
及びサブスタンスＰが少なくとも幾つかのヒト腫瘍及び
癌細胞から分泌され、それらの細胞にはかかるペプチド
の結合部位が存在することを観察した。特に、間接蛍光
抗体法により研究された数多くの成長調節ペプチドの中
で、その４つのペプチド（つまり、バソアクティブ・イ
ンテスティナル・ペプチド（ＶＩＰ）、ソマトスタチ
ン、ボンベシン、及びサブスタンスＰ）が腫瘍細胞に結
合することが示された。（この明細書中、「ペプチドホ
ルモン」、「成長因子」、「成長調節ペプチド」、及び
「ペプチド」という語彙は、それぞれ、ＶＩＰ、ソマト
スタチン、サブスタンスＰ、及びボンベシンを指す）。
それは、腫瘍細胞によりペプチドが分泌される箇所には
細胞増殖のためのオートクリン(autocrine) 機構が存在
し、同じ細胞種上の特異的受容体を通して細胞増殖につ
ながる信号を転換するためかも知れない。
【０００７】以下により詳細に示されるように、腫瘍細
胞成長及び生存に対するソマトスタチン、ＶＩＰ、ボン
ベシン、及びサブスタンスＰの類似体の影響は異なるア
ッセイ系を使用し研究したものである。ＶＩＰ1 、ＶＩ
Ｐ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 、ＢＯＭ1 及びＳ
Ｐ1 の７つの類似体のアミノ酸配列は表２に与えられて
いる。以下に詳細に説明されるように、これら７つの類
似体の組み合わせはMuJ-7 として知られている。付属の
配列リストセクションにおいて、ＶＩＰ1(ＶＩＰ類似
体）のアミノ酸配列は配列ＩＤ番号：１であり、ＶＩＰ
2(ＶＩＰ受容体結合インヒビター）のアミノ酸配列は配
列ＩＤ番号：２である。かかる類似体は手作業及び従来
のペプチド合成器を使用して合成される。ペプチドの純
度は高性能液体クロマトグラフィー及びアミノ酸分析に
より確立され、一方、その分析は配列分析器により再確
認される。
胞成長及び生存に対するソマトスタチン、ＶＩＰ、ボン
ベシン、及びサブスタンスＰの類似体の影響は異なるア
ッセイ系を使用し研究したものである。ＶＩＰ1 、ＶＩ
Ｐ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 、ＢＯＭ1 及びＳ
Ｐ1 の７つの類似体のアミノ酸配列は表２に与えられて
いる。以下に詳細に説明されるように、これら７つの類
似体の組み合わせはMuJ-7 として知られている。付属の
配列リストセクションにおいて、ＶＩＰ1(ＶＩＰ類似
体）のアミノ酸配列は配列ＩＤ番号：１であり、ＶＩＰ
2(ＶＩＰ受容体結合インヒビター）のアミノ酸配列は配
列ＩＤ番号：２である。かかる類似体は手作業及び従来
のペプチド合成器を使用して合成される。ペプチドの純
度は高性能液体クロマトグラフィー及びアミノ酸分析に
より確立され、一方、その分析は配列分析器により再確
認される。
【０００８】
【表２】
【０００９】腫瘍細胞により合成され分泌された成長因
子を異なるアッセイ系により確認した。例えば、癌細胞
の非制御増殖に関与するペプチドホルモンは、確立され
た細胞株において実験を行うことにより確認した。得ら
れた結果は、モデル組織として使用されたヒト結腸アデ
ノ癌腫の原発性腫瘍細胞−それに対し我々は細胞株を確
立する新規な方法を向上させたのであるが−における実
験から得られたデータと一致した。細胞株を確立する新
規方法を記述した以下の文献を参照として引用する：Ja
ggi, M., Mukherjee, R., "Establishment of Tumorige
nic Cell Linesfrom Biopsies of Human Colon Adenoca
rcinomas," Journal of Vasic & Applied Biomedicine,
3(4): 27-35 (1995)。
子を異なるアッセイ系により確認した。例えば、癌細胞
の非制御増殖に関与するペプチドホルモンは、確立され
た細胞株において実験を行うことにより確認した。得ら
れた結果は、モデル組織として使用されたヒト結腸アデ
ノ癌腫の原発性腫瘍細胞−それに対し我々は細胞株を確
立する新規な方法を向上させたのであるが−における実
験から得られたデータと一致した。細胞株を確立する新
規方法を記述した以下の文献を参照として引用する：Ja
ggi, M., Mukherjee, R., "Establishment of Tumorige
nic Cell Linesfrom Biopsies of Human Colon Adenoca
rcinomas," Journal of Vasic & Applied Biomedicine,
3(4): 27-35 (1995)。
【００１０】ペプチドにおけるサンドイッチ形式のＥＬ
ＩＳＡが発明者により向上され使用された。サンドイッ
チ形式ＥＬＩＳＡを記述した以下の文献を参照として引
用する：Jaggi, M., Mukherjee R., "New, Sensitive a
nd Specific ELISA for theDetection of Neuropeptide
s in Culture Supernatants," Journal of Immunoassa
y, 15(2): 129-46 (1994) 。ペプチドの確認は逆相高速
液体クロマトグラフィー及び配列分析を使用して行われ
た。結腸の原発性ヒトアデノ癌腫腫瘍細胞におけるＶＩ
Ｐ、ソマトスタチン、サブスタンスＰ、及びボンベシン
に対する結合部位は受容体−リガンドアッセイを行うこ
とにより実証した。ＶＩＰ及びソマトスタチンにおいて
は２つのクラスの結合部位（高アフィニティ及び準高ア
フィニティ）が証明され、ボンベシンに対しては１つの
クラスの結合部位（高アフィニティ）が証明され、サブ
スタンスＰに対しては１つのクラスの結合部位（準高ア
フィニティ）が証明された。
ＩＳＡが発明者により向上され使用された。サンドイッ
チ形式ＥＬＩＳＡを記述した以下の文献を参照として引
用する：Jaggi, M., Mukherjee R., "New, Sensitive a
nd Specific ELISA for theDetection of Neuropeptide
s in Culture Supernatants," Journal of Immunoassa
y, 15(2): 129-46 (1994) 。ペプチドの確認は逆相高速
液体クロマトグラフィー及び配列分析を使用して行われ
た。結腸の原発性ヒトアデノ癌腫腫瘍細胞におけるＶＩ
Ｐ、ソマトスタチン、サブスタンスＰ、及びボンベシン
に対する結合部位は受容体−リガンドアッセイを行うこ
とにより実証した。ＶＩＰ及びソマトスタチンにおいて
は２つのクラスの結合部位（高アフィニティ及び準高ア
フィニティ）が証明され、ボンベシンに対しては１つの
クラスの結合部位（高アフィニティ）が証明され、サブ
スタンスＰに対しては１つのクラスの結合部位（準高ア
フィニティ）が証明された。
【００１１】表３、４、５及び６はヒト結腸アデノ癌腫
の８つの異なる原発性腫瘍培地におけるＶＩＰ、ソマト
スタチン、ボンベシン、及びサブスタンスＰの受容体ア
フィニティのデータを示すものである。これらのデータ
は125I−ＶＩＰ、125I−ソマトスタチン、125I−ボンベ
シン、及び125I−サブスタンスＰを使用した受容体−リ
ガンドアッセイを行うことにより得られたものである。
受容体−リガンドアッセイの詳細については、「プロト
コールの説明」と題された以下のセクションを参照され
たい。表３、４、５及び６において、ＫD （Ｍ）は単位
がモル（Ｍ）である解離定数を表し、Ｒ（Ｍ／Ｌ）は単
位がモル／リットル（Ｍ／Ｌ）である受容体数（つま
り、１腫瘍細胞当りの受容体数）を表す。以下の「プロ
トコールの説明」のセクションに記述されるとおり、Ｋ
D （Ｍ）及びＲ（Ｍ／Ｌ）は、受容体−リガンドアッセ
イからの粗データを使用してスキャッチャード分析を行
うＬＩＧＡＮＤソフトウェアを使用して計算したもので
ある。
の８つの異なる原発性腫瘍培地におけるＶＩＰ、ソマト
スタチン、ボンベシン、及びサブスタンスＰの受容体ア
フィニティのデータを示すものである。これらのデータ
は125I−ＶＩＰ、125I−ソマトスタチン、125I−ボンベ
シン、及び125I−サブスタンスＰを使用した受容体−リ
ガンドアッセイを行うことにより得られたものである。
受容体−リガンドアッセイの詳細については、「プロト
コールの説明」と題された以下のセクションを参照され
たい。表３、４、５及び６において、ＫD （Ｍ）は単位
がモル（Ｍ）である解離定数を表し、Ｒ（Ｍ／Ｌ）は単
位がモル／リットル（Ｍ／Ｌ）である受容体数（つま
り、１腫瘍細胞当りの受容体数）を表す。以下の「プロ
トコールの説明」のセクションに記述されるとおり、Ｋ
D （Ｍ）及びＲ（Ｍ／Ｌ）は、受容体−リガンドアッセ
イからの粗データを使用してスキャッチャード分析を行
うＬＩＧＡＮＤソフトウェアを使用して計算したもので
ある。
【００１２】約１０-9から約１０-10 の範囲のＫ
D （Ｍ）値は高アフィニティ受容体を示し、約１０-6か
ら約１０-8の範囲のＫD （Ｍ）値は準高アフィニティ受
容体を示すものである。腫瘍細胞にはＶＩＰに対して準
高アフィニティを有する受容体と同様にＶＩＰに対して
高アフィニティを有する受容体も存在するという理由に
より、表３ではそれぞれの原発性腫瘍培地について２つ
のＫD （Ｍ）値及び２つのＲ（Ｍ／Ｌ）値が示されてい
る。腫瘍細胞にはソマトスタチンに対して準高アフィニ
ティを有する受容体と同様にソマトスタチンに対して高
アフィニティを有する受容体も存在するという理由によ
り、表４ではそれぞれの原発性腫瘍培地について２つの
ＫD （Ｍ）値及び２つのＲ（Ｍ／Ｌ）値が示されてい
る。腫瘍細胞にはボンベシンに対して高アフィニティを
有する受容体のみしか存在しないという理由により、表
５ではそれぞれの原発性腫瘍培地について１つのＫ
D （Ｍ）値及び１つのＲ（Ｍ／Ｌ）値のみが示されてい
る。腫瘍細胞にはサブスタンスＰに対して準高アフィニ
ティを有する受容体のみしか存在しないという理由によ
り、表６ではそれぞれの原発性腫瘍培地について１つの
ＫD （Ｍ）値及び１つのＲ（Ｍ／Ｌ）値のみが示されて
いる。
D （Ｍ）値は高アフィニティ受容体を示し、約１０-6か
ら約１０-8の範囲のＫD （Ｍ）値は準高アフィニティ受
容体を示すものである。腫瘍細胞にはＶＩＰに対して準
高アフィニティを有する受容体と同様にＶＩＰに対して
高アフィニティを有する受容体も存在するという理由に
より、表３ではそれぞれの原発性腫瘍培地について２つ
のＫD （Ｍ）値及び２つのＲ（Ｍ／Ｌ）値が示されてい
る。腫瘍細胞にはソマトスタチンに対して準高アフィニ
ティを有する受容体と同様にソマトスタチンに対して高
アフィニティを有する受容体も存在するという理由によ
り、表４ではそれぞれの原発性腫瘍培地について２つの
ＫD （Ｍ）値及び２つのＲ（Ｍ／Ｌ）値が示されてい
る。腫瘍細胞にはボンベシンに対して高アフィニティを
有する受容体のみしか存在しないという理由により、表
５ではそれぞれの原発性腫瘍培地について１つのＫ
D （Ｍ）値及び１つのＲ（Ｍ／Ｌ）値のみが示されてい
る。腫瘍細胞にはサブスタンスＰに対して準高アフィニ
ティを有する受容体のみしか存在しないという理由によ
り、表６ではそれぞれの原発性腫瘍培地について１つの
ＫD （Ｍ）値及び１つのＲ（Ｍ／Ｌ）値のみが示されて
いる。
【００１３】
【表３】
【００１４】
【表４】
【００１５】
【表５】
【００１６】
【表６】
【００１７】本発明の範囲内の組み合わせの１つの例
は、ＳＯＭ2 ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯ
Ｍ1 、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1 を含む。これ以降MuJ-7 と
して参照される１つの組み合わせは以下の７つのペプチ
ド類似体を用いて調製したものである：（１）約３４６
４．９の分子量及び約１０-7Ｍの濃度を有するＶＩＰ
1(ＶＩＰ類似体）、（２）約１０２７．５５の分子量及
び約１０-8Ｍの濃度を有するＶＩＰ2(ＶＩＰ受容体結合
インヒビター）、（３）約３３４２．０９の分子量及び
約１０-8Ｍの濃度を有するＶＩＰ3(ＶＩＰ受容体アンタ
ゴニスト）、（４）約１０６１．５９の分子量及び約１
０-9Ｍの濃度を有するＳＯＭ1(ソマトスタチン類似体
（ＣＴＯＰ））、（５）約１６３７．９の分子量及び約
１０-8Ｍの濃度を有するＳＯＭ2(ソマトスタチンの類似
体）、（６）約９８３．５５の分子量及び約１０-8Ｍの
濃度を有するＢＯＭ1(ボンベシン類似体) 、及び（７）
約１５１５．８３の分子量及び約１０-8Ｍの濃度を有す
るＳＰ1(サブスタンスＰ類似体) 。前文はMuJ-7 を構成
する７つの類似体の好ましい濃度を説明するものであっ
て、７つの類似体それぞれの濃度が約１０-6Ｍから１０
-12 Ｍまでの範囲であれば、MuJ-7 の効果があると考え
られる。
は、ＳＯＭ2 ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯ
Ｍ1 、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1 を含む。これ以降MuJ-7 と
して参照される１つの組み合わせは以下の７つのペプチ
ド類似体を用いて調製したものである：（１）約３４６
４．９の分子量及び約１０-7Ｍの濃度を有するＶＩＰ
1(ＶＩＰ類似体）、（２）約１０２７．５５の分子量及
び約１０-8Ｍの濃度を有するＶＩＰ2(ＶＩＰ受容体結合
インヒビター）、（３）約３３４２．０９の分子量及び
約１０-8Ｍの濃度を有するＶＩＰ3(ＶＩＰ受容体アンタ
ゴニスト）、（４）約１０６１．５９の分子量及び約１
０-9Ｍの濃度を有するＳＯＭ1(ソマトスタチン類似体
（ＣＴＯＰ））、（５）約１６３７．９の分子量及び約
１０-8Ｍの濃度を有するＳＯＭ2(ソマトスタチンの類似
体）、（６）約９８３．５５の分子量及び約１０-8Ｍの
濃度を有するＢＯＭ1(ボンベシン類似体) 、及び（７）
約１５１５．８３の分子量及び約１０-8Ｍの濃度を有す
るＳＰ1(サブスタンスＰ類似体) 。前文はMuJ-7 を構成
する７つの類似体の好ましい濃度を説明するものであっ
て、７つの類似体それぞれの濃度が約１０-6Ｍから１０
-12 Ｍまでの範囲であれば、MuJ-7 の効果があると考え
られる。
【００１８】MuJ-7 は次のようにして調製することが可
能である。７つペプチド類似体それぞれのストック溶液
を約７から７．４のｐＨで調製する。下記の試験を行う
ために無菌燐酸緩衝溶液を使用したのであるが、ＲＰＭ
Ｉ １６４０、緩衝溶液、等張ＮａＣｌ、リンガー溶
液、水（注射用）、蒸留水、ポリエチレングリコール
（無希釈又は水溶液）、２％Ｔｗｅｅｎ水溶液、５０％
ジメチルスルホキシド水溶液、平衡塩類液、グリセロー
ル、及び静脈投与に適切な他の従来の液体、等の他の希
釈液を使用してもかまわない。それぞれのストック溶液
のｐＨを約７から約７．４に調節するために、１ＮのＨ
ＣｌをｐＨを低下させるために、又は１ＮのＮａＯＨを
ｐＨを増加させるために使用することができる（勿論、
ｐＨを調節するための他の従来の試薬を使用することも
可能である）。それぞれのストック溶液中のペプチド類
似体の濃度は約１０-3Ｍである。７つのペプチド類似体
のアリコットはMuJ-7 製剤が７つのペプチド類似体のそ
れぞれをほぼ同量含有するように混合される。MuJ-7 中
においてＶＩＰ1 の濃度は約１０-7Ｍであり、ＶＩＰ2
の濃度は約１０-8Ｍであり、ＶＩＰ3 の濃度は約１０-8
Ｍであり、ＳＯＭ1 の濃度は約１０-9Ｍであり、ＳＯＭ
2 の濃度は約１０-8Ｍであり、ＢＯＭ1 の濃度は約１０
-8Ｍであり、及びＳＰ1 の濃度は約１０-8Ｍである。１
つの具体例において、MuJ-7 溶液のｐＨは約７．０から
約７．４の範囲であることができる。この範囲のｐＨを
得るために１ＮのＨＣｌをｐＨを低下させるために、又
は１ＮのＮａＯＨをｐＨを増加させるために使用するこ
とができる（勿論、ｐＨを調節するための他の従来の試
薬を使用することも可能である）。
能である。７つペプチド類似体それぞれのストック溶液
を約７から７．４のｐＨで調製する。下記の試験を行う
ために無菌燐酸緩衝溶液を使用したのであるが、ＲＰＭ
Ｉ １６４０、緩衝溶液、等張ＮａＣｌ、リンガー溶
液、水（注射用）、蒸留水、ポリエチレングリコール
（無希釈又は水溶液）、２％Ｔｗｅｅｎ水溶液、５０％
ジメチルスルホキシド水溶液、平衡塩類液、グリセロー
ル、及び静脈投与に適切な他の従来の液体、等の他の希
釈液を使用してもかまわない。それぞれのストック溶液
のｐＨを約７から約７．４に調節するために、１ＮのＨ
ＣｌをｐＨを低下させるために、又は１ＮのＮａＯＨを
ｐＨを増加させるために使用することができる（勿論、
ｐＨを調節するための他の従来の試薬を使用することも
可能である）。それぞれのストック溶液中のペプチド類
似体の濃度は約１０-3Ｍである。７つのペプチド類似体
のアリコットはMuJ-7 製剤が７つのペプチド類似体のそ
れぞれをほぼ同量含有するように混合される。MuJ-7 中
においてＶＩＰ1 の濃度は約１０-7Ｍであり、ＶＩＰ2
の濃度は約１０-8Ｍであり、ＶＩＰ3 の濃度は約１０-8
Ｍであり、ＳＯＭ1 の濃度は約１０-9Ｍであり、ＳＯＭ
2 の濃度は約１０-8Ｍであり、ＢＯＭ1 の濃度は約１０
-8Ｍであり、及びＳＰ1 の濃度は約１０-8Ｍである。１
つの具体例において、MuJ-7 溶液のｐＨは約７．０から
約７．４の範囲であることができる。この範囲のｐＨを
得るために１ＮのＨＣｌをｐＨを低下させるために、又
は１ＮのＮａＯＨをｐＨを増加させるために使用するこ
とができる（勿論、ｐＨを調節するための他の従来の試
薬を使用することも可能である）。
【００１９】MuJ-7 はヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍
細胞に対して試験され、MuJ-7 を構成するペプチド類似
体のそれぞれについてもヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞及
び他の癌細胞株に対して試験を行った。ヒト結腸アデノ
癌腫の原発性腫瘍細胞における結果は表７にまとめられ
ており、他の腫瘍又は癌細胞株における結果は表８にま
とめられている。表７及び８はそれぞれのペプチド類似
体及びMuJ-7 における最大細胞毒性を示している。
細胞に対して試験され、MuJ-7 を構成するペプチド類似
体のそれぞれについてもヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞及
び他の癌細胞株に対して試験を行った。ヒト結腸アデノ
癌腫の原発性腫瘍細胞における結果は表７にまとめられ
ており、他の腫瘍又は癌細胞株における結果は表８にま
とめられている。表７及び８はそれぞれのペプチド類似
体及びMuJ-7 における最大細胞毒性を示している。
【００２０】表７及び８に記載されているMuJ-7 及びそ
れぞれのペプチド類似体における細胞毒性は、テトラゾ
リウム塩の１種であるＭＴＴ(3-(4,5-ジメチルチアゾル
