JPH10506461A

JPH10506461A - 顕微鏡スライドガラスのカバーガラスを検出するための方法と装置

Info

Publication number: JPH10506461A
Application number: JP8510932A
Authority: JP
Inventors: ローゼンロフ，ミケル，デー．; シュミット，ロバート，シー．; リー，シー−ヨン，ジェー．; クアン，チー−チャウ，エル．
Original assignee: ネオパス，インク．
Priority date: 1994-09-20
Filing date: 1995-09-07
Publication date: 1998-06-23
Also published as: AU3508395A; WO1996009610A1; CA2200445C; US5812692A; AU709029B2; CA2200445A1; GR980300049T1; EP0782738A1; ES2122949T1; DE782738T1; US5638459A; EP0782738A4

Abstract

(57)【要約】視野処理装置（５６８）が、下から均一な光源（５０８）で照明された可動フレーム（４０）に設置されたスライドガラス（１２）とカバーガラス（１４）の画像を撮影する電荷結合素子カメラ（５１２）から画像データを受信する。視野処理装置は、所定の基準の組み合わせを満足するエッジの対象物を見つけることによって、カバーガラスの位置を見つける。

Description

【発明の詳細な説明】顕微鏡スライドガラスのカバーガラスを検出するための方法と装置発明の分野本発明は顕微鏡スライドガラスのカバーガラスを検出するための装置に関し、より詳細には、カバーガラスの下の領域の画像を処理する前に顕微鏡スライドガラスのカバーガラスの境界を判定するための装置に関する。発明の背景ワシントン州ベルヴューのNeoPath Corporationから入手可能なＮｅｏＰａｔｈＡｕｔｏｐａｐ３００（登録商標）自動化細胞学システムのような自動化細胞学システムは、偏平上皮内の病変や癌細胞のような対象物の証明のために生物学的標本の画像を分析する。生物学的標本は通常顕微鏡スライドガラスの上に固定されており、顕微鏡スライドガラスは生物学的標本の上のカバーガラスを含んでいる。多くの理由から、生物学的標本の分析をする前に顕微鏡スライドガラスのカバーガラスを検出できれば有利である。標本の画像は、カバーガラスの下に置かれる時にのみ、最も質が高く、安定した均一な光学的特性を示すものと考えられる。取り付けられたときに、カバーガラスの位置はサンプルに対して不変であるので、カバーガラスはサンプルの中の特定の対象物の位置を見つけるための基準となる光学的要素として利用できる。自動化細胞学システムでは、顕微鏡の対物レンズは一定の厚さのカバーガラスの下の標本の画像を捉えるように設計されている。従って、カバーガラスの下にない生物学的標本から得られた画像は、高品質な画像分析のために必要な安定した光学的特性を欠いている。従って、カバーガラスの位置は非常に高い確実さをもって検出されなければならず、さもなければスライドガラス全体が分析のためには不十分なものとして拒否される。画像処理の適用例の中には、カバーガラスが１視野以上に広がっているものもある。従来のエッジ検出技術では多数の視野に広がる対象カバーガラスを再構成するために、少数の部分的なエッジの分析を行うことはできない。先行する技術では、そのエッジによってカバーガラスの位置を見つけることは多くの理由から困難であるとされている。例えば、カバーガラスは通常手で取り付けられるが、その結果、使用される接着剤の量がスライドガラス毎に異なっている。接着剤がカバーガラスのエッジに達せず、接着剤の中に隙間ができていることもある。その隙間のエッジがカバーガラスのエッジのように見えることも多い。他の場合では、接着剤がカバーガラスの下からはみ出して、接着剤の上に汚れを集め、エッジの周囲の光学的特性を変化させることもある。さらに、場合によっては、標本がエッジに似た構造を持つこともある。こうした構造はカバーガラスの位置決めの品位を落としたり、うまくいかなくしたりする。通常のスライドガラスでは、カバーガラスと接着剤の寸法範囲は厚さ約０．１０ｍｍから０．１４ｍｍである。平均的なカバーガラスと接着剤は厚さ約０．１２ｍｍである。スライドガラスは厚さ約１．０ｍｍである。スライドガラスとカバーガラスの間の厚さの違いによって、スライドガラスがより強いエッジの像を形成するようになり、それが顕微鏡で拡大されると、カバーガラスのエッジによって形成された像を圧倒する傾向がある。従来のエッジ検出技術では、スライドガラスのエッジからの移行部分を区別することが困難である。例えば、顕微鏡の標本は通常スライドガラスの一方の端に取り付けられた不透明なラベルを持っている。不透明なラベルと透明なスライドガラスの間の移行部分は非常に強いエッジの画像を作り出す。従来のエッジ検出技術では、カバーガラスのエッジの弱い画像よりも、この強いエッジの画像を検出することが多い。カバーガラスの位置はさまざまなので、スライドガラスの標本を分析する前に、各スライドガラス上のカバーガラスの正確な位置を見つける必要がある。満足できる結果を得るためには、カバーガラスのエッジから所定の距離以上離れて分析を行わなければならない。さらに、データはカバーガラスの下の対象物から得られた時にのみ有効と考えられる。さらに、スライドガラスの分析にはスライドガラス上の資料のデータ平面が多数の位置で測定される必要があるので、普通正確な焦点位置を推定するために図が作成される。顕微鏡の対物レンズは通常ある特定のカバーガラスと接着剤の厚さに関連する球面収差について補正されているので、焦点位置は、カバーガラスと接着剤を通して焦点を合わせた時にだけ意味がある。従って、焦点図の位置はカバーガラスを通して測定されなければならない。さらに、カバーガラスの角はスライドガラスの上の対象物の位置を決める座標システムを定義するための基準マークとして使用される。エッジ・ラインの角度を計算する際の１度程度の誤差でさえ、６０ｍｍのカバーガラスの中心から、最大０．５２ｍｍの誤差を生じる。従って、こうした対象物の位置を正確に見つけるために有益な座標を定めるためには高度の正確さと再現性が必要である。多くの視野に広がる顕微鏡スライドガラスのカバーガラスの位置を見つけ、カバーガラスの位置をより正確に判定するためのより十分な基礎を供給する装置を供給することが本発明の動機の１つである。