JPH10111290A - ＩｇＡ腎症の診断法 - Google Patents
ＩｇＡ腎症の診断法Info
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- JPH10111290A JPH10111290A JP28158096A JP28158096A JPH10111290A JP H10111290 A JPH10111290 A JP H10111290A JP 28158096 A JP28158096 A JP 28158096A JP 28158096 A JP28158096 A JP 28158096A JP H10111290 A JPH10111290 A JP H10111290A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 ヒト血清の又はそれから分離したＩ
ｇＡ１と、ＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との結合能の
差を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法。 ヒト血清の又
はそれから分離したＩｇＡ１と、ＩｇＡ１ヒンジ部の合
成ペプチドに対する抗体との結合能の差を検出する、Ｉ
ｇＡ腎症の診断法。 【効果】 受診者に与える精神的苦痛、腎周囲出血等の
危険性および経済的負担が少ない、ＩｇＡ腎症の迅速・
簡便な新規な診断方法を提供するものである。
ｇＡ１と、ＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との結合能の
差を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法。 ヒト血清の又
はそれから分離したＩｇＡ１と、ＩｇＡ１ヒンジ部の合
成ペプチドに対する抗体との結合能の差を検出する、Ｉ
ｇＡ腎症の診断法。 【効果】 受診者に与える精神的苦痛、腎周囲出血等の
危険性および経済的負担が少ない、ＩｇＡ腎症の迅速・
簡便な新規な診断方法を提供するものである。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＩｇＡ腎症の新規
な診断法に関するものである。より詳細に、本発明は、
ヒト血清ＩｇＡ１とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との
結合能の差に基づいて、受診者に与える精神的苦痛、腎
周囲出血等の危険性および経済的負担が少ない、ＩｇＡ
腎症の迅速・簡便な新規な診断法を提供するものであ
る。
な診断法に関するものである。より詳細に、本発明は、
ヒト血清ＩｇＡ１とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との
結合能の差に基づいて、受診者に与える精神的苦痛、腎
周囲出血等の危険性および経済的負担が少ない、ＩｇＡ
腎症の迅速・簡便な新規な診断法を提供するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】ＩｇＡ（イムノグロブリンＡ）腎症は、
１９６８年Ｂｅｒｇｅｒらにより提唱された疾患概念
で、臨床的には持続的蛋白尿、血尿以外に臨床症状に乏
しく、組織学的には糸球体メサンギウム領域にＩｇＡを
主体とする沈着物が認められることを特徴とする原発性
糸球体腎炎である。わが国でのＩｇＡ腎症の頻度は高
く、慢性腎炎の約３０％を占める。近年、その長期予後
は必ずしも良好ではなく、１０年の経過で１０〜１５
％、２０年の経過で約３０％の患者が末期腎不全に陥る
ことが明らかになってきた。このため、ＩｇＡ腎症は末
期腎不全に至る原因疾患として特に注目されてきてい
る。
１９６８年Ｂｅｒｇｅｒらにより提唱された疾患概念
で、臨床的には持続的蛋白尿、血尿以外に臨床症状に乏
しく、組織学的には糸球体メサンギウム領域にＩｇＡを
主体とする沈着物が認められることを特徴とする原発性
糸球体腎炎である。わが国でのＩｇＡ腎症の頻度は高
く、慢性腎炎の約３０％を占める。近年、その長期予後
は必ずしも良好ではなく、１０年の経過で１０〜１５
％、２０年の経過で約３０％の患者が末期腎不全に陥る
ことが明らかになってきた。このため、ＩｇＡ腎症は末
期腎不全に至る原因疾患として特に注目されてきてい
る。
【０００３】現在のところ、ＩｇＡ腎症の診断法として
は、腎生検による方法しかない。この診断法は、受診者
に大きな精神的苦痛を与える他、検査後に腎周囲出血等