-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド）が
代謝活性細胞によって吸収され、活性ミトコンドリアに
より青色ホルマザン生成物に代謝されてそれが分光光度
計により測定されることを基礎とする１日ＭＴＴ細胞毒
性アッセイを行うことにより試験されたものである。Ｍ
ＴＴアッセイについては、Mosmann, T., "Rapid Colori
metric Assay for Cellular Growth and Survival: App
lication to Proliferation and Cytotoxicity Assay
s", Journal of Immunological Methods 65: 55-63 (19
83) を参照されたい。１日ＭＴＴ細胞毒性アッセイに必
要なＭＴＴストック溶液を調製するために、ＭＴＴ(3-
(4,5-ジメチルチアゾル-2- イル)-2,5-ジフェニルテト
ラゾリウムブロミド）（シグマ社カタログNo. M 2128)
をｐＨ７．４の燐酸緩衝溶液に溶かして５ｍｇ／ｍｌの
濃度のＭＴＴを得、小量の不溶残留物を除去し滅菌する
ために得られた混合物を０．２２μのフィルタを通して
ろ過し、ろ過した混合物をＭＴＴストック溶液（２０μ
ｌ／２００μｌ溶媒）とした。簡潔に説明すると、それ
ぞれのタイプの腫瘍細胞について約２００００から５０
０００の細胞を９６ウェルの培養プレートに植え、それ
ぞれのペプチド類似体又はMuJ-7 をＣＯ2 インキュベー
タ中で約２４時間培養した。ペプチド類似体及びMuJ-7
の濃度は表７及び８に記載されている。（表８におい
て、ペプチド類似体の濃度は１０-6Ｍ、１０-7Ｍ及び１
０-8Ｍについて記載されている）。ペプチド類似体又は
MuJ-7 により処理しない対照についても同様に培養し
た。約１００μｇ（２０μｌ）のＭＴＴをそれぞれのウ
ェルに加えることにより約２４時間後にアッセイを終了
させ、次に約１時間更に培養し、最後に約５０μｌの１
０％ＳＤＳ−０．０１ＮＨＣｌをそれぞれのウェルに添
加して細胞を溶解させてホルマザンを溶かした。３７℃
で約１時間培養した後、分光光度計により５４０ｎｍの
値を読み、以下の式： 細胞毒性率＝１００×［１−（Ｘ／Ｒ1)］ （ここでＸ＝（処理検体の５４０ｎｍにおける吸収度）
−（ブランクの５４０ｎｍにおける吸収度）であり、Ｒ
1 ＝（未処理対照の５４０ｎｍにおける吸収度）−（ブ
ランクの５４０ｎｍにおける吸収度）である）を用いて
細胞毒性率（つまり、殺傷率又は阻害率）を計算した。
従って、ここに報告されるＭＴＴ細胞毒性アッセイのそ
れぞれにおいて、細胞毒性は上記の式に従って計算さ
れ、未処理対照の増殖度を１００％の値とすることを基
礎とするものである。
れぞれのペプチド類似体における細胞毒性は、テトラゾ
リウム塩の１種であるＭＴＴ(3-(4,5-ジメチルチアゾル
-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド）が
代謝活性細胞によって吸収され、活性ミトコンドリアに
より青色ホルマザン生成物に代謝されてそれが分光光度
計により測定されることを基礎とする１日ＭＴＴ細胞毒
性アッセイを行うことにより試験されたものである。Ｍ
ＴＴアッセイについては、Mosmann, T., "Rapid Colori
metric Assay for Cellular Growth and Survival: App
lication to Proliferation and Cytotoxicity Assay
s", Journal of Immunological Methods 65: 55-63 (19
83) を参照されたい。１日ＭＴＴ細胞毒性アッセイに必
要なＭＴＴストック溶液を調製するために、ＭＴＴ(3-
(4,5-ジメチルチアゾル-2- イル)-2,5-ジフェニルテト
ラゾリウムブロミド）（シグマ社カタログNo. M 2128)
をｐＨ７．４の燐酸緩衝溶液に溶かして５ｍｇ／ｍｌの
濃度のＭＴＴを得、小量の不溶残留物を除去し滅菌する
ために得られた混合物を０．２２μのフィルタを通して
ろ過し、ろ過した混合物をＭＴＴストック溶液（２０μ
ｌ／２００μｌ溶媒）とした。簡潔に説明すると、それ
ぞれのタイプの腫瘍細胞について約２００００から５０
０００の細胞を９６ウェルの培養プレートに植え、それ
ぞれのペプチド類似体又はMuJ-7 をＣＯ2 インキュベー
タ中で約２４時間培養した。ペプチド類似体及びMuJ-7
の濃度は表７及び８に記載されている。（表８におい
て、ペプチド類似体の濃度は１０-6Ｍ、１０-7Ｍ及び１
０-8Ｍについて記載されている）。ペプチド類似体又は
MuJ-7 により処理しない対照についても同様に培養し
た。約１００μｇ（２０μｌ）のＭＴＴをそれぞれのウ
ェルに加えることにより約２４時間後にアッセイを終了
させ、次に約１時間更に培養し、最後に約５０μｌの１
０％ＳＤＳ−０．０１ＮＨＣｌをそれぞれのウェルに添
加して細胞を溶解させてホルマザンを溶かした。３７℃
で約１時間培養した後、分光光度計により５４０ｎｍの
値を読み、以下の式： 細胞毒性率＝１００×［１−（Ｘ／Ｒ1)］ （ここでＸ＝（処理検体の５４０ｎｍにおける吸収度）
−（ブランクの５４０ｎｍにおける吸収度）であり、Ｒ
1 ＝（未処理対照の５４０ｎｍにおける吸収度）−（ブ
ランクの５４０ｎｍにおける吸収度）である）を用いて
細胞毒性率（つまり、殺傷率又は阻害率）を計算した。
従って、ここに報告されるＭＴＴ細胞毒性アッセイのそ
れぞれにおいて、細胞毒性は上記の式に従って計算さ
れ、未処理対照の増殖度を１００％の値とすることを基
礎とするものである。
【００２１】
【表７】
【００２２】
【表８】
【００２３】表８において、K562細胞はヒト白血病細胞
であり、MOLT-4細胞はヒトリンパ腫細胞であり、L132細
胞はヒト肺癌腫細胞であり、PC3 細胞はヒト膵臓腫瘍細
胞であり、MCF-7 はヒト乳癌細胞であり、HuTu80細胞は
ヒト十二指腸腫瘍細胞であり、Hu 746T 細胞はヒト胃癌
細胞であり、SKO.007 細胞はヒト骨髄腫細胞であり、HT
29細胞はヒト結腸腫瘍細胞であり、SW620 細胞はヒト結
腸腫瘍細胞であり、G401 細胞はヒト腎臓癌細胞であ
り、SK.MEL.28 細胞はヒト骨髄腫細胞であり、PTC 細胞
はヒト結腸腫瘍細胞である。
であり、MOLT-4細胞はヒトリンパ腫細胞であり、L132細
胞はヒト肺癌腫細胞であり、PC3 細胞はヒト膵臓腫瘍細
胞であり、MCF-7 はヒト乳癌細胞であり、HuTu80細胞は
ヒト十二指腸腫瘍細胞であり、Hu 746T 細胞はヒト胃癌
細胞であり、SKO.007 細胞はヒト骨髄腫細胞であり、HT
29細胞はヒト結腸腫瘍細胞であり、SW620 細胞はヒト結
腸腫瘍細胞であり、G401 細胞はヒト腎臓癌細胞であ
り、SK.MEL.28 細胞はヒト骨髄腫細胞であり、PTC 細胞
はヒト結腸腫瘍細胞である。
【００２４】表７及び８の結果は、ペプチド類似体（Ｖ
ＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 、Ｂ
ＯＭ1 、及びＳＰ1 ）はMuJ-7 中で組み合わされて使用
された場合により効果的であることを示している。MuJ-
7 を構成する７つのペプチド類似体の５つの異なる準組
み合わせをヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞に対して試験し
た。準組み合わせは表９に記載されている。それぞれの
準組み合わせは１日ＭＴＴ細胞毒性アッセイを行うこと
により試験した。簡潔に説明すると、約２００００から
５００００のヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞を９
６ウェルの培養プレートに植え、それぞれの準組み合わ
せをＣＯ2 インキュベータ中で約２４時間培養した。ペ
プチド類似体の濃度は表９に記載されている。準組み合
わせにより処理しない対照についても同様に培養した。
約１００μｇ（２０μｌ）のＭＴＴをそれぞれのウェル
に加えることにより約２４時間後にアッセイを終了さ
せ、次に約１時間更に培養し、最後に約５０μｌの１０
％ＳＤＳ−０．０１ＮＨＣｌをそれぞれのウェルに添加
して細胞を溶解させてホルマザンを溶かした。３７℃で
約１時間培養した後、分光光度計により５４０ｎｍの値
を読み、上記の式を用いて細胞毒性率（つまり、殺傷
率）を計算した。表９にはそれぞれの準組み合わせにお
ける最大細胞毒性が示されている。
ＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 、Ｂ
ＯＭ1 、及びＳＰ1 ）はMuJ-7 中で組み合わされて使用
された場合により効果的であることを示している。MuJ-
7 を構成する７つのペプチド類似体の５つの異なる準組
み合わせをヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞に対して試験し
た。準組み合わせは表９に記載されている。それぞれの
準組み合わせは１日ＭＴＴ細胞毒性アッセイを行うこと
により試験した。簡潔に説明すると、約２００００から
５００００のヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞を９
６ウェルの培養プレートに植え、それぞれの準組み合わ
せをＣＯ2 インキュベータ中で約２４時間培養した。ペ
プチド類似体の濃度は表９に記載されている。準組み合
わせにより処理しない対照についても同様に培養した。
約１００μｇ（２０μｌ）のＭＴＴをそれぞれのウェル
に加えることにより約２４時間後にアッセイを終了さ
せ、次に約１時間更に培養し、最後に約５０μｌの１０
％ＳＤＳ−０．０１ＮＨＣｌをそれぞれのウェルに添加
して細胞を溶解させてホルマザンを溶かした。３７℃で
約１時間培養した後、分光光度計により５４０ｎｍの値
を読み、上記の式を用いて細胞毒性率（つまり、殺傷
率）を計算した。表９にはそれぞれの準組み合わせにお
ける最大細胞毒性が示されている。
【００２５】
【表９】
【００２６】他の実験においては、他のペプチド類似
体：ソマトスタチン類似体--RC-160、サブスタンスＰ類
似体--サブスタンスＰ1-6 及びスパンチドＩ(Spantide
I)、コレシストキニン類似体--CCK-33、及びグルカゴン
類似体--ヒトグルカゴン、が試験された。これらペプチ
ド類似体のそれぞれはヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍
細胞に対して試験された。それぞれのペプチドは１日Ｍ
ＴＴ細胞毒性アッセイを行うことにより、１０Ｍ-6から
１０Ｍ-10 の間の濃度で試験された。簡潔に説明する
と、約２００００から５００００のヒト結腸アデノ癌腫
の原発性腫瘍細胞を９６ウェルの培養プレートに植え、
それぞれのペプチド類似体をＣＯ2 インキュベータ中で
約２４時間培養した。ペプチド類似体により処理しない
対照についても同様に培養した。約１００μｇ（２０μ
ｌ）のＭＴＴをそれぞれのウェルに加えることにより約
２４時間後にアッセイを終了させ、次に約１時間更に培
養し、最後に約５０μｌの１０％ＳＤＳ−０．０１ＮＨ
Ｃｌをそれぞれのウェルに添加して細胞を溶解させてホ
ルマザンを溶かした。３７℃で約１時間培養した後、分
光光度計により５４０ｎｍの値を読み、上記の式を用い
て細胞毒性率（つまり、殺傷率）を計算した。サブスタ
ンスＰ1-6 による最大細胞毒性は約３５．９％であり、
RC-160による最大細胞毒性は約５８．０％であり、スパ
ンチドＩによる最大細胞毒性は約３０．８％であり、ヒ
トグルカゴンによる最大細胞毒性は約０％であり、CCK-
33による最大細胞毒性は約１７．８％であった。 表１
０には他のＶＩＰ類似体が記載されており、表１１には
他のソマトスタチン類似体が記載されており、表１２に
は他のボンベシン類似体が記載されており、表１３には
他のサブスタンスＰ類似体が記載されている。表１０〜
１３に記載されている類似体はMuJ-7 を構成するペプチ
ド類似体の幾つかと置き換えることが可能である。
体：ソマトスタチン類似体--RC-160、サブスタンスＰ類
似体--サブスタンスＰ1-6 及びスパンチドＩ(Spantide
I)、コレシストキニン類似体--CCK-33、及びグルカゴン
類似体--ヒトグルカゴン、が試験された。これらペプチ
ド類似体のそれぞれはヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍
細胞に対して試験された。それぞれのペプチドは１日Ｍ
ＴＴ細胞毒性アッセイを行うことにより、１０Ｍ-6から
１０Ｍ-10 の間の濃度で試験された。簡潔に説明する
と、約２００００から５００００のヒト結腸アデノ癌腫
の原発性腫瘍細胞を９６ウェルの培養プレートに植え、
それぞれのペプチド類似体をＣＯ2 インキュベータ中で
約２４時間培養した。ペプチド類似体により処理しない
対照についても同様に培養した。約１００μｇ（２０μ
ｌ）のＭＴＴをそれぞれのウェルに加えることにより約
２４時間後にアッセイを終了させ、次に約１時間更に培
養し、最後に約５０μｌの１０％ＳＤＳ−０．０１ＮＨ
Ｃｌをそれぞれのウェルに添加して細胞を溶解させてホ
ルマザンを溶かした。３７℃で約１時間培養した後、分
光光度計により５４０ｎｍの値を読み、上記の式を用い
て細胞毒性率（つまり、殺傷率）を計算した。サブスタ
ンスＰ1-6 による最大細胞毒性は約３５．９％であり、
RC-160による最大細胞毒性は約５８．０％であり、スパ
ンチドＩによる最大細胞毒性は約３０．８％であり、ヒ
トグルカゴンによる最大細胞毒性は約０％であり、CCK-
33による最大細胞毒性は約１７．８％であった。 表１
０には他のＶＩＰ類似体が記載されており、表１１には
他のソマトスタチン類似体が記載されており、表１２に
は他のボンベシン類似体が記載されており、表１３には
他のサブスタンスＰ類似体が記載されている。表１０〜
１３に記載されている類似体はMuJ-7 を構成するペプチ
ド類似体の幾つかと置き換えることが可能である。
【００２７】表２及び表１０〜１３及び「配列リスト」
において、「Pen 」はペニシラミンの略であり、「Ψ」
は代用結合(surrogate bond)を示し、
において、「Pen 」はペニシラミンの略であり、「Ψ」
は代用結合(surrogate bond)を示し、
【００２８】
【外１】
【００２９】は還元結合(reduced bond)を示し、「pGl
u」はパイログルタミン酸（つまり、5-オキソ- プロリ
ン）を示し、「NicLys」はリシン-(ニコチノイル)(つま
り、ニコチンがリシン側鎖のε−アミノ基に結合したも
の）を示し、「MePhe 」はメチルフェニルアラニンを示
し、「Nle 」はノルロイシンを示す。表２及び表１０〜
１３及び請求の範囲に開示されるアミノ酸配列は、表２
及び表１０〜１３に開示されるアミノ酸配列の保守的に
変形された変異種を含むものである。特許請求される発
明は、表２及び表１０〜１３に開示されるアミノ酸配列
をＣ末端及び／又はＮ末端からアミノ酸残基（例えば、
１つ、２つ、又はおそらくはそれ以上のアミノ酸残基）
を取り除いて短くしたとしても依然有効であると考えら
れる。また、特許請求される発明は表２及び表１０〜１
３に開示されるアミノ酸配列のＣ末端及び／又はＮ末端
のアミノ酸残基（例えば、１つ、２つ、又はおそらくは
それ以上のアミノ酸残基）を他のアミノ酸残基で置き換
えたとしても依然有効であると考えられる。
u」はパイログルタミン酸（つまり、5-オキソ- プロリ
ン）を示し、「NicLys」はリシン-(ニコチノイル)(つま
り、ニコチンがリシン側鎖のε−アミノ基に結合したも
の）を示し、「MePhe 」はメチルフェニルアラニンを示
し、「Nle 」はノルロイシンを示す。表２及び表１０〜
１３及び請求の範囲に開示されるアミノ酸配列は、表２
及び表１０〜１３に開示されるアミノ酸配列の保守的に
変形された変異種を含むものである。特許請求される発
明は、表２及び表１０〜１３に開示されるアミノ酸配列
をＣ末端及び／又はＮ末端からアミノ酸残基（例えば、
１つ、２つ、又はおそらくはそれ以上のアミノ酸残基）
を取り除いて短くしたとしても依然有効であると考えら
れる。また、特許請求される発明は表２及び表１０〜１
３に開示されるアミノ酸配列のＣ末端及び／又はＮ末端
のアミノ酸残基（例えば、１つ、２つ、又はおそらくは
それ以上のアミノ酸残基）を他のアミノ酸残基で置き換
えたとしても依然有効であると考えられる。
【００３０】
【表１０】
【００３１】
【表１１】
【００３２】
【表１２】
【００３３】
【表１３】
【００３４】本発明の他の例において、癌に冒されたほ
乳類（ヒトを含む）を治療する方法が提供される。治療
可能な癌の種類には、白血病及びリンパ腫；胃、膵臓、
及び前立腺のアデノ癌腫；並びに結腸、直腸、肺、胸及
び腎臓の癌が含まれるが、特にそれらに制限されるわけ
ではない。加えて、本発明はＶＩＰ、ソマトスタチン、
ボンベシン、及びサブスタンスＰのペプチドのうちの１
種又はそれ以上の過剰分泌に特徴付けられる他の疾病及
び癌を治療する方法を提供するものである。
乳類（ヒトを含む）を治療する方法が提供される。治療
可能な癌の種類には、白血病及びリンパ腫；胃、膵臓、
及び前立腺のアデノ癌腫；並びに結腸、直腸、肺、胸及
び腎臓の癌が含まれるが、特にそれらに制限されるわけ
ではない。加えて、本発明はＶＩＰ、ソマトスタチン、
ボンベシン、及びサブスタンスＰのペプチドのうちの１
種又はそれ以上の過剰分泌に特徴付けられる他の疾病及
び癌を治療する方法を提供するものである。
【００３５】本発明の方法は、ＳＯＭ2 と、ＶＩＰ1 、
ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＢＯＭ1 及びＳＰ1 の
ペプチドのうち少なくとも４との薬学的に有効である組
み合わせをほ乳類に体系的に投与することを含む、又は
それらよりなる、又は実質的にそれらからなる。組み合
わせの有効投与量はほ乳類の体重１ｋｇにつき１５〜１
７０μｇ（好ましくは２５〜４０μｇ）のペプチドであ
るが、所望される効果、投与方法、選択されるペプチ
ド、及び治療される癌に依存する。体系的投与とは、経
口、経直腸、経鼻、トランスダーマル、非経口（つま
り、筋肉、静脈、及び皮下注射）意味するものである。
適切な医療における実施においては、不都合な害のある
副作用を引き起こすことなく抗癌作用を発揮する投与量
でかかる組成物を投与することが好ましい。組成物は単
独又は他の医薬剤との混合物として投与することが可能
である。
ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＢＯＭ1 及びＳＰ1 の
ペプチドのうち少なくとも４との薬学的に有効である組
み合わせをほ乳類に体系的に投与することを含む、又は
それらよりなる、又は実質的にそれらからなる。組み合
わせの有効投与量はほ乳類の体重１ｋｇにつき１５〜１
７０μｇ（好ましくは２５〜４０μｇ）のペプチドであ
るが、所望される効果、投与方法、選択されるペプチ
ド、及び治療される癌に依存する。体系的投与とは、経
口、経直腸、経鼻、トランスダーマル、非経口（つま
