JPH0954088A - 微量ヘモグロビン▲Ａ１ｃ▼測定用乾式試験具 - Google Patents
微量ヘモグロビン▲Ａ１ｃ▼測定用乾式試験具Info
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- JPH0954088A JPH0954088A JP23752195A JP23752195A JPH0954088A JP H0954088 A JPH0954088 A JP H0954088A JP 23752195 A JP23752195 A JP 23752195A JP 23752195 A JP23752195 A JP 23752195A JP H0954088 A JPH0954088 A JP H0954088A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 支持体上に、溶血剤と変性剤と微粒子とを塗
布した溶血層と、抗ヘモグロビンＡ１ｃ抗体と抗ＩｇＧ
抗体とが含まれる凝集層と、凝集微粒子を捕捉する測定
層が順に積層されており、展開後の展開残液を吸収する
吸収層が上記測定層の周辺に配置されている、乾式試験
具である。 【発明の効果】本発明によれば、大型の分析装置を用い
ず、しかも溶血および／または変性処理操作といった前
処理を必要とせず、検体数の少ない中小病院や開業医、
または患者自身でも小型機器を用いて、簡単な操作でヘ
モグロビンＡとヘモグロビンＡ１ｃとを同時に直接測定
できる。しかも、本発明の原理である免疫凝集反応は、
市販の着色ビーズを用いるので、色素等で抗体を標識す
る必要がない。目的物質を標識しないので、標識化によ
る抗体の変性の危険性もない。さらに、検体は展開液と
ともに上から下へ展開するために、液がむらなく均一に
展開される。また、検体中にＨｂＡ１ｃが非常に少なく
とも凝集反応を起こすために、測定が可能である。
布した溶血層と、抗ヘモグロビンＡ１ｃ抗体と抗ＩｇＧ
抗体とが含まれる凝集層と、凝集微粒子を捕捉する測定
層が順に積層されており、展開後の展開残液を吸収する
吸収層が上記測定層の周辺に配置されている、乾式試験
具である。 【発明の効果】本発明によれば、大型の分析装置を用い
ず、しかも溶血および／または変性処理操作といった前
処理を必要とせず、検体数の少ない中小病院や開業医、
または患者自身でも小型機器を用いて、簡単な操作でヘ
モグロビンＡとヘモグロビンＡ１ｃとを同時に直接測定
できる。しかも、本発明の原理である免疫凝集反応は、
市販の着色ビーズを用いるので、色素等で抗体を標識す
る必要がない。目的物質を標識しないので、標識化によ
る抗体の変性の危険性もない。さらに、検体は展開液と
ともに上から下へ展開するために、液がむらなく均一に
展開される。また、検体中にＨｂＡ１ｃが非常に少なく
とも凝集反応を起こすために、測定が可能である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＨｂＡとＨｂＡ
１ｃを同時に測定することにより、ＨｂＡ量に対するＨ
ｂＡ１ｃ量の比率を簡易測定するための乾式試験具に関
する。特に、検体中にＨｂＡ１ｃが非常に少ない場合に
有用な試験具に関する。
１ｃを同時に測定することにより、ＨｂＡ量に対するＨ
ｂＡ１ｃ量の比率を簡易測定するための乾式試験具に関
する。特に、検体中にＨｂＡ１ｃが非常に少ない場合に
有用な試験具に関する。
【０００２】
【従来の技術】血中のヘモグロビンに糖が結合したグリ
コヘモグロビンは、その濃度が過去１〜２ケ月間の平均
的な血中糖濃度を反映するために、糖尿病の診断あるい
は糖尿病の経過観察に適した指標として広く利用されて
いる。
コヘモグロビンは、その濃度が過去１〜２ケ月間の平均
的な血中糖濃度を反映するために、糖尿病の診断あるい
は糖尿病の経過観察に適した指標として広く利用されて
いる。
【０００３】グリコヘモグロビンを測定する場合には、
全体のヘモグロビン量を対照とした際のグリコヘモグロ
ビン量の比率で示される。この場合、ヘモグロビンの種
類（ヘモグロビンＡ，Ｓ，ＣおよびＥ）のうち、ヘモグ
ロビンＡ（ＨｂＡ）中の特定のグリコヘモグロビンであ
る、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の割合を指標と
して用いることが臨床的に一般化されており、ＨｂＡに
対するＨｂＡ１ｃの比率で示すと、通常約４〜６％がそ
の目安とされている。
全体のヘモグロビン量を対照とした際のグリコヘモグロ
