JPH10509723A

JPH10509723A - 免疫応答の調節

Info

Publication number: JPH10509723A
Application number: JP8517133A
Authority: JP
Inventors: トマスファーロン，ダグラス; ウォルターデンプセイ，ポール
Original assignee: ケンブリッジユニバーシティテクニカルサービシズリミティド
Priority date: 1994-12-06
Filing date: 1995-12-06
Publication date: 1998-09-22
Also published as: EP0797452A1; DE69526521D1; US6891027B2; AU709990B2; CA2207000A1; WO1996017625A1; EP0797452B1; AU4120496A; US20020102656A1; PT797452E; ATE216593T1; ES2176347T3; DE69526521T2; US6238670B1; DK0797452T3; GB9424631D0

Abstract

(57)【要約】抗原へのC3d 分子、又はCD21又はCD19のリガンドのカップリングは、個人へのその投与に基づいて、免疫原に対する免疫応答を変更する。C3d のためには、効果の大きさは、接合体に含まれるC3d 分子の数に依存する。便利には、C3d 分子又はCD21／CD19リガンドは、コード核酸からの発現により、たとえば核酸を含む宿主細胞を培養することにより製造され得る融合ポリペプチドにおける免疫原にカップリングされる。分子に関連する他の手段は、キャリヤー構造体上の表面上での化学的架橋及び同時発現を包含する。好ましい態様において、C3D 分子及び興味ある免疫原を含んで成る組成物の投与は、予防的に（誘発される免疫学的記憶により）又は治療的に使用され得る。その投与は、免疫原に対する抗体を高めるためである。Ｔ−細胞応答もまた、誘発され得る。

Description

【発明の詳細な説明】免疫応答の調節本発明は、免疫原の投与、及び免疫応答の調節、すなわち阻害又は増強に関する。抗原との初期遭遇は、免疫応答の最とも異なった相である。感作されたＴ細胞とは対照的に、感作されていないＴ細胞を活性化するための閾値は高く、そしてＢ細胞は突然変異誘発されていない、一般的に低い親和性抗原応答を発現する。これは、興味ある免疫原に対する免疫応答を生ぜしめるための、たとえば治療目的のための又は続く操作及び使用のための抗体を得るための必要性又は所望性が存在する場合、問題がある。補体系は、免疫応答の増強において主な役割を演じる。ほとんど20年前、Pepy s は、Ｃ３の消耗マウスが、羊赤血球細胞に対するそれらの免疫応答を、この抗原に対するそれらの抗体応答により測定される場合、低めたことを示した（１）。Ｃ３又はＣ４及びＣ２、すなわちＣ３を活性化する酵素を形成するタンパク質の遺伝的に決定された欠失に関するヒト、テンジクネズミ及びイヌの続く研究は、Ｃ３の活性化が一次免疫応答を増強する結論を確かめた（２）。Ｃ３は、他の生物学的分子への共有結合を仲介するチオエステルを含む血糖タンパク質である（３）。従来の又は他の経路の“Ｃ３コンバーターゼ”によるC3 b へのＣ３の活性化は、弱求核基、たとえば−OH又は炭水化物によるチオエステルの攻撃の接近性を可能にし、活性化反応のすぐ近くにおける標的のOH持持の分子へのエステル結合を通してのC3b の結合を引き起こす。次に、抗原とのC3b（又はタンパク質分解的に処理されたフラグメントiC3b及びC3dg）の複合体が、レセプターCR１，CR２及びCR３を結合する。二次リンパ系器官の一次卵胞及び胚中心における小胞樹状突起上のＣ３レセプターへの前記複合体の結合が、記憶Ｂリンパ球の増殖及び維持を促進することができる。抗原特異的Ｂリンパ球への前記複合体の結合は、抗原レセプター、すなわち膜免疫グロブリン（mIg ）へのCR２の架橋を引き起こす。CR２は、mIg に結合される場合、そのmIg を通して著しく約 100倍、増幅するＢリンパ球膜タンパク質に関連する。全体の反応における制限段階は、C3b の結合である。それは、従来の又は他の経路を通して補体系を活性化することができる抗原を必要とし、そしてそれはC3 b が共有結合することができる部位を有する。次に、興味ある免疫原が可溶性ペプチド及びタンパク質である場合、問題が生じる。なぜならば、それらは、C3b を効果的に結合しないし、又は他の経路の活性化因子である傾向もないからである。さらに、低い親和性の交差反応性IgM 抗体は、従来の経路を活性化するために十分な結合活性を有する一価タンパク質抗原を結合しない。それらの困難性は、たとえばＢ又はＴ細胞のためのエピトープとして定義された小さなペプチドにより免疫化する場合、及びDNA 免疫化に関して、特に関連している（４）。アジュバントが、実験動物、たとえばマウスを免疫化する場合、ペプチド及び非凝集タンパク質の免疫原性を高めるために使用され得るが、一般的に、それらのヒトへの投与は可能でもなく又は少なくとも、好ましくない。本発明は、免疫原に対する免疫応答を高める手段を提供する。さらに、免疫原性物質に対する免疫応答を阻害し、すなわち少なくとも減じることが所望される場合の環境が存在する。たとえば、治療抗体の投与に多くの興味が存在する。しかしながら、歴史的には、利用できる抗体は、ネズミモノクローナル抗体であった。人体はそのようなネズミ抗体を外来性物質として認識するので、免疫応答はそれらに対して高められ、血流からのそれらの急速なクリアランスをもたらす。非ヒト抗体を“人体適合する”多くの技法、及びそれらの外来性特徴を減じるための他の技法は、入手できるが、しかし、しばしばそれらを実施するために高度の作業者を必要とする。さらに、“人体適合化”に続いてさえ、免疫システムは、抗体が宿主イディオタイプと適合できない場合、抗−イディオタイプ応答を増強する。さらに、多くの他の外来性物質、すなわち種々の目的、たとえば治療のために及び“人体適合化”技法が利用できない個人に投与される非ヒト物質が存在する。当業者に良く知られている多くの例の１つは、心臓発作の患者に投与される“ 血餅−破壊性”薬物ストレプトキナーゼである。この酵素は細菌起源のものであり、そして免疫応答は受動体個人によりそれに対して増強される。さらに、本発明は、免疫原に対する免疫応答を阻害する手段を提供する。種々の観点において、本発明は、興味ある免疫原への補体Ｃ３フラグメントC3 d（CD21 のためのリガンド（CR２））のカップリングが免疫原に対する免疫応答の調節を可能にする驚くべき発見に基づいて見出された。その調節は、免疫原投与に対する抗体システムのレベルの上昇又は低下であり得る。完全に思いがけないことであるが、免疫応答が免疫原への多くのC3d 分子のカップリングにより増強され得、そして免疫原への１つのC3d 分子のカップリングにより低められ得ることが見出された。この観点においては、種々の観点における本発明は、CD21のためのリガンド、又はCD21はＢ細胞の表面上のCD19と関連しているので、CD19のためのリガンドと抗原とを関連づけることによる免疫応答の調節に関する。従って、本発明によれば、免疫原の免疫原性を変更するための方法が提供され、ここで前記方法は、CD21（CR２）又はCD19のためのリガンドに関連する（又は “カップリングされる”）免疫原を含んで成る組成物を形成することを含んで成る。好ましい態様においては、前記方法は、免疫原に１又は複数のC3d 分子をカップリングすることを含んで成る。カップリングされるC3d がモノマー性である場合、免疫原の免疫原性は減じられる。カップリングされるC3d がマルチマー、たとえばダイマーである場合、免疫原の免疫原性は高められる。高められた又は低められた免疫原性により、免疫原を受ける個人の免疫応答はそれぞれ、増強され、又は低められるであろう。免疫応答のレベルは、たとえば抗体レベルにより測定され得る。抗原及びリガンドの結合は、Ｂ細胞上の２つのレセプター、すなわち抗原に対して特異的な膜免疫グロブリン(mIg)及びCD21／CD19複合体を通してＢ細胞の応答が調節されるように存在することができる。好ましくは、Ｂ細胞における応答は刺激されるが、しかしたとえば論ぜられるように、一定の環境下で、Ｂ細胞における応答は阻害され得る。mIg 及びCD21／CD19複合体を通してＢ細胞応答を調節する能力を評価するための実験アッセイが本明細書に記載される。たとえば、本発明を用いての抗原−特異的Ｂ細胞の刺激に基づいての（抗原のみによる刺激に比較して）細胞内カルシウム濃度の上昇は、組成物がmIg 及びCD21／CD19を通してＢ細胞を刺激するインジケーターとして使用され得る。本明細書に記載される実験作業は、免疫応答におけるＴ−細胞関与の証拠を包含する。タンパク質抗原に対するＢ−細胞応答は、Ｔ−細胞依存性である。さらに、Ｔ−細胞依存性応答は、記憶を進展せず；記憶は本明細書に例示されている。また、イソタイプ切替えは、Ｔ−細胞依存性Ｂ−細胞応答の特徴である。第２の観点において、本発明は、CD21（CR２）又はCD19のためのリガンドに関連する（又はそれに“カップリングされる”）抗原／免疫原を含んで成る組成物を提供する。そのような組成物は、１又は複数のC3d 分子に結合される、抗原又は免疫原を含んで成る分子（接合体）を含むことができる。多くのC3d 分子が抗原に連結される場合、本明細書に例示されるように、２又は３個の分子を用いることが好ましい。下記に記載される実験証拠は、C3d 分子の数の上昇と共に効果の上昇を示すので、環境に依存して、より多くの数、たとえば４又は５、もしくはそれ以上の分子を用いることが好ましい。 C3d へのカップリングの好ましい手段はペプチド結合によるので、接合体は隣接するポリペプチド、すなわち融合タンパク質であり得る。