JPH09505812A

JPH09505812A - 腸疾患の治療方法

Info

Publication number: JPH09505812A
Application number: JP7515299A
Authority: JP
Inventors: ダグラスフィッシャージャクソン，グラハム
Original assignee: ユニサーチリミテッド
Priority date: 1993-12-01
Filing date: 1994-12-01
Publication date: 1997-06-10
Also published as: CA2177570A1; EP0732938A4; EP0732938A1; WO1995015179A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、患者の腸の管腔内のＴＮＦレベルの上昇によって引き起こされた腸疾患の治療または予防方法を提供するものである。この方法は、管腔内のＴＮＦの作用を低減、あるいは管腔内のＴＮＦの産生または蓄積を低減する成分を患者に投与することを含む。この成分は、既知の抗ＴＮＦ成分のいずれであってもよいが、抗ＴＮＦ抗体が好ましい。また、この成分は、直接的に腸に投与されることが好ましい。

Description

【発明の詳細な説明】腸疾患の治療方法本発明は、腸疾患の治療方法に関する。この方法は、ヒトまたは動物の肝臓で生成され胆汁に放出される腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）の生成を低減、あるいはその作用を遮断する手法または成分の使用に関する。胆汁に放出されたＴＮＦは、ある状況では腸管から吸収されて全身的に作用するので、本発明は、循環ＴＮＦの増加による疾患を、胆汁へのＴＮＦの放出あるいは胆汁での作用を遮断することによって治療する方法にも関する。内毒素性ショック(endotoxic shock)の主な症状は、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）および血小板活性化因子（ＰＡＦ）に最も関心が集まる炎症性仲介前駆物質(pro inflamatory mediators)の範囲によると考えられている。これらの成分が如何に作用して種々の効果を生むのかについては知られていない。腸の病変は、内毒素血症の共通の特徴であり、ＴＮＦとＰＡＦの両方が関係している。さらに、これらの成分が循環系から単独で作用するということは、このような研究で暗に信じられている。本願の発明者らは、内毒素性ショックにおける腸の損傷は、管腔(lumenal)の成分の作用によるという仮説を立てた。リポポリサッカリド（ＬＰＳ）が肝臓で除去されるので、クップファー細胞が関連するサイトカインを産生し、肝臓で生成された産物が胆汁中に少なくとも微量見られるであろうと仮定して、本願発明者らは、ＬＰＳ誘発性肝臓胆汁因子(hepatobiliary factors)が直接的に相互作用して、腸に損傷を引き起こすと推論した。本願発明者らは、致死量のＬＰＳを与えたラットの外的な胆汁ドレナージ(external biliary drainage)が、胃腸の病変を妨げることを見出した。さらに、本願発明者らは、胃腸管からそらされ再度胃腸管に注入される胆汁に組換えヒトＴＮＦを注入することにより、ＬＰＳでチャレンジされた動物に見られるものと類似の症状になることを証明した。さらに、ＬＰＳ処理した動物の胆汁にマウスＴＮＦに向けられた抗体（ラットＴＮＦも認識する）を添加することにより、抗体処理されていない動物で見られるような出血および流体の蓄積、下痢およびひどい腸の損傷を含む胃腸の病変が、部分的または完全に遮断される。また、ＬＰＳ処理および胆汁ＴＮＦレベルの上昇に係る全身的症状（熱、低血圧、一般的な倦怠および組織損傷）が減少する。従って、第一の態様では、本発明は、患者の腸の管腔のＴＮＦレベルの上昇によって引き起こされた腸の疾患を治療又は予防する方法であって、管腔内のＴＮＦの作用を減少する、あるいは管腔内のＴＮＦの産生または蓄積を減少させる成分を患者に投与することを含む。第二の態様では、肝臓で産生され胆汁に分泌されたＴＮＦの循環系への取り込み増加による全身的症状を治療又は予防する方法であって、胆汁ＴＮＦの生成または作用を減少させる成分を患者に投与することを含む。これらの症状の中には、腸の疾患を含む多数の症候群または状態がある。これらの症候群または状態は、敗血症、下痢（ウイルス性、細菌性）、下痢（ストレス、アルコール、抗生物質、化学療法、あるいは放射線によって誘発されたもの）、ゲイ腸症候群(gay bowel syndrome)、宿主対移植片疾患（例えば骨髄移植後）、大腸癌、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連感染症（例えば、ミクロスポリジウム(Microsporidium)）、疝痛、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤＳ）によって開始された潰瘍、炎症性腸疾患（クローン病、漬瘍性大腸炎、感応性腸症候群）、宿主対移植片疾患、胃腸潰瘍、胃腸炎症、手術後の細菌性転座、多重器官不全および食物アレルギーを含む。