JPH09510231A

JPH09510231A - 二重作用心血管剤としての酸化窒素と心血管アミンとの複合体

Info

Publication number: JPH09510231A
Application number: JP7524027A
Authority: JP
Inventors: ハットセル，トーマス・シー
Original assignee: コメディカス・インコーポレイテッド
Priority date: 1994-03-17
Filing date: 1995-02-17
Publication date: 1997-10-14
Also published as: AU684000B2; EP0788354A1; AU1878395A; CA2184753A1; US5482925A; WO1995024898A1

Abstract

(57)【要約】酸化窒素（ＮＯ）およびアミン（このアミンは少なくとも１つの一級または二級アミン基を有する心血管薬剤である。）からなる新規複合体を提供し、得られ複合体は、生理学的条件下に、インビボにて二重活性成分であるＮＯおよび既知の心血管剤を放出することができる。この複合体は心血管疾患の処置や再発狭窄症の予防的または治療的処置に使用される。

Description

【発明の詳細な説明】二重作用心血管剤としての酸化窒素と心血管アミンとの複合体発明の分野本発明は酸化窒素と、既知の心血管剤から誘導されるアミンとの新規な複合体に関し、これは、生理学的条件下に、酸化窒素および対応する心血管アミンを放出して、心血管疾患の処置、とくに再発狭窄症の予防的および／または治療的処置において二重活性を示す。発明の背景内皮由来の弛緩因子（ＥＤＲＦ）は不安定な体液性薬剤であり、これは、血管平滑筋の弛緩を伴う相互作用薬剤のカスケードの一部を構成する。したがって、ＥＤＲＦは血流の血管抵抗の制御や血圧の制御において重要である。ある種の血管拡張剤は、ＥＤＲＦを内皮細胞から強制的に放出させることによって作用する〔Furchgott,Ann,Rev,Pharamacol.Toxicol.24,175〜197,1984〕。近年、ファルマー（Falmer）らは、ＥＤＲＦは単純な分子の酸化窒素（ＮＯ）と同じであることを示した〔Nature,317,524〜526,1987〕。数年の間、三硝酸グリセリンや亜硝酸アミルやＮａＮＯ₂やニトロプルシド・ナトリウム（ＳＮＰ）などのように、ＥＤＲＦの作用を模した多数のニトロ血管拡張剤は、それらの共通の基、即ちＮＯ（これもまた血管拡張剤である。）への変換によってそのように挙動するものと仮定されていた〔Kruszyna et al.,Tox.& Appl.Pharmacol.91,429〜438,1987; Ignarro,FASEB J.3,31〜36,1989; Ignarro et al.,Pharmacol．Exper.Therapeu tics,218(3)、739〜749,1981参照〕。キーファ（Keefer）らは、米国特許第４９５４５２６号、第５０３９７０５号および第５１５５１３７号において、一級アミン、二級アミンおよびポリアミン／ＮＯ複合体、それらの製造法、およびかかる複合体のその処置が必要な哺乳類への投与による哺乳類の心血管の疾患の処置法を開示する。これらの特許の記載をもって本明細書の記載とする。キーファらは、近年、係属中の米国特許出願において、前記ＮＯ複合体は再発狭窄症の予防的および／または治療的処置において特に使用できる旨、報告している。再発狭窄症は３つの力学的に明確な事象を特徴とする：（１）ある種の患者における、バルーン（balloon）血管形成後数分〜数時間以内に血管の急激な閉塞につながる弾性的再コイル化現象、（２）初期段階（バルーン損傷後２日以内）での血小板の凝集および血栓形成および（３）後期段階（バルーン損傷後、約２週間後）での平滑筋細胞の増殖。弾性的再コイル化現象は過剰に引き伸ばされた血管部分の弛緩を意味する。アトレクトミイ（atherectomy）試験片の顕微鏡的実験から得られた最近の観察によれば〔Johnson et al.,J.Am.Coll.Cardio、17,419〜425,1990〕、このメカニズムは、初期の血管造影図に基づき成功したものと分類される血管形成法の２５％まで起こりうることを示唆する。この１つ有り得る説明によれば、内皮細胞が血管形成過程で破壊され、この内皮細胞の機能不全が血管痙攣をもたらす。内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）は血管緊張の制御に介在することが示されており、したがって、この血管痙攣に関与しうる。