発明の概要本発明はカバーガラスの４つのエッジすべての位置を見つけるカバーガラス検出装置を供給する。本発明の装置は電荷結合素子カメラから画像データを受信するために接続された視野処理装置を含む。カメラは可動フレームの上に置かれたスライドガラスとカバーガラスを撮影する。スライドガラスは均一な光源によって照明される。可動フレームはホスト・コンピュータに応答するコンピュータによって制御される。ホスト・コンピュータは初めに可動フレームを動かしてスライドガラスの所定の範囲内でスライドガラスの一部を見ることによってカバーガラスの位置を見つける。その後スライドガラスは、可動フレームがスライドガラスを選択されたエッジの方向に動かした後再び撮影される。対象となるエッジは多数の視野から位置を見つけられフォローされる。対象となるエッジが１組の基準を満足すれば、カバーガラスのエッジが見つけられたことになる。本発明の他の目的、特徴、利点は好適な実施例、請求の範囲、図面の説明を通じて、当業者には明らかになるであろう。ここでは類似の数字は類似のエレメントを示している。図面の簡単な説明本発明を説明するために、好適な実施例が添付の図面を参照して説明される。図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、図１Ｄおよび図１Ｅは、本発明のスライドガラス・イメージ装置の略図である。図２は、２つのいちばん端の位置に設置された最小標準カバーガラスを持つ、スライドガラス受けに入った顕微鏡スライドガラスの略図である。図３は、視野のエッジを検出するために使用される処理の略図である。図４は、フィルタによってエッジの像を捉えるために必要な処理の略図である。図５は、カバーガラス検出の流れ図を示す。図６は、エッジを承認、または拒否するための方法を示す。図７Ａ、図７Ｂおよび図７Ｃは真のエッジを決定するために使用されるエッジ・フィットの方法を示す。図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄ、図８Ｅおよび図８Ｆは、フィルタをかけられた投影の結果を示す。好適な実施例の詳細な説明本発明の好適な実施例の場合には、ここに開示したシステムは、1992年２月18 日出願のアランＣ．ネルソンの「通常の生物医学標本の識別方法」という名称の米国特許出願第０７／８３８，０６４号；1992年２月18日出願のエス・ジェームズ・リー他の「データ処理技術を使用して対象物を識別するための方法」という名称の米国特許出願第０７／８３８，３９５号の一部継続出願である1994年１月１０日出願の米国特許出願第０８／１７９，８１２号；１９９２年２月１８日出願のリチャードＳ．ジョンストンらの「データ・シーケンスを迅速に処理するための方法および装置」という名称の現在は米国特許第５，３１５，７００号となっている、米国特許出願第０７／８３８，０７０号；１９９２年２月１８日出願のジョンＷ．ハイエンガ他の「顕微鏡画像信号の動的修正のための方法および装置」という名称の米国特許出願第０７／８３８，０６５号；および１９９２年２月１８日出願の第０７／８３８，０６３号の一部継続出願であるハイエンガ他の「焦点が合っている顕微鏡画像を迅速に捕捉するための方法および装置」という名称の１９９４年９月７日出願の米国特許出願第０８／３０２，３５５号に開示されている子宮頸部パップ・スメア（ｃｅｒｖｉｃａｌｐａｐｓｍｅａｒｓ）を分析するためのシステムで使用されている。これら特許および特許出願の全文は、ここに引用したことにより本明細書に組み込まれている。本発明は、また本発明の出願人に譲渡されている、他に別段の指定のない限り、１９９４年９月２０日出願の下記特許出願に開示されている、生物学的および細胞学的システムにも関連している。この特許出願は、ここに引用したことによりすべて参考文献として本明細書に組み込まれている。この特許出願とは、クアン他の「視野優先順準装置および方法」という名称の米国特許出願第０８／３０９，１１８号；ウイルヘルム他の「生物学的標本上の細胞グループの自動識別用の装置」という名称の米国特許出願第０８／３０９，０６１号；メイヤ他の「生物学的標本上の厚い細胞グループの自動識別用の装置」という名称の米国特許出願第０８／３０９，１１６号；リー他の「生物学的分析システムの自己較正装置」という名称の米国特許出願第０８／３０９，１１５号、リー他の「多重細胞パターンの識別および統合のための装置」という名称の米国特許出願第０８／３０８，９９２号；リー他の「細胞学的システムの動的正規化用の方法」という名称の米国特許出願第０８／３０９，０６３号；ローゼンロフ他の「カバー・ガラスの接着剤の気泡を検出するための装置」という名称の米国特許出願第０８／３０９，０７７号；リー他の「細胞学的スライドガラス評点装置」という名称の米国特許出願第０８／３０９，９３１号；リー他の「画像面変調パターンを認識するための方法および装置」という名称の米国特許出願第０８／３０９，１４８号；リー他の「自由に動ける細胞を識別するための装置」という名称の米国特許出願第０８／３０９，２５０号；オー他の「頑丈な生物学的標本を分類するための方法および装置」という米国特許出願第０８／３０９，２０９号；およびウイルヘルム他の「自動細胞学的検査のための不適当な条件を検出するための方法および装置」という名称の米国特許出願第０８／３０９，１１７号である。ここで説明されるさまざまな処理はディジタル・処理装置で操作するのに適したソフトウェアにおいて実行されることを理解されたい。ソフトウェアは例えば、中央処理装置５４０に組み込まれる。図１Ａ、図１Ｂおよび図１Ｃについて説明すると、これらの図は、視野の優先化に関する本発明の一実施例の略図である。本発明の装置は、画像システム５０２、移動制御システム５０４、画像処理シテム５３６、中央処理システム５４０、およびワークステーション５４２からなる。画像化システム５０２は、照明装置５０８、画像化光学装置５１０、ＣＣＤカメラ５１２、照明センサ５１４および画像捕捉／焦点システム５１６からなる。画像捕捉／焦点システム５１６は、ＣＣＤカメラ５１２にビデオ・タイミング・データを供給し、ＣＣＤカメラ５１２は、画像捕捉／焦点システム５１６に走査線からなる画像を供給する。照明センサの輝度は、画像捕捉／焦点システム５１６に送られ、そこで照明センサ５１４は、光学装置５１０から画像のサンプルを受ける。本発明のある実施例の場合には、上記光学装置は、さらに自動顕微鏡５１１を含む。照明装置５０８は、スライドガラスを照明する。