JPH10500854A

JPH10500854A - 新規な寄生虫プロテアーゼの遺伝子およびタンパク質

Info

Publication number: JPH10500854A
Application number: JP7530582A
Authority: JP
Inventors: アントリップ、シンシア; アール．フランク、グレン; ビー．グリーブ、ロバート
Original assignee: ヘスカコーポレイション
Priority date: 1994-05-26
Filing date: 1995-05-25
Publication date: 1998-01-27
Also published as: WO1995032988A1; AU702915B2; CA2189741A1; US5691186A; US5750391A; EP0766693A1; AU2651695A; EP0766693A4

Abstract

(57)【要約】本発明は、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼおよび糸状虫システインプロテアーゼのタンパク質、そのようなタンパク質をコードする配列を有する核酸分子、そのようなタンパク質に対して誘発した抗体、ならびに寄生虫の金属エンドペプチダーゼまたはシステインプロテアーゼの活性を阻害できる化合物に関する。本発明は、そのような核酸分子、タンパク質、抗体および阻害剤を得る方法も包含する。本発明は、そのような核酸分子、タンパク質、抗体および阻害剤を含む治療組成物ならびに寄生虫、例えば心糸状虫が生起する疾病から動物を保護するためのそれらの用途も包含する。

Description

【発明の詳細な説明】新規な寄生虫プロテアーゼの遺伝子およびタンパク質発明の分野本発明は、新規な寄生虫プロテアーゼの遺伝子、そのような遺伝子がコードするタンパク質、そのようなタンパク質に対して誘発した抗体、およびそのようなタンパク質を用いて生産したプロテアーゼ阻害剤に関する。本発明の特定のプロテアーゼは、アスタシン金属エンドペプチダーゼ、およびシステインプロテアーゼを包含する。本発明は、そのような核酸分子、タンパク質、抗体および阻害剤を含む治療組成物ならびに寄生虫、例えば、心糸状虫のような組織移動性の蠕虫が生起する疾病から動物を保護するためのそれらの用途も包含する。発明の背景ヒトをはじめとする、動物における寄生虫の感染は、化学的薬物を用いて治療するのが一般的であるが、それは、入手できる効果的なワクチンが基本的に皆無だからである。化学的薬物の一つの短所は、頻繁に投与しなければならないことである。例えば、心糸状虫に対する感受性を有するイヌは、一般に、毎月投与して、薬物の保護的レベルを維持する。しかし、寄生虫の感染を治療するための薬物の反復投与は、もはや治療に応答しない耐性系統の発生を招くことが多い。その上、化学的薬物の多くは、治療しようとする動物に有害であり、耐性が築かれるために、より多くの投与量が必要となるにつれて、副作用がはるかに強くなる。寄生虫の感染に対するワクチンを開発することは、寄生虫の生活環が複雑なことと、寄生虫または寄生虫抗原の投与は、有意な抗体応答の形成へと導くことができるが、免疫応答が、一般に、感染に対して動物を保護するには不充分であることとの双方のために、特に困難である。ほとんどの寄生虫に関しては、イヌ糸状虫Dirofilaria immitis、すなわち心糸状虫を生じる蠕虫の生活環は、様々な生活形態を包含し、その各々が、免疫化に対して異なる標的を提示し、かつ挑戦する。この寄生虫の成体形は、極めて大型であり、動物の心臓および肺動脈に優先的に棲息する。雄虫は、一般に、約１２〜約２０センチメートル（cm）の長さで、約０．７〜約０．９ミリメートル（mm）の幅があり；雌虫は、約２５〜約３１cmの長さで、約１．０〜約１．３mm の幅がある。性的に成熟した成虫は、交尾後に、僅かに約３００マイクロメートル（μm）の長さで、約７μmの幅があるにすぎないミクロフィラリアを生み出す。ミクロフィラリアは、毛細血管床を横断し、イヌの脈管系を、血液１ミリリットル（ml）あたりミクロフィラリア約１０³〜約１０⁵匹の濃度で循環する。イヌにおける感染を証明する一つの方法は、循環するミクロフィラリアを検出することである。イヌを無昆虫の環境に保つならば、寄生虫の生活環は進行しない。しかし、ミクロフィラリアが、感染したイヌでの血液摂食の際に雌のカ（蚊）によって摂取されたときは、その後のミクロフィラリアの幼生への発育がカの体内で生じる。ミクロフィラリアは、２段階の幼生期（Ｌ１およびＬ２）を通過し、最後に、約１．１mmの長さの成熟した第三期幼生（Ｌ３）になり、次いで、カが咬むことによって、イヌに逆伝搬され得る。したがって、最初の感染の原因となるのは、このＬ３期である。感染の早くも３日後には、Ｌ３は第四幼生期（Ｌ４）、次いで、第五期、すなわち未熟成虫へと脱皮する。未熟成虫は、心臓および肺動脈へと移動し、ここで、成熟かつ繁殖し、こうして血中にミクロフィラリアを生み出す。イヌでの心糸状虫による「潜在的な」感染は、ミクロフィラリアは全く検出できないが、胸部検診によって、成体糸状虫の存在が判定できることとして定義される。脱皮過程および組織移動は、双方とも、プロテアーゼを包含する、１種類またはそれ以上の酵素の作用を必要とするものと思われる。プロテアーゼ活性は、哺乳動物ならびに多数の寄生虫（幼生の外分泌−分泌生成物も包含する）でも同定されているが、一見して、いかなる寄生虫のアスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子、またはいかなる糸状虫のシステインプロテアーゼ遺伝子も全く同定されていない。アスタシン金属エンドペプチダーゼ（ザリガニに見出された金属エンドペプチダーゼのアスタシンとの類似性のために、そのように呼ばれる）は、金属プロテアーゼの比較的新しく認められた部類であって、一見して、ショウジョウバエ属、ミバエ、アフリカツメガエル属のカエルおよびウニならびにヒト、マウスおよびラットでも見出されている；例えば、Gomis-Ruthら、1993、J.Mol.Biol.、229、 945〜968；Jiangら、1992、FEBS Letters 312、110〜114；およびDumermuthら、 1991、J．Biol．Chem．266、21381〜21385を参照されたい。ヒト腸管とマウス腎臓との刷子縁の金属エンドペプチダーゼは、約８２％の相同性をアミノ末端の１９８アミノ酸で共有する。両者は、アスタシン、およびヒトの骨の形態形成タンパク質１のアミノ末端ドメインとは、約３０％の相同性を共有する。アスタシン族の成員は、拡大亜鉛結合ドメインの主題的要素を共有し、その共通配列は、Du mermuthら［前掲］によって、ＨＥＸＸＨＸＸＧＦＸＨＥ［ここで、Ｈはヒスチジン、Ｅはグルタミン酸、Ｇはグリシン、Ｆはフェニルアラニンであり、Ｘは、いかなるアミノ酸であることもできる］であるとして同定された。Gomis-Ruthら［前掲］は、亜鉛結合ドメインの主題的要素を、Ｈｉｓ−Ｇｌｕ−Ｕａａ−Ｘａａ−Ｈｉｓ−Ｘａａ−Ｕａａ−Ｇｌｙ−Ｕａａ−Ｘａａ−Ｈｉｓ［ここで、Uaa は大容積非極性残基を有するアミノ酸である］として定義している。Jiangら［前掲］は、ＨＥＩＧＨＡＩＧＦＸＨＥ（下線をつけた文字は厳格に保存されている）として表した、拡大亜鉛結合ドメインの主題的要素ばかりでなく、アスタシン金属エンドペプチダーゼ間で保存された、ほぼ第１５番〜ほぼ第１９番のアミノ酸にわたるＲＸＤＲＤ、およびほぼ第５３番〜ほぼ第６１番のアミノ酸にわたるＹＤＹＸＳＩＭＨＹを含む、他の２種類の配列も開示して、拡大亜鉛結合ドメインの主題的要素中の最初のヒスチジンが、アミノ酸第１位であると考えた。第１、５および１１位の３個のヒスチジンは、第６１位のチロシンがそうであるように、亜鉛の結合を担うものと思われる。第２位のグルタミン酸は、触媒作用を担う。その他の重要なアミノ酸は、二次構造に関与する第８位のグリシン、および成熟酵素のアミノ末端で塩結合を形成する第１２位のグルタミン酸を包含する。特に活性部位の前後の、共通配列は、セリンおよびシステインプロテアーゼについても同定されている；例えば、Sakanariら、1989、Proc．Natl．Acad．Sci ．USA、86、4863〜4867を参照されたい。システインプロテアーゼ遺伝子は、いくつかの哺乳動物の源泉、および線虫である捻転胃Haemonchus contonus［例えば、Prattら、1992、Mol.Biochem.Parasitol.、51、209〜218］およびカエノラーブジチス・エレガンスCaenorhabditis elegans［Rayら、1992、Mol.Biochem .Parasitol.、51、239〜250］から単離されているが、そのような遺伝子のクローニングは、新規なシステインプロテアーゼ遺伝子のクローニングが簡単であることを必ずしも予測させない。その理由としては、特に、異なるシステインプロテアーゼが共有する配列は、共通配列に基づくプローブおよびプライマーが、高度に縮重しているようなものだからである。心糸状虫は、感染後に免疫を発生できない（すなわち、化学療法で治癒した後でさえ、イヌが再感染することがあり得る）のが一般的である、イヌにおける主要な問題であるばかりでなく、他の伴侶動物、例えばネコやフェレットにもますます蔓延するようになっている。心糸状虫の感染は、ヒトでも報告されている。他の寄生虫の感染も蔓延しており、すべてが、予防的ワクチン計画を包含する、より優れた処置、および／または標的とする薬物療法を必要としている。発明の概要本発明の一実施態様は、厳格な条件下で、イヌ糸状虫のアスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子とハイブリダイズできる、単離された寄生虫核酸分子である。そのような核酸分子、すなわち寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの核酸分子は、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子の調節領域を含むこと、および／または寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子の少なくとも一部をコードすることができる。本発明の好適な核酸分子は、配列番号１および／または配列番号２の少なくとも一部を含む。本発明は、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの核酸分子を含む、組換え分子および組換え細胞も包含する。本発明のそのような核酸、組換え分子および組換え細胞を製造する方法も包含される。本発明の別の実施態様は、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼのタンパク質またはそのようなタンパク質のミメトープを含む、単離されたタンパク質である。本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、好ましくは、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を有し、および／または、効果的な方式で動物に投与したとき、天然の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質に対する免疫応答を誘発できるタンパク質を含む。本発明は、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害剤ならびに本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質および／またはそのミメトープを認識する（すなわち選択的に結合する）抗体も包含する。本発明のそのようなタンパク質、阻害剤および抗体を生産する方法も含まれる。本発明の更に別の実施態様は、厳格な条件下で、イヌ糸状虫のシステインプロテアーゼ遺伝子とハイブリダイズできる、糸状虫の線虫の単離された核酸分子である。そのような核酸分子、すなわち糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子は、糸状虫のシステインプロテアーゼ遺伝子の調節領域を含むこと、および／または糸状虫のシステインプロテアーゼタンパク質の少なくとも一部をコードすることができる。本発明の好適な核酸分子は、配列番号１２の少なくとも一部を含む。本発明は、本発明の糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子を含む組換え分子および組換え細胞も包含する。本発明のそのような核酸、組換え分子および組換え細胞を生産する方法も包含される。本発明の別の実施態様は、糸状虫システインプロテアーゼのタンパク質またはそのようなタンパク質を包含する、単離されたタンパク質である。本発明の糸状虫システインプロテアーゼタンパク質は、好ましくは、システインプロテアーゼ活性を有し、および／または、有効な仕方で動物に投与したとき、天然の糸状虫システインプロテアーゼタンパク質に対する免疫応答を誘発できるタンパク質を含む。本発明は、システインプロテアーゼ活性の阻害剤ならびに本発明の糸状虫のシステインプロテアーゼタンパク質および／またはそのミメトープを認識する（すなわち選択的に結合する）抗体も包含する。本発明のそのようなタンパク質、阻害時および抗体を生産する方法も包含される。本発明の更に別の実施態様は、寄生虫が生起する疾病から動物を保護できる治療組成物である。そのような治療組成物は、下記の保護化合物のうち１種類以上を含む：単離された寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質またはそのミメトープ；厳格な条件下で、イヌ糸状虫のアスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子とハイブリダイズできる単離された寄生虫核酸分子；抗寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ抗体；寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害できるその能力によって同定される、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害剤；単離された糸状虫線虫システインプロテアーゼタンパク質またはそのミメトープ；厳格な条件下で、イヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子とハイブリダイズできる、単離された糸状虫線虫核酸分子；抗糸状虫線虫システインプロテアーゼ抗体；および糸状虫線虫システインプロテアーゼ活性を阻害できるその能力によって同定される、システインプロテアーゼ活性の阻害剤。寄生虫が生起する疾病から動物を保護する方法であって、本発明の治療組成物を効果的な仕方で動物に投与することを含む方法も包含される。本発明の好適な治療組成物は、動物を心糸状虫から保護できる組成物である。本発明は、寄生虫のアスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害できる化合物を同定する方法も包含する。そのような方法は、（ａ）単離された寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を、推定される阻害化合物の不在下では、アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質がアスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を有するという条件下で、推定される阻害化合物と接触させること；および（ｂ）該推定阻害化合物がアスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害するか否かを決定することを含む。アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害できる化合物を同定するための試験キットであって、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を有する、単離された寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質、および推定阻害化合物の存在下で、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害の程度を決定する手段を含む試験キットも包含される。寄生虫のシステインプロテアーゼ活性を阻害できる化合物を同定する方法も、本発明に包含される。そのような方法は、（ａ）単離された糸状虫システインプロテアーゼタンパク質を、推定阻害化合物の不在下では、糸状虫システインプロテアーゼタンパク質がシステインプロテアーゼ活性を有するという条件下で、推定阻害化合物と接触させること；および（ｂ）該推定阻害化合物がシステインプロテアーゼ活性を阻害するか否かを決定することを含む。寄生虫のシステインプロテアーゼ活性を阻害できる化合物を同定するための試験キットであって、システインプロテアーゼ活性を有する、単離された糸状虫システインプロテアーゼタンパク質、および推定阻害化合物の存在下で、システインプロテアーゼ活性の阻害の程度を決定する手段を含む試験キットも包含される。発明の詳細な説明本発明は、イヌ糸状虫のような寄生虫が、アスタシン金属エンドペプチダーゼを発現するという発見を包含する。そのため、本発明は、そのようなタンパク質をコードする核酸分子ならびに該タンパク質自体も包含する。本発明者らの知るところでは、アスタシン金属エンドペプチダーゼは、以前は、ヒト、マウス、ラット、ザリガニ、ショウジョウバエ属、アフリカツメガエル属およびウニでのみ見出されているにすぎない。本発明は、糸状虫線虫のシステインプロテアーゼをコードする核酸分子とシステインプロテアーゼ自体との、本発明者らによるそのような核酸分子の困難で、時間のかかる探求の後の、最初の同定および単離も包含する。本発明の単離された核酸分子およびタンパク質は、そのような核酸分子やタンパク質の同族体も含めて、寄生虫の感染から動物を保護することと、下記に開示されるものをはじめとするその他の適用との双方に役立つ。本発明の一実施態様は、単離された寄生虫（もしくは寄生虫性）アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質またはそのミメトープ（すなわち寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質のミメトープ）である。本発明によれば、単離されたか、または生物学的に純粋なタンパク質は、その自然の環境から取り出されたタンパク質である。そのため、「単離（された）」および「生物学的に純粋な」は、該タンパク質が精製された程度を必ずしも反映しない。単離された寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、その天然の源泉から得られる。そのような単離タンパク質は、組換えＤＮＡ技術または化学的合成を用いても製造できる。本明細書に用いられるように、単離された寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、完全な長さのタンパク質、またはそのようなタンパク質のいかなる同族体、例えば、該同族体がアスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を有し、および／または天然のイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質に対する免疫応答を誘発できるように、アミノ酸を削除し（例えば、該タンパク質の断端した翻案、例えばペプチド）、挿入し、転化し、置換し、および／または（例えばグリコシル化、リン酸化、アセチル化、ミリスチル化、プレニル化、パルミチン酸付加、アミド化および／またはグリコシルホスファチジルイノシトールの付加によって）誘導体化したタンパク質であることもできる。本明細書に用いられるように、その完全な長さの翻案が拡大亜鉛結合ドメインを含むタンパク質である、アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、アスタシン、および「アスタシン族の金属エンドペプチダーゼ」のその他の成員に類似の特徴性を有する；例えばDumermuthら［前掲］を参照されたい。アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を有するタンパク質は、亜鉛依存性プロテアーゼのアスタシンに類似の仕方でタンパク質を切断できるタンパク質である。アスタシン活性は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）および１，１０−フェナントロリンのような金属キレート化剤によって阻害されるが、サーモリシンや中性エンドペプチダーゼを包含するいくつかの他の金属エンドペプチダーゼの阻害剤である、ホスホラミドンによっては阻害されない。そのような活性は、当業者が検出できる（例えばDumermuthら［前掲］を参照されたい）。天然タンパク質に対する免疫応答を誘発できるタンパク質は、当業者に公知の手法を用いて、そのタンパタ質（例えば該天然タンパク質またはその同族体）を免疫原として動物に投与したとき、該天然タンパク質（例えば、イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼまたはイヌ糸状虫システインプロテアーゼ）に対する免疫応答（体液性および／または細胞性）を誘発できる１個以上のエピトープを有するタンパク質である。免疫応答を遂行できるタンパク質の能力は、当業者に公知の手法を用いて測定できる。免疫応答を測定する方法（例えば抗体検出、感染に対する耐性）の例を、本明細書に開示する。完全な長さのタンパク質の同族体を包含する、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、厳格な条件下で、イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子と（すなわちそれに）ハイブリダイズできる核酸分子によってコードされているという別の特徴性を有する。本発明の好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、厳格な条件下で、配列番号１および／または配列番号２として開示される核酸配列の少なくとも一部とハイブリダイズできる。本明細書に用いられるように、ある実体「の少なくとも一部」という語句は、その実体の機能的側面を有するのに少なくとも充分である、ある量の実体を指す。例えば、本明細書に用いられるように、核酸配列の少なくとも一部とは、厳格なハイブリダイゼーション条件下で、安定したハイブリッドを形成できる、ある量の核酸配列である。本明細書に用いられる限りで、厳格なハイブリタイゼーション条件とは、類似の配列を同定するために、オリゴヌクレオチドも包含する核酸の分子（または配列）が用いられる、標準的なハイブリダイゼーション条件を指す。