JPH09511486A

JPH09511486A - 合成レセプター、ライブラリー及びこれらの使用

Info

Publication number: JPH09511486A
Application number: JP7519163A
Authority: JP
Inventors: スティル、ダブリュ・クラーク; リ、ゲー; ベンネメルス、ヘルマ
Original assignee: Columbia University of New York
Current assignee: Columbia University of New York
Priority date: 1994-01-13
Filing date: 1995-01-13
Publication date: 1997-11-18
Also published as: CA2180844A1; EP0739486A4; EP0739486A1; ZA95260B; AU686785B2; US20030104360A1; US5804563A; WO1995019567A1; US7067326B2; AU2156595A

Abstract

(57)【要約】本発明は、合成レセプターであって、２以上のオリゴマー（これらは独立に、同じであってもまた異なっていてもよく、更に独立に直鎖でも、環状でも又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合される多官能性有機テンプレートを具備すものに向けられる。該テンプレートは、該合成レセプターを唯一同定できる同定基に結合されうる。該同定基は、ピコモルレベルまで識別及び検出できる安定な１つの化学分子又は複数の化学分子であるか、又はオリゴヌクレオチドである。好ましい態様では、該テンプレートは、同定基に結合される固体支持体に共有結合される。加えて、本発明には、合成レセプター及び合成レセプターライブラリーを製造する方法が含まれる。該合成ライブラリーは、該ライブラリーが複数の異なった合成レセプターのメンバーを含有するように同定基と結合されうる。本発明はまた、適切な合成レセプターであって、（ａ）受容体分子に結合するもの、（ｂ）生物学的活性を示すもの、（ｃ）反応を触媒するか、又は触媒された反応を阻害するもの、及び（ｄ）クロマトグラフィーで化合物を分離するものを決定するための合成レセプターライブラリーをアッセイする方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】合成レセプター、ライブラリー及びこれらの使用この出願は、１９９４年１月１３日に提出された米国特許出願第０８／１８１，６２８の一部係属出願である。該出願の内容は、本出願に参照文献として含まれる。本発明は、全米科学財団よりの補助ＣＨＥ９２−０８２５４の政府基金を一部用いて行った。従って、米国政府は本発明に一定の権利を有する。この出願全体にわたって、種々の参照文献が括弧内で参照される。これら刊行物全体の開示は、参照文献として本出願の一部をなし、この出願の属する分野の状態をより完全に説明するものである。本発明の背景レセプターは、他の分子と選択的に相互作用する分子である。レセプター分子は、基質の選択的な結合から化学反応の触媒まで種々の働きをする。多機能レセプター分子の一例は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、非常に高い選択性で他の分子（抗原）に結合するが、他の場合には、これらは化学反応の遷移状態に選択的に結合することによって該化学反応を触媒する。モノクローナル抗体は、医薬及び診断薬として使用される。他のレセプター分子は、分子をターゲッティングする薬剤として使用され、「魔法の弾丸（magic bullets）」としばしば称される。全ての場合において、レセプター分子の有効性は、高い識別力及び選択性で、即ち他の非常に密接に関連した分子種に結合せずに分子種 (基質)を結合する該レセプターの能力に依存する。抗体は、外来基質の存在に反応して産生されるタンパク質である（Stryer，L. Biochemistry，3rd Edition，W．H．Freeman and Company，New York，1988及び Schultz，P.G．Acc．Chem．Res.，1989，22，287）。抗体形成を引き出すことができる外来基質は抗原と呼ばれる。各校体は、この合成を刺激した抗原に対して高い特異的親和性を有する。抗体がその抗原を結合するための自由エネルギーは通常６〜１５kcal/molである。抗体の構造分析は、そのほとんどが免疫グロブリン構造を有することを示している。免疫グロブリンは、たわみやすいＹ字型の分子であり、分子量により軽鎖及び重鎖と命名された２種類のポリペプチドより成る（図１）。他の研究者は、組み合わせ方法を用いてペプチド及びオリゴマーライブラリーを調製しているが、本発明者らは、組み合わせ技術を適用し、レセプターライブラリーを作成し、更に特別な生物学的標的に対するレセプターを同定する方法を適用した最初の者である。本発明の概要本発明は、合成レセプターであって、２以上のオリゴマー（これらは独立に、同じであってもまた異なっていてもよく、更に独立に直鎖でも、環状でも又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合される多官能性有機テンプレートを具備すものに向けられる。該テンプレートは、該合成レセプターを唯一同定できる同定基（identifier）に結合されうる。該同定基は、ピコモルレベルまで識別及び検出できる安定な１つの化学分子又は複数の化学分子であるか、又はオリゴヌクレオチドである。好ましい態様では、該テンプレートは、同定基に結合される固体支持体に共有結合される。加えて、本発明には、合成レセプター及び合成レセプターライブラリーを製造する方法が含まれる。該合成ライブラリーは、該ライブラリーが複数の異なった合成レセプターのメンバーを含有するように同定基と結合されうる。本発明はまた、適切な合成レセプターであって、（ａ）受容体分子に結合するもの、（ｂ）生物学的活性を示すもの、（ｃ）反応を触媒するか、又は触媒された反応を阻害するもの、及び（ｄ）クロマトグラフィーで化合物を分離するものを決定するための合成レセプターライブラリーをアッセイする方法を提供する。図面の簡単な説明図１。図１はＩｇＧ分子を表す。Ｌ（軽）及びＨ（重）鎖の両方は、可変（Ｖ）及び定常（Ｃ）領域より成る。軽鎖（Ｖ_L）と重鎖（Ｖ_H）の可変領域は、長さ及び配列において同様である。免疫グロブリンＧは３つのフラグメントに分けられる。これらのフラグメントの２つは抗原に結合する。これらはＦ_ab（ａｂは抗原結合（antigen-binding）、Ｆはフラグメントによる）と命名されている。各Ｆ_a _b は、抗原に対する１つの結合部位（又は抗原結合部位）を含有し、これは、分子全体が有するのと同様の抗原に対する結合親和性を有する。他のフラグメント (これは容易に結晶化するのでＦｃと呼ばれる。)は、抗原と結合しない。図１に示されるように、Ｆ_abは、４つのサブユニットＶ_L、Ｖ_H、Ｃ_L及びＣ_Hlを有する。図２。図２は、固体支持体上で２７のトリペプチドを生成するのに使用されるスプリット（SPlit）−合成の組み合わせ法を表す。図３。図３は、固体支持体上の反応をモニターするのに使用される手順を表す。図４。図４は、Disperse Redを用いて、基質に結合したビーズ上のレセプターライブラリーメンバーを検出するためのカラースクリーニングアッセイを表す。１は、着色基質で処理される前のビーズを示し、２は、ビーズに加えられる有機溶媒中の着色基質を表わし、３は、一日後の平衡に達した密封バイアルの結果を示す。図５。図５は、単一の合成ビーズから得た分子バーコードの読みを表す。図６。図６は、単一のデコードされたビーズに対する典型的なガスクロマトグラフィースペクトルを表す（分子タグを有するバイナリーコード系を使用した。）。本発明の詳細な説明ここで使用する多官能性有機テンプレートは、（ａ）単環性脂肪族炭化水素、（ｂ）多環性脂肪族炭化水素、（ｃ）単環性芳香族炭化水素、（ｄ）多環性芳香族炭化水素、（ｅ）単環性ヘテロ環、（ｆ）多環性ヘテロ環、又は大環状化合物であり得る。以下の縮合多環性炭化水素をテンプレートとして使用しうる：ペンタレン、インデン、ナフタレン、アズレン、ヘプタレン、ビフェニレン、asym−インダセン、sym−インダセン、アセナフチレン、フルオレン、フェナレン、フェナントレン、アントラセン、フルオランテン、アセファナントリレン、アセアントリレン、トリフェニレン、ピレン、クリセン及びナフタセン（Dean，J．A.，ed.，Lang e's Handbook of Chemistry，Thirteenth Edition，(1985)，７−９及び７−１０頁、 MacGraw-Hill，Inc.，New York）。以下のヘテロ環系をテンプレートとして使用しうる：チオフェン、チアントレン、フラン、ピラン、イソベンゾフラン、クロメン、アンテン、フェノキサンチン、２−Ｈ−ピロール、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、３−Ｈ−インドール、インドール、ｉＨ−インダゾール、プリン、４−Ｈ−キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、４ａＨ−カルバゾール、カルバゾール、β−カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、ペリミジン、フェナントロリン、フェナジン及びフェナルサジン（Dean，J．A.，ed. ，Lange's Handbook of Chemistry，Thirteenth Edition，(1985)，７−１５及び７−１７頁、MacGraw-Hill，Inc.，New York）。以下のヘテロ環系をテンプレートとして使用しうる：イソクロマン、クロマン、ピロリジン、ピラゾリジン、ピロリジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピラゾリジン、ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、イソインドリン、キヌクリジン及びモルホリン（Dean,J.A.,ed.,Lange's Handbook of Chemis try,ThirteenthEdition,(1985)，７−１７頁〜７−１８頁、MacGraw-Hill，Inc. ,New York）。以下のステロイドホルモンをテンプレートとして使用しうる：ハイドロコルチゾン、コルチゾン、コルチコステロン、アルドステロン、デオキシコルチコステロン、９αフルオロハイドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、トリアンシノロン、エストラジオール１７β、エストロン、エストリオール、プロゲステロン、プレグナンジオール及びテストステロン(D ean,J.A.，ed.，Lange's Handbook of Chemistry，Thirteenth Edition，(1985) ，７−１１６頁〜７−１９頁、MacGraw-Hill，Inc.，New York）。以下の化合物をテンプレートとして使用しうる：フェロセンカルボン酸及び１，１’−フェロセンジメタノール(アルドリッチカタログ／ハンドブックオブファインケミカルズ、１９９４−１９９５、アルドリッチケミカルカンパニー、Ｉｎｃ．ミルウォーキー、ＷＩ、６９７頁）。ここで使用されるオリゴマーには、非環式若しくは環状ホモマー、ヘテロマーが含まれ、非環式若しくは環状オリゴマーには、オリゴアミド、オリゴエステル、オリゴウレア、オリゴウレタン、オリゴアミン、オリゴエーテル、オリゴスルホンアミド、オリゴホスホンアミド、オリゴホスホネート、オリゴホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、ペプチドオリゴマー、シクロファン、又はこれらのモノマーの混合物が含まれる。オリゴマー又はこれらの一部分はまた、多官能性有機テンプレートへの結合に先立って調製されうる。加えて、モノマーはお互いにカップリングされ、２以上のモノマーのユニットを形成し、これは次いで、多官能性有機テンプレートに更に結合される。ここで使用される共有結合的に結合されたとは、エステル結合、アミド結合、アミン結合、エーテル結合、又は硫黄、ケイ素、窒素、酸素、炭素原子を介した結合のような結合、又は何れかの適切な原子への共有結合である。本発明は、２以上のオリゴマーアームに共有結合的に結合された多官能性有機テンプレートであって、マクロサイクル、非環式、分岐した非環式、環式若しくは分岐した環式、又は多環式であるもの（これらは独立に、同じであっても又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖、環状若しくは分岐したものでも、又はこれらの組合せであってもよい。）を含有する合成レセプターに関する。該多官能性有機テンプレートは、非環式、炭素環式、ヘテロ環、ポリカルボサイクル、多環式、炭化水素、ポリヘテロ環、大環状ポリエーテル、大環状ポリアミン、大環状ポリアミド、大環状ポリエステル、大環状ビサイクル、大環状トリサイクル、大環状テトラサイクル、ポダンド（podand）、ステロイド又は但し、Ｘ＝ＯＨ、ＳＨ又はＮＨ₂、であり得る。他の多官能性有機テンプレートには、ポルフィリン環、サイクロデキストリン、オリゴプロリン、カリキセラン及び以下に示すタイプのマクロサイクルが含まれる。又は但し、Ｘ＝Ｏ又はＳ。加えて、以下のものも適切な多官能性有機テンプレートである。又は又は但し、Ｋ＝リジン又は但し、Ｘ、Ｙ＝Ｏ、Ｓ、ＮＨ；Ｋ、ｍ＝２〜６；１＝０〜５；及びｎ＝１〜６。環状ヘテロ環は、シクロスポリンのようなポリ環状ポリペプチドでありうる。但し、ｎ＝３〜２０。オリゴマーは、オリゴアミド、オリゴエステル、オリゴウレア、オリゴウレタン、オリゴアミン、オリゴエーテル、オリゴスルホンアミド、オリゴホスホンアミド、オリゴホスホネート、オリゴホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、ペプチドオリゴマー、シクロファン又はこれらのモノマーの混合物でありうる。好ましくは、該オリゴマーは、ポリペプチド又はオリゴヌクレオチドである。本発明の一つの好ましい態様では、各オリゴマーは、１０以下のモノマーを含有する。合成レセプターのオリゴマーは、同じであっても、また異なっていてもよい。他の好ましい態様では、少なくとも１つのオリゴマーが、上記のオリゴマーより成る群から選択される２以上の独特なオリゴマーのクラスの組合せである。オリゴマーは、ヘテロマー又はホモマーでありうる。該オリゴマーは、環状又は非環式でありうる。本発明の一態様では、合成レセプターは、２以上のペプチドオリゴマーに共有結合的に結合された多官能性ステロイドテンプレートであって、該オリゴマーが、独立に、同じでも、又は異なっていてもよく、更に、直鎖、環状又は枝分かれしていてもよいものであり得る。該多官能性ステロイドテンプレートは、ウルソデオキシコール酸、ヒオデオキシコール酸、アルファ−アポコール酸、又はでありうる。合成レセプターが、多官能性ステロイドテンプレートである場合の好ましい態様では、該オリゴマーは、少なくとも２つのアミノ酸を含有するペプチドオリゴマーでありうる。該テンプレートは、更に色素、蛍光標識又は放射性標識に結合されうる。加えて、多官能性有機テンプレートは、合成レセプターを唯一同定する同定基に更に結合されうる。該同定基は、合成レセプター及び合成レセプターのオリゴマーの分子構造を唯一つ同定する。該同定基は、ピコモルレベルの識別及び検出ができる安定な化学分子又は複数の安定な化学分子又はオリゴヌクレオチドである。好ましい態様では、合成レセプターは、固体基質及び２以上のオリゴマー（これらは独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に、直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に結合された多官能性有機テンプレートででありうる。該固体支持体は、セルロース、制御された細孔のガラス、シリカゲル、ポリスチレン、ＰＥＧ−ポリスチレン、ジビニルベンゼンで任意に交差結合されたポリスチレン、グラフトコポリ（grafted co-poly ）、ポリアクリルアミド、ラテックス、Ｎ，Ｎ’−ビス−アクリロイルエチレンジアミンで任意に交差結合されたポリジメチルアクリルアミド、ポリマーでコートされたガラス、又は低分子量非交差結合ポリスチレンより成る粒子であることが好ましく、該粒子は、長球状、キャピラリー、中空繊維、針、又は固体繊維である。多官能性有機テンプレートがステロイドである場合、該テンプレートは、ポリスチレン、ポリジメチルアクリルアミド又はＰＥＧ−ポリスチレン粒子に共有結合的に結合される。該固体支持体は、該固体支持体に共有結合的に結合された合成レセプターを唯一同定する同定基に更に結合される。本発明は、複数の独特な合成レセプターを含有するライブラリーであって、該ライブラリーが少なくとも１００の独特な合成レセプターを含有するものを合成する方法を提供する。該ライブラリーは、少なくとも１０³の合成レセプター、好ましくは１０⁶又は１０⁹ほどの独特な合成レセプターのメンバーを含有する。好ましくは、該レセプターライブラリーは、少なくとも１０⁶のメンバーを含有する。該ライブラリーは、多官能性有機テンプレートが、非環式炭化水素、炭環式脂肪族炭化水素、多環状脂肪族炭化水素、炭環式芳香族炭化水素、多環式芳香族炭化水素、炭環式ヘテロ環、多環式ヘテロ環、マクロサイクル又はステロイドである合成レセプターを有しうる。一態様において、該ライブラリーの合成レセプターは、固体支持体に共有結合的に結合される。該ライブラリーは少なくとも１００の独特の固体支持体を有する。該固体支持体は、合成レセプターを唯一同定する１以上の同定基に結合される。他の好ましい態様では、多官能性有機テンプレートは、１以上の同定基に更に結合される。加えて、本発明は、複数の異なった合成レセプターのメンバーを含有する同定基を有する合成レセプターライブラリーを調製する方法を提供する。各合成レセプターライブラリーのメンバーは、単一のタイプの結合された合成レセプターを有する固体支持体である。該方法は、以下のステップを有する。該ステップは、ａ）反応容器内の固体支持体を多官能性有機テンプレートと反応すること、ｂ）結合された多官能性有機テンプレートを有する該固体支持体を複数の反応容器中に分配すること、ｃ）各反応容器内の固体支持体上の多官能性有機テンプレートを第一のオリゴマーモノマーと反応すること、ｄ）各反応容器内の固体支持体を第一の同定基と反応すること、ｅ）該固体支持体をプールすること、ｆ）該プールされた支持体を複数の反応容器に分配すること、ｇ）各反応容器内の固体支持体上の多官能性有機テンプレートを第二のオリゴマーモノマーと反応すること、ｈ）各反応容器内でプールされた固体支持体を第二の同定基と反応すること、及びｉ）（ｅ）から（ｈ）のステップを合成レセプターの各オリゴマーに対して少なくとも１回から２０回繰り返すこと、である。ここで開示される方法に使用される同定基分子又はこれらの組合せは、各繰り返しで異なっていることが好ましい。本発明はまた、以下のステップを含有する方法を提供する。該ステップは、ａ）第一のタイプの保護基でブロックされた第一のタイプの活性部位及び第二のタイプの保護基でブロックされた第二のタイプの活性部位を含有する二官能性固体支持体を調製すること、ｂ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第一のタイプの保護基を除去し、これによって第一のタイプの活性部位を露出させること、ｃ）保護された多官能性有機テンプレートを第一のタイプの活性部位とカップリングすること、ｄ）保護された多官能性有機テンプレートを活性化剤と反応し、第一のタイプの保護基を除去し、これによって第一の活性部位を露出させること、ｅ）保護されたオリゴマーモノマーを該脱保護された多官能性有機テンプレートにカップリングすること、ｆ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第二のタイプの保護基を除去し、これによって第二のタイプの活性部位を露出すること、ｇ）保護された同定基を第二のタイプの活性部位にカップリングすること、及びｈ）（ｄ）から（ｇ）のステップを合成レセプターの各折りマーに対して１から２０回繰り返すこと、である。本発明はまた、以下のステップを含有する方法を提供する。該ステップは、ａ）保護された多官能性有機テンプレートを固体支持体にカップリングすること、ｂ）該保護された多官能性有機テンプレートを活性化剤と反応し、保護基を除去し、これによって活性部位を露出させること、ｃ）保護されたオリゴマーモノマーを該脱保護された多官能性有機テンプレートにカップリングすること、ｄ）同定基を該固体支持体にカップリングすること、及びｅ）（ｂ）から（ｄ）のステップを合成レセプターの各オリゴマーに対して１から２０回繰り返すこと、である。上記の方法では、ステップ（ｃ）及び（ｄ）は、図２に概略を示したようなスプリット合成を実施するために、プールするステップ及び分配するステップと更に組み合わされうる。本発明の他の態様は、１以上の同定基を有する合成レセプターであって、２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有するものを合成する方法である。該方法は、ａ）保護された多官能性有機テンプレートを固体支持体にカップリングすること、ｂ）該保護された多官能性有機テンプレートを活性化剤と反応し、保護基を除去し、これによって活性部位を露出すること、ｃ）保護されたオリゴマーモノマーを該脱保護された多官能性有機テンプレートにカップリングすること、ｄ）同定基を固体支持体にカップリングすること、及びｅ）（ｂ）から（ｄ）のステップを各オリゴマーの合成レセプターに対して１から２０回繰り返すこと、のステップを具備する。