り、筋肉、静脈、及び皮下注射）意味するものである。
適切な医療における実施においては、不都合な害のある
副作用を引き起こすことなく抗癌作用を発揮する投与量
でかかる組成物を投与することが好ましい。組成物は単
独又は他の医薬剤との混合物として投与することが可能
である。
【００３６】組成物は任意に及び好ましくは薬学的に許
容できる希釈剤、賦形剤、溶媒、結合剤、安定剤等を含
有する。かかる希釈剤には、RPMI 1640 、緩衝溶液、等
張ＮａＣｌ、リンガー溶液、水、蒸留水、ポリエチレン
グリコール（非希釈又は水溶液）、２％Ｔｗｅｅｎ水溶
液、５０％ジメチルスルホキシド水溶液、プロピレング
リコール（非希釈又は水溶液）、燐酸緩衝液、平衡塩類
液、グリセロール、及び静脈投与に適切な他の従来の液
体等が含まれる。１投与当り約１０から２０００μｇの
組成物を提供する薬剤組成物が好ましく、通常は、錠
剤、ロゼンジ、カプセル、粉末、溶液、又は油状懸濁
液、シロップ、エリキシル剤、及び水溶液として調製さ
れる。用いられる薬剤組成物の属性は勿論所望される投
与ルートに依存する。
容できる希釈剤、賦形剤、溶媒、結合剤、安定剤等を含
有する。かかる希釈剤には、RPMI 1640 、緩衝溶液、等
張ＮａＣｌ、リンガー溶液、水、蒸留水、ポリエチレン
グリコール（非希釈又は水溶液）、２％Ｔｗｅｅｎ水溶
液、５０％ジメチルスルホキシド水溶液、プロピレング
リコール（非希釈又は水溶液）、燐酸緩衝液、平衡塩類
液、グリセロール、及び静脈投与に適切な他の従来の液
体等が含まれる。１投与当り約１０から２０００μｇの
組成物を提供する薬剤組成物が好ましく、通常は、錠
剤、ロゼンジ、カプセル、粉末、溶液、又は油状懸濁
液、シロップ、エリキシル剤、及び水溶液として調製さ
れる。用いられる薬剤組成物の属性は勿論所望される投
与ルートに依存する。
【００３７】
【発明の実施の形態】本発明は下記の例を参照して更に
詳細に説明されるが、これらの例は単に説明を目的とす
るものであり、本発明をこれに限定するものではない。MuJ-7 のインビトロにおける研究 例１ ファインニードル吸引細胞学（ＦＮＡＣ）及び病理組織
学により確認されたヒト結腸アデノ癌腫を用いてヒト結
腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞株を確立した。これらの
細胞を、ヒト結腸アデノ癌腫細胞上に存在する91 KD の
表面抗原に特異的なモノクロナール抗体によりポジティ
ブ染色した。これらの細胞の腫瘍発生力をヌードマウス
にこれらの細胞を皮下注射し、腫瘍を形成させることに
より証明した。１２の主用培地の特徴は表１４に記載さ
れている。
詳細に説明されるが、これらの例は単に説明を目的とす
るものであり、本発明をこれに限定するものではない。MuJ-7 のインビトロにおける研究 例１ ファインニードル吸引細胞学（ＦＮＡＣ）及び病理組織
学により確認されたヒト結腸アデノ癌腫を用いてヒト結
腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞株を確立した。これらの
細胞を、ヒト結腸アデノ癌腫細胞上に存在する91 KD の
表面抗原に特異的なモノクロナール抗体によりポジティ
ブ染色した。これらの細胞の腫瘍発生力をヌードマウス
にこれらの細胞を皮下注射し、腫瘍を形成させることに
より証明した。１２の主用培地の特徴は表１４に記載さ
れている。
【００３８】
【表１４】
【００３９】（注：ＡＣ＝上行結腸、ＤＣ＝下行結腸、
ＴＣ＝横行結腸、ＦＮＡＣ＝ファインニードル吸引細
胞、Ｈｉｓｔ．＝病理組織、Ｍａｂ＝モノクロナール抗
体標識、ＮＤ＝未検査） 表１４に記載された１２のヒト結腸アデノ癌腫細胞培養
のそれぞれに由来するヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞がMu
J-7 （約２０μｌ／ウェル）と共に約７２時間約３７℃
でＣＯ2 インキュベータ中で培養された９６ウェルの培
養プレートにおいてMuJ-7 の抗増殖効果を研究した。Mu
J-7 を加えなかったヒト結腸アデノ癌腫細胞を対照とし
た。トリチウムを導入した 3Ｈ］チミジン（約１μＣｉ
／ウェル）をそれぞれのウェルに加え、プレートを更に
約１時間インキュベートした。細胞をフィルターマット
上に採取し、 3Ｈ］チミジンの細胞分裂中の細胞への導
入をベータプレート(Pharmacia) により計算した。本明
細書中に記載されるトリチウム導入 3Ｈ］チミジン細胞
毒性アッセイのそれぞれにおいては、未処理の対照にお
ける細胞の増殖を１００％とするものとする。例１にお
いては、MuJ-7 が腫瘍細胞の増殖を約９５％阻害したこ
とが観察された。例２ MuJ-7 の細胞毒性効果を１日ＭＴＴアッセイにより再確
認した。１日ＭＴＴ細胞毒性アッセイのためのＭＴＴス
トック溶液の調製方法は上述のとおりである。簡潔に説
明すると、上記表１４に記載された１２のヒト結腸アデ
ノ癌腫腫瘍細胞培養をMuJ-7 （約２０μｌ／ウェルのMu
J-7 を時間＝０において添加）と共に９６ウェル培養プ
レートを用いて、約５％ＣＯ2 中、約３７℃で約２４時
間インキュベートした。MuJ-7 により処理しなかった１
２のヒト結腸アデノ癌腫細胞培養からの細胞を対照とし
た。次に、ストックＭＴＴ溶液（約１００μｇＭＴＴ／
ウェル）をそれぞれのウェルに加え、更に約１時間培養
を続けた。細胞中に形成されたホルマザンの結晶を約１
０％のドデシル硫酸ナトリウム及び約０．０１ＮのＨＣ
ｌからなる洗剤を添加して溶解させ、それぞれのウェル
の５４０ｎｍにおける光学密度を分光光度計により読み
とった。光学密度は増殖し代謝活性のある細胞の数に正
比例するものである。MuJ-7 はＭＴＴ細胞毒性により評
価されたように１２のヒト結腸アデノ癌腫細胞培養のそ
れぞれの増殖−活性を阻害した。阻害率は約８０．７％
から約９５．２％の範囲であった。表１５は１２のヒト
結腸アデノ癌腫細胞株のそれぞれのおよその阻害率をリ
ストにしたものである。表１４における生検番号１〜１
２のそれぞれは表１５のサンプル番号PTC-1 〜PTC-12に
対応するものである。
ＴＣ＝横行結腸、ＦＮＡＣ＝ファインニードル吸引細
胞、Ｈｉｓｔ．＝病理組織、Ｍａｂ＝モノクロナール抗
体標識、ＮＤ＝未検査） 表１４に記載された１２のヒト結腸アデノ癌腫細胞培養
のそれぞれに由来するヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞がMu
J-7 （約２０μｌ／ウェル）と共に約７２時間約３７℃
でＣＯ2 インキュベータ中で培養された９６ウェルの培
養プレートにおいてMuJ-7 の抗増殖効果を研究した。Mu
J-7 を加えなかったヒト結腸アデノ癌腫細胞を対照とし
た。トリチウムを導入した 3Ｈ］チミジン（約１μＣｉ
／ウェル）をそれぞれのウェルに加え、プレートを更に
約１時間インキュベートした。細胞をフィルターマット
上に採取し、 3Ｈ］チミジンの細胞分裂中の細胞への導
入をベータプレート(Pharmacia) により計算した。本明
細書中に記載されるトリチウム導入 3Ｈ］チミジン細胞
毒性アッセイのそれぞれにおいては、未処理の対照にお
ける細胞の増殖を１００％とするものとする。例１にお
いては、MuJ-7 が腫瘍細胞の増殖を約９５％阻害したこ
とが観察された。例２ MuJ-7 の細胞毒性効果を１日ＭＴＴアッセイにより再確
認した。１日ＭＴＴ細胞毒性アッセイのためのＭＴＴス
トック溶液の調製方法は上述のとおりである。簡潔に説
明すると、上記表１４に記載された１２のヒト結腸アデ
ノ癌腫腫瘍細胞培養をMuJ-7 （約２０μｌ／ウェルのMu
J-7 を時間＝０において添加）と共に９６ウェル培養プ
レートを用いて、約５％ＣＯ2 中、約３７℃で約２４時
間インキュベートした。MuJ-7 により処理しなかった１
２のヒト結腸アデノ癌腫細胞培養からの細胞を対照とし
た。次に、ストックＭＴＴ溶液（約１００μｇＭＴＴ／
ウェル）をそれぞれのウェルに加え、更に約１時間培養
を続けた。細胞中に形成されたホルマザンの結晶を約１
０％のドデシル硫酸ナトリウム及び約０．０１ＮのＨＣ
ｌからなる洗剤を添加して溶解させ、それぞれのウェル
の５４０ｎｍにおける光学密度を分光光度計により読み
とった。光学密度は増殖し代謝活性のある細胞の数に正
比例するものである。MuJ-7 はＭＴＴ細胞毒性により評
価されたように１２のヒト結腸アデノ癌腫細胞培養のそ
れぞれの増殖−活性を阻害した。阻害率は約８０．７％
から約９５．２％の範囲であった。表１５は１２のヒト
結腸アデノ癌腫細胞株のそれぞれのおよその阻害率をリ
ストにしたものである。表１４における生検番号１〜１
２のそれぞれは表１５のサンプル番号PTC-1 〜PTC-12に
対応するものである。
【００４０】
【表１５】
【００４１】例３ MuJ-7 の細胞毒性効果を３種類のヒト結腸癌細胞株（Co
Lo 205、HT 29 及びSW620）を用いた３日ＭＴＴアッセ
イにより試験した。３日ＭＴＴ細胞毒性アッセイのため
のＭＴＴストック溶液の調製方法は上述の１日ＭＴＴ細
胞毒性アッセイのためのＭＴＴストック溶液の調製方法
と同様である。簡潔に説明すると、CoLo205、HT 29 及
びSW 620細胞を９６ウェルの培養プレート（約５０００
０癌細胞／ウェル）を用いて、約５％ＣＯ2 中、約３７
℃で約７２時間インキュベートした。MuJ-7 （約２０μ
ｌ／ウェル）を時間＝０、２４、４８時間において全て
の処理サンプルに添加した。MuJ-7 により処理しなかっ
たCoLo 205、HT 29 及びSW620細胞を対照とした。次
に、ストックＭＴＴ溶液（約１００μｇＭＴＴ／ウェ
ル）をそれぞれのウェルに加え、更に約１時間培養を続
けた。細胞中に形成されたホルマザンの結晶を約１０％
のドデシル硫酸ナトリウム及び約０．０１ＮのＨＣｌか
らなる洗剤を添加して溶解させ、それぞれのウェルの５
４０ｎｍにおける光学密度を分光光度計により読みとっ
た。MuJ-7 によるCoLo 205、HT 29 及びSW620の阻害率
はそれぞれ、約８０％、約１８％及び約４１％であっ
た。例４ MuJ-7 の１３種類の腫瘍細胞株における細胞毒性効果を
研究するために、３日ＭＴＴアッセイを用いて実験を行
った。これらの細胞株は、K562細胞（ヒト白血病）、MO
LT-4（ヒトリンパ腫）、L 132 （ヒト肺癌腫）、MCF-7
（ヒト乳癌）、SW 620（ヒト結腸）、G 401 （ヒト腎
臓）、CoLo 205（ヒト結腸）、HuTu80（ヒト十二指
腸）、Hu 746T （ヒト胃）、HT29（ヒト結腸）、PC3
（ヒト膵臓）、SKO.007 （ヒト骨髄腫）、及びSK.MEL.2
8 （ヒト黒色腫）である。３日ＭＴＴ細胞毒性アッセイ
のためのＭＴＴストック溶液の調製方法は上述の１日Ｍ
ＴＴ細胞毒性アッセイのためのＭＴＴストック溶液の調
製方法と同様である。簡潔に説明すると、１３のヒト腫
瘍細胞株からの細胞を９６ウェルの培養プレート（約５
００００癌細胞／ウェル）を用いて、約５％ＣＯ2 中、
約３７℃で約７２時間インキュベートした。MuJ-7 （約
２０μｌ／ウェル）を時間＝０、２４、４８時間におい
て全ての処理サンプルに添加した。MuJ-7 により処理し
なかった１３のヒト腫瘍細胞株からの細胞を対照とし
た。次に、ストックＭＴＴ溶液（約１００μｇＭＴＴ／
ウェル）をそれぞれのウェルに加え、更に約１時間培養
を続けた。細胞中に形成されたホルマザンの結晶を約１
０％のドデシル硫酸ナトリウム及び約０．０１ＮのＨＣ
ｌからなる洗剤を添加して溶解させ、それぞれのウェル
の５４０ｎｍにおける光学密度を分光光度計により読み
とった。MuJ-7 による１３の細胞株におけるおよその細
胞毒性率（つまり、阻害率）は表１６に記載されてい
る。SKO.007 （ヒト骨髄腫）、及びSK.MEL.28 （ヒト黒
色腫）における阻害は観察されなかった。
Lo 205、HT 29 及びSW620）を用いた３日ＭＴＴアッセ
イにより試験した。３日ＭＴＴ細胞毒性アッセイのため
のＭＴＴストック溶液の調製方法は上述の１日ＭＴＴ細
胞毒性アッセイのためのＭＴＴストック溶液の調製方法
と同様である。簡潔に説明すると、CoLo205、HT 29 及
びSW 620細胞を９６ウェルの培養プレート（約５０００
０癌細胞／ウェル）を用いて、約５％ＣＯ2 中、約３７
℃で約７２時間インキュベートした。MuJ-7 （約２０μ
ｌ／ウェル）を時間＝０、２４、４８時間において全て
の処理サンプルに添加した。MuJ-7 により処理しなかっ
たCoLo 205、HT 29 及びSW620細胞を対照とした。次
に、ストックＭＴＴ溶液（約１００μｇＭＴＴ／ウェ
ル）をそれぞれのウェルに加え、更に約１時間培養を続
けた。細胞中に形成されたホルマザンの結晶を約１０％
のドデシル硫酸ナトリウム及び約０．０１ＮのＨＣｌか
らなる洗剤を添加して溶解させ、それぞれのウェルの５
４０ｎｍにおける光学密度を分光光度計により読みとっ
た。MuJ-7 によるCoLo 205、HT 29 及びSW620の阻害率
はそれぞれ、約８０％、約１８％及び約４１％であっ
た。例４ MuJ-7 の１３種類の腫瘍細胞株における細胞毒性効果を
研究するために、３日ＭＴＴアッセイを用いて実験を行
った。これらの細胞株は、K562細胞（ヒト白血病）、MO
LT-4（ヒトリンパ腫）、L 132 （ヒト肺癌腫）、MCF-7
（ヒト乳癌）、SW 620（ヒト結腸）、G 401 （ヒト腎
臓）、CoLo 205（ヒト結腸）、HuTu80（ヒト十二指
腸）、Hu 746T （ヒト胃）、HT29（ヒト結腸）、PC3
（ヒト膵臓）、SKO.007 （ヒト骨髄腫）、及びSK.MEL.2
8 （ヒト黒色腫）である。３日ＭＴＴ細胞毒性アッセイ
のためのＭＴＴストック溶液の調製方法は上述の１日Ｍ
ＴＴ細胞毒性アッセイのためのＭＴＴストック溶液の調
製方法と同様である。簡潔に説明すると、１３のヒト腫
瘍細胞株からの細胞を９６ウェルの培養プレート（約５
００００癌細胞／ウェル）を用いて、約５％ＣＯ2 中、
約３７℃で約７２時間インキュベートした。MuJ-7 （約
２０μｌ／ウェル）を時間＝０、２４、４８時間におい
て全ての処理サンプルに添加した。MuJ-7 により処理し
なかった１３のヒト腫瘍細胞株からの細胞を対照とし
た。次に、ストックＭＴＴ溶液（約１００μｇＭＴＴ／
ウェル）をそれぞれのウェルに加え、更に約１時間培養
を続けた。細胞中に形成されたホルマザンの結晶を約１
０％のドデシル硫酸ナトリウム及び約０．０１ＮのＨＣ
ｌからなる洗剤を添加して溶解させ、それぞれのウェル
の５４０ｎｍにおける光学密度を分光光度計により読み
とった。MuJ-7 による１３の細胞株におけるおよその細
胞毒性率（つまり、阻害率）は表１６に記載されてい
る。SKO.007 （ヒト骨髄腫）、及びSK.MEL.28 （ヒト黒
色腫）における阻害は観察されなかった。
【００４２】
【表１６】
【００４３】例５ ヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞を１０4 細胞／ｍ
ｌの密度で５つの異なるフラスコに植えた。１０％のウ
シ胎児血清を含有するRPMI 1640 （５ミリリットル）を
それぞれのフラスコに加えた。MuJ-7 （約２００μｌ）
を４つのフラスコに加えた。MuJ-7 を加えなかった５番
目のフラスコを対照として使用した。約１２時間から約
９６時間の間の異なる経過時間で細胞をMuJ-7 で処理し
た後、ヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞からゲノミ
ックＤＮＡを抽出した。ゲノミックＤＮＡの抽出に使用
された方法の詳細については「プロトコールの説明」と
題された下記のセクションを参照されたい。第一フラス
コ中の腫瘍細胞からは約１２時間後にゲノミックＤＮＡ
を抽出し、第二フラスコ中の腫瘍細胞からは約２４時間
後にゲノミックＤＮＡを抽出し、第三フラスコ中の腫瘍
細胞からは約４８時間後にゲノミックＤＮＡを抽出し、
第四フラスコ中の腫瘍細胞からは約９６時間後にゲノミ
ックＤＮＡを抽出し、対照フラスコ中の腫瘍細胞からは
約９６時間後にゲノミックＤＮＡを抽出した。処理及び
未処理細胞双方からのＤＮＡを臭化エチジウムを染色に
使用して１％アガロースゲル上で泳動した。MuJ-7 で４
８時間及び９６時間処理した腫瘍細胞のＤＮＡは、プロ
グラム化細胞死を示唆するスミアをゲル上に形成し、一
方未処理細胞からのＤＮＡはそれが完全な形態で存在す
ることを証明する鋭い帯を１０ｋｂの位置に形成した。
MuJ-7 で２４時間処理した腫瘍細胞のＤＮＡは、ゲル上
にスミアを形成しなかった。従って、インビトロの時間
−速度実験は、MuJ-7 による処理によってプログラム化
細胞死が約２４時間から約４８時間の間に起こることを
示すものである。インビボ実験における投与MuJ-7 の成分 投与MuJ-7 成分を以下の方法により調製した。最初に７
種のペプチド類似体それぞれのストック溶液を約７．４
のｐＨの無菌燐酸緩衝溶液を使用して調製した。それぞ
れのストック溶液のペプチド類似体濃度は約１０-3Ｍで
あった。MuJ-7１投与量中における７種のペプチドの総
重量が、投与量に依存して、約８〜１６μｇになり、Mu
J-7 製剤が７種のペプチド類似体のそれぞれをほぼ同量
含有するように、７種のペプチド類似体のアリコットを
混合した。MuJ-7 中、ＶＩＰ1 の濃度は約１０-7Ｍであ
り、ＶＩＰ2 の濃度は約１０-8Ｍであり、ＶＩＰ3 の濃
度は約１０-8Ｍであり、ＳＯＭ1 の濃度は約１０-9Ｍで
あり、ＳＯＭ2 の濃度は約１０-8Ｍであり、ＢＯＭ1 の
濃度は約１０-8Ｍであり、ＳＰ1 の濃度は約１０-8Ｍで
あった。無菌RPMI 1640 を加えることによりこの溶液の
容量を約１５０μｌとした。RPMI 1640 はロズウェル・
パーク・メモリアル・インスティテュート(Rosewell Pa
rk Memorial Institute)において向上された細胞培養培
地である。RPMI 1640 の成分は表１７に記載されてい
る。
ｌの密度で５つの異なるフラスコに植えた。１０％のウ
シ胎児血清を含有するRPMI 1640 （５ミリリットル）を
それぞれのフラスコに加えた。MuJ-7 （約２００μｌ）
を４つのフラスコに加えた。MuJ-7 を加えなかった５番
目のフラスコを対照として使用した。約１２時間から約
９６時間の間の異なる経過時間で細胞をMuJ-7 で処理し
た後、ヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞からゲノミ
ックＤＮＡを抽出した。ゲノミックＤＮＡの抽出に使用
された方法の詳細については「プロトコールの説明」と
題された下記のセクションを参照されたい。第一フラス
コ中の腫瘍細胞からは約１２時間後にゲノミックＤＮＡ
を抽出し、第二フラスコ中の腫瘍細胞からは約２４時間
後にゲノミックＤＮＡを抽出し、第三フラスコ中の腫瘍
細胞からは約４８時間後にゲノミックＤＮＡを抽出し、
第四フラスコ中の腫瘍細胞からは約９６時間後にゲノミ
ックＤＮＡを抽出し、対照フラスコ中の腫瘍細胞からは
約９６時間後にゲノミックＤＮＡを抽出した。処理及び
未処理細胞双方からのＤＮＡを臭化エチジウムを染色に