そのような標準的な条件は、例えばSambrookら［Molecular Clonin g:A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Labs.Press、1989］に開示されている。そのような条件の例は、実施例のセクションで与えられる。安定したハイブリッドを形成するのに必要な相同性の程度は、相同な配列が、核酸分子全体に散在しているか、または核酸分子の明確な領域に密集（すなわち局在）しているかによって、変動し得ることに留意しなければならない。また、本発明によれば、アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質の少なくとも一部は、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を有するのに、および／または天然の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼに対する免疫応答を誘発できるのに充分な大きさのタンパタ質である。配列番号１および配列番号２は、それぞれｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉およびｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆で示される、２個のｃＤＮＡ（相補的ＤＮＡ）核酸分子の推定配列を表し、その生産は、実施例に開示する。核酸配列決定の技術が完全に誤りかないわけではないため、配列番号１および配列番号２は、最良でも、それぞれの核酸分子の見かけの核酸配列を表すことに留意しなければならない。下記に更に詳細に考察するとおり、核酸分子ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉およびｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆は、配列番号１および配列番号２から推定されるとおり、重複する開放読み枠を見かけ上含む。核酸分子ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉は、本明細書ではＰＤｉＭＰＡ１_ORF1、ＰＤｉＭＰＡ１_ORF2およびＰＤｉＭＰＡ１_ORF3と呼ぶ３個の開放読み枠を見かけ上含み、その推定アミノ酸配列を、それぞれ配列番号３、配列番号４および配列番号５に開示する。核酸分子ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆は、本明細書ではＰＤｉＭＰＡ２_ORF1、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF2、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF3、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF4およびＰＤｉＭＰＡ２_ORF5と呼ぶ５個の開放読み枠を見かけ上含み、その推定アミノ酸配列を、それぞれ配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９および配列番号１０に開示する。両核酸分子の開放読み枠が重複することは、生体内での機能的なアスタシン金属エンドペプチダーゼの翻訳が枠移動を伴い得るという、可能性を増大させる。配列番号１および配列番号２は、ともに、ステム−ループ構造を包含する核酸配列を含み、それらが、枠移動ウイルス遺伝子発現のために、リボソームの減速に、したがって枠移動翻訳にも関係している。核酸分子ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉ およびｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆は、交互的なスプライシングの形状の結果でもあり得る。配列番号１１は、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆がコードする５個の開放読み枠から導出される複合アミノ酸配列を表す。そのため、配列番号１１は、開示された開放読み枠の組合せ、この場合は、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF1、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF2、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF3、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF4およびＰＤｉＭＰＡ２_ORF5の組合せの例である。配列番号１１のアスタシンドメインは、ザリガニアスタシンのアミノ酸配列との、約２９％のアミノ酸配列の相同性（すなわち比較できる領域内での同一性）を有する。本明細書に用いられるように、アスタシンドメインは、ザリガニアスタシンとの有意な相同性を共有する約２００アミノ酸のアミノ酸配列であり、これは２００アミノ酸タンパク質である。配列番号１１のアスタシンドメインは、ほぼアミノ酸第９９〜２９６位までにわたる。配列番号１１のアスタシンドメインは、ヒト骨形態形成タンパク質１、マウス腎刷子縁金属エンドペプチダーゼ、ヒト腸管刷子縁金属エンドペプチダーゼおよびアフリカツメガエルXenopuslae vis の胚タンパク質ＵＶＳ．２のアスタシンドメインとも、それぞれ約３０％、３１％、３３％および３３％のアミノ酸レベルでの相同性を共有する（Dumermut hら［前掲］に与えられた配列を用いた）。本発明の好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、配列番号１１のアスタシンドメインとの（すなわち配列番号１１のアタシンドメインの対応する領域との）、約３５％以上の、より好ましくは約４５％以上の、さらに好ましくは約６０％以上の、はるかに好ましくは約７５％以上のアミノ酸の相同性を有するアミノ酸配列を含む。本発明の、より好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、下記の開放読み枠のうち一つ以上の少なくとも一部を含む：ＰＤｉＭＰＡ１_ORF1、ＰＤｉＭＰＡ１_ORF2、ＰＤｉＭＰＡ１_ORF3、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF1、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF2、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF3、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF4およびＰＤｉＭＰＡ２_ORF5：その推定アミノ酸配列を、それぞれ配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９および配列番号１０に開示する。本発明の好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、拡大亜鉛結合ドメインの主題的要素を含む。より好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、Jiangら［前掲］によって同定され、上記に開示したとおりの、チロシン亜鉛結合アミノ酸含有ドメインも含む。寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質の同族体は、天然の対立遺伝子の変異、または自然突然変異の結果であることができる。同族体は、該タンパク質に対する直接の修飾、あるいは、例えば、無作為の、もしくは標的とする突然変異誘発を実施するための古典的な、または組換えＤＮＡによる手法を用いた、該タンパク質をコードする遺伝子に対する修飾を包含するが、それらに限定されない、当技術に公知の手法を用いても、生産できる。同族体も包含する本発明の単離アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を遂行でき、および／または寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質に対する免疫応答を誘発できる、該タンパク質の能力によって、簡明な方式で同定できる。そのような同定手法の例を本明細書に開示する。本発明の単離のタンパク質の最小の大きさは、１エピトープを形成するのに充分であって、一般的には、少なくとも約７〜約９アミノ酸の大きさである。当業者が認識するとおり、エピトープは、天然には互いに隣接するアミノ酸、および、天然タンパク質の三次構造のために、エピトープを形成するのに充分なだけ近接しているアミノ酸を包含できる。いかなる寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼも、本発明の適切なタンパク質である。タンパク質を単離する（天然タンパク質の単離、または組換えもしくは合成手法による該タンパク質の生産を包含する）のに適した寄生虫は、線虫、条虫、吸虫、ノミ、ハエ、ダニ、シラミ、半翅類、およびバベシアBabesia、クリプトスポリジウムCryptosporidium、アイメリアEimeria、エンケファリトゾーオンEncephalitozoon、ヘパトゾーオンHepatozoon、球虫Isospora、レーシュマニアLeishmania、ネオスポラNeospora、小芽胞菌Nosema、マラリア原虫Plasmo dium 、ニューモシスチスPneumocvstis、タイレリアTheileria、トキソプラズマT oxoplasma およびトリパノソーマTrypanosmaという属の原生動物のような、しかしそれらに限定されない寄生性の蠕虫、原生動物および外部寄生虫を包含する。好適な寄生虫は、組織移動性の寄生性蠕虫、特に組織移動性の線虫を包含する。好適な線虫は、糸状虫、回虫、円虫および毛様線虫という線虫を包含する。特に好適な組織移動性線虫は、アカントケイロネーマAcanthocheilonema、ネコ円虫A elurostrongylus 、ズビニ鉤虫Ancylostosma、アンギオストロンギルスAngiostro ngylus 、回虫Ascaris、ブルギアBrugia、ブノストマムBunostomum、肺吸虫Dicty ocaulus 、腎虫Dioctophyme、ディペタロネーマDipetalonema、イヌ糸状虫Dirofi laria 、メディナ虫Dracunculus、フィラロイデスFilaroides、ラゴキルアスカリスLagochilascaris、ロア糸状虫Loa、マンソネラMansonella、ミュレリウスMuel lerius 、アメリカ鉤虫Necator、回旋糸状虫Onchocerca、パラフィラリアParafil aria 、ウマ回虫Parascaris、プロトストロンギルスProtostrongylus、セタリアS etaria 、ステファノフィラリアStephanofilaria、糞線虫Strongyloides、円虫St rongylus 、テラジアThelazia、トキスアスカリスToxascaris、イヌ回虫Toxocara 、旋毛虫Trichinella、極東鉤虫Uncinariaおよび糸状虫Wuchereriaという属の寄生虫を包含する。その他の特に好適な線虫は、毛細線虫Capillaria、カベルティアCh abertia 、クーパリアCooperia、ギョウ虫Enterobius、捻転胃虫Haemonchus、ネマトディルスNematodirus、エソファゴストマムOesophagostomum、オステルタギアOstertagia、毛様線虫Trichostrongylusおよびベン虫Trichurisという属の寄生虫を包含する。好適な糸状虫線虫は、イヌ糸状虫属、アカントケイロネーマ属、ブルギア属、ディペタロネーマ属、ロア糸状虫属、回旋糸状虫属、パラフィラリア属、セタリア属、ステファノフィラリア属および糸状虫属の糸状虫線虫を包含する。特に好適な寄生虫は、イヌ糸状虫属の線虫であり、心糸状虫を生起する寄生虫であるイヌ糸状虫D. immitisが、さらに好適である。本発明によれば、タンパク質のミメトープは、該タンパク質の能力を模倣できるいかなる化合物をも意味し、それは、ミメトープが、該タンパク質を模倣する構造を有するためであることが多い。例えば、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質のミメトープは、本発明の単離された寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質の活性に類似する活性を有する化合物である。ミメトープは、減成に対するその感受性が低下するよう修飾したペプチド；抗イディオタイプおよび／もしくは触媒性抗体またはそのフラグメント；単離タンパク質の非タンパク質性の免疫原性部分（例えば炭水化物構造）；ならびに、核酸も包含する合成または天然有機分子であることができるが、それらに限定されない。このようなミメトープは、本発明のタンパク質のコンピュータで生成した構造を用いて設計できる。ミメトープは、分子、例えばオリゴヌクレオチド、ペプチドその他の有機分子の無作為試料を生成すること、およびそのような試料を、例えば本発明のタンパク質に対して誘発した抗体を用いるアフィニティークロマトグラフィーの手法によって、スクリーニングすることによって、得ることもできる。本発明の好適な寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質またはミメトープは、効果的な仕方で動物に投与したとき、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害する治療に対して感受性を有する寄生虫が生起する疾病から、該動物を保護できる化合物である。そのため、該寄生虫は、好ましくは、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質で、好ましくはイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質で免疫した動物には、疾病を生起することが基本的に不可能である。本発明によれば、寄生虫による疾病から動物を保護できる本発明のタンパク質またはミメトープの能力とは、寄生虫が生起する、疾病に至る感染も包含する疾病を、好ましくは該寄生虫に対する免疫応答を誘発することによって、治療、軽減および／または予防できる、そのタンパク質またはミメトープの能力を指す。そのような免疫応答は、体液性および／または細胞性の免疫応答を包含できる。標的とするのに適した寄生虫は、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を投与した動物に、基本的には疾病を生起できないいかなる寄生虫をも包含する。そのため、標的とすべき寄生虫は、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質に対する体液性および／もしくは細胞性の応答が標的とすることができ、ならびに／または寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を実質的に阻害できる化合物が標的とすることができて、それによって、動物に疾病を生起できる寄生虫の能力の低下を招く、１個またはそれ以上のエピトープを有するタンパク質を生産する、いかなる寄生虫をも包含する。標的とするのに適切かつ好適な寄生虫は、上記に開示した寄生虫である。標的とするのに好適な部類の寄生虫は、組織移動性の寄生性蠕虫を包含する。標的とするのに特に好適な線虫である蠕虫は、心糸状虫を生じるイヌ糸状虫である。本発明の一実施態様は、融合セグメントに結合した寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼのドメインを有する融合タンパク質である。本発明のタンパク質の一部としての融合セグメントを有することは、生産、貯蔵および／または使用の際のタンパク質の安定性を高めることができる。セグメントの特性に応じて、融合セグメントは、そのような融合セグメントを含む本発明のタンパク質で免疫した動物が備える免疫応答を増強するための、免疫強化剤としても作用できる。その上、融合セグメントは、本発明のタンパク質の精製を単純化するための、例えば、得られた融合タンパク質の、アフィニティークロマトグラフィーを用いた精製を可能にするための手段として、機能できる。適切な融合セグメントは、望みの機能を有する（例えば、増大した安定性をタンパク質に与え、増大した免疫原性をタンパク質に与え、および／またはタンパク質の精製を単純化する）いかなる大きさのドメインであることもできる。１個またはそれ以上の融合セグメントを用いることは、本発明の範囲内にある。融合セグメントは、該タンパク質のアスタシン金属エンドペプチダーゼ含有ドメインのアミノおよび／またはカルボキシル末端に結合できる。融合セグメントと、融合タンパク質のアスタシン金属エンドペプチダーゼ含有ドメインとの結合は、そのようなタンパク質のアスタシン金属エンドペプチダーゼ含有ドメインの簡明な回収を可能にするために、切断に対して感受性を有することができる。融合タンパク質は、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ含有ドメインのカルボキシルおよび／またはアミノ末端のいずれかに結合した融合セグメントを有するタンパク質をコードする、融合核酸分子で形質転換した組換え細胞を培養することによって、生産するのが好ましい。本発明に用いるのに好適な融合セグメントは、グルタチオン結合ドメイン、例えば日本住血吸虫Schistosoma japonicumのグルタチオンＳ転移酵素（ＧＴ）、またはグルタチオンに結合できるその一部；金属結合ドメイン、例えば二価金属イオンに結合できるポリヒスチジンセグメント；免疫グロブリン結合ドメイン、例えばプロテインＡ、プロテインＧ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、Ｆｃ受容体もしくは補体タンパク質の抗体結合ドメイン；麦芽糖結合タンパク質からの麦芽糖結合ドメインのような、糖結合ドメイン；および／または「タグ」ドメイン（例えば、β −ガラクトシダーゼの少なくとも一部、ストレプタグペプチド、該ドメインに結合する化合物、例えばモノクローナル抗体を用いて精製できるその他のドメイン）を包含する。より好適な融合セグメントは、金属結合ドメイン、例えばホリヒスチジンセグメント；麦芽糖結合ドメイン；ストレプタグペプチド、例えば米国フロリダ州TampaもBiometra社から入手できるもの；およびＳ１０ペプチドを包含する。本発明の好適な融合タンパク質の例は、ＰＨＩＳ−ＰＤｉＭＰＡ２₈₀₄ であり、その生産を本明細書に開示する。本発明の別の実施態様は、動物を１種類またはそれ以上の疾病から保護できる、１個以上の追加のタンパク質セグメントも有する寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質である。そのような多面的保護タンパク質は、互いに結合させた２個またはそれ以上の核酸ドメインを含む核酸分子で形質転換した細胞を培養することによって生産できるが、その結合は、得られる核酸分子が、例えば１種類以上の感染性作用因が生起する疾病から動物を保護できる、２種類以上の保護化合物またはその部分を含む多面的保護化合物として発現されるようにする。多面的保護化合物の例は、他の１種類もしくはそれ以上の寄生虫タンパク質に、本発明の糸状虫線虫システインプロテアーゼタンパク質とのように結合した、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を包含するが、それらに限らない。多面的保護化合物のその他の例は、他の１種類もしくはそれ以上の感染性作用因、特にネコもしくはイヌに感染する作用因、例えば、それらに限られないが、カリシウイルス、ジステンパーウイルス、ネコヘルペスウイルス、ネコ免疫不全ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ伝染性腹膜炎、肝炎、鉤虫、レプトスピラ症、汎白血球減少症ウイルス、パルボウイルス、狂犬病およびトキソプラズマ症に対して保護する、１種類もしくはそれ以上の化合物に結合した寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を包含する。適切な心糸状虫多面的保護タンパク質は、１種類以上のその他のイヌ糸状虫タンパタ質、例えば、それらに限られないが、イヌ糸状虫Ｇｐ２９タンパク質、イヌ糸状虫Ｐ３９タンパク質、イヌ糸状虫Ｐ２２Ｕタンパク質、イヌ糸状虫Ｐ２２Ｌタンパク質、イヌ糸状虫Ｐ２０．５タンパク質、イヌ糸状虫Ｐ４タンパク質、イヌ糸状虫Ｄｉ２２タンパク質、ならびに／またはＬ３および／もしくはＬ４幼生で発現されるイヌ糸状虫プロテアーゼに結合した、本発明のイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼおよび／またはイヌ糸状虫システインプロテアーゼならびに有意な相同性をそのようなイヌ糸状虫タンパク質と共有するその他の蠕虫タンパク質を包含するが、それらに限られない。有意な相同性を別のタンパク質と共有するタンパク質とは、そのようなタンパク質をコードしている核酸配列の、例えばSambrookら［前掲］に記載されたとおりの、厳格なハイブリダイゼーション条件下で、安定したハイブリダイゼーション複合体を相互に形成できる能力を指す。1994年３月８日出願された「イヌ糸状虫Ｇｐ２９タンパク質、核酸分子およびその用途」と題する米国特許願第08/208,885号明細書は、それらをコードするイヌ糸状虫Ｇｐ２９タンパク質および核酸分子を開示している。1993 年１月12日出願された「免疫原性幼生タンパク質」と題する米国特許願第08/003 ,389号明細書は、本明細書ではＰ３９と呼ぶ、３９kD（キロダルトン）のイヌ糸状虫タンパク質（大きさはトリスグリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）によって決定）、およびそれをコードする核酸配列を開示している。1993年１月12日出願された「ワクチンの同定のための試薬および方法」と題する米国特許願第08/003,257号明細書は、本明細書ではＰ２２ＬおよびＰ２０．５と呼ぶ、２２kDおよび２０．５kDのイヌ糸状虫タンパク質（大きさはトリスグリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定）、ならびにそれらをコードする核酸配列を開示している。1993年８月19日出願された「新規な寄生性蠕虫タンパク質」と題する米国特許願第08/109,391号明細書は、イヌ糸状虫Ｐ４およびイヌ糸状虫Ｐ２２Ｕとともに、それらをコードする核酸配列を開示している。