本発明の融合タンパク質においては、異なったペプチド又はポリペプチドが隣接するポリペプチドを形成するためにお互い整合して連結される。従って、融合タンパク質の第１の部分は、抗原又は免疫原を含んで成り、そして融合タンパク質の第２の部分、すなわち前記第１の部分側のＮ−末端又はＣ−末端はCD21又はCD19リガンドを含んで成る。抗原はC3d 分子又は反復体のアミノ末端側に連結されることが好ましい。 CD21又はCD19リガンドが抗体フラグメント、たとえば一本鎖Fv分子（scFv）である場合、融合はその結合能力の要求を回避するためにscFv分子のＣ−末端側で存在することが好ましい。柔軟リンカー配列(たとえば、ポリグリシン／ポリセリン−含有配列、たとえば〔Gly₄Ser〕₂(Hustonなど（1991）Meth．Enzymol．203：46-88))は、抗原とリガンドとの間の融合タンパク質中に挿入され得る。また、融合タンパク質は“エピトープ標識”を含むように構成され得、これは、たとえばラベリング又は精製目的のために抗体（たとえばモノクローナル抗体）の融合タンパク質への結合を可能にする。エピトープ標識の例は、モノクローナル抗体YL１／２により認識されるGlu−Glu −Phe トリペプチドである。便利には、免疫原がペプチド又はポリペプチドである場合、免疫原をコードする核酸は、リガンド、たとえばC3d、すなわち単一のC3d 分子又は反復体をコードする核酸に融合され得る。従って、本発明のさらなる観点は、興味ある抗原／免疫原をコードするヌクレオチドの配列に融合される、CD21又はCD19（たとえばC3d）のリガンドをコードするヌクレオチドの配列を含んで成る核酸構造体を提供する。好ましくは、その核酸構造体は、融合の発現のための適切なプロモーターを含んで成る発現ベクターである。種々の異なった宿主細胞におけるポリペプチドのクローニング及び発現のためのシステムは良く知られている。適切な宿主細胞は、細菌、哺乳類細胞、酵母及びバキュロウィルス系を包含する。非相同ポリペプチドの発現のための当業界において入手できる哺乳類細胞系は、チャイニーズハムスター卵巣細胞、HeLa細胞、子供ハムスター腎臓細胞及び多くの他のものを包含する。通常の好ましい細菌宿主は、Ｅ．コリである。適切な調節配列、たとえばプロモーター配列、ターミネーターフラグメント、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子及び適切な場合、他の配列を含む適切なベクターが選択され、又は構成され得る。さらなる詳細のためには、たとえば、Molecular Cloning：A Laboratory Manual：第２版、Sambrook など.，1989，Cold Spring Harbor Laboratory Pressor Current Protocols in Molecular Biology，eds．Ausubelなど.，John Wiley & Sons，1992を参照のこと。形質転換法は、使用される宿主に依存しており、そして良く知られている。本発明のさらなる観点は、上記に開示されるような核酸構造体を含んで成る宿主細胞を提供する。さらに追加の観点は、CD21又はCD19のリガンド、好ましくは１又は複数のC3d 分子、及び他の（非相同）ポリペプチド又はペプチドを含んで成るポリペプチド融合体を製造するための方法を提供し、ここで前記方法は、ポリペプチド融合体をコードするヌクレオチドの配列を含んで成る核酸構造体を含んで成る宿主細胞を、ポリペプチド融合体の発現のための条件下で培養することを含んで成る。発現に続いて、細胞からの、又は細胞により分泌される場合、培養培地からのポリペプチド融合体の単離が行なわれ得る。本発明に使用するための核酸は、DNA 又はRNA であり、そして一本鎖又は二本鎖のcDNA、ゲノムDNA 又は完全に又は一部合成のものであり得る。二本鎖DNA が好ましい。マウスC3d のヌクレオチド配列及び予測されるアミノ酸配列は、Domdeyなど．（1982）PNAS USA 79：7619-7623及びFey など．（1983）Ann．N．Y．Acad．Sci ．421：307-312）に開示される。ヒトC3d のためのヌクレオチド配列及び予測されるアミノ酸配列は、de Bruijn and Fey（1985）PNAS USA 82：708-712に開示される。他の種からのC3d をコードする核酸は、標準のハイブリダイゼーション方法への使用のための１又は複数のプローブを調製するためにヒト又はマウス配列情報を用いて単離され得る。C3d が本発明において使用され、そして対象に投与される場合、そのC3d は免疫化される種に適合され得る（たとえばマウスにおいて使用されるマウスC3d、ヒトにおいて使用されるヒトC3d、及び同様の通り）。しかしながら、少なくともマウスとヒトとの間での種交差−反応性を例示する実験的な証拠が本明細書に包含されており（たとえば、マウスC3 d はヒト細胞、たとえばヒトRaji Ｂリンパ幼若細胞上のCD21に結合する）、その結果、C3d 及び対象の種適合は、好ましい場合でさえ、必須ではない。融合タンパク質としての発現による抗原／免疫原及びCD21又はCD19リガンドのカップリングに関するもう１つの態様においては、化学的な架橋が用いられ得る。“化学的に架橋される”とは、化学的な架橋剤の使用を通しての共有結合を意味する。抗原及びリガンド上の官能基（たとえばアミノ酸側鎖、又はペプチド鎖のアミノ−又はカルボキシ末端）と反応する化学的架橋剤が選択され、そのような結果、架橋剤との反応に基づいて、抗原及びリガンドは共有結合されるようになる。さらに、架橋剤は、抗原及びリガンドがそれぞれmIg 及びCD21／CD19複合体と相互作用することができるようにそれらを適切に配置するよう作用するスペーサー分子を含むことができる。広範囲の種類の二官能価又は多官能価架橋剤（ホモ−及びヘテロ官能価）は、当業界において知られており、そして市販されている(たとえば、Pierce Chemic al Co.，Rockford，IL)。そのような架橋剤は、標準の方法（たとえば製造業者の指針に従って）により抗原及びリガンドと反応せしめられ得る。架橋に続いて、抗原−リガンド複合体は、標準の方法（たとえばクロマトグラフィー、SDS−P AGE及び同様のもの）により未反応抗原及びリガンドから精製され得る。Ｂ細胞における細胞内シグナル（たとえば、高められた細胞内カルシウム濃度）を刺激することにおける、及び／又は免疫応答を調節することにおける化学的に架橋された組成物の効能は、たとえば本明細書に記載されるようなアッセイを用いて評価され得る。化学的に架橋された組成物への使用のためのリガンドは、開示される通りである。好ましいリガンドは、１又は複数のC3d 分子である。化学的に架橋された組成物への使用のためのC3d は、組換えC3d(たとえば、コードする核酸からの発現により調製された)、又は精製された天然のC3d であり得る。たとえば、Ｃ３は血漿（たとえばヒト血漿）から精製され得、そしてC3 d は、Lambris，J．D.など．（1980）J．Exp．Med．152：1625に記載されるようにして消化によりそれから調製され得る。もう１つの態様においては、抗原及びリガンドが、キャリヤー構造体の表面上で同時発現され得る（すなわち、両者が存在できる）。好ましくは、抗原及びリガンドは、キャリヤー構造体の表面上で同時発現され、その結果、Ｂ細胞との接触に基づいて、前記抗原はＢ細胞の表面上の抗原に対して特異的な膜免疫グロブリン（mIg）と相互反応することができ、そしてリガンドはＢ細胞の表面上のCD2 1／CD19複合体と相互反応することができる。抗原及びリガンドの同時発現のために使用されるキャリヤー構造体は、リポソーム（又はそれらの表面上に物質を担持することができる類似する小胞タイプの構造体、たとえば微小球、ポリアクリルスターチ微粒子、微小カプセル及び同様のもの）であり得る。抗原及びリガンドは、標準の方法によりリポソーム又は他のキャリヤー小胞の表面に共有結合され得る。詳しくは、Jones，M．N．（1995 ）Adv．Colloid．Interface Sci．54：93-128を参照のこと。また、たとえばHea th，T．D.など．（1980）Biochim．Biophys．Acta．599：42-62；Heath，T．D． and Martin，F．J．（1986）Chem．Phys．Lipids 40：347-358；Hutchinson，F ．J.，など．（1989）Biochim．Biophys．Acta．978：17-24；Therien，H．M．など．（1991）Cell．Immunol．136：402-413；Freide，M.，など.，（1993）An al．Biochem．211：117-122を参照のこと。抗原に対する免疫応答の刺激のためには、抗原及びリガンドのためのキャリヤー構造体としてのリポソーム又はポリアクリルスターチ微粒子の使用は、リポソーム又は微粒子自体がアジュバント活性を有する（又は追加のアジュバント、たとえばモノホスホリルアジュバント脂質Ａを担持することができる）追加の利点を有することができる。詳細には、Alving，C．R．（1995）Immunol．Rev．145：5-31 を参照のこと。また、たとえば、Raphael，L．and Tom，B．H．（1984）Clin．Exp． Immunol．55：1-13；Artursson，P.,など．（1986）J．Pharm．Sci．75：697-70 1；Degling，L．and Stjaernkvist，P．（1995）Vaccine 13：629-636；Lachman ，L．B.，など（1995）AIDS Res．Hum．Retrovirus．11：921-932 を参照のこと。