ビン量の比率で示される。この場合、ヘモグロビンの種
類（ヘモグロビンＡ，Ｓ，ＣおよびＥ）のうち、ヘモグ
ロビンＡ（ＨｂＡ）中の特定のグリコヘモグロビンであ
る、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の割合を指標と
して用いることが臨床的に一般化されており、ＨｂＡに
対するＨｂＡ１ｃの比率で示すと、通常約４〜６％がそ
の目安とされている。
【０００４】グリコヘモグロビンの測定法としては電気
泳動法、ボロン酸アフィニティクロマトグラフィー法、
イオン交換クロマトグラフィー法、イムノアッセイ法な
どが知られているが、現在では所要時間や分離性などの
点からイオン交換クロマトグラフィー法が主流となって
いる。しかし、最近では特異性の高い抗体を用いたイム
ノアッセイ法でも測定されるようになって来ている。
泳動法、ボロン酸アフィニティクロマトグラフィー法、
イオン交換クロマトグラフィー法、イムノアッセイ法な
どが知られているが、現在では所要時間や分離性などの
点からイオン交換クロマトグラフィー法が主流となって
いる。しかし、最近では特異性の高い抗体を用いたイム
ノアッセイ法でも測定されるようになって来ている。
【０００５】このイムノアッセイ法は、用いる抗体の特
異性が高いためイオン交換クロマトグラフィー法におい
て問題とされる不安定型グリコヘモグロビン、カルバミ
ル化ヘモグロビン、アセトアルデヒド化ヘモグロビンお
よびアセチル化ヘモグロビンなどの影響を受けず、迅速
かつ検体処理能力が高い長所がある。
異性が高いためイオン交換クロマトグラフィー法におい
て問題とされる不安定型グリコヘモグロビン、カルバミ
ル化ヘモグロビン、アセトアルデヒド化ヘモグロビンお
よびアセチル化ヘモグロビンなどの影響を受けず、迅速
かつ検体処理能力が高い長所がある。
【０００６】しかし、グリコヘモグロビンに対する特異
抗体はヘモグロビンと化学構造の相違する部位（つまり
糖が結合した部分）をエピトープとしており、さらにＨ
ｂＡ１ｃの場合その部位は十分露出していないため、イ
ムノアッセイ法を行う際、多くの場合その部位を露出さ
せるための変性操作が必要である。
抗体はヘモグロビンと化学構造の相違する部位（つまり
糖が結合した部分）をエピトープとしており、さらにＨ
ｂＡ１ｃの場合その部位は十分露出していないため、イ
ムノアッセイ法を行う際、多くの場合その部位を露出さ
せるための変性操作が必要である。
【０００７】イオン交換クロマトグラフィー法および従
来のイムノアッセイ法では、比較的大型の分析装置を必
要とし、大きな病院検査室または検査センターでのみ測
定が行なわれている。
来のイムノアッセイ法では、比較的大型の分析装置を必
要とし、大きな病院検査室または検査センターでのみ測
定が行なわれている。
【０００８】一方、イムノアッセイ法を応用したもの
で、血中のヘモグロビンＡ、Ｓ、ＣおよびＥの種類判定
を目視でできる使い捨てタイプの乾式検査具（Ｓｃｒｅ
ｅｎｉｎｇ３，６７〜７６，１９９４）も知られてい
る。この乾式検査具は患者自身で測定することが可能で
あるが、前処理として溶血操作を必要とし、ＨｂＡ１ｃ
といったグリコヘモグロビンを測定するものではない。
前処理を患者自身が行う場合、操作の煩雑さの他に汚染
も問題である。
で、血中のヘモグロビンＡ、Ｓ、ＣおよびＥの種類判定
を目視でできる使い捨てタイプの乾式検査具（Ｓｃｒｅ
ｅｎｉｎｇ３，６７〜７６，１９９４）も知られてい
る。この乾式検査具は患者自身で測定することが可能で
あるが、前処理として溶血操作を必要とし、ＨｂＡ１ｃ
といったグリコヘモグロビンを測定するものではない。
前処理を患者自身が行う場合、操作の煩雑さの他に汚染
も問題である。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】ＨｂＡ１ｃといったグ
リコヘモグロビンを測る事ができ、かつ検体を前処理す
ることなしに測定可能な乾式試験具が開発されればその
メリットは極めて大きい。そこで本発明は、大型の分析
装置を用いず、しかも溶血および／または変性処理操作
を必要とせず、検体数の少ない中小病院や開業医、また
は患者自身でも小型機器を用いて、簡単な操作でＨｂＡ
とＨｂＡ１ｃとを同時に直接測定できる乾式試験具を提
供することを目的とする。また、検体中にＨｂＡ１ｃが
特に少ない場合でも良好に測定できる乾式試験具を提供
することも目的とする。
リコヘモグロビンを測る事ができ、かつ検体を前処理す