1993年５月10日出願された「心糸状虫ワクチン」と題する米国特許願第08/060,500号明細書は、イヌ糸状虫Ｄｉ２２タンパク質、およびそれをコードする核酸配列を開示し（Genbankデータベース受入番号M82811に収録）；特許願第08/060,500号は、1991年４月８日出願された米国特許願第07/683,202号の継続出願である。1993年11月16日出願された「心糸状虫に対するプロテアーゼワクチン」と題する米国特許願第08/153,554号明細書は、イヌ糸状虫の幼生プロテアーゼを開示し；特許願第08/153,554号は、1991年11月12日出願された米国特許願第 07/792,209号の継続出願である。これらの特許明細書は、それぞれ、本明細書中に参考としてその全体を援用する。特に好適な寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、配列番号１または配列番号２の少なくとも一部によってコードされたタンパク質であり、そのため、それぞれ、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９および配列番号１０で表される開放読み枠のうち１個以上の少なくとも一部を含むアミノ酸配列を有するタンパク質である。好適なタンパク質は、そのような読み枠の、機能性タンパク質を生じる組合せ、例えば配列番号１１を含むことができる。これらの開放読み枠を用いた相同性の検索は、配列番号１０以外のすべてが、アスタシン金属エンドペプチダーゼ族の公知の成員、およびカエノラーブジチス・エレガンスCaenorhabditis elegansＲ１５１．５遺伝子産物（Genbank受入番号U00036［Wilsonら、1994、Nature、368、 32〜38］）との有意な相同性を共有することを示し、カエノラーブジチス・エレガンスも、アスタシン金属エンドペプチダーゼをコードすることが示唆される。拡大亜鉛結合ドメインの主題的要素、およびチロシン含有ドメインの主題的要素が、特に充分に保存され、配列全体の相同性は、約２４％である。本発明の特に好適なタンパク質は、配列番号１１のアスタシンドメインを有するタンパク質、該ドメインを含むタンパク質（例えば、それらに限られないが、完全な長さのタンパク質、融合タンパク質、および多面的保護を与えるタンパク質）、ならびに該ドメインの、断端された同族体であるタンパク質を包含する。それよりさらに好適なタンパク質は、ＰＤｉＭＰＡ２₈₀₄およびＰＨＩＳ−ＰＤｉＭＰＡ２₈₀₄を包含する。本発明の別の実施態様は、厳格な条件下で、イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子とハイブリダイズできる、単離された寄生虫核酸分子である。本明細書で用いられるように、イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子は、該遺伝子がコードするイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質の生産を制御する調節領域（例えば、それらに限られないが、転写、翻訳または翻訳後の調節領域）、およびコード領域それ自体のような、天然のイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子に関連するすべての核酸配列を包含する。本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子は、単離された天然のいかなる寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子またはその同族体も包含できる。本発明の核酸分子は、１個所もしくはそれ以上の調節領域、完全な長さの、もしくは部分的なコード領域、またはそれらの組合せを包含できる。本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの核酸分子の最小の大きさは、厳格なハイブリダイゼーション条件下で、安定したハイブリッドを形成できる最小の大きさである。本発明によれば、単離された核酸分子は、その自然な環境から取り出された（すなわち、大為操作に付された）核酸分子である。そのため、「単離（された）」は、該核酸分子が精製された程度は反映しない。単離核酸分子は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡもしくはＲＮＡのいずれかの誘導体を包含できる。本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの単離核酸分子は、その天然の源泉から、全体的な（すなわち完全な）遺伝子、または該遺伝子と安定したハイブリッドを形成できるその一部のいずれとしても得ることができる。寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの単離核酸分子は、組換えＤＮＡ技術（例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、クローニング）または化学合成を用いても製造できる。寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの単離核酸分子は、天然の核酸分子、ならびに、天然の対立遺伝子変異体および修飾した核酸分子を包含するが、それらに限られないその同族体を包含するが、この修飾は、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質をコードできるか、または、厳格な条件下で、天然の単離体と安定したハイブリッドを形成できる核酸分子の能力に、そのような修飾が実質的に干渉しないようにして、ヌクレオチドを挿入、削除、置換および／または転化するものである。寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの核酸分子の同族体は、当業者に公知の多くの方法（例えばSambrookら［前掲］を参照されたい）を用いて製造できる。例えば、古典的な突然変異誘発の手法および組換えＤＮＡの手法、例えば部位指向性突然変異誘発、突然変異を誘発するための核酸分子の化学処理、制限酵素による核酸フラグメントの切断、核酸フラグメントの連結、核酸配列の選ばれた領域のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅および／または突然変異誘発、核酸分子の混合物を「形成する」ためのオリゴヌクレオチド混合物の合成や混合物群の連結、ならびにそれらの組合せを包含するが、それらに限られない、様々な手法を用いて、核酸分子を修飾できる。核酸分子の同族体は、修飾した核酸の混合物から、該核酸がコードするタンパク質の機能（例えば、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性、または寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質の１個以上のエピトープに対して免疫応答を誘発できる能力）についてのスクリーニングによって、および／または厳格な条件下での寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの単離核酸とのハイブリダイゼーションによって選択できる。本発明の単離核酸分子は、本発明の１種類以上の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質をコードする核酸配列を含むことができ、そのようなタンパク質の例を本明細書に開示する。語句「核酸分子」は、物理的な核酸分子を専ら指し、語句「核酸配列」は、核酸分子上のヌクレオチドの配列を専ら指すが、二つの語句は、特にタンパク質をコードできる核酸分子または核酸配列に関しては、互換可能な形で用いることができる。これまで開示したとおり、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質は、完全な長さのアスタシン金属エンドペプチダーゼコード領域を有するタンパク質、部分的なアスタシン金属エンドペプチダーゼコード領域を有するタンパク質、融合タンパク質、多面的保護タンパク質およびそれらの組合せを包含するが、それらに限られない。本発明の一実施態様は、厳格な条件下で、核酸分子であるｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉ および／または核酸分子であるｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆とハイブリダイズできる、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの核酸分子である。そのようなものとして、好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子は、配列番号１および配列番号２で表される核酸分子と、安定したハイブリッドを形成できる。特に好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼの核酸分子は、核酸分子ｎＤｉＭＰＡ１₁₂ ₉₉ および／または核酸分子ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆の少なくとも一部を含む。そのため、本発明の好適な核酸分子は、配列番号１または配列番号２の少なくとも一部を有する核酸配列を含む。そのような核酸分子は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉またはｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆であることができ、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉またはｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆ の他にもヌクレオチドを含むことができ、あるいはｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉またはｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆の断端フラグメントであることができる。特に好適な核酸分子は、ｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆、ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄、ｎＤｉＭＰＡ２₂₇₁およびＢｖＭＰＡ２を包含し、それらの生産を実施例に開示する。本発明の一好適実施態様は、下記のアミノ酸配列で示されるとおりの、一個以上の下記の開放読み枠をコードする核酸分子とハイブリダイズできる、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの核酸分子である：配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０および配列番号１１。好ましくは、そのような核酸分子は約３５％以上の、より好ましくは約４５％以上の、より一層好ましくは約６０％以上の、そしてさらに好ましくは約７５％以上のアミノ酸の相同性を配列番号１１と共有する、タンパク質をコードする。より好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子は、一個以上のそのような開放読み枠の少なくとも一部をコードする。特に好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼの核酸分子は、拡大亜鉛結合ドメインの主題的要素（すなわち、該主題的要素のカルボキシル末端まで、ならびに亜鉛結合ドメイン全体まで）をコードする核酸分子と、より好ましくは、アスタシン金属エンドペプチダーゼの開示されたその他の保存ドメイン、例えば、亜鉛と結合するものと考えられる、チロシンを含む主題的要素をコードする核酸分子とも、安定したハイブリッドを形成できる。本発明のある種の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子の核酸配列を知ることは、当業者が、これらの核酸分子の複製を作成すること、ならびにそのような核酸分子、および寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼのその他の核酸分子同族体の、少なくとも一部を含む核酸分子を得ることも可能にする。そのような核酸分子は、本発明の抗体による適切な発現ライブラリーのスクリーニング；本発明のオリゴヌクレオチドプローブを用いて適切なライブラリーもしくはＤＮＡをスクリーニングする、慣用のクローニング手法；および本発明のオリゴヌクレオチドプライマーを用いた適切なライブラリーもしくはＤＮＡのＰＣＲ増幅を包含する、様々な方法で得ることができる。スクリーニングし、またはそれから増幅するのに好適なライブラリーは、寄生虫の幼生（特にＬ３、Ｌ４）および成虫のｃＤＮＡライブラリー、ならびにゲノムＤＮＡのライブラリーを包含する。同様に、スクリーニングし、またはそれから増幅するのに好適なＤＮＡ源は、寄生虫の幼生（特にＬ３、Ｌ４）および成虫のｃＤＮＡ、ならびにゲノムＤＮＡを包含する。遺伝子をクローニングかつ増幅する手法は、例えばSambrook ら［前掲］に開示されている。本発明は、本発明のその他の、好ましくはより長い、核酸分子の相補的領域、例えば、イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの遺伝子の相補的領域を包含する、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの遺伝子の相補的領域と、厳格な条件下でハイブリダイズできるオリゴヌクレオチドである核酸分子も包含する。そのようなオリゴヌクレオチドは、厳格な条件下で、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉ またはｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆の相補的領域と、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉またはｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆の少なくとも一部を含む核酸分子の相補的領域と、および、厳格な条件下で、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉またはｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆とハイブリダイズする核酸分子の相補的領域とハイブリダイズできる。そのようなオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはそのいずれかの誘導体であることができる。そのようなオリゴヌクレオチドの最小の大きさは、与えられたオリゴヌクレオチドと、本発明の別の核酸分子上の相補的配列との間に、安定したハイブリッドを形成するのに必要な大きさである。そのため、その大きさは、核酸の組成、および該オリゴヌクレオチドと相補的配列との相同性の百分率、ならびにハイブリダイゼーション条件それ自体（例えば温度、塩濃度）に左右される。ＡＴに富む核酸配列、例えば寄生性蠕虫のそれに対しては、オリゴヌクレオチドは、一般に、約１５〜約１７塩基以上の長さである。オリゴヌクレオチドの大きさは、また、本発明によるオリゴヌクレオチドの用途に充分でなければならない。本発明のオリゴヌクレオチドは、追加の核酸分子を同定するためのプローブとして、核酸分子を増幅もしくは延長するためのプライマーとして、または、例えば寄生虫によるアスタシン金属エンドペプチダーゼの発現を阻害するための治療の用途でのそれを包含するが、それらに限られない様々な用途に用いることができる。そのような治療的用途は、例えばアンチセンスに、トリプレックス形成に、リボザイムに、および／またはＲＮＡ薬物に基づく技術における、そのようなオリゴヌクレオチドの用途を包含する。したがって、本発明は、そのような技術のうち一つまたはそれ以上を用いることによって、アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質の生産に干渉するための、そのようなオリゴヌクレオチドおよび方法を包含する。適切なオリゴヌクレオチド含有治療組成物は、動物を疾病から保護するために、当業者に公知の手法を用いて、イヌ糸状虫のような寄生性蠕虫による感染の前後に該動物に投与することができる。本発明の別の実施態様は、糸状虫線虫の単離システインプロテアーゼタンパク質またはそのミメトープである。本明細書で用いられるように、糸状虫線虫の、または糸状虫の単離システインプロテアーゼタンパク質は、完全な長さの糸状虫システインプロテアーゼタンパク質、またはそのようなタンパク質のいかなる同族体であることもできる。糸状虫線虫のシステインプロテアーゼタンパク質は、その同族体も含めて、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質について、本明細書に開示した方法に従って、単離かつ生産できる。糸状虫システインプロテアーゼタンパク質の同族体およびミメトープは、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質の同族体およびミメトープと同様にして、定義される。糸状虫システインプロテアーゼタンパク質（同族体を包含する）およびそのミメトープは、それぞれ、糸状虫システインプロテアーゼタンパク質に対する免疫応答を誘発でき（すなわち、免疫応答を誘発できる少なくとも１個のエピトープを有する）、および／またはシステインプロテアーゼ活性を遂行できる。システインプロテアーゼ活性は、免疫応答を遂行できるタンパク質の能力とともに、当業者に公知の手法を用いて測定できる。システインプロテアーゼ活性は、システインプロテアーゼ切断部位を有するペプチド、例えばｚ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ− Ａｒｇ−ＡＭＣを切断できるその能力によって測定できるが、そのような活性は、例えばシステインプロテアーゼ阻害剤のＥ−６４（Boehringer Mannheim社、米国インジアナ州インジアナポリスより入手可能）によって阻害できる。好適な糸状虫は、本明細書に開示されている。特に好適な糸状虫は、イヌ糸状虫である。本発明の糸状虫システインプロテアーゼタンパク質は、そのいかなる同族体も含めて、厳格な条件下で、糸状虫システインプロテアーゼタンパク質をコードする核酸配列の少なくとも一部を含む核酸分子とハイブリダイズできる核酸分子によってコードされているという、追加的な特性を有する。好適なタンパク質は、ｎＤｉＣＰ₁₄₃（その生成は、実施例で詳細に説明する）の少なくとも一部と、安定したハイブリッドを形成する核酸分子がコードしている。配列番号１２は、推定されるその翻訳産物が、ｎＤｉＣＰ₁₄₃と呼ばれる、配列番号１３で表される４７アミノ酸の配列である、ｎＤｉＣＰ₁₄₃の推定配列を表す。核酸配列決定の技術が完全に無謬ではないため、配列番号１２は、最良でも、完全な長さのイヌ糸状虫システインプロテアーゼの少なくとも一部をコードする核酸分子の、見かけの核酸配列を表すことに留意しなければならない。更に、配列番号１３は、配列番号１２が見かけ上開始コドンも終止コドンも保有しないため、イヌ糸状虫システインプロテアーゼの内部アミノ酸配列を見かけ上表す。しかし、配列番号１３は、多数のシステインプロテアーゼ間で保存されているアミノ酸配列を有する。配列番号１３と、公知の寄生虫システインプロテアーゼ遺伝子の対応する領域との比較から、配列番号１３は、捻転胃虫H. contortus（線虫の１種）、マンソン住血吸虫Schistosoma mansoni（吸虫の１種）、カエノラーブジチス・エレガンスC. elegans（線虫の１種）、カンテツFasciola hepatica（吸虫の１種）、赤痢アメーバEntamoeba histolytica（原生動物の１種）、クルーズトリパノソーマTrypanosoma cruzi（原生動物の１種）およびブルーストリパノソーマT. br ucie からのシステインプロテアーゼと、それぞれ約１６％、約２２％、約２４％、約３５％、約３９％、約４４％および約４９％のアミノ酸レベルでの相同性を共有することが示される。配列番号１３は、ヒトカテプシンＬとの約５０％のアミノ酸相同性、ニワトリカテプシンＬとの約４５％のアミノ酸相同性、およびウエステルマン肺吸虫Paragonimus westermani（吸虫）のシステインプロテアーゼとの約５６％のアミノ酸相同性も共有する。配列番号１３のほぼ第３０位のセリン、およびほぼ第３７位のシステインは、これらのシステインプロテアーゼのすべてにおいて保存されている。上記に参照した配列のリストについては、例えば下記を参照されたい：Heusslerら、1994、Mol．Biochem．Parasitol.、64、11〜 23；Eakinら、1990、Mol.Biochem.Parasitol.、39、1〜8；Rayら、前掲、Pratt ら、前掲、Sakanariら、前掲；Hamajimaら、ヨーロッパ公開特許第0524834A2号公報、1993年１月27日公開。本発明の好適な糸状虫プロテアーゼタンパク質は、配列番号１３との約６０％以上の、より好ましくは約７０％以上の、そしてさらに好ましくは約８０％以上の相同性を共有するアミノ酸配列を含む。本発明の特に好適な糸状虫システインプロテアーゼタンパク質は、ＰＤｉＣＰ₁₄₂、ＰＤｉＣＰ₁₄₂を含むタンパク質（完全な長さのタンパク質、融合タンパク質および多面的保護タンパク質を包含するが、それらに限られない）、およびＰＤｉＣＰ₁₄₂の少なくとも一部を含むタンパク質を包含する。好適な糸状虫システインプロテアーゼタンパク質またはそのミメトープは、効果的な方式で動物に投与したとき、システインプロテアーゼ活性を阻害する組成物による治療に感受性を有する寄生虫が生起する疾病から、該動物を保護できる化合物である。標的とするのに適した寄生虫は、本発明の糸状虫線虫のシステインプロテアーゼタンパク質に対する体液性および／もしくは細胞性の応答が標的とすることができ、ならびに／または糸状虫システインプロテアーゼ活性を実質的に阻害できる化合物が標的とすることができ、それによって、動物に疾病を生起できる寄生虫の能力の低下を招くことができる、１個またはそれ以上のエピトープを有するタンパク質を生産するいかなる寄生虫でもある。適切かつ好適な寄生虫は、上記に開示されている。標的とするのに好適な部類の寄生虫は、組織移動性の寄生性蠕虫を包含する。標的とするのに特に好適な線虫は、心糸状虫を生じるイヌ糸状虫である。少なくとも１種類の糸状虫システインプロテアーゼタンパク質を含む、融合タンパク質および多面的保護タンパク質も、本発明に包含される。