JPH095630A - 光走査方法 - Google Patents
光走査方法Info
- Publication number
- JPH095630A JPH095630A JP7148597A JP14859795A JPH095630A JP H095630 A JPH095630 A JP H095630A JP 7148597 A JP7148597 A JP 7148597A JP 14859795 A JP14859795 A JP 14859795A JP H095630 A JPH095630 A JP H095630A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sample
- scanning
- lines
- frame
- images
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- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 褪色を抑え、コントラストの良好な標本画像
を得る。 【構成】 共焦点レーザ走査顕微鏡における光走査方法
であって、画像取得条件の調整に際し、試料へのレーザ
光の照射を間歇的に行い、かつ、各フレームごとの走査
ラインを変更する。
を得る。 【構成】 共焦点レーザ走査顕微鏡における光走査方法
であって、画像取得条件の調整に際し、試料へのレーザ
光の照射を間歇的に行い、かつ、各フレームごとの走査
ラインを変更する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、光走査方法に関する
ものである。さらに詳しくは、この発明は、褪色を抑
え、共焦点レーザ走査顕微鏡においてコントラストの良
好標本画像を得ることのできる改善された光走査方法に
関するものである。
ものである。さらに詳しくは、この発明は、褪色を抑
え、共焦点レーザ走査顕微鏡においてコントラストの良
好標本画像を得ることのできる改善された光走査方法に
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】光走査装置を顕微鏡に組み込み、従来の
光学顕微鏡に比較して高い解像力をもたせたものとして
共焦点レーザ走査顕微鏡が知られている。この共焦点レ
ーザ走査顕微鏡は、主として光源、顕微鏡本体、制御・
解析を行うコンピュータ、そしてモニター等から構成さ
れている。たとえば図２に示したように、この顕微鏡で
は、光源から出射されたレーザ光（１）は対物レンズ
（２）により絞られ、試料のある一点の最小サイズのス
ポットとして照射される。スポット内の試料からの光は
再び対物レンズ（２）およびレンズ（３）を通過して細
く絞られる。共焦点が結ばれる位置にはピンホールフィ
ルタ（４）が置かれており、焦点面（５）からの光のみ
が光検出器（６）に達して像は電気信号化されるが、焦
点面（５）以外からの光は大部分がピンホールフィルタ
（４）を通過できないので、光検出器（６）に達しな
い。そのため、通常の光学顕微鏡で像がぼやける原因と
なっていた焦点面以外からの光は共通レーザ走査顕微鏡
では画像化されず、焦点面（５）の画像のみが得られる
ことになる。このスポットの位置を、図３に示すよう
に、移動すなわち走査（走査ライン数は例えば４８０本
で）することにより、ＸＹ平面のデータを読みとる。こ
のようにピンホールフィルタ（４）を置くことにより、
焦点面からの光のみを得ることができるため、深さ方向
の解像度が飛躍的に改良され、同時にコントラストが高
まる。
光学顕微鏡に比較して高い解像力をもたせたものとして
共焦点レーザ走査顕微鏡が知られている。この共焦点レ
ーザ走査顕微鏡は、主として光源、顕微鏡本体、制御・
解析を行うコンピュータ、そしてモニター等から構成さ
れている。たとえば図２に示したように、この顕微鏡で
は、光源から出射されたレーザ光（１）は対物レンズ
（２）により絞られ、試料のある一点の最小サイズのス
ポットとして照射される。スポット内の試料からの光は
再び対物レンズ（２）およびレンズ（３）を通過して細
く絞られる。共焦点が結ばれる位置にはピンホールフィ
ルタ（４）が置かれており、焦点面（５）からの光のみ
が光検出器（６）に達して像は電気信号化されるが、焦
点面（５）以外からの光は大部分がピンホールフィルタ
（４）を通過できないので、光検出器（６）に達しな
い。そのため、通常の光学顕微鏡で像がぼやける原因と
なっていた焦点面以外からの光は共通レーザ走査顕微鏡
では画像化されず、焦点面（５）の画像のみが得られる
ことになる。このスポットの位置を、図３に示すよう
に、移動すなわち走査（走査ライン数は例えば４８０本