ることなしに測定可能な乾式試験具が開発されればその
メリットは極めて大きい。そこで本発明は、大型の分析
装置を用いず、しかも溶血および／または変性処理操作
を必要とせず、検体数の少ない中小病院や開業医、また
は患者自身でも小型機器を用いて、簡単な操作でＨｂＡ
とＨｂＡ１ｃとを同時に直接測定できる乾式試験具を提
供することを目的とする。また、検体中にＨｂＡ１ｃが
特に少ない場合でも良好に測定できる乾式試験具を提供
することも目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】上記目的は、全体が液体
を移送しうる材質で形成されており、展開液を用いるこ
とで血中のＨｂＡに対するＨｂＡ１ｃの量を測定するた
めの乾式試験具であって、１個の支持体上に、以下のｉ
からｖの構成すなわち ｉ）溶血剤と変性剤と微粒子とを塗布した溶血層 ｉｉ）展開層 ｉｉｉ）抗ＨｂＡ１ｃ抗体と抗ＩｇＧ抗体とを含む凝集
層 ｉｖ）展開層 ｖ）凝集微粒子を捕捉する機能を有する測定層 が順に積層された構造物が設置されており、展開後の展
開残液を吸収する吸収層が上記測定層の周囲に配置され
ている、血中ＨｂＡ１ｃ測定用乾式試験具を用いて、血
液検体を点着して展開させた後光学的方法により測定し
てＨｂＡとＨｂＡ１ｃの量を同時に求め、それぞれの値
からＨｂＡに対するＨｂＡ１ｃの比率を算出することに
より、達成できる。なお、このときに使用される血液検
体としては、全血は勿論のこと、分離された赤血球でも
良い。
を移送しうる材質で形成されており、展開液を用いるこ
とで血中のＨｂＡに対するＨｂＡ１ｃの量を測定するた
めの乾式試験具であって、１個の支持体上に、以下のｉ
からｖの構成すなわち ｉ）溶血剤と変性剤と微粒子とを塗布した溶血層 ｉｉ）展開層 ｉｉｉ）抗ＨｂＡ１ｃ抗体と抗ＩｇＧ抗体とを含む凝集
層 ｉｖ）展開層 ｖ）凝集微粒子を捕捉する機能を有する測定層 が順に積層された構造物が設置されており、展開後の展
開残液を吸収する吸収層が上記測定層の周囲に配置され
ている、血中ＨｂＡ１ｃ測定用乾式試験具を用いて、血
液検体を点着して展開させた後光学的方法により測定し
てＨｂＡとＨｂＡ１ｃの量を同時に求め、それぞれの値
からＨｂＡに対するＨｂＡ１ｃの比率を算出することに
より、達成できる。なお、このときに使用される血液検
体としては、全血は勿論のこと、分離された赤血球でも
良い。
【００１１】免疫凝集反応は、市販の着色ビーズを用い
るので、色素等で抗体を標識する必要がない。目的物質
を標識しないので、標識化による抗体の変性の危険性も
ない。さらに、検体は展開液とともに上から下へ展開す
るために、液がむらなく均一に展開される。
るので、色素等で抗体を標識する必要がない。目的物質
を標識しないので、標識化による抗体の変性の危険性も
ない。さらに、検体は展開液とともに上から下へ展開す
るために、液がむらなく均一に展開される。
【００１２】また、先の構造物の隣に、さらに以下のｖ
ｉからｖｉｉｉの構成すなわち ｖｉ）溶血剤を塗布した溶血層 ｖｉｉ）展開層 ｖｉｉｉ）ＨｂＡを捕捉する測定層 が順に積層された構造物を設置することにより、測定精
度を向上することができる。詳細は後述する。以下具体
的に述べる。
ｉからｖｉｉｉの構成すなわち ｖｉ）溶血剤を塗布した溶血層 ｖｉｉ）展開層 ｖｉｉｉ）ＨｂＡを捕捉する測定層 が順に積層された構造物を設置することにより、測定精
度を向上することができる。詳細は後述する。以下具体
的に述べる。
【００１３】
【発明の実施の形態】第１図は、支持体１の上に凝集微
粒子のみを捕捉しうる測定層２を設け、測定層２の上に
展開可能な材質からなる展開層３を設け、展開層３の上
に抗ＨｂＡ１ｃ抗体を塗布した凝集層４を設け、凝集層
４の上に展開可能な材質からなる展開層５を設け、展開
層５の上に溶血剤・微粒子および変性剤を塗布した溶血
層６を設け、測定層２の周囲に展開後の展開残液を吸収
する吸収層８を設け、これらを積層したものを、穴を有
するカバー７で覆った試験具の縦断面図である。これを
試験具Ａとする。この試験具の溶血層６に血液検体を点
着すると、溶血と変性が行なわれ、微粒子の表面へＨｂ
Ａ１ｃを含むＨｂＡが吸着される。引き続き展開液を溶
血層６に加えると微粒子は凝集層４の抗ＨｂＡ１ｃ抗体
と免疫反応して凝集し、凝集した微粒子は測定層２に捕
捉され、凝集しなかった微粒子を含む展開残液は吸収層
８に吸収される。次いで、測定層２と吸収層８中のＨｂ
ＡとＨｂＡ１ｃによる着色度と、測定層２に捕捉された