そのようなタンパク質は、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質について開示したのと同様の融合セグメントおよび／または多面的保護ドメインを含むことができ、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質について開示したのと同様な方式で生産できる。特に好適な融合タンパク質は、ＰＨＩＳ−ＰＤｉＣＰ₁₄₂を包含する。本発明の更に別の実施態様は、厳格な条件下で、イヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子とハイブリダイズできる、糸状虫線虫の単離された核酸分子である。そのような核酸分子を、糸状虫線虫の、または糸状虫のシステインプロテアーゼ核酸分子と呼ぶ。本明細書で用いられるように、糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子は、該遺伝子がコードするイヌ糸状虫システインプロテアーゼタンパク質の生産を制御する調節領域、およびコード領域それ自体のような、天然の糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子に関連するすべての核酸配列を包含する。本発明の糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子は、単離された天然の糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子またはその同族体を包含できる。本発明の核酸分子は、１個所もしくはそれ以上の調節領域、完全な長さの、もしくは部分的なコード領域、またはそれらの組合せを包含できる。本発明の糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子の最小の大きさは、厳格なハイブリダイゼーション条件下で、イヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子と安定したハイブリッドを形成できる最小の大きさである。糸状虫イミチスのシステインプロテアーゼ核酸分子は、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子の生産および単離について本明細書に教示した方法に従って、単離かつ生産できる。システインプロテアーゼ核酸分子の同族体は、該核酸がコードするタンパク質の機能（例えばシステインプロテアーゼ活性、および／または糸状虫システインプロテアーゼタンパク質の１個以上のエピトープに対して免疫応答を誘発できる能力）についてのスクリーニング、および／または単離したイヌ糸状虫システインプロテアーゼ核酸との厳格な条件下でのハイブリダイゼーションによって、修飾した核酸の混合物から選ぶことができる。本発明の単離された糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子は、本発明の１種類以上の糸状虫システインプロテアーゼタンパク質をコードする核酸配列を含むことができ、そのようなタンパク質の例を、本明細書に開示する。これまで開示したとおり、本発明の糸状虫システインプロテアーゼタンパク質は、完全な長さの糸状虫システインプロテアーゼコード領域、部分的な糸状虫システインプロテアーゼコード領域を有するタンパク質、融合タンパク質、多面的保護タンパク質、およびそれらの混合物を包含するが、それらに限られない。本発明は、そのような核酸分子を発現しようとする細胞のコドンの用い方の特性に適合するよう修飾した、糸状虫システインプロテアーゼタンパク質をコードする核酸分子も包含する。本発明の一実施態様は、厳格な条件下で、イヌ糸状虫核酸分子のｎＤｉＣＰ₁₄ ₃ （その推定配列を、配列番号１２に開示する）とハイブリダイズできる核酸配列を含む、糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子である。好適な糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子は、配列番号１３と、約６０％以上の、より好ましくは約７０％以上の、さらに好ましくは約８０％以上のアミノ酸の相同性を有するタンパク質をコードする。配列番号１３の少なくとも一部を含むイヌ糸状虫システインプロテアーゼタンパク質をコードする核酸分子が、より好適である。本発明の好適な核酸分子は、イヌ糸状虫核酸分子ｎＤｉＣＰ₁₄₃の少なくとも一部を含む。そのような核酸分子は、ｎＤｉＣＰ₁₄₃であることができ、ｎＤｉＣＰ₁₄₃の他にもヌクレオチドを含むことができ（例えば、それらに限られないが、完全な長さのタンパク質をコードする核酸分子、融合タンパク質をコードする核酸分子、または多面的保護化合物をコードする核酸分子）、またはｎＤｉＣＰ₁₄₃の断端フラグメントであることができる。特に好適な糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子は、ｎＤｉＣＰ₁₄₃およびｎＤｉＣＰ₁₄₂を含む。本発明の発明者らには、クローニングされているシステインプロテアーゼが非常に多様であるにもかかわらず、イヌ糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子を単離するという困難があった。公知の寄生虫システインプロテアーゼ遺伝子を包含する、公知のシステインプロテアーゼ遺伝子から導出される共通配列を用いて、本発明者らが設計したプライマーには、イヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子を引き出すには基本的に過大である縮重があった。本発明者らは、イヌ糸状虫コドンの用い方の偏りを組み込んだプライマーを用いることが、イヌ糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子、すなわちｎＤｉＣＰ₁₄₃の初めての同定を可能にすることを発見した。核酸分子ｎＤｉＣＰ₁₄₃を同定すると、当業者は、この核酸分子の複製を作成すること、ならびに完全な長さの遺伝子およびその同族体も包含する、他の糸状虫線虫のシステインプロテアーゼ核酸分子を得ることもできる可能性がある。そのような核酸分子は、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子の単離および生産について述べたような、様々な方法で得ることができる。スクリーニングし、またはそれから増幅するのに好適なライブラリーは、糸状虫の幼生（特にＬ３、Ｌ４）および成虫のｃＤＮＡライブラリー、ならびに糸状虫のゲノムＤＮＡライブラリーを包含する。同様に、スクリーニングし、またはそれから増幅するのに好適なＤＮＡ源は、糸状虫の幼生（特にＬ３、Ｌ４）および成虫ｃＤＮＡ、ならびに糸状虫ゲノムＤＮＡを包含する。用いるのに好適なプライマーおよびプローブは、与えられた糸状虫についてコドンを偏らせてある。本発明は、厳格な条件下で、本発明のその他の、好ましくはより長い、核酸分子の相補的領域と、例えば糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子の相補的領域とハイブリダイスできる、オリゴヌクレオチドである核酸分子も包含する。そのようなオリゴヌクレオチドは、厳格な条件下で、ｎＤｉＣＰ₁₄₃の相補的領域と、ｎＤｉＣＰ₁₄₃の少なくとも一部を含む核酸分子の相補的領域と、および厳格な条件下でｎＤｉＣＰ₁₄₃とハイブリダイズする核酸分子の相補的領域とハイブリダイスできる。そのようなオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはそのいずれかの誘導体であることができる。その他の基準、例えば最小の長さ、およびそのようなオリゴヌクレオチドを生産し、かつ用いるための方法は、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼのオリゴヌクレオチドについて開示したとおりである。本発明は、核酸分子を宿主細胞内に送達できるいかなるベクターにも挿入された、本発明の１種類以上の核酸分子（例えば寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子および／または糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子、その例は本明細書に開示されている）を含有する組換えベクターも包含する。そのようなベクターは、異種核酸配列、すなわち、天然には本発明の核酸分子の近隣には見出されず、かつ、好ましくは、該核酸分子が導出された種以外の種から導出された、核酸配列を有する。該ベクターは、ＲＮＡまたはＤＮＡのいずれであることも、原核性または真核性のいずれであることもでき、一般的には、ウイルスまたはプラスミドである。組換えベクターは、本発明の、イヌ糸状虫を包含する寄生虫の核酸分子のクローニング、配列決定および／またはそれ以外の操作に用いることができる。組換えベクターの一類型は、本明細書では組換え分子と呼び、より詳細に下記に説明するが、本発明の核酸分子の発現に用い得る。好適な組換えベクターは、形質転換した細胞内で複製できる。本発明の組換えベクターに含ませるのに好適な核酸分子は、下記のうちの１種類以上である：ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉の少なくとも一部を含む核酸分子、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆の少なくとも一部を含む核酸分子、およびｎＤｉＣＰ₁₄₃の少なくとも一部を含む核酸分子。本発明の組換えベクターに含ませるのに特に好適な核酸分子は、ｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆、ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄、ｎＤｉＭＰＡ２₂₇₁、ＢｖＭＰＡ２、ｎＤｉＣＰ₁₄₃およびｎＤｉＣＰ₁₄₂を包含する。本発明の単離タンパク質は、天然タンパク質の生産および回収、組換えタンパク質の生産および回収、ならびにタンパク質の化学合成を包含する様々な方法で生産できる。一実施態様では、本発明の単離タンパク質は、該タンパク質を生産するのに効果的な条件下で、該タンパク質を発現できる細胞を培養し、該タンパク質を回収することによって製造する。培養するのに好適な細胞は、本発明の１種類またはそれ以上の核酸分子で宿主細胞を形質転換することによって生成される、該タンパク質を発現できる組換え細胞である。細胞内への核酸分子の形質転換は、核酸分子を該細胞に挿入できるいかなる方法を用いても達成できる。形質転換の手法は、核酸移入、電気穿孔、微量注入、リポソーム移入、吸着およびプロトプラスト融合を包含するが、それらに限られない。組換え細胞は、単細胞性のままでも、または組織、器官もしくは多細胞生物体へと増殖させてもよい。本発明の形質転換された核酸分子は、染色体外に留まることも、または形質転換した（すなわち組換えた）細胞の染色体内の１個所もしくはそれ以上の部位へと、発現させようとするそれらの能力が保持されるような仕方で組み込むこともできる。細胞を形質転換するのに好適な核酸分子は、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子および／または糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子を包含する核酸分子である。細胞を形質転換するのに特に好適な核酸分子は、ｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆、ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄、ｎＤｉＭＰＡ２₂₇₁、ＢｖＭＰＡ２、ｎＤｉＣＰ₁₄₃およびｎＤｉＣＰ₁₄₂ を包含する。形質転換するのに適した宿主細胞は、形質転換できるいかなる細胞も包含する。宿主細胞は、形質転換されていない細胞、または１種類以上の核酸分子で既に形質転換された細胞のいずれであることもできる。本発明の宿主細胞は、本発明の、イヌ糸状虫を包含する寄生虫のタンパク質を内因的に（すなわち天然に）生産できるか、または本発明の１種類以上の核酸分子で形質転換した後に、そのようなタンパク質を生産できるかのいずれかである。本発明の宿主細胞は、本発明の１種類以上のタンパク質を生産できるいかなる細胞であることもでき、細菌、真菌（酵母を包含する）、動物寄生虫（蠕虫、原生動物および外部寄生虫を包含する）、昆虫、動物および植物の細胞を包含する。好適な宿主細胞は、細菌、マイコバクテリア、酵母、蠕虫、昆虫および哺乳動物の細胞である。より好適な宿主細胞は、サルモネラ属Salmonella、エスケリキア属Escherichia、バシルス属B acillus 、サッカロマイセス属Sacchromyces、スポドプテラ属Spodoptera、マイコバクテリア属Mycobacteria、トリコプルシア属Trichoplusia、ＢＨＫ（仔ハムスター腎）細胞、ＭＤＣＫ細胞（イヌヘルペスウイルス培養用正常イヌ腎細胞系）、ＣＲＦＫ細胞（ネコヘルペスウイルス培養用正常ネコ腎細胞系）およびＣＯＳ細胞を包含する。特に好適な宿主細胞は、大腸菌Ｋ−１２誘導体を包含する大腸菌Escherichia coli；チフス菌Salmonella typhi；ＵＫ−１ｘ３９８７およびＳＲ−１１ｘ４０７２のような弱毒株を包含するネズミチフス菌Salmonella typ himurium ；スポドプテラ・フルギペルダSpodoptera frugiperda；トリコプルシア・ニーTrichoplusia ni；ＢＨＫ細胞；ＭＤＣＫ細胞；ＣＲＦＫ細胞および非腫瘍原性マウス筋原細胞Ｇ８細胞（例えばＡＴＣＣ：ＣＲＬ１２４６）である。追加される適切な哺乳動物細胞の宿主は、その他の腎細胞系（例えばＣＶ−１サル腎細胞系）、その他の線維芽細胞の細胞系（例えば、ヒト、ネズミまたはニワトリの胚線維芽細胞の細胞系）、骨髄腫細胞系、チャイニーズハムスター卵巣細胞および／またはHeLa細胞を包含する。組換え細胞は、好ましくは、一つまたはそれ以上の転写調節配列を有する発現ベクターに機能的に結合された、本発明の１種類またはそれ以上の核酸分子をそれぞれ含む、１種類またはそれ以上の組換え分子で宿主細胞を形質転換させることによって生成する。機能的に結合されたという語句は、発現ベクターへの核酸分子の、宿主細胞内に形質転換したときに、該分子が発現できるような方式での挿入を指す。本明細書に用いられるように、発現ベクターは、宿主を形質転換でき、かつ指定された核酸分子の発現を遂行できるＤＮＡまたはＲＮＡベクターである。好ましくは、該発現ベクターは、宿主細胞内で複製することもできる。発現ベクターは、原核性または真核性のいずれであることもでき、一般的には、ウイルスまたはプラスミドである。本発明の発現ベクターは、細菌、真菌、動物寄生虫、昆虫、動物および植物の細胞を包含する、本発明の組換え細胞内で機能する（すなわち遺伝子発現を支配する）いかなるベクターも包含する。本発明の好適な発現ベクターは、細菌、酵母、蠕虫その他の寄生虫、昆虫および哺乳動物の細胞内で、より好ましくは、これまで開示された細胞型内で遺伝子発現を支配できる。本発明の発現ベクターは、（ａ）発現された本発明のタンパク質（すなわち、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質および／もしくは糸状虫システインプロテアーゼタンパク質）が、該タンパク質を生産する細胞から分泌されるのを可能にするための分泌シグナル（すなわち、シグナルセグメントの核酸配列）を有してもよく、そして／または（ｂ）挿入された本発明の核酸分子の、融合タンパク質としての発現を招く融合配列を有してもよい。真核性組換え分子は、本発明の核酸分子の核酸配列の周囲および／または内部に、干渉性の、および／または翻訳されない配列を含んでよい。融合セグメントの核酸がコードする適切な融合セグメントの例は、開示されている。適切なシグナルセグメントは、天然のシグナルセグメント（例えば、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼまたはシステインプロテアーゼのシグナルセグメント）、または本発明のタンパク質の分泌を支配できるいかなる異種シグナルセグメントも包含する。好適なシグナルセグメントは、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）、インターフェロン、インターロイキン、成長ホルモン、組織適合性およびウイルス外皮の糖タンパク質のシグナルセグメントを包含するが、それらに限られない。本発明の核酸分子は、プロモーター、オペレーター、リプレッサー、エンハンサー、終止配列、複製開始点、およびその他の、組換え細胞に適合し、本発明の核酸分子の発現を制御する調節配列のような、調節配列を有する発現ベクターに機能的に結合できる。特に、本発明の組換え分子は、転写調節配列を有する。転写調節配列は、転写の開始、延長および終結を制御する配列である。特に重要な転写調節配列は、転写開始を制御する配列、例えばプロモーター、エンハンサー、オペレーターおよびリプレッサー配列である。適切な転写調節配列は、本発明の組換え細胞のうち１種類以上で機能できる、いかなる転写調節配列も包含する。様々なそのような転写調節配列が、当業者には公知である。好適な転写調節配列は、細菌、酵母、蠕虫その他の寄生虫、昆虫および哺乳動物の細胞で機能するそれ、例えば、それらに限られないが、ｔａｃ、ｌａｃ、ｔｒｐ、ｔｒｃ、ｏｘｙ−ｐｒｏ、ｏｍｐ／ｌｐｐ、ｒｒｎＢ、バクテリオファージラムダ（λ）（例えば、λｐ_Lおよびλｐ_R、ならびにそのようなプロモーターを含む融合）、バクテリオファージＴ７、Ｔ７ｌａｃ、バクテリオファージＴ３、バクテリオファージＳＰ６、バクテリオファージＳＰ０１、メタロチオネイン、α交配因子、ピキア属アルコール酸化酵素、アルファウイルスのサブゲノムプロモーター（例えばシンドビスウイルスのサブゲノムプロモーター）、バキュロウイルス、ヘリオチス・ゼアHeliothis zea昆虫ウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アデノウイルス、シミアンウイルス４０、レトロウイルスアクチン、レトロウイルスの長い末端重複、ラウス肉腫ウイルス、熱ショック、リン酸および硝酸転写調節配列ならびに、原核もしくは真核細胞での遺伝子発現を制御できるその他の配列を包含する。追加される適切な転写調節配列は、組織特異的なプロモーターおよびエンハンサー、ならびにリンホカイン誘導可能プロモーター（例えば、インターフェロンまたはインターロイキンで誘導できるプロモーター）を包含する。本発明の転写調節配列は、単離する前に寄生性蠕虫、例えばイヌ糸状虫の分子に天然に付随する、天然に産する転写調節配列も包含できる。本発明の組換え分子は、形質転換しようとする細胞での核酸分子の発現を効果的に調節できる、いずれかの転写調節配列のうち１種類以上に機能的に結合された、これまで述べたいずれかの核酸分子のうち１種類以上を含み得る分子であって、その例は、本明細書に開示されている。特に好適な組換え分子は、ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉、ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆、ｐｔｒｃＨｉｓ− ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄、ｐλＰ_RＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄、ｐＢＢIII−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆およびｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉｃＰ₁₄₂を包含する。そのような組換え分子の生産に関する詳細は、本明細書に開示する。本発明の組換え細胞は、本発明のいずれかの核酸分子のうち１種類以上で形質転換したいかなる細胞も包含する。好適な組換え細胞は、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子、例えばｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉ 、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆、ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄、ｎＤｉＭＰＡ２₂₇₁もしくはＢｖＭＰＡ２の少なくとも一部、および／または糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子、例えばｎＤｉＣＰ₁₄₃もしくはｎＤｉＣＰ₁₄₂の少なくとも一部を含む核酸分子で形質転換した細胞である。特に好適な組換え細胞は、大腸菌：ｐβｇａｌ− ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉、大腸菌：ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆、大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄、大腸菌：ｐλＰ_RＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄ 、スポドプテラ・フルギペルダ：ｐＢＢIII−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆および大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉｃＰ₁₄₂を包含する。これらの組換え細胞の生産に関する詳細は、本明細書に開示する。本発明の組換え細胞は、１種類またはそれ以上の本発明のタンパク質（例えば寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質および／または糸状虫システインプロテアーゼタンパク質）と、１種類もしくはそれ以上の保護化合物を含有できる多面的ワクチンの生産に役立つ、１種類またはそれ以上のその他のタンパク質とをコードする核酸分子を含む１種類またはそれ以上の組換え分子で同時形質転換することもできる。当業者には、組換えＤＮＡ技術の利用は、例えば、宿主細胞中の核酸分子のコピー数、これらの核酸分子が転写される効率、得られた転写体が翻訳される効率、および翻訳後修飾の効率を操作することによって、形質転換された核酸分子の発現を改良できることが認識される可能性がある。