使用して１％アガロースゲル上で泳動した。MuJ-7 で４
８時間及び９６時間処理した腫瘍細胞のＤＮＡは、プロ
グラム化細胞死を示唆するスミアをゲル上に形成し、一
方未処理細胞からのＤＮＡはそれが完全な形態で存在す
ることを証明する鋭い帯を１０ｋｂの位置に形成した。
MuJ-7 で２４時間処理した腫瘍細胞のＤＮＡは、ゲル上
にスミアを形成しなかった。従って、インビトロの時間
−速度実験は、MuJ-7 による処理によってプログラム化
細胞死が約２４時間から約４８時間の間に起こることを
示すものである。インビボ実験における投与MuJ-7 の成分 投与MuJ-7 成分を以下の方法により調製した。最初に７
種のペプチド類似体それぞれのストック溶液を約７．４
のｐＨの無菌燐酸緩衝溶液を使用して調製した。それぞ
れのストック溶液のペプチド類似体濃度は約１０-3Ｍで
あった。MuJ-7１投与量中における７種のペプチドの総
重量が、投与量に依存して、約８〜１６μｇになり、Mu
J-7 製剤が７種のペプチド類似体のそれぞれをほぼ同量
含有するように、７種のペプチド類似体のアリコットを
混合した。MuJ-7 中、ＶＩＰ1 の濃度は約１０-7Ｍであ
り、ＶＩＰ2 の濃度は約１０-8Ｍであり、ＶＩＰ3 の濃
度は約１０-8Ｍであり、ＳＯＭ1 の濃度は約１０-9Ｍで
あり、ＳＯＭ2 の濃度は約１０-8Ｍであり、ＢＯＭ1 の
濃度は約１０-8Ｍであり、ＳＰ1 の濃度は約１０-8Ｍで
あった。無菌RPMI 1640 を加えることによりこの溶液の
容量を約１５０μｌとした。RPMI 1640 はロズウェル・
パーク・メモリアル・インスティテュート(Rosewell Pa
rk Memorial Institute)において向上された細胞培養培
地である。RPMI 1640 の成分は表１７に記載されてい
る。
【００４４】
【表１７】
【００４５】以下のインビボ実験全体を通して、MuJ-7
を注射しなかった対照マウスにはその代わりにRPMI 164
0 を注射した。対照マウスにおける腫瘍の進行成長はRP
MI 1640 がMuJ-7 の効果に重要なものではないことを示
すものである。以下のインビボ実験において、腫瘍の容
積は副はさみ尺(vernier calliper)を使用して計算し
た。腫瘍の短辺(a) 及び長辺(b) を正確に計測し、以下
の式： 腫瘍容積 ＝ ０．４×a2×ｂ を用いて容積を計算した。
を注射しなかった対照マウスにはその代わりにRPMI 164
0 を注射した。対照マウスにおける腫瘍の進行成長はRP
MI 1640 がMuJ-7 の効果に重要なものではないことを示
すものである。以下のインビボ実験において、腫瘍の容
積は副はさみ尺(vernier calliper)を使用して計算し
た。腫瘍の短辺(a) 及び長辺(b) を正確に計測し、以下
の式： 腫瘍容積 ＝ ０．４×a2×ｂ を用いて容積を計算した。
【００４６】上記の腫瘍容積を計算式は、H. J. Winn,
National Cancer Institute Monograph 2 (1959) 113-1
38によるものである。以下のインビボ実験において、腫
瘍重量の測定は、実験の終了時に皮膚の真下の筋肉層上
の後部表面に成長している腫瘍全部分をマウスから摘出
することによって行った。腫瘍に付着している皮膚及び
他の組織を全て除去し、腫瘍重量を即座に分析用バラン
スによって測定した。腫瘍発生ヌードマウスのインビボ研究 例６〜１３に記述される様々なインビボプロトコールに
従いMuJ-7 によって処理された５２匹の腫瘍を有するヌ
ードマウスのうち、４９匹のマウスが完全又は部分的腫
瘍縮小を示した。経過時間におけるMuJ-7 処理による腫
瘍縮小の効果を示す図１には、例６〜１３に記述された
インビボプロトコールにおける全てのマウスの平均腫瘍
容積（ｍｍ3)が経過日数と対比させて示されている（図
１におけるデータポイントのそれぞれは、別々の実験か
らの異なる数のマウスの平均腫瘍容積を示すものであ
る）。図１において、マウスは４つのカテゴリーにグル
ープ分けされている：（１）未処理対照マウス（△）、
（２）MuJ-7 の最初の投与を第５日までに受けた処理マ
ウス（＋）、（３）MuJ-7 の最初の投与を第５日以降第
１２日までに受けた処理マウス（▲）、及び（４）MuJ-
7 の最初の投与を第１２日以降第２０日までに受けた処
理マウス（▽）。例６ 第１日において１０匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスにヒ
ト結腸アデノ癌腫の原発性細胞（約１千万腫瘍細胞／マ
ウス）を移植し、移植後約１時間経過で最初のMuJ-7 を
これらのマウスに投与した。それぞれの処理マウスにお
ける１日のMuJ-7 注射量中には、約１．１４３μｇのＶ
ＩＰ1 、約１．１４３μｇのＶＩＰ2 、約１．１４３μ
ｇのＶＩＰ3 、約１．１４３μｇのＳＯＭ1 、約１．１
４３μｇのＳＯＭ2 、約１．１４３μｇのＢＯＭ1 、及
び約１．１４３μｇのＳＰ1 が含まれていた。従って、
１日当りのMuJ-7 総投与量中にはそれぞれがおよそ同量
の７種のペプチド類似体（ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ
3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1)がいつ
も含有され、これら７種のペプチド類似体の総重量は約
８μｇであったということになる。MuJ-7 の１日の総重
量はほぼ同量になるように３等分した。約８時間の間隔
をおいて、一日に３回、３等分のうちの１つを処理マウ
スそれぞれに注射した。１日のうち最初の投与は尾の静
脈に注射し、２回目の投与は臀部筋肉の一方に注射し、
３回目の投与は他方の臀部筋肉に注射した。２週間に渡
り処理を継続した。１０匹の処理マウスの体重に近い体
重を有する無作為に選択したBALB/Cヌードnu/nu マウス
を対照とした。対照マウスには処理マウスと同様に同タ
イプ及びおよそ同一数のヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞を
皮下注射した。対照マウスにはMuJ-7 を与えなかった。
National Cancer Institute Monograph 2 (1959) 113-1
38によるものである。以下のインビボ実験において、腫
瘍重量の測定は、実験の終了時に皮膚の真下の筋肉層上
の後部表面に成長している腫瘍全部分をマウスから摘出
することによって行った。腫瘍に付着している皮膚及び
他の組織を全て除去し、腫瘍重量を即座に分析用バラン
スによって測定した。腫瘍発生ヌードマウスのインビボ研究 例６〜１３に記述される様々なインビボプロトコールに
従いMuJ-7 によって処理された５２匹の腫瘍を有するヌ
ードマウスのうち、４９匹のマウスが完全又は部分的腫
瘍縮小を示した。経過時間におけるMuJ-7 処理による腫
瘍縮小の効果を示す図１には、例６〜１３に記述された
インビボプロトコールにおける全てのマウスの平均腫瘍
容積（ｍｍ3)が経過日数と対比させて示されている（図
１におけるデータポイントのそれぞれは、別々の実験か
らの異なる数のマウスの平均腫瘍容積を示すものであ
る）。図１において、マウスは４つのカテゴリーにグル
ープ分けされている：（１）未処理対照マウス（△）、
（２）MuJ-7 の最初の投与を第５日までに受けた処理マ
ウス（＋）、（３）MuJ-7 の最初の投与を第５日以降第
１２日までに受けた処理マウス（▲）、及び（４）MuJ-
7 の最初の投与を第１２日以降第２０日までに受けた処
理マウス（▽）。例６ 第１日において１０匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスにヒ
ト結腸アデノ癌腫の原発性細胞（約１千万腫瘍細胞／マ
ウス）を移植し、移植後約１時間経過で最初のMuJ-7 を
これらのマウスに投与した。それぞれの処理マウスにお
ける１日のMuJ-7 注射量中には、約１．１４３μｇのＶ
ＩＰ1 、約１．１４３μｇのＶＩＰ2 、約１．１４３μ
ｇのＶＩＰ3 、約１．１４３μｇのＳＯＭ1 、約１．１
４３μｇのＳＯＭ2 、約１．１４３μｇのＢＯＭ1 、及
び約１．１４３μｇのＳＰ1 が含まれていた。従って、
１日当りのMuJ-7 総投与量中にはそれぞれがおよそ同量
の７種のペプチド類似体（ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ
3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1)がいつ
も含有され、これら７種のペプチド類似体の総重量は約
８μｇであったということになる。MuJ-7 の１日の総重
量はほぼ同量になるように３等分した。約８時間の間隔
をおいて、一日に３回、３等分のうちの１つを処理マウ
スそれぞれに注射した。１日のうち最初の投与は尾の静
脈に注射し、２回目の投与は臀部筋肉の一方に注射し、
３回目の投与は他方の臀部筋肉に注射した。２週間に渡
り処理を継続した。１０匹の処理マウスの体重に近い体
重を有する無作為に選択したBALB/Cヌードnu/nu マウス
を対照とした。対照マウスには処理マウスと同様に同タ
イプ及びおよそ同一数のヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞を
皮下注射した。対照マウスにはMuJ-7 を与えなかった。
【００４７】処理及び未処理マウスの腫瘍容積を４日お
きに記録した。表１８にはそれぞれの処理マウスにおけ
る腫瘍容積（ｍｍ3)が記載されており、表１９にはそれ
ぞれの未処理マウス（対照）における腫瘍容積（ｍｍ3)
が記載されている。図２は処理マウス（○）及び未処理
マウス（＋）の平均腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関
係で示すグラフである。図２中、矢印は第１日において
腫瘍細胞移植後約１時間経過した後最初のMuJ-7 を処理
マウスに投与したことを示すものである。
きに記録した。表１８にはそれぞれの処理マウスにおけ
る腫瘍容積（ｍｍ3)が記載されており、表１９にはそれ
ぞれの未処理マウス（対照）における腫瘍容積（ｍｍ3)
が記載されている。図２は処理マウス（○）及び未処理
マウス（＋）の平均腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関
係で示すグラフである。図２中、矢印は第１日において
腫瘍細胞移植後約１時間経過した後最初のMuJ-7 を処理
マウスに投与したことを示すものである。
【００４８】
【表１８】
【００４９】
【表１９】
【００５０】MuJ-7 を使用した処理によって、処理マウ
スのうち約９０％において腫瘍成長が妨げられた。更
に、実験期間中１匹の処理マウスとも死ぬことはなかっ
た。これと比較して、対照マウスには腫瘍の成長が観察
され、それは結果的にマウスの死につながった。例７ 第１日において２０匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスを１
０匹づつの２つのグループに分け、それぞれにヒト結腸
アデノ癌腫の原発性細胞（約１千万腫瘍細胞／マウス）
を移植した。グループ１のマウスには第１２日（つま
り、第１日の腫瘍細胞移植後１１日経過後）に最初のMu
J-7 を投与した。グループ２のマウスには第２０日（つ
まり、第１日の腫瘍細胞移植後１９日経過後）に最初の
MuJ-7 を投与した。これらの２０匹の処理マウスに１４
日間に渡り毎日１日分のMuJ-7 を与えた。それぞれの処
理マウスにおけるMuJ-7 の１日注射量中には、約１．１
４３μｇのＶＩＰ1 、約１．１４３μｇのＶＩＰ2 、約
１．１４３μｇのＶＩＰ3 、約１．１４３μｇのＳＯＭ
1 、約１．１４３μｇのＳＯＭ2 、約１．１４３μｇの
ＢＯＭ1 、及び約１．１４３μｇのＳＰ1 が含まれてい
た。従って、１日当りのMuJ-7 総投与量中にはそれぞれ
がおよそ同量の７種のペプチド類似体（ＶＩＰ 1 、ＶＩ
Ｐ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 、ＢＯＭ1 、及び
ＳＰ1)がいつも含有され、これら７種のペプチド類似体
の総重量は約８μｇであったということになる。MuJ-7
の１日の総重量はほぼ同量になるように３等分した。約
８時間の間隔をおいて、一日に３回、３等分のうちの１
つを処理マウスそれぞれに注射した。１日のうち最初の
投与は尾の静脈に注射し、２回目の投与は臀部筋肉の一
方に注射し、３回目の投与は他方の臀部筋肉に注射し
た。グループ１及びグループ２の２０匹の処理マウスの
体重に近い体重を有する無作為に選択した５匹のBALB/C
ヌードnu/nu マウスを対照とした（この５匹のマウスを
グループ１及びグループ２の双方の実験における対照と
した）。対照マウスには処理マウスと同様に同タイプ及
びおよそ同一数のヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞を皮下注
射した。対照マウスにはMuJ-7 を与えなかった。
スのうち約９０％において腫瘍成長が妨げられた。更
に、実験期間中１匹の処理マウスとも死ぬことはなかっ
た。これと比較して、対照マウスには腫瘍の成長が観察
され、それは結果的にマウスの死につながった。例７ 第１日において２０匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスを１
０匹づつの２つのグループに分け、それぞれにヒト結腸
アデノ癌腫の原発性細胞（約１千万腫瘍細胞／マウス）
を移植した。グループ１のマウスには第１２日（つま
り、第１日の腫瘍細胞移植後１１日経過後）に最初のMu
J-7 を投与した。グループ２のマウスには第２０日（つ
まり、第１日の腫瘍細胞移植後１９日経過後）に最初の
MuJ-7 を投与した。これらの２０匹の処理マウスに１４
日間に渡り毎日１日分のMuJ-7 を与えた。それぞれの処
理マウスにおけるMuJ-7 の１日注射量中には、約１．１
４３μｇのＶＩＰ1 、約１．１４３μｇのＶＩＰ2 、約
１．１４３μｇのＶＩＰ3 、約１．１４３μｇのＳＯＭ
1 、約１．１４３μｇのＳＯＭ2 、約１．１４３μｇの
ＢＯＭ1 、及び約１．１４３μｇのＳＰ1 が含まれてい
た。従って、１日当りのMuJ-7 総投与量中にはそれぞれ
がおよそ同量の７種のペプチド類似体（ＶＩＰ 1 、ＶＩ
Ｐ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 、ＢＯＭ1 、及び
ＳＰ1)がいつも含有され、これら７種のペプチド類似体
の総重量は約８μｇであったということになる。MuJ-7
の１日の総重量はほぼ同量になるように３等分した。約
８時間の間隔をおいて、一日に３回、３等分のうちの１
つを処理マウスそれぞれに注射した。１日のうち最初の
投与は尾の静脈に注射し、２回目の投与は臀部筋肉の一
方に注射し、３回目の投与は他方の臀部筋肉に注射し
た。グループ１及びグループ２の２０匹の処理マウスの
体重に近い体重を有する無作為に選択した５匹のBALB/C
ヌードnu/nu マウスを対照とした（この５匹のマウスを
グループ１及びグループ２の双方の実験における対照と
した）。対照マウスには処理マウスと同様に同タイプ及
びおよそ同一数のヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞を皮下注
射した。対照マウスにはMuJ-7 を与えなかった。
【００５１】グループ１のマウスに対しては腫瘍容積を
５日おきに記録した。表２０には処理マウス及び５匹の
対照（未処理）マウスにおける平均腫瘍容積が記載され
ている。このうち３匹の未処理対照マウスは第３１、３
２及び３４日に死に、これらの死んだマウスはその死後
の測定からは除外された。
５日おきに記録した。表２０には処理マウス及び５匹の
対照（未処理）マウスにおける平均腫瘍容積が記載され
ている。このうち３匹の未処理対照マウスは第３１、３
２及び３４日に死に、これらの死んだマウスはその死後
の測定からは除外された。
【００５２】
【表２０】
【００５３】グループ１の１０匹の処理マウスのうち８
匹が第４２日までに腫瘍の完全な消滅を示した。完全な
消滅の際には腫瘍重量及び腫瘍容積の測定は不可能であ
った。それ故、表２０及びこの段落において、第４２日
のグループ１処理マウスの平均腫瘍容積及び平均腫瘍重
量に関して完全な消滅を示した８匹のマウスは除外され
ている。表２０に示されるとおり、MuJ-7 を与えられた
グループ１のマウスの平均腫瘍容積は第２２日に約９．
８ｍｍ3 であったものが第４２日には約４４．８ｍｍ3
に増加し、一方、対照（未処理）マウスの平均腫瘍容積
は第２２日に約１２２．１ｍｍ3 であったものが第４２
日には約１９７８．１ｍｍ3 に増加した。第４２日にお
いて腫瘍の完全な消滅を示さなかったグループ１の２匹
の処理マウスの平均腫瘍重量は約５１ｍｇであり、一
方、未処理対照マウスにおける第４２日の平均腫瘍重量
は約１１９６ｍｇであった。
匹が第４２日までに腫瘍の完全な消滅を示した。完全な
消滅の際には腫瘍重量及び腫瘍容積の測定は不可能であ
った。それ故、表２０及びこの段落において、第４２日
のグループ１処理マウスの平均腫瘍容積及び平均腫瘍重
量に関して完全な消滅を示した８匹のマウスは除外され
ている。表２０に示されるとおり、MuJ-7 を与えられた
グループ１のマウスの平均腫瘍容積は第２２日に約９．
８ｍｍ3 であったものが第４２日には約４４．８ｍｍ3
に増加し、一方、対照（未処理）マウスの平均腫瘍容積
は第２２日に約１２２．１ｍｍ3 であったものが第４２
日には約１９７８．１ｍｍ3 に増加した。第４２日にお
いて腫瘍の完全な消滅を示さなかったグループ１の２匹
の処理マウスの平均腫瘍重量は約５１ｍｇであり、一
方、未処理対照マウスにおける第４２日の平均腫瘍重量
は約１１９６ｍｇであった。
【００５４】グループ２の１０匹の処理マウスのうち８
匹が第３４日（つまり、癌細胞移植後３３日目）までに
腫瘍の完全な消滅を示した。完全な消滅の際には腫瘍重
量及び腫瘍容積の測定は不可能であった。それ故、この
段落において、第３４日のグループ２処理マウスの平均
腫瘍容積及び平均腫瘍重量に関して完全な消滅を示した
８匹のマウスは除外されている。対照マウスのうち１匹
は第３１日に死に、１匹は第３２日に死に、更にもう１
匹が第３４日に死んだ。このため、この段落において、
第３４日の対照マウスの平均腫瘍容積及び平均腫瘍重量
に関して、第３４日より前に死んだ２匹のマウスは除外
されている。グループ２の処理マウスにおいて、MuJ-7
は第２２日に約１０５ｍｍ3 であった平均腫瘍容積を第
３４日には約３．１ｍｍ3 なるまで減少させ、一方、対
照（未処理）マウスの平均腫瘍容積は第２２日に約１２
２．１ｍｍ3 であったものが第３４日には約１８８８ｍ
ｍ 3 にまで増加した。第３４日の実験終了時における腫
瘍の完全な消滅を示さなかったグループ２の２匹の処理
マウスの平均腫瘍重量は約２３ｍｇであり、一方、未処
理対照マウスにおける第３４日の平均腫瘍重量は約７４
６ｍｇであった。
匹が第３４日（つまり、癌細胞移植後３３日目）までに