微粒子自身（ＨｂＡ１ｃ量に相当）の着色度をそれぞれ
光学的方法により測定して、その結果からそれぞれＨｂ
ＡおよびＨｂＡ１ｃの値を求め、ＨｂＡに対するＨｂＡ
１ｃの比率を算出する。
粒子のみを捕捉しうる測定層２を設け、測定層２の上に
展開可能な材質からなる展開層３を設け、展開層３の上
に抗ＨｂＡ１ｃ抗体を塗布した凝集層４を設け、凝集層
４の上に展開可能な材質からなる展開層５を設け、展開
層５の上に溶血剤・微粒子および変性剤を塗布した溶血
層６を設け、測定層２の周囲に展開後の展開残液を吸収
する吸収層８を設け、これらを積層したものを、穴を有
するカバー７で覆った試験具の縦断面図である。これを
試験具Ａとする。この試験具の溶血層６に血液検体を点
着すると、溶血と変性が行なわれ、微粒子の表面へＨｂ
Ａ１ｃを含むＨｂＡが吸着される。引き続き展開液を溶
血層６に加えると微粒子は凝集層４の抗ＨｂＡ１ｃ抗体
と免疫反応して凝集し、凝集した微粒子は測定層２に捕
捉され、凝集しなかった微粒子を含む展開残液は吸収層
８に吸収される。次いで、測定層２と吸収層８中のＨｂ
ＡとＨｂＡ１ｃによる着色度と、測定層２に捕捉された
微粒子自身（ＨｂＡ１ｃ量に相当）の着色度をそれぞれ
光学的方法により測定して、その結果からそれぞれＨｂ
ＡおよびＨｂＡ１ｃの値を求め、ＨｂＡに対するＨｂＡ
１ｃの比率を算出する。
【００１４】もしもここで、検体中にＨｂＡ１ｃが非常
に少ない場合は、微粒子１個につきＨｂＡ１ｃがたった
１個だけ吸着するという状況になる。これでは凝集層に
おいて、抗ＨｂＡ１ｃ抗体を介して微粒子どうしが繋が
らず、結果として凝集反応が起こらない。その解決策と
して、抗ＨｂＡ１ｃ抗体を作製した動物のＩｇＧに対す
る抗体を使用して、「抗ＨｂＡ１ｃ抗体」どうしを繋ぐ
ことによって凝集を起こさせるのである。
に少ない場合は、微粒子１個につきＨｂＡ１ｃがたった
１個だけ吸着するという状況になる。これでは凝集層に
おいて、抗ＨｂＡ１ｃ抗体を介して微粒子どうしが繋が
らず、結果として凝集反応が起こらない。その解決策と
して、抗ＨｂＡ１ｃ抗体を作製した動物のＩｇＧに対す
る抗体を使用して、「抗ＨｂＡ１ｃ抗体」どうしを繋ぐ
ことによって凝集を起こさせるのである。
【００１５】ここで、各構成要素の機能と材料を以下に
示す。基本的に、材料は公知のもので構わない。
示す。基本的に、材料は公知のもので構わない。
【００１６】支持体は光透過性の物質が好ましく、本発
明では展開終了後の光学的測定を支持体下部から行うた
めに、測定層の下部は必ず光透過性でなくてはならな
い。また、支持体は一枚板である必要はなく、例えば支
持体全体が光非透過性であり、測定層下部に貫通孔を有
していてもよい。材質は、ある程度の強度を有するもの
で、例えばガラス，ポリスチレン，ポリエステル，ポリ
エチレンテレフタレート，酢酸セルロースなどが挙げら
れる。
明では展開終了後の光学的測定を支持体下部から行うた
めに、測定層の下部は必ず光透過性でなくてはならな
い。また、支持体は一枚板である必要はなく、例えば支
持体全体が光非透過性であり、測定層下部に貫通孔を有
していてもよい。材質は、ある程度の強度を有するもの
で、例えばガラス，ポリスチレン，ポリエステル，ポリ
エチレンテレフタレート，酢酸セルロースなどが挙げら
れる。
【００１７】展開層をなす展開膜は、吸着反応や免疫凝
集反応を行わせるための場として、またその反応の速度
を調節するためにある。また、この展開層の一部へ溶血
剤等を塗布して溶血層を、抗体を塗布して凝集層を設け
る。材質としては、酢酸セルロース、ニトロセルロー
ス、セルロース、ガラスファイバーなどの、液体と微粒
子が通りやすい物質であることが必要である。
集反応を行わせるための場として、またその反応の速度
を調節するためにある。また、この展開層の一部へ溶血
剤等を塗布して溶血層を、抗体を塗布して凝集層を設け
る。材質としては、酢酸セルロース、ニトロセルロー
ス、セルロース、ガラスファイバーなどの、液体と微粒
子が通りやすい物質であることが必要である。
【００１８】溶血層に含まれる溶血剤としてはサポニン
が有力であるが、界面活性剤も使用できる。その界面活
性剤の種類としては、ポリソルベート、ポリエチレング
リコール−ｐ−イソオクチルエーテルなどが挙げられ
る。その中でも溶血能の点から、トリトンＸ−１００が
市販品として特に望ましい。同時に溶血層に塗布される
変性剤は、ＨｂＡ１ｃを変性させてＨｂＡとの化学構造
の相違する部位（つまり糖部分）を露出させ、抗ＨｂＡ