ＴＮＦは、これらの症候群または状態の多くと関係している（９−１８）。また、ＮＳＡＩＤＳ誘発腸損傷の進行における胆汁の重要性についても、以前に証明されている（１９）。従って、本発明の実施態様において、患者の腸疾患はこれらの症状または状態の一つ以上の結果である。特に、敗血症、下痢（ウイルス性、細菌性）、下痢（ストレス、アルコール、抗生物質、化学療法、あるいは放射線によって誘発されたもの）、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連感染症（例えば、ミクロスポリジウム(Microsporidium)）、手術後の細菌性転座および腸の虚血／再灌流(r eperfusion)傷害を患っている患者である。これらの状態または症候群のいくつか、特に感染を含むものは、腸に流れ込む胆汁中のＴＮＦレベルを増加させる。本発明の好ましい実施態様では、腸の管腔中のＴＮＦレベルの上昇は胆汁に由来するものである。管腔ＴＮＦの作用を低減する、あるいは管腔ＴＮＦの生成または蓄積を低減する成分は、以下の多数の成分、すなわちａ）ＴＮＦまたはそのレセプターに対する抗体、例えばＴＮＦ遮断抗体；ｂ）ＴＮＦレセプターの可溶性形態；ｃ）レセプターにおけるＴＮＦの作用を遮断するペプチドまたは他の分子；ｄ）ＴＮＦの産生を減少するペプチド；ｅ）サリドマイド等のＴＮＦ産生を遮断する成分、５−リポキシゲナーゼおよび５−シクロオキシゲナーゼといった抗炎症阻害剤、例えば、テポキサリン(Tepox alin)（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｈｏｎｓｏｎ）、テニダップ(Tenidap)（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＧＰ４７９６９Ａ（ＣｉｂａＧｅｉｇｙ）、ペントキシフィリン(p entoxyfylline)を含むｃＡＭＰレベルを上昇させることによりＴＮＦ産生を低減する成分；ｆ）ＴＮＦ産生を遮断するポリ不飽和脂肪酸等の脂質分子のいずれかとすることができる。現在のところ、上記成分が、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であることが好ましい。好ましいモノクローナル抗体は、ＭＡｂ４７である。ＭＡｂ４７を産生するハイブリドーマセルラインは、動物細胞培養欧州コレクション（ＥＣＡＣＣ）、ワクチン・リサーチ・プロダクション・ラボラトリー(Vaccine Res earch Production Laboratory)、公共健康研究サービス(Public Health Laborat ory Service)、提供された微生物およびリサーチのためのセンター、ポートンダウン、サリスバリー、ウィルトシアＳＰ４ＯＪＧ、イギリスに１９８９年１２月１４日に寄託され、寄託番号８９１２１４０２が付与されている。本発明の方法で使用できることが見出された他の抗体は、国際特許出願ＷＯ９０／０１９５０、ＷＯ８９／０８４６０およびＷＯ９０／１０７０７に開示されたものである。本発明のさらに好ましい態様では、上記成分がペプチド、好ましくはペプチド４９２またはペプチドＴである。ペプチド４９２に係るさらなる詳細は、オーストラリア特許出願第２２７３１／９２号“ＴＮＦおよび／またはＬＰＳ毒素を排除するペプチド(Peptide which abrogates TNF and/or LPS toxicity)”に見出すことができる。ペプチドＴのさらなる情報は、欧州特許出願第０２４９３９０号、欧州特許出願第０２４９３９４号および国際特許出願第８８／０９３３８号に見られる。これらの参考文献の開示を、参照としてここに取り込む。ＴＮＦの産生を低減する成分は、経口、非経口、経皮等を含む多数の経路を介して、あるいは肝臓における前記成分の蓄積を増幅する第二成分と組み合わせて運ぶことができる。胆汁ＴＮＦの作用を低減する成分は、以下の多数の経路、すなわちａ）カニューレまたは針を介した胆管または胃腸管の適切な領域への直接輸送、ｂ）腸でその効果を有する経口輸送（すなわち、腸の所望の部位で放出されるまで、分解から保護されるように製剤されたもの）、ｃ）肝臓を経て胆汁中に分泌される非経口輸送、ｄ）胆汁へのＴＮＦの輸送を遮断する非経口輸送、ｅ）下方の腸疾患用に直腸を介する輸送、もしくはｆ）これらの経路の組み合わせで運ぶことができる。現在のところ、上記成分が、直接的に胃腸管または胆管に運ばれることが好ましい。本発明の性質をより明確に理解するために、その好ましい形態を以下の実施例および図面を参照して記載する。図１正常ラット（ａ）、ＬＰＳ処理ラット（ｂ）、胆管カニューレ挿入（ＢＤＣ）正常ラット（ｃ）ＢＤＣされたＬＰＳ処理ラット（ｄ）および胆管結紮（ＢＤＬ）されたＬＰＳ処理ラット（ｅ）における、腸の透明な流体の体積。体積は、平均値±Ｓ．Ｅ（ｎ＝５）として示されている。方法：各ラットの小腸を各末端で縛り、腹の組織から分け、内容物を十二指腸から回腸へやさしく絞り出した。粘液を含む固形物を遠心（５００ｇ、１５分）して除去し、透明な流体の体積を測定した。