免疫応答を刺激するための好ましいリポソーム配合物は、脂質Ａを含み、そして抗原、及びリポソームの表面に結合されるCD21又はCD19リガンドを有するみょうばん−吸着性リポソームを含んで成る。キャリヤー構造体は細胞であり得る。たとえば、細胞は、抗原及びリガンドの膜結合形をコードする組換え発現ベクターによりトランスフェクトされ、その結果、細胞中のベクターの発現が抗原及びリガンドの細胞表面発現を導びく。抗原の表面発現は、たとえば標準の組換えDNA 技法を用いて、抗原をコードするDNA の５’端にシグナル配列をコードするDNA フラグメントを連結し（抗原自体がシグナル配列を含まない場合）、そして抗原をコードするDNA の３’端にトランスメンブランドメインをコードするDNA フラグメントを連結する（抗原自体がトランスメンブランドメインを含まない場合）ことにより達成され得る。リガンドは、そのリガンドの細胞表面発現を達成するために同様にして変性され得る。抗原及びリガンドの高レベルの発現は、Ｂ細胞上にmIg 及びCD21／CD19の両者の架橋を達成するために必要である。従って、強い調節要素（たとえば１又は複数の強いエンハンサー）を用いる組換え発現ベクターは、キャリヤー細胞の表面上での抗原及びリガンドの発現のために好ましい。キャリヤー構造体は、たとえばウィルスの膜において又は表面上で、HBsAg 粒子上で及び同様のもの上で、投与のためのいづれかのワクチン又は生物学的粒子であり得る。抗原／免疫原、及びCD21又はCD19のためのリガンドの同時発現は、ウィルスゲノム中への適切な核酸の導入を従えることができる。キャリヤー構造体は、固体支持体、たとえばビーズ（たとえば、アガロース、セファロース、ポリスチレン及び同様のもの）、又はプレートであり得る。抗原及びCD21又はCD19リガンドは、標準の技法により固体支持体に結合され得る。たとえば、化学的架橋剤、たとえば本明細書に記載されるものは、固体支持体に抗原及びリガンドを共有結合するために使用され得る。本発明の組成物、たとえば(C3d)_n−抗原接合体の投与は、受容体個人の免疫応答を調節する。従って、本発明のさらなる観点は、興味ある抗原／免疫原に対する個人の免疫応答を調節するための方法を提供し、ここで前記方法は、CD21又は CD19のリガンドに関連される抗原／免疫原を含んで成る組成物、たとえば、開示されるように、１又は複数のC3d 分子に結合される抗原／免疫原を含んで成る分子の投与を含んで成る。免疫応答の強化、増強又は増加は、免疫原に多くのC3d 分子をカップリングすることにより達成され得る。免疫応答の阻害、縮小又は低下は、１つのC3d 分子のカップリングにより達成され得る。その投与は、予防目的（“ワクチン接種”、たとえば抗微生物性）又はたとえば免疫療法（たとえば抗微生物又は抗腫瘍性）における治療目的のためである。ワクチン接種は、抗原に対して対象の保護免疫性を付与するために使用され得る。ペプチド又はポリペプチドの場合、接合体を投与する代わり、融合体をコードするDNA が、既知の技法に従って投与され得る（４，５，６）。これは特に、CT L 応答の刺激のために好都合である（下記を参照のこと）。なぜならば、CD8⁺Ｔ細胞、たとえばCTL を刺激するMHC クラスＩ分子による抗原発現を促進することが知られている融合体が対象の細胞において細胞内に発現されるからである。DN A は、たとえばDNA の直接的な筋肉内注入、又はDNA−カチオン性脂質配合物の投与により投与され得る（たとえば、Cohen．J．（1993）Science 259：1691-16 92；Yenkauekas，M．A.，など．（1993）DNA Cell Biol．12：771-776；Boots， A．M.,など．（1992）Vaccine 10：119-124；Conry，R．M.，など．（1994）Can cer Res．54：1164-1168；Montgomery，D．L.,など．（1993）DNA Cell．Biol．12 ：777-783；Wang．B.，など．（1993）DNA Cell Biol．12：799-805；San，H. ，など．（1993）Ham．Gene Ther．4：781-788；Felgner，J．H.,など．（1994 ）J．Biol．Chem．269：2550-2561；Duzgunes，N．and Felgner，J．H．（1993 ）Methods Enzymol．221：303-306；Jiao，S.，など．（1992）Exp．Neurol．11 5 ：400-413を参照のこと）。免疫原に対する抗体を生ぜしめることを包含する、そのような投与の適用は上記で論じられる。さらなる観点において、本発明は、開示されるように、多くの C3d 分子に結合される、CD21又はCD19のリガンドに関連する抗原／免疫原の哺乳類への投与を包含する、興味ある抗原／免疫原に対する抗体応答（抗体を含む）を生ぜしめる方法を提供する。一般的に、前記哺乳類は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ヤギ、羊又はサルであり得る。投与の目的は、治療目的であり、又はたとえば組換え技法、たとえばモノクローナル抗体技法及び／又はバクテリオファージ表示法（たとえば、WO92/0 1047を参照のこと）を用いて、後での使用／操作のために抗体を生ぜしめることであり得る。哺乳類からの抗体及び／又は抗体産生細胞の単離は、動物の殺害の段階を伴なう。本発明によれば、インビトロ、たとえば培養物における抗体産生が刺激され得る。たとえば、興味ある抗原に対して特異的なＢ細胞が、本発明の刺激性組成物と共に培養され、興味ある抗原に対する抗体のＢ細胞による生成が刺激される。生成される抗体は、たとえば抗原についてのそれらの結合能力により培養培地から単離され得る。投与は、たとえば抗−微生物（抗−ウィルスを包含する）及び抗−癌免疫療法において、免疫原に対するＴ−細胞応答を調節するために実施され得る。本発明の組成物の投与に対する免疫応答におけるＴ−細胞関与の証拠が上記で論じられる。Ｂ細胞活性化を助ける、Ｔ−ヘルパー細胞の刺激は、細胞毒性Ｔ細胞(CTL) の増殖を促進することができる。従って、腫瘍マーカーのエピトープがCD21又は CD19リガンド、たとえば多くのC3d 分子に結合され、そして前記エピトープを発現する腫瘍を有する個人に投与される場合、その投与に起因するエピトープに対する増強された免疫応答が腫瘍に対する治療的に有益な効果を有する。また、CT LはIFN−γを分泌し、これがTH１バイアスを付与するので、その投与はアレルギーのために使用され得る。さらなる観点において、本発明は、開示されるように、CD21又はCD19のリガンドと関連する抗原／免疫原、たとえば(C3d)_n−免疫原接合体を含んで成る医薬組成物を供給する。本発明の医薬組成物は、CD21又はCD19に関連する抗原／免疫原、たとえば(C3d )_n−免疫原接合体の他に、医薬的に許容できる賦形剤、キャリヤー、ビークル、緩衝液、安定剤又は当業者に良く知られている他の材料を含むことができる。そのような材料は、非毒性であるべきであり、そして活性成分の効能を妨げるべきではない。キャリヤー又は他の材料の正確な性質は、投与路に依存し、この投与路は好ましくは、皮膚、皮下又は静脈内注射、特に皮下注射であろう。非経口、静脈内、皮膚又は皮下注射のためには、活性成分は発熱物質を含まず、そして適切なpH、等張性及び安定性を有する非経口的に許容できる水溶液の形で存在するであろう。当業者は、たとえば等張ビークル、たとえば塩化ナトリウム注射剤、リンガー注射剤、乳酸化されたリンガー注射剤を用いて適切な溶液を調製することができる。保存剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤及び／又は他の添加剤が、必要な場合、含まれ得る。皮下注射は、好ましい投与路であり得る。本発明の医薬組成物は、１又は複数の追加の活性成分を含むことができる。たとえば、前記組成物は、免疫調節性質を有する追加の剤、たとえばサイトキン又は（追加の）アジュバントを含むことができる。本発明のさらなる観点は、免疫原に対する個人の免疫応答を調節するために個人への投与のための組成物又は医薬の製造への、CD21又はCD19リガンドに関連する抗原／免疫原、たとえば(C3D)_n−免疫原（開示されるような）の使用を提供する。この投与の目的は、論じられたように、抗体を得るためである。本発明は広範囲の種類の抗原に適用できる。好ましい態様においては、抗原は、タンパク質株物質、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドである。もう１つの態様において、抗原はDNA である。抗原は脂質でもあり得る。それは炭水化物でもあり得る。好ましい抗原は、病原体（たとえば、ウィルス、細菌、寄生体）及び腫瘍（特に、腫瘍関連抗原又は“腫瘍マーカー”）からのものを包含する。他の好ましい抗原は自己抗原である。腫瘍関連抗原の例は、癌胎児性抗原（CEA）、前立腺特異的抗原（PSA），muc−１（Agrawallなど．（1995）Cancer Res．55：2257-226 1），MART-１（Kawakamiなど（1994）J．Exp．Med．180：347-352）、及びgp100 （Ademaなど（1994）J．Biol．Chem．269：20126-20133）を包含する。ウィルス抗原の例は、ヘルペス単純ウィルス−１タンパク質、たとえばgB，gC，gD，gEW ，gG，gH，gI，gK，gL，Vmw65，ICPO及びIcp4、ミクソウィルスの赤血球凝集素（たとえばインフルエンザ、おたふくかぜ又は麻疹）及びヒト免疫欠損ウィルスのgp120 を包含する。本明細書に言及されるような“C3d”は、変異体、誘導体又はそのフラグメント（たとえば１又は複数のアミノ酸の付加、挿入、置換又は欠失による）であり得るが、但し、免疫原性／免疫応答を増強し、又は減じる能力が保持されるべきであることを注目すること。