１ｃ抗体が免疫的に認識し易くする役割を有する。種類
としては、チオシアン酸塩のような酸や、プロテアーゼ
のような加水分解酵素が好ましく、単に酸性にするのみ
でも良い。さらに、ヘモグロビンＡ１ｃを捕捉するため
の構造物の溶血剤層には、抗原を吸着させるための微粒
子を含ませる。それは、免疫凝集反応で使用される市販
の着色ビーズ（ラテックス製）でよく、また、着色また
は無着色の金属コロイド（金、銀、銅）も使用できる。
ただし、これら微粒子の着色は、ヘモグロビンの色（赤
色）と光学的に区別して測定できるものでなければなら
ない。
が有力であるが、界面活性剤も使用できる。その界面活
性剤の種類としては、ポリソルベート、ポリエチレング
リコール−ｐ−イソオクチルエーテルなどが挙げられ
る。その中でも溶血能の点から、トリトンＸ−１００が
市販品として特に望ましい。同時に溶血層に塗布される
変性剤は、ＨｂＡ１ｃを変性させてＨｂＡとの化学構造
の相違する部位（つまり糖部分）を露出させ、抗ＨｂＡ
１ｃ抗体が免疫的に認識し易くする役割を有する。種類
としては、チオシアン酸塩のような酸や、プロテアーゼ
のような加水分解酵素が好ましく、単に酸性にするのみ
でも良い。さらに、ヘモグロビンＡ１ｃを捕捉するため
の構造物の溶血剤層には、抗原を吸着させるための微粒
子を含ませる。それは、免疫凝集反応で使用される市販
の着色ビーズ（ラテックス製）でよく、また、着色また
は無着色の金属コロイド（金、銀、銅）も使用できる。
ただし、これら微粒子の着色は、ヘモグロビンの色（赤
色）と光学的に区別して測定できるものでなければなら
ない。
【００１９】凝集層に含まれる抗ＨｂＡ１ｃ抗体と、測
定層での抗ＨｂＡ抗体としては、ポリクローナル抗体と
モノクローナル抗体がともに使用できる。抗ＩｇＧ抗体
としては、抗ＨｂＡ１ｃ抗体を作製した動物のＩｇＧに
対するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体が
使用できる。
定層での抗ＨｂＡ抗体としては、ポリクローナル抗体と
モノクローナル抗体がともに使用できる。抗ＩｇＧ抗体
としては、抗ＨｂＡ１ｃ抗体を作製した動物のＩｇＧに
対するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体が
使用できる。
【００２０】測定層は、凝集した微粒子を捕捉し得る孔
径を有する濾過剤である多孔性マトリックスが望まし
い。濾過剤の例は、ポリテトラフルオロエチレン、ポリ
スルオン、ポリプロピレン、ポリビニリデンジフロライ
ド、セルロース混合エステルなどが挙げられる。また、
この層に捕捉された微粒子の呈色を観察するために、そ
の呈色とは波長の異なる色をした膜が好ましい。好まし
くは白色である。捕捉の方法は、濾過剤を使用して濾過
することが望ましくて一般的であるが、抗体やイオン交
換樹脂を使用する方法もある。
径を有する濾過剤である多孔性マトリックスが望まし
い。濾過剤の例は、ポリテトラフルオロエチレン、ポリ
スルオン、ポリプロピレン、ポリビニリデンジフロライ
ド、セルロース混合エステルなどが挙げられる。また、
この層に捕捉された微粒子の呈色を観察するために、そ
の呈色とは波長の異なる色をした膜が好ましい。好まし
くは白色である。捕捉の方法は、濾過剤を使用して濾過
することが望ましくて一般的であるが、抗体やイオン交
換樹脂を使用する方法もある。
【００２１】吸収剤の条件としては、展開残液を吸収す
るのに十分な細孔容積を有する多孔性マトリックスか、
十分な液吸収能を有する乾燥ゲルが挙げられる。例とし
ては、セルロース、酢酸セルロース、ポリアクリル酸、
ポリビニールアルコールなどがある。
るのに十分な細孔容積を有する多孔性マトリックスか、
十分な液吸収能を有する乾燥ゲルが挙げられる。例とし
ては、セルロース、酢酸セルロース、ポリアクリル酸、
ポリビニールアルコールなどがある。
【００２２】展開に用いる展開液としては、通常のイム
ノアッセイ法に使用されるような、少量の蛋白質、塩、
界面活性剤を含む緩衝液が望ましく、一例としては、
０．１％ウシ血清アルブミンと、０．０１％トリトンＸ
−１００と、０．９％塩化ナトリウムを含む０．１Ｍリ
ン酸緩衝液が挙げられる。
ノアッセイ法に使用されるような、少量の蛋白質、塩、
界面活性剤を含む緩衝液が望ましく、一例としては、
０．１％ウシ血清アルブミンと、０．０１％トリトンＸ
−１００と、０．９％塩化ナトリウムを含む０．１Ｍリ
ン酸緩衝液が挙げられる。