本発明はまた、複数の異なった合成レセプターメンバーを含有する、同定基を有する合成レセプターライブラリーを製造する方法であって、各合成レセプターライブラリーのメンバーが固体支持体を含有し、該固体支持体が単一のタイプの合成レセプターをこれに結合しており、該単一のタイプの合成レセプターが２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び該合成レセプターを同定する１以上の同定基を含有するものを提供する。この方法は、ａ）複数の反応容器内の固体支持体を分配すること、ｂ）各反応容器内の該固体支持体を第一のオリゴマーモノマーと反応すること、ｃ）各反応容器内の該固体支持体を第一の同定基と反応すること、ｄ）該固体支持体をプールすること、ｅ）該プールされた支持体を複数の反応容器に分配すること、ｆ）各反応容器内の固体支持体を第二のオリゴマーモノマーと反応すること、ｇ）各反応容器内の該プールされた固体支持体を第二の同定基と反応すること、ｈ）（ｄ）から（ｇ）のステップを各オリゴマーに対して少なくとも１回から２０回繰り返すこと、及びｉ）各反応容器内の固体支持体を多官能性有機テンプレートと反応すること、のステップを具備する。１以上の同定基を有する合成レセプターを調製するための方法を提供する。該合成レセプターは、２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び該合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有する。この方法は、ａ）保護基でブロックされた活性部位を含有する多官能性固体支持体を調製すること、ｂ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第一タイプの保護基を除去し、これにより第一のタイプの活性部位を露出させること、ｃ）保護されたオリゴマーモノマーを固体支持体の第一のタイプの活性部位にカップリングすること、ｄ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第二のタイプの保護基を除去し、これによって第二のタイプの活性部位を露出させること、ｅ）保護された同定基を第二のタイプの活性部位にカップリングすること、及びｆ）（ｂ）から（ｅ）のステップを各オリゴマーに対して１から２０回繰り返すこと、ｇ）該固体支持体上の保護されたオリゴマーを活性化剤と反応し、保護基を除去し、これによって活性部位を露出すること、ｈ）多官能性有機テンプレートを活性部位にカップリングすること、のステップを具備する。上記の方法において、同定基は、ピコモルレベルまで識別及び検出可能な安定な化学分子又は複数の安定な化学分子又はオリゴヌクレオチドである。各反応容器内で多官能性有機テンプレートにカップリングされる固体支持体が、まず同定基と反応され得、次いで固体支持体上の多官能性有機テンプレートがオリゴマーモノマーと反応されうる。本発明はまた、注目の受容体分子に対して適切な合成レセプターを決定するための合成レセプターライブラリーをアッセイする方法を提供する。該方法は、ａ）合成レセプターライブラリーを生じさせること、ｂ）該合成レセプターライブラリーと注目の受容体分子とを、該受容体分子が合成レセプターライブラリーの１以上の適切な合成レセプターと相互作用し、これらに結合するような条件下で接触すること、ｃ）受容体分子との結合を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｄ）適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを含有する。アッセイのために導入された受容体分子は、標識に結合されうる。導入された受容体分子に結合された該標識は、該受容体分子と相互作用する適切な合成レセプターを同定する。該標識は、色素、蛍光標識又は放射性標識でありうる。アッセイで同定される適切な合成レセプターは、クロマトグラフィーの分離剤として使用されうる。注目の受容体分子は、次の、抗体、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、脂質、薬物、金属又は小さな分子から選択される。ペプチド受容体の場合は、該ペプチドは、副腎皮質刺激性ホルモン及びフラグメント、アンギオテンシン、心房性ナトリウム排泄増加剤、ブラジキニン、ケモタティック（chemotatic）、ダイノルフィン（dynorphin）、エンドルフィン及びβ−リポトロフィンフラグメント、エンケファリン、酵素阻害剤、フイブロネクチンフラグメント、腸間内、成長ホルモン放出性ペプチド、黄体形成ホルモン放出性ペプチド、メラノサイト刺激ホルモン、ニューロテンシン、オピオイド、オキシトシン、バソプレシン、バソトシン、副甲状腺ホルモン及びフラグメント、タンパクキナーゼ、ソマトスタチン、サブスタンスＰでありうる。タンパク質受容体分子が、成長ホルモンである場合、これは、ヒト、ウシ、ブタ、トリ、ヒツジ、魚、又はウマ成長ホルモン、及び対応する天然に存在する成長ホルモンの生物学的活性を有するこれらのポリペプチド類似体を包含する群から選択されうる。加えて、成長因子であるタンパク質は、ＩＬ−１、Ｌ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＥＧＦ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＴＧＦ−ベータ１、ＴＧＦ−ベータ２、ＴＧＦ−ベータ３、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＥＧＦ、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＮＦ、ＩＬ、ＬＩＦ、ＫＧＦ、ＯＳＭ、ＰＤＧＦ、ＴＮＦ、サイトカイン、キットリガンド、ＥＰＯ、トランスフォーミング成長因子、神経成長因子、脳誘導化成長因子、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、ヘプタオサイト（heptaocyte）成長因子でありうる。該タンパク質は、上記端タンパク質の何れか、又は成長因子に対するレセプターでもありうる。該受容体分子は、全細胞、ウイルス又はバクテリアにも存在しうる。他の受容体分子には以下の癌に関連したガン細胞に関係する分子が含まれる。該細胞は、メラノーマ、唇、舌、口、咽頭、食道、胃、小腸、結腸、直腸、肝臓、膵臓、喉頭、肺、骨、結合組織、皮膚、胸部、子宮、卵巣、前立腺、精巣、膀胱、腎臓、眼、脳、中枢神経系、内分泌腺、血液及びリンパ組織、又は白血病である。本発明はまた、受容体分子を、他の異なった受容体分子の存在下で選択的に結合する合成レセプターに向けられる。本発明は更に、生物学的活性を示す適切な合成レセプターに対して合成レセプターライブラリーをアッセイする方法を提供する。該方法は、ａ）合成レセプターライブラリーを生成すること、ｂ）in situで合成レセプターライブラリーの適切な合成レセプターの生物学的活性を検出すること、ｃ）生物学的活性を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｄ）ステップｃ）で単離された適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを具備する。注目の生物学的活性は、例えば、細胞毒性、抗腫瘍活性、抗菌活性、抗ウイルス活性、抗真菌活性、抗寄生虫活性、成長因子活性、成長阻害活性、ホルモン活性、神経伝達物質活性、免疫調節活性、調節活性又は酵素活性である。上記アッセイにおいて、注目の活性は、ナノモル濃度で決定され、検出される合成レセプターは治療剤として、又は診断薬として使用されうる。更に、適切な合成レセプターは遷移状態の類似体に選択的に結合しうる。本発明の他の態様には、反応を触媒する適切な合成レセプターに対して合成レセプターライブラリーをアッセイするための方法が含まれる。該方法は、ａ）合成レセプターライブラリーを生成すること、ｂ）触媒された反応生成物が決定されるような基質を該合成レセプターライブラリーに導入すること、ｃ）触媒活性を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｄ）ステップｃ）で単離された適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを具備する。加えて、本発明は、酵素で触媒される反応を阻害する適切な合成レセプターに対して合成レセプターライブラリーをアッセイするための方法を提供する。該方法は、ａ）合成レセプターライブラリーを生成すること、ｂ）in situで注目の反応を触媒する酵素を合成レセプターライブラリーに導入すること、ｃ）insitu で注目の酵素触媒反応の適切な合成レセプターによって阻害を検出すること、ｄ）in situで注目の酵素触媒反応の阻害を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｅ）ステップｃ）で単離された適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを具備する。本発明はまた、薬物を検出するためのレセプターの使用及び禁制の薬物、即ち麻薬、蛋白同化の検出における使用に向けられる。本発明には、新規な合成レセプターを作成するための方法が含まれ、モノクローナル抗体に似た合成レセプターのライブラリーが開発される。ここで、合成レセプター分子は、ほとんどの何れかの所望の基質に選択的に結合する。組み合わせ合成を用いて、合成レセプターの広範なライブラリーが生成されうる。一度調製された合成レセプターライブラリーは、所望の特性を有する合成レセプターのメンバーに対するスクリーニングに使用されうる。合成レセプターのライブラリーは、組み合わせ技術を用いて合成されうる。合成レセプターライブラリーは、組み合わせ合成の何れかの公知の方法によって調製されうる(G .Jung and A.G．Beck-Sickinger，Angew．Chem．Int．Ed．Engl．1992，367-383 ，31; M.R．Pavia，T.K．Sawyer and W.H．Moos，Bioorg．Med．Chem．Lett.，1 993，387-396，3）。合成レセプターは下記の構造の１つを有する。この場合多官能性有機テンプレートは、である。合成レセプターのメンバーは以下の一般式（スキーム１）を有する。スキーム１：合成レセプターのメンバーに対する一般式ここで、Ｌは、オリゴマーであるＶ、Ｖ’等に化学的に結合された多官能性有機テンプレートである。スキーム１は一般式Ｌ−（−Ｖ^N）_Mのサブセットである。合成レセプターライブラリーは、種々の異なったオリゴマー、Ｖ、Ｖ’等の基を有するこのような合成レセプター分子の集まり（即ち、ライブラリー）より成る。幾つかの場合はには、多官能性有機テンプレートを固体支持体粒子（Ｐ）に、何れかの与えられた固体支持体粒子がこれに結合された唯一のタイプの合成レセプター（即ち、ライブラリーの１つのタイプの合成レセプターのメンバー）を有するように結合されることが望ましいであろう。スキーム２：合成レセプター分子に結合された固体支持体粒子その色、その蛍光、その放射性等によってナノモルレベルで検出が可能な注目の基質が調製されうる。このような検出可能な基質を標識された基質と称する。次に、合成レセプターライブラリーは、表記しされた基質と所望の相互作用を有するライブラリーのこれらのメンバーを検出するためにアッセイにかけられる。所望の相互作用が該基質への結合である場合、該合成レセプターライブラリーは、概評指揮された基質の溶液と混合され、該標識された基質に結合するこれらのライブラリーのメンバーが選別される。この手順は、構成ライブラリのメンバーがスキーム２に示すような固体支持体に結合されている場合には特に簡単である。この場合、標識された基質に結合するレセプターを有する固体支持体粒子は、色素又は蛍光又は放射性を（使用される標識の特性に依存して）蓄積する。使用される標識された基質の濃度に依存して、アッセイを何れかの所望の強さの結合を検出するように調製しうる。例えば、レセプターライブラリーの存在下で、標識された基質の量を調節し、１００μＭの濃度の遊離（未結合）の標識された基質が得られるならば、アッセイは（１００μＭ）^-1以上の結合定数（ｋ）でテンプレート−基質結合を検出できるのみであろう。所望の相互作用が化学反応を触媒する場合には、合成レセプターライブラリーを標識された基質の溶液と混合し、基質の反応生成物への変換を触媒するこれらのライブラリーのメンバーを選別する。触媒活性を有する合成レセプターライブラリーのメンバーに対する反応生成物の検出は、例えばＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）分析で決定される。次に、触媒活性を示す合成レセプターをライブラリーから単離する。一度所望の合成レセプターライブラリーのメンバーが上記のアッセイを用いて選別されれば、次に、合成レセプターの構造を決定する。選別された合成レセプターは、アフィニティークロマトグラフィーに使用されうる（Eveleigh，J.W．& Levy，D.E.、アガロースベースの免疫吸着剤の免疫学的特性及び分離への応用（Immunochemical characteristics and preparative application of agarose- based immunoosorbents）、J．Solid Biochem．（2）45-78，1977）。以下のカップリングゲルをアフィニティークロマトグラフィーに使用しうる。ＮＨＳ−活性化スペロース１２、活性化ＣＨセファロース４Ｂ、ＣＮＢｒ−活性化セファロース４Ｂ、ＥＣＨセファロース４Ｂ、エポキシ−活性化セファロース６Ｂ、ＥＡＨセファロース４Ｂ、アガロースアジピン酸ヒドラジド、チオプロピルセファロース６Ｂ及び活性化チオールセファロース４Ｂ（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジープロダクツカタログ１９９１、ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー、ピスカタウェイ、ＮＪ、７〜８頁）。ハイトラップＮＨＳ−活性化、ＣＮＢｒ− 活性化セファロース４Ｂ、アガロースアジピン酸ヒドラジド及びチオプロピルセファロース６Ｂのような追加のカップリングゲルがアフィニティークロマトグラフィーに使用しうる（アトラスオブプラクティカルピュリフィケーション：ニーズに合致したクロマトグラフイーメデイア、ファルマシアバイオテック、２４〜２５頁、３１）。テンプレート（Ｌ）は、種々のオリゴマー鎖が空間の近傍の領域に対して方向付けされるような方法で配向された構造の可動性及び機能性を制限することが望ましい。このような適切なテンプレートの幾つかの選択された例には、ステロイド性ジオール、トリオール及びアミンのような多官能性ステロイドが含まれる。オリゴマー鎖は、Ｖ又はＶ’で表される。これらの記号のうち、遊離のテンプレートライブラリーの場合には、Ｒは何れかの安定な有機官能基を表し（これはテンプレートの特性には重要でない。）、一方、固相支持されたライブラリーの場合には固体支持体の結合した官能基を表す。又はコール酸テンプレートコール酸は、三重鎖テンプレートに対する基盤（これは上記のＬＶＶ’Ｖ”の例である。）を形成しうる。上記のコール酸ベースのテンプレートでは、Ｄ−環側鎖は、固体支持体に該テンプレートを結合する適切な付属基として作用する。他のテンプレートでは、このような付属基は、存在し得ないが、三官能性物質を該テンプレート官能基の１つに付加することによってこのような基を導入しうる。この物質は、固体支持体（Ｒ）及び種々のオリゴマー（Ｖ、Ｖ’等）を結合するのに使用されうる２つの残りの基を提供する。硬直（rigid）な多官能性有機テンプレートを有することの効果は、以下に示されるＬｅｕエンケファリンに対して観測される結合によってうまく例示される。このペプチドステロイドレセプターライブラリーは、Ｋ_D-Max＝７５〜８５μ ＭでＬｅｕエンケファリンを結合する概算で３００の配列を有する。しかし、以下に示される硬直性の少ない例はＫ_D-Max＝２００μＭでＬｅｕエンケファリンを結合する概算で２０００の配列を有する。種々の非ステロイド性テンプレートも例えば大環状性のコアーを基にして合成レセプターライブラリーを製造するのに使用されうる。この構造は、一般に公知のテンプレートを基にしている（Yoon and Still，J.Am.Chem.Soc.，115，823， 1993）。一般に、テンプレートは、何れかのジ−、トリ−又はテトラ等の官能基化された有機構造であって、該官能基が種々のオリゴマー鎖（Ｖ、Ｖ’等）の結合を可能にするものを含む。種々のオリゴマー鎖（Ｖ、Ｖ’等）に対して、何れのオリゴマーも使用しうる。従って、Ｖ、Ｖ’等は、オリゴアミド、オリゴエステル、オリゴウレア、オリゴウレタン、オリゴエーテル、オリゴスルホンアミド、オリゴホスホンアミド、オリゴホスホネート、オリゴホスフェート等、並びに上記の官能基の混合物より成る混合オリゴマー化合物から成る。該鎖は、直鎖であっても、環状であっても又は枝分かれしていてもよく、環状及び非環状セグメントの両方を含みうる。分岐したオリゴマーを、よりタイトでより選択的な基質の結合を与えるべき広範な結合部位を生じさせるために使用しうる。オリゴマー化合物の配座として強固なフラグメント又はセグメントは、これらがテンプレートを予め組織化し、このためその選択性を増加する助けとなりので注目される。好ましい態様では、該オリゴマーは、ポリペプチド、シクロファン又はこれらの混合物である。議論したように、組合せ合成は、異なった多数の分子を含有するレセプターライブラリーを生じさせる好都合な方法である。これらの組合せ合成技術には、マルチ−ピン法(Geysen，H.M.；Meloen，R．and Barteling，S．Proc．Natl．Acad ．Sci．USA，1984，81，3998; Geysenet al.,Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A，1 985，82，178; WO 84/03564; WO 86/06487; PCT/AU85/00165(WO 86/00991)、米国特許第５，１３３，８６６)、ティーバッグ法(米国特許第４，６３１，２１１ ;Houghton et al.，Int．J．Peptide Protein Res.，1986，27，673; Houghton et al.， Biotechniques，1986，4，6，522; Houghton，R.A.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，19 85，82，5131; WO 92/09300; WO 92/09300）、セルロース−ペーパー法（Frank ，R．and Doering，R．Tetrahedron Lett.，1988，44，6031）、光指示(light-d irected)法(ＶＬＳＩＰＳ法とも言われる。Fodor，S.P.A.; Read,J.L.;Pirrung ，M.C.; Stryer，L.; Lu，A.T．and Solas，D．Science 1991，251，767,;米国特許第５，１４３，８５４;WO 90/15070;WO 92/10092)及びスプリット合成法(La m，K.; Salvon，S; Hersh，E.; Hruby，V.; Kazmierski，W．and Knapp，R．Nat ure，1991，354，82; WO 92/00091，WO 93/06121)が含まれる。しかし、スプリット合成法が、他の方法より優れている。これは、該方法が系統的な合成及び同定された構造のオリゴマーライブラリーのスクリーニングを含む手順を提供するためである。スプリット合成の手順には、数千から数十億の異なった分子より成る広範なオリゴマーライブラリーを作成することが含まれる。該分子は、ビーズのような粒子に結合され、各ビーズには単一のオリゴマー配列が含まれ、更に収集物は可能なランダムオリゴマー配列の多数の組合せを表す。「１つのビーズ、１つのオリゴマー配列」の概念は、合成の間にビーズを分子及び混合することによって容易に達成しうる。図２には、スプリット合成による、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）及びバリン（Ｖ）を含有する２７のトリペプチドの合成が示されている。合成の最後に、各ビーズは、特異的な反応順序で得られた１つの生成物のみを有する。各ビーズ上の生成物の量は、通常５０〜２００pmolであるから、このような少量の生成物の構造を解明することは、ヌクレオチド合成又は天然アミノ酸より成るペプチドの合成に対するスプリット合成を制限する。該スプリット合成法単独では非天然のモノマーを含有する他のライブラリーへのアクセスを提供する。構造解析の問題を解決するために、読み込み可能なタグ（オリゴヌクレオチドタグ又はペプチドタグ）を含めて合成し、各ライブラリーの要素の合成で使用される一連のステップ及び試薬をコードする（Brermer，S.and Lerner，R.A.Proc. Natl．Acad．Sci，USA，1992，89，5381; Kerr，J.M.: Banville，S.C．and Zuc kermarm，R.N．J．Am．Chem．Soc．1993，115，2529）。