JPH10513044A

JPH10513044A - ヒト前立腺特異的還元酵素

Info

Publication number: JPH10513044A
Application number: JP8522224A
Authority: JP
Inventors: ヘ，ウェイ・ウー; マイスナー，ポール・エス; ハドソン，ピーター・エル; ローゼン，クレイグ・エイ
Original assignee: Human Genome Sciences Inc
Current assignee: Human Genome Sciences Inc
Priority date: 1995-01-20
Filing date: 1995-01-20
Publication date: 1998-12-15
Also published as: EP0804546A4; AU1918095A; WO1996022360A1; EP0804546A1

Abstract

(57)【要約】ヒト前立腺特異的還元酵素ポリペプチドおよびそのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および組換え技術によってそのようなポリペプチドを調製する方法を開示する。また、このようなポリヌクレオチドを前立腺癌の診断マーカーとしておよび前立腺癌が転移しているかどうかを決定する試薬として利用する方法をも開示する。また、前立腺癌細胞を標的とし前立腺癌ワクチンの位置部として使用するヒト前立腺特異的還元酵素ポリペプチドに特異的な抗体をも開示する。また、該ポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストのスクリーニング方法および該アンタゴニストの治療的使用をも開示する。

Description

【発明の詳細な説明】ヒト前立腺特異的還元酵素本発明は新規に同定されたポリヌクレオチド、そのようなポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチドおよびそのようなポリヌクレオチドおよびポリペプチドを前立腺癌の存在および前立腺癌の転移を検出するための診断アッセイの一部として使用することに関する。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドはヒト前立腺特異的還元酵素であり、以後時に「ＰＳＲ」として称する。前立腺の癌腫は多様な処置の結果を評価することにおける健全な治療決定を非常に困難にする予測不能の疾患として長い間考えられてきた。前立腺癌は潜在的致死性ヒト悪性腫瘍の間では、癌として認識可能な組織的変化の広範な普及と臨床的疾患の非常に低い普及といった広範な矛盾がある点で独特である。前立腺のアデノカルシノーマは潜伏性および臨床的形態に存在するという概念は疫病学的、病理学的および臨床的証拠により支持されている。前立腺癌のこれらの多様な兆候は構造および細胞学的特徴にあるが、それらは互いに障害の量、程度および侵入程度のようなある種の病理学的特徴によりある程度まで区別されることができる。前立腺癌は米国人男性の間で最もありふれている癌であり、唯一肺癌のみが該癌より癌による死亡が高い（ボーリング（Ｂoring，Ｃ．Ｃ.）、Ｃancer Ｓtati stics、４１：１９−３６（１９９１））。年齢特異的な死亡率は過去５０年をかけてゆっくりと増加しており、米国黒人男性においては白人男性においてみられる率のほぼ２倍である（カーター（Ｃarter，Ｈ．Ｂ.）、Ｐrostate、１６：３９−４８（１９９０））。前立腺癌は５５歳より高齢の男性における死亡全体のほぼ３％である（ジードマン（Ｓeidman，Ｈ.）ら、Ｐrobabilities of Ｅven tually Ｄeveloping or Ｄying of Ｃancer-Ｕnited Ｓtates、３５：３６−５６（１９８５））。前立腺癌の発生は他の癌より年齢と共により一層急速に増加し、米国人男性の平均年齢が上昇しているので、前立腺癌を罹患している患者数はこれからの１０年間で劇的に増加すると予期される。前立腺癌の男性の約３０％は診断時に遠位に転移が見られる（シュミット（Ｓchmidt，Ｊ．Ｄ.）ら、Ｊ．Ｕrol.、１３６：４１６−４２１（１９８６）。ホルモン操作（アンドロゲン除去）に対する印象的な症状の応答にもかかわらず、これらの患者の生存率はみじめなものである：その生存期間の中央値は３年より短い（アイアー（Ｅyar，Ｄ.Ｐ.）、ウロロジック・パソロジー（Ｕrologic Ｐathology）：ザ・プロステート（Ｔhe Ｐrostate）、フィラデルフィア、ＰＡ、リー・アンド・フェビガー（Ｌea and Ｆebiger）、２４１−２６７（１９７７））。５年間までに７５％を越える人々が、１０年間までに９０％を越える患者がその癌により死亡している（シルバーバーグ（Ｓilverberg，Ｅ.）、Ｃan cer、６０：６９２−７１７（１９８７）（Ｓuppl.））。前立腺癌に伴う問題は、前立腺癌の多くの形態が潜在性であること、言い換えると、検出が困難であることである。前立腺癌の臨床症状が全くない５０歳を越える男性のうちの約３０％には前立腺内に癌を宿している（マクニール（ＭcＮe al，Ｊ．Ｅ.）ら、Ｌancet Ｊanuary、１１：６０−６３（１９８６））。この剖検における前立腺癌の顕著に高い普及はその他の器官において見られず、それにより人類において最も共通の悪性腫瘍とさせている（ドーム（Ｄhom，Ｇ.）、Ｊ．Ｃancer Ｒes．Ｃlin．Ｏncol.、１０６：２１０−２１８（１９８３））。潜在的な癌が、完全な悪性腫瘍発現にすべてではないにせよ、いくつかの段階を通して進行するという前立腺癌の病理発生における多段階プロセスの概念は強く支持されている（アッター(Ｕtter，Ｈ．Ｂ.)ら、Ｊ．Ｕrol.、１４３：７４２ −７４６（１９９０）。前立腺癌の初期決定および特徴付けに関する多様な技術はあるが、しかしながら、それらのうちのひとつもいかなる問題を解決していない。前立腺癌は殆ど初期症状がない悪評高い無症状疾患である。襄排出障害に関する症状は５０歳を越える男性に共通に見られるものであり、しばしば良性の前立腺過形成（ＢＰＨ）のためである。直腸内指診検査（ＤＲＥ）は伝統的に前立腺癌の検出の最も正確な試験であると認識されている。ＤＲＥは他の利用可能な多様な研究試験より、一層感度が高く、一層特異的であり、ついで利用できる実験室での多様な試験より一層有効性を有するものであると示されているが、しかしながらこれらの研究試験のうちで今日使用されるものは殆どない（ギナン（Ｇuinan，Ｐ．）ら、Ｎ．Ｅngl．Ｊ．Ｍed．、３０３：４９９−５０３（１９８０））。ＤＲＥにより検出される癌は比較的末期であり、ＤＲＥにより推定される癌の大きさと実際に存在する正確な大きさの間の相関は弱いものでしかない。最も重大なＤＲＥの限界は、その感度の欠如である（偽陰性の結果）。例えば、癌を示唆する明瞭な異常が全くない患者における良性の前立腺肥大に関して行われた経尿道的切除の約１０％から２０％は前立腺癌の発生を網羅していない。スクリーニング研究において見られる２２のうちのわずか１２をＤＲＥは検出するが、一方で直腸横断エコー（transrec tal ultrasonography）（ＴＲＵＳ）は２０である（リー（Ｌee，Ｆ．）ら、Ｒa diology、１６８：３８９−３９４（１９８８））。従って、ＤＲＥは比較的感度が低く、非特異的である。触知により検出された癌は比較的大きく、発達後期であり、もはや治療不可能であり、いくつかは非常に小さく臨床的に重要ではない癌である。前立腺癌を有する患者は前立腺特異的抗原レベルが上昇している。ＰＳＡレベル４.０〜１０.０ng／mlを有する男性の２６％において癌が検出された。血清ＰＳＡレベルは一般的に大きさ、臨床的段階、前立腺癌の病理学的段階に相関を示すが、所定の大きさまたは段階に関連したＰＳＡ値は広範囲に存在する（ハドソン(Ｈudson，Ｍ.Ａ.）、Ｊ．Ｕrol．１４２：１０１１−１０１７（１９８９））。しかしながらＰＳＡは個々の患者において癌の特徴の予兆ではない。ＰＳＡのレベルが１０.０ng／mlより高いならば、患者のうちの５７％〜９２％が局所に進行した癌を有するであろう。故に、一層特異的であり、１０ng／mlより高いＰＳＡレベルを用いることは初期検出に有効な技術を提供しない。初期検出についてこの血清マーカーを使用する他の理論的な制限が存在する。通常の血清ＰＳＡレベルは癌の診断を排除しない。偽陰性の結果は共通であり、前立腺癌のために放射線による前立腺切除で処置した男性の１／３は通常の血清ＰＳＡレベルを有する。偽陽性の結果もまた、ＰＳＡレベルがしばしばＢＰＨまたは前立腺炎などの良性の症状を有する男性において上昇するから共通である。要約すると、ＰＳＡレベルは前立腺癌の初期検出において非常に有用であり、特にＤＲＥまたはＴＲＵＳと一緒の場合には有用である。しかしながらＰＳＡレベル検出は、存在するものが癌であってＢＰＨまたは前立腺炎でないことを確実にするためにＤＲＥまたはＴＲＵＳと組み合わせて使用されなければない。ＴＲＵＳの導入は、前立腺の内部の解剖学的構造および病理を理解する有効な方法を提供した。ＴＲＵＳはいくつかの大きな連続において前立腺癌をスクリーニングするのに使用され、ＤＲＥに比較して検出を増加することを矛盾なく示す。ＴＲＵＳは骨盤領域のエコーを行い、おそらく、前立腺癌の初期検出における最も重要なＴＲＵＳの使用は前立腺の直接的針生検の指針としている（リーら、Ｒadiology、１７０：６０９−６１５（１９８９））。本発明の一態様により、宿主由来のサンプル中の特異的な核酸配列の存在を決定することにより前立腺癌の転移を診断する方法および手順を提供する。本発明の他の態様により、宿主由来の生物学的サンプル中のＰＳＲタンパク質のレベルの変化を決定する（ＰＳＲタンパク質の上昇レベルは前立腺疾患の診断を示す）ことにより前立腺障害を診断する方法および手順を提供する。本発明の他の態様により、本発明の前立腺特異的還元酵素遺伝子およびポリペプチドに特異的にハイブリダイズするのに十分長い核酸分子を有する核酸プローブもまた提供する。本発明のさらに別の態様により、前立腺特異的還元酵素ポリペプチドである新規ポリペプチドならびにその生物学的に活性であり診断学的または治療学的に有用な断片、類似体および誘導体を提供する。本発明の別の態様によりmＲＮＡs、ＤＮＡs、cＤＮＡs、ゲノムＤＮＡsを含むヒトＰＳＲタンパク質をコードする単離した核酸分子ならびにその生物学的に活性であり、診断学的または治療学的に有用な断片、類似体および誘導体を提供する。本発明のさらに別の態様により、ヒト前立腺特異的還元酵素核酸配列を含む組換え原核生物および／または真核生物宿主細胞を、該タンパク質の発現を促進し、ついで該タンパク質を回集する条件下で培養することを含む、組換え技術によりこのようなポリペプチドを産生する工程を提供する。本発明のさらに別の態様により、このようなポリペプチドに特異的な抗体を提供する。本発明の別の態様により、本発明のＰＳＲポリペプチドを用いて化合物をスクリーニングする方法、例えば該ポリペプチドと相互作用するアンタゴニストおよび／またはアゴニストおよび抗体をスクリーニングする方法を提供する。本発明のさらに別の態様によりこのようなポリペプチドに対するアンタゴニストを提供し、例えば前立腺癌の処置においてこのようなポリペプチドの作用を抑制するのに使用する。本発明のこれらおよび他の態様は本明細書の教示から当業者には明らかである。