図２十二指腸内(intra-duodenally)（Ｉ／Ｄｕｏ）または静脈内（Ｉ／Ｖ）のいずれかで投与される、１ｍｌのポリクローナルウサギ抗ＴＮＦαによる処理前、あるいは処理２０時間後における、サルモネラ菌（Salmonella）感染ラットの血清中の生物学的に活性なＴＮＦレベル。方法：血清を、ＴＮＦ感応性ヒト横紋筋肉腫細胞ライン（ＫＹＭ−１）を用いた細胞毒性アッセイでＴＮＦ滴定した（２０）。実施例１致死量のＬＰＳをげっ歯類に与えると、死亡する前に、熱、低血圧、一般的な倦怠、および組織損傷等の一連のよく知られた症状が発生する。大人のウィスターラット(Wistar rats)に、１５ｍｇ／ｋｇの大腸菌Ｂ０４：１１１ＬＰＳを静脈内注射することにより、１２−２４時間後には１００％が死亡する。接種から４時間後の試験では、出血の肉眼的証拠および小腸内の流体の蓄積が見られた。胆汁が腸に入り込むのを防ぐためのカニューレ挿入された共通の胆管を有するラットでは、同様の処理がなされても、これらのいずれの症状も見られなかった。正常な動物もしくは胆管カニューレ挿入された動物（ＬＰＳ処理されていない）では、腸の損傷は全く見られなかった。胆管結紮されたＬＰＳ処理ラットでは、出血がほとんど見られず、流体蓄積が全く観察されなかった。このときの腸に存在する流体の体積の測定は、ＬＰＳ処理されたラットと、胆汁が腸に入り込まないようにされたラットとの間に重要な差異を示した（図１）。これらの現象における胆汁のさらなる関わりのために、ＬＰＳ処理ラットの胆管をカニューレ挿入し、胆汁を上方の空腸に離した。腸の下方で出血および流体の蓄積があったが、ここで十二指腸は正常に見えた。組織の組織学的試験は、胆汁を奪う（そらす）ことにより、ＬＰＳ処理ラットにおけるひどい腸の疾患が妨げられることを示した。好中球辺縁趨向(neutrophil margination)は、完全なラットおよびＢＤＣラットの両方の腸の血管においてかなり明瞭であったが、完全なラットのグループにおいてのみ、絨毛で出血現象の証拠があった。組織の完全性の主要な障害がないことは明らかであるが、ＢＤＣグループの特別な絨毛には、その先端にいくらかの水腫があった。主観的であるかもしれないが、ＢＤＣグループは、手術を受けたにもかかわらず、対称となる完全なラットよりも４時間も生存し続けたことが観察されたが、この研究は、生存に関する胆汁を奪うことの効果を調べるために意図されたものではない。ＢＤＣ動物の便通がよくなされたことも観察された。正常およびＬＰＳ処理動物の胆汁および血清中のＴＮＦの測定（バイオアッセイによる）により、処理グループ中の胆汁ＴＮＦレベルが実質的に増加することが示された（表１）。この内毒素性ショックのモデルでは、胃で組織損傷も起こる。これは、巨視的および微視的レベルの両方から、上記実験で観察された。しかしながら、このような損傷は、ＢＤＣ動物では全く検出されなかった。しかして、ＴＮＦのレベルが増加した胆汁の逆流(reflux)が、胃における潰瘍形成を誘発すると考えられる。実施例２深刻な腸の損傷を引き起こす致死量の細菌性リポポリサッカリド（ＬＰＳ）が与えられたラットの胆汁中の高レベルの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）を検出することで、以下の仮説、すなわち、ａ）ＴＮＦは腸の損傷の原因であること、およびｂ）ＴＮＦ活性のｉｎｓｉｔｕでの中和により、腸の損傷が妨げられることを直接的に調べる実験を行うことにした。仮説ａ）を調べるために、無菌食塩水中の組換えヒトＴＮＦαを、１ｍｌ／ｈｒの速度で４時間、ラットのグループの十二指腸に注入した。０−３０１μｇ／ｍｌ３０−６０５μｇ／ｍｌ６０−１２０１０μｇ／ｍｌ１２０−１８０５μｇ／ｍｌ１８０−２４０１μｇ／ｍｌ第二グループの動物に、ＬＰＳをＩＶ注入し（実施例１のように１５ｍｇ／ｋｇ）、上述のように胆管をカニューレ挿入してＴＮＦαを注入した。さらに別のグループの動物に、生理食塩水（対照）を与えた。４時間後、これらの動物を殺して、Ｈ＆Ｅ染色した十二指腸、空腸および回腸の断片を調製した。ＴＮＦ注入された動物のグループの両方の腸管の巨視的および微視的な試験は、ＬＰＳ注入されたラットに似た損傷パターンを示し、そこでは胆汁が正常に流れていた。食塩水の注入は、腸に影響を与えなかった。これらの結果は、仮説ａ）と一致する。仮説ｂ）を調べるために、ＬＰＳをＩＶ注入（実施例１のように１５ｍｇ／ｋｇ）したグループのラットに、Ｇｅｎｚｙｍｅウサギポリクローナル抗マウスＴＮＦα（組番号Ｂ４３７７とＢ４８０５）を十二指腸に注入した。さらに別のグループのＬＰＳ処理動物に、正常なウサギ血清（ＮＲＳ）を注入した。血清の注入速度は１ｍｌ／時で、希釈率（食塩水中）は以下の通りであった：０−３０１：１０希釈３０−６０１：５希釈６０−１２０１：２希釈１２０−１８０１：５希釈１８０−２４０１：１０希釈４時間後に、動物を殺して、上述のように腸組織を切断し染色した。抗ＴＮＦα血清を注入した動物の組織は、正常のように見えた。十二指腸および回腸の絨毛で低頻度の水腫が見られたが、出血はどこにも見られなかった。上皮の破れ目は、全く観察されなかった。