ＥＤＲＦは酸化窒素と同じであることが示されているため〔Palmer et al.,Nature,317,524〜526,1987〕、内皮細胞がバルーン血管形成の間に破壊されたときに酸化窒素はＥＤＲＦの機能的損失を補うことができ、よって急激な血管閉塞を防止できるであろうと期待するのは合理的でである。血管損傷の数分以内に、血小板の凝集体およびフィブリンが形成されると共に赤血球細胞が閉塞される〔Harker,Am.J.Cardiol,60,21B-28B,1987〕。これらトロンビンは平滑筋細胞のミトゲン（有糸分裂誘発因子）および誘引物質を含む。内皮下部面に対する血小板の付着が、この段階の再発狭窄症の間に生じる有糸分裂誘発活動の大きな要因となる〔Baumgartner and Muggil,in Gordon(ed):Plate lets in Biology and Pathology,23〜60,1976〕。以下に説明する動物モデルにおける実験データは、インビトロおよびインビボの両方において、血小板の凝集および付着の防止に関し酸化窒素の有効性を明確に示している。よって、酸化窒素を哺乳類の血管損傷部位に送達すれば、これらと同じ活性が生じることを期待するのは、合理的である。恐らく、前記したような損傷血小板からのミトゲン放出によるものであろうが、平滑筋細胞はバルーン損傷後２〜３日の間に増殖サイクルに入り、著しく高度な増殖が７日以内に完了する〔Circ.Res.56,139〜145,1986〕。恐らく、これら平滑筋細胞の増殖は、初期バルーン血管形成法を施した患者の１／３〜１／２において見られる再発狭窄症につながるであろう。以下に記載のように、ラットおよびヒト大動脈誘発平滑筋細胞を用いるインビトロモデル系の実験データは、約濃度２０〜１００μＭの酸化窒素が平滑筋細胞の増殖速度を５０％抑制することが明確に示されている。よって、約７日までの期間に血管損傷部位へ送達される高濃度、例えば約２００〜５００μＭでの酸化窒素は、再発狭窄症および関連症状において予防的および／または治療的効果を期待するのは合理的である。従来から、再発狭窄症軽減のために多数の方法が試みられてきたが、これらの方法は、再発狭窄症が生じる事象の複雑なカスケードにおける唯一初期段階での介在にしか焦点を合わせていない。キーファらによって開示された酸化窒素のポリマー形態での使用は、大きな価値を示す再発狭窄症自体の治療法を提供するだけでなく、かかる変性酸化窒素の効果を最大にするような、酸化窒素を適した量および間隔で制御しながら送達する方法を提供する。発明の概要心血管疾患の処置や、再発狭窄症の予防的および／または治療的処置に著しく有用なある種の薬剤を提供するもので、かかる薬剤は、少なくとも１つの一級および／または二級アミノ基を含んでいるため、ＮＯ複合体を形成可能である。すなわち、本発明の１つの要旨は、生理学的条件下にＮＯおよび対応する心血管アミンをインビボで放出して二重活性を示す化合物を開発することである。本発明の別の要旨は、本明細書に開示のＮＯ心血管アミン複合体を用いる心血管疾患の治療法を提供することであり、またかかる複合体を有効量含有する医薬組成物を提供することである。さらに、本発明の別の要旨は、本願明細書に開示の心血管アミンＮＯ複合体を用いる再発狭窄症の予防的および／または治療的処置法およびそのために適した医薬組成物を提供することてある。したがって、本発明は式：〔式中、Ａは少なくとも１つの二級または一級アミン基を有する心血管アミン基、Ｍ^+xは薬学上許容されるカチオン、ｘはカチオンの価数、ａは少なくとも１、ｂおよびｃは中性化合物が得られるような最小の整数を意味する。〕で示される化合物であって、生理学的条件下にＮＯおよび式：ＡＨの心血管アミンを放出可能である化合物である。本発明の第２の要旨は、有効量の式Ｉの化合物および薬学上許容される担体を含んでなる二重作用心血管医薬組成物であって、生理学的条件下にＮＯおよび対応する心血管薬剤を放出可能な組成物、および心血管の疾患を処置する必要のあるホストに上記医薬組成物を投与することを含んでなる心血管の疾患を処置する方法である。前記ＮＯ心血管アミン複合体のうち、好適なものは、アルギニン、アンギオペプチン、ヘパリン、ヒルジンおよびＲＧＤ配列を有するペプチドのような複合体形成に利用可能なアミノ基を有する公知の活性血管拡張剤由来のものである。ＮＯ複合体として好適な化合物は、生理学的条件下にその必要があるホストにおいて有効量のＮＯおよび特定の心血管アミンを放出すると再発狭窄症の予防的および／または治療的処置が可能である。発明の詳説Ａが心血管アミンであることは、Ａが少なくとも１つの一級または二級アミノ基を有する共に、心血管疾患を処置するための既知の治療特性を示す任意の既知化合物であることを意味し、この化合物は、ＮＯと反応させると複合体を形成し、この複合体は生理学的条件下にＮＯおよびその前駆体である心血管アミンを放出する。