以下の図面は本発明の態様を説明するものであって、クレームに包含される本発明の範囲を制限することを意図したものではない。図１はＰＳＲポリペプチドのｃＤＮＡ配列および対応する推定アミノ酸配列を示す。アミノ酸には標準１文字省略記号を使用する。図２は他の還元酵素に対するＰＳＲのホモロジーを示す。枠囲みしたアミノ酸はポリペプチド間で正確に一致するものである。本発明の一態様により、宿主内の前立腺癌の微小転移（micrometastases）を検出する診断アッセイを提供する。本出願人は本発明の論拠を任意の特定の科学的理論に制限することを望んではないが、宿主の細胞中のＰＳＲをコードするm ＲＮＡの存在は前立腺由来の他のものより一層、前立腺癌の転移の指標である。これは、ＰＳＲ遺伝子は身体全ての細胞中で見られるが、そのmＲＮＡへの転写およびコードされたポリペプチドの発現は正常個体の前立腺に制限される。しかしながら、前立腺癌が存在するならば、前立腺癌細胞は癌から他の細胞へと移動し、これら他の細胞は積極的にＰＳＲ遺伝子を転写および発現し、mＲＮＡが存在するようになる。この細胞中のmＲＮＡまたは発現したタンパク質の検出は前立腺からのものである他、前立腺癌の転移の指標である。このような診断アッセイにおいて、前立腺以外の組織からのサンプル中の核酸配列を増幅して検出する。そのサンプルには核酸または核酸の混合物を含み、少なくとも１つのＰＳＲポリペプチドをコードする配列を含むと考えられるものを含む。従って、例えば、細胞中の特異的なmＲＮＡの存在を決定するアッセイの形態において最初にＲＮＡが該細胞から単離される。血液、尿、唾液、組織生検および剖検物質などの細胞から得られたサンプル中に特異的な核酸配列が存在することを決定する、当該技術分野において良く知られる多数の方法がある。前立腺以外の細胞から得られたサンプル中のＰＳＲ遺伝子から転写されたmＲＮＡを検出するアッセイの使用は本明細書の教示から当業者の範囲内でよく行われている。 mＲＮＡの単離には、細胞を破壊し、分画遠心を行うことにより、総細胞ＲＮＡを単離することを含む。一度総ＲＮＡが単離されると、ｍＲＮＡは、その３' 端にて各真核生物mＲＮＡ分子に実質的に見られるポリＡテールとして当業者に知られるアデニンヌクレオチド残基を使用することによって単離される。デオキシチミジン［オリゴ（dT）］のみからなるオリゴヌクレオチドをセルロースに結合させ、小さいカラムにオリゴ（dT）−セルロースを充填する。総細胞ＲＮＡの調製がこのようなカラムを通して行われると、mＲＮＡ分子はポリＡテールによってオリゴ（dT）に結合し、一方で残りのＲＮＡはカラムを流れて行く。ついで結合したmＲＮＡsをカラムから溶出し収集する。例えば、ＰＳＲなどの特定のタンパク質をコードするmＲＮＡを検出する１つの例には、収集したmＲＮＡsを、検出されるべきmＲＮＡにハイブリダイズするよう常法により設計された遺伝子特異的オリゴヌクレオチドでスクリーニングすることを含む。プロービング技術は当該技術分野においてよく知られており、プローブの大きさは多様であるが、少なくとも１５ヌクレオチドの長さのプローブであることが好ましいと認識されている。また、このようなプローブは、該プローブの同定を容易にする分析的に検出可能な試薬で標識するのが好ましいと認識されている。有用ではあるが、しかし制限するものではない試薬としては、放射能、蛍光染料または検出可能な産物の形成を触媒することができる酵素である。特定のmＲＮＡ配列を検出するための他の方法は、逆転写酵素とともにポリメラーゼチェインリアクション（ＰＣＲ）を利用する。ＰＣＲはＤＮＡまたはＲＮＡ伸長の特異的な増幅に非常に強力な方法である（サイキ（Ｓaiki）ら、Ｎatur e、２３４：１６３−１６６（１９８６））。この技術の一つの応用は、核酸プローブ技術においてコピー数の少ない核酸配列を検出可能なレベルまでにするためのものである。この方法の多数の診断学的、科学的応用はアーリッヒ（Ｈ．Ａ．Ｅrlich）(編)により、ＰＣＲテクノロジー−プリンシプルズ・アンド・アプリケーションズ・フォー・ＤＮＡアンプリフィケーション（ＰＣＲＴechnology -Ｐrinciples and Ａpplications for ＤＮＡＡmplification）、ストックトンプレス（Ｓtockton Ｐress）、ＵＳＡ、１９８９に、およびアイニス（Ｍ．Ａ．Ｉnis）によりＰＣＲプロトコールズ（ＰＣＲＰrotocols）、アカデミックプレス(Ａcademic Ｐress)、サンディエゴ、ＵＳＡ、１９９０に記載されている。ＲＴ−ＰＣＲはいわゆる逆転写酵素とＰＣＲの組合せである。逆転写酵素は対応するmＲＮＡ分子からcＤＮＡ分子を産生する酵素である。これはＰＣＲが核酸分子特にＤＮＡを増幅するので重要であり、このＤＮＡは宿主由来の身体サンプルから分離したmＲＮＡから産生されるものである。ＲＴ−ＰＣＲ診断アッセイの例には、宿主の組織からサンプルを取り出すことにかかわる。このようなサンプルは組織（前立腺以外の組織）からのものであり、そのサンプルから総ＲＮＡを抽出し、ついで総ＲＮＡのＰＳＲＲＴ−ＰＣＲを行い、ついでアガロースゲル上でそのＰＣＲ産物を電気泳動する。ＲＴ−ＰＣＲに使用したオリゴヌクレオチドプライマーは長さ１６〜５０ヌクレオチド塩基および好ましくは１６〜３０ヌクレオチド塩基であった。ＰＳＲ mＲＮＡ配列の任意のセグメントがオリゴヌクレオチドを生産するのに使用される。このやり方で、一度配列がＰＣＲを使用して増幅されるとゲノムＤＮＡは１.２％のアガロースゲル上での電気泳動後に異なるサイズのバンドが現れるので、ＰＳＲ mＲＮＡから区別される。約１.２kbのバンドであるゲノムＤＮＡの存在は、転移に関する負の表示であると解釈される。しかしながら、一層小さなバンドはmＲＮＡが存在することを示しており、それはＰＳＲ遺伝子が積極的に転写されていることを意味し、このことが今度は前立腺細胞が血液中を循環し、おそらく転移していることを示している。サンプル中の特定のＲＮＡを検出する他の例は、逆転写酵素の使用によって検出されるべきmＲＮＡに対応するｃＤＮＡ分子を産生することに関係し、ついでその後、そのｃＤＮＡ分子をベクターにクローニングしてライブラリーを調製することに関する。このような方法はプラスミドで細菌細胞を形質転換し、細胞を増殖に必要な栄養分および選択に必要な適切な抗生物質を含むアガープレートの上に撒くことに関係する。このやり方で、収集した画分からのmＲＮＡsのすべてを細菌に形質転換し、個々のコロニーにプレートアウト（plate out）した。そのmＲＮＡは多様な方法によりライブラリーから検出された。例えば核酸プローブは目的のＤＮＡ配列を運ぶクローンを位置付けるのに使用される。このような方法において、ライブラリーの複製をニトロセルロースフィルター上に調製した。このプロセスは各コロニーの位置をこれらのニトロセルロースに移す。検出されるべきmＲＮＡに対応するｃＤＮＡに特異的な抗体とともに核酸プローブを有するこれらのニトロセルロースレプリカをインキュベートすることによりスクリーニングを行う。前立腺とは別に由来する細胞中のＰＳＲから転写されたmＲＮＡの存在はまた、このような遺伝子の発現産物を検出するアッセイの使用により決定される。従って、例えばこのようなアッセイはサンプル中に含まれるmＲＮＡからのcＤＮＡを産生することに関係し、ついでそれらから産生されたcＤＮＡの発現産物を検出することによって特異的なmＲＮＡの存在を決定する。このような方法において、cＤＮＡsは、そのcＤＮＡを発現ベクターと名付けられた適切に構築されたプラスミドにクローニングした後、細菌中で遺伝子産物を探すことにより同定する。cＤＮＡsはその発現を大腸菌（Ｅ．coli）において促進させる領域内でこれらのベクターに挿入される。調節可能な細菌のプロモーターが使用される。タンパク質は原核生物タンパク質からのアミノ酸が真核生物タンパク質の一端に組み込まれた融合タンパク質として発現される。融合タンパク質は対応する真核生物タンパク質より細菌中で一層安定であり、それゆえ、一層高いレベルで産生される。 mＲＮＡ配列を検出するための他の方法は、所望のタンパク質を発現するクローンをつきとめ、例えばＰＳＲなどのタンパク質の機能をアッセイすることである。ＰＳＲの放射線標識した基質をイン・ビトロで基質と結合することができるタンパク質を発現するクローンを同定するためのプローブとして使用する。クローニングされた遺伝子はまた、真核生物細胞にて機能的なアッセイによって同定される。この技術は、関心のあるcＤＮＡを発現する細胞の直接的な物理的選択を可能にし、ついでこのcＤＮＡを細胞から直接回収できる。哺乳類遺伝子もまた、受容細胞においてその機能の遺伝的選択によって単離することができる。前立腺以外の細胞において対応するmＲＮＡを産生するＰＳＲ遺伝子からの積極的な転写の存在は転移した前立腺癌の存在の指標である。というのは、前立腺癌細胞は一般的な循環器系に前立腺から移動するからである。従って、この現象は、転移した腫瘍に対し、局在化されている腫瘍の処置方法は全く異なるので、重要な臨床的示唆を有するかもしれない。末梢静脈血中のＰＳＲ mＲＮＡの存在は転移の指標である。上記のアッセイはまた、化学療法の前に保存された骨髄が前立腺癌細胞の微小転移で汚染されていないかどうかを試験するのに使用される。アッセイにおいて、骨髄からの血球を上記のように単離し、処置し、この方法は保存された骨髄が化学療法の後、なお移植のため生存可能であるかどうかを決定することができる。本発明はまた、診断的な遺伝子としてのＰＳＲ遺伝子の使用にも関する。例えば、いくつかの疾患は遺伝した欠陥遺伝子から生じる。ＤＮＡレベルにて遺伝子における突然変異は多様な技術によって検出される。診断のために使用される核酸（ゲノムＤＮＡ、mＲＮＡなど）は、血液、尿、唾液、組織生検および剖検物質などの前立腺以外の患者の細胞から得られる。該ゲノムＤＮＡは検出に直接的に使用され得て、または分析の前にＰＣＲを使用することによって酵素的に増幅される。ＲＮＡまたはcＤＮＡはまた同様の目的のために使用される。一例として、本発明の核酸に相補的であるＰＣＲプライマーは、ＰＳＲ遺伝子突然変異を同定し、分析するのに使用することができる。例えば、欠失および挿入は、通常の遺伝子型に比較して、増幅された産物の大きさにおける変化によって検出することができる。点突然変異は、増幅したＤＮＡを放射線標識したＰＳＲ遺伝子ＲＮＡ、または代わりに放射線標識したアンチセンスＤＮＡ配列にハイブリダイズすることによって同定されることができる。完全にマッチした配列はＲＮアーゼＡによる消化または融解温度における相違によってマッチしていない二重らせんから区別することができる。参照遺伝子と「突然変異体」の間の配列の差異は直接的なＤＮＡシークエンシング方法によって明らかにされる。さらに、クローニングされたＤＮＡセグメントは特定のＤＮＡセグメントを検出するプローブとして使用することができる。この方法の感度はＰＣＲと組み合わすと非常に増大される。例えば、シークエンシングプライマーは二本鎖ＰＣＲ産物または修飾したＰＣＲにより産生した一本鎖鋳型分子と共に使用される。配列決定は、放射線標識したヌクレオチドでの従来手順または蛍光タグでの自動化シークエンシング手順によって行われる。ＤＮＡ配列の相違に基づいた遺伝的試験は、変性試薬を使用するかまたは使用しないで、ＤＮＡ断片およびゲルの電気泳動移動度における変化の検出によって達成される。小さな配列の欠失および挿入は、高解像（high-resolution）ゲル電気泳動によって可視化される。異なる配列のＤＮＡ断片は異なるＤＮＡ断片の移動度が特異的または部分的な融点に従って異なる位置でゲル中で遅延される変性ホルムアミド濃度勾配ゲルで区別され得る（例えば、マイヤーズ（Ｍyers）ら、Ｓcience、２３０：１２４２（１９８５））。