たとえば、CD21を結合する能力を保持し、そしてCD 21／CD19複合体を通してＢ細胞を刺激するC3d の一部が使用され得る。Ｃ３上の CD21結合部位は、Ｃ３配列のアミノ酸残基1205−1214に地図により示されており (Lambrisなど．（1985）PNAS USA 82：4235)、そしてアミノ酸残基1201−1214又は1187−1214を含んで成る合成Ｃ３ペプチドはCD21を結合することが示されている（Servis and Lambris（1989）J．Immunol．142：2207）。類似するペプチド又は他のCD21−結合Ｃ３ペプチドが、本発明において使用され得る。 C3d は、それが内部チオエステルを含まないように変性され得る。たとえば、チオエステルの形成に関与される、C3d のCys₁₀₂₉が標準の方法によりSer に変異誘発され得る。 C3d の代わりに、他のCD21又はCD19リガンド、たとえば１又は複数のiC3b分子、１又は複数のC3dg分子、抗体又は抗原−結合フラグメント又はその一部（CD21又はCD19に対して特異的に結合する）が使用され得る。C3d に比較して、iC3b及びC3dgサブフラグメントはトリプシン消化に対してより敏感であり、その結果、C3d が、iC3d又はC3dgに比較して、インビボでの使用のために好ましい。しかしながら、トリプシン消化部位が変異誘発され、その結果、iC3d又はC3dgのフラグメントがタンパク質分解性消化に対してより耐性である、iC3d又はC3dgの変性された形が、インビボでの使用のためにより好ましい。抗体又はそのフラグメント又は誘導体が使用される場合、それは、CD21又はCD 19を結合する能力を保持する態様で抗原又は免疫原に結合され得る（たとえば融合され得る）。これは、抗体のＨ又はＬ鎖の不変領域との融合によるものである。一本鎖Fv（scFv）抗体フラグメントのＣ−末端での融合は、scFvの結合能力を妨害しないことが示されている。抗体は多くの手段で変性され得るので、用語“ 抗体”とは、必要とされる特異性を含む結合ドメインを有するいづれの特異的結合物質でも包含するように構成されるべきである。従って、この用語は、抗体フラグメント、誘導体、機能的同等物及び抗体の相同体、たとえば免疫グロブリン結合ドメインを含んで成るいづれかのポリペプチド（天然又は合成）を包含する。従って、他のポリペプチドに融合される、免疫グロブリン結合ドメイン又は同等物を含んで成るキメラ性分子が包含される。キメラ性抗体のクローニング及び発現は、EP−Ａ−0120694 及びEP−Ａ−0125023 に記載される。完全な抗体のフラグメントが結合抗原の機能を実施できることが示されている。結合フラグメントの例は、（ｉ）VL，VH，CL及びCH１ドメインから成るFab フラグメント；（ii）VH及びCH１ドメインから成るFdフラグメント；（iii）単一抗体のVL及びVHドメインから成るFvフラグメント；（iv）VHドメインから成るdAB フラグメント（Ward，E．S ．など.，Nature 341，544-546（1989）；（ｖ）単離されたCDR 領域；（vi）Ｆ (ab')₂フラグメント、すなわち２種の連結されたFab フラグメントを含んで成る二価フラグメント；（vii）一本鎖Fv分子（scFv）、ここでVHドメイン及びVLドメインが、抗原結合部位を形成するために２種のドメインの会合を可能にするペプチドリンカーにより連結されている（Birdなど.，Science，242，423-426，19 88；Hustonなど.，PNAS USA，85，5879-5883，1988）；（viii）二特異的一本鎖 Fvダイマー（PCT/US92/09965）；及び（ix）“ジアボディーズ（diabodies）” 、すなわち遺伝子融合により構成された多価又は多特異的フラグメント（WO94/1 3604；P．Holligerなど.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90，6444-6448，1993）である。 CD21に対する抗体は、記載されており、そして当業界において入手できる（たとえば、OKB7，Ortho Pharmaceuticals，Raritan，NJ，USA；及びHB-５，Americ an Type Culture Collection，Rockville，MD，USA，No HB135）。CD19に対する抗体した当業界において入手できる（たとえば、Certerなど（1991）J．Immunol ．147：3663-3671；及びHolderなど（1992）Eur．J．Immunol．22：2725-2728）。興味ある標的に対して特異的である抗体が、当業界において標準である技術を用いて得られる。抗体を生成する方法は、タンパク質又はそのフラグメント、又は前記タンパク質又はフラグメントを発現する細胞又はウィルスにより哺乳類（たとえば、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、ヤギ、羊又はサル）を免疫化することを包含する。標的ポリペプチドをコードするDNA による免疫化もまた可能である。抗体は当業界において知られている種々の技法のいづれかを用いて、免疫化された動物から得られ、そして好ましくは、興味ある抗原に対する抗体の結合性を用いてスクリーンされ得る。たとえば、ウェスターンブロット技法又は免疫沈殿法が使用され得る(Armitageなど.，1992，Nature 357：80-82)。哺乳類を免疫化する他の方法又は補足として、抗体が、たとえばそれらの表面上に機能的免疫グロブリン結合ドメインを示すλバクテリオファージ又は繊維状バクテリオファージを用いて、発現された免疫グロブリン可変ドメインの組換え的に生成されたライブラリーから得られる；たとえばWO92/01047を参照のこと。ライブラリーは、純粋であり、すなわち標的により免疫化されていない生物から得られた配列から構成され得、又は興味ある抗原（又はそのフラグメント）に暴露された生物から得られる配列を用いて構成されたものであり得る。元の抗体の特異性を保持する他の抗体又はキメラ性分子を生成するために、抗体を採取し、そして組換えDNA 技術の技法を用いることが可能である。そのような技法は、異なった免疫グロブリンの不変領域、又は不変領域＋骨格領域に、抗体の免疫グロブリン可変領域又は相補的決定領域（CDRs）をコードするDNA を導入することを包含する。たとえば、EP−Ａ−184187，GB2188638A又はEP−Ａ−23 9400を参照のこと。モノクローナル抗体を生成するハイブリドーマは、生成される抗体の結合特異性を変更することができても又はできなくても良い遺伝子突然変異又は他の変化を受けやすい。抗体がヒト治療に使用される場合、それらの抗体の免疫原性応答を最少にしながら、非ヒト抗体の抗原結合性質を有する抗体を供給するために非ヒト（たとえばネズミ）抗体を“ヒト適合化する”ことが所望される。従って、ヒト適合化された抗体は、ヒト適合化された抗体は、ヒト免疫グロブリンに由来する骨格領域（受容体抗体）を含んで成り、ここで１又は複数の相補的決定領域(CDR's)からの残基が所望する性質、たとえば特異性、親和性又は能力を有する、非ヒト種（ドナー抗体）、たとえばマウス、ラット又はウサギ抗体のCDR'sからの残基により置換されている。ヒト抗体の骨格残基のいくつかがまた、対応する非ヒト残基により、又はドナー又は受容体抗体のいづれにも存在しない残基により置換され得る。それらの変性は、追加の精製に向けられ、そして抗体の性質を最適化する。いわゆる“ファージ表示”はまた、抗体のヒト適合化にも使用され得る；たとえばWO93/06213を参照のこと。本発明は、天然に存在する抗原／免疫原の複合体及び補体の他の経路が活性化される場合に生成されるＣ３フラグメントをカバーすることを意図せず、そしてＣ３フラグメントは、Ｃ３の内部チオエステル結合を通しての反応により抗原上に付着される。従って、本発明の組成物において、CD21（CR２）又はCD19のためのリガンドと抗原／免疫原との会合は、前記抗原／免疫原が補体Ｃ３フラグメントの内部チオエステルに由来するエステル結合を通してその補体Ｃ３フラグメントにより会合されない条件を有する。（チオエステル残基を形成するシステイン残基がジスルフィド架橋を通して化学的架橋に使用され得るが、これはエステル結合ではない。）本発明のさらなる観点及び態様が、当業者に明らかになるであろう。本発明の態様は、例により例示されるであろう。本明細書に言及されるすべての文書は引用により本明細書に組込まれる。図１は、鶏卵リゾチーム−C3d 組換えタンパク質の構造の図による表示である。HEL，HEL−C3d，HEL−C3d₂及び HEL−C3d₃タンパク質のモデルは、カセットのドメイン間に連結配列を示す。アミノ酸残基のための略語は次の通りである：Ｃ，Cys；Ｅ，Gly；Ｆ，Ph e；Ｇ，Gly；及びＳ，Ser。BamHＩ及びBglII制限部位の連結は、HEL，C3d及び〔 Gly₄Ser〕₂配列を端に有するGly Ser リンカー（14）を生成する。また、Ser へのCys₁₀₂₈の突然変異が示される。個々の構造体は、モノクローナル抗体YL 1／2 により認識されるGlu Glu Phe トリペプチドで終結する。図２は、精製された鶏卵リゾチーム−C3d 組換えタンパク質の還元条件下で行なわれた５〜20％ SDS−ポリアクリルアミドゲルを示す。分子サイズの標準は、キロドルトンで左側に示される。図３は、Raji細胞の〔¹²⁵Ｉ〕HEL-C3d₂結合の阻害を示す。（□−HEL．C3d； ○−HEL．C3d₂；△−HEL．C3d₃；■IgGl；●インヒビターなし；▲CR２）。図４は、CFA における組換え抗原に対するIgGl応答を示す。HEL(正方形)、HEL −C3d(丸)及び HEL−C3d₂（三角）の組換え抗原を希釈し、0.05mlのPBS 中、500 ｐモル（パネルＡ）、50ｐモル（パネルＢ）又は５ｐモル（パネルＣ）の最終濃度にした。