生理学的条件なる語は、投与時点に身体において見られるか、または当該化合物の分布後に任意の手段によって直接的にまたは間接的に血流中において見られる化学的、物理的および生物学的条件を意味する。化合物は、一般に静脈内投与で用いられるため、要すれば、可溶化剤または生物学上許容される有機溶媒を用い、少なくとも水溶液中にいくらか可溶性を示すべきである。少なくとも１つの一級または二級アミノ基なる語は、ＮＯと反応して誘導複合体を形成可能であって所望の治療的特性を示すような、１またはそれ以上の一級または二級アミノ基またはそれらの混合物を有する化合物を意味する。一級および二級アミノ基の両方を有する化合物は、Ｎ₂Ｏ₂基が好適には二級アミノ基上に形成される複合体を形成する。薬学上許容されるカチオンなる語は、化合物が用いた用量で不安定にならないかまたは水不溶性にならないかまたは毒性を示さないような、任意のカチオンを意味する。これらのカチオンは医薬分野の当業者に既知である。一般に、カチオンは第１族または第２族のイオン、たとえばナトリウム、カリウム、カルシウムもしくはマグネシウムイオンまたは、式：ＮＲ₂Ｒ₃Ｒ₄Ｒ₅ ⁺〔式中、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は各々独立してＨ、炭素数１〜４のアルキル、炭素数５〜６のシクロアルキル、ベンジルおよびフェニルからなる群から選ばれる。〕であってよい。最も好適なカチオンはＮａ⁺、Ｋ⁺、Ｃａ⁺²、Ｍｇ⁺²およびＮＨ₄ ⁺である。式Ｉの添え字ｂおよびｃは、当該塩の実験式において判明した特定イオンの数を意味する。電気的的に中性の化合物をもたらすような総数のうち、最小の数値を用いる。よって、アニオンがＯＮ₂Ｏ₂ ^-2である場合、カチオンはＮａ⁺で、ｂは１で、ｃは２である。本発明の化合物を製造するには、まず好適な心血管アミンを得、次いでＮＯと好適な条件下に反応させて、所望の化合物を得る。心血管アミンは、既知であるので、市場の供給源から入手するか、または常法により調製する。本発明のＮＯ心血管アミン複合体は、適した心血管アミンとＮＯとを、ドラゴ（Drago）ら開示の方法と類似の方法によって反応させて得ることができる〔R.S .Drago et al.,J.Am.Chem.Soc.,83,1819〜1822,1961〕。ドラゴの方法は、本願明細書開示の本発明の化合物を製造するのに使用した場合、ＮＯの好適なアミン冷却溶液（約−７８℃）への泡立てが必要となり、また形成した生成物を沈殿させることができる。これとは別の方法として、ダルゴの前記文献には硝酸付加物形成用の高圧技術が開示されており、この内容をもって本願明細書の記載とする。本願明細書開示のＮＯ複合体形成の間、選択されたアミン上の窒素原子が複数存在するにも拘わらず、ただ１つのＮ₂Ｏ₂ ^-基のみが各分子に結合することが注目される。これは、ＮＯ付加塩は、ダルゴら教示のいずれの条件下でも形成後直ちに沈殿するため、ＮＯとの付加的な反応に利用されないという事実によるものである。本発明の所望のＮＯ付加塩を一旦調製すれば、本願明細書に開示のようなその薬学上許容される塩も所望により調製することができる。かかる塩の調製に使用される技術として、たとえば、本願明細書開示の式Ｉの化合物の１つを水酸化カリウムとエタノールまたは同様な溶液中で反応させることによってそのカリウム塩を調製する。同様に、他の塩のうち、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウム塩を調製することができる。本発明の化合物は、その化学構造のため好適には静脈内投与され、また適した薬学上許容される担体または希釈剤と混合して医薬組成物を製造することができる。たとえば、本明細書に開示の式Ｉの化合物を注入用の製品として、かかる投与経路に有用な方法で配合することができる。以下の方法および賦形剤はそのような有用で許容される方法の例示である。もっとも、医薬組成物または投与経路に関し、以下に記載のものに本発明の範囲は制限されるものと理解すべきでない。本発明の化合物は、当該化合物を水性または非水性溶媒、たとえば植物油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコール中に（所望により、通常の添加剤、たとえば可溶化剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤および保存剤と共に）溶解、懸濁または乳化することによって、注入用の製品に配合することができる。