さらに、配列の変化は特に小さな欠失の場合、ＤＮＡの移動パターン中での変化として検出される。特定の位置における配列の変化はまた、ＲＮアーゼおよびＳ１保護または化学的開裂方法などのヌクレアーゼ保護アッセイによって明らかにされる（例えば、コットン（Ｃotton）ら、ＰＮＡＳ、ＵＳＡ、８５：４３９７−４４０１（１９８５））。従って、特定のＤＮＡ配列の検出はハイブリダイゼーション、ＲＮアーゼ保護、化学的開裂、直接的ＤＮＡシークエンシングまたは制限酵素の使用（例えば、制限断片長多型（ＲＦＬＰ））およびサザンブロッティングなどの方法を用いて達成される。本発明の他の態様により、例えば癌などの前立腺障害を前立腺以外の組織由来の生物学的サンプル中のＰＳＲ産物の異常なレベルを決定することによって診断する方法を提供する。宿主由来のサンプル中のＰＳＲタンパク質のレベルを検出するために使用したアッセイは当業者によく知られており、ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイおよび「サンドイッチ」アッセイを含む。生物学的サンプルには、以下に制限されるものではないが、組織抽出物、細胞サンプルまたは生物学的液体が含まれる。しかしながら生物学的サンプルは、前立腺の組織または細胞を特に含まない。ＥＬＩＳＡアッセイ（コリガン（Ｃoligan）ら、Ｃurrent Ｐrotocols in Ｉmuunology、１（２）、第６章、１９９１）は最初にＰＳＲタンパク質に特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製することを含む。さらに、リポーター抗体は該モノクローナル抗体に対して調製される。リポーター抗体には放射能、蛍光、または本例においては西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素などの検出可能な試薬を結合させる。サンプルを宿主から除去し、例えばサンプル中の該タンパク質をサンプル中で結合させるポリスチレン皿などの固相支持体上でインキュベートする。該皿上の任意の遊離のタンパク質結合部位を、ついでＢＳＡのような非特異的なタンパク質とインキュベートすることによって覆う。次に、モノクローナル抗体を皿の中でインキュベートすると、その間にポリスチレン皿に結合したＰＳＲタンパク質にモノクローナル抗体が結合する。全ての未結合モノクローナル抗体をバッファーで洗い流す。西洋ワサビペルオキシダーゼに結合したリポーター抗体を皿に入れると、ＰＳＲタンパク質に結合したモノクローナル抗体にリポーター抗体が結合する。結合していないリポーター抗体を洗い流す。ついでペルオキシダーゼ基質をさらに加え、ついで所定の時間での発色量を標準曲線に対して比較すると、患者のサンプルの所定量において存在するＰＳＲタンパク質の量が測定される。競合アッセイも使用でき、該アッセイでは、ＰＳＲタンパク質に対する特異的抗体を固相支持体に結合させ、標識されたＰＳＲタンパク質および宿主由来のサンプルを固相支持体に通過させ、例えば液体シンチレーションクロマトグラフィーによって検出された標識の量をサンプル中のＰＳＲタンパク質の量に関連づけることができる。「サンドイッチ」アッセイはＥＬＩＳＡアッセイと同様である。「サンドイッチ」アッセイにおいて、ＰＳＲタンパク質を固相支持体を通過させ、固相支持体に結合した抗体に結合する。ついで第二抗体をＰＳＲタンパク質に結合させる。第二抗体に特異的な標識第三抗体を、ついで固相支持体に通過させ、第二抗体に結合すると、その量を定量できる。別法において、ＰＳＲタンパク質に対する標識された抗体を使用する。１工程アッセイにおいて、標的分子がもし存在するのであれば、固定化され、標識された抗体とともにインキュベートする。標識した抗体は固定化標的分子に結合する。非結合分子を洗浄して除去した後、該サンプルを標識の存在に関してアッセイする。２工程のアッセイにおいては、固定化された標的分子を未標識の抗体とインキュベートする。その標的分子−標識抗体複合体は、もし存在するのであれば、ついで未標識の抗体に特異的である第二の標識した抗体に結合する。抗体を標識するのに使用されたマーカーの選択はこの応用に依存して多様である。しかしながら、マーカーの選択は当業者には容易に決定できる。これらの標識した抗体はイムノアッセイにてならびに該タンパク質の存在を検出するための組織学的な応用において使用される。その標識された抗体はポリクローナルまたはモノクローナルである。このようなＰＳＲに特異的である抗体（例えば、抗イデオタイプ抗体）は、しっかりとそこに結合することによってＰＳＲの作用を妨げ、それゆえ、前立腺癌細胞の生存を妨害または排除するので前立腺癌ワクチンとして使用されることができる。該抗体はまた、例えば、前立腺癌細胞と接触させるとそれらを破壊する相互作用薬剤をホーミングする方法において前立腺癌細胞をターゲティングするのに用いることができる。これは該抗体が前立腺において主として発現されるＰＳＲに特異的であり、かつ相互作用薬剤の抗体への結合が相互作用薬剤を前立腺に直接もたらすことから真実である。このタイプの抗体はまた、イン・ビボイメージングを行うため使用され、例えば、骨盤領域および前立腺のスキャンを容易にするために抗体を標識することによって行われる。イメージングの１つの方法には、イメージしようとする前立腺の腫瘍細胞を検出可能なマーカーで標識した抗−ＰＳＲ抗体と接触させることを含む。該方法は標識された抗体がＰＳＲに結合するような条件下で行われる。具体的な例において、該抗体は前立腺、例えば前立腺癌細胞と相互作用し、そのように接触すると、前立腺のイメージングおよび可視化が増強されて、前立腺の疾患状態または非疾患状態の決定を可能にするように蛍光を発する。ＰＳＲポリペプチドの量が上昇しているかどうかを決定するために、上記の方法は健常である、すなわち前立腺の障害を有さないことがわかっている多数の宿主に対して行われてよい。ついでＰＳＲポリペプチドの平均レベルを決定すると、これは標準として働き、該標準に対してＰＳＲポリペプチドの異常な量のイン・ビボにおいての同定のために、ＰＳＲポリペプチドレベルを測定することができる。本発明の他の態様により、配列番号：２の推定アミノ酸配列を有する成熟ポリペプチドまたは１９９４年１０月１１日にＡＴＣＣ受託番号第７５９１３号として寄託されたクローンのcＤＮＡによってコードされる成熟ポリペプチドをコードする単離した核酸（ポリヌクレオチド）を提供する。本発明のポリヌクレオチドはヒト前立腺由来のcＤＮＡライブラリーにおいて見い出された。該ＰＳＲ遺伝子は、前立腺において主として発現し、本発明者らによってスクリーニングされたその他のヒトのcＤＮＡ組織ライブラリーにおいては全く見られなかった（下記表１参照）。ＰＳＲは３１６アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含む。表１に示すように、３つの前立腺cＤＮＡライブラリーを構築し、これら３つのライブラリーから得られた多数のクローンをシークエンシングした。これらのライブラリーから同定されたクローンをヒト前立腺cＤＮＡライブラリー以外の３００以上のヒトcＤＮＡライブラリーから得られた２７５,２６１の独立したc ＤＮＡクローンの同定を含むデータベースと比較した。表に示されるように、ヒト前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）は正常のヒト前立腺ライブラリーにおいて４回、ステージＢ２のヒト前立腺癌ライブラリーにおいて７回、ついでステージＣのヒト前立腺癌ライブラリーにおいて１４回同定された。ヒト前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）は正常のヒト前立腺ライブラリーにおいて１３回、ステージＢ２のヒト前立腺癌ライブラリーにおいて１回、ついでステージＣのヒト前立腺癌ライブラリーにおいて１４回同定された。本発明の前立腺特異的還元酵素は、ステージＢ２のヒト前立腺癌ライブラリーにおいて３回、ついでステージＣのヒト前立腺癌ライブラリーにおいて７回同定され、最も顕著なことには、正常なヒト前立腺ライブラリーにおいて、または非前立腺組織由来のライブラリーにおいては全く同定されることがなく、このことにより、前立腺障害のマーカーとして重要であることを示している。本発明のポリヌクレオチドはＲＮＡまたはＤＮＡの形態であり、そのＤＮＡにはcＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよび合成ＤＮＡが含まれる。該ＤＮＡは二本鎖または一本鎖であり、一本鎖の場合には、コーディング鎖または非コーディング鎖（アンチセンス）であってよい。成熟ポリペプチドをコードするコーディング配列は配列番号：２に示されるコーディング配列または寄託されたクローンの配列に同一であってよいし、または遺伝的コードの重複性または縮重の結果コーディング配列が配列番号：１または寄託されたcＤＮＡのＤＮＡと同一の成熟ポリペプチドをコードする異なるコーディング配列であってよい。配列番号：２の成熟ポリペプチドまたは寄託されたcＤＮＡによってコードされる成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドには以下が含まれる：成熟ポリペプチドのコーディング配列のみ、または成熟ポリペプチドのコーディング配列（および時にさらに別のコーディング配列）および例えば、イントロンまたは該成熟ポリペプチドのコーディング配列の５'および／または３'の非コーディング配列などの非コーディング配列。従って、「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」なる語は、該ポリペプチドのコーディング配列のみを含むかまたはコーディグおよび／または非コーディング配列をさらに含むポリヌクレオチドを含む。本発明はさらに、配列番号：２の推定アミノ酸配列を有するポリペプチドまたは寄託されたクローンのcＤＮＡによってコードされるポリペプチドの断片、類似体および誘導体をコードする上記のポリヌクレオチドの変異体にも関連する。該ポリヌクレオチドの変異体は、天然に存在する該ポリヌクレオチドの対立遺伝子変異体または天然には存在しない該ポリヌクレオチドの変異体であってよい。従って、本発明は、配列番号：２に示すのと同じ成熟ポリペプチド、または寄託されたクローンのｃＤＮＡによってコードされる同じ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチドの変異体が含まれ、これらの変異体は、配列番号：２のポリペプチドまたは寄託されたクローンのｃＤＮＡによってコードされるポリヌクレオチドの断片、誘導体、または類似体をコードする。そのようなヌクレオチド変異体には欠失変異体、置換変異体および付加または挿入変異体が含まれる。先に示したように、該ポリヌクレオチドは配列番号：１に示すコーディング配列の天然に存在する対立遺伝子変異体または寄託されたクローンのコーディング配列の天然に存在する対立遺伝子変異体であるコーディング配列を有してよい。当該技術分野において公知のように、対立遺伝子変異体は１またはそれ以上のヌクレオチドの置換、欠失または付加（実質的にはコードするポリペプチドの機能を変えない）を有してよい別の形のポリヌクレオチド配列である。本発明のポリヌクレオチドはまた、本発明のポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列にインフレームで融合したコーディング配列を有してもよい。