腫瘍の完全な消滅を示した。完全な消滅の際には腫瘍重
量及び腫瘍容積の測定は不可能であった。それ故、この
段落において、第３４日のグループ２処理マウスの平均
腫瘍容積及び平均腫瘍重量に関して完全な消滅を示した
８匹のマウスは除外されている。対照マウスのうち１匹
は第３１日に死に、１匹は第３２日に死に、更にもう１
匹が第３４日に死んだ。このため、この段落において、
第３４日の対照マウスの平均腫瘍容積及び平均腫瘍重量
に関して、第３４日より前に死んだ２匹のマウスは除外
されている。グループ２の処理マウスにおいて、MuJ-7
は第２２日に約１０５ｍｍ3 であった平均腫瘍容積を第
３４日には約３．１ｍｍ3 なるまで減少させ、一方、対
照（未処理）マウスの平均腫瘍容積は第２２日に約１２
２．１ｍｍ3 であったものが第３４日には約１８８８ｍ
ｍ 3 にまで増加した。第３４日の実験終了時における腫
瘍の完全な消滅を示さなかったグループ２の２匹の処理
マウスの平均腫瘍重量は約２３ｍｇであり、一方、未処
理対照マウスにおける第３４日の平均腫瘍重量は約７４
６ｍｇであった。
【００５５】図３はグループ１の処理マウス（○）、グ
ループ２の処理マウス（□）、及び未処理対照マウス
（＋）の平均腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示
すグラフである。図３中、第１２日の下の矢印はグルー
プ１のマウスが最初にMuJ-7 を投与された時を示し、第
２０日の下の矢印はグループ２のマウスが最初にMuJ-7
を投与された時を示す。例８ ヒト結腸癌細胞株（HT 29 、SW 620及びCoLo 205）を使
用して、ヒト起源原発性結腸腫瘍を有するBALB/Cヌード
nu/nu マウスの治療におけるMuJ-7 の有効性の試験を行
った。更に、MuJ-7 の有効性をヒト肺癌株L 132 からの
細胞を注射したBALB/Cヌードnu/nu マウスの治療におい
て証明した。簡潔に説明すると、上記のヒト癌細胞株
（HT 29 、SW 620及びCoLo 205）のそれぞれを、２匹の
ヌードマウス（そのうち１匹は対照とする）に１２００
万癌細胞／マウスの割合で皮下注射し（第１日）、注射
後３〜１１日からMuJ-7 による非対照マウスの治療を開
始した。一旦治療を開始した後は、処理マウスのそれぞ
れにMuJ-7 を１４日間連続して注射し、１日のMuJ-7 投
与量の約３分の１を１回当りに注射した。それぞれの処
理マウスにおけるMuJ-7 の１日注射量中には、約１．１
４３μｇのＶＩＰ1 、約１．１４３μｇのＶＩＰ2 、約
１．１４３μｇのＶＩＰ3 、約１．１４３μｇのＳＯＭ
1 、約１．１４３μｇのＳＯＭ2 、約１．１４３μｇの
ＢＯＭ1 、及び約１．１４３μｇのＳＰ1 が含まれてい
た。HT 29 癌細胞を移植された処理マウスに対しては第
１２日目（つまり、癌細胞の注射後１１日）に治療を開
始し、SW620癌細胞を移植された処理マウスに対しては
第８日目（つまり、癌細胞の注射後７日）に治療を開始
し、CoLo 205癌細胞を移植された処理マウスに対しては
第４日目（つまり、癌細胞の注射後３日）に治療を開始
し、L 132 癌細胞を移植された処理マウスに対しては第
５日目（つまり、癌細胞の注射後４日）に治療を開始し
た。MuJ-7 の１日の総重量はほぼ同量になるように３等
分した。約８時間の間隔をおいて、一日に３回、３等分
のうちの１つを処理マウスそれぞれに注射した。１日の
うち最初の投与は尾の静脈に注射し、２回目の投与は臀
部筋肉の一方に注射し、３回目の投与は他方の臀部筋肉
に注射した。処理マウスの体重に近い体重を有する無作
為に選択したBALB/Cヌードnu/nu マウスを対照とした。
対照マウスには処理マウスと同様に同タイプ及びおよそ
同一数のヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞を皮下注射した。
対照マウスにはMuJ-7 を与えなかった。
ループ２の処理マウス（□）、及び未処理対照マウス
（＋）の平均腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示
すグラフである。図３中、第１２日の下の矢印はグルー
プ１のマウスが最初にMuJ-7 を投与された時を示し、第
２０日の下の矢印はグループ２のマウスが最初にMuJ-7
を投与された時を示す。例８ ヒト結腸癌細胞株（HT 29 、SW 620及びCoLo 205）を使
用して、ヒト起源原発性結腸腫瘍を有するBALB/Cヌード
nu/nu マウスの治療におけるMuJ-7 の有効性の試験を行
った。更に、MuJ-7 の有効性をヒト肺癌株L 132 からの
細胞を注射したBALB/Cヌードnu/nu マウスの治療におい
て証明した。簡潔に説明すると、上記のヒト癌細胞株
（HT 29 、SW 620及びCoLo 205）のそれぞれを、２匹の
ヌードマウス（そのうち１匹は対照とする）に１２００
万癌細胞／マウスの割合で皮下注射し（第１日）、注射
後３〜１１日からMuJ-7 による非対照マウスの治療を開
始した。一旦治療を開始した後は、処理マウスのそれぞ
れにMuJ-7 を１４日間連続して注射し、１日のMuJ-7 投
与量の約３分の１を１回当りに注射した。それぞれの処
理マウスにおけるMuJ-7 の１日注射量中には、約１．１
４３μｇのＶＩＰ1 、約１．１４３μｇのＶＩＰ2 、約
１．１４３μｇのＶＩＰ3 、約１．１４３μｇのＳＯＭ
1 、約１．１４３μｇのＳＯＭ2 、約１．１４３μｇの
ＢＯＭ1 、及び約１．１４３μｇのＳＰ1 が含まれてい
た。HT 29 癌細胞を移植された処理マウスに対しては第
１２日目（つまり、癌細胞の注射後１１日）に治療を開
始し、SW620癌細胞を移植された処理マウスに対しては
第８日目（つまり、癌細胞の注射後７日）に治療を開始
し、CoLo 205癌細胞を移植された処理マウスに対しては
第４日目（つまり、癌細胞の注射後３日）に治療を開始
し、L 132 癌細胞を移植された処理マウスに対しては第
５日目（つまり、癌細胞の注射後４日）に治療を開始し
た。MuJ-7 の１日の総重量はほぼ同量になるように３等
分した。約８時間の間隔をおいて、一日に３回、３等分
のうちの１つを処理マウスそれぞれに注射した。１日の
うち最初の投与は尾の静脈に注射し、２回目の投与は臀
部筋肉の一方に注射し、３回目の投与は他方の臀部筋肉
に注射した。処理マウスの体重に近い体重を有する無作
為に選択したBALB/Cヌードnu/nu マウスを対照とした。
対照マウスには処理マウスと同様に同タイプ及びおよそ
同一数のヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞を皮下注射した。
対照マウスにはMuJ-7 を与えなかった。
【００５６】SW 620細胞に関する実験において、未処理
対照マウスの腫瘍容積は第６日に約６７．５ｍｍ3 であ
ったものが第２６日（つまり、第１日の癌細胞注射後２
５日）には約５０８．９ｍｍ3 にまで増加し、その時点
でマウスは腫瘍が原因で死んでしまった。一方、MuJ-7
処理したマウスの腫瘍容積は第６日に約４７．１ｍｍ 3
であったものが第１６日（処理９日後）には完全に消滅
してしまった。表２１には第６日から死ぬまでの未処理
対照マウス及び処理マウスの腫瘍容積測定結果（単位：
ｍｍ2)が記載されている。図４は処理マウス（○）、及
び未処理対照マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日
数との関係で示すグラフである。図４中、矢印は処理マ
ウスが第８日に最初にMuJ-7 を投与されたことを示す。
第８７日目（つまり第１日のSW 620細胞注射後８６日）
に死んだ処理マウスの生存時間は、未処理対照マウスと
比較して、約２４４％増加した。生存時間における増加
率は以下の式： 生存時間増加率 ＝ (ＮT −ＮC ) ／ＮC ×１００ （ここでＮT は処理マウスの死んだ日数（又は生存が確
認された最後の日数）から癌細胞を注射した日の日数を
引いたものであり、ＮC は未処理対照マウスの死んだ日
数から癌細胞を注射した日の日数を引いたものである）
に従い計算した。
対照マウスの腫瘍容積は第６日に約６７．５ｍｍ3 であ
ったものが第２６日（つまり、第１日の癌細胞注射後２
５日）には約５０８．９ｍｍ3 にまで増加し、その時点
でマウスは腫瘍が原因で死んでしまった。一方、MuJ-7
処理したマウスの腫瘍容積は第６日に約４７．１ｍｍ 3
であったものが第１６日（処理９日後）には完全に消滅
してしまった。表２１には第６日から死ぬまでの未処理
対照マウス及び処理マウスの腫瘍容積測定結果（単位：
ｍｍ2)が記載されている。図４は処理マウス（○）、及
び未処理対照マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日
数との関係で示すグラフである。図４中、矢印は処理マ
ウスが第８日に最初にMuJ-7 を投与されたことを示す。
第８７日目（つまり第１日のSW 620細胞注射後８６日）
に死んだ処理マウスの生存時間は、未処理対照マウスと
比較して、約２４４％増加した。生存時間における増加
率は以下の式： 生存時間増加率 ＝ (ＮT −ＮC ) ／ＮC ×１００ （ここでＮT は処理マウスの死んだ日数（又は生存が確
認された最後の日数）から癌細胞を注射した日の日数を
引いたものであり、ＮC は未処理対照マウスの死んだ日
数から癌細胞を注射した日の日数を引いたものである）
に従い計算した。
【００５７】
【表２１】
【００５８】HT 29 細胞に関する実験において、未処理
対照マウスの腫瘍容積は第１０日に約９５．１ｍｍ3 で
あったものが第５２日（つまり、第１日の癌細胞注射後
５１日）には約４５３６．３ｍｍ3 にまで増加し、その
時点でマウスは腫瘍が原因で死んでしまった。それと比
較して、MuJ-7 処理したマウスの腫瘍容積は第１０日に
約１５９．１ｍｍ3 であったものが第５２日には約２１
９２．７ｍｍ3 と比較的ゆっくり増加し、その後第８６
日（つまり、第１日の癌細胞注射後８５日）には約１５
５６．４ｍｍ3 に腫瘍容積が減少した。表２２には第１
０日から死ぬまでの未処理対照マウス及び処理マウスの
腫瘍容積測定結果（単位：ｍｍ2)が記載されている。図
５は処理マウス（○）、及び未処理対照マウス（＋）の
腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示すグラフであ
る。図５中、矢印は処理マウスが第１２日に最初にMuJ-
7 を投与されたことを示す。第１０４日目（つまり第１
日のHT 29 細胞注射後１０３日）に死んだ処理マウスの
生存時間は、未処理対照マウスと比較して、約１０２％
増加した。
対照マウスの腫瘍容積は第１０日に約９５．１ｍｍ3 で
あったものが第５２日（つまり、第１日の癌細胞注射後
５１日）には約４５３６．３ｍｍ3 にまで増加し、その
時点でマウスは腫瘍が原因で死んでしまった。それと比
較して、MuJ-7 処理したマウスの腫瘍容積は第１０日に
約１５９．１ｍｍ3 であったものが第５２日には約２１
９２．７ｍｍ3 と比較的ゆっくり増加し、その後第８６
日（つまり、第１日の癌細胞注射後８５日）には約１５
５６．４ｍｍ3 に腫瘍容積が減少した。表２２には第１
０日から死ぬまでの未処理対照マウス及び処理マウスの
腫瘍容積測定結果（単位：ｍｍ2)が記載されている。図
５は処理マウス（○）、及び未処理対照マウス（＋）の
腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示すグラフであ
る。図５中、矢印は処理マウスが第１２日に最初にMuJ-
7 を投与されたことを示す。第１０４日目（つまり第１
日のHT 29 細胞注射後１０３日）に死んだ処理マウスの
生存時間は、未処理対照マウスと比較して、約１０２％
増加した。
【００５９】
【表２２】
【００６０】CoLo 205細胞に関する実験において、未処
理対照マウスの腫瘍容積は第３日に約７４．９ｍｍ3 で
あったものが第２２日（つまり、第１日の癌細胞注射後
２１日）には約７３４４．９ｍｍ3 にまで増加し、その
時点でマウスは腫瘍が原因で死んでしまった。それと比
較して、MuJ-7 処理したマウスの腫瘍容積は第３日に約
７８．２ｍｍ3 であったものが第８日（処理後４日）に
は完全に消滅してしまった。表２３には第３日から死ぬ
までの未処理対照マウス及び処理マウスの腫瘍容積測定
結果（単位：ｍｍ2)が記載されている。図６は処理マウ
ス（○）、及び未処理対照マウス（＋）の腫瘍容積（ｍ
ｍ3)を経過日数との関係で示すグラフである。図６中、
矢印は処理マウスが第４日に最初にMuJ-7 を投与された
ことを示す。第７９日目（つまり第１日のCoLo 205細胞
注射後７８日）に死んだ処理マウスの生存時間は、未処
理対照マウスと比較して、約２７１％増加した。
理対照マウスの腫瘍容積は第３日に約７４．９ｍｍ3 で
あったものが第２２日（つまり、第１日の癌細胞注射後
２１日）には約７３４４．９ｍｍ3 にまで増加し、その
時点でマウスは腫瘍が原因で死んでしまった。それと比
較して、MuJ-7 処理したマウスの腫瘍容積は第３日に約
７８．２ｍｍ3 であったものが第８日（処理後４日）に
は完全に消滅してしまった。表２３には第３日から死ぬ
までの未処理対照マウス及び処理マウスの腫瘍容積測定
結果（単位：ｍｍ2)が記載されている。図６は処理マウ
ス（○）、及び未処理対照マウス（＋）の腫瘍容積（ｍ
ｍ3)を経過日数との関係で示すグラフである。図６中、
矢印は処理マウスが第４日に最初にMuJ-7 を投与された
ことを示す。第７９日目（つまり第１日のCoLo 205細胞
注射後７８日）に死んだ処理マウスの生存時間は、未処
理対照マウスと比較して、約２７１％増加した。
【００６１】
【表２３】
【００６２】L 132 細胞に関する実験において、未処理
対照マウスの腫瘍容積は第２日に約２８．５ｍｍ3 であ
ったものが第３４日（つまり、第１日の癌細胞注射後３
３日）には約７１７４．３ｍｍ3 にまで増加し、その時
点でマウスは腫瘍が原因で死んでしまった。一方、MuJ-
7 処理したマウスの腫瘍容積は第２日に約３８．３ｍｍ
3 であったものが第２７日（処理後２２日）には完全に
消滅してしまった。表２４には第２日から死ぬまでの未
処理対照マウス及び処理マウスの腫瘍容積測定結果（単
位：ｍｍ2)が記載されている。図７は処理マウス
（○）、及び未処理対照マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ
3)を経過日数との関係で示すグラフである。図６中、矢
印は処理マウスが第５日に最初にMuJ-7 を投与されたこ
とを示す。第７０日目（つまり第１日のL 132 細胞注射
後６９日）に死んだ処理マウスの生存時間は、未処理対
照マウスと比較して、約１０９％増加した。
対照マウスの腫瘍容積は第２日に約２８．５ｍｍ3 であ
ったものが第３４日（つまり、第１日の癌細胞注射後３
３日）には約７１７４．３ｍｍ3 にまで増加し、その時
点でマウスは腫瘍が原因で死んでしまった。一方、MuJ-
7 処理したマウスの腫瘍容積は第２日に約３８．３ｍｍ
3 であったものが第２７日（処理後２２日）には完全に
消滅してしまった。表２４には第２日から死ぬまでの未
処理対照マウス及び処理マウスの腫瘍容積測定結果（単
位：ｍｍ2)が記載されている。図７は処理マウス
（○）、及び未処理対照マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ
3)を経過日数との関係で示すグラフである。図６中、矢
印は処理マウスが第５日に最初にMuJ-7 を投与されたこ
とを示す。第７０日目（つまり第１日のL 132 細胞注射
後６９日）に死んだ処理マウスの生存時間は、未処理対
照マウスと比較して、約１０９％増加した。
【００６３】
【表２４】
【００６４】例９ ２匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスのそれぞれに約１０億
個のヒト結腸アデノ癌腫細胞を移植した（第１日）。第
２２日目（つまり、癌細胞の注射後２１日）から１匹の
マウスに、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 及
びＳＯＭ2 の組み合わせの１日投与量を腹腔内注射によ
り与えた。１４日間に渡りこの処理マウスに約８μｇの
組み合わせを与えた。この組み合わせは、約１．６μｇ
のＶＩＰ 1 、約１．６μｇのＶＩＰ2 、約１．６μｇの
ＶＩＰ3 、約１．６μｇのＳＯＭ 1 及び約１．６μｇの
ＳＯＭ2 を含有するものであった。この処理マウスに対
して第３５日目（つまり、第１日の癌細胞の注射後３４
日）に最後の組み合わせを与えた。第３５日目の実験終
了後、処理マウスの腫瘍容積は約７２０ｍｍ3 であっ
た。他のマウスは未処理であり対照とした。第３５日に
未処理対照マウスの腫瘍容積は約３５８４ｍｍ3 であっ
た。例１０ ３匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスのそれぞれに約１０億
個のヒト結腸アデノ癌腫細胞を移植した（第１日）。第
２日目（つまり、癌細胞の注射後１日）から２匹のマウ
スに、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 及びＳ
ＯＭ2 の組み合わせの１日投与量を腹腔内注射により与
えた。１４日間に渡り１日に１度、この処理マウスに約
８μｇの組み合わせを与えた。この組み合わせは、約
１．６μｇのＶＩＰ1 、約１．６μｇのＶＩＰ2 、約
１．６μｇのＶＩＰ3 、約１．６μｇのＳＯＭ1 及び約
１．６μｇのＳＯＭ2 を含有するものであった（これら
を１度に与え、分けることはしなかった）。この処理マ
ウスに対して第１５日目（つまり、第１日の癌細胞の注
射後１４日）に最後の組み合わせを与えた。第１５日目
の実験終了後、処理マウスの腫瘍容積は約８０ｍｍ3 で
あり、腫瘍重量は約０．１４９ｇであった。第１５日に
未処理対照マウスの腫瘍容積は約３８４ｍｍ3 であり、
腫瘍重量は約０．４０６ｇであった。例１１ ２匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスのそれぞれに約１０億
個のヒト結腸アデノ癌腫細胞を移植した（第１日）。第
２日目（つまり、癌細胞の注射後１日）から２匹のマウ
スに、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 及びＳ
ＯＭ2 の組み合わせの１日投与量を腹腔内注射により与
えた。１４日間に渡り、この処理マウスに約８μｇの組
み合わせを与えた。この組み合わせは、約１．６μｇの
ＶＩＰ1、約１．６μｇのＶＩＰ2 、約１．６μｇのＶ
ＩＰ3 、約１．６μｇのＳＯＭ1及び約１．６μｇのＳ
ＯＭ2 を含有するものであった。組み合わせの１日の総
重量をほぼ同量になるように３等分した。約８時間の間
隔をおいて、一日に３回、３等分のうちの１つを処理マ
ウスそれぞれに注射した。１日のうち最初の投与は静脈
内投与とし、２回目及び３回目の投与は筋肉内注射とし
た。この処理マウスに対して第１５日目（つまり、第１
日の癌細胞の注射後１４日）に最後の組み合わせを与え