一度ライブラリーの要素が幾つかのアッセイによって選択されると、その構造は、そのペプチドタグ又はオリゴヌクレオチドタグをＰＣＲ増幅の後にシーケンシングすることによって同定されうる。上記のコード法の主な問題は、タグを付けるための構造が合成有機化学に通常関連した多くの試薬及び条件を化学的に受けやすく、これらによって破壊されることである。更に、オリゴヌクレオチド又はペプチドタグは、それ自身生物学的レセプターに結合され得、結合又は酵素アッセイを混乱させる。最近、他のコード法が分子タグを用いて開発された（M.J.H．Ohlmeyer，R.N.Swa nson，L.W.Dillard，J.C.Reader，G.Asouline，R.Kobayashi，M.Wigler and W.C .Still,（1993）Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90，10922-10926; WO 94/08051）。この技術は、高い選択性の化学的に不活性な分子タグ及びバイナリーコード系を使用する。この方法は、大量の化学的に異なったライブラリーを構成するための実用的な溶液を提供する。バイナリーコード系は、最小数のタグ分子を用いて最大量の情報をコードすることを可能にする。例えば、各ステップで７つの異なる試薬の何れかを用いる簡単な組合せ合成が行われる。これらの７つの異なった試薬は、試薬に対してタグ１、試薬２に対してタグ２、試薬３に対してタグ１及びタグ２、．．．．．、試薬７に対してタグ１、タグ２及びタグ３の様にバイナリーコード系を介して３つのタグ分子によって指定されうる。この後者の表現は、００１（試薬１）、０１０（試薬２）、０１１（試薬３）、．．．．．、１１１（試薬７）の様にバイナリー数値表現に簡単に翻訳されうる。該バイナリーコード系は、ライブラリー内の７^Nの異なった最終生成物をコードするのに３Ｎのタグ分子のみを必要とする。ここで、Ｎはライブラリーの合成のための化学的ステップの数である。使用されるタグ分子を以下に示す。スキーム３：タグ化分子の構造分子タグは、炭化水素の長さの違い（ｎ＝０〜１０）、及び３種類の異なったエレクトロフォア（electrophore）（Ａｒ）によって変化する。光開裂可能なリンカー（Patchornik，A.; Amit，B．and Woodward，R.B.J.Am.Chem.Soc．1970， 92，6333）では、エレクトロフォア様のタグは、３２０nm以上の波長の光を照射することによって、固体支持体から容易に遊離されうる。次に、遊離されたアルコールを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中でＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドによりシリル化する。得られたシリルエーテルは、キャピラリーＧＣでよく分離され、ＥＣ（電子捕捉）により＜１pmolのレベルで選択的に検出される。２０以上のタグ化分子が調製され、これらは、２²⁰の異なった合成までのコードを可能にする。上記のバイナリーコード系及びタグ化分子を用いて、１０，０００〜２０，０００のレセプターのメンバーより成る２つの異なったレセプターライブラリーが調製されている。標識された基質（下記参照）での色スクリーニングを介して、エンケファリンに対する抗体の類似体、即ち「合成抗体」としてライブラリーから得た幾つかの合成レセプター分子を選択することができる。これは概念的には以下のように表される。結合定数は、受容体に対する生成自由エネルギーΔＧが５Kcal/molから１２Kc al/molであることが望ましい。幾つかの場合には、好ましい生成自由エネルギー ΔＧは、９Kcal/molから１２Kcal/molであり得、他の場合には、ΔＧは８Kcal/m olから15Kcal/molであることが望ましい。ダブルアーム化したペプチドステロイド性レセプターライブラリー(Boyce，Li ，Nestler，Suenaga and Still，J．Am．Chem．Soc.，1994，116，7955）の合成の一部として、シングルアーム化したペプチドステロイド性レセプターライブラリーを先に示したように調製した。ＡＡ１及びＡＡ２で１０の異なったアミノ酸が使用され、１００の異なったレセプターを生じる。該ライブラリーがＤｉｓｐｅｒｓｅＲｅｄで着色されたＬｅｕエンケファリンで処理された場合、結合は見出されなかった。以下の詳細な例は、本発明の理解を助けるための説明であり、以下に添付したクレームにおいて説明する本発明を何れの方法によっても制限することを意図するものではなく、またこのように解するべきではない。例１一般的手順固体支持体上の反応は全て、メリーフィールド反応容器内で行った。該反応容器は、使用する前に、トルエン中室温で１時間１０％トリメチルシリルクロライドで処理することによってシリル化し、次いで洗浄及び乾燥した。ビューレルリストアクションシェーカーを反応容器を振蘯するために使用した。無水溶媒を反応に使用した。該溶媒は蒸留するか、又はアルドリッチＩｎｃから購入した。ビーズを洗浄するためにしようした溶媒は試薬等級である。ビーズの光分解は、ＭｅＯＨ又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中で、モデルＵＶＬ−５６（ＵＶＰ、Ｉｎｃ．、サンガブリエル、ＣＡ）ウルトラバイオレットランプを用いて、３６６nmのＵＶ光下でビーズを照射することによって行った。アミノメチル樹脂は、バルケムＩｎｃ．（Balchem，Inc.）（２００〜４００メッシュ、０．６mmol/g ）又はシグマＩｎｃ．（１００〜２００メッシュ、１．１mmol/g¹⁸）から購入した。ライブラリーの合成をコードするために使用されるタグ分子は、スキーム３に示されている。これらは、Ｃ_n、２、４、５Ｃｌ₃、Ｃ_n、２、４、６Ｃｌ₃及びＣ_n 、Ｃｌ₅の様に単純に記した。これらはそれぞれ、２，４，５−トリクロロフェニル、２，４，６−トリクロロフェニル及びペンタクロロフェニル基を表す。以下のライブラリーの合成のために使用されるアミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、リジン、アスパラギン酸及びグルタミン酸である。アラニン、バリン、ロイシン、フェニルアラニン及びプロリンは、α−アミノ基用の９−フルオレニルメチルオキシカルボニル及び側鎖保護のためのｔ−ブチルを有する。リジンは、α−アミノ基用の９ −フルオレニルメチルオキシカルボニル及びξ−アミノ基のためのｔ−ブチルオキシカルボニルによって保護される。溶液の合成の間、反応の進行は反応混合物をＴＬＣでチェックすることによって容易にモニターされる。しかし、固相合成の間には、ペプチド生成以外の反応はほとんどモニターできない。固相合成は、通常大過剰の反応剤を使用することが必要であり、出発物質を生成物に変換するのに複数回のカップリングが必要である。従って、反応をモニターするための検出ツールがないこと、及び合成の間に大過剰の試薬を使用する必要があることから、溶液内よりも固体支持体上で選択的な機能化を行うことが非常に困難である。固体支持体上で、ペプチド生成以外の反応をモニターするために、「検出可能な固相合成」法を開発した。これは図３に示されている。テンプレートと固体支持体の間に光感受性リンカーを導入することによって反応を、光分解によってビーズから遊離された遊離の生成物の核磁気共鳴（スペクトル法）によってモニターすることができる。検出可能なビーズの合成は以下に示される。Ｇｌｙ−ライブラリーは、バケムＩｎｃ．（Bachem Inc.）から購入したアミノメチル樹脂（２００〜４００メッシュ、０．６mmol/g）上に構築された。Ｐｒｏ−ライブラリーは、シグマＩｎｃ．から購入したアミノメチル樹脂（１００〜２００メッシュ、０．９mmol/g）上に構築された。略称の一覧表ＡＡアミノ酸ＡｃアセチルＡｃ₂Ｏ無水酢酸Ａｌａアラニンａｑ．水性Ａｓｐアスパラギン酸ａｔｍ．大気圧９−ＢＢＮ９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナンＢｏｃ tert−ブトキシカルボニルｎ−Ｂｕｎ−ブチルｔ−Ｂｕ tert−ブチルｃａｔ．触媒量ＣＳＡカンファースルホン酸ＤＣＣジシクロヘキシルカルボジイミドＤＥＴ酒石酸ジエチルＤＩＡＤジイソプロピルアゾジカルボキシレートＤＩＢＡＨ水素化ジイソブチルアルミニウムＤＩＰＥＡジイソプロピルエチルアミンＤＩＰＴ酒石酸ジイソプロピルＤＭＡＰ４−ジメチルアミノピリジンＤＭＦＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドＤＭＳＯジメチルスルホキシドＥＣ電子補足（検出）ＥＤＣＮ−エチル−Ｎ¹−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドｅｅエナンチオマー過剰量ｅｑ．等量ＥｔエチルＥｔＯＡｃ酢酸エチルＥｔＯＨエタノールＦＭＯＣ９−フルオレニルメチルオキシカルボニルＧＣガスクロマトグラフィーＧｌｕグルタミン酸ｈ時間ＨＯＡｃ酢酸ＨＯＢＴ１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＨＭＰＡヘキサメチルホスホリックトリアミドｈν 光ｉ−Ｐｒイソプロピルｉ−ＰｒＯＨ２−プロパノールＬＡＨ水素化アルミニウムリチウムＬＤＡリチウムジイソプロピルアミドＬｅｕロイシンＬｙｓリジンＭＣＰＢＡｍ−クロロ過安息香酸ＭｅメチルＭｅＯＨメタノールＭｅＣＮアセトニトリルｍｏｌモルｍｐ融点Ｍｓメシル（メタンスルホニル）ＮＭＯＮ−メチルモルホリンＮ−オキシドＮＭＲ核磁気共鳴（スペクトル法） −−Ｐアミノメチル樹脂支持体ＰｈフェニルＰｈｅフェニルアラニンＰｒｏプロリンｐｙピリジンｒ．ｔ．室温ＴＢＤＭＳ tert−ブチルジメチルシリルＴＥＡトリエチルアミンＴＦＡトリフルオロ酢酸ＴＨＦテトラヒドロフランＴＨＰテトラヒドロピランＴｈｒスレオニンＴＬＣ薄層クロマトグラフィーＴＭＳトリメチルシリルＳｅｒセリンＶａｌバリンｕｖ紫外線（スペクトル法）検出可能なビーズの合成 α−ブロモ−ｐ−トルイル酸（２１.５ｇ、１００mmol）を、等量づつ５回に分けて９０％ＨＮＯ₃（２５０mL）に−１０℃で加えた。反応混合物を−１０℃ で３時間撹拌し、氷−水にあけた。３時間室温で撹拌した後、白色の沈殿を濾過して集め、空気で一夜乾燥して、オルト−ニトロ α−ブロモ−ｐ−トルイル酸（２２.２ｇ、８５％）を僅かに黄色の固体として得た。炭酸カリウム水溶液（３５.０ｇ、２００mLの水）へ、オルト−ブロモ−ｐ− トルイル酸（１３.１ｇ、５０mmol）を加えた。均一な溶液を室温で一夜撹拌し、次いで、０℃に冷却した。濃ＨＣｌをＰＨ＝１になるまで加えた。得られた白色沈殿を濾過して集め、空気中で乾燥して２を白色の固体（８.９ｇ、９５％mmo l）として得た。濾液を酢酸エチルで三回抽出した。抽出物を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過し、濃縮して、更に２を僅かに黄色の固体（１.０ｇ、５％）として得た。¹ H NMR（CD₃OD）4.98(s，2H)，7.96(d，1H，J=8.12Hz)，8.25(dd，1H，J=1.72， 8.16Hz)，8.56(d，1H，J=1.64Hz)．¹³ C NMR(CD₃OD)61.85，126.56，129.70，131.96，135.11，143.94，148.29，167 .39. IR（KBr）3450，2953，1726，1152，1080cm^-1．オルトニトロ α−ヒドロキシｐ−トルイル酸（９.９ｇ、５０mmol）のアリルアルコール（２００mL）溶液にｐ−ＴｓＯＨＨ₂Ｏ（８５０mg、５mmol）を加えた。混合物を２４h還流し、乾燥するまで濃縮した。次に、得られた残渣を５００mLの酢酸エチルに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。酢酸エチルを除去し、ＭｅＯＨから再結晶して、アリルエステル３を僅かに黄色い固体（９.３ｇ、９５％）として得た。¹ H NMR(CDCl₃)2.61(bs．1H)，4.86(dt，2H，J=5.84，1.40Hz)，5.07(s，2H)，5. 33(dd，1H，J=10.4，1.28Hz)，5.43(dd，1H，J=17.24，1.48Hz)，6.21(ddt，1H ，J=5.76，10.44，17.24Hz)，7.92(d，1H．J=8.08Hz)，8.31(dd，1H，J=1.64，8 .08Hz)，8.72(d，1H，J=1.60Hz)．¹³ C NMR（CDCl₃）61.94，66.30，118.99，125.89，129.49，130.67，131.58，13 4.27，141.54，147.66，164.04. IR（KBr）3500，3089，2946，1726，1649，1622，1537，1492，1406，1281，125 3，1189，1151，1125，1080，1049，974，853，832，774cm^-1 ケノデオキシコール酸（３.４９ｇ、１０mmol）及びオルトニトロ α−ヒドロキシｐ−トルイル酸（２.４ｇ、１０mmol）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５０mL）溶液へ、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジエチルアミノプロピル）カルボジイミド（２.９ｇ、１５mmol）及び４−ジメチルアミノピリジン（１２０mg、１mmol）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。この後、反応混合物を２００mLの酢酸エチルで希釈し、１ＮＨＣｌで２回、飽和食塩水で１回洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、減圧下に濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにかけ、所望の生成物４を白色の発泡性固体(５.３ｇ、８７％、Ｒ_f＝０.７５、ＥｔＯＡｃ中２５％ヘキサン)として得た。¹ H NMR（CDCl₃）0.65(s，3H)，0.89(s，3H)，0.94(d，3H，J=6.24Hz)，0.96-2.0 5(m，25H)，2.19(dt．1H，J=12.8，12.8Hz)，2.35(m，1H)，2.47(m，1H)，3.45( m，1H)，3.84(m，1H)，4.86(d，2H，J=5.76Hz)，5.33(d，1H，J=10.36Hz)，5.42 (dd，1H，J=17.16，1.28Hz)，5.55(s，2H)，6.03(ddt，1H，J=5.76，10.52，17. 12Hz)，7.69(d，1H，J=8.12Hz)，8.30(dd，1H，J=1.6，8.12Hz)，8.74(d，1H，J =1.6Hz)．¹³ C NMR（CDCl₃）11.77，18.27，20.62，2.74，23.67．28.09，30.75，31.02，3 2.94，34.76，35.07，35.29，35.40，39.53，39.71，39.96，41.60，42.73，50. 50，55.86，62.38，66.35，68.43，71.95，119.07，126.01，129.20，131.19，1 31.56，134.01，136.83，147.84，163.80，173.22． IR（KBr）3500，3089，2945，1726，1649，1622，1537，1492，1406，1348，115 1，1080，1049，974，743cm^-1．アリルエステル４（３.０ｇ、４.９mmol）及びＰｄ（ＰＰｈ₃）₄（１１５mg、０.１mmol）を１５mLのＣＨ₂Ｃｌ₂中で０℃に冷却した。ピロリジン（８４０μ Ｌ、１０mmol）の２mL ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液を滴下した。反応混合物を０℃で４５分撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（２００mL）及び１ＮＨＣｌ（５０mL）を加えた。有機層を飽和食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過し、濃縮して遊離の酸を僅かに黄色の固体として得た。５０mLの反応容器内の予め膨張させたアミノメチル樹脂（３.０g、０.６mmol/ g）へ、先の遊離の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（６７５mg、５mmol）及びＤＩＣ（６６０μＬ、４.５mmol）の３０mL ＤＭＦ溶液を加えた。反応混合物を、カイサー（Kaiser）試験が反応の完了を示すまで室温で６〜８ｈ室温で振蘯した。試薬を濾過し、ビーズを３×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、３×ｉ−ＰｒＯＨ、及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂で洗浄し、次いで、乾燥して検出しうるビーズ５（４.０ｇ）を得た。上記のビーズ（５）（４０mg）及び５００μＬのＣＨ₃ＯＨを１mLの蓋をした試験管中、紫外光下、室温で１２時間紫外線を照射した。ビーズを濾過し、濾液を濃縮して白色の固体を得た。この白色固体のＮＭＲスペクトルは、ケノデオキシコール酸のみが形成されていることを示した。検出可能なビーズ５（２００mg、０.９mmol）へ、ジイソプロピルエチルアミン（１００μＬ、０.６mmol）の１mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加え、次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−ＧｌｙＦ（１３５mg、０. ４５mmol）の１mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加えた。室温で３時間振蘯した後、試薬を濾過し、ビーズをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５mL）で一回洗浄した。得られたビーズを、同じ条件でジイソプロピルアミンと９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−ＧｌｙＦのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で二回再処理し、次いで３×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ₃− ＯＧｌｙ−９−フルオレニルメトキシカルボニル，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。上記のビーズに、１：１Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ピペリジン（５mL ）を加えた。反応容器を室温で３０分振蘯し、次いでビーズを４×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄し、次いでＨＯＡｃ（２７μＬ、０.４５mmol）、１− ヒドロキシベンゾトリアゾール（６８mg、０.５mmol）及びＤＩＣ（７０μＬ、０．４５mmol）の２mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で処理した。反応混合物を、カイサー（Kaiser）試験が反応の完了を示すまで２時間振蘯した。次に、ビーズを２×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（５mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（５mL、各２分）で徹底的に洗浄し、次いでポンプで乾燥してビーズ９を得た。蓋をした１mLの試験管中で、得られたビーズ９（4０〜５０mg）及び５００μ ＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを１２時間紫外光下に置いた。該ビーズを濾過し、濾液を濃縮して白色の固体として１０を得た。１０のＮＭＲスペクトルは、Ｃ₃−ＯＨとＣ₇−ＯＨのエステル化の選択性が１９：１であることを示した。検出可能なビーズ５（２００mg、０.０９mmol）へ、ジイソプロピルエチルアミン（１１０μＬ、０.６mmol）の１mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加え、次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−ＧｌｙＦ（１３５mg、０ .４５mmol）の１mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加えた。室温で３時間振蘯した後、試薬を濾過し、ビーズをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５mL）で一回に洗浄した。得られたビーズを同じ条件下で、ジイソプロピルエチルアミン及び９−フルオロレニルメチルオキシカルボニル−ＧｌｙＦのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で２回再処理し、次いで、３×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ₃−ＯＧｌｙ−９−フルオレニルメトキシカルボニル，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。