画像捕捉／焦点システム５１６は、ＶＭＥバス５３８にデータを供給する。ＶＭＥバスは、画像処理システム５３６にデータを分配する。画像処理システム５３６は、視野処理装置５６８からなる。画像は、画像バス５６４を通して、画像捕捉／焦点システム５１６から送られる。中央処理装置５４０は、ＶＭＥバス５３８を通して本発明の動作を制御する。本発明の一実施例の場合には、中央処理装置５６２は、モトローラ社の６８０３０（登録商標）ＣＰＵを使用している。移動制御装置５０４は、トレイ・操作器５１８、顕微鏡ステージコントローラ５２０、顕微鏡トレイ・コントローラ５２２、および較正スライドガラス５２４からなる。モータ駆動装置５２６が、スライドガラスを光学装置の下に位置させる。バー・コード・リーダ５２８は、スライドガラス５２４上のバー・コードを読む。タッチセンサ５３０は、スライドガラスが顕微鏡の対物レンズの下にあるかどうかを判断し、ドアが開いている場合には、ドア・インターロック５３２が動作を禁止する。移動コントローラ５３４は、中央処理装置５４０の指示に従って、モータ駆動装置５２６を制御する。イーサネット（登録商標）通信システム５６０が、システムを制御するために、ワークステーション５４２と通信する。ハード・ディスク５４４は、ワークステーション５５０により制御される。本発明の一実施例の場合には、ワークステーション５５０は、サン・スパーク・クラシック（登録商標）ワークステーションを使用している。テープ・ドライブ５４６は、ワークステーション５５０およびモデム５４８、モニタ５５２、キーボード５５４およびマウス・位置決め装置５５６に接続している。プリンタ５５８は、イーサネット（登録商標）通信システム５６０に接続している。カバーガラス検出の間、中央コンピュータ５４０は、リアル・タイム・オペレーティング・システムを操作しながら、顕微鏡５１１と処理装置を制御して、顕微鏡５１１から画像を得てそれをディジタル化する。例えば、コンピュータ制御タッチ・センサを使用してスライドガラスの４つの角に接触することによってスライドガラスの平面度がチェックされる。コンピュータ５４０はまた、顕微鏡の対物レンズの下の標本の位置を決める顕微鏡５１１のステージと、コンピュータ５４０の制御下で画像を受信する１から１５の視野（ＦＯＶ）処理装置５６８を制御する。ここで本発明のカバーガラス検出装置の概略を示す図１Ｄおよび図１Ｅを参照する。カバーガラス検出装置はホスト・コンピュータ５６８を含むコンピュータと画像収集システムを含む。ホスト・コンピュータ５６８は、照明のためのキセノン・ストロボ５０８を持つ顕微鏡２６、顕微鏡２６からの画像を収集しディジタル化するための処理装置５３６、顕微鏡の対物レンズ３０の下で標本を位置決めするためのコンピュータ制御された顕微鏡のステージ４０、ホスト・コンピュータの制御のもとで画像収集処理装置５３６から画像を受信する１から１５の視野（ＦＯＶ）処理装置５６８を含む残りのシステムの動作を制御するリアル・タイム・オペレーティング・システムを操作する。ＦＯＶ処理装置５６８は、画像処理と画像の対象物の分類操作を行い、その結果をホスト・コンピュータに送る。図１Ｅは、カバーガラス１４によって覆われた顕微鏡スライドガラス１２の一角の拡大図を示す。接着剤１１がカバーガラス１４をスライドガラスに接着している。図２は、スライドガラス受け２０の中のスライドガラス１２の例を示す。スライドガラス１２は、例えば、不透明なラベルによって広く覆われたすりガラスからなるラベル部分１８と、透明な標本部分１９の、概して２つの部分を持つ通常の標本スライドガラスである。ガラス製のカバーガラス１４は、ここでは、点線のカバーガラス１４ａおよび１４ｂによって表示される２つの位置に示される。第１のスライドガラスの上の位置１５ａと第２のスライドガラスの上の位置１５ｂは、スライドガラス１２の光を透過する部分１９の上に置かれたことを示すカバーガラスの配置の例である。スライドガラスの位置１５ａは、図２で見ると上側・左側の端に寄ったカバーガラスの配置を示す。スライドガラスの位置１５ｂは、下側・右側の端に寄ったカバーガラスの配置を示す。数字１６で示され、線１７によって輪郭を描かれた窓の部分は、スライドガラス受け２０のうち、スライドガラス・マウントの物理的制約によって、常にカバーガラスが存在する領域である。スライドガラス１２は、スライドガラス受け２０の上・左側角から下・右側角までの、スライドガラス受け２０の範囲内のどこかに位置する。スライドガラス受け２０に対するスライドガラス１２の位置に関わらず、窓の領域１６は、カバーガラスが常に見られる窓を供給する。本発明は、窓の領域１６の中からカバーガラスのエッジのサーチを開始することによって、この条件を利用する。以下の説明では、スライドガラスを、図２のように上から見る時、幅とは従来のデカルト座標システムでのＸ方向の寸法、高さとはＹ方向の寸法のことである。スライドガラス受け２０の上で、スライドガラス１２の位置は、「ステージ幅」対「ステージ高さ」の寸法の矩形の範囲内で変化する。この時「ステージ幅」とは受け２０の中のスライドガラスのための空間の寸法を表し、「ステージ高さ」とは受け２０の中のスライドガラスのための空間の高さの同様の空間的寸法を表す。スライドガラス１２の一部は、カバーガラス１４ａおよび１４ｂの部分によって覆われることのないラベル部分１８に使われている。ラベル部分はスライドガラス１２の上部に広がり、スライドガラス１２の左端から、「ラベル幅」として定義される幅を持っている。カバーガラス１４ａおよび１４ｂは、「カバーガラス幅」対「カバーガラス高さ」の最小の寸法を持っており、スライドガラス１２の上の任意の場所に接着されるので、カバーガラスの一部がスライドガラスからはみ出すことはなく、カバーガラスの一部がラベル部分に入ることもない。すなわち、「カバーガラス幅」はカバーガラスの幅を測定するパラメータであり、「カバーガラス高さ」はカバーガラスの高さを測定するパラメータである。ステージの限度とカバーガラスの最小寸法が与えられると、カバーガラスによって覆われなければならない領域１６の位置が計算される。左側のエッジの一番右寄りの位置「最大左」は以下のように計算される。「最大左」＝「ステージ幅」−「カバーガラス幅」右側のエッジの一番左寄りの位置「最小右」は以下のように計算される。「最小右」＝「ラベル幅」＋「カバーガラス幅」カバーガラスの下側のエッジの上限の値「最小上」とカバーガラスの上側のエッジの下限の値「最大下」は同様に以下のように計算される。