た。第１５日目の実験終了後、処理マウスの腫瘍容積は
約０．８ｍｍ 3 であり、腫瘍重量は約０．００９ｇであ
った。他のマウスは未処理であり対照とした。第１５日
に未処理対照マウスの腫瘍容積は約１７２８ｍｍ3 であ
り、未処理対照マウスの腫瘍重量は約２．１８ｇであっ
た。例１２ ３匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスのそれぞれに約１６０
０万個のヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞を移植し
た（第１日）。第２１日目（つまり、癌細胞の注射後２
０日）、第２２日目、及び第２３日目にこれらのマウス
のうち２匹に、１日投与量分のMuJ-7 を与えた。この３
日間のそれぞれの日においてそれぞれの処理マウスに与
えたMuJ-7 の１日分投与量には、約１．１４３μｇのＶ
ＩＰ1 、約１．１４３μｇのＶＩＰ2 、約１．１４３μ
ｇのＶＩＰ3 、約１．１４３μｇのＳＯＭ1 、約１．１
４３μｇのＳＯＭ2 、約１．１４３μｇのＢＯＭ1 、及
び約１．１４３μｇのＳＰ1 が含まれており、７種のペ
プチド類似体の総重量は約８μｇであった。第２４日か
ら第３４日にかけては、それぞれの処理マウスに与えた
MuJ-7 の１日分投与量には、約２．２８６μｇのＶＩＰ
1 、約２．２８６μｇのＶＩＰ2 、約２．２８６μｇの
ＶＩＰ3 、約２．２８６μｇのＳＯＭ1 、約２．２８６
μｇのＳＯＭ2 、約２．２８６μｇのＢＯＭ1 、及び約
２．２８６μｇのＳＰ1 が含まれており、７種のペプチ
ド類似体の総重量は約１６μｇであった。MuJ-7 の１日
の総重量をほぼ同量になるように３等分した。約８時間
の間隔をおいて、一日に３回、３等分のうちの１つを処
理マウスそれぞれに注射した。１日のうち最初の投与は
尾の静脈に注射し、２回目の投与は臀部筋肉の一方に注
射し、３回目の投与は他方の臀部筋肉に注射した。２匹
の処理マウスの体重に近い体重を有する３匹目の未処理
マウスを対照とし、このマウスにはMuJ-7 を与えなかっ
た。表２５には、１匹目の処理マウスについては第５５
日まで、２匹目の処理マウス及び対照マウスについては
死ぬまでの腫瘍容積（ｍｍ3)が示されている。少なくと
も第５５日目（つまり第１日目の腫瘍細胞注射後５４
日）まで生きた１匹目の処理処理マウスの生存時間は、
未処理対照マウスと比較して、少なくとも約１０８％増
加した。第３８日目（つまり第１日目の腫瘍細胞注射後
３７日）に死んだ２匹目の処理処理マウスの生存時間
は、未処理対照マウスと比較して、約４２％増加した。
個のヒト結腸アデノ癌腫細胞を移植した（第１日）。第
２２日目（つまり、癌細胞の注射後２１日）から１匹の
マウスに、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 及
びＳＯＭ2 の組み合わせの１日投与量を腹腔内注射によ
り与えた。１４日間に渡りこの処理マウスに約８μｇの
組み合わせを与えた。この組み合わせは、約１．６μｇ
のＶＩＰ 1 、約１．６μｇのＶＩＰ2 、約１．６μｇの
ＶＩＰ3 、約１．６μｇのＳＯＭ 1 及び約１．６μｇの
ＳＯＭ2 を含有するものであった。この処理マウスに対
して第３５日目（つまり、第１日の癌細胞の注射後３４
日）に最後の組み合わせを与えた。第３５日目の実験終
了後、処理マウスの腫瘍容積は約７２０ｍｍ3 であっ
た。他のマウスは未処理であり対照とした。第３５日に
未処理対照マウスの腫瘍容積は約３５８４ｍｍ3 であっ
た。例１０ ３匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスのそれぞれに約１０億
個のヒト結腸アデノ癌腫細胞を移植した（第１日）。第
２日目（つまり、癌細胞の注射後１日）から２匹のマウ
スに、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 及びＳ
ＯＭ2 の組み合わせの１日投与量を腹腔内注射により与
えた。１４日間に渡り１日に１度、この処理マウスに約
８μｇの組み合わせを与えた。この組み合わせは、約
１．６μｇのＶＩＰ1 、約１．６μｇのＶＩＰ2 、約
１．６μｇのＶＩＰ3 、約１．６μｇのＳＯＭ1 及び約
１．６μｇのＳＯＭ2 を含有するものであった（これら
を１度に与え、分けることはしなかった）。この処理マ
ウスに対して第１５日目（つまり、第１日の癌細胞の注
射後１４日）に最後の組み合わせを与えた。第１５日目
の実験終了後、処理マウスの腫瘍容積は約８０ｍｍ3 で
あり、腫瘍重量は約０．１４９ｇであった。第１５日に
未処理対照マウスの腫瘍容積は約３８４ｍｍ3 であり、
腫瘍重量は約０．４０６ｇであった。例１１ ２匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスのそれぞれに約１０億
個のヒト結腸アデノ癌腫細胞を移植した（第１日）。第
２日目（つまり、癌細胞の注射後１日）から２匹のマウ
スに、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 及びＳ
ＯＭ2 の組み合わせの１日投与量を腹腔内注射により与
えた。１４日間に渡り、この処理マウスに約８μｇの組
み合わせを与えた。この組み合わせは、約１．６μｇの
ＶＩＰ1、約１．６μｇのＶＩＰ2 、約１．６μｇのＶ
ＩＰ3 、約１．６μｇのＳＯＭ1及び約１．６μｇのＳ
ＯＭ2 を含有するものであった。組み合わせの１日の総
重量をほぼ同量になるように３等分した。約８時間の間
隔をおいて、一日に３回、３等分のうちの１つを処理マ
ウスそれぞれに注射した。１日のうち最初の投与は静脈
内投与とし、２回目及び３回目の投与は筋肉内注射とし
た。この処理マウスに対して第１５日目（つまり、第１
日の癌細胞の注射後１４日）に最後の組み合わせを与え
た。第１５日目の実験終了後、処理マウスの腫瘍容積は
約０．８ｍｍ 3 であり、腫瘍重量は約０．００９ｇであ
った。他のマウスは未処理であり対照とした。第１５日
に未処理対照マウスの腫瘍容積は約１７２８ｍｍ3 であ
り、未処理対照マウスの腫瘍重量は約２．１８ｇであっ
た。例１２ ３匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスのそれぞれに約１６０
０万個のヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞を移植し
た（第１日）。第２１日目（つまり、癌細胞の注射後２
０日）、第２２日目、及び第２３日目にこれらのマウス
のうち２匹に、１日投与量分のMuJ-7 を与えた。この３
日間のそれぞれの日においてそれぞれの処理マウスに与
えたMuJ-7 の１日分投与量には、約１．１４３μｇのＶ
ＩＰ1 、約１．１４３μｇのＶＩＰ2 、約１．１４３μ
ｇのＶＩＰ3 、約１．１４３μｇのＳＯＭ1 、約１．１
４３μｇのＳＯＭ2 、約１．１４３μｇのＢＯＭ1 、及
び約１．１４３μｇのＳＰ1 が含まれており、７種のペ
プチド類似体の総重量は約８μｇであった。第２４日か
ら第３４日にかけては、それぞれの処理マウスに与えた
MuJ-7 の１日分投与量には、約２．２８６μｇのＶＩＰ
1 、約２．２８６μｇのＶＩＰ2 、約２．２８６μｇの
ＶＩＰ3 、約２．２８６μｇのＳＯＭ1 、約２．２８６
μｇのＳＯＭ2 、約２．２８６μｇのＢＯＭ1 、及び約
２．２８６μｇのＳＰ1 が含まれており、７種のペプチ
ド類似体の総重量は約１６μｇであった。MuJ-7 の１日
の総重量をほぼ同量になるように３等分した。約８時間
の間隔をおいて、一日に３回、３等分のうちの１つを処
理マウスそれぞれに注射した。１日のうち最初の投与は
尾の静脈に注射し、２回目の投与は臀部筋肉の一方に注
射し、３回目の投与は他方の臀部筋肉に注射した。２匹
の処理マウスの体重に近い体重を有する３匹目の未処理
マウスを対照とし、このマウスにはMuJ-7 を与えなかっ
た。表２５には、１匹目の処理マウスについては第５５
日まで、２匹目の処理マウス及び対照マウスについては
死ぬまでの腫瘍容積（ｍｍ3)が示されている。少なくと
も第５５日目（つまり第１日目の腫瘍細胞注射後５４
日）まで生きた１匹目の処理処理マウスの生存時間は、
未処理対照マウスと比較して、少なくとも約１０８％増
加した。第３８日目（つまり第１日目の腫瘍細胞注射後
３７日）に死んだ２匹目の処理処理マウスの生存時間
は、未処理対照マウスと比較して、約４２％増加した。
【００６５】
【表２５】
【００６６】例１３ ２２匹のBALB/Cヌードnu/nu マウスのそれぞれに約１０
００万個のヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞を移植
した（第１日）。第１５日目にこれらのマウスのうち１
２匹に１日投与量分のMuJ-7 を与え、これを１４日間続
けた。それぞれの処理マウスに与えたMuJ-7 の１日分投
与量には、約１．１４３μｇのＶＩＰ1、約１．１４３
μｇのＶＩＰ2 、約１．１４３μｇのＶＩＰ3 、約１．
１４３μｇのＳＯＭ1 、約１．１４３μｇのＳＯＭ2 、
約１．１４３μｇのＢＯＭ1 、及び約１．１４３μｇの
ＳＰ1 が含まれていた。従って、MuJ-7 の１日分投与量
には７種のペプチド類似体（ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩ
Ｐ3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1 ）が
いつもほぼ同量含まれており、これら７種のペプチド類
似体の１日の総重量は約８μｇであった。MuJ-7 の１日
の総重量をほぼ同量になるように３等分した。約８時間
の間隔をおいて、一日に３回、３等分のうちの１つを処
理マウスそれぞれに注射した。１日のうち最初の投与は
尾の静脈に注射し、２回目の投与は臀部筋肉の一方に注
射し、３回目の投与は他方の臀部筋肉に注射した。１０
匹の未処理マウスを対照として使用した。対照は、１２
匹の処理マウスの体重に近い体重を有するBALB/Cヌード
nu/nu マウスから１０匹を無作為に選択した。対照マウ
スには処理マウスと同様に、同タイプ及びおよそ同一数
のヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞を注射した。対照マウス
にはMuJ-7 を与えなかった。それぞれの処理及び未処理
マウスの腫瘍容積を概略５日おきに記録した。表２６に
は１２匹の処理マウスそれぞれの腫瘍容積（ｍｍ3)が示
され、表２７には１０匹の未処理対照マウスそれぞれの
腫瘍容積（ｍｍ3)が示されている。
００万個のヒト結腸アデノ癌腫の原発性腫瘍細胞を移植
した（第１日）。第１５日目にこれらのマウスのうち１
２匹に１日投与量分のMuJ-7 を与え、これを１４日間続
けた。それぞれの処理マウスに与えたMuJ-7 の１日分投
与量には、約１．１４３μｇのＶＩＰ1、約１．１４３
μｇのＶＩＰ2 、約１．１４３μｇのＶＩＰ3 、約１．
１４３μｇのＳＯＭ1 、約１．１４３μｇのＳＯＭ2 、
約１．１４３μｇのＢＯＭ1 、及び約１．１４３μｇの
ＳＰ1 が含まれていた。従って、MuJ-7 の１日分投与量
には７種のペプチド類似体（ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩ
Ｐ3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1 ）が
いつもほぼ同量含まれており、これら７種のペプチド類
似体の１日の総重量は約８μｇであった。MuJ-7 の１日
の総重量をほぼ同量になるように３等分した。約８時間
の間隔をおいて、一日に３回、３等分のうちの１つを処
理マウスそれぞれに注射した。１日のうち最初の投与は
尾の静脈に注射し、２回目の投与は臀部筋肉の一方に注
射し、３回目の投与は他方の臀部筋肉に注射した。１０
匹の未処理マウスを対照として使用した。対照は、１２
匹の処理マウスの体重に近い体重を有するBALB/Cヌード
nu/nu マウスから１０匹を無作為に選択した。対照マウ
スには処理マウスと同様に、同タイプ及びおよそ同一数
のヒト結腸アデノ癌腫腫瘍細胞を注射した。対照マウス
にはMuJ-7 を与えなかった。それぞれの処理及び未処理
マウスの腫瘍容積を概略５日おきに記録した。表２６に
は１２匹の処理マウスそれぞれの腫瘍容積（ｍｍ3)が示
され、表２７には１０匹の未処理対照マウスそれぞれの
腫瘍容積（ｍｍ3)が示されている。
【００６７】
【表２６】
【００６８】
【表２７】
【００６９】図８は処理マウス（○）、及び未処理対照
マウス（＋）の平均腫瘍容積（ｍｍ 3)を経過日数との関
係で示すグラフである。図９は処理マウスの生存率（点
線）及び未処理対照マウスの生存率（実線）を経過日数
との関係で示すグラフである。図８及び９において、矢
印は処理マウスが第１５日に最初のMuJ-7 を投与された
ことを示す。
マウス（＋）の平均腫瘍容積（ｍｍ 3)を経過日数との関
係で示すグラフである。図９は処理マウスの生存率（点
線）及び未処理対照マウスの生存率（実線）を経過日数
との関係で示すグラフである。図８及び９において、矢
印は処理マウスが第１５日に最初のMuJ-7 を投与された
ことを示す。
【００７０】１０匹の対照マウスのうち８匹が第２５日
から第３５日にかけて死んだ。これと比較して、１２匹
の処理マウスのうち５匹が腫瘍の完全な消滅を示し、１
２匹の処理マウスのうち他の５匹は腫瘍の部分的縮小を
示した。従って、１２匹の処理マウスのうち１０匹が腫
瘍の完全又は部分的縮小を示したことになり、一方、処
理マウスのうち残りの２匹（マウス番号１１及び１３）
においては異なる結果となった。処理マウス番号１１は
第１５日から第３０日の間にMuJ-7 による治療を受け
た。MuJ-7 による処理が終了した後、マウス番号１１の
腫瘍は成長し始め、結果として第５０日にマウス番号１
１は死んだ。しかしながら、マウス番号１１の生存時間
は未処理対照マウスの平均生存時間を上回るものであ
る。処理マウス３もまた未処理対照マウスにおける平均
腫瘍成長速度と比較して減少した腫瘍成長速度を示し
た。処理マウス３は結果的に第５０日に死んだが、処理
マウス３の生存時間もまた未処理対照マウスの平均生存
時間を上回るものである。
から第３５日にかけて死んだ。これと比較して、１２匹
の処理マウスのうち５匹が腫瘍の完全な消滅を示し、１
２匹の処理マウスのうち他の５匹は腫瘍の部分的縮小を
示した。従って、１２匹の処理マウスのうち１０匹が腫
瘍の完全又は部分的縮小を示したことになり、一方、処
理マウスのうち残りの２匹（マウス番号１１及び１３）
においては異なる結果となった。処理マウス番号１１は
第１５日から第３０日の間にMuJ-7 による治療を受け
た。MuJ-7 による処理が終了した後、マウス番号１１の
腫瘍は成長し始め、結果として第５０日にマウス番号１
１は死んだ。しかしながら、マウス番号１１の生存時間
は未処理対照マウスの平均生存時間を上回るものであ
る。処理マウス３もまた未処理対照マウスにおける平均
腫瘍成長速度と比較して減少した腫瘍成長速度を示し
た。処理マウス３は結果的に第５０日に死んだが、処理
マウス３の生存時間もまた未処理対照マウスの平均生存
時間を上回るものである。
【００７１】１０匹の未処理対照マウスのうち、２匹が
第２５日に死に、２匹が第３０日に死に、４匹が第３５
日に死に、２匹が第３５日以降に死んだ。完全に腫瘍が
消滅した５匹の処理マウスを第５５日に検査したが腫瘍
の再発は観察されなかった。残りの７匹の処理マウスの
うち、４匹が第４０日に死に、１匹が第５０日に死に、
２匹が第５５日に死んだ。従って、これら７匹の処理マ
ウスの生存時間は１０匹の未処理対照マウスの平均生存
時間を上回るものである。プロトコールの説明 間接蛍光抗体法 ：３〜４日経過した培養から採取した約
１０4 細胞／ｍｌの濃度を有する約１００μｌの活発な
粘着性腫瘍細胞を２４デイ培養プレートの円形無菌カバ
ーグラスに入れ、ＣＯ2 インキュベータにおいて３７℃
でインキュベートした。２４時間後、腫瘍細胞が培養表
面に付着し始めた際に、ウェルを成長培地で洗浄し、Ｃ
Ｏ 2 インキュベータで３７℃において更にインキュベー
トした。約４〜５日後、粘着性腫瘍細胞が付着したカバ
ーグラスを、RPMI 1640 を含有する約５％のウシ胎児血
清（以後、「ＦＣＳ］とする）を用いてよく洗浄し、次
に、約５％のＦＣＳを含有し、約７．４のｐＨである約
０．０５Ｍの燐酸緩衝溶液（以後、「ＰＢＳ」とする）
により洗浄し、更に、ＰＢＳのみを使用して洗浄した。
次に、カバーグラス上の腫瘍細胞を抗ペプチドポリクロ
ナール抗体の１：５０希釈と共に約３７℃で約１時間イ
ンキュベートした。カバーグラスを上記の要領で再び洗
浄し、腫瘍細胞を上記と同じ条件下で抗ウサギIgG-FITC
複合体の１：２００希釈と共にインキュベートした。洗
浄の後、パラフェニル−ジアミンの結晶を含有する１：
１の炭酸水素塩緩衝液−グリセロールで作成した培地中
にカバーグラスをマウントし、ガラススライド上に上下
を逆にして透明ワニス溶液を用いて封入した。腫瘍細胞
をMicrophot FX顕微鏡を用い紫外光の下で観察した。サンドイッチＥＬＩＳＡ法 ：丸底マイクロタイタ高活性
化(Maxisorp)プレート(Nunc, カタログNo. 449824) の
ウェルを、約０．０５％のTween 20(PBS-T) を含有し、
ｐＨが約７．４である１００μｌの約０．０５Ｍの燐酸
緩衝溶液中の１μｇの精製抗体により被覆し、約３７℃
で約１時間インキュベートした。インキュベート終了
後、自動プレート洗浄器(BDSL, UK)中でPBS-0.2%Tween
を用いてウェルを２回洗浄した。それぞれのウェルに原
発性腫瘍培地のアミコン(Amicon)濃縮培地上澄み（１０
０μｌ）を加え、約３７℃で約１時間インキュベートし
た。上記の要領でウェルを３回洗浄した。色を向上させ
るため、クエン酸−燐酸緩衝液（ｐＨ：約５．５）に基
質（１ｍｇ／ｍｌのオルトフェニルジアミン＋１μｌの
Ｈ2 Ｏ2)を加えたもの（２５μｌ）をそれぞれのウェル
に添加し、暗下において約３７℃で約５分間インキュベ
ートした。色の向上は１０μｌの５Ｎ・Ｈ2 ＳＯ4 を加
えることにより完了させた。４９０ｎｍにおけるそれぞ
れのウェルの吸光度をマルチスキャンミクロプレート分
光計(Biotech, USA)を使用して求めた。逆相高速液体クロマトグラフィー ：腫瘍細胞培養の上澄
みを５ミクロン（４６ｍｍ×１５ｃｍ）カラムを用いて
Waｔｅｒｓ Ｃ−１８ にかけた。溶媒系はグラジエン
トとして使用された２種類の溶媒から構成された。溶媒
Ａは約０．１％のトリフロロ酢酸からなり、溶媒Ｂは溶
媒Ａ中の約８０％のアセトニトリルからなるものであっ
た。１．０ｍｌ／分の流速を維持し、約４５分で約４０
％〜１００％の溶媒Ｂのグラジエントになるよう調整し
た。２３０ｎｍの波長でＵＶ検知器を使用し、ペプチド
の検出を行った。受容体−リガンドアッセイ ：腫瘍細胞を７５ｃｍ3 フラ
スコ中で群成させ、培地をデカントした。ゴム冠ポリス
マンを使用して細胞をはぎ取り、約０．５×１０6 細胞
／５０μｌの濃度になるように、RPMI 1640 中に約５％