が起こる危険性がある。さらに、腎生検検査後は２４時
間以上の絶対安静が必要で、受診者に数日間の入院を強
いることになり、受診者の経済的負担も大きいのが現状
である。また、この診断法には多くの設備が必要で、診
断に長時間要するという欠点がある。従って、より簡便
な操作で、短時間に実施できるＩｇＡ腎症の診断法が望
まれている。
は、腎生検による方法しかない。この診断法は、受診者
に大きな精神的苦痛を与える他、検査後に腎周囲出血等
が起こる危険性がある。さらに、腎生検検査後は２４時
間以上の絶対安静が必要で、受診者に数日間の入院を強
いることになり、受診者の経済的負担も大きいのが現状
である。また、この診断法には多くの設備が必要で、診
断に長時間要するという欠点がある。従って、より簡便
な操作で、短時間に実施できるＩｇＡ腎症の診断法が望
まれている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、Ｉｇ
Ａ腎症の診断法として、これまで必須とされてきた腎生
検によらない、より簡便な診断法を提供することにあ
る。
Ａ腎症の診断法として、これまで必須とされてきた腎生
検によらない、より簡便な診断法を提供することにあ
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】図１は、ＩｇＡ１分子の
構造の概略を示す模式図である。ＩｇＡ腎症の成因に関
与すると考えられるＩｇＡとは免疫グロブリンの一種で
ある。このＩｇＡ分子は、２本の重鎖と２本の軽鎖から
成り、重鎖構造の違いからＩｇＡ１とＩｇＡ２の２つの
サブタイプに分類される。Ｂａｅｎｚｉｇｅｒらは、図
１に示されるように、このＩｇＡ１分子のヒンジ部と呼
ばれる領域に、５本のＯ結合型糖鎖（１本がＮ−アセチ
ルガラクトサミンで、他の４本が２−アセトアミド−２
−デオキシ−３−Ｏ−β−ガラクトピラノシル−ガラク
トピラノース）が結合していると報告している（ジャー
ナルオブバイオロジカルケミストリー、第２４９巻、７
２７０−７２８１ページ、１９７４年）。
構造の概略を示す模式図である。ＩｇＡ腎症の成因に関
与すると考えられるＩｇＡとは免疫グロブリンの一種で
ある。このＩｇＡ分子は、２本の重鎖と２本の軽鎖から
成り、重鎖構造の違いからＩｇＡ１とＩｇＡ２の２つの
サブタイプに分類される。Ｂａｅｎｚｉｇｅｒらは、図
１に示されるように、このＩｇＡ１分子のヒンジ部と呼
ばれる領域に、５本のＯ結合型糖鎖（１本がＮ−アセチ
ルガラクトサミンで、他の４本が２−アセトアミド−２
−デオキシ−３−Ｏ−β−ガラクトピラノシル−ガラク
トピラノース）が結合していると報告している（ジャー
ナルオブバイオロジカルケミストリー、第２４９巻、７
２７０−７２８１ページ、１９７４年）。
【０００６】これに対して、ＩｇＡ２分子のヒンジ部に
はＯ結合型糖鎖は結合していない。ＩｇＡ腎症におい
て、糸球体内に沈着するＩｇＡはＩｇＡ１サブタイプが
主体であることから考えて、ＩｇＡ腎症患者と健常者等
の非ＩｇＡ腎症患者の血清ＩｇＡ１の性質に差があるこ
とを想定し、本発明者らは種々検討した。その結果、Ｉ
ｇＡ腎症患者の血清ＩｇＡ１は、健常者等の非ＩｇＡ腎
症患者の血清ＩｇＡ１よりも、ＩｇＡ１ヒンジ部に対す
る抗体との結合能が有意に増加していることを見出し、
この知見はＩｇＡ腎症の診断に利用することが可能であ
ると考え、本発明を完成するに達した。
はＯ結合型糖鎖は結合していない。ＩｇＡ腎症におい
て、糸球体内に沈着するＩｇＡはＩｇＡ１サブタイプが
主体であることから考えて、ＩｇＡ腎症患者と健常者等
の非ＩｇＡ腎症患者の血清ＩｇＡ１の性質に差があるこ
とを想定し、本発明者らは種々検討した。その結果、Ｉ
ｇＡ腎症患者の血清ＩｇＡ１は、健常者等の非ＩｇＡ腎
症患者の血清ＩｇＡ１よりも、ＩｇＡ１ヒンジ部に対す
る抗体との結合能が有意に増加していることを見出し、
この知見はＩｇＡ腎症の診断に利用することが可能であ
ると考え、本発明を完成するに達した。
【０００７】即ち、被検者の血清、望ましくは血清から
分離したＩｇＡ１について、ＩｇＡ１ヒンジ部に結合す
る抗体との結合能を測定することにより、ＩｇＡ腎症の
迅速な診断が可能である。即ち、本発明は： ヒト血清ＩｇＡ１とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体
との結合能の差を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法を提供
する。また、 ヒト血清から分離したＩｇＡ１とＩｇ