本発明の核酸分子の発現を増大させるのに役立つ組換え手法は、核酸分子と高コピー数のプラスミドとの機能的な結合、１個またはそれ以上の宿主細胞染色体への核酸分子の組込み、プラスミドへのベクター安定性配列の付加、転写調節シグナル（例えばプロモーター、オペレーター、エンハンサー）の置換または修飾、翻訳調節シグナル（例えばリボソーム結合部位、シャイン−ダルガルノ配列）の置換または修飾、宿主細胞のコドンの用い方に対応させるための、本発明の核酸分子の修飾、転写体を不安定化する配列の削除、および発酵の際に組換え細胞の増殖を組換え酵素生産から一時的に分離する調節シグナルの利用を包含するが、それらに限られない。発現された本発明の組換えタンパク質の活性を、そのようなタンパク質をコードする核酸分子を分断、修飾または誘導体化することによって、向上させてよい。本発明によれば、本発明の組換え細胞は、本発明の１種類またはそれ以上のタンパク質を、そのようなタンパク質を生産するのに効果的な条件下でそのような細胞を培養し、かつ該タンパク質を回収することによって、生産するのに用いることができる。タンパク質を生産するのに効果的な条件は、タンパク質生産を可能にする適切な培地、バイオリアクター、温度、pHおよび酸素の条件を包含するが、それらに限られない。適切な培地とは、本発明の細胞を培養したときに、それが本発明の、イヌ糸状虫タンパク質を包含する寄生虫タンパク質を生産できる、いかなる培地も意味する。効果的な培地は、一般に、同化できる炭水化物、窒素およびリン酸塩の供給源ならびに、適切な塩類、無機質、金属およびその他の栄養素、例えばビタミン類を含む水性培地である。該培地は、複合栄養素を含んでよく、または規定された最小培地でもよい。本発明の細胞は、回分式、流加培養式、細胞再循環式および連続式の発酵槽を包含するが、それらに限られない慣用の発酵バイオリアクターで培養できる。培養は、振盪フラスコ、試験管、微量滴定ディッシュおよびペトリ皿中でも実施できる。培養は、組換え細胞に適した温度、pHおよび酸素含量で実施する。そのような培養条件は、充分に当業者の熟練の範囲内にある。適切な条件の例は、実施例のセクションに含まれている。生産に用いられるベクターおよび宿主系に応じて、得られる本発明のタンパク質は、組換え細胞内に残留するか；発酵培地に分泌されるか；２細胞膜間の空間、例えば大腸菌の細胞周辺腔に分泌されるか；または細胞もしくはウイルスの膜の外表面に保持されてよい。語句「タンパク質を回収する」とは、該タンパク質を含有する発酵培地全体を単に捕集することを意味し、分離または精製の追加的段階を含意する必要はない。本発明のタンパク質は、様々な標準的タンパク質精製手法、例えば、それらに限られないが、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、濾過、電気泳動、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、コンカナバリンＡクロマトグラフィー、クロマトフォーカシングおよび示差可溶化を用いて精製できる。本発明のタンパク質は、好ましくは、「実質的に純粋な形態」で回収される。本明細書に用いられるように、「実質的に純粋」とは、治療組成物または診断剤としてのタンパク質の効果的な使用を可能にする純度を指す。例えば、動物用ワクチンは、実質的な毒性を全く示さず、かつ予防接種した動物での抗体の生産を刺激できなければならない。本発明は、本発明のタンパク質またはそのミメトープに選択的に結合できる単離抗体も包含する。本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質に選択的に結合できる抗体は、抗寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ抗体と呼ばれる。本実施態様の特に好適な抗体は、抗イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ抗体である。本発明の糸状虫システインプロテアーゼタンパク質に選択的に結合できる抗体は、抗糸状虫システインプロテアーゼ抗体と呼ばれる。この実施態様の特に好適な抗体は、抗イヌ糸状虫システインプロテアーゼ抗体である。単離抗体は、その天然の環境から取り出された抗体である。用語「単離（された）」は、そのような抗体の純度の状態を意味しない。そのため、単離抗体は、様々な程度に精製された、そのような１種類または数種類の抗体を含有する抗血清を包含できる。本明細書に用いられるように、用語「選択的に結合する」とは、そのような抗体の、本発明の指定されたタンパク質およびそのミメトープに優先的に結合できる能力を意味する。結合は、免疫ブロット検定、免疫沈降検定、放射線免疫検定、酵素免疫検定（例えばＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光抗体検定、および免疫電子顕微鏡検査を包含する、当業者に公知の様々な方法を用いて測定できる；例えばSambrookら［前掲］を参照されたい。本発明の抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体のいずれであることもできる。本発明の抗体は、該抗体を得るのに用いられるタンパク質のエピトープまたはミメトープのうち１個以上に選択的に結合できる、一本鎖抗体も包含する抗体フラグメント、および遺伝的に加工された抗体のような機能的等価物を包含する。好適な抗体は、本発明の核酸分子が少なくとも部分的にコードしている、タンパク質またはそのミメトープに応答して誘発される。本発明の抗体を生産する好適な方法は、（ａ）該抗体を生産するのに効果的な量の本発明のタンパク質またはそのミメトープを動物に投与すること、および（ｂ）該抗体を回収することを含む。規定されたタンパク質またはミメトープに対して誘発した抗体は、好都合であり得るが、それは、そのような抗体は、治療組成物に用いたならば診断用検定における干渉または副作用をあるいは生じかねない、その他の物質に対する抗体で実質的に汚染されていないからである。本発明の抗体は、本発明の範囲内にある各種の潜在的な用途を有する。例えば、そのような抗体は、（ａ）動物を受動的に免疫して、そのような抗体による治療に感受性を有する寄生虫から該動物を保護するワクチンとして、（ｂ）そのような寄生虫による感染を検出する検定での試薬として、および／または（ｃ）タンパク質とその他の汚染物質との混合物から望みの本発明のタンパク質を回収する手段として用いることができる。その上、本発明の抗体は、本発明の寄生虫を細胞傷害性薬剤の標的にさせて、そのような寄生虫を直接殺すのに用いることができる。標的化は、当業者に公知の手法を用いて、そのような抗体を該細胞傷害性薬剤に接合（すなわち安定的に結合）することによって達成できる。適切な細胞傷害性薬剤は、二本鎖毒素（すなわち、ＡおよびＢ鎖を有する毒素）、例えばジフテリア毒素、リシン毒素、シュードモナス外毒素、モデッシン毒素、アブリン毒素および志賀毒素；一本鎖毒素、例えばアメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、αアマニチンおよびリボソーム阻害タンパク質；ならびに化学毒素、例えばメルファラン、メトトレキサート、窒素マスタード、ドキソルビシンおよびダウノマイシンを包含するが、それらに限られない。好適な二本鎖毒素は、該毒素の毒性ドメインおよび転位ドメインは含むが、毒素の固有細胞結合ドメインを欠くように修飾される。本発明の一実施態様は、効果的な仕方で動物に投与したとき、下記の処置のうち少なくとも一つに感受性を有する寄生虫が生起する疾病から、該動物を保護できる治療組成物である：本発明の単離寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼによる免疫化、本発明の単離糸状虫システインプロテアーゼによる免疫化、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害剤の投与、またはシステインプロテアーゼ活性の阻害剤の投与。本明細書に用いられるように、そのような処置に感受性を有する寄生虫は、そのような処置を効果的な仕方で動物に施したならば、該動物に疾病を生起できる能力の実質的低下を示す寄生虫である。そのような寄生虫は、直前に列挙したもの以外の処置にも感受性を有し得ることを理解しなければならない。そのような処置は、本明細書に開示された追加処置または治療組成物を包含できるが、それらに限られない。本発明の治療組成物は、下記の保護化合物のうち１種類以上を含む：（ａ）単離された寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質、またはそのミメトープ；（ｂ）厳格な条件下でイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子とハイブリダイズできる、単離寄生虫核酸分子；（ｃ）抗寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ抗体；（ｄ）寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害できるその能力によって同定される、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害剤；（ｅ）単離された糸状虫線虫システインプロテアーゼタンパク質またはそのミメトープ；（ｆ）厳格な条件下でイヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子とハイブリダイズできる、単離された糸状虫線虫核酸分子；（ｇ）抗糸状虫線虫システインプロテアーゼ抗体；および（ｈ）糸状虫線虫システインプロテアーゼ活性を阻害できるその能力によって同定される、システインプロテアーゼ活性の阻害剤。本明細書に用いられるように、保護化合物は、効果的な仕方で動物に投与されたとき、本発明の寄生虫が生起する疾病を治療、軽減および／または予防できる化合物を指す。標的とするのに好適な寄生虫は、これまでに開示されている。本発明のタンパク質、核酸分子および抗体の例は、本明細書中に開示されている。本発明のアスタシン金属エンドペプチダーゼ阻害剤およびシステインプロテアーゼ阻害剤は、下記により詳細に説明する。本発明は、本発明の１種類以上の、アスタシン寄生虫金属エンドペプチダーゼまたは糸状虫線虫システインプロテアーゼに基づく保護化合物を、１種類またはそれ以上の感染性作用因に対して保護する１種類以上の追加の化合物と組合せて含む治療組成物も包含する。そのような化合物および感染性作用因の例は、これまでに開示されている。本発明の治療組成物は、そのような治療法に感受性を有するいかなる動物にも、好ましくは哺乳動物に、より好ましくはイヌ、ネコ、ヒト、フェレット、ウマ、ウシ、ヒツジならびに他の愛玩および／または実利的食用動物に投与できる。保護するのに好適な動物は、イヌ、ネコ、ヒトおよびフェレットであり、イヌおよびネコが特に好適である。一実施態様では、本発明の治療組成物は、心糸状虫の蔓延を防ぐために、その中で寄生虫がミクロフィラリアからＬ３へと発育する媒介生物、例えばカに投与することができる。そのような投与は、経口的にか、または本発明の１種類以上の治療組成物を生産できるトランスジェニックな媒介生物を発生させることによって、実施できると思われる。別の実施態様では、媒介生物、例えばカは、本発明の治療組成物を投与された宿主の血中に存在する治療組成物を摂取できる。本発明の治療組成物は、治療しようとする動物が耐容できる賦形剤中に配合できる。そのような賦形剤の例は、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース液、ハンクス液、およびその他の生理的均衡塩類水溶液を包含する。非水性賦形薬、例えば不揮発油、ゴマ油、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド類も用いてよい。その他の有用な配合物は、増粘剤、例えばカルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含有する懸濁液を包含する。賦形剤は、少量の添加物、例えば、等張性および化学的安定性を高める物質も含有できる。緩衝剤の例は、リン酸緩衝剤、重炭酸緩衝剤およびトリス緩衝剤を包含し、一方、防腐剤の例は、チメロサール、ｍ−またはｏ−クレゾール、ホルマリンおよびベンジルアルコールを包含する。標準配合物は、液体注射可能物、または、注射に適した懸濁液もしくは溶液としての液体に溶解できる固体のいずれであることもできる。したがって、液体でない配合物では、賦形剤は、デキストロース、ヒト血清アルブミン、防腐剤等々を含むことができ、投与の前に無菌の水または生理食塩水をこれに加えることができる。本発明の一実施態様では、治療組成物は、免疫強化剤、例えばアジュバントまたは担体も含有できる。アジュバントは、一般に、特異抗原に対する動物の免疫応答を全般的に強化する物質である。適切なアジュバントは、フロインドアジュバント；他の細菌の細胞壁成分；アルミニウム系の塩類；カルシウム系の塩類；シリカ；ポリヌクレオチド；トキソイド；血清タンパク質；ウイルスコートタンパク質；他の細菌に由来する製剤；γインターフェロン；ブロック共重合体アジュバント、例えばハンターのTitermaxアジュバント（Vaxcel［登録商標］社、米国ジョージア州Norcross）；Ribiアジュバント（Ribi ImmunoChem Research社［米国モンタナ州Hamilton］より入手可能）；ならびにサポニンおよびそれらの誘導体、例えばQuil A（デンマータ国のSuperfos Biosector A/Sより入手可能）を包含するが、それらに限られない。担体は、一般に、投与された動物での治療組成物の半減期を増大させる化合物である。適切な担体は、重合体の徐放性配合物、生物分解できる移植物、リポソーム、細菌、ウイルス、油類、エステルおよびグリコール類を包含するが、それらに限られない。本発明の寄生虫が生起する疾病から動物を保護するには、本発明の治療組成物を、該組成物が、寄生虫が生起する疾病から該動物を保護できるような効果的な方式で、該動物に投与する。例えば、単離されたタンパク質またはそのミメトープは、効果的な仕方で動物に投与したとき、該動物を疾病から保護するのに充分である、好ましくは体液性および細胞性の応答をともに包含する、免疫応答を誘発（すなわち刺激）できる。同様に、本発明の抗体は、効果的な仕方で動物に投与したとき、少なくとも一時的には、該動物を疾病から保護するのに充分である力価で該動物中に存在するような量で投与する。本発明のオリゴヌクレオチドの核酸分子も、効果的な仕方で投与し、それによってアスタシン金属エンドペプチダーゼまたはシステインプロテアーゼのタンパク質の発現を低下させて、本発明に従って標的とされた寄生虫の発育に干渉することができる。本発明の治療組成物は、感染前に動物に投与して、感染を防止でき、および／または感染後に動物に投与して、該寄生虫が生起する疾病を治療できる。例えば、タンパク質、そのミメトープおよびその抗体を免疫療法剤として用いることができる。治療組成物を効果的な仕方で投与するための、許容され得るプロトコルは、個別的な投与分の多少、投与分の回数、投与分投与の頻度、および投与の様式を包含する。そのようなプロトコルの決定は、当業者が達成できる。適切な一回投与分は、適切な期間にわたって１回またはそれ以上投与したとき、動物を疾病から保護できる投与分である。例えば、タンパク質、ミメトープまたは抗体の治療組成物の好適な一回投与分は、動物の体重１kgあたり該治療組成物約１マイクログラム（μg）〜約１０ミリグラム（mg）である。ブースター予防接種は、当初の投与の約２週〜数年後に投与できる。ブースター予防接種は、好ましくは、動物の免疫応答が疾病から動物を保護するのに不充分になったときに、投与する。好適な投与計画は、動物の体重１kgあたりワクチン約１０μｇ〜約１mgを、約２週〜約１２ケ月の期間にわたって約１〜約２回投与する計画である。投与の様式は、皮下、皮内、静脈内、鼻内、経口、経皮および筋内の経路を包含できるが、それらに限られない。一実施態様によれば、本発明の核酸分子は、動物に、疾病から保護しようとする該動物での保護タンパク質または保護ＲＮＡ（例えばアンチセンスＲＮＡ、リボザイムまたはＲＮＡ薬）への該核酸分子の発現を可能にする様式で投与できる。核酸分子は、（ａ）直接の注射（例えば、Wolffら［Science、247、1465〜146 8、1990年］に例えば教示されたような、「露出した」ＤＮＡもしくはＲＮＡ分子として）、または（ｂ）組換えウイルス粒子ワクチンもしくは組換え細胞ワクチンとして包装（すなわち、組換えウイルス粒子ワクチンおよび組換え細胞ワクチンよりなる群から選ばれる賦形薬によって細胞に送達される）を包含するが、それらに限られない様々な方法で動物に送達できる。本発明の組換えウイルス粒子ワクチンは、ウイルスコートに包装され、投与後に動物で発現できる本発明の組換え分子を含有する。好ましくは、該組換え分子は包装物を欠く。アルファウイルス、ポックスウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルスおよびレトロウイルスに基づくものを包含するが、それらに限られない多数の組換えウイルス粒子を用いることができる。好適な組換え粒子ウイルスは、アルファウイルス（例えばシンドビスウイルス）、ヘルペスウイルスおよびポックスウイルスに基づくウイルスである。組換えウイルス粒子ワクチンを生産かつ使用する方法は、「組換えウイルス粒子ワクチン」と題する、1993年２月８日出願の米国特許願第08/015,414号明細書に開示され、その全体を本明細書中に参考として援用する。動物に投与したとき、本発明の組換えウイルス粒子ワクチンは、免疫された動物の体内で細胞に感染し、本発明の寄生虫が生起する疾病から該動物を保護できる、保護タンパク質またはＲＮＡ核酸分子の生産を支配する。例えば、本発明のイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子および／またはイヌ糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子を含む組換えウイルス粒子を、自身を心糸状虫から保護するのに充分な免疫応答を生じる動物を生み出すプロトコルに従って、投与する。本発明の組換えウイルス粒子ワクチンの好適な一回投与量は、動物の体重１kgあたり約１ｘ１０⁴〜約１ｘ１０⁷ウイルスプラータ形成単位（pfu）である。投与プロトコルは、タンパク質に基づくワクチンについて本明細書に記載したものと同様である。本発明の組換え細胞ワクチンは、本発明の少なくとも１種類のタンパク質を発現する本発明の組換え細胞を含有する。好適な組換え細胞は、サルモネラ属、大腸菌、マイコバクテリウム属、スポドプテラ・フルギペルダ、仔ハムスター腎、筋原細胞Ｇ８、ＣＯＳ、ＭＤＣＫおよびＣＲＦＫの組換え細胞を包含し、サルモネラの組換え細胞がより好適である。そのような組換え細胞は、様々な方法で投与できるが、経口的に、好ましくは体重１kgあたり細菌約１０⁸〜約１０¹²個という範囲の投与分で、投与できるという利点を有する。投与プロトコルは、タンパク質に基づくワクチンについて本明細書に記載したものと同様である。組換え細胞ワクチンは、全細胞または細胞溶解物を含むことができる。他のほとんどの腸内病原体と共通して、サルモネラ属の菌株は、通常、経口的に宿主に侵入する。一度腸管内に達したならば、粘膜表面と作用し合って、通常は、侵襲性感染を確立する。ほとんどのサルモネラ属の感染は、上皮表面で制御されて、代表的なサルモネラ誘発性胃腸炎を生じる。チフス菌、およびいくつかのネズミチフス菌分離株を包含する、何種類かのサルモネラ属の菌株は、宿主内により深く侵入できる能力を発達させていて、拡散した全身性感染を生じる。そのような菌株は、マクロファージその他の免疫細胞の殺傷作用に抵抗する力量を有するものと思われる。チフス菌は、通性細胞内寄生体として長期間存在できる。何種類かの生ワクチンの菌株も、単核食細胞系内に長期間存続できる。そのようにして感染した宿主は、粘膜の免疫応答に加え、サルモネラ属に対する全身的な細胞性および血清抗体性の応答を発生する。したがって、強毒性であれ弱毒性であれ、侵襲性のサルモネラ属は、局所的な非侵襲性消化管感染を生起するにすぎない他の多くの腸内病原体とは異なり、強度の免疫応答を刺激できる。生きたサルモネラ属の強力な免疫原性は、それらを、本発明の核酸分子、およびそれらがコードするタンパク質を免疫系へと輸送するための、関心が惹かれる候補にしている。組換え細胞に基づく好適なワクチンは、該細胞が弱毒化されているワクチンである。例えば、ネズミチフス菌の菌株は、生体内での増殖および生存に決定的に重要な遺伝子に突然変異を導入することによって、弱毒化できる。例えば、サイクリックアデノシン−リン酸（ｃＡＭＰ）受容体タンパク質またはアデニル酸シクラーゼをコードする遺伝子を削除して、非強毒性のワクチン菌株を形成する。そのような菌株は、抗原を消化管内のリンパ系組織に送達できるが、脾臓および腸間膜リンパ節を侵襲できる力量の低下を示す。これらの菌株は、依然として、哺乳動物である宿主の体液性および細胞性の免疫をともに刺激できる。組換え細胞ワクチンは、本発明のタンパク質を動物の免疫系に導入するのに用いることができる。例えば、サルモネラ属で機能する発現ベクターに機能的に結合させた、本発明の核酸分子を含む組換え分子は、サルモネラ属宿主細胞内への形質転換ができる。次いで、得られる組換え細胞を、保護しようとする動物に導入する。好適なサルモネラ属宿主細胞は、その生存が、組換え分子を維持できるその能力に依存する細胞（すなわち、均衡致死宿主−ベクター系）である。そのような好適な宿主／組換え分子の組合せの例は、アスパラギン酸βセミアルデヒド脱水素酵素を生産できないサルモネラ属の菌株（例えば、ＵＫ−１ｘ３９８７またはＳＲ−１１ｘ４０７２）と、該酵素もコードできる組換え分子とを組合せた組合せである。アスパラギン酸βセミアルデヒド脱水素酵素は、ａｓｄ遺伝子にコードされ、ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）を生産する経路の重要な酵素である。ＤＡＰは、グラム陰性菌、例えばサルモネラ属の細胞壁のペプチドグリカンの必須成分であり、そのため、細胞の生存に必要である。したがって、機能的なａｓｄ遺伝子を欠くサルモネラ属は、機能的なａｓｄ遺伝子も発現できる組換え分子を維持する場合にのみ、生存できるにすぎない。一実施態様では、本発明の核酸分子をｐＴＥＣＨ−１という発現ベクター（Me deva社［英国ロンドン］より入手可能）に挿入し、得られる組換え分子をサルモネラ属の菌株、例えばＢＲＤ５０９（Medeva社より入手可能）に核酸移入して、組換え細胞を形成する。そのような組換え細胞は、コードされた対応するタンパク質を生産するのに、または組換え細胞ワクチンとして、用いることができる。本発明の一好適実施態様は、動物を心糸状虫から保護するための、本発明の核酸分子およびタンパク質、特にイヌ糸状虫の核酸分子およびタンパク質の用途である。好適な治療組成物は、循環系に侵入する前の、Ｌ３幼生、第三脱皮、Ｌ４幼生、第四脱皮および未成熟成虫を包含するこの寄生虫の発生周期の部分中の、少なくとも一段階を阻害できる組成物である。イヌでは、発生周期のこの部分は約７０日である。そのため、好適な治療組成物は、イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼおよびイヌ糸状虫システインプロテアーゼに基づく、本発明の治療化合物を含有する。