通常の血清を注入されたラットの腸管は、ＬＰＳが注入され抗ＴＮＦα血清が注入されていない動物と同じように損傷（壊死、ひどい出血、ウイルス損傷または重度の水腫）を受けた。これらの結果は、仮説ｂ）と一致する。さらに、胃の組織の組織学的試験から、抗ＴＮＦ抗体の腸内注入も胃を損傷から保護することがわかった。実施例３胆汁ＴＮＦの起源としての肝臓マクロファージさらなる実験により、胆汁ＴＮＦが肝臓のクップファー細胞から生じるであろうこと、並びにＬＰＳ処理後の損傷成分としてＴＮＦがさらに含まれることがわかった。しかして、致死量のＬＰＳで処理する２４時間前に、塩化ガドリニウム（クップファー細胞を排除(eliminate)することが知られている（２１））で処理されたラットは、腸の損傷から保護される。同時に、塩化ガドリニウム処理したラットの胆汁のＴＮＦレベルは、バックグラウンドレベルより高くならないことがわかった。これは、肝臓におけるＴＮＦ生成の阻害が、腸組織の完全性を維持する選択的／付加的な手段であるという本発明者らの主張を強力に支持する。実施例４腸の病原の病因性における胆汁ＴＮＦの影響バックグラウンド：侵襲性の腸の病原に関する現在の考察および調査は、上皮表面への付着、増殖および局所組織への侵入の工程を増幅する微生物（ウイルス性因子）の特徴に集中している。この工程に影響する宿主のファクター（特に誘発因子）には、ほとんど注意が注がれていなかった。グラム陰性細菌の病原の構成要素の一つである細菌性リポポリサッカリド（ＬＰＳ、内毒素）の腸の効果における胆汁腫瘍壊死因子αの役割に係る本発明者らの報告は、ａ）ＬＰＳによって誘発された胆汁のファクターが、腸の上皮を変えて、この障壁を介して生物を早く侵入させること、およびｂ）感染の後の段階で胆汁（および特に腫瘍壊死因子αの成分）が下痢の進行の原因であることの仮説を調べる実験を刺激した。感染モデル：感染（非致死）量（１０⁶−１０⁷）の生きたSalmonella enterid itis（Ｓｅ）が経口投与されたラットは、８−１２日から疾患の徴候を示し、２１日までに十分に回復する。生物体の高い投与量（１０¹⁰のオーダー）が投与されたラットは、１週間以内で病気になり、処置しなければ１０−１２日で死亡するであろう。５−６日で下痢段階が始まる。Ｓｅでのラットの感染は、ヒト腸チフスの標準動物モデルの一つとして見なされる。実験：１．正常ラットの低い投与量感染は、標的組織（肝臓および脾臓）が最も早くて３日までに侵害されることを示した。しかしながら、ラットに、腸からのＳｅＬＰＳの吸収を模造する、低い投与量のＬＰＳ（１−３００μｇ）を静脈内に前処理した場合には、より早く侵害が起こり、１０μｇ／ラット以上の投与量では２４時間以内に侵害が起こった。重要なことに、感染およびＬＰＳ処理（全投与量）の際の、胆管カニューレ挿入、すなわち外的な胆汁のドレナージのラットは、２４時間以内に標的生物中におけるＳｅの発生を妨げた。さらなる一連の実験から、上記投与量のＬＰＳが、最後に疾患を引き起こすか否かに係わらず、病原が侵入する機会を提供する腸の透過性を一時的に増加することがわかった。確かに、腸の細菌である正常なミクロビオタ(microbiota)は、これらの実験でＳｅの侵害に伴って検出された。これらの生物体は、腸が傷つけられるとわかっている環境で細菌性敗血症の誘発の第一の候補である。また、これらの生物体は、胆汁が奪われる（そらされる）と、侵入（すなわち細菌性転座）できない。他の実験は、ＬＰＳ処理後の胆汁ＴＮＦが増加すること、並びに、胆汁が腸からそらされるか、ＴＮＦ成分が中和されれば、腸はその完全性を維持することを示したので、これらの実験で、腸の透過性および増幅された侵襲性が、胆汁ＴＮＦレベルの増加によるものであると信じられる。２．対照の動物では下痢が続いたが、下痢が明らかである高い投与量（１０¹⁰ ）のＳｅが与えられたラット（６日）の外的な胆汁のドレナージにより、２０時間以内に下痢が停止した。カニューレ挿入後のラットの状態の評価（例えば素早さ等）は、非カニューレ挿入グループと比べて優れた健康状態を示した。カニューレ挿入は腸の流体の体積を顕著に低減し、便通がなされるようにした。下痢の工程におけるＴＮＦの役割を評価すべく、ラットのグループを以下のように処理した：（ａ）１ｍｌの中和ポリクローナルウサギ抗ＴＮＦ抗体（Ｇｅｎｚｙｍｅ）をＩＶ注入（ｂ）１ｍｌ／時の速度で１ｍｌの上記抗血清（１／２０に希釈）を上方の十二指腸に注入（ｃ）１ｍｌの正常ウサギ血清をＩＶ注入（対照）（ｄ）１ｍｌの希釈された正常ウサギ血清を注入（上記と同様に）（対照）。この実験は２０時間で終了した。結果：対照グループ（ｃ）および（ｄ）の動物は、健康状態および下痢の観点、すなわち過剰な下痢を伴った内毒素血症の徴候（毛なみの乱れ、食欲の喪失、無気力）の観点から区別できなかった。グループ（ａ）の動物の５０％が２０時間以内に死亡した。生存しているものも、内毒素血症の明らかな症状および明らかな下痢を示し（グループ（ｃ）および（ｄ）よりもひどい）、目に見えて苦しんだ。グループ（ｂ）の動物は、グループ（ｃ）および（ｄ）よりもずっと健康であると評価された。全ての動物において、下痢が止まった。グループ（ｂ）における下痢が止んだ証拠は、他のグループの動物の腸内に存在する腸の流体の体積と比べて、その体積が統計学的に非常に減少していることから判断される（表２）。