Ａ１ヒンジ部に対する抗体との結合能の差を検出する、
ＩｇＡ腎症の診断法を提供する。また、 ヒト血清Ｉ
ｇＡ１とＩｇＡ１ヒンジ部の合成ペプチドに対する抗体
との結合能の差を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法を提供
する。また、 合成ペプチドがＰｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒ
ｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ
−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−
Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒである点にも
特徴を有する。また、 ヒト血清から分離したＩｇＡ
１とＩｇＡ１ヒンジ部の合成ペプチドに対する抗体との
結合能の差を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法を提供す
る。
分離したＩｇＡ１について、ＩｇＡ１ヒンジ部に結合す
る抗体との結合能を測定することにより、ＩｇＡ腎症の
迅速な診断が可能である。即ち、本発明は： ヒト血清ＩｇＡ１とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体
との結合能の差を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法を提供
する。また、 ヒト血清から分離したＩｇＡ１とＩｇ
Ａ１ヒンジ部に対する抗体との結合能の差を検出する、
ＩｇＡ腎症の診断法を提供する。また、 ヒト血清Ｉ
ｇＡ１とＩｇＡ１ヒンジ部の合成ペプチドに対する抗体
との結合能の差を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法を提供
する。また、 合成ペプチドがＰｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒ
ｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ
−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−
Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒである点にも
特徴を有する。また、 ヒト血清から分離したＩｇＡ
１とＩｇＡ１ヒンジ部の合成ペプチドに対する抗体との
結合能の差を検出する、ＩｇＡ腎症の診断法を提供す
る。
【０００８】以下、本発明を詳細に説明する。本発明に
おいて、ＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体
との結合能を調べる時に、被験者の血清をそのまま用い
ることもできるが、結合能を精度良く調べるには、血清
からＩｇＡ１を分離することが望ましい。血清からＩｇ
Ａ１を分離する方法としては、レクチンの一種であるジ
ャカリンを用いる方法、抗ヒトＩｇＡ１抗体を用いる方
法等が知られている。
おいて、ＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体
との結合能を調べる時に、被験者の血清をそのまま用い
ることもできるが、結合能を精度良く調べるには、血清
からＩｇＡ１を分離することが望ましい。血清からＩｇ
Ａ１を分離する方法としては、レクチンの一種であるジ
ャカリンを用いる方法、抗ヒトＩｇＡ１抗体を用いる方
法等が知られている。
【０００９】本発明において、ＩｇＡ１ヒンジ部は、Ｉ
ｇＡ１重鎖のどこからどこまでのアミノ酸配列部分であ
ると明確には定義されない。図１に示されるように、Ｉ
ｇＡ１ヒンジ部とは、ＩｇＡ１分子を構成する重鎖中
で、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間にある領域
を指す。この領域は、重鎖間のジスルフィド結合部分を
含み、プロリン含量が高い。なお、前述のようにＢａｅ
ｎｚｉｇｅｒらは、このＩｇＡ１ヒンジ部にはＯ結合型
糖鎖が結合していると報告している。
ｇＡ１重鎖のどこからどこまでのアミノ酸配列部分であ
ると明確には定義されない。図１に示されるように、Ｉ
ｇＡ１ヒンジ部とは、ＩｇＡ１分子を構成する重鎖中
で、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間にある領域