上記のビーズに、１：１Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ピペリジン（５mL ）を加え、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−保護基を除去した。反応容器を室温で３０分振蘯し、次いでビーズを４×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄し、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−フェニルアラニン（９７ mg、０.２５mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３５mg、０.２５mmol ）及びＤＩＣ（４０μＬ、０.２５mmol）の２mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で処理した。反応混合物を、カイサー（Kaiser）試験が反応の完了を示すまで３時間振蘯した。次に、ビーズを２×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（５mL、各２分）で徹底的に洗浄し、Ｃ₃−ＯＧｌｙフェニルアラニン−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。上記のビーズに、１：１Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ピペリジン（５mL ）を加えた。室温で３０分振蘯し、次いでビーズを４×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄し、次いでＨＯＡｃ（２７μＬ、０.４５mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３５mg、０.２５mmol）及びＤＩＣ(７０μＬ、０.４５mmo l)の２mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液で処理した。反応混合物を、カイサー（Kaiser）試験が反応の完了を示すまで２時間振蘯した。次に、ビーズを２ ×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（５mL、各２分）で徹底的に洗浄し、Ｃ₃−ＯＧｌｙフェニルアラニンＡｃ，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。上記のビーズに、ジイソプロピルエチルアミン（１１０μＬ、０.６mmol）及び４−ジメチルアミノピリジン（１１mg、０.０９mmol）の１mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加え、次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニル− ＧｌｙＦ（１３５mg、０.４５mmol）の１mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加えた。室温で１ｈ振蘯した後、試薬を濾過し、ビーズをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ml）で一回洗浄した。得られたビーズを、同じ条件で、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン及び９−フルオロレニルメチルオキシカルボニル−ＧｌｙＦのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで２回再処理し、次いで３×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（５mL、各２分）及び５ＣＨ₂Ｃｌ₂（５mL、各２分）で洗浄し、次いでポンプで乾燥してビーズ１１を得た。蓋をした１mLの試験管中で、得られたビーズ９（４０〜５０mg）及び５００μ ＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを１２時間紫外光下に置いた。該ビーズを濾過し、濾液を濃縮してワックス状の固体として１２を得た。１２のＮＭＲスペクトルは、全部がＣ₇−ＯＨのアシル化であることを示した。Ｇｌｙ−ライブラリーの合成３ｇのアミノメチル樹脂（１.８mmol，０.６mmol/g）を含有する５０mLの反応容器へ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（６７５mg、５.０mmol）、ＤＩＣ（６６０μＬ、４.５mmol）及びケノデオキシコール酸（１.８ｇ、４.５mmol）の３０mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加えた。反応混合物を室温で６〜８時間振董した。カイサー試験でカップリング反応の完了が示されたら、反応容器内のビーズをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで２回（各３０mL）、ＣＨ₂Ｃｌ₂で３回（各３０mL）洗浄し、乾燥した。上述のケノデオキシコール酸ビーズに、ジイソプロピルアミン（２.１mL、１２mmol）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０mL）溶液を加え、次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−ＧｌｙＦ（２.７ｇ、９mmol）の１０mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を加えた。室温で３時間振蘯した後、溶媒と試薬を濾過し、ビーズをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで一回洗浄した。得られたビーズを、同じ条件でジイソプロピルエチルアミン及び９−フルオレニルメチルオキシカルボニルで２回再処理し、次いで３×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２×ｉ−ＰｒＯＨ及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂で洗浄し、次いでポンプで乾燥してＣ₃− ＯＧｌｙ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル，Ｃ₇−ＯＨビーズ（４.２ｇ、わずかに黄色のビーズ）を得た。上述の樹脂を等量づつ１０に分配したもの（４００mg〜０.１８mmol）を１、２、３、．．．、１０のラベルを付した１０個の反応容器に入れた。この分配した各ビーズを室温において１：１Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ピペリジン（１０mL）で３０分処理し、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル保護基を除去した。ビーズを４×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄し、タグ分子（１. ８×１０^-3mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１３mg、０.０９mmol 、５０ｅｑ．）及びＤＩＣ（１４μＬ、０.０９mmol、５０ｅｑ．）の４mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を以下の要領で各反応容器に加えた。１２時間暗所、室温で振蘯した後、各反応容器内のビーズを４×ＣＨ₂Ｃｌ₂（各１０mL）で洗浄した。９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−アミノ酸（０.５mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（７０mg、０.５mmol）及びＤＩＣ（８０μＬ、０.５mmol）の４mL Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を各反応容器に以下のように加えた。各反応容器内の樹脂のカイサー試験が負となるのは通常室温で３時間である。次に、１０個の反応容器内のビーズを５０mLの反応容器内で合わせ、２×Ｎ，Ｎ −ジメチルフォルムアミド（３０mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（３０mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（３０mL、各２分）で洗浄し、乾燥して、Ｃ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。第二のステップＡＡ₂は、上記Ｃ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＦＭＯＣ，Ｃ₇−ＯＨビーズを等量づつ１０に分配することから始めた。ラベル化及びカップリング条件は、実質的に第一のＡＡ₁と同じである。第二のステップの合成をコードするのに使用するタグ分子を以下の一覧表に示した。ラベル化、カップリング及び洗浄のサイクルの後、Ｃ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＡＡ₂ ＦＭＯＣ，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。上述のＣ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＡＡ₂ＦＭＯＣ，Ｃ₇−ＯＨビーズを１：１ＤＭＦ／ピペリジン（３０mL）で処理し、ＦＭＯＣ−基を除去した。３０分室温で振蘯した後、該ビーズを４×ＤＭＦで洗浄し、ＨＯＡｃ（５３０μＬ、９mmol）、ＨＯＢＴ（１.３５g、１０mmol）及びＤＩＣ（１.４mL、９mmol）の３５mL ＤＭＦ溶液で処理した。反応混合物をカイサー試験が反応の完了を示すまで２ｈ振蘯した。次に、ビーズを２×ＤＭＦ（３０mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（３０mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（３０mL、各２分）で徹底的に洗浄し、次いで乾燥してＣ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７−ＯＨビーズを得た。上述のビーズへＤＩＰＥＡ（２.１mL、１２mmol）及びＤＭＡＰ（２２０mg、１.８mmol）の２０mL ＤＭＦ溶液を加え、次にＦＭＯＣ−ＧｌｙＦ（２.７ｇ、９mmol）の１５mLＤＭＦ溶液を加えた。室温で１時間振蘯した後、試薬を濾過し、ビーズをＤＭＦ（３０mL）で一回洗浄した。得られたビーズを、同じ条件でＤＩＰＥＡ、ＤＭＡＰ及びＦＭＯＣ−ＧｌｙＦのＤＭＦ溶液で２回再処理し、次いで３×ＤＭＦ、３×ｉ−ＰｒＯＨ及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂で洗浄し、次いで乾燥してＣ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７−ＯＧｌｙＦＭＯＣビーズを得た。第三のステップＡＡ₃はまた、上記のＣ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７−ＯＧｌｙＦＭＯＣビーズを等量づつ１０に分配することから開始される。ラベル付け、及びカップリング条件は、実質的に第一のステップと同様である。第三のステップの合成をコードするのに使用されるタグ分子は以下に一覧表として示した。ラベル化、カップリング及び洗浄のサイクルの後、Ｃ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＡＡ₂ Ａｃ，７−ＯＧｌｙＡＡ₃ＦＭＯＣビーズを得た。第四のステップＡＡ₄のラベル付け、及びカップリング条件は、実質的に先のステップと同様である。合成の最後でまた、Ｃ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７ −ＯＧｌｙＡＡ₃ＡＡ₄ＦＭＯＣを得た。このステップで使用されるタグ分子は以下に一覧表として示した。上述のＣ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７−ＯＧｌｙＡＡ₃ＡＡ₄ＦＭＯＣビーズへ１：１ＤＭＦ／ピペリジン（３０mL）を加え、ＦＭＯＣ−基を除去した。反応混合物を、３０分室温で振蘯し、次いでこのビーズを４×ＤＭＦで洗浄し、ＨＯＡｃ（５３ＯμＬ、９mmol）、ＨＯＢＴ（１.３５ｇ、１０mmol）及びＤＩＣ（１.４mL、９mmol）の３５mL ＤＭＦ溶液で処理した。反応混合物をカイサー試験が反応の完了を示すまで２ｈ振蘯した。次に、ビーズを２×ＤＭＦ（３０mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（３０mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（３０mL、各２分）で徹底的に洗浄し、次いで乾燥して保護されたＧｌｙ−ライブラリーを得た。保護されたＧＬｙ−ライブラリー得られたＣ₃−ＯＧｌｙＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，Ｃ₇−ＯＧｌｙＡＡ₃ＡＡ₄Ａｃビーズ（１.０ｇ）へ、２５％ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（２０mL）を加えた。反応容器を室温で１ｈ振蘯し、ビーズを４×ＣＨ₂Ｃｌ₂、３×ｉ−ＰｒＯＨ及び５×ＣＨ₂ Ｃｌ₂で洗浄し、乾燥して脱保護されたＧｌｙ−ライブラリーを得た。Ｐｒｏ−ライブラリーの合成検出可能なビーズ５（２２０mg、０.１３mmol）へ、ＤＩＰＥＡ（３５０μＬ、２.０mmol）及びテトラゾール（１４０mg、２.０mmol）の３mL ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液を加え、次いでＬ−ＰｒｏＣｌ（３６０mg、１.００mmol）の１mL ＣＨ₂Ｃｌ₂ 溶液を加えた。室温で１２時間振蘯した後、試薬を濾過し、ビーズを４×ＣＨ₂ Ｃｌ₂（５mL、各２分）で洗浄し、ついで乾燥した。上記のビーズに、１：１ＤＭＦ／ピペリジン（５mL）を加えた。反応容器を室温で３０分振蘯し、次いでビーズを４×ＤＭＦで洗浄し、ＨＯＡｃ（３９μＬ、０.６５mmol）、１−ＨＯＢＴ（８８mg、０.６５mmol）及びＤＩＣ（１００μ Ｌ、０.６５mmol）の４mL ＤＭＦ溶液で処理した。反応混合物を、カイサー試験が反応の完了を示すまで２時間振蘯した。次に、ビーズを２×ＤＭＦ（５mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（５mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（５mL、各２分）で徹底的に洗浄し、次いでポンプで乾燥してビーズ１３を得た。蓋をした１mLの試験管中でビーズ１３（２５mg）及び５００μＬのＣＨ₃ＯＨを１２時間ＵＶ光下に置いた。ビーズを濾過し、濾液を濃縮して白色の固体として１４を得た。１４のＮＭＲスペクトルは、Ｃ₃−ＯＨとＣ₇−ＯＨのエステル化の選択性が２５：１であることを示した。検出可能なビーズ５（２２０mg、０.１３mmol）へ、ＤＩＰＥＡ（３５０μＬ、２.０mmol）及びテトラゾール（１４０mg、２.０mmol）の３mL ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液を加え、次いでＤ−ＰｒｏＣｌ（３６０mg、１.００mmol）の１mLＣＨ₂Ｃｌ₂ 溶液を加えた。室温で６時間振蘯した後、試薬を濾過し、ビーズを４×ＣＨ₂Ｃｌ₂（５mL、各２分）、２×ＣＨ₃ＯＨ（５mL、各２分）及び４×ＣＨ₂Ｃｌ₂（５ mL、各２分）で洗浄し、ついで乾燥した。上記のビーズに、１：１ＤＭＦ／ピペリジン（５mL）を加えた。反応容器を室温で３０分振蘯し、次いでビーズを４×ＤＭＦで洗浄し、ＨＯＡｃ（３９μＬ、０.６５mmol）、１−ＨＯＢＴ（８８mg、０.６５mmol）及びＤＩＣ（１００μ Ｌ、０.６５mmol）の４mL ＤＭＦ溶液で処理した。反応混合物を、カイサー試験が反応の完了を示すまで２時間振蘯した。次に、ビーズを２×ＤＭＦ（５mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（５mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（５mL、各２分）で徹底的に洗浄し、次いでポンプで乾燥してビーズ１５を得た。蓋をした１mLの試験管中でビーズ１５（２５mg）及び５００μＬのＣＨ₃ＯＨを１２時間ＵＶ光下に置いた。ビーズを濾過し、濾液を濃縮して白色の固体として１６を得た。１６のＮＭＲスペクトルは、Ｃ₃−ＯＨとＣ₇−ＯＨのエステル化の選択性が２０：１であることを示した。２ｇのアミノメチル樹脂（１.８mmol、０.９mmol/g）を含有する５０mLの反応容器へ、ＨＯＢＴ（６７５mg、５.０mmol）、ＤＩＣ（６６０μＬ、４.５mmol）及びケノデオキシコール酸（１.８ｇ、４.５mmol）の３０mL ＤＭＦ溶液を加えた。反応混合物を室温で６.８時間振蘯した。カイサー試験でカップリング反応の完了が示されたら、反応容器内のビーズを２×ＤＭＦ（３０mL、各２分）、３ ×ｉ−ＰｒＯＨ（３０mL、各２分）、５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（３０mL、各２分）で洗浄し、乾燥してケノデオキシコール酸ビーズ（２.７ｇ）を得た。上述の樹脂を等量づつ２つに分配したもの（１.３ｇ、０.９mmol）をＡ及びＢのラベルを付した２個の反応容器に入れた。反応容器Ａ内のビーズをＤＩＰＥＡ（２.４mL、１４mmol）及びテトラゾール（９８０mg、１４mmol）の２０mL ＣＨ₂ Ｃｌ₂溶液で処理し、Ｌ−ＰｒｏＣｌ（２.４ｇ、７mmol）の１０mL ＣＨ₂Ｃｌ₂ 溶液を加えた。室温において１２時間振蘯した後、ビーズを３×ＣＨ₂Ｃｌ₂、２ ×ｉ−ＰｒＯＨ及び４×ＣＨ₂Ｃｌ₂で徹底的に洗浄し、乾燥した。得られたビーズを、等量（１５０mg、〜０.０９mmol）づつ１０に分配し、１０個の反応容器に入れた。該容器に１、２、３、．．．、１０のラベルを付した。この分配した各ビーズを室温において１：１ＤＭＦ／ピペリジン（１０mL）で３０分処理し、ＦＭＯＣ保護基を除去した。ビーズを４×ＤＭＦで洗浄した後、タグ分子（０ .９×１０^-3mmol）、ＨＯＢＴ（９.５mg、０.０７mmol、７５ｅｑ．）及びＤＩＣ（１１μＬ、０.０７mmol、７５ｅｑ．）の４mL ＤＭＦ溶液を以下の要領で各反応容器に加えた。１２時間暗所、室温で振蘯した後、各反応容器内のビーズを４×ＣＨ₂Ｃｌ₂（各１０mL）で洗浄し、ＦＭＯＣ−ＡＡ（０.２５mmol）、ＨＯＢＴ（３５mg、０. ２５mmol）及びＤＩＣ（４０μＬ、０.２５mmol）の４mL ＤＭＦ溶液を各反応容器に以下のように加えた。各反応容器内の樹脂のカイサー試験が負となるのは通常室温で３時間である。次に、１０個の反応容器内のビーズを５０mLの反応容器内で合わせ、２×ＤＭＦ（３０mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（３０mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂ （３０mL、各２分）で洗浄し、乾燥して、Ｃ₃−Ｏ−Ｌ−ＰｒｏＡＡ₁ＦＭＯＣ，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。反応容器Ｂ内のビーズをＤＩＰＥＡ（２.４mL、１４mmol）及びテトラゾール（９８０mg、１４mmol）の２０mL ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液で処理した。室温において６時間振蘯した後、ビーズを３×ＣＨ₂Ｃｌ₂、２×ｉ−ＰｒＯＨ及び４×ＣＨ₂Ｃｌ₂で徹底的に洗浄し、乾燥した。得られたビーズを、等量（１５０mg、〜０.０９mmol）づつ１０に分配、１０個の反応容器に入れた。該容器に１、２、３、...、１０のラベルを付した。この分配した各ビーズを室温において１：１ＤＭＦ／ピペリジン（１０mL）で３０分処理し、ＦＭＯＣ保護基を除去した。ビーズを４ ×ＤＭＦで洗浄した後、タグ分子（１０.９×１０^-3mmol）、ＨＯＢＴ（９.５mg 、０.０７mmol、７５ｅｑ.）及びＤＩＣ（１１μＬ、０.０７mmol、７５ｅｑ.）の４mL ＤＭＦ溶液を以下の要領で各反応容器に加えた。１２時間暗所、室温で振蘯した後、各反応容器内のビーズを４×ＣＨ₂Ｃｌ₂（各１０mL）で洗浄し、ＦＭＯＣ−ＡＡ（０.２５mmol）、ＨＯＢＴ（３５mg、０. ２５mmol）及びＤＩＣ（４０μＬ、０.２５mmol）の４mL ＤＭＦ溶液を各反応容器に以下のように加えた。各反応容器内の樹脂のカイサー試験が負となるのは通常室温で３時間である。次に、１０個の反応容器内のビーズを５０mLの反応容器内で合わせ、２×ＤＭＦ（３０mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（３０mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂ （３０mL、各２分）で洗浄し、乾燥して、Ｃ₃−Ｏ−Ｄ−ＰｒｏＡＡ₁ＦＭＯＣ，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。