「最大下」＝「ステージ高さ」−「カバーガラス高さ」「最小上」＝「カバーガラス高さ」Ｘ軸上で「最大左」と「最小右」を境界とする範囲と、Ｙ軸上で「最大下」と「最小上」を境界とする範囲がカバーガラスの下にならなければならない。同様に、カバーガラスの範囲の外側の境界は、以下の等式によって定義されるパラメータ「最小左」、「最大右」、「最小下」、「最大上」によって定義される。「最小左」＝「ラベル幅」「最大右」＝「ステージ幅」「最小下」＝０「最大上」＝「ステージ高さ」従って、カバーガラスのある特定のエッジを探すためには、サーチは必ずカバーガラスに覆われているはずの領域１６の内側から始め、１つの実施例でサーチの対象となっているエッジと直交する方向に進み、カバーガラスの外側の境界範囲の外側で終了する。本発明の装置は、少なくとも１つ、好適には多数のスライドガラスを保持するトレー２４を含む。本発明の例の１つでは、トレー２４は、顕微鏡のレンズ３０の下で動かせるような位置に８枚までのスライドガラスを保持する。トレー２４は受け２０を含み、受け２０は普通の範囲の寸法のスライドガラスを受け入れるのに適した寸法の開口部を含み、その開口部は容易にスライドガラスの挿入・取り外しができるような十分な広さを持っているので有利である。発明の例の１つでは、受けは、スライドガラスの位置が受け２０に対してＸ軸、Ｙ軸について２ミリメートルまで変化してもよい寸法になっている。また、スライドガラス１２に取り付けられるカバーガラス１４はスライドガラス１２より小さいので、スライドガラスのエッジ２２に対するカバーガラスの位置は変化する。この変化はスライドガラスの寸法とカバーガラスの寸法の両方に依存する。カバーガラスの位置の全体的な変化は、スライドガラス１２の上のカバーガラスの位置の変化とトレー２４の中のスライドガラスの位置の変化の合計である。この全体的な変化は、ある適用例では、標本を照明する光学システム２８が、照明される範囲は、レンズで見る視野の端から０．３１８ｍｍは障害物がないことを要求しているため重要である。カバーガラスのエッジは、その照明に対する影響のため、障害物とみなされる。当業者には、カバーガラスの厚さとスライドガラスの厚さが変化すれば、障害物を取り除かなければならない範囲の大きさも変化することを理解できるだろう。カバーガラス１４はスライドガラス１２に永続的に取り付けられているので、カバーガラス１４の角は各スライドガラスの座標システムを定義するための基準マークとして使用される。カバーガラスの角に基づく座標システムはスライドガラスの移動や回転に対して不変である。従って、カバーガラスの角に基づく座標システムの中に位置する物体は、スライドガラスがスライドガラスのトレーから取り外されて置き換えられたり、トレーの中で動かされたりしても見つけることができる。スライドガラスは、違う種類の顕微鏡が同じカバーガラスの角を正確に見つけることができ、カバーガラスがスライドガラスに対して動かないものだとすれば、違う種類の顕微鏡に移動することさえできる。本発明によって考慮されるようなカバーガラスのエッジを検出するプロセスの実施例の１つは、２つのサブプロセスを含む。エッジ検出ＦＯＶ処理と呼ばれる第１のサブプロセスは、画像処理コンピュータで行われ、顕微鏡から得られたＦＯＶ毎に１つの画像を分析して、エッジがあるかないかを判断する。ＦＯＶ処理結果収集・分析と呼ばれる第２のサブプロセスは、サーチ・パターンを指示し、画像処理コンピュータから得られた個々の画像を収集し、収集されたデータを分析してエッジの位置を判断し、サーチの追加を指示する。ここで図３を参照すると、視野の中のエッジを検出するために使用される処理の略図が示されている。ＦＯＶ処理装置５６８の１つであるエッジ検出ＦＯＶ処理装置は、４倍の対物レンズといった低倍率対物レンズを持つ顕微鏡から得られた１つの画像を受信する。本発明の一実施例では、画像は５１２×５１２ピクセルからなり、各ピクセルが２．７５ミクロン角の寸法を持っているので、画像の寸法は１．４０８ミリメートル角となる。画像の寸法は使用される装置の種類によって異なり、本発明はこの説明される例の特定のパラメータに制限されるものでないことを理解されたい。画像の前処理は、待ち行列の位置、エッジ・サーチの方向（すなわち、水平または垂直方向）、左右のエッジの位置の優先順位付けを含む、ホスト・コンピュータ５６８から送られた多数の入力パラメータを使用し、画像３３を標準化する。標準化は、垂直方向のみにサーチするために画像３３を方向づけするステップと、画像処理ステップのために画像を所定の画像バッファの中に位置づけるステップからなる。水平のエッジは、画像を９０度回転させて、垂直方向にサーチすることによって探し出される。図３のステップに関して以下より詳細に説明されるように、画像処理操作は、グレースケールの元の画像を受け取り、縦方向のエッジを強調し、画像３３の中の誤って検出された人為構造を除去することによって、対象となるエッジの信号対雑音比を改善する。垂直方向の長さとユニットの幅が徐々に大きくなる構造要素を使用して順次開放８４を行う。実質的な隣接する垂直エネルギーを持たない物体をフィルタで除去する。元のグレースケールの画像３３は、ステップ５２で水平に膨張変換される。これはステップ５４で垂直にも膨張変換され、ステップ５６で水平に閉鎖される。水平膨張変換ステップ５２の出力は、ステップ５８で元のグレースケールの画像から引き算され、３５×１水平膨張変換残余画像６４を供給する。垂直膨張変換ステップ５４の出力は、ステップ６０で元の画像から引き算され、ステップ６６で画像の１×６５垂直膨張変換残余を作り出す。１３×１水平閉鎖ステップ５６の出力は、ステップ６２で元の画像から引き算され、１３×１閉鎖残余画像６８を作り出す。ステップ７２では、１３×１閉鎖残余画像６８が１×６５垂直膨張変換残余画像から引き算されて細いエッジの画像７６を作り出す。ステップ７０で、３５×１水平膨張変換残余画像６４は１×６５垂直膨張変換残余画像６６から引き算されて太いエッジの画像７４を作り出す。ステップ８０で、細いエッジの画像７６は２倍され、ステップ７８で太いエッジの画像に加算されて、複合エッジ画像８２を作り出す。複合エッジ画像は図４で概説される処理によってフィルタをかけられ、フィルタをかけられたエッジの画像８６を作り出す。本発明の投影法はフィルタをかけられたエッジの画像８６から得られた画像にエッジがあるかどうかを判定する。画像は多数の異なった画像に分割される。１つの例では画像は４つの水平の領域に分割される。これによって本方法に局所画像コントラストを適用することが可能になる。