を指す。この領域は、重鎖間のジスルフィド結合部分を
含み、プロリン含量が高い。なお、前述のようにＢａｅ
ｎｚｉｇｅｒらは、このＩｇＡ１ヒンジ部にはＯ結合型
糖鎖が結合していると報告している。
【００１０】このＩｇＡ１ヒンジ部の５ケ所のセリン残
基にはＯ結合型糖鎖が結合しており、その糖鎖構造は、
１ケ所がＮ−アセチルガラクトサミンで、他の４ケ所が
２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−β−ガラク
トピラノシル−ガラクトピラノースであると報告してい
る（ジャーナルオブバイオロジカルケミストリー、第２
４９巻、７２７０−７２８１ページ、１９７４年）。
基にはＯ結合型糖鎖が結合しており、その糖鎖構造は、
１ケ所がＮ−アセチルガラクトサミンで、他の４ケ所が
２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−β−ガラク
トピラノシル−ガラクトピラノースであると報告してい
る（ジャーナルオブバイオロジカルケミストリー、第２
４９巻、７２７０−７２８１ページ、１９７４年）。
【００１１】本発明において、ＩｇＡ１分子とＩｇＡ１
ヒンジ部に対する抗体との結合能の差は、非ＩｇＡ腎症
患者での結合能を基準とすると、ＩｇＡ腎症患者の血清
ＩｇＡ１とＩｇＡヒンジ部に対する抗体との結合能は高
い値を示す。被験者の血清ＩｇＡ１分子との結合能を調
べ、非ＩｇＡ腎症患者群の血清ＩｇＡ１との結合能（基
準値）と比較し、この結合能の差［＝被験者の血清Ｉｇ
Ａ１分子との結合能の値−非ＩｇＡ腎症患者の血清Ｉｇ
Ａ１分子との結合能の値（基準値）］に統計上有意な差
があれば陽性（ＩｇＡ腎症）と判定し、また統計上有意
な差がなければ（殆ど０に近い）陰性（ＩｇＡ腎症でな
い）と判定する。
ヒンジ部に対する抗体との結合能の差は、非ＩｇＡ腎症
患者での結合能を基準とすると、ＩｇＡ腎症患者の血清
ＩｇＡ１とＩｇＡヒンジ部に対する抗体との結合能は高
い値を示す。被験者の血清ＩｇＡ１分子との結合能を調
べ、非ＩｇＡ腎症患者群の血清ＩｇＡ１との結合能（基
準値）と比較し、この結合能の差［＝被験者の血清Ｉｇ
Ａ１分子との結合能の値−非ＩｇＡ腎症患者の血清Ｉｇ
Ａ１分子との結合能の値（基準値）］に統計上有意な差
があれば陽性（ＩｇＡ腎症）と判定し、また統計上有意
な差がなければ（殆ど０に近い）陰性（ＩｇＡ腎症でな
い）と判定する。
【００１２】本発明において、ＩｇＡ１分子を標識する
ことが、より高感度にＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部
に対する抗体との結合能の差を検出するのに望ましい。
例えば、ＥＬＩＳＡ法を用いてＩｇＡ１分子とＩｇＡ１
ヒンジ部に対する抗体との結合能の差を検出する場合
に、ビオチン、パーオキシダーゼ、アルカリフォスター
ゼ等による標識が好ましく、また蛍光偏向法を用いる場
合に、フルオレセイン等による標識が一般的に用いられ
る。
ことが、より高感度にＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部
に対する抗体との結合能の差を検出するのに望ましい。
例えば、ＥＬＩＳＡ法を用いてＩｇＡ１分子とＩｇＡ１
ヒンジ部に対する抗体との結合能の差を検出する場合
に、ビオチン、パーオキシダーゼ、アルカリフォスター
ゼ等による標識が好ましく、また蛍光偏向法を用いる場
合に、フルオレセイン等による標識が一般的に用いられ
る。
【００１３】また、本発明において、ヒト血清ＩｇＡ１
とＩｇＡ１ヒンジ部の抗体との結合能の差を検出するの
に、ＩｇＡ１ヒンジ部の合成ペプチドに対する抗体を用
いることができる。上記合成ペプチドには、ＩｇＡ１ヒ
ンジ部ペプチドが一般的であるが、代表的にはＰｒｏ−
Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔ
ｈｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ
を挙げることができる。
とＩｇＡ１ヒンジ部の抗体との結合能の差を検出するの
に、ＩｇＡ１ヒンジ部の合成ペプチドに対する抗体を用
いることができる。上記合成ペプチドには、ＩｇＡ１ヒ
ンジ部ペプチドが一般的であるが、代表的にはＰｒｏ−
Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔ
ｈｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ
を挙げることができる。
【００１４】次に、本発明におけるＩｇＡ１分子とＩｇ
Ａ１ヒンジ部に対する抗体との結合能を測定する手段と
しては、一般的に広く用いられている酵素免疫測定（Ｅ
ＬＩＳＡ）法の他、蛍光偏光法、表面プラズモン共鳴法
等を利用することができる。 １）ＥＬＩＳＡ法を用いた場合の概略はつぎのようであ
る。Ｒｏｑｕｅ−Ｂａｒｒｅｉｒａらのジャカリンを用
いる方法（ジャーナルオブイムノロジー、第１３４、１
７４０−１７４３ページ、１９８５年）で血清からＩｇ
Ａ１を分離し、これをプラスチック製の９６穴のマイク
ロタイタープレートにコーティング（固定化）する。
Ａ１ヒンジ部に対する抗体との結合能を測定する手段と
しては、一般的に広く用いられている酵素免疫測定（Ｅ
ＬＩＳＡ）法の他、蛍光偏光法、表面プラズモン共鳴法
等を利用することができる。 １）ＥＬＩＳＡ法を用いた場合の概略はつぎのようであ
る。Ｒｏｑｕｅ−Ｂａｒｒｅｉｒａらのジャカリンを用
いる方法（ジャーナルオブイムノロジー、第１３４、１
７４０−１７４３ページ、１９８５年）で血清からＩｇ
Ａ１を分離し、これをプラスチック製の９６穴のマイク
ロタイタープレートにコーティング（固定化）する。
【００１５】適当な緩衝液で洗浄した後、ＩｇＡ１ヒン
ジ部に対する抗体（ウサギＩｇＧ）を、ＩｇＡ１をコー
ティングしたマイクロタイタープレートに加え反応させ
る。適当な緩衝液で洗浄した後、結合したＩｇＡ１ヒン
ジ部に対する抗体と特異的に結合するパーオキシダーゼ
で標識した抗ウサギＩｇＧを添加する。これにパーオキ
シダーゼによる反応を利用して発色を生じさせるための
発色剤を加え反応し、４９０ｎｍの吸光度を測定する。
この吸光度の値は、ＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に
対する抗体との結合能が強い程、高い値となる。 ＥＬ
ＩＳＡ法に限らず、上記のようにＩｇＡ１分子とＩｇＡ
１ヒンジ部に対する抗体との結合能が測定できる方法
は、すべてこの診断法に用いることが可能である。
ジ部に対する抗体（ウサギＩｇＧ）を、ＩｇＡ１をコー
ティングしたマイクロタイタープレートに加え反応させ
る。適当な緩衝液で洗浄した後、結合したＩｇＡ１ヒン
ジ部に対する抗体と特異的に結合するパーオキシダーゼ
で標識した抗ウサギＩｇＧを添加する。これにパーオキ
シダーゼによる反応を利用して発色を生じさせるための
発色剤を加え反応し、４９０ｎｍの吸光度を測定する。
この吸光度の値は、ＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に
対する抗体との結合能が強い程、高い値となる。 ＥＬ
ＩＳＡ法に限らず、上記のようにＩｇＡ１分子とＩｇＡ
１ヒンジ部に対する抗体との結合能が測定できる方法
は、すべてこの診断法に用いることが可能である。
【００１６】２）蛍光偏光法とは、蛍光標識した分子に
別の分子が結合し分子の大きさが変化すると蛍光偏光度
の値が変化することを測定原理とする方法であり、Ｉｇ
Ａ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との結合能が
測定できるので、この診断法に用いることができる。
別の分子が結合し分子の大きさが変化すると蛍光偏光度
の値が変化することを測定原理とする方法であり、Ｉｇ
Ａ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との結合能が
測定できるので、この診断法に用いることができる。
【００１７】３）表面プラズモン共鳴法とは、金属表面
に接触している溶液の濃度変化を光の反射角度の変化と
して検出する表面プラズモン共鳴現象を利用する方法
で、ＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との
結合能が測定可能であり、この診断法に用いることがで
きる。
に接触している溶液の濃度変化を光の反射角度の変化と
して検出する表面プラズモン共鳴現象を利用する方法
で、ＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との
結合能が測定可能であり、この診断法に用いることがで
きる。
【００１８】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態を詳細
に説明するが、これらは本発明の範囲を制限するもので