そのような組成物を、動物を心糸状虫から保護するのに効果的な仕方で該動物に投与する。これまでに開示したその他のイヌ糸状虫タンパク質、核酸分子および抗体を包含する、追加の保護化合物を投与することによって、追加的な保護を得てもよい。本発明の一実施態様は、酵素活性を有する本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼおよび／または糸状虫線虫システインプロテアーゼというタンパク質の、そのような酵素活性の阻害剤を同定するための用途である。理論にとらわれるものではないが、寄生虫は、そのようなプロテアーゼを、胚および幼生の発生を遂行すること、脱皮を遂行すること、ならびに幼生および成虫の双方として組織移動を遂行することを包含するが、それらに限られない数多くのことに用いると考えられる。そのようなプロテアーゼは、そのような機能を促進するために、皮膚の結合組織の高分子ならびに他のタンパク質性材料を減成できる。ウニ類、ショウジョウバエ属およびアフリカツメガエル属で同定されたアスタシン金属エンドペプチダーゼが、それぞれの生物の発生および成熟に関連しているのは興味深いことである。そのため、アスタシン金属エンドペプチダーゼおよび／またはシステインプロテアーゼ活性の阻害剤は、寄生虫全般による胚および／もしくは幼生の発生または脱皮、ならびにそのような移動ができるこれらの寄生虫による組織移動を混乱させるのに、特に有益であり得ると思われる。そのような阻害剤を開発するのに寄生虫酵素を用いることも好都合であるが、それは、該寄生虫に高度に選択的である阻害剤を、処置しようとする動物への不当な副作用を生じることなく、同定できるからである。本発明の一治療組成物は、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害剤、すなわち、イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害剤による阻害に対して感受性を有する、寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼの機能に実質的に干渉できる化合物を含有する。アスタシン金属エンドペプチダーゼの阻害剤は、酵素活性を有する、寄生虫、好ましくはイヌ糸状虫のアスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を用いて同定できる。本発明の一実施態様は、寄生虫のアスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害できる化合物を同定する方法である。そのような方法は、（ａ）単離された寄生虫、好ましくはイヌ糸状虫のアスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を、推定される阻害化合物に、該化合物の不在下では該タンパク質がアスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を有する条件下で接触させる（例えば結合する、混合する）段階、および（ｂ）該推定される阻害化合物がアスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害するか否かを決定する段階を含む。スクリーニングすべき推定阻害化合物は、有機分子、抗体（その機能的等価物を包含する）および基質類似体を包含する。アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を決定する方法は、当業者に公知である；例えば、Gomis-Ruthら［前掲］、およびその中に引用された参考文献を参照されたい。本発明は、寄生虫のアスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害できる化合物を同定するための試験キットも包含する。そのような試験キットは、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を有する、寄生虫、好ましくはイヌ糸状虫の単離されたアスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質、および推定阻害化合物の存在下で（すなわち、それによって遂行される）、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害の程度を決定する手段を含む。そのような方法および／または試験キットによって単離されたアスタシン金属エンドペプチダーゼ阻害剤は、そのような阻害剤に感受性を有するいかなるアスタシン金属エンドペプチダーゼを阻害するのに用いることもできる。阻害するのに好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼ酵素は、寄生虫が生産するそれである。本発明の特に好適なアスタシン金属エンドペプチダーゼ阻害剤は、心糸状虫から動物を保護できる。本発明の阻害剤を用いて、動物のアスタシン金属エンドペプチダーゼ関連障害を標的とすることも、本発明の範囲内である。本発明のアスタシン金属エンドペプチダーゼ阻害化合物を含む治療組成物は、標的とされたアスタシン金属エンドペプチダーゼ酵素が生起する疾病から動物を保護するのに、好ましくは心糸状虫から動物を保護するのに効果的な仕方で、動物に投与できる。効果的な量および投与法は、当業者に公知の手法を用いて決定できる。本発明の別の治療組成物は、寄生虫システインプロテアーゼ活性の阻害剤、すなわち、糸状虫線虫のシステインプロテアーゼ活性の阻害剤による阻害に対して感受性を有する、寄生虫システインプロテアーゼの機能に実質的に干渉できる化合物を包含する。システインプロテアーゼ阻害剤は、酵素活性を有する、本発明の糸状虫線虫、好ましくはイヌ糸状虫の単離されたシステインプロテアーゼタンパク質を用いて同定できる。本発明の一実施態様は、寄生虫のシステインプロテアーゼ活性を阻害できる化合物を同定する方法である。そのような方法は、（ａ）糸状虫線虫、好ましくはイヌ糸状虫のシステインプロテアーゼタンパク質を、推定される阻害化合物に、該化合物の不在下では該タンパク質がシステインプロテアーゼ活性を有する条件下で接触させる（例えば結合する、混合する）段階、および（ｂ）該推定される阻害化合物がシステインプロテアーゼ活性を阻害するか否かを決定する段階を含む。スクリーニングすべき推定阻害化合物は、有機分子、抗体（その機能的等価物を包含する）および基質類似体を包含する。アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を決定する方法は、これまでに開示したとおり、当業者には公知である。本発明は、寄生虫のシステインプロテアーゼアスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害できる化合物を同定するための試験キットも包含する。そのような試験キットは、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を有する寄生虫、好ましくはイヌ糸状虫の単離されたアスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質、および推定阻害化合物の存在下で（すなわち、それによって遂行される）、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害の程度を決定する手段を含む。そのような方法および／または試験キットで単離された阻害剤は、そのような阻害剤に対して感受性を有するいかなるシステインプロテアーゼを阻害するのに用いることもできる。阻害するのに好適な酵素のシステインプロテアーゼは、寄生虫が生産するそれである。本発明の特に好適なシステインプロテアーゼ阻害剤は、動物を心糸状虫から保護できる。本発明の阻害剤を用いて、動物のシステインプロテアーゼ関連障害を標的とすることも、本発明の範囲内にある。本発明のシステインプロテアーゼ阻害化合物を含む治療組成物は、標的とされたシステインプロテアーゼが生起する疾病から動物を保護するのに効果的な方式で、動物に投与できる。効果的な量および投与様式は、当業者に公知の手法を用いて決定できる。寄生虫が生起する疾病から動物を保護するための、本発明の治療組成物の薬効は、（例えば、本発明のタンパク質またはミメトープを用いる）保護抗体の検出、処置された動物体内の細胞性免疫の検出、または処置された動物が疾病に耐性であるか否かを決定するための、寄生虫に対する処置された動物の挑戦を包含するが、それらに限られない様々な方法で試験できる。そのような手法は、当業者に公知である。本発明によれば、本発明者らは、プロテアーゼ阻害剤が寄生虫の幼生の発生を阻害できることを示した。例えば、ベスタチンおよびホスホラミドンは、イヌ糸状虫幼生の脱皮を阻害することが示されたが、それを実施例で、より詳細に説明する。本発明の別の実施態様は、寄生虫幼生の外分泌／分泌（ＥＳ）産物からの、金属プロテアーゼおよびシステインプロテアーゼを包含する、プロテアーゼの単離を含む。米国特許願第08/153,554号明細書［前掲］に最初に記載されたプロトコルの修正した翻案を用いて、本発明者らは、例えば、約６０kDのタンパク質（トリス−グリシン＝硫酸ドデシルナトリウムポリアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって測定した限りで）のタンパク質を含む、Ｈ−Ｐｈｅ−ＡＭＣを切断できる該タンパク質の能力によって決定される限りでの金属プロテアーゼ活性を有する分画を単離した。サイズ排除クロマトグラフィーに付したとき、該活性分画は、ウシ血清アルブミンとともに溶出し、約６２〜約６６kDの近似分子量を示す。より詳細に実施例で説明するこの修正プロトコルは、寄生虫、好ましくはイヌ糸状虫の幼生ＥＳを、陰イオン交換クロマトグラフィー、次いでサイズ排除クロマトグラフィーおよび等電点電気泳動に付すことを包含する。該活性分画は、約６．８のｐＩを有する。別の実施態様では、本発明者らは、コラーゲンを減成できる、ＥＳからの１種類以上の寄生虫金属プロテアーゼを同定した。例えば、ゼラチンを基剤とする基質中でのイヌ糸状虫幼生ＥＳの電気泳動は、約６０、９５、および少なくとも約２００kDの見かけ分子量で移動する、単離された活性分画へと導く。そのような分画のタンパク質分解活性は、ＥＤＴＡによって、基本的に完全に阻害される。単離された本発明のタンパク質、ミメトープ、核酸分子および抗体を、寄生虫による感染を探知するための診断用試薬として用いることも、本発明の範囲内である。そのような診断用試薬は、該寄生虫の生活環のその他の相を探知できる追加の化合物で補強することができる。下記の実施例は、例示の目的で与えたものであって、本発明の範囲を限定しようとするものではない。実施例下記の実施例は、当業者に公知である多くの組換えＤＮＡおよびタンパク質化学の手法を含む；例えばSambrookら［前掲］を参照されたい。実施例１本実施例は、本発明の２種類の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子のクローニングおよび配列決定を開示する。本実施例は、本発明の組換え分子および組換え細胞の生産も開示する。下記の仕方で、イヌ糸状虫の第３期幼生のｃＤＮＡ発現ライブラリーを調製した。ChomczynskiおよびSacchi［Anal.Biochem.、162、156〜159、1987年］が記載した方法に類似の、酸グアニジニウム・フェノール・クロロホルム法を用いて、イヌ糸状虫の第３期幼生（Ｌ３）から総ＲＮＡを抽出した。約230,000のＬ３をＲＮＡ調製に用いた。Collaborative Research Inc．社［米国マサチューセッツ州Waltham］からのOligo dTセルロースを、製造者が推奨する方法に従って用い、オリゴｄＴセルロースクロマトグラフィーによって、ポリＡ＋選択ＲＮＡを総ＲＮＡから分離した。発現ベクターであるラムダ（λ）Ｕｎｉ−ＺＡＰ（商品名）ＸＲ（Stratagene Cloning System社［米国カリフォルニア州La Jola］より入手可能）にＬ３のポリＡ＋ＲＮＡを挿入することによって、発現ライブラリーを構成したが、それにはStratagene社のＺＡＰ−ｃＤＮＡ合成キット（商品名）のプロトコルおよびＬ３ポリＡ＋ＲＮＡ約６〜７μｇを用いた。得られたライブラリーを、約９６％の組換え体で、約４．８８ｘ１０⁹pfu／mlの力価まで増幅した。最初のＬ３ｃＤＮＡの増幅したライブラリーから無作為に選んだアリコートの更に１回の増幅によって、１０個のミニライブラリーを形成した。これらのミニライブラリーファージを、ファージ希釈緩衝液（例えば１０mMトリス−ＨＣｌ、pH７．５、１０ mM硫酸マグネシウム）中で捕集し、４℃で貯蔵した。約６８９ヌクレオチドのイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子は、部分的なイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子を表し、ｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉と呼ばれるが、これを、下記の２種類のプライマー：配列番号１４を有する４倍縮重プライマー、すなわち５’ＡＣＷＣＡＴＧＡＡＡＴＩＧＳＩＣＡＴ３’（ＭＰ１と呼ぶ；ＷはＡまたはＴであることができ；ＳはＣまたはＧであることができ；Ｉはイノシンである）、および配列番号１５を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド、すなわち５’ＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧ３’（Ｔ７と呼ばれる）を用いて、イヌ糸状虫Ｌ３ｃＤＮＡ発現ミニライブラリーからＰＣＲ増幅した。プライマーＭＰ１は、金属プロテアーゼの保存亜鉛結合ドメインの公表された配列から設計した。プライマーＴ７は、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ［商品名］というベクター（Stratagene社より入手可能）と相補的である。ミニライブラリー第１０番から増幅した核酸分子は、ｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉と呼ぶが、これをゲル精製し、電気溶出し、クローニングベクターｐＣＲII（Invitr ogen社［米国カリフォルニア州San Diego］より入手可能）内に、製造者の指示に従ってクローニングし、それによって、組換えベクターｐＣＲII−ｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉を形成した。ｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉のヌクレオチド配列を決定し、配列番号１のほぼヌクレオチド第６６０位から３’末端にわたるヌクレオチドを含むことを見出したが、その生成を、より詳細に下記に説明する。Ｌ３ｃＤＮＡのミニライブラリー第１０番を、Sambrookら［前掲］に記載の厳格な（すなわち標準的な）ハイブリダイゼーション条件を用いて、プローブとして放射能標識したＭＰ１オリゴヌクレオチドでスクリーニングした。プローブとハイブリダイズしたプラークを再スクリーニングし、プラーク精製した。イヌ糸状虫核酸分子のｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉を含むプラーク精製したクローンを、本明細書ではｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉と呼ぶ二本鎖組換え分子へと転換したが、これには、Stratagene社のＺＡＰ−ｃＤＮＡ合成キット（商品名）に記載の生体内切り出しプロトコルに従って、Ｒ４０８というヘルパーファージおよび大腸菌ＸＬ１−Ｂｌｕｅ株を用いた。Sambrookら［前掲］に記載のようにして、アルカリ性溶解のプロトコルを用いて、二本鎖プラスミドＤＮＡを調製した。組換え分子ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉を大腸菌内に形質転換して、組換え細胞である大腸菌：ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉を形成した。組換え分子ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉を、Sambrookら［前掲］に記載のとおり、サンガーのジデオキシ鎖終結法を用いて、核酸配列決定に付した。核酸分子ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉約１２９９ヌクレオチドの共通配列を決定し、配列番号１として提示した。配列番号１は、３個の重複する開放読み枠を見かけ上コードする。最初の開放読み枠は、ＰＤｉＭＰＡ１_ORF1と呼ばれ、約１９１アミノ酸であり（配列番号３に提示）、配列番号１のヌクレオチド第１８〜５９０番を包含する。第二の開放読み枠は、ＰＤｉＭＰＡ１_ORF2と呼ばれ、配列番号１のヌクレオチド第５０８〜約９３０番のヌクレオチドを包含する。開放読み枠ＰＤｉＭＰＡ１_ORF2は、配列番号４のほぼアミノ酸第３６番で始まる、拡大亜鉛結合ドメイン、および親水性領域ＨＥＩＧＨＴＬＧＩＦＨＥとともに、ドメインＹＤＴＧＳＶＭＨＹ（ほぼアミノ酸第８７番で始まる）を含むが、これは、アミノ酸第９５番で亜鉛と結合すると考えられるチロシンを有する。第三の開放読み枠は、ＰＤｉＭＰＡ１_ORF3と呼ばれ、約１２１アミノ酸であり（配列番号５に提示）、配列番号１のヌクレオチド第７８５〜１１４７番を包含する。無重複タンパク質配列データベースの相同性検索を、ＢＬＡＳＴというネットワークを用い、米国国立バイオテクノロジー情報センターを通じて実施した。このデータベースは、＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ＋ＰＩＲ＋ＳＰＵｐｄａｔｅ＋ＧｅｎＰｅｐｔ＋ＧＰＵｐｄａｔｅを包含する。配列番号３、配列番号４および配列番号５を用いて実施した検索は、アスタシン族の金属エンドペプチダーゼの成員に対して、３種類の開放読み枠のすべてによるアミノ酸レベルでの有意な相同性を示した。３種類の開放読み枠のすべてを通じての有意な相同性は、カエノラーブジチス・エレガンスＲ１５１．５遺伝子産物［Genbank受入番号第U00036号］にも付随する。核酸分子ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉の５’末端およびその付近でのｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター配列から、２個のｃＤＮＡフラグメントが、それらの５’末端を通じて互いに結合して、この核酸分子を形成したことは明らかであった。配列番号１のヌクレオチド配列と、配列番号２の配列（実施例２に記載の無関係に単離されたアスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子であるｎＤｉＭＰＡ２₂₁₆₆の見かけのヌクレオチド配列）、およびアスタシン族金属エンドペプチダーゼのその他の成員のヌクレオチド配列との比較は、配列番号１のヌクレオチド第５６番が、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆の５’末端の最初のヌクレオチドに対応することを示し、ヌクレオチド第５６番は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉の異なる２個のｃＤＮＡ配列の接点を表すことを示唆する。したがって、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉のヌクレオチド第１〜５５番は、クローニングの前にアスタシン金属エンドペプチダーゼｃＤＮＡフラグメントの５’末端に結合した、非アスタシン関連ｃＤＮＡ配列を表す可能性が最も高い。アミノ酸レベルでのアスタシンの相同性は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉ の最初の開放読み枠、すなわちＰＤｉＭＰＡ１_ORF1のアミノ酸第１２５番に始まることを見出すことができる。実施例２本実施例は、本発明の追加の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子のクローニングおよび配列決定を開示する。本実施例は、本発明の組換え分子および組換え細胞の生産も開示する。アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉の５’末端の異例の配列のため、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆と呼ぶ、第二のアスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子を、下記のとおり、実施例１に記載のＬ３ｃＤＮＡ発現ライブラリーから単離した。約２７１ヌクレオチドのイヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子をｎＤｉＭＰＡ２₂₇₁と呼び、イヌ糸状虫Ｌ３ｃＤＮＡ発現ミニライブラリー第９番から、下記の２プライマー：配列番号１６を有するオリゴヌクレオチド、すなわち５’ＴＧＧＴＡＴＴＡＴＡＴＣＡＣＡＴＧＡＡＡＴＴＧＧＴＣＡＴＡＣ３’（ＺＮＳＥＮと呼ぶ）、および配列番号１７を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド、すなわち５’ＣＣＣＡＡＴＴＧＴＧＴＡＣＴＧＴＴＧＡＡＡＴＴＴＡＴＣＡＣ３’（ＭＰ１４と呼ぶ）を用いてＰＣＲ増幅した。プライマーＺＮＳＥＮは、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉の金属プロテアーゼの保存亜鉛結合ドメインをコードし、配列番号１のほぼヌクレオチド第６００番〜ほぼヌクレオチド第６２９番にわたる。プライマーＭＰ１４は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉のほぼヌクレオチド第８４２番〜ほぼヌクレオチド第８７０番にわたる領域に相補的なアンチセンスプライマーである。核酸分子ｎＤｉＭＰＡ２₂₇₁を放射能標識し、Ｌ３ｃＤＮＡミニライブラリー第９番をスクリーニングするためのプローブとして用いた。このプローブと、厳格な条件下でハイブリダイズしたプラークを再スクリーニングし、プラーク精製した。イヌ糸状虫核酸分子ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆を含むプラーク精製したクローンを、本明細書ではｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆と呼ぶ、二本鎖組換え分子へと転換したが、これには、Stratagene社のＺＡＰ−ｃＤＮＡ合成キット（商品名）に記載の生体内切り出しプロトコルに従って、Ｒ４０８ヘルパーファージおよび大腸菌ＸＬ１−Ｂｌｕｅ株を用いた。