各領域は異なったフィルタをかけられたしきい値を持っている。何重にも見ることによって本発明は傾いたエッジを処理することが可能になる。例えば、４つの視野を通る傾いたエッジがあるとすれば、エッジの１／４は各視野にわたるので、対象物のヒットになる。この対象物のヒットは本発明の投影プロセスの最後のステップで１つの傾いたエッジと相関され、非常に確実な方法である。相関ステップは壊れたエッジの画像も処理する。ここでフィルタをかけられたエッジの画像の処理を示す図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄ、図８Ｅおよび図８Ｆを参照する。図８Ａはフィルタをかけられたエッジの画像を示す。図８Ｂは各領域でピクセルの垂直投影が行われた、４つの均等な水平の領域に分割された画像を示す。各柱状の領域のピクセルの値の合計が計算された。図８Ｃは各領域の投影の結果を示す。数値が高いほど垂直なエッジのエネルギーが高いことが示される。各投影結果の曲線にローパス・フィルタがかけられる。図８Ｄはローパス・フィルタをかけた曲線を示す。この曲線は各領域に対象物があるかどうかを判定するしきい値として機能する。図８Ｅは発見された対象物を検出されたとおりに示す。それらは低い画像の質、不適切な照準や、不完全な画像処理のため連続的でないことがある。図８Ｆは対象物のヒットが最小の誤差基準と一致するように検出されたエッジを示す。ここで、フィルタを使ってエッジを描くために必要な処理の概略を示す図４を参照する。複合エッジの画像８２は、１×５垂直侵食ステップ９４で垂直に侵食され、その後１×９垂直膨張変換ステップ９６で垂直に膨張変換される。その後画像は、１×１３垂直侵食ステップ１０４で再び垂直に侵食され、１×１７垂直膨張変換ステップ１０２で再び垂直に膨張変換される。それは次いで１×２６垂直侵食ステップ９８で再び垂直に侵食され、１×３６垂直膨張変換ステップ１０６で垂直に膨張変換される。１×５１垂直侵食ステップ１０８における次の垂直侵食にはやはり、１×６７垂直膨張変換ステップ１１０における垂直侵食ステップが続く。画像はその後、より大きな構造要素によって、１×１０１垂直侵食ステップ１１２で再び垂直に侵食され、１×１３４垂直膨張変換ステップ１１４で垂直に膨張変換される。処理された出力はフィルタをかけられたエッジの画像８６である。残りの画像にあるのが実質上垂直のエネルギーを持つ対象物だけになるように、一度画像が上記で説明した処理によって強調されると、画像は４つの領域に水平に実質上等しく分割され、検出されたエッジの明暗度はこれらの領域に投影される。各領域は画像の幅と等しく、エッジの明暗度の４分の１の投影を表す。エッジの明暗度の投影は、領域の中の垂直方向のピクセルの合計からなる。より大きな垂直エネルギーを持つ対象物の合計は、小さい垂直エネルギーを持つ対象物より大きい数になる。対象物の投影の値は１つの方向でローパス・フィルタにかけられ、しきい値でカットされる。フィルタをかけられ、しきい値でカットされた投影を超える領域の投影が発生することをその都度対象物のヒットと呼ぶ。本発明は、正確に取り付けられたカバーガラスを持つスライドガラスは一切拒否しないという目標を持ってエッジの位置を見つける。実際に使用するためには誤って拒否する率が２〜３パーセントであることが要求される。図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄ、図８Ｅおよび図８Ｆは対象物のヒットとして検出されたエッジの例を示す。各グループからの対象物のヒットは、それらを相関させて完全な垂直の線にするために分析される。予想されるエッジは各領域からの１つの対象物のヒットから作られる。エッジとしてみとめられるには最低３つの領域での発見が含まれる。すなわち、エッジとして予想されるには、３つの領域または画像の３分の１にわたっていなければならない。それは連続した領域を含む必要はない。対象物の傾き（回転）は垂直の線から１０度以上あってはならない。線分の相関は好適にも最小の誤差基準と一致する。検討された点が上記の基準と一致する場合、エッジは検出されたとみなされ、エッジのある画像のピクセル位置はセーブされ復帰される。本発明の有益な実施例の１つでは、相関条件を満たす３つのエッジのうち最大のものはホストに戻される。３つ以上のエッジがある場合、ＦＯＶ処理に入力される１つの追加される方向が、復帰される３つのエッジの位置（一番左か一番右）を決定する。スライドガラス座標システムは、スライドガラスの長いエッジをＸ軸、短いエッジをＹ軸として規定される。通常すりガラスである、スライドガラスのラベル部分は左側に位置するので、正Ｘ軸はラベルから離れた方向に向かい、正Ｙ軸は上方に向かう。４つのエッジはそれぞれ、左側のエッジが小さいＸの値を持つ垂直のエッジ、右側のエッジが大きいＸの値を持つ垂直のエッジ、下側のエッジが小さいＹの値を持つ水平のエッジ、上側のエッジが大きいＹの値を持つ水平のエッジと呼ばれる。スライドガラスの下側と左側のエッジの交点が座標システムの基準である。ここで、ある特定のカバーガラスのエッジのサーチが一連の走査に分割されていることを表す図５および図６を合わせて参照する。簡単に要約すると、走査は開始点、方向、自動化顕微鏡画像収集と処理システムへの間隔、収集する画像の数を特定するステップを含む。サーチされるエッジの種類が水平か垂直かも特定される。画像収集・処理システムは画像を収集し、各画像の中で検出されたエッジの位置を送り返す。エッジは左（ステップ１２４）、下（ステップ１２６）、上（ステップ１２８）、右（ステップ１３０）の順でサーチされる。その後ステップ１３２のリストで、どれか１つのエッジでも見つけられなければ、エッジの位置を見つけるすべての試みは中止される。ある特定のエッジのサーチは、問題のエッジと直交する走査から始まる。この走査はクロス・サーチ・ステップ１５４と呼ばれる。クロス・サーチは、顕微鏡から得られた１つの画像の幅の７５パーセントに及ぶカバーガラスによって覆われているはずの部分１６の内側から始まる。下側、または上側のエッジがサーチの目標である場合、水平のエッジが予想され、左側、または右側のエッジがサーチされる場合、垂直のエッジが予想される。クロス・スキャン１５４で処理された１つかそれ以上の領域からエッジが検出された場合、フォロー・サーチが行われる。フォロー・サーチ１５６はエッジが検出された点を中心として開始され、方向は問題のエッジと平行で、間隔と回数はエッジを特定するのに十分なエッジが検出でき、カバーガラスの中にあると計算される範囲の外側をサーチしないように選択される。