次に、上述のＤ及びＬ−Ｐｒｏビーズを単一の反応容器内で合わせた。３０mL のＣＨ₂Ｃｌ₂に懸濁された該合わされたビーズを室温で３０分振蘯した。溶媒を濾過し、ビーズを乾燥してＣ₃−Ｏ−ＤＬ−ＰｒｏＡＡ₁ＦＭＯＣ，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。このステップの合成に使用されるタグは、以下のものである。第二のステップＡＡ₂は、上記Ｃ₃−Ｏ−ＬＤ−ＰｒｏＡＡ₁ＦＭＯＣ，Ｃ₇−ＯＨビーズを等量づつ１０に分配することから始めた。ラベル化及びカップリング条件は、実質的に第一のＡＡ₁と同じである。第二のステップの合成をコードするのに使用するタグ分子を以下の一覧表に示した。この分配した各ビーズを室温において１：１ＤＭＦ／ピペリジン（１０mL）で３０分処理し、ＦＭＯＣ保護基を除去した。ビーズを４×ＤＭＦで洗浄した後、タグ分子（１.８×１０^-3mmo l）、ＨＯＢＴ（１３mg、０.０９mmol、５０ｅｑ.）及びＤＩＣ（１４μＬ、０. ０９mmol、５０ｅｑ.）の４mL ＤＭＦ溶液を以下の要領で各反応容器に加えた。１２時間暗所、室温で振蘯した後、各反応容器内のビーズを４×ＣＨ₂Ｃｌ₂（各１０mL）で洗浄した。ＦＭＯＣ−ＡＡ（０.５mmol）、ＨＯＢＴ（７０mg、０. ５mmol）及びＤＩＣ（８０μＬ、０.５mmol）の４mL ＤＭＦ溶液を各反応容器に以下のように加えた。各反応容器内の樹脂のカイサー試験が負となるのは通常室温で３時間である。次に、１０個の反応容器内のビーズを５０mLの反応容器内で合わせ、２×ＤＭＦ（３０mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（３０mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂ （３０mL、各２分）で洗浄し、乾燥して、Ｃ₃−Ｏ−Ｌ−ＰｒｏＡＡ₁ＡＡ₂ＦＭＯＣ，Ｃ₇−ＯＨビーズを得た。上述のＣ₃−ＯＰｒｏＡＡ₁ＡＡ₂ＦＭＯＣ，Ｃ₇−ＯＨビーズを１：１ＤＭＦ／ピペリジン（３０mL）で処理し、ＦＭＯＣ−基を除去した。３０分室温で振蘯した後、該ビーズを４×ＤＭＦで洗浄し、ＨＯＡｃ（５３０μＬ、９mmol）、ＨＯＢＴ（１.３５g、１０mmol）及びＤＩＣ（１.４mL、９mmol）の３５mL ＤＭＦ溶液で処理した。反応混合物をカイサー試験が反応の完了を示すまで２ｈ振蘯した。次に、ビーズを２×ＤＭＦ（３０mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（３０mL、各２分）及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂（３０mL、各２分）で徹底的に洗浄し、次いで乾燥してＣ₃−ＯＰｒｏＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７−ＯＨビーズを得た。上述のビーズへＤＩＰＥＡ（２．１mL、１２mmol）及びＤＭＡＰ（２２０mg、１.８mmol）の２０mL ＤＭＦ溶液を加え、次にＦＭＯＣ−ＧｌｙＦ（２.７ｇ、９mmol）の１５mL ＤＭＦ溶液を加えた。室温で１時間振蘯した後、試薬を濾過し、ビーズをＤＭＦ（３０mL）で一回洗浄した。得られたビーズを、同じ条件でＤＩＰＥＡ、ＤＭＡＰ及びＦＭＯＣ−ＧｌｙＦのＤＭＦ溶液で２回再処理し、次いで３×ＤＭＦ、３×ｉ−ＰｒＯＨ及び５×ＣＨ₂Ｃｌ₂で洗浄し、次いで乾燥してＣ₃−ＯＰｒｏＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７−ＯＧｌｙＦＭＯＣビーズを得た。第三のステップＡＡ₃はまた、上記のＣ₃−ＯＰｒｏＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７−ＯＧｌｙＦＭＯＣビーズを等量づつ１０に分配することから開始される。ラベル付け、及びカップリング条件は、実質的に第二のステップと同様である。第三のステップの合成をコードするのに使用されるタグ分子は以下に一覧表として示した。ラベル化、カップリング及び洗浄のサイクルの後、Ｃ₃−ＯＰｒｏＡＡ₁ＡＡ₂ Ａｃ，７−ＯＧｌｙＡＡ₃ＦＭＯＣビーズを得た。第四のステップＡＡ₄のラベル付け、及びカップリング条件は、実質的に第二のステップと同様である。合成の最後でまた、Ｃ₃−ＯＰｒｏＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７ −ＯＧｌｙＡＡ₃ＦＭＯＣを得た。このステップで使用されるタグ分子は以下に一覧表として示した。上述のＣ₃−ＯＰｒｏＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，７−ＯＧｌｙＡＡ₃ＡＡ₄ＦＭＯＣビーズへ１：１Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ピペリジン（３０mL）を加え、９− フルオレニルメチルオキシカルボニル−基を除去した。反応混合物を、３０分室温で振蘯し、次いでこのビーズを４×Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄し、酢酸（５３０μＬ、９mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１.３５ｇ、１０mmol）及びＤＩＣ（１.４mL、９mmol）の３５mL ＤＭＦ溶液で処理した。反応混合物をカイサー試験が反応の完了を示すまで２ｈ振蘯した。次に、ビーズを２×ＤＭＦ（３０mL、各２分）、３×ｉ−ＰｒＯＨ（３０mL、各２分）及び５ ×ＣＨ₂ＣＩ₂、３×ｉ−ＰｒＯＨ及び５×ＣＨ₂ＣＩ₂で徹底的に洗浄し、次いで乾燥して保護されたＰｒｏ−ライブラリーを得た。レセプターライブラリービーズをスクリーニングするための色アッセイ法を開発した。使用される色素は、Disperse Red１（アルドリッチＩｎｃ．から入手可能）である。この中性のジアゾ色素は、λ_maxを５０２nmに有する。種々の有機溶媒中で、赤色が１００μＭ程度の低濃度で認識しうる。この方法を図４に示した。レセプタービーズを、基質（これは、自身に色素を結合している。）で処理した後、基質を結合したビーズを染色し、多数の色素ビーズの地色の中で容易に同定しうる。染色されたビーズは、マイクロシリンジでライブラリーから除去され、その構造を同定するためにデコードにかけられる。このデコーディングプロセスには、３つの操作が含まれる。これは、ａ）ビーズの光分解、ｂ）遊離したアルコールのシリル化、ｃ）ＧＣ−ＥＣ機への導入である。一度同定されると、次に該レセプターは、確認結合試験のための大量のビーズとして西郷製される。図５は、典型的なビーズの分子バーコードを読むのに使用されるプロセスを示し、図６には、ビーズの典型的ガスクロマトグラフィーを示す。このスペクトルから、レセプターの構造は、Ｃ₃−ＯＧｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｃ，Ｃ₇−ＯＧｌｙ −ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｃであると同定される。Ｇｌｙ−レセプターライブラリーは、第一に色素で誘導体化された以下に示すセリン１７で処理される。これは、５０％以上のビーズをオレンジ色に染色することが見出された。この非特異的結合は、生体の興味のあるペプチドのようなより機能化され、配座の特定された基質で該ライブラリーをスクリーニングすること、又は結合のコンホーメーションがよりより強固な他のライブラリーを合成することの何れかによって減少させることができる。ライブラリーをスクリーニングするための着色基質第二のレセプターライブラリー（Ｐｒｏ−ライブラリー）を以下に示す。２０，０００の要素を含む「Ｐｒｏ」ライブラリー先のライブラリーのグリシンの代わりのＣ₃−鎖の最初の位置のＤ又はＬプロリンがＣ₃−鎖に硬直性を付与することが期待できる。従って、第二のレセプターに対する結合の配座は、第一のものよりもより明確に規定されるであろう。Ｇｌｙ−ライブラリーは、ロイシンエンケファリン１８及びＭｅｔエンケファリン１９に特に選択的に結合することが見出された。エンケファリンは、重要な神経ペプチドである（Ｌｅｕエンケファリン及びＭｅｔエンケファリンは、両方ともバケム，Ｉｎｃ．（Bachem，Inc.）から商業的に利用可能である。Fodor，S.P.A.;Read，J.L.;Pirrung，M.C.;Stryer，L.;Lu， A.T．and Solas，D．Science 1991，251，767; Hughes，J.; Smithm T.W.；Kost erlitz，H.W.; Fothergill，L.A.l Morgan，B.A.and Morrio，H.R.Nature，1975 ，258，577）。これは２種類のペンタペプチド、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＬｅｕＯＨ及びＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＭｅｔＯＨより成る鎮静剤レセプターに対する天然のリガンドである。上記の「セリン」結合とは対照的に、染色ビーズのパーセンテージは、ロイシンエンケファリンに対して０.６５％であり、Ｍｅｔエンケファリンに対しては、０.５３％である。Ｌｅｕエンケファリンに対する１７の活性ビーズ、及びＭｅｔエンケファリンに対する２８の活性ビーズがＧｌｙライブラリーから回収され、デコードされた。２種類のペプチド鎖の配列は表１及び１にまとめた。表１及び２から、プロリンは、Ｌｅｕ及びＭｅｔエンケファリン両レセプター内の最も共通なアミノ酸残基である。プロリンは、特にＣ７鎖の二番目の位置で、レセプターの結合コンホーメーションを特定するのに重要な役割を演じている。しかし、第二番目の最も共通なアミノ酸残基は、Ｌｅｕ及びＭｅｔエンケファリンレセプターで異なっている。Ｌｅｕエンケファリンレセプターに対して、これらはＣ₃鎖でロイシンであり、Ｃ₇鎖でリジンであるが、Ｍｅｔエンケファリンレセプターでは、これらはＣ₃鎖でアスパラギン酸であり、Ｃ₇鎖でバリンである。他の目に付く発見は、Ｌｅｕエンケファリンに対するレセプターの１つが、Ｍｅｔエンケファリンを認識することが見出されているものとオーバーラップしていないということである。この観測は、スクリーニングによって選択されたレセプターがこれら自身のリガンドに選択性を有しうることを意味する。Ｌｅｕエンケファリンで処理した場合に、保護されているか又は保護されていないＣ₃−ＯＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｃレセプターを含有するビーズは、強く染色される。従って、このレセプターを、この結合結果を確認するために２００mgのビーズ上で再合成した。得られたビーズを、室温で１時間、５００μＬ、６２０μＭのＬｅｕエンケファリン１８溶液で処理した後、ビーズが溶液から着色した基質を全て集め、溶液は無色になった。他の５mgの上記ビーズを５００μＬ、６２０μＭのＭｅｔエンケファリン溶液で処理した。室温で２時間後、ビーズは赤色になり、溶液は僅かにオレンジ色になった。しかし、Ｌｅｕ及びＭｅｔエンケファリンに対するＣ₃−ＯＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｃ，Ｃ₇− ＯＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｃレセプターの定量的な選択的結合の測定は行わなかった。Ｌｅｕエンケファリンに結合するレセプターは、より派生されたライブラリーを作成することによって更に増加させられるであろう。これは、ペプチド鎖を伸ばすためのより多くの化学的ステップ及び核ステップでより多くのモノマーを使用することによって容易に達成される。Ｐｒｏ−ライブラリーは、Ｌｅｕエンケファリン１８及びＭｅｔエンケファリン１９によりスクリーニングされる。約０.７５％のビーズがえうエンケファリンで染色され、０.４％がＭｅｔエンケファリンで染色された。この結果を表３及び４に一覧表として示す。レセプターの配列は、実験の部に一覧表として示してある。Ｇｌｙ−ライブラリーとは対照的に、プロリン−ライブラリー内の最も共通な残基は、Ｃ７鎖の第三番目のアラニンである。プロリンは、Ｌｅｕエンケファリンの少なくとも１つの共通アミノ酸である。再度言うが、Ｌｅｕ及びＭｅｔエンケファリンレセプターは共通の配列を持たない。エンケファリンを結合する我々のレセプターの実際の結合様式は、まだ明かではなく、確かめることは非常に困難である。しかし、我々の「人工抗体」は、Ｌｅｕ及びＭｅｔエンケファリンを認識する見込みが顕著にあることが示されている。これは、分子間の非常に微細な違いを識別するための有効な化学的方法を提供する。ＬｅｕとＭｅｔ間の微細な違いは、天然のレセプターによってさえもこれらを識別することを困難にしており、合理的な設計でこれらに対するレセプターを開発することは、ほとんど不可能である。従って、上述の方法は、実際の形、サイズ及び含まれる機能性基の配列がわからなくても、ほとんどの何れの基質に対してもレセプターを開発することができる。ベータ−カソモルフィンアミド及びＤｅｓ−ＴｙｒＬｅｕエンケファリンを持つペプチドステロイド性レセプターに対する幾つかの追加の結合試験を以下の表５に示し、Ｌｅｕエンケファリン及びＭｅｔエンケファリンと比較した。例２Ｇｌｙ−デオキシコール酸ライブラリーの合成Ｇｌｙ−デオキシコール酸ライブラリーは、デオキシコール酸をケノデオキシコール酸の代わりに使用した以外、基本的にケノデオキシコール酸ライブラリーで開示した手順と同様に調製した（スキーム４）。第一段階では、デオキシコール酸を、ＤＩＣで活性化した後にアミノメチル樹脂に結合した。次に３−ヒドロキシル基をＦｍｏｃ−ＧｌｙＦと反応した。Ｆｍｏｃの脱保護の後、２種類のアミノ酸を、２つのスプリット合成ステップで加え、このスプリット合成には１０個のアミノ酸を用い、各ステップを１０個の別々の反応容器で行った。各ステップは、ケノデオキシコール酸の例で説明したようにコード化される。使用されるアミノ酸は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｐであった。次に、Ｆｍｏｃ−ＧｌｙＦを、ケノデオキシコール酸の例でＣ₇−ヒドロキシで説明したようにＣ−環のヒドロキシル基と反応させた。Ｆｍｏｃを脱保護した後、同様の１０種類のアミノ酸を２つのコード化されたスプリット合成ステップに導入した。得られたＣ３−ＯＣｌｙＡＡ₁ＡＡ₂Ａｃ，Ｃ１１−ＯＣｌｙＡＡ₃ ＡＡ₁Ａｃデオキシコール酸をケノコール酸ライブラリーで説明したように脱保護した。例３大環状合成レセプターの調製例４トリメシン酸及び１，２−ジアミンに基づいた環状オリゴマーレセプター。配列選択的なペプチド結合のための最小の構造。以下に示すレセプターライブラリーは、大環状「オリゴマーアーム」を有する。これは、該レセプターのコンホーメーションの柔軟性を小さくさせ、より選択的なレセプターにする。しかし、該受容体オリゴマーアームは大環状性である必要はないことに注意しなければならない。トリメシン酸（Ａ（ＯＨ）₃）から調製された化学量論のＡ₄Ａ₆、及び幾つかのキラルな１，２−ジアミン（例えばＢＨ₂）を有する大環状トリサイクルレセプター１は、優れた選択性で種々のペプチドに結合することが先に示されている。簡略化された類似体１、マクロモノサイクル２＆３及びマクロビサイクル４〜６、並びに選択的なペプチド合成に必要な最小の構造が開示される。最近の報告では、多数のＤ₂−対称なマクロトリサイクルレセプター（１）（これは、単純な、トリメシン酸（Ａ（ＯＨ）₃）と１，２−ジアミン（例えば、ＢＨ₂、Ｂ’Ｈ₂）である。）が開示されている（Yoon，S.S．and Still，W.C.， J.Am.Chem.Soc．1993，115，823; Yoon，S.S.and Still，W.C.，Tetrahedron Le tt.1994，35，2117; Yoon，S.S．and Still，W.C.，Tetrahedron，印刷中）。このようなレセプターは、容易に調製でき、高いエナンチオ選択性及び配列選択性で有機溶媒中の一定のペプチドに結合することが見出されている。例えば、１は、２kcal/molを上回るエナンチオ選択性でＬ−バリン又はＬ−フェニルグリシンを含有する特定のアミノ酸誘導体に結合し、ＣＨＣｌ₃中で、側鎖が保護されたトリペプチド配列（Ｄ）Ａｓｎ（Ｎ−Ｔｒ）−（Ｌ）Ｖａｌ−（Ｌ）Ｓｅｒ（Ｏ −ｔＢｕ）に対して特別な親和性を示す。１は、合成で調製されるが、最も配列選択的なペプチドレセプターの一つであるから、選択的なペプチド結合特性を維持した、最も小さな容易に調製しうる１の基質を決定するために研究が行われた。従って、関連したマクロサイクル２及び３、並びにマクロサイクル４及び５からペプチド結合特性が提供され、調査された。選択性の高いペプチド結合特性は、１のようなマクロトリサイクルに限られない。色素で標識されたレセプター基質２〜５を、１の合成で開発した以下の方法論を用いて調製した（Yoon，S.S．and Still，W.C.，Tetrahedron，印刷中）。ペプチド基質を結合するこれらの一般的な能力をこれらの化合物の各々で試験するために、コードされたスプリット合成によってポリスチレンビーズ上で調製された〜５０，０００（最大で１５⁴＝５０，６２５）のアシル化されたトリペプチドのライブラリーを使用して、先に説明した固相合成着色アッセイを用いた (A.Borchardt and W.C．Still，J．Am．Chem．Soc.，1994，116,373; A.Borchar dt and W.C.Still，J.Am.Chem.Soc.，1994，116，7467参照；Ｒ＝メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、イソプロピル（ｉｐｒ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、ネオペンチル（ｎｅｏＰｅ）、トリフルオロメチル（ＣＦ₃）、イソブチル（ｉＢｕ）、メトキシメチル（ＭＯＭ）、アセトキシメチル（ＡｃＯＭ）、シクロプロピル（ｃＰｒ）、シクロブチル（ｃＢｕ）、シクロペンチル（ｃＰｅ）、フェニル（ｐｈ）、モルホリノ（ＭｏｒＰｈ）、ジメチルアミノ（Ｍｅ₂Ｎ）、及びＡＡ₁− ＡＡ₃＝Ｇｌｙ、Ｄ−Ａｌａ、Ｌ−Ａｌａ、Ｄ−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）、Ｌ−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）、Ｄ−Ｖａｌ、Ｌ−Ｖａｌ、Ｄ−Ｐｒｏ、Ｌ−Ｐｒｏ、Ｄ−Ａｓｎ（Ｎ− トリチル）、Ｌ−Ａｓｎ（Ｎ−トリチル）、Ｄ−Ｇｌｎ（Ｎ−トリチル）、Ｌ− Ｇｌｎ（Ｎ−トリチル）、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎ−Ｂｏｃ）、及びＬ−Ｌｙｓ（Ｎ−Ｂｏｃ）の可能な組み合わせ；Ohlmeyer，M.H.J.，Swanson，R.N.，Dillard，L.W. ，Reader，J.C.,Asouline，G.，Kobayashi，R.，Wigler，M.and Still，W.C.，P roc.Natl．Acad.Sci．USA 1993，90，10922）。ライブラリーの各要素は、異なったビーズに結合されており、以下の一般的な構造を有する。Ｒ（Ｃ＝Ｏ）-ＡＡ３-ＡＡ２-ＡＡ１-ＮＨ（ＣＨ₂）₅ＣＯＮＨ-ポリスチレンペプチド結合の調査は、１０〜５００μＭの２〜５をＣＨＣｌ₃中において４８時間、基質ライブラリーで平衡化することによって行った。ビーズがレセプター及びその繋ぎ留められた色素の色を濃くする場合に、与えられた基質ライブラリービーズに対する結合が示される。次に、最も深く着色されたビーズ上のアシル化されたトリペプチドの構造をＥＣＧＣでコーデイングによって決定した（Ohlm eyer，M.H.J.，Swanson，R.N.，Dillard，L.W.，Reader，J.C.，Asouline，G.， Kobayashi，R.，Wigler，M．and Still，W.C.,Proc．Natl．Acad．Sci．USA1993 ，90，10922）。これらの結合試験から得た結果は、非常に明確である。マクロモノサイクルレセプターフラグメント２及び３は、レセプターの濃度が５００μＭと同定との高さでも、ペプチドライブラリーへの結合の証拠を示さなかった。この結果は、ライブラリーのメンバーが、ＣＨＣｌ₃中で〜２００を上回るＫ_aでこれらの単一アームのレセプターフラグメントのどちらにも結合しないことを示している。（先の試験は、ビーズ上の利用可能な５〜１０％程度の少量の基質が結合したとき、染色されたレセプターに結合するビーズが容易に検出できることを示している。）対照的に、ダブルアームのマクロビサイクルレセプター４及び５は、基質ライブラリー内のペプチドに結合する。実際に、両方とも、それぞれ３８及び４μＭのレセプター濃度で一定のペプチドの高度に選択的な結合を示した。４との基質選択性は特に高い。ビーズに結合されたレセプターと、結合されていないモノとの間で非常に大きな色調のコントラストがあり、〜２５００ビーズあたり僅かに１つのビーズが色素結合したレセプターにより染色される。このレベルの選択性は、全体で５０，０００のメンバーのペプチドライブラリーのわずか〜２０のメンバーが、ＣＨＣｌ₃中で〜４０μＭの濃度の４により結合されることを示す。５では、染色されたビーズ内でより大きな色の強度のグラデーションがあり、〜５００あたり１ビーズが染色される。比較として、マクロサイクル１は、２０μＭのレセプター濃度で〜１０００あたり１つのビーズを結合することが報告されている（Yoon，S.S．