腸内抗ＴＮＦグループと静脈内抗ＴＮＦグループとの差異は統計学的に重要である（ｐ＝０．０２６）。また、グループｂ）の動物で、より便通がなされていることにも注目すべきである。また、腸内に２０ｍｌ投与されたグループｂ）の動物では、腸の流体の体積が他のグループの体積より非常に少ないことが注目される。グループ（ｂ）の動物は、グループ（ａ）の動物より腸間膜のリンパ節におけるＳｅが顕著に低い。グループ（ｂ）の動物のパイエル板における生物体数も低いが、統計学的にグループ（ａ）における数と変わらない（表３）。腸組織の組織学的試験は、上皮の完全性における実質的な改良がグループｂの動物で起こったことを示した。さらに、血清ＴＮＦレベルは、これらの動物において検出不可能なレベルにまで減少した。結論：これらの実験結果は、上記の仮説に当てはまるものである。これらの実験の特定のメリットは、確立された下痢の状態におけるＴＮＦ活性の阻害（腸から胆汁をそらすこと、またはin situ中和による）が、劇的にこのエピソードを終結することである。最初の実験（ＬＰＳ毒性モデル）では、腸内抗ＴＮＦ治療が腸の損傷の開始を妨げることが証明された。抗ＴＮＦ抗体の十二指腸内への投与とは対照的に、同じ量の抗体の全身輸送では動物が保護されず、その代わりに、このグループの動物において、内毒素血症の全身的な症状がより急速に進行した。抗ＴＮＦ抗体の全身輸送の効果についての上記結果は、他の研究者らの発見と一致しており（２−６）、抗ＴＮＦ抗体と他のＴＮＦ阻害剤を全身的に投与することを備えた最近の診療上の試みが、なぜ失望させる結果を生むのか（７）を説明する助けになることであろう。実施例５種々の腸疾患を有するヒトの便のＴＮＦレベルを評価する研究便のサンプルを公表された方法によるアッセイ用に調製した。アッセイシステム−酵素結合免疫測定法−は、公表されたプロトコル（８）によって確立された。以下の条件を備えた患者は、正常な個人の便物質中に存在するレベルよりも、統計学的に（Kruskal-Wallis One Way Analysis of Varianceを使用）かなり高いレベルの便のＴＮＦを有することがわかった。炎症腸疾患（公表されたデータ（９）を確認）。Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａの陽性診断結果を有するヒト免疫不全ウイルス／ＡＩＤＳ患者。移植対宿主疾患の診断を受けた骨髄移植患者。これらの結果は、腸障害がＴＮＦの上昇したレベルの存在と関係するという見地と一致した。実施例１−５の結果からわかるように、本願発明者らは、胃腸の病変と胆汁中のＴＮＦレベルの上昇との間の強力な関係を証明した。さらに、胆汁にＴＮＦの作用を遮断する成分を添加することによっても、関連する胃腸の病変が遮断されることを効果的に示した。また、本願発明者らは、胆管のカニューレ挿入後腸から胆汁をそらすことにより、あるいは胃腸管にＴＮＦに対する抗体が投与されたＬＰＳ処理動物において、胆汁ＴＮＦレベルの上昇に係わる一般的な全身的症状（毛なみの乱れ、食欲の喪失、無気力、他の動物からの孤立）が低減することを観察した。敗血症性ショック症候群(the septic shock syndrome)と係わるものを含む、ヒトの多くの毒血症は、肝臓を含む多くの組織および器官におけるＴＮＦの過剰な産生と関連する。多くの刊行物は、ＴＮＦ産生と種々の病理学的症状との間に係る原因を報告している。ヒトでは、動物のように、胃腸管（Ｇ．Ｉ．）に胆管を介して肝臓のＴＮＦを放出するか、他の源から腸の管腔にＴＮＦを直接的に放出することが、敗血症性ショックを含む多数の内毒素血症の直接的な原因であると提案し、ここにＧ．Ｉ．管のＴＮＦの毒性量の肝臓中における生成の効果を妨げる方法および深刻な疾患の病状を確立することにおけるその結果を記載する。細菌性細胞壁リポポリサッカリド画分（ＬＰＳ）のような細菌細胞構成物の体循環に存在するような刺激物は、肝臓における大過剰のＴＮＦの産生を誘発するということが我々の論点である。このＴＮＦは、十二指腸中に胆管を介して分泌され、そこで入り口から遠位のＧ．Ｉ．管の領域に炎症反応を引き起こす。順に、これにより、腸の完全性を乱す（ブリーチング）ことを含む腸壁の裏の損傷が引き起こされ、Ｇ．Ｉ．管の内容物を体循環に分散させてしまう。これらの内容物は、次いで肝臓中のＴＮＦのさらなる段階の誘発を開始する他の細菌および細菌性細胞構成物を含み、順に、腸に放出されて、個人の健康に深刻な結果をもたらすサイクルを進行し続ける。この疾患のサイクルを終結し、この疾患の症状を治癒するいくつかの方法を工夫した。選択的、あるいはより効果的な結果を達成するように組み合わせて用いることもできるこれらの工程は、以下のものである。１．Ｇ．Ｉ．管中に胆管を介して、肝臓で生成されたＴＮＦの分泌の防止。これは、ＴＮＦを含む胆管の内容物が外に出る（ドレイン）ような、標準的なあらゆる工程で胆管にカニューレを挿入することにより、容易に実施できる。このドレナージを、疾患の症状がなくなるまで続ける。２．Ｇ．Ｉ．管のＴＮＦの中和。胃の幽門括約筋に隣接し遠位にある十二指腸のＧ．Ｉ．管の上部に、胆管がその内容物を放出する。