Sambrookら［前掲］に記載のようにして、アルカリ性溶解のプロトコルを用いて、二本鎖プラスミドＤＮＡを調製した。組換え分子ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆を大腸菌内に形質転換して、組換え細胞の大腸菌：ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆を形成した。組換え分子ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆を、Sambrookら［前掲］に記載のとおり、サンガーのジデオキシ鎖終結法を用いて、核酸配列決定に付した。核酸分子ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆の約２１２６ヌクレオチドの共通配列を決定し、配列番号２として提示した。配列番号２は、５個の重複する開放読み枠を見かけ上コードしている。最初の開放読み枠は、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF1と呼ばれ、約１７８アミノ酸であり（配列番号６に提示）、配列番号２のヌクレオチド第２〜５３５番を包含する。第二の開放読み枠は、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF2と呼ばれ、約１４５アミノ酸であり（配列番号７として提示）、配列番号２のほぼヌクレオチド第４５３〜８８７番を包含する。ＰＤｉＭＰＡ２_ORF2は、配列番号７のほぼアミノ酸第３６番に始まる、拡大亜鉛結合ドメイン、およびほぼアミノ酸第８７番に始まる、チロシン含有主題的要素を含む。第三の開放読み枠は、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF3と呼ばれ、約１３４アミノ酸であり（配列番号８に提示）、配列番号２のヌクレオチド第７３０〜１１３１番を含む。第四の開放読み枠は、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF4と呼ばれ、約１５４アミノ酸であり（配列番号９に提示）、配列番号２のヌクレオチド第１１１２〜１５７３番を包含する。第五の開放読み枠は、ＰＤｉＭＰＡ２_OR _F5 と呼ばれ、約１６３アミノ酸であり（配列番号１０に提示）、配列番号２のヌクレオチド第１４２９〜１９１７番を包含する。ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉（配列番号１）とｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆（配列番号２）との推定される核酸配列の比較から、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉のほぼ第１〜５５位（配列番号１で番号付けた限りで）のヌクレオチドの範囲を含まないことが示される。上記に考察したとおり、このヌクレオチドの範囲は、アスタシン金属エンドペプチダーゼ核酸分子の５’末端に結合した無関係のｃＤＮＡクローンを表すものと考えられる。ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉のほぼ第５６〜９０７位（配列番号１で番号付けた限りで）にわたるヌクレオチドの範囲は、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆のほぼ第１〜８５２位（配列番号２で番号付けた限りで）にわたるヌクレオチドの範囲との１００％の相同性を共有する。ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉のほぼ第９０８〜９７０位（配列番号１で番号付けた限りで）にわたるヌクレオチドの範囲は、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆から欠けている。ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉のほぼ第９７１〜１１３３位（配列番号１で番号付けた限りで）にわたるヌクレオチドの範囲は、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆のほぼ第８５３〜１０１５位（配列番号２で番号付けた限りで）にわたるヌクレオチドの範囲との１００％の相同性を共有する。核酸分子ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉より有意に長い３’末端を有する。無重複タンパク質配列データベースの相同性検索を、ＢＬＡＳＴというネットワークを用い、米国国立バイオテクノロジー情報センターを通じて実施した。このデータベースは、＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ＋ＰＩＲ＋ＳＰＵｐｄａｔｅ＋ＧｅｎＰｅｐｔ＋ＧＰＵｐｄａｔｅを包含する。配列番号７、配列番号８、配列番号９および配列番号１０、ならびに配列番号１１を用いて実施した検索は、配列番号７、配列番号８、配列番号９および配列番号１０は、それぞれ、アスタシン族の金属エンドペプチダーゼの既知の成員とのアミノ酸レベルでの有意な相同性を共有することを示した。それに反して、配列番号１１は、既知のアスタシン金属エンドペプチダーゼとは有意な相同性を示さなかった。ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆がコードする５個の開放読み枠の複合イヌ糸状虫ＯＲＦを、この５個のＯＲＦを既知のアスタシン金属エンドペプチダーゼ配列に対して整列させることによって形成した。この複合イヌ糸状虫ＯＲＦは、２００アミノ酸のアスタシンタンパク質より有意に長い領域にわたり、配列番号１１に提示した。配列番号１１のアスタシンドメインとザリガニのアスタシンとの比較は、アミノ酸レベルでの約２９％の相同性を示した。配列番号１１のアスタシンドメインは、ヒト骨形態形成タンパク質１、マウス腎刷子縁金属エンドペプチダーゼ、ヒト腸管刷子縁金属エンドペプチダーゼおよびアフリカツメガエル胚タンパク質ＵＶＳ．２のアスタシンドメインに対しても、それぞれ、アミノ酸レベルでの約３０％、３１％、３３％および３３％の相同性を示した。配列番号１１とカエノラーブジチス・エレガンスＲ１５１．５遺伝子産物（Ge nbank受入番号第U00036号）との比較は、２配列間の約２４％の相同性を示した。カエノラーブジチス・エレガンス遺伝子産物は、充分に保存された拡大亜鉛結合ドメインの主題的要素、およびチロシン含有主題的要素も含む。興味深いことに、カエノラーブジチス・エレガンスＲ１５１．５遺伝子産物は、Wilsonら［前掲］が開放読み枠として同定したが、該出版物の著者らは、自由生活線虫のカエノラーブジチス・エレガンスからの２．２メガベースの隣接ヌクレオチド配列を記載して、Ｒ１５１．５とアスタシン金属エンドペプチダーゼの一族との相同性を認めることに失敗した。本発明者らは、そのような相同性、およびカエノラーブジチス・エレガンスがアスタシン金属エンドペプチダーゼをコードしている見込みに注目した、明らかに最初の者である。実施例３本実施例は、本発明の組換え細胞の生産、および本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を生産するためのその用途を開示する。ｔｒｃという転写調節配列と、６個のヒスチジンを含むポリヒスチジンセグメントをコードする融合配列とに機能的に結合した、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆のほぼ第１１９〜９２２位（配列番号２で番号付けた限りで）のヌクレオチドを含む、組換え分子のｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄を、下記の仕方で生産した。ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆のほぼ第１１９番〜ほぼ第９２２番（配列番号２で番号付けた限りで）にわたるヌクレオチドを含む、ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄と呼ばれる約８０４ヌクレオチドのＤＮＡフラグメントを、制限エンドヌクレアーゼのＢａｍＨＴＩで、組換え分子ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆から切断し、ゲル精製し、ＢａｍＨＩで切断しておいた発現ベクターｐＴｒｃＨｉｓＢ（Invitrogen社より入手可能）内にサブクローニングした。得られた組換え分子であるｐｔｒｃＨｉｓ− ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄を大腸菌内に形質転換して、組換え細胞である大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄を形成した。組換え細胞の大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄を、約０．１mg／m lのアンピシリンを含有する強化細菌増殖培地を収容する振盪フラスコ中で、３７℃で培養する。細胞が約０．３のＯＤ₆₀₀達したとき、約１ミリモルのイソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）の添加によって、大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄の発現を誘導し、細胞を約３７℃で３時間培養する。標準的手法を用い、組換え細胞溶解物のＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いでクーマシーブルー染色によって、タンパク質生産を監視する。組換え細胞の大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄は、本明細書ではＰＨＩＳ−ＰＤｉＭＰＡ２₈₀₄ と呼ぶ融合タンパク質を生産するが、それは、寄生虫核酸分子の挿入断片を欠くｐＴｒｃＨｉｓＢプラスミドで形質転換した細胞によっては、生産されない。実施例４本実施例は、本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を生産できる、本発明の別の組換え細胞の生産を開示する。 λＰ_Rという転写調節配列と、６個のヒスチジンを含むポリヒスチジンセグメントをコードする融合配列とに機能的に結合した、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆のほぼ第１１９〜９２２位（配列番号２で番号付けた限りで）のヌクレオチドを含む、組換え分子のｐλＰＲＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄を、下記の方式で生産した。実施例３に記載のとおりに生産した核酸分子ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄を、λＰ_R／Ｔ７／ＲＳＥＴ−Ｂという発現ベクターのＢａｍＨＩ制限部位内に結合した。約３４５５塩基対（bp）であるこのベクターは、アンピシリン耐性遺伝子、および大腸菌の複製開始点を含む、ｐＵＣ１９からのＰｖｕIIからＡａｔIIまでの約１９９０塩基対；λＰ_Rプロモーター、ｃＩ⁸⁵⁷λリプレッサー遺伝子、および溶菌性増殖を調節するｃｒｏ遺伝子の２２アミノ酸を含む、一端にＰｖｕIIというリンカーが加えられたベクターｐＲＫ２４８ｃＩｔｓ（ＡＴＣＣ第33766号として入手可能）からのＢｇｌIIからＢｇｌIIまでの１１００bpのＤＮＡフラグメント；ｐＧＥＭＥＸ−１（Promega社［米国ウィスコンシン州Madison］より入手可能）からの、Ｔ７プロモーターを含むＢｇｌIIからＸｂａＩまでの５５bpのセグメント；Ｔ７−Ｓ１０翻訳エンハンサー、Ｈｉｓ６融合、１１アミノ酸のＳ１０リーダー融合、エンテロキナーゼ切断部位および多重クローニング部位を含む、ｐＲＳＥＴ−Ｂ（Invitrogen社より入手可能）からのＸｂａＩからＥｃｏＲＩまでの約１７０bpのセグメント；ならびに、ｔｒｐＡオペロンからの３個の読み枠のすべてでのＴ1 翻訳ターミネーター、バシルス・ツリンギエンシスBacillus thuren giensis の結晶タンパク質からのＲＮＡ安定化配列、およびＴ2というｒｈｏ非依存性転写ターミネーターを含む合成翻訳および転写終止シグナルを有する約１４０bpのフラグメントを含んだ。得られた組換え分子を、ｐλＰ_RＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄と呼び、大腸菌内に形質転換して、組換え細胞の大腸菌：ｐλＰ_RＨｉｓ−ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄を形成した。実施例５本実施例は、本発明の別の組換え細胞、および本発明の寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を生産するためのその用途を記載する。バキュロウイルスの多角体転写調節配列に機能的に結合した、核酸分子ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆（実施例２に記載のとおり生産した）を含む、組換え分子ｐＢＢII I−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆を下記の方法で生成した。ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆がコードするタンパク質の生産を支配できるバキュロウイルス組換え分子を生産するために、実施例２に記載のとおり生産した組換え分子ｐβｇａｌ−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆ をＸｈｏＩで消化し、クレノウＤＮＡポリメラーゼで末端充填し、ＰＳｔＩで消化し、ゲル精製し、これをＢｖＭＰＡ２と呼ぶ。バキュロウイルスシャトルプラスミドであるＢｌｕｅＢａｃIII（ＢＢIII：Invitrogen社より入手可能）をＮｃｏＩで消化し、末端充填し、ＰｓｔＩで消化し、ウシ腸管ホスファターゼで処理した。得られたベクターフラグメントをゲル精製し、ＢｖＭＰＡ２に結合した。得られた組換え分子は、ｐＢＢIII−ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆と呼び、制限地図作成によって、適正な挿入断片の方向付けを確認した。この構成体、および線状のBaculogoldというバキュロウイルスＤＮＡ（Pharmingen社）を、宿主細胞のスポドプテラ・フルギペルダｓｆ９（コロラドバイオプロセシングセンター［米国コロラド州Fort Collins］により供与）内に同時形質転換した。得られたＢｖＭＰＡと名付けた組換えウイルスを培養して、組換えウイルスの生産を増大させ、ウエスタンブロット法によって、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆の発現を確認した。実施例６本実施例は、本発明の糸状虫線虫のシステインプロテアーゼ核酸分子のクローニングおよび配列決定を説明する。ｎＤｉＣＰ₁₄₃と呼ばれる、約１４３ヌクレオチドのイヌ糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子は、部分的なイヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子を表すが、これを、イヌ糸状虫の成雌虫から抽出したイヌ糸状虫のゲノムＤＮＡから、Sambrookら［前掲］に記載のものと類似の標準プロトコルを用いて、ＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ増幅反応に用いた２個のプライマーは、配列番号１８、すなわち５’ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＧＴＧＧＷＴＣＡＴＧＹＴＧＧＧＣ３’（２５Ｃと呼ぶ；下線をつけたものはＢａｍＨＩ部位；ＷはＡまたはＴ；ＹはＣまたはＴ）を有する４重に縮重したプライマー、および配列番号１９、すなわち５’ＴＡＩＣＣＩＣＣＲＴＴＲＣＡＩＣＣＹＴＣ３’（Ｇ６５と呼ぶ；ＲはＡまたはＧ；ＹはＣまたはＴ；Ｉはイノシン）を有する８重に縮重したアンチセンスプライマーを包含した。両プライマーとも、システインプロテアーゼの公表された配列から設計した。プライマー２５Ｃを更に精製したが、それは、イヌ糸状虫コドンの偏りが、縮重を減少させるように２５Ｃに組み込まれているためである。本発明者らは、そのようなコドンの偏りは、本発明のイヌ糸状虫システインプロテアーゼ核酸分子を効果的に単離するのに必要であることを見出した。増幅したＰＣＲフラグメント、すなわちｎＤｉＣＰ₁₄₃をゲル精製し、製造者の指示に従って、ｐＣＲIIというクローニングベクター（Invitrogen社［米国カリフォルニア州San Diego］より入手可能）内にクローニングした。ｎＤｉＣＰ₁ ₄₃ の約１４３ヌクレオチド配列を決定し、配列番号１２として提示する。配列番号１２は、約４７アミノ酸のタンパク質を見かけ上コードし、これを配列番号１３として提示する。該タンパク質の翻訳開始部位および翻訳終止コドンは、このゲノムクローン内に含まれていない。無重複タンパク質配列データベースの相同性検索を、ＢＬＡＳＴというネットワークを用い、米国国立バイオテクノロジー情報センターを通じて実施した。このデータベースは、＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ＋ＰＩＲ＋ＳＰＵｐｄａｔｅ＋ＧｅｎＰｅｐｔ＋ＧＰＵｐｄａｔｅを包含する。検索は、配列番号１３を用いて実施し、多数のシステインプロテイナーゼとの有意な相同性を示した。アミノ酸レベルでの最高の評点を得た対合は、ダイズのほぼ確定的なチオールプロテアーゼ前駆体（Genbank受付番号P22895）、オオムギシステインプロテイナーゼＥＰ−Ｂ１の前駆体（Genbank受付番号P25249）およびオオムギシステインプロテイナーゼＥＰ−Ｂ４の前駆体（Genbank受付番号P25250）を包含する。配列番号１３との相同性を有する寄生虫特異的システインプロテアーゼは、トリパノソーマ・ブルーセイTrypanosoma brucei（Genbank受付番号S07051およびS12099）、レーシュマニア・ピファノイLeishmania pifanoi（Genbank受付番号B48566）、レーシュマニア・メキシカーナL. mexicana（Genbank受付番号S25003），トリパノソーマ・コンゴレンシスT. congolensis（Genbank受付番号37048）および膣トリコモナスTrichomonas vaginalis（Genbank受付番号X77220）を包含する。配列番号１３は、捻転胃虫H. contortus（線虫の１種）、マンソン住血吸虫Schistosoma mans oni （吸虫の１種）、カエノラーブジチス・エレガンスC. elegans（線虫の１種）、カンテツFasciola hepatica（吸虫の１種）、赤痢アメーバEntamoeba histolytica（原生動物の１種）、クルーズトリパノソーマTrypansom acruzi （原生動物の１種）およびトリパノソーマ・ブルーセイT. brucieからのシステインプロテアーゼと、それぞれ約１６％、約２２％、約２４％、約３５％、約３９％、約４４％および約４９％のアミノ酸レベルの相同性を共有した。配列番号１３は、ヒトカテプシンＬとの約５０％のアミノ酸相同性も共有した。配列番号１３は、Hamajimaらによる、1993年１月27日公開されたヨーロッパ公開特許第0524834A2号公報に報告された、ウェステルマン肺吸虫Paragonimuswesterma ni （吸虫）のシステインプロテアーゼとの約５６％のアミノ酸相同性も共有した。配列番号１３のほぼ第３０位のセリンおよびほぼ第３７位のシステインが、これらのシステインプロテアーゼのすべてに保存されていた。これらの相同性の算出は、配列番号１８および配列番号１９というＤＮＡプライマーがコードするアミノ酸を包含しないことに注目されたい。そのため、相同性の算出に用いた領域は、配列番号１３のほぼアミノ酸第６〜４１位にわたった。実施例７本実施例は、本発明の組換え細胞の生産、および本発明の糸状虫線虫のシステインプロテアーゼタンパク質を生産するためのその用途を開示する。ｔｒｃという転写調節配列と、６個のヒスチジンを含むポリヒスチジンセグメントをコードする融合配列とに機能的に結合した、ｎＤｉＣＰ₁₄₂のほぼ第２〜１４３位（配列番号１２で番号付けた限りで）のヌクレオチドを含む、組換え分子のｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＣＰ₁₄₂を、下記の方式で生産した。ｎＤｉＣＰ₁₄₃ のほぼ第２番〜ほぼ第１４３番（配列番号１２で番号付けた限りで）にまたがるヌクレオチドを含む、ｎＤｉＣＰ₁₄₂と呼ばれる約１４２ヌクレオチドのＤＮＡフラグメントを、制限エンドヌクレアーゼのＢａｍＨＩ、次いでＥｃｏＲＩで、ｎＤｉＣＰ₁₄₃から逐次消化した。核酸分子ｎＤｉＣＰ₁₄₂をゲル精製し、ＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩで切断しておいた発現ベクターｐＴｒｃＨｉｓＡ（Invitr ogen社より入手可能）内に指向的にサブクローニングし、次いでゲル精製した。得られた組換え分子、すなわちｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＣＰ₁₄₂を大腸菌内に形質転換して、組換え細胞である大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＣＰ₁₄ ₂ を形成した。組換え細胞の大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＣＰ₁₄₂を、約０．１mg／mlのアンピシリンを含有する強化細菌増殖培地を収容する振盪フラスコ中で、３７℃ で培養する。細胞が約０．３のＯＤ₆₀₀達したとき、約１mMイソプロピルβ−Ｄ −チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）の添加によって、大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＣＰ₁₄₂の発現を誘導し、細胞を約３７℃で約３時間培養する。標準的手法を用い、組換え細胞溶解物のＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いでクーマシーブルー染色によって、タンパク質生産を監視する。