本発明の化合物の非経口投与には、薬学上許容される担体、例えばデキストロース、注入用滅菌水、ＵＳＰまたは生理食塩水を含めることもできる。経口投与に適した組成は、以下のものからなる：（ａ）液体溶液：有効量のポリマー結合組成物を、例えば希釈剤（例えば、水または生理食塩水）中に溶解したもの、（ｂ）カプセル、サシエ剤または錠剤：各々、所定量の活性成分を固体または顆粒として含む、（ｃ）適した溶液中の懸濁液、および（ｄ）好適な乳化剤。錠剤形には、１またはそれ以上のラクトース、マンニトール、コーンスターチ、ポテトスターチ、微結晶セルロース、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化シリコン、クロスカルメローゼ（croscarmellose）・ナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸および他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤財、保存剤、フレイバー剤、および薬学上許容される担体が包含される。ロゼンジ形態は、活性成分をフレイバー、通常はショ糖およびアカシアまたはトラガカント中に含んでなることができる。同様にトローチ形態は、活性成分を不活性基剤、例えばゼラチン、グリセリン、ショ糖、アカシア、乳濁液等中に含んでなり、また活性剤に加え、当該分野で既知の担体を含んでいる。心血管剤として使用される本発明の化合物の量は、もちろん、投与された化合物、発症した心血管の疾患のタイプや選択した投与経路などに従い、変化する。適した投与量は、高血圧症や動脈硬化症や脳血管痙攣症や冠状血管痙攣症の患者に静脈内投与経路で治療した場合、約０.０１〜１０.０mg／体重１kg／日とすベきと考えられる。好適な投与は、もちろん具体的な心血管疾患の治療にちょうど充分な量であり、好適には約０.０５〜５.０mg／体重１kg／日である。また本発明は哺乳類の再発狭窄症および関連疾患の予防的および治療的処置法を提供する。予防的方法には、予防有効量のポリマー組成物（これは、ポリマーと当該ポリマーに結合した心血管アミンＮＯ複合体を含んでなり、酸化窒素および心血管アミンを再発狭窄症また関連疾患の危険がある哺乳類の所定の部位へ放出可能である。）を用いる送達手段によって、心血管アミンＮＯ複合体の哺乳類（とくにヒト）へ局所投与することが包含される。治療的方法には、治療有効量のポリマー組成物の再発狭窄症または関連疾患をすでに患っている部位への送達手段による、当該複合体の局所投与が包含される。局所投与なる語は、再発狭窄症または関連疾患を患っている部位もしくはその付近またはその危険がある部位もしくはその付近へ投与することを意味する。送達なる語は、心血管アミンＮＯ複合体放出ポリマー組成物を投与しうるような多数の投与形態を意味し、例えば、以下に詳述するように血管インプラント、ステント、心臓弁、縫合法、薬剤ポンプ、カテーテル、ウイーピング（weeeping）バルーンおよび血管付着手段が挙げられる。予防的および治療的有効量は、その投与量に関し、以下に詳述する。特定の哺乳類が再発狭窄症または関連疾患の危険があるか否かについては、性別およびこれまでの病歴、例えば、当業者に既知であるような糖尿病メリタス（me litus）、禁煙の継続、不安定または変性狭心症、高コレステロール血症、心筋梗塞の有無によって決定することができる。同様に、特定の哺乳類が再発狭窄症または関連疾患によって影響を受けているか否かについては、当該分野で知られているように、影響を受けている血管の数およびタイプ、血管内の位置（近位または末梢）、および当初の狭窄症の状態（閉塞の長さや程度、損傷の特異性、開口位置、石灰化の程度）によって決定することができる。本発明はまた、以下に詳述するように、本発明の予防的および治療的方法に使用される種々の送達手段を提供する。本発明は、心血管アミンＮＯ複合体のポリマーマトリックスへの組み込みによって有用な医薬を提供できるという、知見に基づく。したがって、複合体なる語は、本願明細書に開示の用語として「ポリマーに結合したもの」を意味する。本発明者らによれば、複合体をポリマーマトリックスヘ組み込むことによって、対象となる生物学的部位への特異性を示す状態で適用しうるポリマーマ結合心血管アミンＮＯ複合体組成物を得られることが判明した。ポリマー結合付加物組成物の部位への特異的な適用は、活性ＮＯおよび心血管アミンの選択性を向上させる。仮に、ポリマーに結合した複合体が必然的に局在化すれば、その放出の作用は当該複合体が接触する組織に集中する。ポリマーが可溶性である場合でも、作用の選択性は、例えば、フィブリンや組織トロンボプラスチンのような標的組織に特異的な抗体に付着させるかまたは当該抗体を誘導化することによって、変えることができる。