【００２３】溶血層と凝集層と測定層は、展開膜に各種
試薬を含浸・塗布または結合させることで作製するが、
手法としては当業者間で公知の方法で良く、施すべき物
質を１種以上の含浸溶液中へ溶かし込み、塗り付けるこ
とで含浸したり、インクジェットプリンターで噴霧した
り、化学的に結合する（「酵素免疫測定法」医学書院、
１９８７年）ことができる。いずれにしても、最終的に
は乾燥させる。
試薬を含浸・塗布または結合させることで作製するが、
手法としては当業者間で公知の方法で良く、施すべき物
質を１種以上の含浸溶液中へ溶かし込み、塗り付けるこ
とで含浸したり、インクジェットプリンターで噴霧した
り、化学的に結合する（「酵素免疫測定法」医学書院、
１９８７年）ことができる。いずれにしても、最終的に
は乾燥させる。
【００２４】支持体上へ各層を配置する方法としては、
円形に加工した各々の層の膜を重ね合わせ，カバーと支
持体とを物理的に（例えば接着剤で）固定する。もちろ
ん、円形である必要は特にない。その際のカバーの材質
の例は、ポリエチレン，ポリプロピレン，ポリスチレ
ン，メタクリル樹脂，ポリカーボネートなどが挙げられ
る。
円形に加工した各々の層の膜を重ね合わせ，カバーと支
持体とを物理的に（例えば接着剤で）固定する。もちろ
ん、円形である必要は特にない。その際のカバーの材質
の例は、ポリエチレン，ポリプロピレン，ポリスチレ
ン，メタクリル樹脂，ポリカーボネートなどが挙げられ
る。
【００２５】第２図は、支持体１１の上に、ＨｂＡ１ｃ
を捕捉するための構造物と、その隣にＨｂＡを捕捉する
ための新しい構造物を有する試験具Ｂの断面図であり、
この試験具を試験具Ｂとする。ＨｂＡを捕捉するための
構造物は、支持体１１の上に抗ＨｂＡ抗体またはイオン
交換物質を固定化した測定層２２を有し、その測定層の
上に液を展開可能な材質からなる展開層２３を有し、そ
の展開層の上に溶血剤を塗布した溶血層２６を有してい
る。これらの構成要素は、検体と展開液を供給するため
の穴を有するカバー２７で覆われており、積層されると
同時に支持体へ固定されている。測定層２２の周囲に
は、展開残液を吸収させる吸収剤からなる吸収層２８が
設けてある。ＨｂＡ１ｃを捕捉するための構造物は、支
持体１１の上に凝集微粒子のみを捕捉しうる濾過膜でで
きた測定層１２を有し、その測定層１２の上に液を展開
可能な材質からなる展開層１３を有し、その展開層１３
の上に抗ＨｂＡ１ｃ抗体を塗布した凝集層１４を有し、
その凝集層１４の上に液を展開可能な材質からなる展開
層１５を有し、その展開層１５上に溶血剤，変性剤およ
び微粒子を塗布した溶血層１６を有している。これらの
構成要素は、穴を有するカバー１７で覆われており、積
層されると同時に支持体へ固定されている。測定層の周
囲には、展開残液を吸収させる吸収剤からなる吸収層１
８が設けてある。
を捕捉するための構造物と、その隣にＨｂＡを捕捉する
ための新しい構造物を有する試験具Ｂの断面図であり、
この試験具を試験具Ｂとする。ＨｂＡを捕捉するための
構造物は、支持体１１の上に抗ＨｂＡ抗体またはイオン
交換物質を固定化した測定層２２を有し、その測定層の
上に液を展開可能な材質からなる展開層２３を有し、そ
の展開層の上に溶血剤を塗布した溶血層２６を有してい
る。これらの構成要素は、検体と展開液を供給するため
の穴を有するカバー２７で覆われており、積層されると
同時に支持体へ固定されている。測定層２２の周囲に
は、展開残液を吸収させる吸収剤からなる吸収層２８が
設けてある。ＨｂＡ１ｃを捕捉するための構造物は、支
持体１１の上に凝集微粒子のみを捕捉しうる濾過膜でで
きた測定層１２を有し、その測定層１２の上に液を展開
可能な材質からなる展開層１３を有し、その展開層１３
の上に抗ＨｂＡ１ｃ抗体を塗布した凝集層１４を有し、
その凝集層１４の上に液を展開可能な材質からなる展開
層１５を有し、その展開層１５上に溶血剤，変性剤およ
び微粒子を塗布した溶血層１６を有している。これらの
構成要素は、穴を有するカバー１７で覆われており、積
層されると同時に支持体へ固定されている。測定層の周
囲には、展開残液を吸収させる吸収剤からなる吸収層１
８が設けてある。
【００２６】試験具Ｂの溶血層２６に血液検体を点着す
ると溶血され、次いで展開液を溶血層２６に加えると、
ＨｂＡは展開され測定層２２に固定化されている抗Ｈｂ
抗体またはイオン交換物質に捕捉される。その際の展開
残液は吸収層２８に吸収される。一方、溶血層１６に血
液検体を点着すると、検体は溶血および変性され、Ｈｂ