はない。 （実施例１）血清からのＩｇＡ１の分離は以下に示す方
法で行った。血清５ｍｌを、０．１５ＭＮａＣｌ含有の
０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５、以下ＰＢＳと略
す）で平衡化したジャカリンアガロース（Ｖｅｃｔｏｒ
社）を充填したカラム（１×１５ｃｍ）に注入し、６０
ｍｌのＰＢＳでジャカリンに非吸着な成分を洗った後、
６０ｍｌの０．１Ｍメリビオース含有ＰＢＳで、ジャカ
リン吸着成分を回収した。
に説明するが、これらは本発明の範囲を制限するもので
はない。 （実施例１）血清からのＩｇＡ１の分離は以下に示す方
法で行った。血清５ｍｌを、０．１５ＭＮａＣｌ含有の
０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５、以下ＰＢＳと略
す）で平衡化したジャカリンアガロース（Ｖｅｃｔｏｒ
社）を充填したカラム（１×１５ｃｍ）に注入し、６０
ｍｌのＰＢＳでジャカリンに非吸着な成分を洗った後、
６０ｍｌの０．１Ｍメリビオース含有ＰＢＳで、ジャカ
リン吸着成分を回収した。
【００１９】この液を透析膜（Ｖｉｓｋａｓｅ ｓｅａ
ｌｓ社製、ｓｉｚｅ２０／３２）を用いて、ＰＢＳに対
して、４℃で１晩透析した後、凍結乾燥し、ＩｇＡ１試
料とした。ＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体は、ＩｇＡ１
ヒンジ部の合成ペプチド（Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｓ
ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ
−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ）にキャリアプロテ
インＫｅｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐｅｔ Ｈｅｍｏｃｙａｎ
ｉｎ（バイオロジカ社製）を結合させた後、ウサギに注
射し、採血後、プロテインＧカラム（シグマ社製）によ
りＩｇＧ分画を精製することにより得た。血清から分離
したＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との
結合能をＥＬＩＳＡ法で測定した結果を以下に示す。
ｌｓ社製、ｓｉｚｅ２０／３２）を用いて、ＰＢＳに対
して、４℃で１晩透析した後、凍結乾燥し、ＩｇＡ１試
料とした。ＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体は、ＩｇＡ１
ヒンジ部の合成ペプチド（Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｓ
ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ
−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ）にキャリアプロテ
インＫｅｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐｅｔ Ｈｅｍｏｃｙａｎ
ｉｎ（バイオロジカ社製）を結合させた後、ウサギに注
射し、採血後、プロテインＧカラム（シグマ社製）によ
りＩｇＧ分画を精製することにより得た。血清から分離
したＩｇＡ１分子とＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体との
結合能をＥＬＩＳＡ法で測定した結果を以下に示す。
【００２０】上記方法で分離したＩｇＡ腎症患者の血清
ＩｇＡ１（２１例；ＩｇＡ腎症患者群）と非ＩｇＡ腎症
患者の血清ＩｇＡ１（１９例；非ＩｇＡ腎症患者群）
を、０．０１５Ｍの炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）に５０μ
ｇ／ｍｌの濃度になるように溶解し、９６穴マイクロタ
イタープレート（Ａ Ｆｌｏｗ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｃｏ
ｍｐａｎｙ製 Ｌｉｎｂｒｏ／Ｔｉｔｅｒｔｅｋ ＥＩ
Ａ Ｍｉｃｒｏｔｉｔｒａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅ、ｃａ
ｔ ｎｏ．７６−３８１−０４）の各ウェルに１００μ
ｌづつ加え、４℃で１晩、インキュベーションした。各
ウェルを２００μｌの０．１％ウシ血清アルブミンおよ