該マーカー配列は、細菌宿主の場合には、マーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製を提供するためのベクター、好ましくはｐＱＥ−９ベクターによって与えられるヘキサ−ヒスチジンタグであり、または例えば、哺乳動物宿主（例えば，ＣＯＳ−７細胞）を使用する場合には、マーカー配列は、赤血球凝集素（ＨＡ）タグであってよい。該ＨＡタグはインフルエンザ赤血球凝集素タンパク質より得られるエピトープに対応する（ウィルソン（Ｗilson，Ｉ.）ら、Ｃell、３７：７６７（１９８４））。本発明はさらに、配列間に少なくとも５０％、また好ましくは少なくとも７０％の同一性がある場合に、本明細書に記載の上記の配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本発明は特に、ストリンジェント条件下、上記のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本明細書で使用する場合、「ストリンジェント条件」という語は、配列間に少なくとも９５％、また好ましくは少なくとも９７％の同一性がある場合にのみ、ハイブリダイゼーションが起こるであろうことを意味する。好ましい態様では、上記のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドは、配列番号：１のｃＤＮＡまたは寄託されたｃＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドと同じ生物学的機能または活性を実質的には保有するポリペプチドをコードする。本明細書で使用する寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の約定の下に保持されるであろう。これらの寄託は、単に当業者への便宜として与えられるものであって、寄託が３５Ｕ.Ｓ.Ｃ．§１１２下に要求されることを承認するものではない。寄託された物質中に含まれるポリヌクレオチドの配列、さらにまた、それによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、本明細書の一部を構成して、本明細書中の配列のいずれかの記載と矛盾する際は、いつでも制御している。寄託された物質を製造し、使用し、または販売するには、実施許諾が要求され得て、またそのような実施許諾は、ここでは付与されない。本発明はさらに、配列番号：２の推定アミノ酸配列を有する、または寄託されたｃＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列を有するＰＳＲポリペプチド、さらにはまた、そのようなポリペプチドの断片、類似体および誘導体に関する。配列番号：２のポリペプチドまたは寄託されたｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドに言及する場合、「断片」、「誘導体」および「類似体」という語は、そのようなポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を保有するポリペプチドを意味する。従って、類似体には、プロタンパク質部分を切断することにより活性化して、活性な成熟ポリペプチドを製造することができるプロタンパク質が含まれる。本発明のポリペプチドは、組換えポリペプチド、天然ポリペプチドまたは合成ポリペプチドであってよいが、組換えポリペプチドが好ましい。配列番号：２のポリペプチドまたは寄託されたｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドの断片、誘導体または類似体は、（ｉ）１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が保存または非保存アミノ酸残基（好ましくは、保存アミノ酸残基）で置換されており、またそのような置換アミノ酸残基が遺伝コードによりコードされるものであってもよく、またはコードされたものでなくてもよいもの、または（ ii）１つまたはそれ以上のアミノ酸残基に置換基が含まれるもの、または（iii ）成熟ポリペプチドが、該ポリペプチドの半減期を増加させる化合物（例えば、ポリエチレングリコール）のような他の化合物と融合しているものであり得る。そのような断片、誘導体および類似体は、本明細書中の教示から当業者の範囲内であると思われる。本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、単離された形で提供されるのが好ましく、好ましくは、均一となるまで精製される。「単離された」という語は、物質がその元の環境（例えば、それが天然に存在するなら、天然の環境）から除去されていることを意味する。例えば、生きている動物にある天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されていないが、天然の系における共存物質のいくつかまたは全てから分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されている。そのようなポリヌクレオチドはベクターの一部であってよく、および／またはそのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の一部であってよく、それでいて、そのようなベクターまたは組成物はその天然の環境の一部ではないという点で、なお単離されている。本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドが含まれるベクター、本発明のベクターで遺伝的に操作された宿主細胞、および本発明のポリペプチドの組換え技術による製造にも関する。宿主細胞は、例えば、クローニングベクターまたは発現ベクターであり得る本発明のベクターで遺伝的に操作される（形質導入、または形質転換、またはトランスフェクションされる）。該ベクターは、例えば、プラスミド、ウイルス粒子、ファージ等の形であり得る。操作された宿主細胞は、プロモーターを活性化し、形質転換体を選択し、またはＰＳＲ遺伝子を増幅するのに適するよう改変された通常の栄養培地で培養することができる。温度、ｐＨ等といったような培養条件は、発現用に選択された宿主細胞で先に使用した培養条件であって、当業者に明らかであろう。本発明のポリヌクレオチドは、ポリペプチドを組換え技術により製造するのに使用することができる。従って、例えば、該ポリヌクレオチドを、ポリペプチドを発現するための様々な発現ベクターのいずれか１つに含ませることができる。そのようなベクターには、染色体ＤＮＡ配列、非染色体ＤＮＡ配列および合成ＤＮＡ配列、例えば、ＳＶ４０の誘導体；細菌プラスミド；ファージＤＮＡ；バキュロウイルス；酵母プラスミド；プラスミドとファージＤＮＡとの組み合わせから得られるベクター；ワクシニア、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病といったようなウイルスＤＮＡが含まれる。しかしながら、他のいずれのベクターも、それが宿主中で複製可能であって、生存可能である限り、使用することができる。適当なＤＮＡ配列を様々な方法によりベクターに挿入することができる。一般には、ＤＮＡ配列を当該技術分野で公知の方法により適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入する。そのような方法および他の方法は、当業者の範囲内であると思われる。発現ベクター中のＤＮＡ配列を、適当な発現調節配列（プロモーター）に作動可能に連結して、ｍＲＮＡ合成を行わせる。そのようなプロモーターの代表例として、以下のものが挙げられる；ＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーター、大腸菌、lac 、またはtrp、ファージラムダＰ_Lプロモーター、および原核もしくは真核細胞またはそれらのウイルスでの遺伝子の発現を調節することが知られている他のプロモーター。発現ベクターはまた、翻訳開始のためのリボソーム結合部位および転写ターミネーターも含む。該ベクターはまた、発現を増幅するのに適当な配列も含み得る。さらに、発現ベクターは、真核細胞培養の場合にはジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性といったようなまたは、大腸菌ではテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性といったような、形質転換された宿主細胞の選択のための表現型特性を与えるための１つまたはそれ以上の選択可能なマーカー遺伝子を含むのが好ましい。上記のような適当なＤＮＡ配列、さらにはまた、適当なプロモーターまたは調節配列を含むベクターを、適当な宿主を形質転換するために使用して、その宿主がタンパク質を発現するのを可能にすることができる。適当な宿主の代表例として、以下のものが挙げられる：大腸菌、ストレプトマイセス（Ｓtreptomyces）、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓalmonella typhi murium）といったような細菌細胞；酵母のような真菌細胞；ドロソフィラ（Ｄro sophila）Ｓ２およびＳｆ９といったような昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳまたはＢ owesメラノーマといったような動物細胞；アデノウイルス；植物細胞等。適当な宿主の選択は、本明細書中の教示から当業者の範囲内であると思われる。とりわけ、本発明にはまた、先に広く記載した配列を１つまたはそれ以上含んでなる組換え構築物も含まれる。そのような構築物は、本発明の配列が順方向または逆方向で挿入されている、プラスミドまたはウイルスベクターといったようなベクターを含む。この実施態様の好ましい側面では、該構築物はさらに、例えば、該配列に作動可能に連結したプロモーターなどの調節配列を含む。適当なベクターおよびプロモーターが多数、当業者に知られていて、市販されている。以下のベクターを例として挙げる。細菌用；ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、ｐＱＥ−９（キアゲン（Ｑiagen））、ｐＢＳ、ｐＤ１０、ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔ、ｐｓｉＸ１７４、ｐｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ、ｐＢＳＫＳ、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（ストラタジーン(Ｓtratagene)）；ptrc ９９a、pＫＫ２２３−３、pＫＫ２３３−３、pＤＲ５４０、pＲＩＴ５(ファルマシア（Ｐharmacia）)。真核生物用: pＷＬＮＥＯ、pＳＶ２ＣＡＴ、pＯＧ４４、 pＸＴ１、pＳＧ(ストラタジーン)、pＳＶＫ３、pＢＰＶ、pＭＳＧ、pＳＶＬ(ファルマシア)。しかしながら、他のいずれのプラスミドまたはベクターも、それらが宿主中で複製可能であって、生存可能である限り、使用することができる。プロモーター領域は、ＣＡＴ(クロラムフェニコールトランスフェラーゼ)ベクターまたは選択マーカーを有する他のベクターを用いて、いずれかの所望の遺伝子から選択することができる。