抗原を同体積の完全フロイントアジュバントにより乳化し、そしてそのエマルジョン 0.1mlを、生後４〜６週の雄の CBA／caマウス（Harlan U.K.）のグループの腹腔内に注射した。対照のマウスは、PBS のみにより乳化されたCF A を受けた（ひし形）。マウスから、７日間隔で連続的に採血した。すべてのグループの動物は、同体積の不完全フロイントアジュバントにより56日目（矢印）に乳化された、PBS 0.5ml 中、50ｐモルのHEL を受けた。HEL 特異的応答を、記載のようにして、ELISA により決定した。結果は、５匹の動物のグループの平均 ±１s．d．を示す。図５は、塩溶液における皮下組換え抗原に対するIgGl応答を示す。HE（正方形）、HEL-C3d(丸)及び HEL−C3d₂（三角）の抗原をPBS に希釈し、0.1mlのPBS 中、7000ｐモル（パネルＡ）、700ｐモル（パルＢ）又は70ｐモル（パネルＣ）の最終濃度にした。抗原を、生後４〜６週の雄の CBA／ｃマウスの右後部の側腹部に皮下注射した。対照のマウスは、 PBS のみを受けた（ひし形）。マウスから、７日の間隔で連続的に採血した。すべてのグループは、77日目（矢印）、同体積の不完全フロイントアジュバントにより乳化された、PBS 0.05ml中、50ｐモルのHEL を受けた。HEL 特異的応答を制限希釈ELISA により決定し、それにより、最後の２倍の一連の希釈溶液はＡ₅₇₀ ＞２s．d．を有し、これは比力価として取られる場合、非免疫血清の吸光度よりも高かった。結果は、４匹（700 ｐモルのHEL−C3d）又は５匹（すべての他のグループ）の動物の平均±１s．d．を示す。図６は、HEL−C3D₂に対する応答の7G6 抗−CR２による抑制を示す。生後４〜６週の雄の CBA／ｃマウスに、0.2mgの7g6(黒丸)又は対照のIgG2b(正方形及び丸 )を静脈内注射した。24時間後、マウスは0.1mlのPBS(丸)中、又は0.05mlのPBS( 正方形)中、７ｐモルの HEL−C3d₂を左後部の側腹部に皮下注射した。マウスから、７日めの間隔で連続的に採血し、そしてHEL 特異的応答を、記載のようにしてELISA により決定し、結果は３匹のマウスのグループの平均を示す。図７は、HEL−特異的Ｂ細胞における〔Ca²⁺〕ｉの上昇の組換えHEL 及び HEL −C3dl−３による刺激を示す。HEL に対して特異的なmIgM及びmIgDを発現するＢ細胞を有するトランスジェニックマウスからの脾臓リンパ球を、indo−１により負荷し、そしてそれぞれ、上昇する濃度のHEL，HEL−C3d，HEL−C3d2及び HEL− C3d3と共にインキュベートした：70nM（□），７nM（○），0.7nM（△），70pM （■），７pM（●），0.7pM（▲）及び緩衝液のみ（◇）。Ｂ細胞中の〔Ca²⁺〕ｉの変化を流動細胞計測法によりモニターした。図８は、PBS 中、組換えHEL 抗原により皮下免疫化されたマウスにおけるIgGl 抗−HEL 応答を示す。ゼロ日目、４匹のマウスのグループに、緩衝液のみ（ぬりつぶされていない記号）又はPBS 中、上昇する量のHEL，HEL−C3d2、又はHEL−C 3d3（ぬりつぶされた記号）を皮下注射した。マウスは、矢印により示されるように、IFA 中、50ｐモルのHEL による腹腔内注射により35日目に追加免疫された。血清を、HEL−特異的IgGlについてELISA により分析し、そして力価を相対的単位（RU）として表わした。図９は、HEL の免疫原性に対するCFA 及びC3d の効果の比較を示す。ゼロ日目、５匹のマウスのグループは、CFA における、500ｐモル（□），50ｐモル（○ ），５ｐモル（△），500ｆモル（■），50ｆモル（●）又は５ｆモル（▲）のH EL により皮下注射された。５匹のマウスの他のグループは、PBS における、５ｐモル（△），500ｆモル（■），50ｆモル（●）又は５ｆモル（▲）のHEL−C3 d3、又は緩衝液のみにより皮下注射された。すべての動物は、矢印により示されるように、IFA 中、50ｐモルのHEL により28日目に追加免疫化された。HEL−特異的IgGlの血清力価を、RUとして表わす。図10は、種々の投与路により、PBS 中、HEL 又はHEL−C3d₂により免疫化されたマウスにおけるIgGl抗−HEL 応答の比較を示す。ゼロ日目、５匹のマウスのグループは、１ｐモル又は50ｐモルのタンパク質を、皮下（◇）、筋肉内（○）又は腹腔内（△）投与された。マウスは、矢印により示されるように、IFA 中、50 ｐモルのHEL による35日目での腹腔内注射により追加免疫化された。血清をHEL −特異的IgGlについてアッセイし、そして力価を相対単位（RU）として表わす。 C3d/抗原キメラの構成及び発現 C3d をコードするDNA（７，８）のために、鋳型として、EcoRＩにより線状化されたpMLC３−７ cDNA クローンを用いてのPCR、及び２分間の変性、アニーリング及び拡張の25回のサイクルにより、C3d を増幅した。使用されるプライマーは次の通りであった：この及びすべての続くPCR 生成物は、Sequonceキット（U．S．Biochemical Co rp.）を用いて、ジデオキシヌクレオチド鎖終結方法により配列決定した。XbaＩ及びBglII部位は、５’プライマーに及びBamHＩ部位は３’プライマーに含まれた。プライマーは、完全なネズミＣ３配列の塩基対3070〜3960間の配列を含むように企画された。５’マライマーにおけるＧ〜Ｃ置換を含むことによって、本発明者は、アミノ酸位置1028でのCys コドンを、Ser をコードするコドンに変えることができ、それにより、チオールエステル結合形成に包含される決定的なCys を変異誘発した。増幅の後、フラグメントをXbaＩ及びBamHＩにより消化し、そして XbaＩ−及びBamHＩ−消化されたpBS 中に連結し、pBS．C3dを生成した。モノマー構造体のアセンブリーのために、モノクローナル抗体YL 1／2 により認識されるエピトープ標識（９，10）及び停止コドンを、オリゴヌクレオチドを用いてC3d の３’端上に連結した。pBS．C3dをBamHＩ及びEcoRＩにより消化し、そしてYL 1／2 エピトープをコードするオリゴヌクレオチドと共に連結し、pBS ．C3d．YLを生成した。前記オリゴヌクレオチドは次の通りであった：オリゴマーC3d 構造体のアセンブリーのために、〔(Gly)₄Ser〕₂リンカーを、 PstＩにより線状化されたpSVG−spcHEL鋳型を用いてのPCR、及び30秒の変性、アニーリング及び拡張の25回のサイクルにより、鶏卵白リゾチームとの融合配列の一部として増幅したプライマーは、次の通りであった：フラグメントを pCRII（InVitrogon）中にクローン化し、そして34b．p．の〔 (Gly)₄Ser〕₂を、BamHＩ消化されたpBS．C3d中に、BamHＩ及びBglIIによる消化によりサブクローン化し、pBS．C3d．GSを生成した。BamHＩ消化されたpBS．C3d ．GS中へのpBS．C3d．YLからのBamHＩ−BglII C3d．YL フラグメントの連結が、pBS．C3d₂ YLを生成した。pBS．C3d₃の生成は、１回のpBS．C3d．GSのBamHＩ及び BglII消化及びBamHＩ消化されたpBS．C3d．GS中への 937b．p．のC3d．GS フラグメントのサブクローン化を反復することによって達成された。続いて、pB S．C3d₃構造体を、pBS．C3d．YLのBamHＩ及び BglII消化及びBamHＩ消化されたp BS．C3d₂中への919b．p．のC3d．YL フラグメントの消化により完結した。イヌのプレ−プロ−インスリンシグナル配列（DPPISS）（11）を、30秒の変性、アニーリング及び拡張の25回のサイクルを用いて、PvuIIにより線状化されたp GIR−477（K．Drickamer により供給される）から増幅した。それらのプライマーは次の通りであった：フラグメントをBamHＩ及びEcoRＩにより消化し、そしてBamHＩ−EcoRＩにより消化されたpBS(“BLUESCRIPT”)中に連結し、pBS．DPPISS を生成した。真核性発現ベクターpSG5（Stratagene）を、EcoRＩ−及び BglII−消化及びpBS．DPPIS S 生成されたpSG．SSからのEcoRＩ−BglII DPPISS フラグメントのサブクローン化により調製した。C3d 含有フラグメントを、pBS．C3dを消化することによって pBS ベクターからサブクローン化した。BamHＩ及び BglIIによるYL．pBS．C3d₂ ．YL 及びpBS．C3d₃．YLの消化及び BglIIにより調製されたpSG．SS 中への連結は、pSG．C3d．YL，pSG．C3d₂．YL 及びpSG．C3d₃．YLを生成した。抗原性鶏卵白リゾチーム（HEL）（12）（C．Goodnow）を、30秒の変性、アニーリング及び拡張の25回のサイクルを用いて、PstＩにより線状化された鋳型pDa mian から増幅した。使用されるプライマーは次の通りであった：フラグメントを、pCRII中にクローン化した。HEL フラグメントを、BamHＩ及びBglIIによる pCRII．HEL の消化及び404bpのHEL フラグメントのBglII−及びB amHＩ−消化されたpSG．C3d．YL，pSG．C3d₂．YL 及びpSG．C3d₃．YL プラスミド中への連結によりサブクローン化した。pCRII．HEL プラスミドをまた、YL 1 ／2 エピトープを含むように上記のようにして変性し、そしてこの 420bpの Bgl II−BamHＩ消化されたHEL．YLフラグメントをBamHＩ−及びBglII−調製されたpS G．SSベクター中に連結し、pSG．HEL．YLを付与した。