Ａ１ｃを含むＨｂＡは微粒子に吸着する。引き続き展開
液を溶血層１６に加えると、ＨｂＡ１ｃを含むＨｂＡと
吸着したその微粒子は凝集層１４の抗ＨｂＡ１ｃ抗体と
反応して凝集する。凝集した微粒子は測定層１２に捕捉
され、凝集していない微粒子を含む展開残液は吸収層１
８に吸収される。次いで、測定層２２中のＨｂＡの着色
度と、測定層１２に捕捉された微粒子自身（ＨｂＡ１ｃ
量に相当）の着色度とをそれぞれ光学的に測定し、その
結果からそれぞれＨｂＡおよびＨｂＡ１ｃの値を求めた
後、ＨｂＡに対するＨｂＡ１ｃの比率を算出する。
ると溶血され、次いで展開液を溶血層２６に加えると、
ＨｂＡは展開され測定層２２に固定化されている抗Ｈｂ
抗体またはイオン交換物質に捕捉される。その際の展開
残液は吸収層２８に吸収される。一方、溶血層１６に血
液検体を点着すると、検体は溶血および変性され、Ｈｂ
Ａ１ｃを含むＨｂＡは微粒子に吸着する。引き続き展開
液を溶血層１６に加えると、ＨｂＡ１ｃを含むＨｂＡと
吸着したその微粒子は凝集層１４の抗ＨｂＡ１ｃ抗体と
反応して凝集する。凝集した微粒子は測定層１２に捕捉
され、凝集していない微粒子を含む展開残液は吸収層１
８に吸収される。次いで、測定層２２中のＨｂＡの着色
度と、測定層１２に捕捉された微粒子自身（ＨｂＡ１ｃ
量に相当）の着色度とをそれぞれ光学的に測定し、その
結果からそれぞれＨｂＡおよびＨｂＡ１ｃの値を求めた
後、ＨｂＡに対するＨｂＡ１ｃの比率を算出する。
【００２７】試験具Ｂでは、ＨｂＡとＨｂＡ１ｃを捕捉
する場所が異なり、それぞれを異なる手段で確実に捕捉
するために、試験具Ａと比較すると、測定精度が向上す
る。
する場所が異なり、それぞれを異なる手段で確実に捕捉
するために、試験具Ａと比較すると、測定精度が向上す
る。
【００２８】ＨｂＡ１ｃを捕捉するための構造物中の溶
血層では、ＨｂＡ１ｃを変性させてＨｂＡとの化学構造
の相違する部位（つまり糖部分）を露出させ、抗ＨｂＡ
１ｃ抗体が免疫的に認識し易くする必要があるが、Ｈｂ
Ａを捕捉するための構造物中の溶血層では、ＨｂＡ１ｃ
を含むＨｂＡ全体を捕捉するために、変性剤は特に必要
としない。また、凝集する微粒子もないので、測定層に
は抗ＨｂＡ抗体やイオン交換樹脂（例としては、ジエチ
ルアミノエチルセルロース，カルボキシメチルセルロー
ス）などを含ませておけばよい。抗ＨｂＡ抗体は、Ｈｂ
ＡとＨｂＡ１ｃの両方に結合する。
血層では、ＨｂＡ１ｃを変性させてＨｂＡとの化学構造
の相違する部位（つまり糖部分）を露出させ、抗ＨｂＡ
１ｃ抗体が免疫的に認識し易くする必要があるが、Ｈｂ
Ａを捕捉するための構造物中の溶血層では、ＨｂＡ１ｃ
を含むＨｂＡ全体を捕捉するために、変性剤は特に必要
としない。また、凝集する微粒子もないので、測定層に
は抗ＨｂＡ抗体やイオン交換樹脂（例としては、ジエチ
ルアミノエチルセルロース，カルボキシメチルセルロー
ス）などを含ませておけばよい。抗ＨｂＡ抗体は、Ｈｂ
ＡとＨｂＡ１ｃの両方に結合する。
【００２９】図２の試験具Ｂにおいても、検体中にＨｂ
Ａ１ｃが少ない場合は、図１の試験具Ａと同様の理由
で、凝集層へ抗ＨｂＡ１ｃ抗体と抗ＩｇＧ抗体の両方を
含ませる。
Ａ１ｃが少ない場合は、図１の試験具Ａと同様の理由
で、凝集層へ抗ＨｂＡ１ｃ抗体と抗ＩｇＧ抗体の両方を
含ませる。
【００３０】
【発明の効果】本発明によれば、大型の分析装置を用い
ず、しかも溶血および／または変性処理操作といった前
処理を必要とせず、検体数の少ない中小病院や開業医、
または患者自身でも小型機器を用いて、簡単な操作でＨ
ｂＡとＨｂＡ１ｃとを同時に直接測定できる。しかも、
本発明の原理である免疫凝集反応は、市販の着色ビーズ
を用いるので、色素等で抗体を標識する必要がない。目
的物質を標識しないので、標識化による抗体の変性の危
険性もない。さらに、検体は展開液とともに上から下へ
展開するために、液がむらなく均一に展開される。ま
た、検体中にＨｂＡ１ｃが非常に少なくとも凝集反応を
起こすために、測定が可能である。
ず、しかも溶血および／または変性処理操作といった前
処理を必要とせず、検体数の少ない中小病院や開業医、
または患者自身でも小型機器を用いて、簡単な操作でＨ
ｂＡとＨｂＡ１ｃとを同時に直接測定できる。しかも、
本発明の原理である免疫凝集反応は、市販の着色ビーズ
を用いるので、色素等で抗体を標識する必要がない。目
的物質を標識しないので、標識化による抗体の変性の危
険性もない。さらに、検体は展開液とともに上から下へ