さらに、複合体のポリマーマトリックス内への組み込みは、二重作用薬剤の比較的急速な放出に関し、当該心血管アミンＮＯ複合体の当該特性を減少させることができる。これにより、ＮＯおよび心血管剤の放出を長期間のものとすることができと共に、効率的な投与が可能となって、所望の生物学的作用を達成でき、その結果、頻繁な投与を減少させることができる。いずれの特定の理論に拘束されるものではないが、本発明のポリマー結合心血管アミンＮＯ複合体の薬剤放出についての長期寿命は、組成物の物理的構造および静電作用の両方の貢献によるものであると、考えられる。すなわち、ポリマーが不溶性の固体である場合、当該粒子の表面近傍における二重作用薬剤複合体は、急速な放出に利用される一方、より深く埋め込まれた複合体は、立体的に遮蔽され、二重作用薬剤が媒体内でそのように作用するのにより長い時間および／またはエネルギーが必要である。意外にも、Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基の近傍において正電荷を増加させると、酸化窒素生成の半減期を長くさせる傾向を示すことが判明した。この速度遅延化の機構は、単に正電荷の反発相互作用の貢献によるものである。すなわち、Ｎ₂Ｏ₂ ^-基の近傍におけるＨ⁺反発作用を示す正電荷の数の増加は、Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基上の正電荷Ｈ⁺イオンの攻撃を抑制し、そのＨ⁺イオン触媒化分解反応の速度を遅延化させる。ポリマーに結合した心血管アミンＮＯ複合体の酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基は、一般に水性環境においてかかる水性環境との接触によって酸化窒素を自発的に放出することができる。すなわち、それは、三硝酸グリセリルやニトロプルシドナトリウムにとって必要なような電子移動または酸化還元反応によって活性化される必要がない。もっとも、本発明の実施に有用な酸化窒素／核親和性複合体のある種のものは、対象となる特定細胞の近傍における酸化窒素放出Ａ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］^-基の遊離のみに必要な特定の手段によって、活性化が必要である。１つの例として、保護基をアニオン性［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］^-官能基に共有結合させることによって、酸化窒素の放出を、代謝により保護基をはずしうる器官に当該分子が到着するまで、延期させる手段が得られる。対象となる腫瘍や生物学的疾患や細胞や組織に対し特異的な酵素によって選択的に切断される保護基を選択すると、例えば、酸化窒素／心血管アミン複合体の作用は、標的として使用され、所望の効果を最大にすることができる。本発明のポリマー結合心血管アミンＮＯ複合体組成物は、酸化窒素と心血管薬剤を水溶液中に放出することができるが、かかる化合物は、好適には酸化窒素および心血管薬剤を生理学的条件下に放出する。任意で広範なポリマーを本発明の実施に使用しうる。選択されるポリマーは生物学的に許容されることのみ、必要である。本発明の使用に適したポリマーの例として、ポリオレフィン、例えばポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリビニリデン・ジフルオライドおよびポリビニルクロライド、ポリエチレンイミンまたはそれらの誘導体、ポリエーテル、例えばポリエチレングリコール、ポリエステル、例えばポリ（ラクチド／グリコリド）、ポリアミド、例えばナイロン、ポリウレタン、生ポリマー、例えばペプチド、蛋白質、オリゴヌクレオチド、抗体および核酸、スターバースト・デンドリマーズ（starburst dendrimers）などが挙げられる。本発明の使用に適したポリマーの物理的および構造的特性は、制限されるものではないが、最終の使用の用途に依存する。当業者にわかるように、本発明のポリマー結合酸化窒素／核親和性付加物組成物は、局所的であって比較的短期間の投与またはこれに類似する投与を意図しており、また生分解性である必要はない。ある種の用途、例えば、後期血管形成法、環状血管バイパス手術、血管移植インプラントに関連する初期過形成などについて、ポリマー結合組成物のポリマーは、生理学的環境においてゆっくり溶解するか、または生分解性であることが望ましい。ポリマー結合酸化窒素放出組成物は、広範な種々の形態の送達手段によって投与することができる。任意の送達手段は、酸化窒素の一体性をその放出前に充分に保護すべきであって、また酸化窒素の放出を再発狭窄症の予防または治療に有効な手段として役立つような速度、量および配置となるように、制御すべきである。