and Still，W.C.，Tetrahedron，印刷中）。このように、これらの簡略化されたレセプターは、効果的にペプチドに結合されるばかりでなく、これらの１つ（４）が、１よりも実質的によい選択性でペプチドに結合する。４及び５で見出される構造モチーフの更なる簡略化が行われうる。特に、中心のリンカーＢ’のコンホーメーションをひずませている環を、選択的な結合特性を維持したままで除去することが可能である。このように、４のピロリジンリンカーを、酒石酸から誘導されるよりフレキシブルな非環式ジアミンと置き換え、６を創製した。（Yoon，S.S．andS till，W.C.，Tetrahedron Lett．1994，35， 2117.）４及び５と同様に、レセプター６も、非常に高い選択的結合を示す。此の選択性は、〜９００あたり１ビーズのレベル（［６］＝４０μＭ）でペプチドに結合することに対応する。これらの結合特性は、６を４よりも幾分低い選択性にしているが、これらはまだ、構造のより複雑な１の選択性に匹敵する。４〜６により優先して結合されるペプチド基質の構造は、各レセプターのアッセイで最も深く染色された〜５０のビーズを採集し、ＥＣＧＣででコーディングすることによって決定される。結果を、親レセプター１に対する比較データと共に、最も共通して現れるペプチド配列の頻度によって表６にリストした。ペプチドライブラリーは、各部位で１５の異なった残基を有する全ての可能なトリペプチドより成るので、非選択的な結合に対する何れかのジ−又はトリペプチドの予想される出現の頻度が推定でき、そのデータも表中に示した。指摘したように、末端アシル基（Ｒ）に対して僅かな選択性が見られるが、レセプターは非常に高い配列選択性で基質ライブラリーのペプチドドメインに結合する。４のペプチド結合特性は、選択されたビーズの７８％が２つのトリペプチド配列のみを有するという点で特に注目すべきである。有意な結合特性を有する最小の構造は極めてシンプルであることが重要である。特に、２つのアームを有するレセプター４〜６の各々は、簡単な非環式アミド結合によってお互いに保持される３つの明瞭な分子（１つのテンプレートと２つのオリゴマーアーム）から構築されていると考えることができる。このように、このタイプのレセプターは、種々のテンプレートとオリゴマーアームから出発するスプリット合成を用いて組み合わせライブラリーとして容易に合成され得るべきである。（よりコンホーメーションのフレキシブルなダブルアームレセプターライブラリーに対しては、Boyce,R.,Li,G.,Nestler,H.P.,Suenaga,T.andStill,W .C.，J.Am.Chem．Soc．1994，116，7955を参照。）これらのレセプターの各々が、それ自身独特なペプチド結合選択性を有することも重要である。これらの実験で、１のようなレセプターとペプチドを結合するのに必要な最小の２つのアーム構造が確立される（スキーム１も参照）。これらのレセプターのライブラリーには、与えられたペプチド性基質に対して実質的な選択性を有するメンバーが含まれる。これらの実験は、所望の基質をしっかりと固定し、かつ選択的に結合するレセプターを見出すためのプロトコールの第一段階を示す。この方法は、１）新たなレセプターファミリーの例を合成し、所望の基質タイプのライブラリーに対してスクリーニングすること、２）ステップ１で選択的な結合を示した構造に基づいてレセプターライブラリーを合成し、選択的な結合が望まれる基質でスクリーニングすること、及び３）ステップ２で見出された個々のレセプターを再合成し、ステップ１の基質ライブラリーに対してスクリーニングし、選択性を確立すること、のステップを具備する。大環状オリゴマーアームを有する２つのアームを持つレセプターの組み合わせライブラリーの合成ライブラリーを、出発物質は異なるが、上記のペプチドステロイドライブラリーの合成で説明した技術を用いて固相スプリット合成によって調製した。この調製は以下のステップより成る。ステップ１．以下の一般式を有する、種々の異なった一連のテンプレートを調製する。ここで、Ａは、固相合成での支持体（例えば、メリーフィールドのポリスチレンビーズ）にテンプレートを結合させる官能基であり、Ｂ及びＣはレセプターの２つのオリゴマーアームを結合できる官能基である。Ｂ及びＣは同じ官能基であってもよく、この場合には、２つのレセプターオリゴマーアームは同じとなる。この他には、Ｂ及びＣは異なっていてもよく（又は別々に保護されていてもよい。）、この場合には、２つのレセプターオリゴマーアームは異なり、これは好ましい態様である。ステップ２．以下の一般式を有する、種々の異なった一連のオリゴマーアームを調製する。ここで、Ｂ’及びＣ’は、テンプレート官能基Ｂ及びＣにそれぞれオリゴマーアームを結合できる官能基である。該オリゴマーアームは、非環式、環式又は大環状でありうるが、配座の柔軟性が最小であるオリゴマーアームが好ましい。１以上の官能基（Ｂ’及びＣ’以外）を有するオリゴマーアームも好ましい（これは、該官能基が、最終的にレセプターと結合される基質との特異的な相互作用に関係することになるからである。）。ステップ３．官能基Ａを用いてステップ１で得た各テンプレートを、別々に分配した固相合成支持体粒子（ここではＰで示した。）（例えば、メリーフィールドのぷりスチレンビーズ、ポリ（エチレングリコール）−ポリスチレンコポリマービーズ、ポリジメチルアクリルアミドビーズ）に結合し、下式のものを得る。ここで、Ａ’はＡをＰに結合することによって得られる化学部分である。ステップ４．ステップ３で得た別々に分配した合成支持体粒子（Ｐ）の全てを混合し、次にＮ個の異なった反応容器に等しく分配する。ここで、Ｎは、Ｐと結合したテンプレートに付加される異なった第一のアームユニット（アームＢ’）の数である。テンプレートＢの官能基は、Ｂ’と反応させる必要があるので脱保護されるか、又は活性化され、異なった各々の反応容器内で異なったアームＢ’ にカップリングされ、下式のものを与える。ここで、ＢＢはＢとＢ’をカップリングして得られる化学部分であり、第一のアームユニットにテンプレートユニットを化学的に結合する（これは、組み合わせスプリット合成の第一段階である）。必要に応じて、第一のアームユニットを、テンプレートへのカップリングの後に化学反応によって更に修飾することができる。このような化学反応は、標準的な合成によって、又は組み合わせ合成（この場合には、作成された異なった化合物の数が増加するであろう。）によって行われうる。ステップ５．ステップ４で得た別々に分配した合成支持体粒子（Ｐ）の全てを混合し、次いでＮ’個鋸となった反応容器に等しく分配した。ここで、Ｎ’はテンプレートに付加される異なった第二のアームユニット（アーム−Ｃ’）の数である。テンプレートＣの官能基は、Ｃ’と反応させる必要があるので脱保護されるか、又は活性化され、異なった各々の反応容器内で異なったアーム−Ｃ’にカップリングされ、下式のものを与える。ここで、ＣＣはＣとＣ’をカップリングして得られる化学部分であり、第二のアームユニットにテンプレートユニットを化学的に結合する（これは、組み合わせスプリット合成の第二段階である）。必要に応じて、第二のアームユニットを、テンプレートへのカップリングの後に化学反応によって更に修飾することができる。このような化学反応は、標準的な合成によって、又は組み合わせ合成（この場合には、作成された異なった化合物の数が増加するであろう。）によって行われうる。必要に応じて、最初のテンプレートが、オリゴマーアームを結合するための３以上の官能基を備えているならば、ステップ５に類似の１以上の追加のステップを行い、３以上のオリゴマーアームをテンプレートに結合することができる。上記のステップは、価値のある特性（選択的なリガンド又は基質結合、特定の化学反応の触媒、生物学的分子への選択的結合、超分子構造（例えば細胞）への選択的結合など）に対してスクリーニングされうる粒子上の合成レセプターのライブラリーを創製する。一度粒子が、評価しうる特性を有する合成レセプターを有していることが明らかになると、そのレセプターの構造が決定され、該レセプターが大量スケールで再合成される。レセプターの構造決定は、レセプターの直接分析（例えば質量スペクトル法）によって、又はコードされたライブラリー合成の場合には、分子タグ分析によって達成されうる。先に一般的に説明したレセプターライブラリー合成の特別な例以下のステップにおいて、最終のレセプターライブラリーのメンバーの構造を解明するためのペプチドステロイドライブラリー合成で使用した分子コードスキームを使用した。ステップ１．以下に概略を示したように以下のテンプレートを合成した。ステップ２．以下のアーム構造を合成した。ステップ３．ステップ１で得たテンプレートを、ＮＨ₂−機能化テンタゲル（T entaGel）（ポリ（エチレングリコール）−ポリスチレンコポリマー）ビーズ（上記の一般的スキームのＰ）に、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を用いて化学的に結合した。例えば、以下のものが得られる。ステップ４．テンプレート上の第一の官能基（Ｆｍｏｃ−保護されたアミン。上記一般的スキームのＢ）をピペリジンを用いて脱保護し、ＤＩＣを使用して、各オリゴマーアーム（ＣＯＯＨ＝Ｂ’）を該テンプレートにカップリングした。これによりステップ１のテンプレートと、ステップ２のオリゴマーアームの全ての可能な組み合わせの合成ができる。例えば、第一のテンプレートと第一のアームのカップリングで以下のレセプター中間体の合成が行える。ステップ５．第二の官能基を、Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄を用いて脱保護し（Ａｌｌｏｃ−保護されたアミン。上記の一般的なスキームのＣ）、ＤＩＣを使用して、各オリゴマーアーム（ＣＯＯＨ＝Ｃ’）をテンプレートにカップリングした。これによりステップ１のテンプレートと、ステップ２のオリゴマーアームの全ての要素の全ての可能な組み合わせの合成ができる。例えば、ステップ４及び５の両方で第一のテンプレートと第一のアームをカップリングして以下のレセプターの合成が行える。上記の組み合わせスプリット合成で先に示した６つの異なったテンプレート及び１０の異なったオリゴマーアームを用いて、得られた合成レセプターライブラリーの異なったレセプターの数は、全体で６００（６×１０×１０）である。異なった及び／又はより大量のレセプターライブラリーより大量のテンプレート及び／又はオリゴマーアームを用いることにより、より大量のライブラリーを上記のスプリット合成法を用いて合成することができる。非常に多量のテンプレート及びアーム構造はほとんど仮定でありうるが、構造は有利な以下の特性を一般的に有するであろう。テンプレートはコンホーメーションが制限されている（以下に示されるような環状テンプレート）。テンプレートは、オリゴマーアームを結合するのに使用される官能基（以下に示されるような環状及び非環状テンプレート）の間に原子の短い鎖（１０以下）をゆうする。加えて、テンプレートは、１以上のアームを結合することができる官能基を有する。２つ以上のオリゴマーアームを有するレセプターは、２つのアームのあるレセプターと少なくとも同程度の選択性であろう（３つのアームを有するレセプターの合成に適切なテンプレートの例は以下を参照。）オリゴマーアームは、コンホーメーションが制限されており、これには、大環状分子、多環状分子、枝分かれした環状分子、及び枝分かれした環状分子が含まれる。オリゴマーアームには、結合された基質と特異的に相互作用するための官能基の範囲があり、基質、例えばイオン性（例えば、有機アンモニウム、カルボキシレート、ホスフェート、スルホネート、スルホンアミドイオン）、又は水素結合供与体若しくは受容体（例えば、ケトン、エステル、アミド、アルコール、エーテル、ホスホンアミド、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン、イミン、アミン、アミンオキシド、ヘテロ環、ハロゲン）である官能基は特異的なレセプター−基質結合を促進するので特に貴重でありうる。以下は、レセプターライブラリーを合成するために使用されるべきテンプレート及びオリゴマーアームの網羅してはいない一覧である。Ｒ、Ｒ’及びＲ”は適切な保護基である。オリゴマーアーム例５ダブルアームレセプターの合成ジアミドＡ５００mg（０.９０mmol）のビス−ペンタフルオロフェニルトリメシン酸モノメチル及び４００mg（１.９８mmol ２.２ｅｑ．）のモノ−Boc−（Ｒ，Ｒ）−シクロヘキサンジアミンを２０mlのＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解し、６０７ml（３.６０mmol 、４ｅｑ．）のⁱＰｒ₂ＮＥｔを加えた。１６時間ｒ．ｔ．で撹拌した後、溶媒を減圧下に除去した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨＣｌ₃／アセトン１０：２）で５４０mg（９７％）のＡを非晶質の白色固体として得た。¹ H-NMR(400MHz，CDCl₃): 1.27(s，18H)，1.34(m，4H)，1.78(m，4H)，2.03(m，2 H)，2.23(m，2H)，3.54(m，2H)，3.81(m，2H)，3.96(s，3H)，4.67(d，J=8.4，2 H)，7.33(d，J=7.6，2H)，8.47(t，J=1.7，1H)，8.64(d，J=1.6，2H)．¹³ C-NMR(75MHz，CDCl₃): 24.45，25.01，28.13，32.32，32.46，52.30，53.61， 56.14，79.71，129.47，130.90，134.87，156.98，165.26，165.66． FT-IR(KBr): 3336，2978，2935，2859，1682，1654，1531cm^-1． HRMS(M+1) : calcd．for C₃₂H₄₉N₄O₈617.3550，found 617.3533．大環状テトララクタムＢ３００mg（１.８１mmol）のイソフタル酸の３０ml ＣＨ₂Ｃｌ₂撹拌溶液へ、７００mg（３.７９mmol、２.１ｅｑ）のペンタフルオロフェノール及び７２７mg（３.７９mmol、２.１ｅｑ）のＥＤＣを加えた。４時間後、反応混合物は透明になり反応が完結したことを示した。減圧下に溶媒を除去し、次いでフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ₂Ｃｌ₂／アセトン２０：１）で８２５mg（９１％）のイソフタル酸ビス−ペンタフルオロフェニルエステルを白色固体として得た。トリフルオロ酢酸（０.５ml）を、２００mg（０.３２mmol）のＡの４ml ＣＨ₂ Ｃｌ₂溶液にシリンジを通して加えた。２時間後、全ての揮発成分を減圧下に除いた。油状の残渣をジエチルエーテルで粉末化して白色の固体を得た。これをデカンテーションで単離し、減圧下に乾燥した。得られたビス−ＴＦＡアミン塩及び１６２mg（０.３２mmol）のイソフタル酸ビス−ペンタフルオロフェニルエステルの１０ml乾燥ＴＨＦ溶液を、２２０ml（１.３０ mmol、４ｅq）のⁱＰｒ₂ＮＥｔの３００ml乾燥ＴＨＦ溶液へ２４時間かけて滴下した。更に２４時間撹拌した後、反応混合物を減圧下にエバポレートし、フラッシユクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ始め１００：２、次いで１００：４）にかけ、１６５mg（９３％）のマクロサイクルＢを非晶質の白色固体として得た。¹ H-NMR(400MHz，CD₃OD): 1.47 and 1.58(m，8H)，1.87(m，4H)，2.12(m，4H)，3 .92(s，3H)，4.02(m，4H)，7.45(t，J=7.7，1H)，7.87(dd，J=7.7 and J=1.6，2 H)，8.33(d，J=1.6，1H)，8.49(d，J=1.7，2H)，8.56(t，J=1.7，1H)．¹³ C-NMR(75MHz，CD₃OD): 26.01，32.95，52.99，55.68，55.87，128.23，129.96 ，131.23，131.86，132.38，132.45，136.01，136.66，166.89，168.79，169.84 . FT-IR(KBr): 3324，2936，2859，1728，1666，1648，1534cm^-1． HRMS(M+1):calcd.for C₃₀H₃₅N₄O₆ 547.2557，found 547.2578．ペンタフルオロフェニルエステルＣ１２７mg（０.２３mmol）のＢを２ml ＴＨＦに溶解した。１mlのＨ₂Ｏに溶解した２ml ＭｅＯＨ及び１９mg（０.４７mmol、２ｅｑ）のＮａＯＨを加えた。１６時間後、反応混合物を１ＭＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ml）で抽出し、有機層を合わせ、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。濾過し、減圧下に溶媒を除去し、粗製の酸を白色の固体として得た。これを１０mlのＣＨ₂Ｃｌ₂に懸濁した。８６mg（０.４７mmol、２ｅｑ）のペンタフルオロフェノール及び８９mg（０.４７ mmol、２ｅq）のＥＤＣを加えた。５時間撹拌した後、ほとんどの固体が溶解した。溶媒を減圧下に除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ₂Ｃｌ₂／アセトン１０：１）で精製し、１３２mg（８１％）のペンタフルオロフェニルエステルＣを白色の固体として得た。 ¹H-NMR(400MHz，CD₃OD): 1.46 and 1.57(m，8H)，1.86(m，4H)，2.13(m，4H)， 4.02(m，4H)，7.50(t，J=7.7，1H)，7.88(dd，J=7.7 and J=1.7，2H)，8.35(s， 1H)，8.56（d，J=7.8，2H)，8.67（s，2H)，8.72（s，1H)．¹³ C-NMR(75MHz，CD3OD): 25.94，32.86，55.74，56.00，128.23，129.01，129.9 6，131.28，132.79，134.26，135.93，137.25，137.6，139.3，140.9，142.7，1 44.2，162.65，168.10，169.73，169.81． FT-IR(KBr): 3323，2937，2860，1768，1652，1522cm^-1． HRMS(M+1): calcd．for C₃₅H₃₂N₄O₆F₅ 699.2242，found 699.2272. レセプター４（スキーム５）８mg（１.３６mmol）のdisperse redで標識されたＲ，Ｒ−ピロリジンジアミン（S.S．Yoon and W.C．Still，Tetrehedron，印刷中(1994)）及び２０mg（２. ８６mmol、２.１ｅｑ）のペンタフルオロフェニルエステルＣの０.５mlＣＨ₂Ｃｌ₂溶液へ、９ml（５.４４mmol、４ｅｑ）のⁱＰｒ₂ＮＥｔを加え、反応混合物を２４時間撹拌した。反応混合物全体をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ１００：４）にかけ、生成物を更にゲル濾過（ＬＨ２０、ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ９５：５）で精製し、２０mg（９５％）のレセプタ −４を暗赤色の固体として得た。¹ H-NMR(400MHz，CDCl₃／CD₃OD):1.21(t，J=7.0，3H)，1.37及び1.45(m，16H)，1 .78(m，8H)，2.11(m，8H)，2.51（m，2H)，2.57(m，2H)，3.24(m，2H)，3.49(m ，2H)，3.51（m，2H)，3.69(m，2H),3.89(m，8H)，4.28(m，2H)，4.55(m，2H)， 6.83(d，J=9.2，2H)，7.43(t,J=7.7,2H)，7.85(m，8H)，8.28(m，8H)，8.48(s， 2H)．¹³ C-NMR(75MHz，CDCl3/CD3OD)：12.54，25.60，29.33，29.63，32.61，46.21，幾つかのシグナルはＣＤＣｌ₃で隠された。53.40，55.45，55.65，123.29，125. 34，126.98，127.82，129.57，129.82，129.96，130.83，130.97，135.31，135. 47，135.98，144.63，148.31 152.60，157.70，168.30，168.36，168.59，169.4 1，171.94,174.03． FT-IR(KBr): 3468，2933，2859，1730，1645，1598，1518cm^-1． HRMS(M+1): calcd．for C₈₂H₉₂N₁₅O₁₅ 1526.6900，found 1526.6843 スキーム５−ダブルアームレセプター４の合成例６水溶性である多官能性有機テンプレートの合成。３及び１２位のアルファヒドロキシルはオリゴマー鎖に結合され、カルボキシル基は、合成レセプターを固体支持体へ結合するのに使用されうる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年１月１６日【補正内容】請求の範囲１．２以上のオリゴマーに共有結合的に結合された多官能性有機テンプレートを含有する合成レセプターであって、該オリゴマーが、独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうるもの。２．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、非環式、炭素環式、ヘテロ環、ポリカルボサイクル、多環式、炭化水素、ポリヘテロ環、大環状ポリエーテル、大環状ポリアミン、大環状ポリアミド、大環状ポリエステル、大環状ビサイクル、大環状トリサイクル、大環状テトラサイクル、ポダンド、ステロイド又は但し、Ｘ＝ＯＨ、ＳＨ又はＮＨ₂。