で）することにより、ＸＹ平面のデータを読みとる。こ
のようにピンホールフィルタ（４）を置くことにより、
焦点面からの光のみを得ることができるため、深さ方向
の解像度が飛躍的に改良され、同時にコントラストが高
まる。
【０００３】ただ、このような、共焦点レーザ走査顕微
鏡で観察し得る生物細胞等の標本はほとんど蛍光性を有
するものに限られており、この場合走査の繰り返しによ
る蛍光励起時間の延長に伴う試料の蛍光の褪色が最も問
題となる。特に、画像データの取得に先立ち行われる諸
条件（レーザパワー、光検出器など）の調節時に蛍光が
褪色してしまい、実際に必要となる画像データが得られ
なくなる恐れがある。そこで、これまで、画像取得条件
調節時に褪色を抑えるために２つの方法が用いられてい
る。第１の方法としては、試料へのレーザ光の照射を間
歇的に行い蛍光励起時間を短くする方法である。第２の
方法としては、図４に示すように１フレームあたりの走
査ライン数を（例えば４８０本から１２０本に）減ら
し、試料全体ではなく特定の部分のみを走査する方法で
ある。
鏡で観察し得る生物細胞等の標本はほとんど蛍光性を有
するものに限られており、この場合走査の繰り返しによ
る蛍光励起時間の延長に伴う試料の蛍光の褪色が最も問
題となる。特に、画像データの取得に先立ち行われる諸
条件（レーザパワー、光検出器など）の調節時に蛍光が
褪色してしまい、実際に必要となる画像データが得られ
なくなる恐れがある。そこで、これまで、画像取得条件
調節時に褪色を抑えるために２つの方法が用いられてい
る。第１の方法としては、試料へのレーザ光の照射を間
歇的に行い蛍光励起時間を短くする方法である。第２の
方法としては、図４に示すように１フレームあたりの走
査ライン数を（例えば４８０本から１２０本に）減ら
し、試料全体ではなく特定の部分のみを走査する方法で
ある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
上記第１の方法では、レーザ光の照射を試料全体に対し
て行っているので、照射を間歇的に行ったとしても、走
査ライン数を減らした粗い画像で実施することのできる
画像取得条件（レーザパワー、光検出器など）の調節時
に必要以上に多くの部分が褪色してしまうという問題が
ある。このため、画像取得条件調節時にこの方法を採用
すると、次に全走査ラインを使用して詳細な標本画像デ
ータを取得した場合、褪色がかなりあり、蛍光が非常に
弱くコントラストがきわめて悪い画像となる。
上記第１の方法では、レーザ光の照射を試料全体に対し
て行っているので、照射を間歇的に行ったとしても、走
査ライン数を減らした粗い画像で実施することのできる
画像取得条件（レーザパワー、光検出器など）の調節時
に必要以上に多くの部分が褪色してしまうという問題が
ある。このため、画像取得条件調節時にこの方法を採用
すると、次に全走査ラインを使用して詳細な標本画像デ
ータを取得した場合、褪色がかなりあり、蛍光が非常に
弱くコントラストがきわめて悪い画像となる。
【０００５】また上記第２の方法では、各フレームで試
料の同じ部分を走査しているので画像取得条件調節時に
走査された部分は褪色があり、走査されていない部分は
褪色がないという問題がある。画像取得条件調節時にこ
の方法を採用すると、次に全走査ラインを使用して詳細
な標本画像データを取得した場合、試料内で褪色の度合
いが不均一でありコントラストが悪い画像となる。
料の同じ部分を走査しているので画像取得条件調節時に
走査された部分は褪色があり、走査されていない部分は
褪色がないという問題がある。画像取得条件調節時にこ
の方法を採用すると、次に全走査ラインを使用して詳細
な標本画像データを取得した場合、試料内で褪色の度合
いが不均一でありコントラストが悪い画像となる。
【０００６】そこで、この発明は、以上の通りの従来の
問題点に鑑みてなされたものであって、画像取得条件
（レーザパワー、光検出器など）の調節時の褪色を最小
限に抑え、かつ試料内での褪色を均一にする光走査方法
を提供することを目的としている。
問題点に鑑みてなされたものであって、画像取得条件
（レーザパワー、光検出器など）の調節時の褪色を最小
限に抑え、かつ試料内での褪色を均一にする光走査方法
を提供することを目的としている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】この発明は、上記の課題
を解決するために、光走査を空間的または時間的に間引
き、かつ各フレームごとの走査ラインを変更する光走査
方法を提供する。すなわち、この発明は、共焦点レーザ
走査顕微鏡における画像取得条件の調整に際し、試料へ
のレーザ光の照射を間歇的に行い、かつ、各フレームご
との走査ラインを変更することを特徴とする光走査方法