例えば、局所投与用の送達手段は、次のものに制限されるものではないが、縫合、血管インプラント（内腔内用、血管外周囲用）、ステント、心臓弁、薬剤ポンプ、薬剤送達カテーテル（圧力駆動型、イオン導入型）、自己付着手段（容器被覆）、例えば内腔内用インプラント、リポソーム、微粒子、微粒子球、ビーズ、デイスクまたは他の器具が挙げられる。全身投与用の送達手段は、次のものに制限されるものではないが、溶液、懸濁液、乳化液、カプセル、サシエ剤、錠剤、皮膚（局所）パッチ、ロゼンジ、エアロゾル、リポソーム、微粒子、微粒子球、ビーズなどが挙げられ、また、血管損傷部位への放出用のプロドラッグ、例えばコレステロール酸プロドラッグ、組織特異抗体、例えばフィブリンまたは組織トロンボプラスチン、および細胞認識配列を模した小さなペプチドおよび配列特異的オリゴヌクレオチド（前記参照）を包含する。ポリマーはそれ自体、送達手段の形態として役立つのに充分な構造を有することができる。これとは別の形態として、ポリマー結合組成物は、他のマトリックスや基質などの内部に組み込むことができ、またこれらの上に被覆することができ、またマイクロカプセル化などをすることができる。本発明の複合体は種々の異なる方法でポリマー支持体に結合することができる。例えば、前記化合物をポリマーと一緒に共沈させることによって、化合物をポリマーに結合させることができる。共沈には、例えばポリマーおよび心血管アミンＮＯ化合物の両方を溶解し、溶媒を蒸発させることが包含される。式Ｉの化合物はＮＯと既知の心血管アミンの両方をインビボで放出するため、好適な投与量はＮＯ複合体用に使用される選択心血管アミンの前記投与量範囲によって影響される。本発明の複合体についての２つの利点は、残留物やゴーストや、多数の不活性断片を生成することなく、２つの活性剤の同時投与および二重放出が可能な点に存在する。加えて、既知であって効果が確認されている心血管アミンを選択することによって、毒性に関する危惧を排除した。ＮＯ複合体を形成可能であるとくに好適な心血管アミンは、例えばアルギニン、アンギオペプチン、ヘパリン、ヒルジンまたＲＧＤ配列を有するペプチドである。生理学的に活性形のアルギニンは、Ｌ（＋）形態を有する異性体であり、以下の式で示される：Ｌ-アルギニンは、血管組織においてＮＯ形成用の生理学的前駆体として貢献している。ＮＯは血管緊張の制御を伴う。ウサギの冠大動脈において、Ｎ^G-モノメチル-Ｌ-アルギニン（Ｌ-ＮＭＭＡ）は、わずかではあるが重要な内皮依存性収縮を誘発すると共に、アセチルコリンによって誘発されるＮＯの放出およびＮＯによる弛緩を抑制する。Ｌ-アルギニンは、それ自体ではわずかな内皮依存性弛緩のみを誘発するのであるが、このアルギニンはＬ-ＮＭＭＡの作用全てに拮抗する。これらの結果によれば、脈管構造において、血圧の維持管理の役割を果たすＮＯを形成するためにＬ-アルギニンが連続的に利用されることが明確に示されている〔Moncada,S.,Palmer,R.M.J.,Higgs,E.A.“Biosynthesis of Nitric Oxide From L-Arginine．A Pathway for Regulation of Cell Function and Com munication”,Biochemical Pharamacology 38:1709-1715,1989；Radomdki,M.W., Palmer,R.M.,Moncada,S.,“An L-Arginine/Nitric Oxide Pathway Present in H uman Platelets Regulates Aggregation”,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:5193-51 97,1990参照〕。アンギオペプチンは、ソマトスタチンの環状オクタペプチド同族体であって、血管内膜筋の増殖を、ラット頸動脈、ウサギ大動脈、腸骨動脈および移植ウサギ心臓の環状動脈における内皮細胞の損傷に応じて著しく抑制する。この活性は、経皮的で経内腔的な環状血管形成ののちにおける再発狭窄症のもどりおよび／または変形を抑制することや、心臓移植後の環状アテローム性動脈硬化症の促進を防止するのにかかるペプチドを使用しうることを示唆する〔Conor F.Lundergan, MD,Marie L．