２つの適当なベクターは、ＰＫＫ２３２−８およびＰＣＭ７である。個々に名付けられた細菌プロモーターには、lacＩ、lacＺ、Ｔ３、Ｔ７、gpt、ラムダＰ_R、Ｐ_Lおよびtrpが含まれる。真核プロモーターには、ＣＭＶ即時初期(immediate early)、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期および後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来のＬＴＲｓ、およびマウスのメタロチオネイン −Ｉが含まれる。適当なベクターおよびプロモーターの選択は、十分、当業者のレベルの範囲内である。さらなる態様では、本発明は、上記の構築物を含む宿主細胞に関する。そのような宿主細胞は、哺乳動物細胞のような高等真核細胞、酵母細胞のような下等真核細胞であり得、または該宿主細胞は、細菌細胞のような原核細胞であり得る。構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクションまたはエレクトロポレーションにより行うことができる。(デイビス（Ｄavis,Ｌ.）、ディブナー（Ｄibner,Ｍ.）、バッテイ（Ｂattey,Ｉ.）、ベーシック・メソッズ・イン・モレキュラー・バイオロジー（Ｂasic Ｍethods in Ｍolecular Ｂiology）、（１９８６）)。宿主細胞中の構築物を通常の方法で使用して、組換え配列によりコードされる遺伝子産物を製造することができる。あるいはまた、本発明のポリペプチドは、従来のペプチド合成装置により合成的に製造することができる。成熟タンパク質は、適当なプロモーターの調節下、哺乳動物細胞、酵母、細菌、または他の細胞中で発現させることができる。そのようなタンパク質を、本発明のＤＮＡ構築物から得られるＲＮＡsを用いて製造するために、無細胞翻訳系もまた使用することができる。原核および真核宿主で使用するのに適当なクローニングおよび発現ベクターは、サンブルック（Ｓambrook）ら、モレキュラー・クローニング（Ｍolecular Ｃloning）：ア・ラボラトリー・マニュアル（ＡＬ aboratory Ｍanual）、第２版、コールド・スプリング・ハーバー（Ｃold Ｓpri ng Ｈarbor）、ニューヨーク、（１９８９）により記載されており、この開示は、本明細書の一部を構成する。本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの高等真核生物による転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することにより増大する。エンハンサーは、プロモーターに作用してその転写を増加させる、通常、約１０〜３００bpの、ＤＮＡのシス作用性要素である。例には、bp １００〜２７０の、複製開始点の後期側にあるＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが含まれる。通例、組換え発現ベクターには、複製開始点および宿主細胞の形質転換を可能にする選択可能なマーカー、例えば、大腸菌のアンピシリン耐性遺伝子ならびにサッカロミセス・セレビシエ（Ｓ.cerevisiae）ＴＲＰ１遺伝子、および下流の構造配列の転写を行わせるために高度に発現される遺伝子から得られるプロモーターが含まれるであろう。そのようなプロモーターは、とりわけ、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ(ＰＧＫ)のような解糖系酵素、α因子、酸性ホスファターゼ、または熱ショックタンパク質をコードするオペロンから得ることができる。ヘテロロガス構造配列は、翻訳開始および終結配列と共に、適当な相(phase)で集合する。場合により、そのヘテロロガス配列は、所望の特性、例えば、発現された組換え生成物の安定化または精製の簡易化を与えるＮ−末端同定ペプチドが含まれる融合タンパク質をコードすることができる。細菌で使用するのに有用な発現ベクターは、所望のタンパク質をコードする構造ＤＮＡ配列を、作動可能なリーディング相にある適当な翻訳開始および終結シグナルと機能的なプロモーターと共に挿入することにより構築される。そのようなベクターは、ベクターの維持を確実なものとするために、また所望により、宿主内での増幅を与えるために、１つまたはそれ以上の表現型の選択可能なマーカーおよび複製開始点を含むであろう。形質転換に適当な原核宿主には、大腸菌、バシラス・サチリス（Ｂacillus subtilis）、サルモネラ・ティフィムリウム、およびシュードモナス（Ｐseudomonas）属、ストレプロマイセス属、ならびにスタフィロコッカス（Ｓtaphylococcus）属の範囲内の様々な種が含まれるが、他のものもまた選択可能である。代表的であるが、非限定的な例として、細菌で使用するのに有用な発現ベクターは、周知のクローニングベクターｐＢＲ３２２(ＡＴＣＣ３７０１７)の遺伝要素を含んでなる市販のプラスミドから得られる、選択可能なマーカーおよび細菌の複製開始点を含んでいてよい。そのような市販のベクターには、例えば、p ＫＫ２２３−３(ファルマシア・ファイン・ケミカルズ（Ｐharmacia Ｆine Ｃhe micals）、ウプサラ（Ｕppsala）、スウェーデン)およびＧＥＭ１(プロメガ・バイオテク（Ｐromega Ｂiotec）、マディソン（Ｍadison）、ウィスコンシン、米国)が含まれる。これらのpＢＲ３２２「骨核」部分を適当なプロモーターおよび発現されるべき構造配列と組み合わせる。適当な宿主株を形質転換して、その宿主株を適当な細胞密度までの増殖させた後、選択されたプロモーターを適当な方法(例えば、温度シフトまたは化学誘導) により誘導して、細胞をさらなる期間培養する。細胞を、一般的には、遠心分離により収集し、物理的または化学的方法により破壊して、その結果得られた粗製の抽出物を更なる精製のために保有する。タンパク質の発現に使用される微生物細胞は、凍結−解凍サイクル、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含むいずれの従来法によっても破壊でき、そのような方法は、当業者に周知である。組換えタンパク質を発現させるために、様々な哺乳動物細胞培養系もまた使用することができる。哺乳動物発現系の例には、グルズマン（Ｇluzman）、Ｃell 、２３：１７５（１９８１）により記載されている、サルの腎臓線維芽細胞のＣＯＳ−７系、および適合可能なベクターを発現させることができる他の細胞系、例えば、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨｅＬａおよびＢＨＫ細胞系が含まれる。哺乳動物発現ベクターは、複製開始点、適当なプロモーターおよびエンハンサー、またいずれかの必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナーおよびアクセプター部位、転写終結配列、および５'に隣接する非転写配列もまた含むであろう。ＳＶ４０のスプライシングから得られるＤＮＡ配列、およびポリアデニル化部位を使用して、必要とされる非転写遺伝要素を与えることができる。ＰＳＲポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈澱、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーが含まれる方法により、組換え細胞培養物から回収して、精製することができる。必要に応じて、タンパク質の再生工程を、成熟タンパク質の立体配置を完成するのに使用することができる。最後に、高性能液体クロマトグラフィー( ＨＰＬＣ)を最終精製工程に使用することができる。本発明のポリペプチドは、天然に精製された産物、もしくは化学合成法の産物であり得るか、または原核もしくは真核宿主から（例えば、培養物中の細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞によって）組換え技術により製造することができる。組換え製造方法で使用する宿主により、本発明のポリペプチドは、グリコシル化され得るか、またはグルコシル化され得ない。本発明のポリペプチドにはまた、最初のメチオニンアミノ酸残基が含まれ得る。本発明の他の態様により、ＰＳＲが還元酵素であり、前立腺癌細胞の増殖に必要であるので、ＰＳＲを抑制する治療剤をスクリーニングするのに使用されるアッセイを提供する。本発明は十分なアフィニティーでＰＳＲと複合体を形成してＰＳＲの生物学的作用を妨害する治療剤を選択する方法を開示する。該方法には多様なアッセイが含まれ、ＰＳＲが支持体に固定化され、ＰＳＲの天然の基質および標識した治療剤と同時かまたは連続して接触させ、ついで該治療剤がその基質に対してＰＳＲの結合を妨害するために十分なやり方において天然の基質と有効に競合するかどうかを決定する競合アッセイを含む。他の態様において、該天然の基質は標識され、ついで該治療剤は標識されない。さらなる態様において、該基質は支持体に固定化され、ついで標識されたＰＳＲおよび治療剤（または標識されていないＰＳＲおよび標識された治療剤）の両方に接触させ、ついで基質に結合したＰＳＲの量が治療剤を添加しないアッセイと比較して減少したかどうかを決定する。該ＰＳＲは本発明の抗ＰＳＲ抗体で標識される。このようなスクリーニングアッセイの他の例において、ＰＳＲポリペプチドを発現する哺乳類細胞または膜調製物を、同時の酸化および還元を行う要素、例えば一緒になって水を形成する水素および酸素（その際、水素は放射能、例えばトリチウムで標識できる）をスクリーニングされるべき化合物の存在下、水素および酸素が水を形成する酸化還元反応に有利な条件の下でインキュベートする。ついでこの相互作用を増強または阻害する化合物の能力を測定する。ＰＳＲに対する潜在的なアンタゴニストには、該ポリペプチドに結合する抗体、すなわち上記のような抗イデオタイプ抗体または、ある場合にはオリゴヌクレオチドを含む。潜在的な他のＰＳＲアンタゴニストはまた、アンチセンス技術を用いて調製されたアンチセンス構築物をも含む。アンチセンス技術は三重螺旋形成またはアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ（その両者の方法はポリヌクレオチドをＤＮＡまたはＲＮＡに結合させること基礎としている）によって遺伝子発現を制御するのに使用されることができる。例えば、該ポリヌクレオチド配列の５'コーディング部位（本発明の成熟ポリペプチドをコードする）は長さが約１０から４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計するのに使用される。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは転写に関与する遺伝子の領域に相補的であるように設計され（三重螺旋−リー（Ｌee）ら、Ｎucl．Ａcids Ｒes.、６：３０７３（１９７９）；クーニー（Ｃooney）ら、Ｓcience、２４１：４５６（１９８８）；およびダーバン（Ｄervan）ら、Ｓcience、２５１：１３６０（１９９１）参照）、それによってＰＳＲの転写および産生を妨害する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはイン・ビボでｍＲＮＡにハイブリダイズし、ｍＲＮＡ分子のＰＳＲポリペプチドへの翻訳を阻害する（アンチセンス−オカノ（Ｏkano）、Ｊ.