続いて、pSGSベクターを、pSG5の BglII部位中にYL 1／2 エピトープを直接的に連結することによって、 YL 1／2 エピトープを含むように変性した。使用されるオリゴヌクレオチドは次の通りであった：過渡的な発現のために、pSG．HEL．C3d₃．YLをEcoRＩ及びXbalにより消化した。3468bpのHEL．C3d₃．YL フラグメントをDNA ポリメラーゼＩのクレノウフラグメントを用いてブラント末端化し、そしてA71dベクター中に連結した。A71d（A ．Venkitaraman の贈り物）、すなわち真核性発現ベクターを、BamHＩにより消化し、そしてこの部位をブラント末端化することにより連結のために調製した。 SmaＩによる続く消化は、ポリアデニル化シグナルの切り出しをもたらした。プラスミドpSG．HEL．YL，pSG．HEL．C3d．YL及びpSG．HEL．C3d₃．YLを、リン酸カルシウム方法を用いて、Ｌ細胞中に、pSV2−neoにより同時トランスフェクトした。細胞を 0.8mg／mlのG418により選択した。G418耐性を示す細胞はクローン化された単一の細胞であり、そして多量の融合タンパク質を分泌するものを ELISA により同定した。抗−HEL 抗体 HyHEL−８及びビオチニル化された HyHEL −９（13）を捕獲ELISA に用い、そしてアビジン−ホースラディシュペルオキシダーゼ（BioRad）により検出した。それらのトランスフェクタントを懸濁液において、又は Cytodex−１マイクロキャリヤービーズ上で多量培養し、そして融合抗原を培養上清液から、10mg／mlで５mlのSepharose 4Bに結合されるYL 1／2 抗体に基づく親和性クロマトグラフィーにより精製した。培養上清液を、親和性樹脂上に通し、そしてそれぞれ10のカラム体積の緩衝液１（50mMのトリス、pH8.0 ，150mMのNaCl，0.1mM のEDTA）及び0.2％のND40により消化された緩衝液１により洗浄した。カラムをさらに、20カラム体積の緩衝液１により洗浄し、そして次に、融合抗原を50mMのTEA， pH11.5，150mMのNaCl，0.1mM のEDTAにより溶離した。抗原を中和し、プールし、そしてPBS に対して透析した。プラスミドA71d．HEL．C3d₃．YL をDEAE−doxt ram 方法を用いてCOS 細胞に過渡的に発現し、そして融合タンパク質を上記のようにして精製した。続いて、精製されたHEL．C3d₃．YL 及びHEL．C3d₂．YLタンパク質を高分解能Sephacryl Ｓ−200カラム（Pharmacia）上でサイズ分別し、トランスフェクトされた細胞により生成されるタンパク質の汚染組換え形を除去した。 HEL −特異的Ｂ細胞における〔Ca²⁺〕ｉの上昇の組換えHEL 及び HEL−C3dl− ３による刺激 HEL に対して特異的なmIgM及びmIgDを発現する８種の細胞を有するトランスジェニックマウスからの脾臓リンパ球を、indo−１により負荷した。脾臓細胞を、フィコエリトリン接合のラット抗−CD43により染色した。CD43陽性細胞を取り出し、そしてその細胞を、それぞれ上昇する濃度のHEL，HEL−C3d、HEL−C3d2及び HEL−C3d3と共にインキュベートした。Ｂ細胞における〔Ca^2-〕ｉの変化を流動細胞計測法によりモニターした。結果は図７に示される。レセプター特異的モノクローナル抗体によるmIg へのCD21又はCD19の同時連結は、mIgが細胞内遊離Ca²⁺濃度（〔Ca²⁺〕ｉ）の上昇を刺激する閾値を低める。H EL のための２nMのKdを有するmIgM及びmIgDをコードするトランスジーンを発現するマウスからのＢリンパ球をindo−１により負荷し、上昇する濃度の組換えHE L タンパク質と共にインキュベートし、そして流動細胞計測法により〔Ca²⁺〕ｉの変化についてアッセイした（図７）。 HELは〔Ca²⁺〕ｉの用量関連上昇を引き起こし、そしてその閾値は７nMであった。HEL 上でのC3d の１，２及び３のコピーの存在は、その閾値をそれぞれ 0.7 nM，0.07nM及び 0.007nMに低め、これは個々のC3d がこの細胞の応答を誘発するためにHEL の能力を10倍、高めたことを示唆する。飽和濃度の7G6 抗−CP21（17）は、HEL−C3d2の応答のための閾値のH ELの閾値への戻りを引き起こした。非トランスジェニックマウスからのＢ細胞は、HEL 又は HEL−C3dl−３に対して応答しなかった。mIgMに対する抗体により非トランスジェニックＢ細胞において誘発された〔Ca²⁺〕ｉの変化は、７nMのHEL −C3d3の存在により変更されなかった。３nMのHEL 及び HEL−C3d3と共にトランスジェニックＢ細胞の10分間のインキュベーションは、フルオレセイン−接合の HEL の続く結合により評価される場合、抗−HEL 部位の51％及び47％飽和をもたらし、これは、HEL へのC3d の結合が、たぶんHEL のためのそれらの抗原レセプターの高い親和性のために、トランスジェニックＢ細胞への結合を改良しなかったことを示唆する。従って、増強された〔Ca²⁺〕ｉ応答は、CD21−CD19複合体の C3d−依存性補充を通して、増強された表示に影響を及ぼした。融合タンパク質のC3d 成分のCD21を結合する能力融合タンパク質のC3d 成分のCD21を結合する能力を、CD21を発現するRaji Ｂリンパ幼芽細胞を用いての競争結合アッセイにより決定した。３〜４×10⁷個の細胞／mlのRaji細胞を、１nMの〔¹²⁵Ｉ〕HEL−C3d2（比活性9.1×10⁵cpm/mg）及び上昇する濃度のHEL−C3d 融合タンパク質、500nMの（CR２）２−IgGl〔T．Heb el，J．M．Ahearn，D．T．Fearon，Science 254，102（1991）〕、又は0.1％ウシ血清アルブミンを含むPBS 中、IgGlと共に４℃で45分間インキュベートした。細胞をジブチル／ジイソ−オクチルフタレートクッションを通して遠心分離し、そして細胞ペレットに結合される¹²⁵Ｉの量を測定した。２種の実験において、〔¹²⁵Ｉ〕HEL−C3d2の特異的結合の50％阻害が、それぞれ 185〜225nM のEEL−C 3d ，８〜20nMの HEL−C3d2、及び1.5〜2.2nM の HEL−C3d3により生じた。結合反応の結合活性とC3d の数との間の相互関係は、融合タンパク質における個々のC3 d がCD21と相互作用することができることを示唆する。 (C3d)_n−免疫原融合体に対するインビボ抗体応答生後４〜６週の雄の CBA／ｃマウスをHarlan U．K.から得た。組換え抗原をPB S に希釈し、そして完全フロイントアジュバントに乳化した。0.1mlを腹腔内注射した。他方、組換え抗原をPBS に希釈し、そして 0.1mlを腹腔内注射した。さらに、組換え抗原をPBS に希釈し、そして 0.1mlを、示されるようにして、左後部の側腹部に皮下又は筋肉内注射した。続く投与は、0.1mg／mlのネズミアルブミン（Sigma Ａ−3559）を含むPBS に組換え抗原を希釈することによって行なわれた。抗体応答を、処理されたマウスの尾の静脈から一定の間隔で採血し、そしてEL ISA によりHEL 特異的血清Igを評価することによってモニターした。Nunc−Immu noプレートを、炭酸塩緩衝液（pH10.0）において４℃で一晩、HEL（0.5mg／ml）（Sigma）により被覆し、そしてPBS中、１％ BSAによりブロックした。ブロック及びすべての続く段階は、室温で１時間、行なわれた。段階の間、プレートを、 0.05％のTween，20を含むPBS により３度洗浄した。血清を0.1％ BSA／PBS に希釈し、そしてHEL 特異的IgGlの存在を、ホースラディシュペルオキシターゼ結合のヤギ抗−マウスIgGl（Southern Biotechnology Associates Inc.）を用いて決定した。それぞれCFA 及びIFA における 0.1mgのHEL により免疫化され、そして追加免疫化されたマウスからのプールされた血清を用いての標準曲線が、個々のプレート上に含まれた。ELISA をｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩（Sigma Ｐ−9187）により展開し、そして光学密度を 570nmでMolecular Devices マイクロプレートリーダーにより決定した。免疫化に対する用量応答 HEL の相対的免疫原性を、PBS中、増加する量の組換えタンパク質によりマウスを皮下免疫化することによって、HEL−C3d2及びHEL−C3d3の免疫原性と比較した。最高の用量、すなわち500ｐモルのHEL は、変性されていない抗原が一次免疫化の後、IgGl応答を誘発した閾値であった（図８）。対照的に、わずか500ｆモルの HEL−C3d2及び50ｆモルの HEL−C3d3が、比較できる初期IgGl応答を誘発するために必要とされた。３種の組換えタンパク質のそれらの用量はまた、不完全フロイントアジュバント(IFA)における50ｐモルのHEL による感作されたマウスの挑戦の後に生じる促進され、そして増強されたIgGl応答により示されるように、免疫学的記憶を誘発するために必要な限界量であった。さらに、すべての組換えタンパク質によるHEL に対する免疫学的記憶の生成は、それらの応答がＴ細胞−依存性であることを示唆する。完全フロイントアジュバントとの比較 C3d の免疫増強機能を、完全フロイントアジュバント（（FA）のその機能とマウスにおいて比較した。初期IgGl応答を誘発するための限界用量は、それぞれ、 CFA 中、HEL に関しては、50ｐモル及びPBS 中、HEL−C3d3に関しては 500ｆモルであった（図９）。記憶を誘発するために必要とされる量は、それぞれ、CFA 中、HEL に関しては、５ｐモル及びPBS 中、HEL−C3d3に関しては50ｆモルであった。