であるもの。３．請求の範囲第２項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、但し、Ｘ＝Ｏ又はＳ、又は但し、Ｋ＝リジン又は但し、Ｘ、Ｙ＝Ｏ、Ｓ、ＮＨ；Ｋ、ｍ＝２〜６；１＝０〜５；及びｎ＝１〜６、であるもの。４．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、各オリゴマーが１０以下のモノマーを含有するもの。５．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、少なくとも１つのオリゴマーが、オリゴアミド、オリゴエステル、オリゴウレア、オリゴウレタン、オリゴアミン、オリゴエーテル、オリゴスルホンアミド、オリゴホスホンアミド、オリゴホスホネート、オリゴホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、ペプチドオリゴマー、シクロファン又はこれらのモノマーの混合物であるもの。６．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、少なくとも１つのオリゴマーが、オリゴアミド、オリゴエステル、オリゴウレア、オリゴウレタン、オリゴアミン、オリゴエーテル、オリゴスルホンアミド、オリゴホスホンアミド、オリゴホスホネート、オリゴホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、シクロファン又はペプチドオリゴマーより成る群から選択されるオリゴマーの２以上の独特のクラスの組み合わせであるもの。７．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該オリゴマーが異なるもの。８．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該オリゴマーが同じであるもの。９．２以上のペプチドオリゴマーに共有結合的に結合された多官能性ステロイドテンプレートを含有する合成レセプターであって、該ペプチドオリゴマーが、独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうるもの。１０．請求の範囲第９項に記載の合成レセプターであって、該多官能性ステロイドテンプレートが、ウルソデオキシコール酸、ヒオデオキシコール酸、アルファ−アポコール酸、又はであるもの。１１．請求の範囲第９項に記載の合成レセプターであって、該ペプチドオリゴマーが少なくとも２つのアミノ酸を含有するもの。１２．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、色素、蛍光標識又は放射性標識に更に結合されたもの。１３．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、該合成レセプターを唯一同定する同定基に更に結合されているもの。１４．請求の範囲第１３項に記載の合成レセプターであって、該同定基が、合成レセプターのオリゴマーの合成及び分子構造を唯一同定するもの。１５．請求の範囲第１３項に記載の合成レセプターであって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子であるもの。１６．請求の範囲第１３項に記載の合成レセプターであって、該同定基がオリゴヌクレオチドであるもの。１７．固体支持体及び２以上のオリゴマーに共有結合的に結合された多官能性有機テンプレートを含有する合成レセプターであって、該ペプチドオリゴマーが、独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうるもの。１８．請求の範囲第１７項に記載の合成レセプターであって、該固体支持体が、セルロース、制御された細孔のガラス、シリカゲル、ポリスチレン、ＰＥＧ −ポリスチレン、ジビニルベンゼンで任意に交差結合されたポリスチレン、グラフトコポリ、ポリアクリルアミド、ラテックス、Ｎ，Ｎ’−ビス−アクリロイルエチレンジアミンで任意に交差結合されたポリジメチルアクリルアミド、ポリマーでコートされたガラス、又は低分子量非交差結合ポリスチレンより成る粒子であり、該粒子が、長球状、キャピラリー、中空繊維、針、又は固体繊維であるもの。１９．請求の範囲第９項に記載の合成レセプターであって、該多官能性ステロイドテンプレートが、固体支持体に共有結合的に結合されているもの。２０．請求の範囲第１９項に記載の合成レセプターであって、該固体支持体が、ポリスチレン又はＰＥＧ−ポリスチレン粒子であるもの。２１．請求の範囲第１７項に記載の合成レセプターであって、該固体支持体が、該固体支持体に共有結合的に結合された合成レセプターを唯一同定する同定基に更に結合されるもの。２２．請求の範囲第２１項に記載の合成レセプターであって、該同定基が、合成レセプターのオリゴマーの合成及び分子構造を唯一同定するもの。２３．請求の範囲第２１項に記載の合成レセプターであって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子であるもの。２４．請求の範囲第２１項に記載の合成レセプターであって、該同定基がオリゴヌクレオチドであるもの。２５．複数の独特の合成レセプターを含有するライブラリーであって、各合成レセプターが、２以上のオリゴマー（これは独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうる。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレートを含有するもの。２６．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該ライブラリーが少なくとも１００の独特の合成レセプターを含有するもの。２７．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該ライブラリーが、少なくとも１０³の独特の合成レセプター、好ましくは１０⁶又は１０⁹の独特な合成レセプターのメンバーを含有するもの。２８．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該合成レセプターが固体支持体に共有結合的に結合されたもの。２９．請求の範囲第２８項に記載のライブラリーであって、少なくとも１００の単一の固体支持体があるもの。３０．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該固体支持体が、該合成レセプターを唯一同定する１以上の同定基に結合されているもの。３１．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該多官能性有機テンプレートが、該合成レセプターを唯一同定する１以上の同定基に更に結合されているもの。３２．請求の範囲第３０項に記載のライブラリーであって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子であるもの。３３．請求の範囲第３０項に記載のライブラリーであって、該同定基がオリゴヌクレオチドであるもの。３４．請求の範囲第３１項に記載のライブラリーであって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子であるもの。３５．請求の範囲第３１項に記載のライブラリーであって、該同定基がオリゴヌクレオチドであるもの。３６．複数の異なった合成レセプターのメンバーを含有する同定基を有する合成レセプターライブラリーを合成する方法であって、各合成レセプターライブラリーのメンバーが、２以上のオリゴマー（これは独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうる。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレートを含有する単一のタイプの合成レセプターを結合した固体支持体を含有し、該方法が、ａ）反応容器内の固体支持体を多官能性有機テンプレートと反応すること、ｂ）結合された多官能性有機テンプレートを有する該固体支持体を複数の反応容器中に分配すること、ｃ）各反応容器内の固体支持体上の多官能性有機テンプレートを第一のオリゴマーモノマーと反応すること、ｄ）各反応容器内の固体支持体を第一の同定基と反応すること、ｅ）該固体支持体をプールすること、ｆ）該プールされた支持体を複数の反応容器に分配すること、ｇ）各反応容器内の固体支持体上の多官能性有機テンプレートを第二のオリゴマーモノマーと反応すること、ｈ）各反応容器内でプールされた固体支持体を第二の同定基と反応すること、及びｉ）（ｅ）から（ｈ）のステップを合成レセプターの各オリゴマーに対して少なくとも１回から２０回繰り返すことを具備した方法。３７．２以上のオリゴマー（これは独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうる。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート及び合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有する、１以上の同定基を含有する合成レセプターを合成する方法であって、ａ）第一のタイプの保護基でブロックされた第一のタイプの活性部位及び第二のタイプの保護基でブロックされた第二の活性部位を含有する多官能性固体支持体を調製すること、ｂ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第一タイプの保護基を除去し、これにより第一のタイプの活性部位を露出させること、ｃ）保護された多官能性有機テンプレートを第一のタイプの活性部位にカップリングすること、ｄ）該保護された多官能性有機テンプレートを活性化剤と反応し、第一のタイプの保護基を除去し、これによって第一のタイプの活性部位を露出させること、ｅ）保護されたオリゴマーモノマーを該脱保護された多官能性有機テンプレートにカップリングすること、ｆ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第二のタイプの保護基を除去し、これによって、第二のタイプの活性部位を露出すること、ｇ）保護された同定基を第二のタイプの活性部位にカップリングすること、及びｈ）ステップ（ｄ）から（ｇ）を合成レセプターの各オリゴマーに対して１から２０回繰り返すこと、を具備した方法。３８．２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有する、１以上の同定基を含有する合成レセプターを合成する方法であって、該方法が、ａ）保護された多官能性有機テンプレートを固体支持体にカップリングすること、ｂ）該保護された多官能性有機テンプレートを活性化剤と反応し、保護基を除去し、これによって活性部位を露出すること、ｃ）保護されたオリゴマーモノマーを該脱保護された多官能性有機テンプレートにカップリングすること、ｄ）同定基を固体支持体にカップリングすること、及びｅ）（ｂ）から（ｄ）のステップを各オリゴマーの合成レセプターに対して１から２０回繰り返すこと、のステップを具備する方法。３９．複数の異なった合成レセプターメンバーを含有する、同定基を有する合成レセプターライブラリーを製造する方法であって、各合成レセプターライブラリーのメンバーが単一のタイプの合成レセプターを結合した固体支持体を含有し、該単一のタイプの合成レセプターが２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び該合成レセプターを同定する1以上の同定基を含有し、該方法が、ａ）複数の反応容器内の固体支持体を分配すること、ｂ）各反応容器内の該固体支持体を第一のオリゴマーモノマーと反応すること、ｃ）各反応容器内の該固体支持体を第一の同定基と反応すること、ｄ）該固体支持体をプールすること、ｅ）該プールされた支持体を複数の反応容器に分配すること、ｆ）各反応容器内の固体支持体を第二のオリゴマーモノマーと反応すること、ｇ）各反応容器内の該プールされた固体支持体を第二の同定基と反応すること、ｈ）（ｄ）から（ｇ）のステップを各オリゴマーに対して少なくとも１回から２０回繰り返すこと、及びｉ）各反応容器内の固体支持体を多官能性有機テンプレートと反応すること、のステップを具備する方法。４０．２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有する、１以上の同定基を有する合成レセプターを合成するための方法であって、該方法が、ａ）保護基でブロックされた活性部位を含有する多官能性固体支持体を調製すること、ｂ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第一タイプの保護基を除去し、これによって第一のタイプの活性部位を露出させること、ｃ）保護されたオリゴマーモノマーを固体支持体の第一のタイプの活性部位にカップリングすること、ｄ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第二のタイプの保護基を除去し、これによって第二のタイプの活性部位を露出させること、ｅ）保護された同定基を第二のタイプの活性部位にカップリングすること、及びｆ）（ｂ）から（ｅ）のステップを各オリゴマーに対して１から２０回繰り返すこと、ｇ）該固体支持体上の保護されたオリゴマーを活性化剤と反応し、保護基を除去し、これによって活性部位を露出すること、ｈ）多官能性有機テンプレートを該活性部位にカップリングすること、のステップを具備する方法。４１．２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び該合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有する、１以上の同定基を有する合成レセプターを合成するための方法であって、該方法が、ａ）保護されたオリゴマーモノマーを固体支持体にカップリングすること、ｂ）同定基を固体支持体にカップリングすること、及びｃ）（ａ）及び（ｂ）のステップを各オリゴマーに対して１から２０回繰り返すこと、ｄ）該固体支持体上の保護されたオリゴマーを活性化剤と反応し、保護基を除去し、これによって活性部位を露出すること、ｅ）多官能性有機テンプレートをオリゴマーにカップリングすること、のステップを具備する方法。４２．請求の範囲第３６、３７、３８、３９、４０又は４１に記載の方法であって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子である方法。４３．請求の範囲第３６、３７、３８、又は３９項に記載の方法であって、該同定基がオリゴヌクレオチドである方法。４４．請求の範囲第３６、３７、３８、３９、４０又は４１に記載の方法であって、各反応容器内の多官能性有機テンプレートにカップリングされた固体支持体が、まず同定基と反応され、次いで該固体支持体上の該多官能性有機テンプレートがオリゴマーモノマーと反応される方法。４５．注目の受容体分子に対して適切な合成レセプターを決定するための合成レセプターライブラリーをアッセイする方法であって、該方法が、ａ）請求の範囲第２５項に記載の合成レセプターライブラリーを生じさせること、ｂ）該合成レセプターライブラリーと注目の受容体分子とを、該受容体分子が合成レセプターライブラリーの１以上の適切な合成レセプターと相互作用し、これらに結合するような条件下で接触すること、ｃ）受容体分子との結合を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｄ）適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを含有する方法。４６．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、導入される該受容体分子がラベルに結合されている方法。４７．請求の範囲第４６項に記載の方法であって、導入された受容体分子に結合されたラベルが、受容体分子と相互作用する適切な合成レセプターを同定する方法。４８．請求の範囲第４７項に記載の方法であって、該ラベルが色素、蛍光標識又は放射性標識である方法。４９．請求の範囲第４７項に記載の方法であって、該受容体分子が、抗体、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、脂質、薬物、金属又は小さな分子である方法。５０．請求の範囲第４９項に記載の方法であって、該タンパク質受容体分子が、ヒト、ウシ、ブタ、トリ、ヒツジ、魚、及びウマ成長ホルモン、及び対応する天然に存在する成長ホルモンの生物学的活性を有するこれらのポリペプチド類似体を包含する群から選択される成長ホルモンである方法。５１．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、該受容体分子が、全細胞、ウイルス又はバクテリアに存在する方法。５２．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、該受容体分子が、以下の癌に関連したガンに関係するガン細胞、即ち、メラノーマ、唇、舌、口、咽頭、食道、胃、小腸、結腸、直腸、肝臓、膵臓、喉頭、肺、骨、結合組織、皮膚、胸部、子宮、卵巣、前立腺、精巣、膀胱、腎臓、眼、脳、中枢神経系、内分泌腺、血液及びリンパ組織、又は白血病である方法。５３．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、該合成レセプターが、他の異なった受容体分子の存在下で受容体分子と選択的に結合する方法。５４．生物学的活性を示す適切な合成レセプターに対して合成レセプターライブラリーをアッセイする方法であって、該方法が、ａ）請求の範囲第２５項に記載の合成レセプターライブラリーを生成すること、ｂ）in situで合成レセプターライブラリーの適切な合成レセプターの生物学的活性を検出すること、ｃ）生物学的活性を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｄ）ステップｃ）で単離された適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを具備する方法。５５．請求の範囲第５４項に記載の方法であって、該生物学的活性が、細胞毒性、抗腫瘍活性、抗菌活性、抗ウイルス活性、抗真菌活性、抗寄生虫活性、成長因子活性、成長阻害活性、ホルモン活性、神経伝達物質活性、免疫調節活性、調節活性又は酵素活性である方法。５６．請求の範囲第４５項又は第５４項に記載の方法であって、注目の活性が、ナノモルの濃度で決定される方法。５７．治療剤として使用するための適切な合成レセプターを決定するための請求の範囲第４５項又は第５４項に記載の方法。５８．診断薬として使用するための適切な合成レセプターを決定するための請求の範囲第４５項又は第５４項に記載の方法。５９．クロマトグラフィー分離剤として使用するための適切な合成レセプターを決定するための請求の範囲第４５項に記載の方法。６０．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、該適切な合成レセプターが、遷移状態類似体に選択的に結合する方法。６１．反応を触媒する適切な合成レセプターに対して合成レセプターライブラリーをアッセイするための方法であって、該方法が、ａ）請求の範囲第２５項に記載の合成レセプターライブラリーを生成すること、ｂ）触媒された反応生成物が決定されるような基質を該合成レセプターライブラリーに導入すること、ｃ）触媒活性を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｄ）ステップｃ）で単離された適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを具備する方法。６２．酵素で触媒される反応を阻害する適切な合成レセプターに対して合成レセプターライブラリーをアッセイするための方法であって、該方法が、ａ）請求の範囲第２５項に記載の合成レセプターライブラリーを生成すること、ｂ）in situで注目の反応を触媒する酵素を合成レセプターライブラリーに導入すること、ｃ）in situで注目の酵素触媒反応の適切な合成レセプターによって阻害を検出すること、ｄ）in situで注目の酵素触媒反応の阻害を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｅ）ステップｃ）で単離された適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを具備する方法。６３．下記構造を有する請求の範囲第１項に記載の合成レセプター。６４．下記構造を有する請求の範囲第１項に記載の合成レセプター。６５．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、であるもの。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｑ 1/25 7823−4ＢＣ１２Ｑ 1/25 Ｇ０１Ｎ 33/566 0276−2ＪＧ０１Ｎ 33/566 // Ｃ０８Ｇ 12/40 8619−4ＪＣ０８Ｇ 12/40 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者リ、ゲーアメリカ合衆国、ニュージャージー州 08536、プレインズボロ、フェザント・ホロー・ドライブ 2816 (72)発明者ベンネメルス、ヘルマアメリカ合衆国、ニューヨーク州 10027、ニューヨーク、アパートメント４エー、ウエスト・ワンハンドレッドトゥエンティーセカンド・ストリート 524