のウシ血清アルブミン（以後、「ＢＳＡ」とする）を含
む最低量の結合緩衝液に懸濁させた。アッセイ管中の細
胞に増加カウントのI-125 ペプチドを加え、結合緩衝液
を加えることにより容量を約２００μｌにした。ガンマ
計数機を使用してそれぞれの管の放射性カウントを測定
した。次に、全ての管を約３７℃で約１時間インキュベ
ートした。反応を終了させるために、２ｍｌの氷温結合
緩衝液をそれぞれの管に加え、ボルテックスにより十分
に混合した。管を４℃において約２５００ｒｐｍ（回転
／分）で約１０分間遠心分離した。上澄みを捨て、ブロ
ットペーパを用いて管を乾燥させた。次に、それぞれの
管をガンマ計数機を用いてカウントした。それぞれの管
に加えられたカウントを結合カウントに対してプロット
し、飽和曲線を作成した。
第２５日に死に、２匹が第３０日に死に、４匹が第３５
日に死に、２匹が第３５日以降に死んだ。完全に腫瘍が
消滅した５匹の処理マウスを第５５日に検査したが腫瘍
の再発は観察されなかった。残りの７匹の処理マウスの
うち、４匹が第４０日に死に、１匹が第５０日に死に、
２匹が第５５日に死んだ。従って、これら７匹の処理マ
ウスの生存時間は１０匹の未処理対照マウスの平均生存
時間を上回るものである。プロトコールの説明 間接蛍光抗体法 ：３〜４日経過した培養から採取した約
１０4 細胞／ｍｌの濃度を有する約１００μｌの活発な
粘着性腫瘍細胞を２４デイ培養プレートの円形無菌カバ
ーグラスに入れ、ＣＯ2 インキュベータにおいて３７℃
でインキュベートした。２４時間後、腫瘍細胞が培養表
面に付着し始めた際に、ウェルを成長培地で洗浄し、Ｃ
Ｏ 2 インキュベータで３７℃において更にインキュベー
トした。約４〜５日後、粘着性腫瘍細胞が付着したカバ
ーグラスを、RPMI 1640 を含有する約５％のウシ胎児血
清（以後、「ＦＣＳ］とする）を用いてよく洗浄し、次
に、約５％のＦＣＳを含有し、約７．４のｐＨである約
０．０５Ｍの燐酸緩衝溶液（以後、「ＰＢＳ」とする）
により洗浄し、更に、ＰＢＳのみを使用して洗浄した。
次に、カバーグラス上の腫瘍細胞を抗ペプチドポリクロ
ナール抗体の１：５０希釈と共に約３７℃で約１時間イ
ンキュベートした。カバーグラスを上記の要領で再び洗
浄し、腫瘍細胞を上記と同じ条件下で抗ウサギIgG-FITC
複合体の１：２００希釈と共にインキュベートした。洗
浄の後、パラフェニル−ジアミンの結晶を含有する１：
１の炭酸水素塩緩衝液−グリセロールで作成した培地中
にカバーグラスをマウントし、ガラススライド上に上下
を逆にして透明ワニス溶液を用いて封入した。腫瘍細胞
をMicrophot FX顕微鏡を用い紫外光の下で観察した。サンドイッチＥＬＩＳＡ法 ：丸底マイクロタイタ高活性
化(Maxisorp)プレート(Nunc, カタログNo. 449824) の
ウェルを、約０．０５％のTween 20(PBS-T) を含有し、
ｐＨが約７．４である１００μｌの約０．０５Ｍの燐酸
緩衝溶液中の１μｇの精製抗体により被覆し、約３７℃
で約１時間インキュベートした。インキュベート終了
後、自動プレート洗浄器(BDSL, UK)中でPBS-0.2%Tween
を用いてウェルを２回洗浄した。それぞれのウェルに原
発性腫瘍培地のアミコン(Amicon)濃縮培地上澄み（１０
０μｌ）を加え、約３７℃で約１時間インキュベートし
た。上記の要領でウェルを３回洗浄した。色を向上させ
るため、クエン酸−燐酸緩衝液（ｐＨ：約５．５）に基
質（１ｍｇ／ｍｌのオルトフェニルジアミン＋１μｌの
Ｈ2 Ｏ2)を加えたもの（２５μｌ）をそれぞれのウェル
に添加し、暗下において約３７℃で約５分間インキュベ
ートした。色の向上は１０μｌの５Ｎ・Ｈ2 ＳＯ4 を加
えることにより完了させた。４９０ｎｍにおけるそれぞ
れのウェルの吸光度をマルチスキャンミクロプレート分
光計(Biotech, USA)を使用して求めた。逆相高速液体クロマトグラフィー ：腫瘍細胞培養の上澄
みを５ミクロン（４６ｍｍ×１５ｃｍ）カラムを用いて
Waｔｅｒｓ Ｃ−１８ にかけた。溶媒系はグラジエン
トとして使用された２種類の溶媒から構成された。溶媒
Ａは約０．１％のトリフロロ酢酸からなり、溶媒Ｂは溶
媒Ａ中の約８０％のアセトニトリルからなるものであっ
た。１．０ｍｌ／分の流速を維持し、約４５分で約４０
％〜１００％の溶媒Ｂのグラジエントになるよう調整し
た。２３０ｎｍの波長でＵＶ検知器を使用し、ペプチド
の検出を行った。受容体−リガンドアッセイ ：腫瘍細胞を７５ｃｍ3 フラ
スコ中で群成させ、培地をデカントした。ゴム冠ポリス
マンを使用して細胞をはぎ取り、約０．５×１０6 細胞
／５０μｌの濃度になるように、RPMI 1640 中に約５％
のウシ血清アルブミン（以後、「ＢＳＡ」とする）を含
む最低量の結合緩衝液に懸濁させた。アッセイ管中の細
胞に増加カウントのI-125 ペプチドを加え、結合緩衝液
を加えることにより容量を約２００μｌにした。ガンマ
計数機を使用してそれぞれの管の放射性カウントを測定
した。次に、全ての管を約３７℃で約１時間インキュベ
ートした。反応を終了させるために、２ｍｌの氷温結合
緩衝液をそれぞれの管に加え、ボルテックスにより十分
に混合した。管を４℃において約２５００ｒｐｍ（回転
／分）で約１０分間遠心分離した。上澄みを捨て、ブロ
ットペーパを用いて管を乾燥させた。次に、それぞれの
管をガンマ計数機を用いてカウントした。それぞれの管
に加えられたカウントを結合カウントに対してプロット
し、飽和曲線を作成した。
【００７２】１管当りの最適細胞数及びトレーサカウン
トを標準曲線から決定した。これは固定細胞濃度にトレ
ーサを添加した際に結合カウント数に更なる増加がない
条件に対応する。低温競合実験をこれらの飽和条件で行
った。先に最適化した固定細胞濃度及びトレーサカウン
トをアッセイ管に加えた。その後、低温ＶＩＰ、ソマト
スタチン、ボンベシン、及びサブスタンスＰを濃度を増
加させて添加し（複製）、結合緩衝液を加えて容量を２
００μｌとした。次に、これらの管を標準曲線の作成に
おいて記述した方法と同一の方法を用いて処理した。
トを標準曲線から決定した。これは固定細胞濃度にトレ
ーサを添加した際に結合カウント数に更なる増加がない
条件に対応する。低温競合実験をこれらの飽和条件で行
った。先に最適化した固定細胞濃度及びトレーサカウン
トをアッセイ管に加えた。その後、低温ＶＩＰ、ソマト
スタチン、ボンベシン、及びサブスタンスＰを濃度を増
加させて添加し（複製）、結合緩衝液を加えて容量を２
００μｌとした。次に、これらの管を標準曲線の作成に
おいて記述した方法と同一の方法を用いて処理した。
【００７３】ＫD （Ｍ）及びＲ（Ｍ／Ｌ）の計算におい
て、複製した管の平均カウントを標識及び未標識ペプチ
ドの分子量、比活性、投与量単位、管容量及びカウント
時間等の他のデータと共にＬＩＧＡＮＤソフトウェアに
インプットした（ＬＩＧＡＮＤソフトウェア（バージョ
ン３．０）は１９８６年にG. A. McPherson により作成
され、英国、ケンブリッジ、６８ヒルズロードのElsevi
er, BIOSOFT により発行され、配給された放射性リガン
ド結合分析プログラムである）。このＬＩＧＡＮＤソフ
トウェアは、それぞれの管に加えられたカウント総数に
より結合カウント数を割ったものをＹ軸にとり、それぞ
れの管に加えられたカウント総数をＸ軸に対数形式でと
ってグラフ化することによりスキャッチャード分析を行
うものである。ＬＩＧＡＮＤソフトウェアは、Ｋ
D （Ｍ）及びＲ（Ｍ／Ｌ）を計算するためにグラフにお
ける傾きの切片を使用するものであった。ゲノミックＤＮＡの抽出 ：原発性腫瘍細胞をインビトロ
で群成させ、その単層を氷温トリス緩衝液（以後、「Ｔ
ＢＳ］とする）により２回洗浄した。ポリスマンを使用
して細胞を約０．５ｍｌのＴＢＳ中に懸濁させた。細胞
懸濁液を遠心分離管に移し、氷上で保存した。フラスコ
をおよそ１ｍｌの追加ＴＢＳで洗浄し、洗浄後の液を遠
心分離管中の細胞懸濁液と混合した。約４℃において約
１５００×ｇで約１０分間遠心分離を行うことにより細
胞を回収した。細胞を約５〜１０容量の氷温ＴＢＳに再
び懸濁させ、遠心分離を再び行った。最後に、細胞を約
５×１０7 細胞／ｍｌの濃度でトリスエデテート(Tris
edetate)（以後、「ＴＥ」とする、ＴＥは約８．０のｐ
Ｈを有する）中に懸濁させた。１０ミリリットルの抽出
用緩衝液を１ｍｌの細胞懸濁液に加え、溶液を約３７℃
で約１時間インキュベートした。この溶液にプロテイナ
ーゼＫを最終濃度が１００μ／ｍｌになるように加え、
ゆっくりとした振とう速度の水浴中で約５０℃で約１２
時間インキュベートした。次に溶液を室温まで冷やし、
遠心分離管に移した。０．５ＭのTris.Cl （約８．０ｐ
Ｈ）で平衡させた等量のフェノール−クロロホルムを加
え、２つの相を約１０分間ゆっくりと混合させた。２つ
の相を約５０００×ｇの遠心分離を約１５分間室温で行
うことにより分離させた。粘性の水相を遠心分離管に移
し、フェノール−クロロホルムを使用して抽出を２回繰
り返した。次に、１／２容量の７．５Ｍ酢酸アンモニウ
ム及び２容量の氷温１００％エタノールを水相に加え
た。形成された糸状のＤＮＡを７０％エタノールにより
洗浄した。これをデカントし、Speedvac(Savant)上で乾
燥させた。ペレットをＴＥ中に再び懸濁させた。
て、複製した管の平均カウントを標識及び未標識ペプチ
ドの分子量、比活性、投与量単位、管容量及びカウント
時間等の他のデータと共にＬＩＧＡＮＤソフトウェアに
インプットした（ＬＩＧＡＮＤソフトウェア（バージョ
ン３．０）は１９８６年にG. A. McPherson により作成
され、英国、ケンブリッジ、６８ヒルズロードのElsevi
er, BIOSOFT により発行され、配給された放射性リガン
ド結合分析プログラムである）。このＬＩＧＡＮＤソフ
トウェアは、それぞれの管に加えられたカウント総数に
より結合カウント数を割ったものをＹ軸にとり、それぞ
れの管に加えられたカウント総数をＸ軸に対数形式でと
ってグラフ化することによりスキャッチャード分析を行
うものである。ＬＩＧＡＮＤソフトウェアは、Ｋ
D （Ｍ）及びＲ（Ｍ／Ｌ）を計算するためにグラフにお
ける傾きの切片を使用するものであった。ゲノミックＤＮＡの抽出 ：原発性腫瘍細胞をインビトロ
で群成させ、その単層を氷温トリス緩衝液（以後、「Ｔ
ＢＳ］とする）により２回洗浄した。ポリスマンを使用
して細胞を約０．５ｍｌのＴＢＳ中に懸濁させた。細胞
懸濁液を遠心分離管に移し、氷上で保存した。フラスコ
をおよそ１ｍｌの追加ＴＢＳで洗浄し、洗浄後の液を遠
心分離管中の細胞懸濁液と混合した。約４℃において約
１５００×ｇで約１０分間遠心分離を行うことにより細
胞を回収した。細胞を約５〜１０容量の氷温ＴＢＳに再
び懸濁させ、遠心分離を再び行った。最後に、細胞を約
５×１０7 細胞／ｍｌの濃度でトリスエデテート(Tris
edetate)（以後、「ＴＥ」とする、ＴＥは約８．０のｐ
Ｈを有する）中に懸濁させた。１０ミリリットルの抽出
用緩衝液を１ｍｌの細胞懸濁液に加え、溶液を約３７℃
で約１時間インキュベートした。この溶液にプロテイナ
ーゼＫを最終濃度が１００μ／ｍｌになるように加え、
ゆっくりとした振とう速度の水浴中で約５０℃で約１２
時間インキュベートした。次に溶液を室温まで冷やし、
遠心分離管に移した。０．５ＭのTris.Cl （約８．０ｐ
Ｈ）で平衡させた等量のフェノール−クロロホルムを加
え、２つの相を約１０分間ゆっくりと混合させた。２つ
の相を約５０００×ｇの遠心分離を約１５分間室温で行
うことにより分離させた。粘性の水相を遠心分離管に移
し、フェノール−クロロホルムを使用して抽出を２回繰
り返した。次に、１／２容量の７．５Ｍ酢酸アンモニウ
ム及び２容量の氷温１００％エタノールを水相に加え
た。形成された糸状のＤＮＡを７０％エタノールにより
洗浄した。これをデカントし、Speedvac(Savant)上で乾
燥させた。ペレットをＴＥ中に再び懸濁させた。
【００７４】上記の実施例は説明を目的とするものであ
り、この中に特に開示されていない要素を用いて本発明
を適宜実施することも可能である。本発明の請求の範囲
は本発明に一致する最も広い範囲のものである。配列リスト （１）一般情報： (i) 出願人：Rama Mukherjee, Manu Jaggi (ii)発明の名称：癌治療用薬剤 (iii) 配列の数：１０ (iv)住所又は居所： (A) 住所: Ladas & Parry (B) 通り：26 West 61st Street (C) 市：ニューヨーク (D) 州：ニューヨーク (E) 国：アメリカ合衆国 (F) 郵便番号：10023 (v) コンピュータ読み取り形態： (A) 媒体形式: 5.25インチディスク、360 kb記憶容量 (B) コンピュータ：IBM PC/XT/AT 2又は互換機 (C) オペレーティングシステム：ＤＯＳ (D) ソフトウェア：ワード・パーフェクト (vi)現在の出願情報： (A) 出願番号: 未入手 (B) 出願日：未入手 (C) 識別番号：未入手 (viii)弁護士／事務所情報： (A) 氏名: Cord, Janet I. (B) 登録番号：33778 (C) 参考／事件番号：U-010522-4 (ix)通信情報： (A) 電話:(212) 708-1800 (B) FAX ：(212) 246-8959 (C) TELEX ：233288 （２）配列ＩＤ番号１の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: ２８アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号１： Lys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Le
u-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-
Ile-Leu-Asn （３）配列ＩＤ番号２の情報： (i) 配列特徴：(A) 長さ: ８アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号２： Leu-Met-Tyr-Pro-Thr-Tyr-Leu-Lys （４）配列ＩＤ番号３の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １９アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号３： Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Ty
r-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn （５）配列ＩＤ番号４の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: ２３アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号４： Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Al
a-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn （６）配列ＩＤ番号５の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １４アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号５： Tyr-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Se
r-Cys （７）配列ＩＤ番号６の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １４アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号６： Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Tyr-Thr-Se
r-Cys （８）配列ＩＤ番号７の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １４アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号７： pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-L
eu- Ψ(CH2NH)-Leu （９）配列ＩＤ番号８の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １５アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号８：
り、この中に特に開示されていない要素を用いて本発明
を適宜実施することも可能である。本発明の請求の範囲
は本発明に一致する最も広い範囲のものである。配列リスト （１）一般情報： (i) 出願人：Rama Mukherjee, Manu Jaggi (ii)発明の名称：癌治療用薬剤 (iii) 配列の数：１０ (iv)住所又は居所： (A) 住所: Ladas & Parry (B) 通り：26 West 61st Street (C) 市：ニューヨーク (D) 州：ニューヨーク (E) 国：アメリカ合衆国 (F) 郵便番号：10023 (v) コンピュータ読み取り形態： (A) 媒体形式: 5.25インチディスク、360 kb記憶容量 (B) コンピュータ：IBM PC/XT/AT 2又は互換機 (C) オペレーティングシステム：ＤＯＳ (D) ソフトウェア：ワード・パーフェクト (vi)現在の出願情報： (A) 出願番号: 未入手 (B) 出願日：未入手 (C) 識別番号：未入手 (viii)弁護士／事務所情報： (A) 氏名: Cord, Janet I. (B) 登録番号：33778 (C) 参考／事件番号：U-010522-4 (ix)通信情報： (A) 電話:(212) 708-1800 (B) FAX ：(212) 246-8959 (C) TELEX ：233288 （２）配列ＩＤ番号１の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: ２８アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号１： Lys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Le
u-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-
Ile-Leu-Asn （３）配列ＩＤ番号２の情報： (i) 配列特徴：(A) 長さ: ８アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号２： Leu-Met-Tyr-Pro-Thr-Tyr-Leu-Lys （４）配列ＩＤ番号３の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １９アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号３： Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Ty