を提供する。
を解決するために、光走査を空間的または時間的に間引
き、かつ各フレームごとの走査ラインを変更する光走査
方法を提供する。すなわち、この発明は、共焦点レーザ
走査顕微鏡における画像取得条件の調整に際し、試料へ
のレーザ光の照射を間歇的に行い、かつ、各フレームご
との走査ラインを変更することを特徴とする光走査方法
を提供する。
【０００８】
【作用】図１は、この発明の光走査方法を示したもので
あるが、この図１に示したように、１フレーム目は図４
の従来方法と同様に走査ライン数を減らして光走査を行
い、次のフレームでは前のフレームで走査したラインと
は異なるラインを走査していき、これを１フレーム目で
走査したラインと重なるまで（たとえば４フレームごと
に）繰り返す。さらに、各フレームのレーザ照射を間歇
的に行う。このように走査する方法は、試料の１スポッ
トに対する励起光の照射時間を短縮し、かつ試料を均一
に照射しているので、褪色を最小限に押さえ、かつ試料
内での褪色を均一にすることができる。
あるが、この図１に示したように、１フレーム目は図４
の従来方法と同様に走査ライン数を減らして光走査を行
い、次のフレームでは前のフレームで走査したラインと
は異なるラインを走査していき、これを１フレーム目で
走査したラインと重なるまで（たとえば４フレームごと
に）繰り返す。さらに、各フレームのレーザ照射を間歇
的に行う。このように走査する方法は、試料の１スポッ
トに対する励起光の照射時間を短縮し、かつ試料を均一
に照射しているので、褪色を最小限に押さえ、かつ試料
内での褪色を均一にすることができる。
【０００９】
【実施例】以下、この発明の実施例を説明する。すなわ
ち、この実施例では、細胞をＦＩＴＣにて染色した標本
を作製し、共焦点レーザ走査顕微鏡で観察した。まず図
１に例示した光走査方法で画像取得条件（レーザパワ
ー、光検出器など）を調節してから実際に必要となる詳
細な画像データを図３のように全走査ラインを使用して
取得した。具体的には、４フレームごとに走査したライ
ンが重なるように異なるラインを走査し、さらに、各フ
レームのレーザ照射を間歇的に行い、画像取得条件を調
整した。その後全画像ラインを使用して画像を得た。褪
色が最小限に押さえられ、かつ試料内での褪色が均一と
なったコントラストの良い画像が得られた。
ち、この実施例では、細胞をＦＩＴＣにて染色した標本
を作製し、共焦点レーザ走査顕微鏡で観察した。まず図
１に例示した光走査方法で画像取得条件（レーザパワ
ー、光検出器など）を調節してから実際に必要となる詳
細な画像データを図３のように全走査ラインを使用して
取得した。具体的には、４フレームごとに走査したライ
ンが重なるように異なるラインを走査し、さらに、各フ
レームのレーザ照射を間歇的に行い、画像取得条件を調
整した。その後全画像ラインを使用して画像を得た。褪
色が最小限に押さえられ、かつ試料内での褪色が均一と
なったコントラストの良い画像が得られた。
【００１０】なおこの実施例では染色のためにＦＩＴＣ
を用いたが、これ以外に BODIPY FL、 Rhodamine、 Tex
as Red、Propidium Iodidaなど、蛍光性を有するもので
あれば用いることができる。
を用いたが、これ以外に BODIPY FL、 Rhodamine、 Tex
as Red、Propidium Iodidaなど、蛍光性を有するもので
あれば用いることができる。
【００１１】
【発明の効果】以上のように、この発明によれば、画像
取得条件（レーザパワー、光検出器など）の調節時に褪
色を最小限に抑え、かつ試料内での褪色を均一にするこ
とができ、コントラストの良い標本画像を得られる。
取得条件（レーザパワー、光検出器など）の調節時に褪
色を最小限に抑え、かつ試料内での褪色を均一にするこ
とができ、コントラストの良い標本画像を得られる。
【図１】この発明の光走査方法を示す説明図である。
【図２】共焦点レーザ走査顕微鏡の原理を示す説明図で
ある。
ある。
【図３】従来の光走査方法を示す説明図である。
【図４】従来の光走査方法を示す説明図である。
１ レーザ光 ２ 対物レンズ ３ レンズ ４ ピンホールフィルタ ５ 焦点面 ６ 光検出器
Claims (1)
- 【請求項１】 共焦点レーザ走査顕微鏡における光走査
方法であって、画像取得条件の調整に際し、試料へのレ
ーザ光の照射を間歇的に行い、かつ、各フレームごとの