ここで本発明のカバーガラス検出法の１つの例を示す図５を参照する。カバーガラス検出プロセスはステップ１２２から始まる。このプロセスは最初にステップ１２４でカバーガラスの左側のエッジを見つけようとする。左側のエッジが見つかった場合、このプロセスはステップ１２６で下側のエッジを見つけるステップに進む。左側のエッジが見つからない場合、プロセスは拒否ステップ１３２に進み、標本は拒否される。ステップ１２６で下側のエッジが見つかると、プロセスは上側のエッジを探すステップ１２８に進む。上側のエッジが見つかった場合、プロセスは右側のエッジを探すステップ１３０に進む。下、上、または右どれかのエッジが見つからない場合、プロセスはすべてステップ１３２に進む。ステップ１３０で右側のエッジが見つかった場合、プロセスはカバーガラスの角を投影するステップ１３６に進む。プロセスは、角が直角であるかどうかを判定するステップ１３４に進む。ステップ１３４で、エッジが検出された後、検出されたエッジは本当のエッジが見つけられたことを保証するために確認される。カバーガラスの角は隣り合うエッジの組み合わせの交差を計算することによって投影される。この交差点は以下のいくつかの評価の中でも使用される。カバーガラスは９０度の角を持つ矩形であるので、隣り合うエッジの角度は所定の基準と比較される。角の角度がこの基準から外れていると、スライドガラス１２は、カバーガラスの位置を見つけることができないものとして、分析を拒否される。ステップ１３４で角が直角でないと判定されると、スライドガラスはステップ１３２で拒否される。角が直角であると判定されると、プロセスは長さが１０ｍｍの倍数であるかを判定するステップ１３８に進む。カバーガラスは通常幅が１０ｍｍの倍数であるように製造される。検出されたカバーガラスの幅は、ステップ１４０で、所定の公差の範囲内で４０、５０、６０ｍｍと比較される。幅がこれらの３つの幅の公差の範囲外にある場合、本当のエッジを探すためもう一度サーチが行われる。経験によれば、スライドガラスのラベル部分の近くにある左側のエッジがこのプロセスによってもっとも見落とされたり、このプロセスによってエッジとして検出されやすいエッジである。従って、右側のエッジが正確であると考えられ、フォロー・サーチ１５６は、右側のエッジから４０、５０、６０ｍｍの位置で行われる。このエッジが見つかった場合、カバーガラスの角の角度が次の基準によって再び評価される。この再トライ・サーチは一度だけ行われる。１つのエッジ位置が正しいと仮定して、一定の距離の位置に反対側のエッジを探す技術は、４つすべてのエッジに適用できるが、これまでの経験からここでそれを行う必要は示されない。エッジが１０ｍｍの倍数でない場合、プロセスはステップ１４０で右から４０ｍｍ、５０ｍｍ、６０ｍｍの位置に左側のエッジをサーチする。左側のエッジが見つかった場合、プロセスは、ステップ１４０で得られた新しいデータを使用して、もう一度角を投影するためにステップ１３６に戻る。ステップ１３４、ステップ１３８で、プロセスはもう一度繰り返され、ステップ１３８で長さが１０ｍｍの倍数であれば、ステップ１４２でカバーガラスの幅が許容できるかどうかを判定する。ステップ１３８でプロセスが繰り返された後で、長さが１０ｍｍまたはその倍数でなかった場合、プロセスはステップ１３２に進む。ステップ１４２で幅が許容できた場合、プロセスは、傾きの角度が許容できるかどうかを判定するステップ１４４に進み、ステップ１４４で傾きの角度が許容できた場合、プロセスはステップ１４８に進み、カバーガラスが承認されたことを報告する。ステップ１４２で幅が許容されなかった場合、プロセスはステップ１４６でスライドガラスを拒否する。ステップ１４０で右から４０ｍｍ、５０ｍｍ、６０ｍｍの位置での左側のエッジのサーチが成功しなかった場合、プロセスはスライドガラスを拒否するステップ１４６に進む。ここで、左、下、上または右のエッジを探しながらエッジがどこにあるかを判定するためのプロセスの流れの詳細を示す図６を参照する。プロセスはエッジを見つけるプロセスを開始するステップ１５２から始まる。プロセスはクロス・サーチを行うステップ１５４に進む。ステップ１５４でエッジが見つかった場合プロセスはフォロー・サーチ１５６に進み、エッジが見つからなかった場合、プロセスはエッジが見つかるまで、５回までサーチを行う。５回のサーチの後プロセスによってエッジが見つからないことが報告された場合、ステップ１５４でフォロー・サーチが行われる。フォロー・サーチでは、プロセスはエッジと見られる候補者を等級付けするステップ１５８に進む。その後プロセスは最良の候補者を選択するステップ１７２に進む。プロセスは、その最良の候補者が所定の一連の基準に対して資格を持っているかどうかを判定するステップ１７４に進む。候補者が資格を持っている場合、プロセスはエッジが承認されたことを報告するステップ１７６に進む。候補者が資格を持っていない場合、プロセスは次の最良の候補者を選択するステップ１７８に進む。次の最良の候補者が資格を持っていた場合、プロセスは再びステップ１７６に進む。すべての候補者が失格した場合、プロセスはエッジを拒否するステップ１８０に進む。ここで本発明の装置の走査の１つの断面図を示す図７Ａを参照する。スライドガラスのエッジ２０８、カバーガラスのエッジ２０６と共に、泡のエッジ２０２と接着剤の小滴２０４が示される。図７Ａは、通常見られるものを示すが、スライドガラスの上の画像構造はカバーガラスのエッジ２０６に続くスライドガラスのエッジ２０８と、カバーガラスを超えて広がる接着剤の小滴を含んでいる。図７Ｂは、菱形Ｄによって示される検出されたエッジの位置を示す。画像ｆ１〜ｆ７はフォロー・サーチを示す。画像ｃ１〜ｃ５はクロス・サーチを示す。図７Ｂは５つの画像のクロス・サーチと、クロス・サーチによって最初に検出されたエッジの位置を示す。それはまた、７つの画像のフォロー・サーチの画像の位置と各画像が菱形の符号で示された検出されたエッジも示す。クロス・サーチのために示された部分はわかりやすくするためわずかにオフセットされている。図７Ｃは、検出されたエッジの組み合わせからフィットした４つのライン１８２、１８４、１８６、１８８を本発明のプロセスがどのように決定したかの概略を示す。エッジが検出された位置は、ラインが描かれるデカルト平面上に点の集合を形成する。トライアル・ラインは各画像から最大１つのエッジを使ってフィットする。ラインのフィットは、通常の最小二乗法の直線のフィットの中のラインからの使われた点の合計を最小にする。