Ｎeuroc hem.５６：５６０（１９９１）；オリゴデオキシヌクレオチド・アズ・アンチセンス・インヒビターズ・オブ・ジーン・エクスプレッション（Ｏligodeoxynucle otides as Ａntisense Ｉnhibitors of Ｇene Ｅxpression）、ＣＲＣプレス(ＣＲＣＰress)、ボカ・レイトン（ＢocaＲaton）、フロリダ（１９８８））。上記に記載のオリゴヌクレオチドはまたアンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡがイン・ビボでＰＳＲの産生を阻害するために発現されるように細胞に運搬されることができる。潜在的なアンタゴニストにはまた、該ポリペプチドのような活性部位に結合または該部位を占領することによって活性部位が基質に接近できなくなり、通常の生物学的活性が妨害されるような小分子を含む。基質に接近しにくい活性部位を作成するものが含まれる。小分子の例にはこれらに限られるものではないが、小ペプチドまたはペプチド様分子が含まれる。該アンタゴニストは前立腺癌細胞の生存に必要であるＰＳＲの機能を抑制するため前立腺癌を治療するのに使用される。該アンタゴニストは、例えば以下に記載するような製薬学的に許容し得る担体と組み合わせて使用される。全長のＰＳＲ遺伝子の断片は、全長のＰＳＲ遺伝子およびＰＳＲ遺伝子に高い類似性を有するかまたは同様の生物学的活性を有する他の遺伝子を単離するためのcＤＮＡライブラリーのハイブリダイゼーションプローブとして使用されてよい。このタイプのプローブは、例えば２０〜２０００塩基対の間であってよい。しかしながら、好ましくは、該プローブは３０〜５０塩基である。該プローブはまた、全長の転写物およびゲノムクローンまたは調節領域およびプロモーター領域、エクソンおよびイントロンを含む完全なＰＳＲ遺伝子を含むクローンに対応するcＤＮＡを同定するのに使用されてよい。スクリーニングの例には、オリゴヌクレオチドプローブを合成するための公知のＤＮＡ配列を使用することによってＰＳＲ遺伝子のコーディング領域を単離することを含む。本発明の遺伝子の配列に相補的な配列を有する標識したオリゴヌクレオチドはヒトcＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはmＲＮＡのライブラリーをスクリーニングして該プローブがライブラリーのどのメンバーにハイブリダイズするのかを決定するのに使用される。ＰＳＲポリペプチドまたはアゴニストまたはアンタゴニストは、適当な製薬学的担体と組み合わせて使用することができる。そのような組成物は、治療上有効な量のポリペプチド、および製薬学上許容され得る担体または賦形剤を含んでなる。そのような担体には、これに限定されるものではないが、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせが含まれる。その製剤は、投与方法に適合すべきである。本発明はまた、本発明の医薬組成物の成分を１つまたはそれ以上充填した、１つまたはそれ以上の容器を含んでなる医薬品パックまたはキットも提供する。そのような容器には、製薬学的または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府当局により規定された形の通知を付してもよく、この通知は、ヒトへの投与のための製造、使用または販売の、該当局による承認を表わす。さらに、本発明のポリペプチドは、他の治療化合物と共に使用することができる。該医薬組成物は、経口、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内、皮内経路といったような便利な方法で投与することができる。製薬学的な組成物は、特定の徴候を治療および／または予防するのに有効な量で投与される。一般に、該組成物は、１日当たり少なくとも約１０μg／kg(体重)の量で投与され、たいていの場合、約８mg／kg(体重)を超えない量で投与されるであろう。たいていの場合、投与経路および症状等を考慮に入れて、投与量は、毎日約１０μg／kg〜約１mg／kg(体重)である。該ＰＳＲポリペプチドおよびアゴニストおよびアンタゴニストはまた、しばしば「遺伝子治療」と呼ばれる、そのようなポリペプチドのイン・ビボにおける発現により、本発明に従って使用してよい。従って、例えば、患者由来の細胞を、エクス・ビボ（ex vivo）においてポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(ＤＮＡまたはＲＮＡ)で操作した後、操作した細胞を該ペプチドで処置すべき患者に与える。そのような方法は、当該技術分野で公知である。例えば、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子の使用によって、細胞を当該技術分野で公知の方法により操作することができる。同様に、例えば、当該技術分野で既知の方法により、ポリペプチドのイン・ビボにおける発現のために、細胞をイン・ビボにおいて操作することができる。当該技術分野において知られているように、細胞をイン・ビボにおいて処理してポリペプチドをイン・ビボにおいて発現させるために、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子を製造するためのプロデューサー細胞を患者に投与することができる。そのような方法により本発明のポリペプチドを投与するためのこれらの方法および他の方法は、本発明の教示から当業者に明らかであろう。例えば、細胞を操作するための発現ビヒクルは、レトロウイルス以外のもの、例えば、適当な運搬ビヒクルと組み合わせた後、細胞をイン・ビボにおいて操作するために使用することができるアデノウイルスであってもよい。本発明の配列はまた、染色体同定にも有益である。該配列を個々のヒト染色体上の特定の位置に対して特異的に標的化して、ハイブリダイズさせることができる。そのうえ、現在、染色体上の特定の部位を同定する必要がある。実際の配列データ(反復多型性)に基づいた染色体マーキング試薬は、現在、染色体位置をマークするのにはほとんど利用できない。本発明によるＤＮＡの染色体へのマッピングは、それらの配列を疾患関連遺伝子と関係づける重要な第一段階である。簡単に言えば、ｃＤＮＡ由来のＰＣＲプライマー(好ましくは、１５−２５bp) を調製することにより、配列を染色体にマップすることができる。該遺伝子の３ '非翻訳領域のコンピューター分析を使用して、ゲノムＤＮＡ中の１を越えるエクソンにまたがらないプライマーを迅速に選択することから、増幅過程を複雑なものとする。ついで、これらのプライマーを、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングに使用する。プライマーに対応するヒト遺伝子を含むハイブリッドのみが、増幅された断片を与えるであろう。体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定のＤＮＡを特定の染色体に帰属させるための迅速な方法である。同じオリゴヌクレオチドプライマーを用いての本発明を利用して、サブローカリゼーションは、具体的な染色体または大きいゲノムクローンのプール由来の断片のパネルを用いる類似の方法で達成することができる。その染色体へマップするのに同様に利用することができる他のマッピング方法には、イン・サイチュ（in situ）ハイブリダイゼーション、標識化フロー−ソーティッド(flow−sorted)染色体を用いてのプレスクリーニング、および染色体特異的ｃＤＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによるプレセレクションが含まれる。ｃＤＮＡクローンの中期染色体スプレッド（spread）への蛍光イン・サイチュハイブリダイゼーション(ＦＩＳＨ)を利用して、正確な染色体位置を一工程で与えることができる。この技術は、わずか５００または６００塩基の短いｃＤＮＡで利用することができる；しかしながら、２,０００ｂｐより大きいクローンは、簡単な検出に関して十分なシグナル強度を有する独特の染色体の位置に結合しやすい。ＦＩＳＨは、ＥＳＴが由来するクローンの使用を必要とし、長ければ長いほど良い。例えば、２,０００ｂｐは良く、４,０００は一層良く、および４, ０００以上がおそらく時間の合理的なパーセントの良い結果である。この技術の概説には、ベルマ（Ｖerma）ら、ヒューマン・クロモソームズ（Ｈuman Ｃhromo somes）：ア・マニュアル・オブ・ベーシック・テクニクス（a Ｍanual of Ｂas ic Ｔechniques）、パガモン・プレス（Ｐergamon Ｐress）、ニューヨーク（１９８８）を参照。ある配列が正確な染色体位置に一度マップされると、染色体上の配列の物理的位置を遺伝マップデータと関連付けることができる。そのようなデータは、例えば、マックジック（Ｖ.ＭcＫusick）、メンデリアン・インヘリタンス・イン・マン（Ｍendelian Ｉnheritance in Ｍan）(ジョーンズ・ホプキンス・ユニバーシティー・ウェルチ・メディカル・ライブラリー（Ｊohns Ｈopkins Ｕniversit y Ｗelch Ｍedical Ｌibrary）を介してオンラインで利用できる)に見い出される。ついで、同じ染色体領域にマップされている遺伝子と疾患との間の関係を連鎖分析(物理的に隣接した遺伝子の共遺伝(coinheritance))によって確認する。次に、罹患した個体と罹患していない個体との間のｃＤＮＡまたはゲノム配列の相違を決定する必要がある。変異が、罹患した個体のいくつかまたは全てにおいて認められるが、いずれの正常な個体においても認められないなら、その変異は疾患の原因となるものであるらしい。現在の物理的マッピングおよび遺伝的マッピング技術の解析から、疾患と関連する染色体領域に正確に局在化したｃＤＮＡは、５０〜５００の原因となり得る遺伝子の１つとなり得るであろう。(これは、１メガベースのマッピング分析および２０kb当り１つの遺伝子を仮定する)。ポリペプチド、それらの断片もしくは他の誘導体、もしくはそれらのアナログ、またはそれらを発現する細胞を免疫原として使用して、それらに対する抗体を製造することができる。これらの抗体は、例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。本発明にはまた、キメラ、単鎖、およびヒト化抗体、さらにはまた、Ｆabフラグメント、またはＦab発現ライブラリーの生成物も含まれる。当該技術分野で公知の様々な方法を、そのような抗体および断片の製造に使用することができる。本発明の配列に対応するポリペプチドに対して生成される抗体は、ポリペプチドを動物に直接注入することにより、またはポリペプチドを動物、好ましくはヒトでない動物に投与することにより得ることができる。ついで、そのようにして得られた抗体は、そのポリペプチド自体に結合するであろう。この方法では、ポリペプチドの断片のみをコードする配列さえも、完全な天然のポリペプチドを結合する抗体を製造するのに使用することができる。ついで、そのような抗体は、そのポリペプチドを発現する組織からポリペプチドを単離するために使用できる。モノクローナル抗体を調製するには、連続的な細胞系培養により産生される抗体を与える技術を全て使用することができる。