び０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有のＰＢＳで１２回で洗
浄を行った後、各ウェルに１％ウシ血清アルブミン（ｆ
ｒａｃｔｉｏｎ Ｖ、Ｓｉｇｍａ社）含有のＰＢＳを２
００μｌづつ加え、４℃で１晩、インキュベーションし
た。
ＩｇＡ１（２１例；ＩｇＡ腎症患者群）と非ＩｇＡ腎症
患者の血清ＩｇＡ１（１９例；非ＩｇＡ腎症患者群）
を、０．０１５Ｍの炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）に５０μ
ｇ／ｍｌの濃度になるように溶解し、９６穴マイクロタ
イタープレート（Ａ Ｆｌｏｗ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｃｏ
ｍｐａｎｙ製 Ｌｉｎｂｒｏ／Ｔｉｔｅｒｔｅｋ ＥＩ
Ａ Ｍｉｃｒｏｔｉｔｒａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅ、ｃａ
ｔ ｎｏ．７６−３８１−０４）の各ウェルに１００μ
ｌづつ加え、４℃で１晩、インキュベーションした。各
ウェルを２００μｌの０．１％ウシ血清アルブミンおよ
び０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有のＰＢＳで１２回で洗
浄を行った後、各ウェルに１％ウシ血清アルブミン（ｆ
ｒａｃｔｉｏｎ Ｖ、Ｓｉｇｍａ社）含有のＰＢＳを２
００μｌづつ加え、４℃で１晩、インキュベーションし
た。
【００２１】ＩｇＡ１ヒンジ部に対する抗体（４μｇ／
ｍｌ）１００μｌを各ウェルに加え、４℃で１晩、イン
キュベーションした後、１００μｌのオルガノン テク
ニカ社製のパーオキシダーゼで標識した抗ウサギＩｇＧ
をＰＢＳで１０００倍希釈した液を加え、室温で１時
間、インキュベーションした。各ウェルを２００μｌの
０．１％ウシ血清アルブミンおよび０．０５％Ｔｗｅｅ
ｎ２０含有のＰＢＳで６回で洗浄を行った後、発色剤
（オルトフェニレンジアミン２０ｍｇ、リン酸水素二ナ
トリウム１２水１．７９５ｇ、クエン酸０．５２５ｇ、
過酸化水素１５μｌを、水５０ｍｌに溶解したもの）
を、各ウェルに１００μｌづつ加え、室温で１時間、イ
ンキュベーションした。発色停止剤（２Ｎ硫酸）を、各
ウェルに１００μｌづつ加えた後、ＢｉｏＲａｄ社製の
マイクロプレートリーダー（Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｒ
ｅａｄｅｒ Ｍｏｄｅｌ４５０）を用いて、ＯＤ４９０
ｎｍの吸光度を測定した。
ｍｌ）１００μｌを各ウェルに加え、４℃で１晩、イン
キュベーションした後、１００μｌのオルガノン テク
ニカ社製のパーオキシダーゼで標識した抗ウサギＩｇＧ
をＰＢＳで１０００倍希釈した液を加え、室温で１時
間、インキュベーションした。各ウェルを２００μｌの
０．１％ウシ血清アルブミンおよび０．０５％Ｔｗｅｅ
ｎ２０含有のＰＢＳで６回で洗浄を行った後、発色剤
（オルトフェニレンジアミン２０ｍｇ、リン酸水素二ナ
トリウム１２水１．７９５ｇ、クエン酸０．５２５ｇ、
過酸化水素１５μｌを、水５０ｍｌに溶解したもの）
を、各ウェルに１００μｌづつ加え、室温で１時間、イ
ンキュベーションした。発色停止剤（２Ｎ硫酸）を、各
ウェルに１００μｌづつ加えた後、ＢｉｏＲａｄ社製の
マイクロプレートリーダー（Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｒ
ｅａｄｅｒ Ｍｏｄｅｌ４５０）を用いて、ＯＤ４９０
ｎｍの吸光度を測定した。
【００２２】この結果を図２に示した。これによると、
非ＩｇＡ腎症患者群の吸光度は０．２８±０．０４（平
均値±標準偏差）であるのに対して、ＩｇＡ腎症患者群
の吸光度は０．３２±０．０５で、吸光度の値は増加し
ており、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ−Ｕｔｅｓｔによる
統計学的有意差（Ｐ＝０．００１１）が確認された。
非ＩｇＡ腎症患者群の吸光度は０．２８±０．０４（平
均値±標準偏差）であるのに対して、ＩｇＡ腎症患者群
の吸光度は０．３２±０．０５で、吸光度の値は増加し
ており、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ−Ｕｔｅｓｔによる
統計学的有意差（Ｐ＝０．００１１）が確認された。
【００２３】
【発明の効果】本発明の診断法は、これまでの腎生検に