Claims

【特許請求の範囲】１．２以上のオリゴマーに共有結合的に結合された多官能性有機テンプレートを含有する合成レセプターであって、該オリゴマーが、独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうるもの。２．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、非環式、炭素環式、ヘテロ環、ポリカルボサイクル、多環式、炭化水素、ポリヘテロ環、大環状ポリエーテル、大環状ポリアミン、大環状ポリアミド、大環状ポリエステル、大環状ビサイクル、大環状トリサイクル、大環状テトラサイクル、ポダンド、ステロイド又は但し、Ｘ＝ＯＨ、ＳＨ又はＮＨ₂、であるもの。３．請求の範囲第２項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、又は但し、Ｘ＝Ｏ又はＳ、又は但し、Ｋ＝リジン又は但し、Ｘ、Ｙ＝Ｏ、Ｓ、ＮＨ；Ｋ、ｍ＝２〜６；１＝０〜５；及びｎ＝１〜６、であるもの。４．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、各オリゴマーが１０以下のモノマーを含有するもの。５．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、少なくとも１つのオリゴマーが、オリゴアミド、オリゴエステル、オリゴウレア、オリゴウレタン、オリゴアミン、オリゴエーテル、オリゴスルホンアミド、オリゴホスホンアミド、オリゴホスホネート、オリゴホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、ペプチドオリゴマー、シクロファン又はこれらのモノマーの混合物であるもの。６．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、少なくとも１つのオリゴマーが、オリゴアミド、オリゴエステル、オリゴウレア、オリゴウレタン、オリゴアミン、オリゴエーテル、オリゴスルホンアミド、オリゴホスホンアミド、オリゴホスホネート、オリゴホスフェート、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、シクロファン又はペプチドオリゴマーより成る群から選択されるオリゴマーの２以上の独特のクラスの組み合わせであるもの。７．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該オリゴマーが異なるもの。８．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該オリゴマーが同じであるもの。９．２以上のペプチドオリゴマーに共有結合的に結合された多官能性ステロイドテンプレートを含有する合成レセプターであって、該ペプチドオリゴマーが、独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうるもの。１０．請求の範囲第９項に記載の合成レセプターであって、該多官能性ステロイドテンプレートが、ウルソデオキシコール酸、ヒオデオキシコール酸、アルファーアポコール酸、又はであるもの。１１．請求の範囲第９項に記載の合成レセプターであって、該ペプチドオリゴマーが少なくとも２つのアミノ酸を含有するもの。１２．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、色素、蛍光標識又は放射性標識に更に結合されたもの。１３．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、該合成レセプターを唯一同定する同定基に更に結合されているもの。１４．請求の範囲第１３項に記載の合成レセプターであって、該同定基が、合成レセプターのオリゴマーの合成及び分子構造を唯一同定するもの。１５．請求の範囲第１３項に記載の合成レセプターであって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子であるもの。１６．請求の範囲第１３項に記載の合成レセプターであって、該同定基がオリゴヌクレオチドであるもの。１７．固体支持体及び２以上のオリゴマーに共有結合的に結合された多官能性有機テンプレートを含有する合成レセプターであって、該ペプチドオリゴマーが、独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうるもの。１８．請求の範囲第１７項に記載の合成レセプターであって、該固体支持体が、セルロース、制御された細孔のガラス、シリカゲル、ポリスチレン、ＰＥＧ −ポリスチレン、ジビニルベンゼンで任意に交差結合されたポリスチレン、グラフトコポリ、ポリアクリルアミド、ラテックス、Ｎ，Ｎ’−ビス−アクリロイルエチレンジアミンで任意に交差結合されたポリジメチルアクリルアミド、ポリマーでコートされたガラス、又は低分子量非交差結合ポリスチレンより成る粒子であり、該粒子が、長球状、キャピラリー、中空繊維、針、又は固体繊維であるもの。１９．請求の範囲第９項に記載の合成レセプターであって、該多官能性ステロイドテンプレートが、固体支持体に共有結合的に結合されているもの。２０．請求の範囲第１９項に記載の合成レセプターであって、該固体支持体が、ポリスチレン又はＰＥＧ−ポリスチレン粒子であるもの。２１．請求の範囲第１７項に記載の合成レセプターであって、該固体支持体が、該固体支持体に共有結合的に結合された合成レセプターを唯一同定する同定基に更に結合されるもの。２２．請求の範囲第２１項に記載の合成レセプターであって、該同定基が、合成レセプターのオリゴマーの合成及び分子構造を唯一同定するもの。２３．請求の範囲第２１項に記載の合成レセプターであって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子であるもの。２４．請求の範囲第２１項に記載の合成レセプターであって、該同定基がオリゴヌクレオチドであるもの。２５．複数の独特の合成レセプターを含有するライブラリーであって、各合成レセプターが、２以上のオリゴマー（これは独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうる。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレートを含有するもの。２６．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該ライブラリーが少なくとも１００の独特の合成レセプターを含有するもの。２７．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該ライブラリーが、少なくとも１０³の独特の合成レセプター、好ましくは１０⁶又は１０⁹の独特な合成レセプターのメンバーを含有するもの。２８．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該合成レセプターが固体支持体に共有結合的に結合されたもの。２９．請求の範囲第２８項に記載のライブラリーであって、少なくとも１００の単一の固体支持体があるもの。３０．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該固体支持体が、該合成レセプターを唯一同定する１以上の同定基に結合されているもの。３１．請求の範囲第２５項に記載のライブラリーであって、該多官能性有機テンプレートが、該合成レセプターを唯一同定する１以上の同定基に更に結合されているもの。３２．請求の範囲第３０項に記載のライブラリーであって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子であるもの。３３．請求の範囲第３０項に記載のライブラリーであって、該同定基がオリゴヌクレオチドであるもの。３４．請求の範囲第３１項に記載のライブラリーであって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子であるもの。３５．請求の範囲第３１項に記載のライブラリーであって、該同定基がオリゴヌクレオチドであるもの。３６．複数の異なった合成レセプターのメンバーを含有する同定基を有する合成レセプターライブラリーを合成する方法であって、各合成レセプターライブラリーのメンバーが、２以上のオリゴマー（これは独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうる。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレートを含有する単一のタイプの合成レセプターを結合した固体支持体を含有し、該方法が、ａ）反応容器内の固体支持体を多官能性有機テンプレートと反応すること、ｂ）結合された多官能性有機テンプレートを有する該固体支持体を複数の反応容器中に分配すること、ｃ）各反応容器内の固体支持体上の多官能性有機テンプレートを第一のオリゴマーモノマーと反応すること、ｄ）各反応容器内の固体支持体を第一の同定基と反応すること、ｅ）該固体支持体をプールすること、ｆ）該プールされた支持体を複数の反応容器に分配すること、ｇ）各反応容器内の固体支持体上の多官能性有機テンプレートを第二のオリゴマーモノマーと反応すること、ｈ）各反応容器内でプールされた固体支持体を第二の同定基と反応すること、及びｉ）（ｅ）から（ｈ）のステップを合成レセプターの各オリゴマーに対して少なくとも１回から２０回繰り返すことを具備した方法。３７．２以上のオリゴマー（これは独立に同じであるか、又は異なっていてもよく、独立に直鎖、環状又は分岐されうる。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート及び合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有する、１以上の同定基を含有する合成レセプターを合成する方法であって、ａ）第一のタイプの保護基でブロックされた第一のタイプの活性部位及び第二のタイプの保護基でブロックされた第二の活性部位を含有する多官能性固体支持体を調製すること、ｂ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第一タイプの保護基を除去し、これにより第一のタイプの活性部位を露出させること、ｃ）保護された多官能性有機テンプレートを第一のタイプの活性部位にカップリングすること、ｄ）該保護された多官能性有機テンプレートを活性化剤と反応し、第一のタイプの保護基を除去し、これによって第一のタイプの活性部位を露出させること、ｅ）保護されたオリゴマーモノマーを該脱保護された多官能性有機テンプレートにカップリングすること、ｆ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第二のタイプの保護基を除去し、これによって、第二のタイプの活性部位を露出すること、ｇ）保護された同定基を第二のタイプの活性部位にカップリングすること、及びｈ）ステップ（ｄ）から（ｇ）を合成レセプターの各オリゴマーに対して１から２０回繰り返すこと、を具備した方法。３８．２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有する、１以上の同定基を含有する合成レセプターを合成する方法であって、該方法が、ａ）保護された多官能性有機テンプレートを固体支持体にカップリングすること、ｂ）該保護された多官能性有機テンプレートを活性化剤と反応し、保護基を除去し、これによって活性部位を露出すること、ｃ）保護されたオリゴマーモノマーを該脱保護された多官能性有機テンプレートにカップリングすること、ｄ）同定基を固体支持体にカップリングすること、及びｅ）（ｂ）から（ｄ）のステップを各オリゴマーの合成レセプターに対して１から２０回繰り返すこと、のステップを具備する方法。３９．複数の異なった合成レセプターメンバーを含有する、同定基を有する合成レセプターライブラリーを製造する方法であって、各合成レセプターライブラリーのメンバーが単一のタイプの合成レセプターを結合した固体支持体を含有し、該単一のタイプの合成レセプターが２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び該合成レセプターを同定する１以上の同定基を含有し、該方法が、ａ）複数の反応容器内の固体支持体を分配すること、ｂ）各反応容器内の該固体支持体を第一のオリゴマーモノマーと反応すること、ｃ）各反応容器内の該固体支持体を第一の同定基と反応すること、ｄ）該固体支持体をプールすること、ｅ）該プールされた支持体を複数の反応容器に分配すること、ｆ）各反応容器内の固体支持体を第二のオリゴマーモノマーと反応すること、ｇ）各反応容器内の該プールされた固体支持体を第二の同定基と反応すること、ｈ）（ｄ）から（ｇ）のステップを各オリゴマーに対して少なくとも１回から２０回繰り返すこと、及びｉ）各反応容器内の固体支持体を多官能性有機テンプレートと反応すること、のステップを具備する方法。４０．２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有する、１以上の同定基を有する合成レセプターを合成するための方法であって、該方法が、ａ）保護基でブロックされた活性部位を含有する多官能性固体支持体を調製すること、ｂ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第一タイプの保護基を除去し、これによって第一のタイプの活性部位を露出させること、ｃ）保護されたオリゴマーモノマーを固体支持体の第一のタイプの活性部位にカップリングすること、ｄ）該固体支持体を活性化剤と反応し、第二のタイプの保護基を除去し、これによって第二のタイプの活性部位を露出させること、ｅ）保護された同定基を第二のタイプの活性部位にカップリングすること、及びｆ）（ｂ）から（ｅ）のステップを各オリゴマーに対して１から２０回繰り返すこと、ｇ）該固体支持体上の保護されたオリゴマーを活性化剤と反応し、保護基を除去し、これによって活性部位を露出すること、ｈ）多官能性有機テンプレートを該活性部位にカップリングすること、のステップを具備する方法。４１．２以上のオリゴマー（これらは、独立に同じであっても、又は異なっていてもよく、更に独立に直鎖であっても、環状であっても、又は枝分かれしていてもよい。）に共有結合的に結合された多官能性有機テンプレート、及び該合成レセプターのオリゴマーの分子構造を同定する固体支持体に結合された１以上の同定基を含有する、１以上の同定基を有する合成レセプターを合成するための方法であって、該方法が、ａ）保護されたオリゴマーモノマーを固体支持体にカップリングすること、ｂ）同定基を固体支持体にカップリングすること、及びｃ）（ａ）及び（ｂ）のステップを各オリゴマーに対して１から２０回繰り返すこと、ｄ）該固体支持体上の保護されたオリゴマーを活性化剤と反応し、保護基を除去し、これによって活性部位を露出すること、ｅ）多官能性有機テンプレートをオリゴマーにカップリングすること、のステップを具備する方法。４２．請求の範囲第３６、３７、３８、３９、４０又は４１に記載の方法であって、該同定基が、ピコモルレベルまで識別でき、かつ検出できる１の安定な化学分子又は複数の安定な化学分子である方法。４３．請求の範囲第３６、３７、３８、又は３９項に記載の方法であって、該同定基がオリゴヌクレオチドである方法。４４．請求の範囲第３６、３７、３８、３９、４０又は４１に記載の方法であって、各反応容器内の多官能性有機テンプレートにカップリングされた固体支持体が、まず同定基と反応され、次いで該固体支持体上の該多官能性有機テンプレートがオリゴマーモノマーと反応される方法。４５．注目の受容体分子に対して適切な合成レセプターを決定するための合成レセプターライブラリーをアッセイする方法であって、該方法が、ａ）請求の範囲第２５項に記載の合成レセプターライブラリーを生じさせること、ｂ）該合成レセプターライブラリーと注目の受容体分子とを、該受容体分子が合成レセプターライブラリーの１以上の適切な合成レセプターと相互作用し、これらに結合するような条件下で接触すること、ｃ）受容体分子との結合を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｄ）適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを含有する方法。４６．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、導入される該受容体分子がラベルに結合されている方法。４７．請求の範囲第４６項に記載の方法であって、導入された受容体分子に結合されたラベルが、受容体分子と相互作用する適切な合成レセプターを同定する方法。４８．請求の範囲第４７項に記載の方法であって、該ラベルが色素、蛍光標識又は放射性標識である方法。４９．請求の範囲第４７項に記載の方法であって、該受容体分子が、抗体、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、脂質、薬物、金属又は小さな分子である方法。５０．請求の範囲第４９項に記載の方法であって、該タンパク質受容体分子が、ヒト、ウシ、ブタ、トリ、ヒツジ、魚、及びウマ成長ホルモン、及び対応する天然に存在する成長ホルモンの生物学的活性を有するこれらのポリペプチド類似体を包含する群から選択される成長ホルモンである方法。５１．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、該受容体分子が、全細胞、ウイルス又はバクテリアに存在する方法。５２．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、該受容体分子が、以下の癌に関連したガンに関係するガン細胞、即ち、メラノーマ、唇、舌、口、咽頭、食道、胃、小腸、結腸、直腸、肝臓、膵臓、喉頭、肺、骨、結合組織、皮膚、胸部、子宮、卵巣、前立腺、精巣、膀胱、腎臓、眼、脳、中枢神経系、内分泌腺、血液及びリンパ組織、又は白血病である方法。５３．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、該合成レセプターが、他の異なった受容体分子の存在下で受容体分子と選択的に結合する方法。５４．生物学的活性を示す適切な合成レセプターに対して合成レセプターライブラリーをアッセイする方法であって、該方法が、ａ）請求の範囲第２５項に記載の合成レセプターライブラリーを生成すること、ｂ）in situで合成レセプターライブラリーの適切な合成レセプターの生物学的活性を検出すること、ｃ）生物学的活性を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｄ）ステップｃ）で単離された適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを具備する方法。５５．請求の範囲第５４項に記載の方法であって、該生物学的活性が、細胞毒性、抗腫瘍活性、抗菌活性、抗ウイルス活性、抗真菌活性、抗寄生虫活性、成長因子活性、成長阻害活性、ホルモン活性、神経伝達物質活性、免疫調節活性、調節活性又は酵素活性である方法。５６．請求の範囲第４５項又は第５４項に記載の方法であって、注目の活性が、ナノモルの濃度で決定される方法。５７．治療剤として使用するための適切な合成レセプターを決定するための請求の範囲第４５項又は第５４項に記載の方法。５８．診断薬として使用するための適切な合成レセプターを決定するための請求の範囲第４５項又は第５４項に記載の方法。５９．クロマトグラフィー分離剤として使用するための適切な合成レセプターを決定するための請求の範囲第４５項に記載の方法。６０．請求の範囲第４５項に記載の方法であって、該適切な合成レセプターが、遷移状態類似体に選択的に結合する方法。６１．反応を触媒する適切な合成レセプターに対して合成レセプターライブラリーをアッセイするための方法であって、該方法が、ａ）請求の範囲第２５項に記載の合成レセプターライブラリーを生成すること、ｂ）触媒された反応生成物が決定されるような基質を該合成レセプターライブラリーに導入すること、ｃ）触媒活性を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｄ）ステップｃ）で単離された適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを具備する方法。６２．酵素で触媒される反応を阻害する適切な合成レセプターに対して合成レセプターライブラリーをアッセイするための方法であって、該方法が、ａ）請求の範囲第２５項に記載の合成レセプターライブラリーを生成すること、ｂ）in situで注目の反応を触媒する酵素を合成レセプターライブラリーに導入すること、ｃ）in situで注目の酵素触媒反応の適切な合成レセプターによって阻害を検出すること、ｄ）in situで注目の酵素触媒反応の阻害を示す適切な合成レセプターを単離すること、及びｅ）ステップｃ）で単離された適切な合成レセプターの分子構造を決定すること、のステップを具備する方法。６３．請求の範囲第２項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、であるもの。６４．請求の範囲第２項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、であるもの。６５．請求の範囲第１項に記載の合成レセプターであって、該多官能性有機テンプレートが、であるもの。