従って、抗原へのC3d の３種の分子の結合は、強力なアジュバントCFA よりも、獲得された免疫認識のための閾値を低めることにおいて 100倍以上、効果的である。インビボでのCD21の関与 HEL−C3d3に対するIgGl応答におけるCD21の関与を決定した。PBS 中、500ｆモルのHEL−C3d3により皮下免疫化する24時間前、300mgの7G6 抗−CD21又はイソタイプ−適合の対照抗体をマウスに腹腔内注射した。29日目でのIgGl抗−HEL の力価は、7G6−処理されたマウスの25RU及び対照のマウスの4610RUよりも低かった。それぞれ7G6 抗−CD21及び1D3 抗−CD19により染色された脾臓リンパ球の流動細胞計測法による29日目での分析は、7G6 による処理が、CD19のそれらの発現を減じないでＢ細胞上の検出できるCD21を排除したことを示した。（FACS分析のために、脾臓細胞を、５μｇ／mlの7G6，1D3又は対照抗体、続いてPE−接合されたヤギ抗−ラットＦ(ab)₂(CalTag)により染色した。応答の特異性マウスを、PBS 中、25μｇのカサガイ（keyhole limpet）ヘモシアニン(KLH) のみにより、又は0.5ｐモルの HEL−C3d3の存在下で、皮下同時免疫化した。14 日目でのKLH に対するIgGl応答は、HEL−C3d3により変更されず、これは、C3d が結合される抗原に対してのみ応答を調節することを示す。ネズミSmB／SmB −C3d3の構成及び発現 pGEM 72ｆ⁺におけるSmB cDNAは、J．Craft（Yale University）により供給された。SmB は、RNA スプライシングに関与する小さなリボ核タンパク質粒子のタンパク質成分であり、そして通常、細胞質においてのみ発現される。本発明者は、これを、COS 細胞を過渡的にトランスフェクトすることにより、C3d との分泌された可溶性ポリペプチド融合体として発現することができる。この自己−抗原に関する興味は、C3d の調節効果を用いての免疫システムの耐性の克服である。完全なSmB 配列を、EcoRＩを用いてベクターから切断し、そしてそのコード配列を、その配列の５’端に BglII制限部位を、及びその配列の３’ 端にBamHＩ部位を付加するプライマーを用いて、PCRにより増幅した。 PCR 増幅は、１分間の変性、アニーリング（55℃）及び拡張の35回のサイクルから構成された。PCR 生成物を、フェノール／クロロホルム抽出し、そしてBamH Ｉ及びBglIIにより消化し、そしてBamHＩ／BglII消化されたpBS．C3d（上記参照のこと）中にサブクローン化し、pBS．SmBを生成した。コロニーを、PvuII制限消化により正しい配向性についてスクリーンし、そしてSmB 配列を、Sequenase キット(U．S．Biochemical Corp.)を用いてのジデオキシ−仲介の配列決定により確かめた。次に、SmB を、BamHＩ及びBglIIを用いてpBS．SmBから切断し、そしてBamHＩ及びBglIIにより開環されたpSG5．YL（上記参照のこと）及びpSG．C3d3．YL(上記参照のこと)中にサブクローン化した。コロニーを、PvuII消化により正しい配向性についてスクリーンした。正しい挿入は、pSG5ベクターにおけるBamHＩ部位へのSmB 上の BglII部位の連結を必要とした。それらの部位は結果的には、失なわれ、これはBamHＩ及びBglII消化により確かめられた。得られる構造体は、pSG 5．SmB．YL 及びpSG5．SmB．C3d9．YL である。次に、個々の完全なカセットを、EcoRＩ及び XbaＩによる消化によりpSG5ベクターから切断し、ゲル精製し、抽出し、そして1159bpのSmaＩ−Bst 1107Ｉフラグメントの除去により前もって変性されている pcDNA３（Invitrogen）中にサブクローン化し、そして次に、閉環した。得られるプラスミドを、PvuII制限消化によりスクリーンし、そしてpCMV．SmB．YL 及びpCMV．SmB．C3d3．YLと命名した。 pCMVベクターによる可溶性組換えタンパク質の発現は、DEAE Dextran方法によるCOS 細胞の過渡的トランスフェクションにより確かめられた。³⁵Ｓ−メチオニンによるインビトロラベリングを用いて、rSmB及びrSmB．C3d3についての適切に分別されたタンパク質を、COS 細胞上清液から、組換えタンパク質上のYLエピトープを認識するYL 1／2 抗体により免疫沈殿せしめる。本明細書に記載される結果は、抗原に対して高められた免疫応答が抗原の個別な分子変性、すなわちC3d の結合により調節され得ることを示す。その応答は10 ,000倍の程度、増強され得、これは、完全フロイントアジュバント（CFA）を用いての増強よりも、かなりの程度高い。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９６年７月８日【補正内容】請求の範囲１．CD21（CR２）又はCD19のためのリガンドと会合する抗原を含んで成る組成物。但し、そのリガンドは、CD21又はCD19に特異的な抗体ではなく、そして又の抗原は、補体Ｃ３フラグメントの内部チオエステルに由来するエステル結合を通しては補体Ｃ３フラグメントと会合しない。２．請求項１に記載の組成物であって、その抗原がペプチド又はポリペプチドであるもの。３．前記抗原及び前記リガンドを含んで成る融合タンパク質を含んで成る、請求項２に記載の組成物。４．前記リガンドがC3d 分子を含んで成る、請求項１〜３のいずれか１に記載の組成物。５．前記リガンドが２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項４に記載の組成物。６．C3d 分子に結合する抗原を含んで成る接合体。但し、その抗原は、補体Ｃ３フラグメントの内部チオエステルに由来するエステル結合を通しては補体Ｃ３フラグメントに会合しない。７．２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項６に記載の接合体。８．前記免疫原がペプチド又はポリペプチドである、請求項６又は７に記載の接合体。９．融合タンパク質である、請求項８に記載の接合体。 10．CD21（CR２）又はCD19のためのリガンドに連結される、ペプチド又はポリペプチド抗原を含んで成る、融合タンパク質。 11．前記リガンドがC3d分子を含んで成る、請求項10に記載の融合タンパク質。 12．２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項11に記載の融合タンパク質。 13．請求項９〜12のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードする核酸。 14．請求項13に記載の核酸、及び前記コードされた融合タンパク質の発現のための調節配列を含んで成る発現ベクター。 15．請求項13に記載の核酸、又は請求項14に記載の発現ベクターを含んで成る宿主細胞。 16．ペプチド又はポリペプチド、及びCD21又はCD19のリガンドを含んで成る融合タンパク質の製法であって、前記融合タンパク質をコードする核酸からの発現を含む方法。 17．ペプチド又はポリペプチド、及び１以上のC3d 分子を含んで成る融合タンパク質の製法であって、前記融合タンパク質をコードする核酸からの発現を含む方法。 18．前記融合タンパク質の発現のための条件下で、前記核酸を含んで成る宿主細胞を培養することを含んで成る、請求項16又は17に記載の方法。 19．請求項16〜18のいずれか１項に記載の方法に従っての融合タンパク質の製造に続いて、その融合タンパク質を単離することを含む方法。 20．請求項19に記載の方法に従っての融合タンパク質の単離に続いて、（ｉ）請求項９〜12のいずれか１項に記載の融合タンパク質、及び（ii）医薬的に許容できる賦形剤又は担体を含んで成る組成物を配合することを含む方法。 21．抗原の免疫原性を変更するための方法であって、接合体分子を形成するために前記抗原に１以上のC3d 分子をインビトロでカップリングすることを含む方法。 22．前記抗原の免疫原生が高められる、請求項21に記載の方法。 23．多くのC3d 分子が前記抗原にカップリングされる、請求項22に記載の方法。 24．個々のC3d 分子が、ペプチド結合を通じて前記抗原にカップリングされる請求項21〜23のいずれかに１項に記載の方法。 25．前記接合体分子がコーディング核酸からの発現により製造される、請求項 24に記載の方法。 26．請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物、及び医薬的に許容できる賦形剤又は担体を含んで成る、固体への投与のための組成物。 27．C3d 分子にカップリングされる抗原及び医薬的に許容できる賦形剤又は担体を含んで成る接合体を含んで成る、固体への投与のための組成物。 28．前記接合体が２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項27に記載の組成物。 29．前記抗原がペプチド又はポリペプチドである、請求項27又は28に記載の組成物。 30．前記接合体が融合タンパク質である、請求項29に記載の組成物。 31．請求項10〜12のいずれか１項に記載の融合タンパク質及び医薬的に許容できる賦形剤又は担体を含んで成る、固体への投与のための組成物。 32．免疫原に対する個体の免疫応答を調節するために個体への投与のための、請求項26〜31のいずれか１項に記載の組成物。 33．抗原に対する哺乳類の免疫応答を調節するための医薬の製造における、CD 21（CR２）又はCD19のためのリガンドに会合する抗原を含んで成る組成物の使用。但し、その抗原は、補体Ｃ３フラグメントの内部チオエステルに由来するエステル結合を通じて補体Ｃ３フラグメントと会合しない。 