走査ラインを変更することを特徴とする光走査方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7148597A JPH095630A (ja) | 1995-06-15 | 1995-06-15 | 光走査方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7148597A JPH095630A (ja) | 1995-06-15 | 1995-06-15 | 光走査方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH095630A true JPH095630A (ja) | 1997-01-10 |
Family
ID=15456324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7148597A Withdrawn JPH095630A (ja) | 1995-06-15 | 1995-06-15 | 光走査方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH095630A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004138947A (ja) * | 2002-10-21 | 2004-05-13 | Keyence Corp | 走査モード選択可能な共焦点顕微鏡システム |
| EP1617375A1 (de) * | 2004-07-16 | 2006-01-18 | CARL ZEISS JENA GmbH | Verfahren zur bildlichen Erfassung von Objekten mittels eines Lichtrastermikroskopes |
| EP1617254A1 (de) * | 2004-07-16 | 2006-01-18 | CARL ZEISS JENA GmbH | Verfahren zur bildlichen Erfassung von Objekten mittels eines Lichtrastermikroskopes mit linienförmiger Abtastung |
| JP2006313355A (ja) * | 2005-05-03 | 2006-11-16 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | レーザ走査型顕微鏡 |
| USRE49934E1 (en) | 2016-08-31 | 2024-04-23 | Servier Pharmaceuticals Llc | Inhibitors of cellular metabolic processes |
-
1995
- 1995-06-15 JP JP7148597A patent/JPH095630A/ja not_active Withdrawn
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004138947A (ja) * | 2002-10-21 | 2004-05-13 | Keyence Corp | 走査モード選択可能な共焦点顕微鏡システム |
| EP1617375A1 (de) * | 2004-07-16 | 2006-01-18 | CARL ZEISS JENA GmbH | Verfahren zur bildlichen Erfassung von Objekten mittels eines Lichtrastermikroskopes |
| EP1617254A1 (de) * | 2004-07-16 | 2006-01-18 | CARL ZEISS JENA GmbH | Verfahren zur bildlichen Erfassung von Objekten mittels eines Lichtrastermikroskopes mit linienförmiger Abtastung |
| JP2006313355A (ja) * | 2005-05-03 | 2006-11-16 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | レーザ走査型顕微鏡 |
| JP2012098755A (ja) * | 2005-05-03 | 2012-05-24 | Carl Zeiss Microimaging Gmbh | レーザ走査型顕微鏡 |
| USRE49934E1 (en) | 2016-08-31 | 2024-04-23 | Servier Pharmaceuticals Llc | Inhibitors of cellular metabolic processes |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20020903 |