例には、ハイブリドーマ法(コーラー（Ｋohler）およびミルシュタイン（Ｍilstein）、１９７５、Ｎature、２５６:４９５−４９７)、トリオーマ(trioma)法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法( コズボール（Ｋozbor）ら、１９８３、Ｉmmunology Ｔoday ４：７２)、およびヒトモノクローナル抗体を製造するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ法(コール（Ｃole）ら、１９８５、モノクローナル・アンチボディーズ・アンド・キャンサー・セラピー（Ｍonoclonal Ａntibodies and Ｃancer Ｔherapy）、アラン・アール・リス、インク（Ａlan Ｒ.Ｌiss，Ｉnc.）、７７−９６頁において)が含まれる。単鎖抗体の産生に関して記載されている技術(米国特許第４,９４６,７７８号) は、本発明の免疫原性ポリペプチド産生物に対する単鎖抗体を製造するのに適合し得る。また、トランスジェニックマウスを本発明の免疫原ポリペプチド産物に対するヒト化した抗体を発現させるのに使用される。本発明をさらに、以下の実施例に関して記載する；しかしながら、本発明は、そのような実施例に限定されないことを理解すべきである。部または量は全て、特にことわらない限り、重量単位である。以下の実施例の理解を容易にするために、幾つかの頻繁に出てくる方法および／または用語を記載する。「プラスミド」は、前置きする小文字のpおよび／または続けて大文字および／または数字により示す。本明細書中の出発プラスミドは、市販されているか、限定されない基盤の下に公に入手可能であるか、または公開された方法により入手可能なプラスミドから構築できる。さらに、記載したプラスミドと同等のプラスミドは、当該技術分野で公知であって、当業者に明らかであろう。ＤＮＡの「消化」は、ＤＮＡのある配列にのみ作用する制限酵素でＤＮＡを触媒開裂することを示す。本明細書中で使用する様々な制限酵素は市販されており、それらの反応条件、補因子および他の必要条件は、当業者に知られているように使用した。分析目的には、典型的に、緩衝溶液約２０μl中、１μgのプラスミドまたはＤＮＡ断片を約２単位の酵素と共に使用する。プラスミド構築のためのＤＮＡ断片を単離する目的には、より多量の容積中、典型的にＤＮＡ５〜５０μ gを２０〜２５０単位の酵素で消化する。特定の制限酵素に適当な緩衝液および基質量は、製造者により指定されている。３７℃で約１時間のインキュベーション時間が通常利用されるが、供給者の指示に従って変えることができる。消化後、その反応物をポリアクリルアミドゲルで直接電気泳動して、所望の断片を単離する。開裂した断片のサイズ分離は、ゲッデル（Ｇoeddel,Ｄ）ら、Ｎucleic Ａcids Ｒes.、８：４０５７（１９８０）により記載されている８％ポリアクリルアミドゲルを用いて行う。「オリゴヌクレオチド」は、化学的に合成することができる、一本鎖ポリデオキシヌクレオチド、または２つの相補的ポリデオキシヌクレオチド鎖を示す。そのような合成オリゴヌクレオチドは５'リン酸を有さないことから、キナーゼの存在下、ＡＴＰとともにリン酸を加えることなしには、別のオリゴヌクレオチドにライゲートしないであろう。合成オリゴヌクレオチドは、脱リン酸化されていない断片にライゲーションするであろう。「ライゲーション」は、２つの二本鎖核酸断片の間にホスホジエステル結合を形成する過程をいう(マニアチス（Ｍaniatis,Ｔ.）ら、同上、１４６頁)。特にことわらない限り、ライゲーションは、ライゲートさせるべきＤＮＡ断片のほぼ等モル量の０.５μg当り１０単位のＴ４ＤＮＡリガーゼ(「リガーゼ」)と共に、既知の緩衝液および条件を用いて成し遂げることができる。特にことわらない限り、形質転換は、グラハム（Ｇraham,Ｆ.）およびファン・デル・エブ（Ｖan der Ｅb,Ａ.）、Ｖirology、５２：４５６−４５７（１９７３）の方法に記載されているようにして行った。実施例１前立腺以外の組織中のＰＳＲ遺伝子転写物の決定ＰＳＲ mＲＮＡの活性転写物の存在または不在を明らかにするために、約６ml の静脈血をヘパリン化した管を用いて標準静脈穿刺技術にて得た。全血液を当量のリン酸緩衝食塩水と混合し、１５mlのポリスチレン管中の層状になった８mlを越えるＦicoll（ファルマシア、ウプサラ、スウェーデン）の上に置いた。該勾配を５℃で２０分間１８００×ｇで遠心した。リンパ球細胞および顆粒球の層（約５ml）を注意深く通気し、ついで５０ml管中で５０mlまでリン酸緩衝食塩水で再度希釈し、５℃で２０分間、１８００×ｇで遠心した。該上清を捨て、有核（nu cleated）細胞を含むペレットを製造者によって記載されるようにしてＲＮＡzol Ｂ法を用いてＲＮＡ抽出するのに使用する（テル−テストインク（Ｔel−Ｔest ，Ｉnc.）、フレンズウッド、テキサス）。２つのオリゴヌクレオチドプライマーをサンプル中に存在するＰＳＲヌクレオチド配列を増幅するために使用する：５'プライマーはであり、３'プライマーはその逆転写酵素反応およびＰＣＲ増幅を続いてパーキン・エルマー９６００ＰＣＲ機械（エメリビル（Ｅmeryville）、カリフォルニア）において中断なしに行った。２０μlのジエチルピロカーボネート処理した水中の４００ngの総ＲＮＡを６５℃の水浴中で５分間静置し、ついですぐに氷冷し、直後にＰＣＲ試薬を添加した。総量５０μlのＰＣＲ容量は２.５単位のＴaqポリメラーゼ（パーキン・エルマー）、２単位のトリ骨髄芽球症ウイルス逆転写酵素（ベーリンガーマンハイム、（Ｂoehringer Ｍannheim）、インディアナポリス、インディアナ）；各２００μＭのdＣＴＰ、dＡＴＰ、dＧＴＰおよびdＴＴＰ（パーキン・エルマー）；各１８pＭのプライマー、１０mＭのトリス−ＨＣｌ；５０mＭのＫＣｌ；および２mＭのＭgＣｌ₂（パーキン・エルマー）からなる。ＰＣＲの条件は以下のとおりである：サイクル１は４２℃、１５分間ついで９７℃、１５秒間（１サイクル）；サイクル２は９５℃１分間、６０℃１分間ついで７２℃３０秒間（１５サイクル）；サイクル３は９５℃１分間、６０℃１分間ついで７２℃１分間（１０サイクル）；サイクル４は９５℃１分間、６０℃１分間ついで７２℃２分間（８サイクル）；サイクル５は７２℃１５分間（１サイクル）；ついで最終サイクルはサンプルを機械から取り出すまで４℃で維持する。その５０μlのＰＣＲ産物は減圧遠心によって１０μlまで濃縮し、ついで全サンプルをエチジウムブロミドを含む薄い１.２％のトリス−ホウ酸−ＥＤＴＡアガロースゲル上にて流す。１.２ kbのバンドがゲノムＤＮＡが増幅されたことを示し、そのことは前立腺癌転移の指標とはならない。しかしながら、幾分バンドが小さく、５６７塩基対産物であるならば、それは該ＰＳＲのmＲＮＡがＰＣＲによって増幅され、前立腺以外の細胞は積極的に転写しているＰＳＲタンパク質であり、血中を循環している、すなわち転移していることを示す。すべての標本を少なくとも２回、正または負の結果を確認するために分析する。ＰＣＲ産物のヌクレオチド配列の証明が微小シークエンシングによって行われる。該ＰＣＲ産物は製造者の記載通りにキアゲンＰＣＲピュアリフィケーションキット（Ｑiagen ＰＣＲＰroduct Ｐurification Ｋit）（キアゲン、チャッツワース（Ｃhatsworth）、カリフォルニア）で精製した。該ＰＣＲ産物の１μgをアプライドバイオシステムズ（Ａpplied Ｂiosystems）（フォスター（Ｆoster ）、カリフォルニア）によって記載されるようにパーキン−エルマー９６００ＰＣＲ機械においてＴaqダイデオキシ・ターミネーター・サイクル・シークエンシング・キット（Ｔaq ＤyeＤeoxy Ｔerminator Ｃycle sequencing Ｋit）を用いてＰＣＲシークエンシングを行った。そのシークエンシングされた産物を会社の記載通りにセントリーセップ・カラム（Ｃentri-Ｓep colums）（プリンストン・セパレーションズ（Ｐrinceton Ｓeparations）、アデルフィア（Ａdelphia）、ニュージャージー）を用いて精製している。ついでこの産物をマッキントッシュIIciコンピューターと統合したＡＢＩモデル３７３ＡＤＮＡシークエンシングシステム（アプライド・バイオシステムズ）で分析する。実施例２ＰＳＲの細菌による発現および精製ＰＳＲをコードするＤＮＡ配列、ＡＴＣＣ受託番号第７５９１３号は最初にプロセッシングされたタンパク質の５'配列（シグナルペプチド配列を差し引いたもの）および該ＰＳＲ遺伝子の３'側配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅する。ＰＳＲに対応するさらなるヌクレオチドにそれぞれ５'および３'配列を加える。その５'オリゴヌクレオチドプライマーは配列を有し、SalＩ制限酵素部位を含み、アミノ酸１０から出発するＰＳＲコーディングの２０ヌクレオチドが続く。その３'配列は、はＸbaＩ部位に相補的な配列を有し、ＰＳＲコーディング配列の２３ヌクレオチドが続く。細菌発現ベクターpＱＥ−９（キアゲンインク、９２５９イートンアベニュー、チャタスワース、カリフォルニア、９１３１１）の制限酵素部位に対応する。pＱＥ−９は抗生物質耐性(Ａmp')、細菌の複製起点（ori）、ＩＰＴＧ −調節可能なプロモーターオペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、６−Ｈis タグおよび制限酵素部位をコードする。ついでpＱＥ−９をＳal ＩおよびＸbaＩで消化する。その増幅した配列をpＱＥ−９にライゲーションし、ついでヒスチジンタグおよびＲＢＳをコードする配列とともにインフレームで挿入する。ついでそのライゲーション混合物をサンブルック（Ｓambrook，Ｊ.）ら・モレキュラークローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル（Ｍolecular Ｃｌoning：ＡＬaboratory Ｍanual）、コールド・スプリング・ラボラトリー・プレス（Ｃold Ｓpring Ｌaboratory Ｐress）、（１９８９））に記載の手順によって商標Ｍ１５／rep ４の下、キアゲンから入手可能である大腸菌株m１５／pＲＥＰ４を形質転換するのに使用する。Ｍ１５／rep４はプラスミドpＲＥＰ４の多数のコピーを含み、それはlacＩリプレッサーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋan'）を与える。形質転換体はＬＢプレートの上での増殖の能力により同定され、アンピシリン／カナマイシン耐性コロニーが選択される。プラスミドＤＮＡを単離し、ついで制限分析によって確認する。目的構築物を含むコロニーをＡmp（１００μg／ml）およびＫan（２５μg/ml）の両者を補ったＬＢ培地中で液体培養にて一夜（Ｏ／Ｎ）増殖させる。そのＯ／Ｎ培養物を１：１００から１：２５０の割合で大量培養を播取するのに使用する。その細胞を吸光度６００（Ｏ．Ｄ．⁶⁰⁰）で０.４から０.６の間に増殖させる。ついでＩＰＴＧ（「イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクトピラノシド」）を最終濃度１mＭに添加している。ＩＰＴＧはlacＩリプレッサーを不活性化し、Ｐ／Ｏを清浄化して遺伝子発現を増加させるのを誘導する。細胞をさらに３〜４時間増殖させる。ついで細胞を遠心によって採取する。その細胞ペレットを６モーラのグアニジンＨＣlのカオトロピック薬剤中で可溶化する。浄化後、可溶化したＰＳＲを６−Ｈisタグ（ホリウチ(Ｈochuli，Ｅ.)