Foegh,MD,Peter W.Ramwell,MD,“Peptide Inhibition of Myointim al Proliferation by Angiopeptin,ａ Somatostatin Analogue”,Journal of th e American College of Cardiology,17:132B-6B(1991)； J.V.Conte,M.L.,Foegh,D.Calcagno,R.B.Wallance and P.W.Ramwell,“Peptide I nhibitation of Myointimal Proliferation following Angioplasty in Rabbits ",Proceedings of the Fifth International Workshop on Aspiration Cytology and Other Noninvasive Methods of Diagnosis of Rejection in Transplanati on,March 27-29,1989,3686-3688； Clemmon,D.R.,VanWyk,J.J.,“Evidence for a Functional Role of Endogenousl y Produced Somatomedinlike Peptides in the Regulation of DNA Synthesis i n Cultured Human Fibroblasts and Procine Smooth Muscle Cells”,J.Clin.In vest.,75:1914-18,1985参照〕。ヘパリンは、グリコサンミノグリカンとして既知であって、抗凝固活性を示し、かつ種々の硫化多糖類鎖（これは、Ｄ−グリコサンミンおよびＬ−イジュロン酸またはＤ-グルクロン酸のいずれかの反復単位を有し、分子量範囲６０００〜３００００ダルトンである。）の均一な混合物である。ヘパリンは抗血栓剤または抗凝固剤として既知である。ヘパリンはまた損傷動脈において平滑筋細胞の増殖抑制に有用であることが報告されている〔Clowes,A.，Karnovsky,M.,“Supres sion by Heparin of Smooth Muscle Cell Proliferation Injury”,Nature,285: 623-625,1977; Guyton,J.,et al.,Cir.Res.,46:625-634,1980参照〕別の抗凝固剤はヒルジンであり、これは、アミノ酸組成に基づき分子量約１０８００のポリペプチドである。ヒルジンは、二カルボン酸を高い割合で含有し（これは、その酸特性を説明するものである。）、かつトリプトファン、メチオニンおよびアルギニンを含んでいないことを特徴とする。ヒルジンおよびヘパリンは近年、ブタの血管形成の間の急速な血小板血栓の沈降に対しトロンビン抑制剤として活性であることが報告されている〔Heras,M.,et al.,Circulation,79:657 -685,1989〕。ＲＧＤ配列を有するペプチド（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）はまた動脈平滑筋細胞の調節増殖に関連している〔Thyberg,J.,et al.,Arterioscreosis,10:966-980 ,1990〕。前記したような具体的な心血管剤は、少なくとも１またはそれ以上の一級また二級アミノ基を有すると共にＮＯ複合体を形成しうる心血管アミンである。これらの薬を放出すると、ＮＯの利点が得られるだけでなく、心血管アミン自体の特異的な心血管剤としての利点が得られる。心血管アミンＮＯ複合体の全身投与の実施例１．注入投与（静脈内、腹腔内）好適な量のＮＯ複合体をメスフラスコ内に計り込んでＮＯ複合体の貯蔵液を調製する。例えば、１０^-2Ｍ溶液については、心血管アミンＮＯ複合体０．０１ｍｏｌを１０ｍｌメスフラスコ内へ秤量する。数ｍｌの氷冷１０mMＮａＯＨに溶解し、次いで氷冷１０mMＮａＯＨで所定の容量にし、湿潤氷上に保持する。この貯蔵液から、過剰のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ＝７.４）を用いて投与液を調製する。例えば、１０^-5Ｍ投与液を調製し、１０^-2Ｍ貯蔵液１０μｌを１／１０００に希釈する。すなわち、氷冷ＰＢＳを用い１０mlにする。次いで、この投与液を用いて、単一用量または連続的注入液を哺乳類に与えることができる。例えば、子羊に１〜２μg／kg／分の速度で５分間連続注入するか、またはブタに１０μg／kgの割合で１日１回静脈内注射をする。２．経皮投与ＮＯ複合体を、プロピレングリコール中の充分に氷冷した１０％蒸留水に溶解して、好適な投与濃度、例えば５μmolの濃度を得る。溶液０.２mlを毛ぞりをした皮膚に１週間当たり３回適用した。これとは別の方法として、ＮＯ複合体を氷冷蒸留水に溶解し、次いで冷却プロピレングリコールで１０倍に希釈し、前記と同様に適用した。