展開するために、液がむらなく均一に展開される。ま
た、検体中にＨｂＡ１ｃが非常に少なくとも凝集反応を
起こすために、測定が可能である。
【図１】本発明の試験具Ａの縦断面図である。
【図２】本発明の試験具Ｂの縦断面図である。
１，１１ ： 支持体 ２，１２，２２ ： 測定層 ３，５，１３，１５，２３： 展開層 ４，１４， ： 凝集層 ６，１６，２６ ： 溶血層 ７，１７，２７ ： カバー ８，１８，２８ ： 吸収層
Claims (5)
- 【請求項１】全体が液体を移送しうる材質で形成されて
おり、展開液を用いることで全血中のヘモグロビンＡ
（ＨｂＡと略する）量に対する微量なヘモグロビンＡ
１ｃ（ＨｂＡ１ｃと略する）量を測定するための乾式試
験具であって、１個の支持体上に、以下のｉからｖの構
成すなわち ｉ）溶血剤と変性剤と微粒子とを塗布した溶血層 ｉｉ）展開層 ｉｉｉ）抗ＨｂＡ１ｃ抗体と抗ＩｇＧ抗体とを含む凝集
層 ｉｖ）展開層 ｖ）凝集微粒子を捕捉する機能を有する測定層 が順に積層された構造物が設置されており、展開後の展
開残液を吸収する吸収層が上記測定層の周囲に配置され
ている、血中ＨｂＡ１ｃ測定用乾式試験具。 - 【請求項２】特許請求の範囲第１項に記載の構造物の隣
に、さらに以下のｖｉからｖｉｉｉの構成すなわち ｖｉ）溶血剤を塗布した溶血層 ｖｉｉ）展開層 Ｖｉｉｉ）抗ＨｂＡ抗体またはイオン交換樹脂が固定化
されている測定層 が順に積層された構造物が並列に設置してあり、展開後
の展開残液を吸収する吸収層が上記測定層の周囲に配置
されている試験具。 - 【請求項３】測定層での凝集微粒子の捕捉方法が、濾過
剤による濾過作用によるものである、特許請求の範囲第
１又は２項に記載の試験具。 - 【請求項４】溶血層中の微粒子が、ヘモグロビンの色と
光学的に区別して測定し得る色に着色されている、特許
請求の範囲第１から３項のいずれかに記載の試験具。 - 【請求項５】測定層における光学的測定のために、支持
体の全体又は一部分が光透過性であるか、又は測定層の
下部に穴を開けたものである、特許請求の範囲第１から
４項のいずれかに記載の試験具。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23752195A JPH0954088A (ja) | 1995-08-11 | 1995-08-11 | 微量ヘモグロビン▲Ａ１ｃ▼測定用乾式試験具 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23752195A JPH0954088A (ja) | 1995-08-11 | 1995-08-11 | 微量ヘモグロビン▲Ａ１ｃ▼測定用乾式試験具 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0954088A true JPH0954088A (ja) | 1997-02-25 |
Family
ID=17016565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23752195A Pending JPH0954088A (ja) | 1995-08-11 | 1995-08-11 | 微量ヘモグロビン▲Ａ１ｃ▼測定用乾式試験具 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0954088A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112740037A (zh) * | 2018-09-28 | 2021-04-30 | 积水医疗株式会社 | 糖化血红蛋白(％)测定方法 |
-
1995
- 1995-08-11 JP JP23752195A patent/JPH0954088A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112740037A (zh) * | 2018-09-28 | 2021-04-30 | 积水医疗株式会社 | 糖化血红蛋白(％)测定方法 |
| EP3859332A4 (en) * | 2018-09-28 | 2022-07-13 | Sekisui Medical Co., Ltd. | GLYQUATED HEMOGLOBIN (%) ASSAY METHOD |
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