よる診断法と比較して、受診者に与える精神的苦痛、腎
周囲出血等の危険性および経済的負担が少なく、より簡
単な操作で、短時間に診断が実施可能となるため、Ｉｇ
Ａ腎症の迅速・簡便な診断法として適している。
よる診断法と比較して、受診者に与える精神的苦痛、腎
周囲出血等の危険性および経済的負担が少なく、より簡
単な操作で、短時間に診断が実施可能となるため、Ｉｇ
Ａ腎症の迅速・簡便な診断法として適している。
【図１】ＩｇＡ１分子の構造の概略を示す模式図であ
る。
る。
【図２】ＩｇＡ腎症患者群２１例および非ＩｇＡ患者群
１９例のＯＤ４９０ｎｍの吸光度の測定値をプロットし
たグラフである。
１９例のＯＤ４９０ｎｍの吸光度の測定値をプロットし
たグラフである。
Claims (5)
- 【請求項１】 ヒト血清ＩｇＡ１とＩｇＡ１ヒンジ部に
対する抗体との結合能の差を検出することからなるを特
徴とする、ＩｇＡ腎症の診断法。 - 【請求項２】 ヒト血清から分離したＩｇＡ１とＩｇＡ
１ヒンジ部に対する抗体との結合能の差を検出すること
からなるを特徴とする、ＩｇＡ腎症の診断法。 - 【請求項３】 ヒト血清ＩｇＡ１とＩｇＡ１ヒンジ部の
合成ペプチドに対する抗体との結合能の差を検出するこ
とからなるを特徴とする、ＩｇＡ腎症の診断法。 - 【請求項４】 合成ペプチドがＰｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ
−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−
Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔ
ｈｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒであることを特
徴とする、請求項３記載のＩｇＡ腎症の診断法。 - 【請求項５】 ヒト血清から分離したＩｇＡ１とＩｇＡ
１ヒンジ部の合成ペプチドに対する抗体との結合能の差
を検出することからなるを特徴とする、ＩｇＡ腎症の診
断法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28158096A JPH10111290A (ja) | 1996-10-04 | 1996-10-04 | ＩｇＡ腎症の診断法 |
| PCT/JP1997/001709 WO1997044663A1 (fr) | 1996-05-22 | 1997-05-21 | PROCEDE D'EXAMEN ET KIT D'EXAMEN POUR LA NEPHROPATHIE A IgA |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28158096A JPH10111290A (ja) | 1996-10-04 | 1996-10-04 | ＩｇＡ腎症の診断法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10111290A true JPH10111290A (ja) | 1998-04-28 |
Family
ID=17641148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28158096A Withdrawn JPH10111290A (ja) | 1996-05-22 | 1996-10-04 | ＩｇＡ腎症の診断法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10111290A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010285419A (ja) * | 2009-05-12 | 2010-12-24 | Fujita Gakuen | 糖鎖不全ヒトＩｇＡ１ヒンジ部を認識する抗体及びその用途 |
-
1996
- 1996-10-04 JP JP28158096A patent/JPH10111290A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010285419A (ja) * | 2009-05-12 | 2010-12-24 | Fujita Gakuen | 糖鎖不全ヒトＩｇＡ１ヒンジ部を認識する抗体及びその用途 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20040106 |