ら、Ｊ．Ｃhromatography ４１１：１７７−１８４（１９８４））を含むタンパク質によってしっかりと結合できるような条件で、ニッケル−キレートカラムの上でクロマトグラフィーによってこの溶液から精製している。ＰＳＲ（純度９０％）は６モーラのグアニジンＨＣl（pＨ５.０）中でカラムから溶出し、ついで復元のために３モーラーのグアニジンＨＣl、１００m Ｍのリン酸ナトリウム、１０nＭグルタチオン（還元した）および２mＭのグルタチオン（酸化した）で調整した。この溶液中で１２時間インキュベートした後、そのタンパク質を１０ｎＭのリン酸ナトリウムにて透析した。実施例３ＣＯＳ細胞内での組換えＰＳＲの発現発現プラスミド、ＰＳＲＨＡは以下を含むベクターpcＤＮＡＩ／Ａmp（インビトロゲン（Ｉnvitrogen）由来である：１）ＳＶ４０複製起点、２）アンピシリン耐性遺伝子、３）大腸菌複製起点、４）ポリリンカー領域、ＳＶ４０イントロンおよびポリアデニレーション部位が続くＣＭＶプロモーター。ＰＳＲ前駆体全体をコードするＤＮＡ断片および３'端にインフレームで融合するＨＡタグをそのベクターのポリリンカー領域にクローニングし、それゆえ、その組換えタンパク質発現をＣＭＶプロモーターの下で行う。そのＨＡタグは、以前に記載したように（ウィルソン（Ｉ.Ｗilson）、ニーマン（Ｈ．Ｎiman）、ハイテン（Ｒ．Ｈ eighten）、チェレンソン（Ａ．Ｃherenson）、コノリー（Ｍ．Ｃonnolly）およびラーナー（Ｒ．Ｌerner）、１９８４、Ｃell ３７、７６７）インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに一致する。ＨＡタグの我々の標的タンパク質への注入によりＨＡエピトープを認識する抗体を有する組換えタンパク質の検出を容易にする。そのプラスミドの構築策は以下に記載するとおりである：ＰＳＲ、ＡＴＣＣ受託番号第７５９１３号をコードするＤＮＡ配列を２つのプライマーを用いて元々の全長ＰＳＲに関してＰＣＲによって構築する：ＨindIII 部位を含み、続いて開始コドンから出発するＰＳＲコーディング配列の１９ヌクレオチドを含む、５'プライマーＨＡタグおよびＰＳＲコーディング配列の最終の１８ヌクレオチド（終止コドンハイブリダイゼーション含まない）に相補的な配列を含む、３'配列それゆえ、そのＰＣＲ産物はＨindIII部位およびインフレームで融合したＨＡタグが続くＰＳＲコーディング配列およびＸbaＩ部位を含む。そのＰＣＲ増幅したＤＮＡ断片およびベクターpcＤＮＡＩ／ＡmpをＨindIIIおよびＸbaＩ制限酵素で消化してライゲーションする。そのライゲーション混合物を大腸菌株ＳＵＲＥ（ストラタジーン・クローニング・システムズ（Ｓtratagene Ｃloning Ｓystems ）、ラ・ホラ、カリフォルニア）に形質転換して、その形質転換した培養物をアンピシリン培地プレートにプレーティングし、ついで耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを形質転換体から単離し、ついで正確な断片の存在のために制限分析によって試験する。組換えＰＳＲの発現のため、ＣＯＳ細胞をＤＥＡＥ− デキストラン法（サンブルック、フィリッチ（Ｅ．Ｆritsch）、マニアチス（Ｔ．Ｍaniatis）、モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル、コールド・スプリング・ラボラトリー・プレス、（１９８９））によって発現ベクターでトランスフェクションする。ＰＳＲＨＡタンパク質の発現を放射線標識および免疫沈降法（ハーロウ（Ｅ．Ｈarlow）、レーン（Ｄ．Ｌane）、アンチボディーズ：ア・ラボラトリー・マニュアル、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、（１９８８））により検出する。２日間のトランスフェクションの後、³⁵Ｓ−システインで８時間標識する。ついで培養培地を回収し、その細胞を界面活性剤（ＲＩＰＡバッファー（１５０mＭＮaＣl、１％ＮＰ −４０、０.１％ＳＤＳ、１％ＮＰ−４０、０.５％ＤＯＣ、５０mＭトリス、p Ｈ７.５）にて溶解する（ウィルソンら、上記、３７：７６７（１９８４））。細胞リゼイトおよび培養培地の両者をＨＡ特異的モノクローナル抗体で沈澱させる。沈澱したタンパク質を１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分析する。実施例４ヒト組織におけるＰＳＲの発現パターンヒト組織におけるＰＳＲの発現のレベルを調べるためノーザンブロット分析を行った。総細胞ＲＮＡサンプルをＲＮＡzol^TMＢシステム（バイオテックス・ラボラトリーズ・インク（Ｂiotecx Ｌaboratories，Ｉnc.）６０２３サウス・ループ・イースト（Ｓouth Ｌoop Ｅast）、ヒューストン、テキサス７７０３３）で単離した。特定の各ヒト組織から単離した総ＲＮＡの約１０μgを１％アガロースゲル上で分離し、ナイロンフィルターにブロットした（サンブルック、フリッチュおよびマニアチス、モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル、コールド・スプリング・ハーバー・プレス、（１９８９））。その標識反応は、５０ｎgのＤＮＡ断片とともにストラタジーンプライム-イットキット（Ｓtratagene Ｐrime-Ｉt kit）に従って行った。標識したＤＮＡをＳelect −Ｇ−５０カラムで精製した。（５プライム−３プライム、インク、ブルダー（Ｂoulder）、コロラド）。ついで、フィルターを放射性標識したＰＳＲ遺伝子の全長と０.５ＭＮaＰＯ₄、ｐＨ７.４および７％ＳＤＳ中で１,０００,０００cp m／mlで６５℃で一夜ハイブリダイズさせた。室温で２回洗浄した後、６０℃で０.５×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで２回洗浄し、ついでフィルターを増感紙で− ７０℃で一晩露光させた（表１参照）。先の教示から見て、本発明の多数の変更および変化が可能であることから、追記する請求の範囲内で、詳しく記載した以外に、本発明を行うことができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/50 ＴＧ０１Ｎ 33/50 33/53 Ｄ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者マイスナー，ポール・エスアメリカ合衆国20838メリーランド州バーネスビル、バーネスビル・ロード 18040番ピー・オー・ボックス306 (72)発明者ハドソン，ピーター・エルアメリカ合衆国20874メリーランド州ジャーマンタウン、ハイストリーム・ドライブ 19041番 (72)発明者ローゼン，クレイグ・エイアメリカ合衆国20882メリーランド州レイトンズビル、ローリング・ヒル・ロード 22400番

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）配列番号：２の推定アミノ酸配列を有するポリペプチド、または該ポリペプチドの断片、類似体または誘導体をコードするポリヌクレオチドおよび（ｂ）ＡＴＣＣ受託番号第７５９１３号に含まれるcＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチド、または該ポリペプチドの断片、類似体または誘導体をコードするポリヌクレオチドよりなる群から選択される単離したポリヌクレオチド。２．該ポリヌクレオチドがＤＮＡである請求項１のポリヌクレオチド。３．該ポリヌクレオチドがＲＮＡである請求項１のポリヌクレオチド。４．該ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡである請求項１のポリヌクレオチド。５．該ポリヌクレオチドが配列番号：２の推定アミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする請求項２のポリヌクレオチド。６．該ポリヌクレオチドがＡＴＣＣ受託番号第７５９１３号のcＤＮＡによってコードされるポリペプチドをコードする請求項２のポリヌクレオチド。７．該ポリヌクレオチドが配列番号：１に示されるコーディング配列を有する請求項１のポリヌクレオチド。８．該ポリヌクレオチドがＡＴＣＣ受託番号第７５９１３号として寄託されているコーディング配列を有する請求項１のポリヌクレオチド。９．配列番号：１に示されるポリヌクレオチド配列に少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む単離したポリヌクレオチド配列。１０．該ポリヌクレオチド配列がＤＮＡである請求項９に示す単離したポリヌクレオチド配列。１１．該ポリヌクレオチド配列がＲＮＡである請求項９の単離したポリヌクレオチド配列。１２．ストリンジェント条件下で請求項９のポリヌクレオチド配列とハイブリダイゼーションすることによってＡＴＣＣ受託番号第７５９１３号に含まれ、単離できるポリヌクレオチド配列に一致するポリヌクレオチド配列を含む単離したポリヌクレオチド配列。１３．少なくともＰＳＲポリペプチドの領域をコードするポリペプチドを含む単離したポリヌクレオチド配列。１４．請求項２のＤＮＡを含むベクター。１５．請求項１４のベクターで遺伝的に操作された宿主細胞。１６．請求項１５の宿主細胞から該ＤＮＡによってコードされるポリペプチドを発現することよりなるポリペプチドを産生する方法。１７．請求項１４のベクターで細胞を遺伝的に操作することよりなる、ポリペプチドを発現させることができる細胞を産生する方法。１８．請求項２のＤＮＡにハイブリダイズすることができ、ＰＳＲ活性を有するポリペプチドをコードする単離したＤＮＡ。１９．（ｉ）配列番号：２の推定アミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその断片、類似体および誘導体および（ii）ＡＴＣＣ受託番号第７５９１３号のcＤＮＡによってコードされるポリペプチド、および該ポリペプチドの断片、類似体および誘導体よりなる群から選択されるポリペプチド。２０．該ポリペプチドが配列番号：２の推定アミノ酸配列を有する請求項１９のポリペプチド。２１．請求項１９のポリペプチドに対する抗体。２２．請求項１９のポリペプチドに対するアンタゴニスト。２３．患者に請求項２２のアンタゴニストの治療学的に有効な量を投与することよりなるＰＳＲを抑制することを必要とする患者の処置方法。２４．請求項１９のポリペプチドをコードするＲＮＡの存在を前立腺以外の組織由来のサンプルから決定することよりなる宿主中の前立腺癌細胞の転移を診断する方法。２５．該サンプル中のポリペプチドの量が上昇することによって前立腺障害を確実にするため宿主由来のサンプル中に存在する請求項１９のポリペプチドの量を決定することよりなる宿主中の前立腺障害を決定する方法。２６．ＰＳＲを酸化還元反応が通常起こる条件下でスクリーニングされるべき化合物の存在下で同時に酸化および還元を経験する要素を組合せ、ついで該化合物が反応を抑制する能力を決定することよりなるＰＳポリペプチドに対するアンタゴニストを同定するための化合物をスクリーニングする方法。２７．前立腺以外の組織に由来する宿主由来のサンプル中に、請求項１９のポリペプチドのレベル上昇および請求項１９のポリペプチドをコードするＲＮＡの存在よりなる群の一員を検出することを含む、宿主中の前立腺の障害を検出する方法。