34．免疫原に対する個体の免疫応答を調節するための医薬の製造における、C3 d 分子にカップリングされる抗原を含んで成る接合体の使用。 35．前記接合体が２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項34に記載の使用。 36．前記抗原がペプチド又はポリペプチドである、請求項34又は35に記載の使用。 37．前記接合体が融合タンパク質である、請求項36に記載の使用。 38．免疫原に対する個体の免疫応答を調節するための医薬の製造における、請求項10〜12のいずれか１項記載の融合タンパク質の使用。 39．前記免疫応答が抗体応答を含んで成る、請求項33〜38のいずれか１項に記載の使用。 40．前記免疫応答がＴ−細胞応答を含んで成る、請求項33〜39のいずれか１項に記載の使用。 41．着目の抗原に対する個体の免疫応答を調節するための方法であって、請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を個体に投与することを含む方法。 42．着目の抗原に対する個体の免疫応答を調節するための方法であって、C3d 分子にカップリングされる抗原を含んで成る接合体を個体に投与することを含む方法。 43．前記接合体が２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項42に記載の方法。 44．前記抗原がペプチド又はポリペプチドである、請求項42又は43に記載の方法。 45．前記接合体が融合タンパク質である、請求項44に記載の方法。 46．着目の抗原に対する個体の免疫応答を調節するための方法であって、請求項10〜12のいずれか１項に記載の融合タンパク質を個体に投与することを含む方法。 47．前記免疫応答が抗体応答を含んで成る、請求項41〜46のいずれか１項に記載の方法。 48．前記免疫応答がＴ−細胞応答を含んで成る、請求項41〜47のいずれか１項に記載の方法。 49．着目の抗原に対する抗体応答を高めるための方法であって、CD21又はCD19 のためのリガンドに会合する抗原を含んで成る組成物を哺乳類に投与することを含む方法。但し、そのリガンドは、CD21又はCD19のための抗体ではない。 50．着目の抗原に対する抗体応答を高めるための方法であって、複数のC3d 分子にカップリングされる抗原を含んで成る接合体を哺乳類に投与することを含む方法。 51．請求項49に記載の組成物又は請求項50に記載の接合体の哺乳類への投与に続いて、その哺乳類から抗体を単離することを含む方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．CD21（CR２）又はCD19のためのリガンドと会合する抗原を含んで成る組成物。但し、その抗原は、補体Ｃ３フラグメントの内部チオエステルに由来するエステル結合を通しては補体Ｃ３フラグメントと会合しない。２．請求項１に記載の組成物であって、その抗原がペプチド又はポリペプチドであるもの。３．前記抗原及び前記リガンドを含んで成る融合タンパク質を含んで成る、請求項２に記載の組成物。４．前記リガンドがC3d 分子を含んで成る、請求項１〜３のいずれか１に記載の組成物。５．前記リガンドが２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項４に記載の組成物。６．C3d 分子に結合する抗原を含んで成る接合体。但し、その抗原は、補体Ｃ３フラグメントの内部チオエステルに由来するエステル結合を通しては補体Ｃ３フラグメントに会合しない。７．２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項６に記載の接合体。８．前記免疫原がペプチド又はポリペプチドである、請求項６又は７に記載の接合体。９．融合タンパク質である、請求項８に記載の接合体。 10．CD21（CR２）又はCD19のためのリガンドに連結される、ペプチド又はポリペプチド抗原を含んで成る、融合タンパク質。 11．前記リガンドがC3d 分子を含んで成る、請求項10に記載の融合タンパク質。 12．２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項11に記載の融合タンパク質。 13．請求項９〜12のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードする核酸。 14．請求項13に記載の核酸、及び前記コードされた融合タンパク質の発現のための調節配列を含んで成る発現ベクター。 15．請求項13に記載の核酸、又は請求項14に記載の発現ベクターを含んで成る宿主細胞。 16．ペプチド又はポリペプチド、及びCD21又はCD19のリガンドを含んで成る融合タンパク質の製法であって、前記融合タンパク質をコードする核酸からの発現を含む方法。 17．ペプチド又はポリペプチド、及び１以上のC3d 分子を含んで成る融合タンパク質の製法であって、前記融合タンパク質をコードする核酸からの発現を含む方法。 18．前記融合タンパク質の発現のための条件下で、前記核酸を含んで成る宿主細胞を培養することを含んで成る、請求項16又は17に記載の方法。 19．請求項16〜18のいずれか１項に記載の方法に従っての融合タンパク質の製造に続いて、その融合タンパク質を単離することを含む方法。 20．請求項19に記載の方法に従っての融合タンパク質の単離に続いて、（ｉ）請求項９〜12のいずれか１項に記載の融合タンパク質、及び（ii）医薬的に許容できる賦形剤又は担体を含んで成る組成物を配合することを含む方法。 21．抗原の免疫原性を変更するための方法であって、接合体分子を形成するために前記抗原に１以上のC3d 分子をインビトロでカップリングすることを含む方法。 22．前記抗原の免疫原生が高められる、請求項21に記載の方法。 23．多くのC3d 分子が前記抗原にカップリングされる、請求項22 に記載の方法。 24．個々のC3d 分子が、ペプチド結合を通じて前記抗原にカップリングされる請求項21〜23のいずれかに１項に記載の方法。 25．前記接合体分子がコーディング核酸からの発現により製造される、請求項 24に記載の方法。 26．請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物、及び医薬的に許容できる賦形剤又は担体を含んで成る、固体への投与のための組成物。 27．C3d 分子にカップリングされる抗原及び医薬的に許容できる賦形剤又は担体を含んで成る接合体を含んで成る、固体への投与のための組成物。 28．前記接合体が２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項27に記載の組成物。 29．前記抗原がペプチド又はポリペプチドである、請求項27又は28に記載の組成物。 30．前記接合体が融合タンパク質である、請求項29に記載の組成物。 31．請求項10〜12のいずれか１項に記載の融合タンパク質及び医薬的に許容できる賦形剤又は担体を含んで成る、固体への投与のための組成物。 32．免疫原に対する個体の免疫応答を調節するために個体への投与のための、請求項26〜31のいずれか１項に記載の組成物。 33．免疫原に対する個体の免疫応答を調節するための医薬の製造における、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物の使用。 34．免疫原に対する個体の免疫応答を調節するための医薬の製造における、C3 d 分子にカップリングされる抗原を含んで成る接合体の使用。 35．前記接合体が２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項34に記載の使用。 36．前記抗原がペプチド又はポリペプチドである、請求項34又は35に記載の使用。 37．前記接合体が融合タンパク質である、請求項36に記載の使用。 38．免疫原に対する個体の免疫応答を調節するための医薬の製造における、請求項10〜12のいずれか１項記載の融合タンパク質の使用。 39．前記免疫応答が抗体応答を含んで成る、請求項33〜38のいずれか１項に記載の使用。 40．前記免疫応答がＴ−細胞応答を含んで成る、請求項33〜39のいずれか１項に記載の使用。 41．着目の抗原に対する個体の免疫応答を調節するための方法であって、請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物を個体に投与することを含む方法。 42．着目の抗原に対する個体の免疫応答を調節するための方法であって、C3d 分子にカップリングされる抗原を含んで成る接合体を個体に投与することを含む方法。 43．前記接合体が２以上のC3d 分子を含んで成る、請求項42に記載の方法。 44．前記抗原がペプチド又はポリペプチドである、請求項42又は43に記載の方法。 45．前記接合体が融合タンパク質である、請求項44に記載の方法。 46．着目の抗原に対する個体の免疫応答を調節するための方法であって、請求項10〜12のいずれか１項に記載の融合タンパク質を個体に投与することを含む方法。 47．前記免疫応答が抗体応答を含んで成る、請求項41〜46のいずれか１項に記載の方法。 48．前記免疫応答がＴ−細胞応答を含んで成る、請求項41〜47のいずれか１項に記載の方法。 49．着目の抗原に対する抗体応答を高めるための方法であって、CD21又はCD19 のためのリガンドに会合する抗原を含んで成る組成物を哺乳類に投与することを含む方法。 50．着目の抗原に対する抗体応答を高めるための方法であって、複数のC3d 分子にカップリングされる抗原を含んで成る接合体を哺乳類に投与することを含む方法。 51．請求項49に記載の組成物又は請求項50に記載の接合体の哺乳類への投与に続いて、その哺乳類から抗体を単離することを含む方法。