各フォロー・サーチ１５６について、これらの基準を満足する多数のラインがフィットする。予想されるエッジの線は、ラインを定義するために少なくとも４つの点を使うプロセスによって推定される。フィットの際に使われる、点の数（ポイントカウントと呼ばれる）によって標準化される、「計算された」位置と測定された位置の差の誤差の合計は所定の値を超えてはならない。合計（abs（測定された_i−計算された_i））／ポイントカウント上記の等式で定義されるように、より小さい総誤差を持つラインが好ましい。カバーガラスの中心により近いラインが好ましい。１回のフォロー・スキャンで最大８の画像が処理され、３つまでのエッジのヒットがＦＯＶ処理から戻される。予想されるエッジをすべて描くように点を結び付けると、描きうるラインは３⁸すなわち６，５６１あるが、現実的な使用条件では、充分な組み合わせのサーチが妥当な時間内に行われるように、実際の数は普通はるかに少ない。図６に関して上記で列挙したエッジのフィットの基準は優先順である。サーチの間、ステップ１５８および１７２で見つけられたエッジが最上のエッジとされ、新しい候補者が見つかると、各アイテムをリストに入れる。候補者とみなされるためには、最初の２つがステップ１７４で合致すべき絶対的な基準である。第３のアイテムは総誤差の最も低いラインを選択するために使われる。カバーガラスの中心に最も近いラインを選択するステップは、タイ・ブレーカー・ステップ１７８として使われる。カバーガラスは通常所定の公差内の高さを持って製造される。検出されたカバーガラスの高さがこの公差を超えている場合、そのスライドガラスはカバーガラスの位置を見つけることができないため拒否される。経験によれば、高さの誤差による失格は幅による失格よりはるかに少ないので、再トライ・サーチは実行されない。カバーガラスは、カバーガラスのエッジがスライドガラスのエッジと正確に平行ではないように顕微鏡スライドガラスに固定されることがある。スライドガラスはまた、スライドガラスのエッジがステージの座標システムと正確に整合しないようにトレーに取り付けられることもある。こうした配置上の変化の合計は、カバーガラスがステージの座標システムに対して回転する最大角度を生じる。検出されたカバーガラスの方向は、下左側から下右側の角の投影点からのラインの角度を計算することによって判定される。この角度が所定の範囲外にある場合、そのスライドガラスはカバーガラスの傾きが大きすぎるために拒否される。本発明は４つのカバーガラスのエッジすべての位置を見つけるが、検出されたエッジはカバーガラスのエッジの内側の所定の距離にあるので、カバーガラスの下の充分な割合のサンプルが分析される。本発明の方法はまた、できるだけ短い時間でエッジの位置を見つける。実際の使用条件で、本発明の実施例の１つでは、実行に要する時間は約３０秒である。本発明はここで、特許法に適合し、当業者に、新しい原理を適用し、必要に応じてこれらの専門的な部品を設計・使用するために必要な情報を提供するためにかなり詳細に説明された。しかし、本発明は特にさまざまな装置やデバイスによって実行されるものであり、さまざまな変更が、装置の詳細と操作手順の両方に関して、本発明それ自体の範囲から離れることなく達成されることを理解されたい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者シュミット，ロバート，シー. アメリカ合衆国．98052 ワシントン，レッドモンド，ワンハンドレッドアンドシックスティファーストプレイスノースイースト 10014 (72)発明者リー，シー−ヨン，ジェー. アメリカ合衆国．98006 ワシントン，ベレヴュー，フォーティシックススストリート 14116 サウスイースト (72)発明者クアン，チー−チャウ，エル. アメリカ合衆国．98052 ワシントン，レッドモンド，ハンドレッドスコート 18217 ノースイースト

Claims

【特許請求の範囲】１．顕微鏡スライドガラスのカバーガラスを検出する装置であって、（ａ）顕微鏡スライドガラスのカバーガラス（１４）が顕微鏡スライドガラスのカバーガラスのエッジ（２０６）を持つ、顕微鏡スライドガラスのカバーガラス（１４）を持つ顕微鏡スライドガラス（１２）を設置するための可動ステージ（５２０）と、（ｂ）顕微鏡スライドガラスのカバーガラス（１４）の画像を得るための画像手段（５０２）と、（ｃ）画像を受信・処理し、顕微鏡スライドガラスのカバーガラスのエッジ（２０６）の位置を見つけるための画像処理装置（５３６）と、（ｄ）顕微鏡スライドガラスのカバーガラス（１４）を照明するために置かれた光源（５０８）と、を含む装置。２．画像処理装置（５３６）が、（ａ）画像処理装置（５３６）からの画像を処理するために画像処理装置（５３６）に接続された視野処理装置（５６８）と、（ｂ）視野処理装置（５６８）を制御するためのホスト・コンピュータ（５６２）と、を含む、請求項１に記載の装置。３．画像処理装置（５３６）が顕微鏡スライドガラスのカバーガラス（１４）の所定の範囲をサーチする、請求項１に記載の装置。４．画像処理装置（５３６）がエッジの画像を得るために少なくとも１回の形態学的操作を行う、請求項１に記載の装置。５．視野処理装置（５６８）が、太いエッジの画像（７４）、細いエッジの画像（７６）、複合されたエッジの画像（８２）を生じるために、３５ ×１水平膨張変換（５２）、１×６５垂直膨張変換（５４）、および１３×１水平閉鎖（５６）を行う、請求項２に記載の装置。６．複合されたエッジの画像（８２）がフィルタをかけられたエッジの画像（８６）に処理される、請求項１に記載の装置。７．顕微鏡スライドガラス（１２）がさらに、パパニコロー法によって準備された標本を含む、請求項１に記載の装置。８．画像手段（５０２）がＣＣＤカメラ（５１２）を含む、請求項１に記載の装置。９．光源（５０８）がアーク・ランプである、請求項１に記載の装置。 10．光源（５０８）がストロボ・アーク・ランプである、請求項１に記載の装置。 11．関心のある対象物のために少なくとも１組の点座標を収集するための手段をさらに含み、少なくとも１組の点座標が所定のフィットでライン（１８２、１８４、１８６、１８８）にフィットする（図７Ｃ）、請求項１に記載の装置。 12．所定のフィットが最小二乗法の誤差フィットである（図７Ｃ）、請求項１１に記載の装置。 13．点座標の複数の集合が所定のフィットでフィットし（図７Ｃ）、複数の点座標の集合の１つが所定の基準（１７４）を満たすものとして選択される、請求項１１に記載の装置。 