十二指腸の内容物は、ｐＨでほぼ中性を示し、十二指腸に直接的に輸送された抗体はかなり安定である。結果的に、十二指腸におけるＴＮＦの中和の効果的な方法の一つは、例えば、胃と幽門括約筋を経て腸の十二指腸に至るように、胃管を腸の管腔まで挿入して、あるいは、キーホール(keyhole)外科器具によってガイドした十二指腸の壁部を外側から貫通する針を介して、ＴＮＦに直接結合し得る抗体を注入することである。適切な抗体は、肝臓のＴＮＦの放出が正常な限界値に落ちるまで、それを不活性化するためにＴＮＦの存在量を超え続けるように一つ以上の上記管を介して十二指腸に連続的に滴下される。上述の実験では、ウサギで産生された不均一なポリクローナル抗体が、実験動物、この場合には深刻な毒血症を誘発するためにＬＰＳが注入されたラットに注入される。ヒト毒血症を治療するには、通常の方法で種々の動物をヒトＴＮＦで過剰免疫(hyperimmunising)して産生されるポリクローナル抗体、あるいはいくつかのモノクローナルヒト抗体を混合することによって調製されるポリクローナル抗体を用いることが好ましいと考えられる。ポリクローナル抗ＴＮＦ抗体の動物源は、ウマ、ウシ、ヒツジ、ラクダ、ヤギもしくはウサギとすることができる。モノクローナル抗体も効果的である。ヒトＴＮＦの生物学的活性を遮断しうるヒトモノクローナル抗体の方が、免疫学的な副作用を起こしそうもないが、実際に、Ｇ．Ｉ．管に輸送された他の動物のモノクローナル抗体は同様に効果的である。十二指腸または十二指腸とは遠位であって腸壁の損傷が発生しているＧ．Ｉ．管の他の部分に直接的に、抗体あるいは、ＴＮＦを不活性化し得る他の治療成分を輸送することとは別に、間接的な不活性化方法も効果的であることは明瞭である。また、抗ＴＮＦ抗体、あるいは他のＴＮＦ阻害剤は、必要な部位で放出されるような適切な製剤として経口的に輸送することもできる。ある場合では、腸のＴＮＦ分泌細胞によるＴＮＦの局在化した産生によって炎症が引き起こされることがある（１０、１１）。いくつかの単純な製剤およびコーティングは、胃における分解から不安定な薬品を保護するために使用されるが、活性成分がＧ．Ｉ．管の下方で利用できるようになっている。このようなコーティングおよび／または製剤の使用は、ほとんど外傷性の毒血症がない治療用であって、患者に意識があり、タブレットをのみ込むことができ、疾患の消散がそれほど緊急ではない場合に、抗体、ペプチド等の経口治療の使用を可能にする利点を有する。これらの内毒素血症は、胃を経てあるいは体壁を貫通して挿入されたチューブを介して、治療成分をＧ．Ｉ．管の上方に輸送することによって治療できることを提案することにおいて、類似した治療も、抗体の放出部位に隣接または遠位の腸の領域に対するＴＮＦによる損傷を妨げるために、直腸を経て下方の腸に挿入されたチューブを介して、ＴＮＦへの露呈によって最も影響を受けたＧ．Ｉ．管の部位に輸送されうることも明確である。Ｇ．Ｉ．管でＴＮＦを中和できる抗体に加えて、ＴＮＦの機能を調節し毒性効果を弱めることができる他の治療成分を、抗体に関して記載したのと同じ方法で胃腸管に輸送することによってこのような毒血症を治療するのに用いることができる。このような化合物の例としては、ＴＮＦとそのレセプターとの結合を抑制することができるいくつかのペプチドが挙げられる。ＴＮＦもしくはＴＮＦレセプターから誘導されたペプチドおよびその類似体は、ＴＮＦの機能を遮断する活性を有することが示されており、この治療的役割に使用される。他には、ペプチドＴ等（欧州特許第０２４９３９０号、欧州特許第０２４９３９４号および国際特許第ＷＯ８８／０９３３８号）は、ＴＮＦのある機能を遮断することができ、上記方法で輸送して使用することもできる。ヒトの治療において、治療抗体またはペプチドを、連続して十二指腸またはＧＩ管の別の領域に直接的に輸送する必要があってもよい。深刻な毒血症の患者は一般的に昏睡状態にあるため、これは十二指腸に通された胃管を使用することにより最も都合よく達成することができる。抗体は、胆管から十二指腸に通るＴＮＦを完全に不活性化する必要量を超えるような速度で連続的に十二指腸に滴下される。この効果は、遊離ＴＮＦのレベルおよび遊離抗ＴＮＦ抗体のレベルをアッセイするために、胃管を介して十二指腸中の流体を周期的にサンプリングすることによって、実際的な意味で達成することができる。ＴＮＦの効果を不活性化する化合物による胆管またはＧ．Ｉ．管のカニューレ挿入は、単独で用いられた時に利点を有すると考えられるが、両方の方法を組み合わせて使用することにより、さらに治療結果を確実にするであろう。正確な投与量は、上述の方法で決定することができる。本願発明の使用は、ヒトの治療に関係して記載されているが、本願発明の方法がヒト以外の動物の治療に同様に適用できることも容易に理解できる。当業者であれば、広く記載された本発明の精神または範囲から外れることなく、特定の実施態様に示されているように、本発明に多数の変形および／または修飾をしてもよいことが理解できるであろう。それゆえ、この実施態様は、あらゆる点で、例証であり、限定するものではないと見なすべきである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年１０月４日【補正内容】明細書腸疾患の治療方法本発明は、腸疾患の治療方法に関する。