心血管アミンＮＯ複合体の局所投与の実施例（局所投与の利点は、（１）全身投与に比し、より迅速に標的部位に有効濃度の薬剤を到達させる能力があること、（２）全身投与よりも、局所投与を用いる場合の方が必要な用量が少ないこと、および（３）全身投与で観察される毒性作用に比し、局所投与で観察される毒性作用が少ないことである。）１．多孔質膜／イオン導入投与ＮＯ複合体を水に溶解し、氷冷しながら保持する。微孔質膜、例えば１５０Å のポリカルボネート膜（Nucleopore(商標名)：Costar Corporation,Cambridge,M AまたはFluoropore(商標名):Millipore Corporation,Bedford,MA）からつくられたバルーンカテーテルを血管内の血管形成部位に挿入する。ＮＯ複合体液を用いて、バルーンを損傷部位で膨張させる。電流（例えば、５ｍＡ、８〜１０Ｖ）をバルーンに１〜２分間通す。この間に、ＮＯ付加物１００〜３０００μgをバルーンを介して血管壁内へ移動させる。２．生分解性ポリマー穏やかな撹拌下に、少しづつ増量しながら、ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレン・ブロックコポリマー(Pluronic(商標名):F127NF,BASF,Corporation, Parsippany,NJ)を氷冷水またはリン酸緩衝生理的食塩水（ｐＨ７.４）に添加して、２５重量％溶液を調製した。ＮＯ複合体は、必要な投与量を得るのに適した量で水またはリン酸緩衝生理的食塩水中に含まれている。これにより、透明な溶液が得られ、この一部、例えば０.２mlを傷口がふさがる直前に、損傷した血管（例えばバルーンで損傷したラット頸動脈）の外周に添加することができる。得られたゲルは心血管アミンおよびＮＯを数時間〜数日間にわたり放出する。３．形成したポリマー系内での生分解性(ATRIGEL（商標名），ATRIGEL Labor atories，Fort Collins,Co) 必要量のＮＯ複合体を含むＮ−メチル−２−ピロリドンに、撹拌しながら、充分に乾燥した生分解性ポリマーを溶解して、５０重量％のポリマー溶液を得る。用いうるポリマーには、例えばポリ（ＤＬ-ラクチド）；７５／２５のポリ（ＤＬ-ラクチドーコーグリコシド）；および５０／５０のポリ（ＤＬ-ラクチド-コ-カプロラクトン）が包含される。得られた溶液は、例えば身体の腔内において水と接触すると、ゲルになる。この溶液の一部、例えば０.２mlを血管損傷域の周囲に噴射することができる。溶液のゲル化ののち、薬剤は、用いたポリマー系に応じてこの系から数日〜数週間溶出する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 47/48 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/64 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．式：〔式中、Ａは少なくとも１つの二級または一級アミン基を有する心血管アミン基、Ｍ^+xは薬学上許容されるカチオン、ｘはカチオンの価数、ａは少なくとも１、ｂおよびｃは中性化合物が得られるような最小の整数を意味する。〕で示される化合物であって、生理学的条件下にＮＯおよび式：ＡＨの心血管アミンを放出可能である化合物。２．Ａはアルギニンを放出可能な基である請求項１記載の化合物。３．Ａはアンギオペプチンを放出可能な基である請求項１記載の化合物。４．Ａはヘパリンを放出可能な基である請求項１記載の化合物。５．Ａはヒルジンを放出可能な基である請求項１記載の化合物。６．ＡはＲＧＤ配列を有するペプチドを放出可能な基である請求項１記載の化合物。７．有効量の、式：で示される請求項１記載の化合物および薬学上許容される担体を含んでなる二重作用心血管医薬組成物であって、生理学的条件下にＮＯおよび対応する心血管薬剤を放出可能な組成物。８．前記化合物の有効量はＮＯと共に放出される心血管薬剤の確立した用量範囲に相当する請求項７記載の組成物。９．Ａは、アルギニン、アンギオペプチン、ヘパリン、ヒルジンおよびＲＧＤ配列のペプチドからなる群から選ばれる化合物から誘導される心血管薬剤基である請求項７記載の組成物。１０．心血管の疾患を処置する必要のあるホストに請求項７記載の二重作用心血管医薬組成物を投与することを含んでなる心血管の疾患を処置する方法。１１．再発狭窄症を予防的または治療的に処置することが必要なホストに、請求項９記載の予防または治療有効量の二重活性医薬組成物を投与することを含んでなる再発狭窄症を予防的または治療的に処置する方法。