14．所定のフィットが多数の点からなり（図７Ｃ）、所定の基準（１７４）が、所定のフィットで使用される点の数によって標準化される点の複数の集合（図７Ｃ）の各々の計算された位置から引き算された測定された位置に実質上等しい差によって定義される総誤差からなり、それが所定の値を超えない、請求項１３に記載の装置。 15．さらに、顕微鏡スライドガラスのカバーガラスのエッジ（２０６）がお互いに所定の公差内で実質上垂直か（１３４）どうかをチェックするための手段を含む、請求項１に記載の装置。 16．画像処理装置（５３６）がさらに、多数の視野を処理するための複数の視野処理装置（５６８）を含む、請求項１に記載の装置。 17．スライドガラスの上のカバーガラスを検出するための方法であって、（ａ）左側のエッジを見つけるステップ（１２４）と、（ｂ）下側のエッジを見つけるステップ（１２６）と、（ｃ）上側のエッジを見つけるステップ（１２８）と、（ｄ）右側のエッジを見つけるステップ（１３０）と、（ｅ）各交差する組み合わせのエッジの角を投影するステップ（１３６）と、（ｆ）各角が直角であることを判定するステップ（１３４）と、（ｇ）各角が直角でない場合スライドガラスを拒否し（１３２）、各角が直角である場合、カバーガラスの長さが第１の長さの倍数であるかどうかを判定し（１３８）、各長さが第１の長さの倍数でない場合、スライドガラスの右側のエッジから第２の距離、第３の距離、第４の距離に左側のエッジをサーチする（１４０）ステップと、（ｈ）カバーガラスの幅が適切かどうかを判定し（１４２）、適切でない場合、スライドガラスを拒否し（１４６）、適切な場合、カバーガラスの傾きの角度が適切かどうかを判定し（１４４）、適切な場合、スライドガラスを受け入れ（１４８）、適切でない場合、スライドガラスを拒否する（１４６）ステップと、を含む方法。 18．第１の距離が１０ｍｍ（１３８）であり、第２の距離が４０ｍｍ、第３の距離が５０ｍｍ、第４の距離が６０ｍｍ（１４０）である、請求項１７に記載の方法。 19．カバーガラスのスライドガラスを等級付けする方法であって、（ａ）エッジを見つけるためにクロス・サーチを行うステップ（１５４）と、（ｂ）複数のエッジの候補を得るためにフォロー・サーチを行うステップ（１５６）と、（ｃ）所定の基準の組み合わせに従って、複数のエッジの候補を１つずつ等級付けするステップ（１５８）と、（ｄ）少なくとも１つのエッジの候補を選択するステップ（１７２）と、（ｅ）少なくとも１つのエッジの候補が資格を有するかどうかを判定し（１７４）、少なくとも１つのエッジの候補が資格を有する場合、少なくとも１つのエッジの候補を受け入れ（１７６）、さもなければ次の最上のエッジを選択する（１７８）ステップと、（ｆ）資格を有するエッジだけを選択するステップ（１８０）と、を含む方法。 20．カバーガラスの下の対象物を位置合わせする方法であって、（ａ）顕微鏡スライドガラス（１２）に対する顕微鏡カバーガラス（１４）の位置を見つけるステップと、（ｂ）カバーガラス（１４）に対して関心のある少なくとも１つの対象物の位置を見つけるステップと、（ｃ）顕微鏡スライドガラス（１２）を設置し直して、カバーガラス（１４）を少なくとも１つの関心のある対象物の位置を見つけるための座標システムの基礎として利用するステップと、を含む方法。 21．スライドガラス（１２）の上のカバーガラス（１４）を検出する方法であって、（ａ）コンピュータ制御に応答して、スライドガラス（１２）の何らかの部分の画像を得るステップ（５６２）と、（ｂ）均一な光源で下からスライドガラス（１２）を照明するステップ（５０８）と、（ｃ）スライドガラス（１２）の所定の範囲（１７）内でスライドガラス（１２）の一部分（１６）が見られるようにスライドガラス（１２）を位置決めするステップと、（ｄ）スライドガラス（１２）が選ばれたエッジの方向に動いた後で再びスライドガラス（１２）の画像を得るステップと、（ｅ）エッジの対象物の位置を見つけるステップ（１５４）と、（ｆ）多数の視野についてエッジの対象物をフォローするステップ（１５６）と、（ｇ）エッジの対象物が所定の基準の組み合わせを満足するかどうかを判定し（１７４）、満足する場合、カバーガラスのエッジ（２０６）が発見されたと判断するステップと、を含む方法。 22．所定の基準の組み合わせがさらに、エッジの対象物がお互いに所定の公差内で実質上垂直かどうかをチェックする（１３４）ステップを含む、請求項２１に記載の方法。 23．フォーカス・マップを作成するためのデータ面の測定が完全にカバーガラス（１４）の下のデータだけから行われるように、検出されたエッジ（２０６）が物理的なエッジから第１の距離（１３８）だけしか離れていない、請求項２１に記載の方法。 24．顕微鏡スライドガラスのカバーガラスの画像のディジタル表現を投影する方法であって、画像（３３）が一視野以上に広がっており、（ａ）複数の固有の画像（７４、７６）の各１つがスライドガラスのカバーガラスのエッジ（２０６）のデータの要素を含むように、画像（３３）を視野の複数の固有の画像（７４、７６）に分割するステップと、（ｂ）エッジの要素（図７Ｂ）からなる各データの要素について、対象物がヒットしたかを判定するステップと、（ｃ）各下位画像中のエッジの要素（図７Ｃ）を顕微鏡のエッジの画像（８２）と相関させるステップと、を含む方法。 25．複数の固有の画像がフィルタをかけられたエッジの画像（８６）からなる、請求項２４に記載の方法。 26．ロー・パス・フィルタの演算子がフィルタをかけられたエッジの画像（８６）に対して操作される、請求項２４に記載の方法。 27．エッジを表すデータの要素が対象物のヒットを判定するためのしきい値にかけられる（図８Ｄ）、請求項２４に記載の方法。 28．さらに、フィルタをかけられたエッジの画像（８６）を生じるために、少なくとも１つの形態学的な演算子によって、複数の固有の画像（７４、７６）にフィルタをかけるステップを含む、請求項２４に記載の方法。 29．少なくとも１つの形態学的演算子（５２、５４、５６、６４、６６、６８）が、侵食、膨張変換、垂直侵食、垂直膨張変換からなるグループから選択される、請求項２８に記載の方法。 30．複数の固有の画像（７４、７６）を下位画像がエッジの画像のエネルギーの一部を含むように複数の下位画像に分割するステップを含む、請求項２９に記載の方法。 31．フィルタをかけられたエッジの画像（８６）がしきい値にかけられた結果、フィルタをかけられ、しきい値を超える領域の投影の発生が各々対象物のヒットと判定される（図８Ｄ）、請求項３０に記載の方法。