この方法は、ヒトまたは動物の肝臓で生成され胆汁に放出される腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）の生成を低減、あるいはその作用を遮断する手法または成分の使用に関する。胆汁に放出されたＴＮＦは、ある状況では腸管から吸収されて全身的に作用するので、本発明は、循環ＴＮＦの増加による疾患を、胆汁へのＴＮＦの放出あるいは胆汁での作用を遮断することによって治療する方法にも関する。内毒素性ショック(endotoxic shock)の主な症状は、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）および血小板活性化因子（ＰＡＦ）に最も関心が集まる炎症性仲介前駆物質(pro inflamatory mediators)の範囲によると考えられている。これらの成分が如何に作用して種々の効果を生むのかについては知られていない。腸の病変は、内毒素血症の共通の特徴であり、ＴＮＦとＰＡＦの両方が関係している。さらに、これらの成分が循環系から単独で作用するということは、このような研究で暗に信じられている。本願の発明者らは、内毒素性ショックにおける腸の損傷は、管腔(lumenal)の成分の作用によるという仮説を立てた。リポポリサッカリド（ＬＰＳ）が肝臓で除去されるので、クップファー細胞が関連するサイトカインを産生し、肝臓で生成された産物が胆汁中に少なくとも微量見られるであろうと仮定して、本願発明者らは、ＬＰＳ誘発性肝臓胆汁因子(hepatobiliary factors)が直接的に相互作用して、腸に損傷を引き起こすと推論した。本願発明者らは、致死量のＬＰＳを与えたラットの外的な胆汁ドレナージ(external biliary drainage)が、胃腸の病変を妨げることを見出した。さらに、本願発明者らは、胃腸管からそらされ再度胃腸管に注入される胆汁に組換えヒトＴＮＦを注入することにより、ＬＰＳでチャレンジされた動物に見られるものと類似の症状になることを証明した。さらに、ＬＰＳ処理した動物の胆汁にマウスＴＮＦに向けられた抗体（ラットＴＮＦも認識する）を添加することにより、抗体処理されていない動物で見られるような出血および流体の蓄積、下痢およびひどい腸の損傷を含む胃腸の病変が、部分的または完全に遮断される。また、ＬＰＳ処理および胆汁ＴＮＦレベルの上昇に係る全身的症状（熱、低血圧、一般的な倦怠および組織損傷）が減少する。従って、第一の態様では、本発明は、患者の腸の管腔のＴＮＦレベルの上昇によって引き起こされた腸の疾患を治療又は予防する方法であって、管腔内のＴＮＦの作用を減少する、あるいは管腔内のＴＮＦの産生または蓄積を減少させる成分を、成分を静脈投与しないことを特徴として患者に投与することを含む。第二の態様では、肝臓で産生され胆汁に分泌されたＴＮＦの循環系への取り込み増加による全身的症状を治療又は予防する方法であって、胆汁ＴＮＦの生成または作用を減少させる成分を、成分を静脈投与しないことを特徴として患者に投与することを含む。これらの症状の中には、腸の疾患を含む多数の症候群または状態がある。これらの症候群または状態は、敗血症、下痢（ウイルス性、細菌性）、下痢（ストレス、アルコール、抗生物質、化学療法、あるいは放射線によって誘発されたもの）、ゲイ腸症候群(gay bowel syndrome)、宿主対移植片疾患（例えば骨髄移植後）、大腸癌、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連感染症（例えば、ミクロスポリジウム(Microsporidium)）、疝痛、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤＳ）によって開始された潰瘍、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎、感応性腸症候群）、宿主対移植片疾患、胃腸漬瘍、胃腸炎症、手術後の細菌性転座、多重器官不全および食物アレルギーを含む。ＴＮＦは、これらの症候群または状態の多くと関係している（９−１８）。また、ＮＳＡＩＤＳ誘発腸損傷の進行における胆汁の重要性についても、以前に証明されている（１９）。従って、本発明の実施態様において、患者の腸疾患はこれらの症状または状態の一つ以上の結果である。特に、敗血症、下痢（ウイルス性、細菌性）、下痢（ストレス、アルコール、抗生物質、化学療法、あるいは放射線によって誘発されたもの）、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連感染症（例えば、ミクロスポリジウム(Microsporidium)）、手術後の細菌性転座および腸の虚血／再灌流(r eperfusion)傷害を患っている患者である。これらの状態または症候群のいくつか、特に感染を含むものは、腸に流れ込む胆汁中のＴＮＦレベルを増加させる。本発明の好ましい実施態様では、腸の管腔中のＴＮＦレベルの上昇は胆汁に由来するものである。