r-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn （５）配列ＩＤ番号４の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: ２３アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号４： Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Al
a-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn （６）配列ＩＤ番号５の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １４アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号５： Tyr-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Se
r-Cys （７）配列ＩＤ番号６の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １４アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号６： Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Tyr-Thr-Se
r-Cys （８）配列ＩＤ番号７の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １４アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号７： pGlu-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-L
eu- Ψ(CH2NH)-Leu （９）配列ＩＤ番号８の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １５アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号８：
【００７５】
【化１】
【００７６】（１０）配列ＩＤ番号９の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: ７アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号９： Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met （１１）配列ＩＤ番号１０の情報： (i) 配列特徴： (A) 長さ: １４アミノ酸 (B) タイプ：アミノ酸 (C) トポロジー：未解明 (xi) 配列：配列ＩＤ番号１０： pGlu-Gln-Arg-Tyr-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-l
eu-Met
eu-Met
【００７７】
【発明の効果】上述の結果から明らかなように、本発明
により癌細胞又は腫瘍細胞を殺傷する又はそれらの非制
御的増殖を妨げることが可能となる。本発明のペプチド
又はペプチド類似体の組み合わせを含む薬剤又は薬剤組
成物を、結腸、直腸、肺、胸、及び腎臓における癌の治
療、並びに白血病及びリンパ腫の治療に使用することが
可能である。また、かかる薬剤組成物は、ＶＩＰ、ソマ
トスタチン、ボンベシン、及びサブスタンスＰ、或いは
ＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン、又はサブスタン
スＰの何れかの組み合わせの過剰分泌を妨げ、抑制し、
又は調節することにも有用である。
により癌細胞又は腫瘍細胞を殺傷する又はそれらの非制
御的増殖を妨げることが可能となる。本発明のペプチド
又はペプチド類似体の組み合わせを含む薬剤又は薬剤組
成物を、結腸、直腸、肺、胸、及び腎臓における癌の治
療、並びに白血病及びリンパ腫の治療に使用することが
可能である。また、かかる薬剤組成物は、ＶＩＰ、ソマ
トスタチン、ボンベシン、及びサブスタンスＰ、或いは
ＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン、又はサブスタン
スＰの何れかの組み合わせの過剰分泌を妨げ、抑制し、
又は調節することにも有用である。
【００７８】加えて、本発明により癌又は他の腫瘍に冒
されたヒト、ほ乳類、又は他の動物に対する治療方法が
提供され、この本発明の治療方法は、結腸及び直腸の癌
又は腫瘍の治療に特に有用である。更に、本発明により
ＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン、サブスタンスＰ
或いはＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン、又はサブ
スタンスＰの何れかの組み合わせの過剰分泌に苦しむヒ
ト、ほ乳類、又は他の動物の治療方法が提供され、その
治療に非常に効果的なものである。
されたヒト、ほ乳類、又は他の動物に対する治療方法が
提供され、この本発明の治療方法は、結腸及び直腸の癌
又は腫瘍の治療に特に有用である。更に、本発明により
ＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン、サブスタンスＰ
或いはＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン、又はサブ
スタンスＰの何れかの組み合わせの過剰分泌に苦しむヒ
ト、ほ乳類、又は他の動物の治療方法が提供され、その
治療に非常に効果的なものである。
【図１】例６〜１３に記述されたインビボプロトコール
における全てのマウスの平均腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日
数と対比させて表すことによりMuJ-7 の腫瘍縮小効果を
経過時間と共に示すグラフである。
における全てのマウスの平均腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日
数と対比させて表すことによりMuJ-7 の腫瘍縮小効果を
経過時間と共に示すグラフである。
【図２】例６に記述されたインビボプロトコールにおけ
る処理マウス（○）及び未処理マウス（＋）の平均腫瘍
容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示すグラフである。
る処理マウス（○）及び未処理マウス（＋）の平均腫瘍
容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示すグラフである。
【図３】例７に記述されたインビボプロトコールにおけ
るグループ１の処理マウス（○）、グループ２の処理マ
ウス（□）、及び未処理対照マウス（＋）の平均腫瘍容
積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示すグラフである。
るグループ１の処理マウス（○）、グループ２の処理マ
ウス（□）、及び未処理対照マウス（＋）の平均腫瘍容
積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示すグラフである。
【図４】例８に記述されたSW 620を使用したインビボプ
ロトコールにおける処理マウス（○）、及び未処理対照
マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で
示すグラフである。
ロトコールにおける処理マウス（○）、及び未処理対照
マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で
示すグラフである。
【図５】例８に記述されたHT 29 を使用したインビボプ
ロトコールにおける処理マウス（○）、及び未処理対照
マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で
示すグラフである。
ロトコールにおける処理マウス（○）、及び未処理対照
マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で
示すグラフである。
【図６】例８に記述されたCoLo 205を使用したインビボ
プロトコールにおける処理マウス（○）、及び未処理対
照マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係
で示すグラフである。
プロトコールにおける処理マウス（○）、及び未処理対
照マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係
で示すグラフである。
【図７】例８に記述されたL 132 を使用したインビボプ
ロトコールにおける処理マウス（○）、及び未処理対照
マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で
示すグラフである。
ロトコールにおける処理マウス（○）、及び未処理対照
マウス（＋）の腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で
示すグラフである。
【図８】例１３に記述されたインビボプロトコールにお
ける処理マウス（○）、及び未処理対照マウス（＋）の
平均腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示すグラフ
である。
ける処理マウス（○）、及び未処理対照マウス（＋）の
平均腫瘍容積（ｍｍ3)を経過日数との関係で示すグラフ
である。
【図９】例１３に記述されたインビボプロトコールにお
ける処理マウスの生存率（点線）及び未処理対照マウス
の生存率（実線）を経過日数との関係で示すグラフであ
る。
ける処理マウスの生存率（点線）及び未処理対照マウス
の生存率（実線）を経過日数との関係で示すグラフであ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マヌー ジャギー インド国 110067 ニュー・デリー アル ナ・アサフ・アリ・マルグ ナショナル・ インスティテュート・オブ・イミュノロジ ー内（番地なし)
Claims (14)
- 【請求項１】 ＳＯＭ2 ペプチドと、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ
2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1 のうち
少なくとも４つのペプチドとの薬学的に有効な組み合わ
せを含むことを特徴とする薬剤組成物。 - 【請求項２】 ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ
2 及びＢＯＭ1 の薬学的に有効な組み合わせを含むこと
を特徴とする請求項１記載の薬剤組成物。 - 【請求項３】 ＶＩＰ1 、ＶＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ
1 、ＳＯＭ2 、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1 の薬学的に有効な
組み合わせを含むことを特徴とする請求項１記載の薬剤
組成物。 - 【請求項４】 ＶＩＰ1 の濃度が約１０-7Ｍであり、Ｖ
ＩＰ2 の濃度が約１０-8Ｍであり、ＶＩＰ3 の濃度が約
１０-8Ｍであり、ＳＯＭ1 の濃度が約１０-9Ｍであり、
ＳＯＭ2 の濃度が約１０-8Ｍであり、ＢＯＭ1 の濃度が
約１０-8Ｍであり、及びＳＰ1 の濃度が約１０-8Ｍであ
ることを特徴とする請求項１又は３記載の薬剤組成物。 - 【請求項５】 ＶＩＰ1 ：ＶＩＰ2 ：ＶＩＰ3 ：ＳＯＭ
1 ：ＳＯＭ2 ：ＢＯＭ1 ：ＳＰ1 のモル比がおよそ１．
０：０．１：０．１：０．０１：０．１：０．１：０．
１であることを特徴とする請求項１、３又は４記載の薬
剤組成物。 - 【請求項６】 ＳＯＭ2 ペプチドと、ＶＩＰ1 、ＶＩＰ
2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＢＯＭ1 、及びＳＰ1 のうち
少なくとも４つのペプチドとの薬学的に有効な組み合わ
せを含むことを特徴とする、ヒト又は他の動物における
腫瘍細胞又は癌細胞を殺傷する又は増殖を阻害する、或
いはヒト又は他の動物におけるＶＩＰ、ソマトスタチ
ン、ボンベシン若しくはサブスタンスＰの過剰分泌、又
はＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン若しくはサブス
タンスＰの組み合わせの過剰分泌、を防止、阻害、又は
調整するための薬剤。 - 【請求項７】 ペプチドの組み合わせが、ＶＩＰ1 、Ｖ
ＩＰ2 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 及びＢＯＭ1 の組み合わせ
を含むことを特徴とする請求項６記載の薬剤。 - 【請求項８】 ペプチドの組み合わせが、ＶＩＰ1 、Ｖ
ＩＰ2 、ＶＩＰ3 、ＳＯＭ1 、ＳＯＭ2 、ＢＯＭ1 、及
びＳＰ1 の組み合わせを含むことを特徴とする請求項６
記載の薬剤。 - 【請求項９】 ＶＩＰ1 の濃度が約１０-7Ｍであり、Ｖ
ＩＰ2 の濃度が約１０-8Ｍであり、ＶＩＰ3 の濃度が約
１０-8Ｍであり、ＳＯＭ1 の濃度が約１０-9Ｍであり、
ＳＯＭ2 の濃度が約１０-8Ｍであり、ＢＯＭ1 の濃度が
約１０-8Ｍであり、及びＳＰ1 の濃度が約１０-8Ｍであ
ることを特徴とする請求項６又は８記載の薬剤。 - 【請求項１０】 ＶＩＰ1 ：ＶＩＰ2 ：ＶＩＰ3 ：ＳＯ
Ｍ1 ：ＳＯＭ2 ：ＢＯＭ1 ：ＳＰ1 のモル比がおよそ
１．０：０．１：０．１：０．０１：０．１：０．１：
０．１であることを特徴とする請求項６、８又は９記載
の薬剤。 - 【請求項１１】 ソマトスタチン、ＶＩＰ、ボンベシ
ン、及びサブスタンスＰペプチドの類似体を含有する薬
学的に有効な組み合わせを含むことを特徴とする薬剤組
成物。 - 【請求項１２】 薬剤組成物が、ソマトスタチン類似体
と、第一ＶＩＰ類似体、第二ＶＩＰ類似体、第三ＶＩＰ
類似体、ソマトスタチンの他の類似体、ボンベシン類似
体、及びサブスタンスＰ類似体からなる群から選択され
る少なくとも４つのペプチドとを含むことを特徴とする
請求項１１記載の薬剤組成物。 - 【請求項１３】 ソマトスタチン、ＶＩＰ、ボンベシ
ン、及びサブスタンスＰペプチドの類似体の薬学的に有
効な組み合わせを含むことを特徴とする、ヒト又は他の
動物における腫瘍細胞又は癌細胞を殺傷する又は増殖を
阻害する、或いはヒト又は他の動物におけるＶＩＰ、ソ
マトスタチン、ボンベシン若しくはサブスタンスＰの過
剰分泌、又はＶＩＰ、ソマトスタチン、ボンベシン若し
くはサブスタンスＰの組み合わせの過剰分泌、を防止、
阻害、又は調整するための薬剤。 - 【請求項１４】 ペプチドの組み合わせが、ソマトスタ
チン類似体と、第一ＶＩＰ類似体、第二ＶＩＰ類似体、
第三ＶＩＰ類似体、ソマトスタチンの他の類似体、ボン
ベシン類似体、及びサブスタンスＰ類似体からなる群か
ら選択される少なくとも４つのペプチドとを含むことを
特徴とする請求項１３記載の薬剤。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IN1822DE1996 | 1996-08-16 | ||
| US1822/DEL/96 | 1996-10-08 | ||
| US08/727,679 US6156725A (en) | 1996-08-16 | 1996-10-08 | Drug for the treatment of cancer |
| US727679 | 1996-10-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1067676A true JPH1067676A (ja) | 1998-03-10 |
Family
ID=26324708
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8344073A Pending JPH1067676A (ja) | 1996-08-16 | 1996-12-24 | 癌治療用薬剤 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1067676A (ja) |
| AU (1) | AU707158B2 (ja) |
| CA (1) | CA2197139C (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113795269A (zh) * | 2018-11-15 | 2021-12-14 | 埃默里大学 | 血管活性肠肽(vip)拮抗剂的组合物和用途 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2825333C (en) * | 2011-02-02 | 2019-07-02 | Emory University | Antagonism of the vip signaling pathway |
-
1996
- 1996-12-24 JP JP8344073A patent/JPH1067676A/ja active Pending
-
1997
- 1997-01-14 AU AU10149/97A patent/AU707158B2/en not_active Ceased
- 1997-02-10 CA CA002197139A patent/CA2197139C/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113795269A (zh) * | 2018-11-15 | 2021-12-14 | 埃默里大学 | 血管活性肠肽(vip)拮抗剂的组合物和用途 |
| EP3880228A4 (en) * | 2018-11-15 | 2022-09-28 | Emory University | COMPOSITIONS AND USES OF VASOACTIVE INTESTINAL PEPTIDE (VIP) ANTAGONISTS |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2197139A1 (en) | 1998-02-17 |
| AU1014997A (en) | 1998-02-26 |
| CA2197139C (en) | 2003-07-08 |
| AU707158B2 (en) | 1999-07-01 |
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