組換え細胞の大腸菌：ｐｔｒｃＨｉｓ−ｎＤｉＣＰ₁₄₂は、本明細書ではＰＨＩＳ−ＰＤｉＣＰ₁₄₂と呼ぶ融合タンパク質を生産するが、それは、糸状虫核酸分子の挿入断片を欠くｐＴｒｃＨｉｓＡプラスミドで形質転換した細胞によっては、生産されない。実施例８本発明は、プロテアーゼ阻害剤のベスタチンおよびホスホラミドンが、イヌ糸状虫幼生の発育、特に脱皮を阻害できることを立証する。ベスタチン（Enzyme S ystems Products社［米国カリフォルニア州Livermore］より入手可能）は、専属的にではないにしても、主として、アミノペプチダーゼその他のエキソペプチダーゼを阻害する。ホスホラミドン（やはりEnzyme Systems Products社より入手可能）は、サーモリジンおよびコラゲナーゼ、ならびに枯草菌Bacillus subtili s 、ストレプトマイセス・グリセウスStreptomyces griseusおよび緑膿菌Pseudom onas aeruginosaの微生物からの金属エンドプロテアーゼを特異的に阻害する。イヌ糸状虫の幼生を、例えば米国特許願第08/153,554号明細書［前掲］に記載のとおりの、ＮＩ培地で培養した。ＮＩ培地は、ＮＣＴＣ−１３５とIscoveの改良ダルベッコ培地の１：１混合物（Sigma Chemical Co.社［米国ミズーリ州セントルイス］より入手可能）、２０％SeruMax、１mlあたり２．５マイクログラム（μg）のアンホテリシンＢ、１mlあたり０．１ナノグラム（ng）のゲンタマイシン、１mlあたり５０μgのスルファジアジン、および１mlあたり１０μgのトリメトプリムを含有する。ＮＩ培地１mlあたり約２００のＬ３という濃度の幼生を、２４ウェルプレートの各ウエル内の０．５mlのアリコートに分配した。ＮＩ培地、およびそれぞれＮＩ培地に溶かしたベスタチンまたはホスホラミドンの１０ミリモル（mM）原液を用いて、各ウエルの体積を１mlに調整した。培養ウエル内の阻害剤の最終濃度は、０、１、２．５または５mMのいずれかであった。幼生を、約３７℃、５％ＣＯ₂および９５％の相対湿度で温置した。幼生を毎日観察し、脱皮の百分率（脱皮％）を７２時間目に判定した。脱皮百分率は、角皮の数を１ウエルあたりの幼生数で除し、１００を乗じることによって、各ウエルについて算出した。阻害剤のそれぞれの濃度については３ウエル、未処理の対照については６ウエルが存在した。この研究の結果を表１に示す。結果は、ベスタチンおよびホスホラミドンによるＬ３の処理は、脱皮できる幼生の能力を有意に低下させることを示す。脱皮％を用いて、分散分析を実施した。全体的な差は有意（Ｐ＝0.0001）であった。各群を対照と比較するフィッシャーのＰＬＳＤ（Ｆｉ）およびシェフのＦ検定（Ｓｃ）による多重比較を、分散分析後に実施した（＊はｐ≦０．０５の有意差を表す。ＮＡ＝適用できず）。研究を通して、概して、ベスタチン処理幼生は、対照と比較してはるかに遅く移動したのに対し、ホスホラミドン処理幼生は、対照と比較して非常に活発であることも観察された。角皮の分離は、ホスホラミドン処理幼生に発生するように思われたが、幼生は、古い角皮を完全に開いて脱出することができなかった。ホスホラミドン処理幼生は、研究終了まで、劣悪な形状であった。理論に束縛されるものではないが、これらの現象は、二つの別個の効果、および阻害剤が異なる酵素を標的としている可能性があることを示唆するものと考えられる。実施例９実施例９は、イヌ糸状虫の幼生の外分泌／分泌（ＥＳ）産物からのタンパク質含有分画の単離および特徴付けを説明する。例えば米国特許願第08/153,554号明細書［前掲］に記載のとおりに、約11,600 のイヌ糸状虫Ｌ３／Ｌ４からＥＳ産物を採集し、濃縮した。セントリプレプ（Ce ntriprep）１０（Amicon Inc.社［米国マサチューセッツ州Beverly］より入手可能）を用いて、緩衝液を２０mMピペラジン−ＨＣｌ、pH６．０、０．００５％ブリジ（Brij）３５に交換した。得られた混合物を、塩化ナトリウムの増加する勾配を用いて２０mMピペラジン−ＨＣｌ、pH６．０中で平衡させた、モノＱカラム（陰イオン交換）（Pharmacia Biotech Inc．［米国ニュージャージー州Piscata way］より入手可能）で分離した。次いで、各分画を０．００５％ブリジ３５に導いた。緩衝液Ａは２０mMピペラジン−ＨＣｌ、pH６．０であった。緩衝液Ｂは２０mMピペラジン−ＨＣｌ、pH６．０への１mM塩化ナトリウムであった。クロマトグラフィーのプログラムは：（ａ）０％のＢで５分間；（ｂ）０〜約５０％のＢで２５分以上；（ｃ）３分間保留；（ｄ）約５０〜１００％のＢで５分以上であった。流速は、毎分０．５mlであった。分画は、１分ごとに捕集した。捕集した分画を、蛍光発光化合物であるＨ−フェニルアラニン−７−アミド− ４−メチルクマリン（Ｈ−Ｐｈｅ−ＡＭＣ）を用いて、金属プロテアーゼ活性について検定した。検定は、下記のとおりに実施した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）への１０mM Ｈ−Ｐｈｅ−ＡＭＣの原液を、１００mMトリス−ＨＣｌ、p H７．０で１：２００に希釈した。希釈した原液約１００マイクロリットル（μ ｌ）を、９６ウェル微量滴定プレートの望みの数のウエルのそれぞれに入れた。各ウエルに、試験しようとする分画または対照試料２５μlを加えた。得られた混合物を、約３７℃で２時間以上温置した。次いで、微量滴定プレートをＵＶ光ボックスに置き、写真撮影して、ＡＭＣが切断された分画を同定した（放出されたＡＭＣは、そのような条件下では発光する）。ともに金属タンパク質分解活性を示す分画２０および２１番を、陰イオン交換から捕集した。分画２１番からのアリコートを濃縮し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（１４％トリス−グリシン）によって判定した。約６０kDの見かけ分子量で移動する、１条の主バンドが検出された。次いで、陰イオン交換分画２１番を、米国特許願第08/153,554号明細書［前掲］に記載のとおり、サイズ排除クロマトグラフィーにかけた。具体的には、陰イオン交換カラムからの分画２１番を、５０mMトリス−ＨＣｌ、pH７．５、１５０ mM塩化ナトリウム中で、毎分０．５mlの流速でＴＳＫ3000 ＳＷカラム（Beckman Instruments Inc.社［米国カリフォルニア州Fullerton］より入手可能）にかけた。分画を０．５分ごとに捕集した。微量滴定プレート蛍光検定を用いて検定すると、分画２１および２２番が陽性であった。これらの分画の溶出の相対時間は、約６２〜６６kDの分子量を有するウシ血清アルブミンの溶出時間に非常に近似していた。陰イオン交換分画２１番は、「未変性」条件下での等電点電気泳動にも付した。得られたゲルを１mmの分画にスライスし、切片を微量滴定プレート蛍光検定によって検定した。活性分画は、約６．８のpIを有する領域中に存在した。別の研究で、約2500の幼生からのＥＳを、ノベックスザイモゲル（Novex Zymogel：Novex社［米国カリフォルニア州San Diego］より入手可能）の２レーンのそれぞれを通じての電気泳動に付した。ザイモゲルは約０．１％のゼラチンを含有した。２レーンを、２．５％トリトンＸ−１００に約３０分間浸漬し、次いで、反応緩衝液（５０mMトリス−ＨＣｌ、pH７．０、５mM塩化カルシウム、０．０２％ブリジ３５および２００mM塩化ナトリウム）中で約３０分間洗浄した。次いで、−レーンを、反応緩衝液中で、約３７℃で６６時間温置した。もう一方のレーンを、２mMのＥＤＴＡを含有する反応緩衝液中で、同量の時間温置した。次いで、双方のレーンを、０．５％ＣＢＢ−Ｒ２５０、４０％メタノール、１０％酢酸中で染色し、４０％メタノール、１０％酢酸で脱染色して、コラゲナーゼ活性を探知した。活性は、青い背景中の澄んだ帯域によって同定した。ＥＤＴＡによって完全に阻害される、金属プロテアーゼ活性を示すＥＳタンパク質は、約６０kD、約９５kD、および約２００kD以上の見かけ分子量で移動した。本発明の様々な実施態様を詳細に説明したが、これらの実施態様に対する変更および適応が当業者に生じるであろうことは明白である。しかし、そのような変更および適応は、本発明の、下記の請求の範囲に記述された範囲内にあることを明白に理解しなければならない。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年４月２９日【補正内容】５．該核酸分子が、配列番号１１のアスタシンドメインとの３５％以上の相同性を有するアスタシンドメインを含むタンパク質をコードする請求項１記載の核酸分子。６．該核酸分子が、ｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆、ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄、ｎＤｉＭＰＡ２₂₇₁およびＢｖＭＰＡ２よりなる群から選ばれる核酸分子を含む請求項１記載の核酸分子。７．寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を含む単離されたタンパタ質。８．該タンパク質が、イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする寄生虫核酸分子によってコードされる請求項７記載のタンパク質。９．該タンパク質が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９および配列番号１０よりなる群から選ばれる少なくとも一つのアミノ酸配列の少なくとも一部を含み、該一部は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉およびｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆よりなる群から選ばれる核酸分子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされる請求項７記載のタンパク質。１０．該タンパク質が、拡大亜鉛結合ドメインの主題的要素を含む請求項７記載のタンパク質。１１．イヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする、単離された成虫糸状虫線虫核酸分子。１２．該核酸分子が、システインプロテアーゼタンパク質をコードする核酸配列を含む請求項１１記載の核酸分子。１３．該核酸分子が、核酸分子ｎＤｉＣＰ₁₄₃と厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする請求項１１記載の核酸分子。１４．該核酸分子が、配列番号１２の少なくとも一部を有する核酸配列を含み、該一部は、ｎＤｉＣＰ₁₄₃と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする請求項１１記載の核酸分子。１５．該核酸分子が、配列番号１３のアミノ酸配列との約６０％以上の相同性を有するタンパク質をコードする請求項１１記載の核酸分子。１６．成虫糸状虫線虫のシステインプロテアーゼタンパク質を含む単離されたタンパク質。１７．該タンパク質が、配列番号１２の核酸配列を含む核酸分子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされる請求項１６記載のタンパク質。１８．該タンパク質が、配列番号１３の少なくとも一部を含むアミノ酸配列を有し、該一部は、ｎＤｉＣＰ₁₄₃と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされる請求項１６記載のタンパク質。１９．該核酸分子が、イヌ糸状虫属Dirofilaria、アカントケイロネマ属Acant hocheilonema 、ブルギア属Burgia、ディペタロネマ属Dipetalonema、ロア糸状虫属Loa、回旋糸状虫属Onchocerca、パラフィラリア属Parafilaria、セタリア属Se taria 、ステファノフィラリア属Stephanofilariaおよび糸状虫属Wuchereriaの核酸分子よりなる群から選ばれる、糸状虫線虫の核酸分子を含む請求項１または１１の核酸分子。２０．該核酸分子が、イヌ糸状虫核酸分子を含む請求項１または１１記載の核酸分子。２１．請求項１または１１記載の少なくとも１種類の核酸分子を有する細胞を含む組換え細胞であって、該細胞が、該核酸分子を発現できる組換え細胞。２２．請求項７または１６記載のタンパク質と選択的に結合できる単離された抗体。２３．アスタシン金属エンドペプチダーゼおよびシステインプロテアーゼよりなる群から選ばれる少なくとも１種類のプロテアーゼの阻害剤に対する感受性を有する寄生性蠕虫が生起する疾病から動物を保護できる治療組成物であって、単離された寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質またはそのミメトープ；イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離された寄生虫核酸分子；抗寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ抗体；寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害できるその能力によって同定される、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害剤；単離された成虫糸状虫線虫システインプロテアーゼタンパク質またはそのミメトープ；イヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする、単離された成虫糸状虫線虫核酸分子；抗成虫糸状虫線虫システインプロテアーゼ抗体；および成虫糸状虫線虫システインプロテアーゼ活性を阻害できるその能力によって同定される、システインプロテアーゼ活性の阻害剤よりなる群から選ばれる少なくとも１種類の保護化合物を含む治療組成物。２４．該寄生虫が、組織移動性蠕虫を含む請求項２３記載の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 48/00 ＡＥＢ 9356−4ＨＣ０７Ｋ 14/44 Ｃ０７Ｈ 21/04 9735−4ＢＣ１２Ｎ 1/21 Ｃ０７Ｋ 14/44 9152−4Ｂ 9/50 Ｃ１２Ｎ 1/21 9637−4ＢＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 9358−4Ｂ 21/08 9/50 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/64 ＡＦＪＣ１２Ｐ 21/02 9051−4Ｃ 37/54 ＡＥＣ 21/08 9735−4ＢＣ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者グリーブ、ロバートビー. アメリカ合衆国 80550 コロラド州ウインザーインディアントレイルドライブ 1013

Claims

【特許請求の範囲】１．イヌ糸状虫Dirofilaria immitisのアスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする、寄生虫の単離された核酸分子であって、該寄生虫が、寄生性蠕虫、原生動物寄生虫および外部寄生虫よりなる群から選ばれる核酸分子。２．該核酸分子が、アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質をコードする請求項１記載の核酸分子。３．該核酸分子が、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉およびｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆よりなる群から選ばれる核酸分子の少なくとも一部を含み、該一部は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉ およびｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆よりなる群から選ばれる核酸分子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸分子を含む請求項１記載の核酸分子。４．該核酸分子が、ＰＤｉＭＰＡ１_ORF1、ＰＤｉＭＰＡ１_ORF2、ＰＤｉＭＰＡ１_ORF3、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF1、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF2、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF3、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF4、ＰＤｉＭＰＡ２_ORF5、およびこれらの開放読み枠の組合せよりなる群から選ばれる開放読み枠の少なくとも一部を含むタンパク質をコードし、該一部は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉およびｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆よりなる群から選ばれる核酸分子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされる請求項１記載の核酸分子。５．該核酸分子が、配列番号１１のアスタシンドメインとの３５％以上の相同性を有するアスタシンドメインを含むタンパク質をコードする請求項１記載の核酸分子。６．該核酸分子が、ｎＤｉＭＰＡ１₆₈₉、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉、ｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆、ｎＤｉＭＰＡ２₈₀₄、ｎＤｉＭＰＡ２₂₇₁およびＢｖＭＰＡ２よりなる群から選ばれる核酸分子を含む請求項１記載の核酸分子。７．寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質を含む単離されたタンパク質。８．該タンパク質が、イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする寄生虫核酸分子によってコードされる請求項７記載のタンパク質。９．該タンパク質が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９および配列番号１０よりなる群から選ばれる少なくとも一つのアミノ酸配列の少なくとも一部を含み、該一部は、ｎＤｉＭＰＡ１₁₂₉₉およびｎＤｉＭＰＡ２₂₁₂₆よりなる群から選ばれる核酸分子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされる請求項７記載のタンパク質。１０．該タンパク質が、拡大亜鉛結合ドメインの主題的要素を含む請求項７記載のタンパク質。１１．イヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする、糸状虫の線虫の単離された核酸分子。１２．該核酸分子が、システインプロテアーゼタンパク質をコードする核酸配列を含む請求項１１記載の核酸分子。１３．該核酸分子が、核酸分子ｎＤｉＣＰ₁₄₃と厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする請求項１１記載の核酸分子。１４．該核酸分子が、配列番号１２の少なくとも一部を有する核酸配列を含み、該一部は、ｎＤｉＣＰ₁₄₃と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする請求項１１記載の核酸分子。１５．該核酸分子が、配列番号１３のアミノ酸配列との約６０％以上の相同性を有するタンパク質をコードする請求項１１記載の核酸分子。１６．糸状虫の線虫のシステインプロテアーゼタンパク質を含む単離されたタンパタ質。１７．該タンパク質が、配列番号１２の核酸配列を含む核酸分子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされる請求項１６記載のタンパク質。１８．該タンパク質が、配列番号１３の少なくとも一部を含むアミノ酸配列を有し、該一部は、ｎＤｉＣＰ₁₄₃と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸分子によってコードされる請求項１６記載のタンパク質。１９．該核酸分子が、イヌ糸状虫属Dirofilaria、アカントケイロネマ属Acant hocheilonema 、ブルギア属Burgia、ディペタロネマ属Dipetalonema、ロア糸状虫属Loa、回旋糸状虫属Onchocerca、パラフィラリア属Parafilaria、セタリア属Se taria 、ステファノフィラリア属Stephanofilariaおよび糸状虫属Wuchereriaの核酸分子よりなる群から選ばれる、糸状虫線虫の核酸分子を含む請求項１または１１の核酸分子。２０．該核酸分子が、イヌ糸状虫核酸分子を含む請求項１または１１記載の核酸分子。２１．請求項１または１１記載の少なくとも１種類の核酸分子を有する細胞を含む組換え細胞であって、該細胞が、該核酸分子を発現できる組換え細胞。２２．請求項７または１６記載のタンパク質と選択的に結合できる単離された抗体。２３．アスタシン金属エンドペプチダーゼおよびシステインプロテアーゼよりなる群から選ばれる少なくとも１種類のプロテアーゼの阻害剤に対する感受性を有する寄生性蠕虫が生起する疾病から動物を保護できる治療組成物であって、単離された寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼタンパク質またはそのミメトープ；イヌ糸状虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ遺伝子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離された寄生虫核酸分子；抗寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ抗体；寄生虫アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性を阻害できるその能力によって同定される、アスタシン金属エンドペプチダーゼ活性の阻害剤；単離された糸状虫線虫システインプロテアーゼタンパタ質またはそのミメトープ；イヌ糸状虫システインプロテアーゼ遺伝子と、厳格なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする、単離された糸状虫線虫核酸分子；抗糸状虫線虫システインプロテアーゼ抗体；および糸状虫線虫システインプロテアーゼ活性を阻害できるその能力によって同定される、システインプロテアーゼ活性の阻害剤よりなる群から選ばれる少なくとも１種類の保護化合物を含む治療組成物。２４．該寄生虫が、組織移動性蠕虫を含む請求項２３記載の組成物。