管腔ＴＮＦの作用を低減する、あるいは管腔ＴＮＦの生成または蓄積を低減する成分は、以下の多数の成分、すなわちａ）ＴＮＦまたはそのレセプターに対する抗体、例えばＴＮＦ遮断抗体；ｂ）ＴＮＦレセプターの可溶性形態；ｃ）レセプターにおけるＴＮＦの作用を遮断するペプチドまたは他の分子；ｄ）ＴＮＦの産生を減少するペプチド；ｅ）サリドマイド等のＴＮＦ産生を遮断する成分、５−リポキシゲナーゼおよび５−シクロオキシゲナーゼといった抗炎症阻害剤、例えば、テポキサリン(Tepox alin)（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｈｏｎｓｏｎ）、テニダップ(Tenidap)（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＧＰ４７９６９Ａ（ＣｉｂａＧｅｉｇｙ）、ペントキシフィリン(pe ntoxyfylline)を含むｃＡＭＰレベルを上昇させることによりＴＮＦ産生を低減する成分；ｆ）ＴＮＦ産生を遮断するポリ不飽和脂肪酸等の脂質分子のいずれかとすることができる。現在のところ、上記成分が、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であることが好ましい。好ましいモノクローナル抗体は、ＭＡｂ４７である。ＭＡｂ４７を産生するハイブリドーマセルラインは、動物細胞培養欧州コレクション（ＥＣＡＣＣ）、ワクチン・リサーチ・プロダクション・ラボラトリー(Vaccine Res earch Production Laboratory)、公共健康研究サービス(Public Health Laborat ory Service)、提供された微生物およびリサーチのためのセンター、ポートンダウン、サリスバリー、ウィルトシアＳＰ４ＯＪＧ、イギリスに１９８９年１２月１４日に寄託され、寄託番号８９１２１４０２が付与されている。本発明の方法で使用できることが見出された他の抗体は、国際特許出願ＷＯ９０／０１９５０、ＷＯ８９／０８４６０およびＷＯ９０／１０７０７に開示されたものである。本発明のさらに好ましい態様では、上記成分がペプチド、好ましくはペプチド４９２またはペプチドＴである。ペプチド４９２に係るさらなる詳細は、オーストラリア特許出願第２２７３１／９２号“ＴＮＦおよび／またはＬＰＳ毒素を排除するペプチド(Peptide which abrogates TNF and/or LPS toxicity)”に見出すことができる。ペプチドＴのさらなる情報は、欧州特許出願第０２４９３９０号、欧州特許出願第０２４９３９４号および国際特許出願第８８／０９３３８号に見られる。これらの参考文献の開示を、参照としてここに取り込む。ＴＮＦの産生を低減する成分は、経口、非経口、経皮等を含む多数の経路を介して、あるいは肝臓における前記成分の蓄積を増幅する第二成分と組み合わせて運ぶことができる。胆汁ＴＮＦの作用を低減する成分は、以下の多数の経路、すなわちａ）カニューレまたは針を介した胆管または胃腸管の適切な領域への直接輸送、ｂ）腸でその効果を有する経口輸送（すなわち、腸の所望の部位で放出されるまで、分解から保護されるように製剤されたもの）、ｃ）肝臓を経て胆汁中に分泌される非経口輸送、ｄ）胆汁へのＴＮＦの輸送を遮断する非経口輸送、ｅ）下方の腸疾患用に直腸を介する輸送、もしくはｆ）これらの経路の組み合わせで運ぶことができる。現在のところ、上記成分が、直接的に胃腸管または胆管に運ばれることが好ましい。本発明の性質をより明確に理解するために、その好ましい形態を以下の実施例および図面を参照して記載する。図１正常ラット（ａ）、ＬＰＳ処理ラット（ｂ）、胆管カニューレ挿入（ＢＤＣ）正常ラット（ｃ）ＢＤＣされたＬＰＳ処理ラット（ｄ）および胆管結紮（ＢＤＬ）されたＬＰＳ処理ラット（ｅ）における、腸の透明な流体の体積。体積は、平均値±Ｓ．Ｅ（ｎ＝５）として示されている。方法：各ラットの小腸を各末端で縛り、腹の組織から分け、内容物を十二指腸から回腸へやさしく絞り出した。粘液を含む固形物を遠心（５００ｇ、１５分）して除去し、透明な流体の体積を測定した。図２十二指腸内(intra-duodenally)（Ｉ／Ｄｕｏ）または静脈内（Ｉ／Ｖ）のいずれかで投与される、１ｍｌのポリクローナルウサギ抗ＴＮＦαによる処理前、あるいは処理２０時間後における、サルモネラ菌（Salmonella）感染ラットの血清中の生物学的に活性なＴＮＦレベル。方法：血清を、ＴＮＦ感応性ヒト横紋筋肉腫細胞ライン（ＫＹＭ−１）を用いた細胞毒性アッセイでＴＮＦ滴定した（２０）。実施例１致死量のＬＰＳをげっ歯類に与えると、死亡する前に、熱、低血圧、一般的な倦怠、および組織損傷等の一連のよく知られた症状が発生する。大人のウィスターラット(Wistar rats)に、１５ｍｇ／ｋｇの大腸菌Ｂ０４：１１１ＬＰＳを静脈内注射することにより、１２−２４時間後には１００％が死亡する。接種から４時間後の試験では、出血の肉眼的証拠および小腸内の流体の蓄積が見られた。胆汁が腸に入り込むのを防ぐためのカニューレ挿入された共通の胆管を有するラットでは、同様の処理がなされても、これらのいずれの症状も見られなかった。正常な動物もしくは胆管カニューレ挿入された動物（ＬＰＳ処理されていない）では、腸の損傷は全く見られなかった。胆管結紮されたＬＰＳ処理ラットでは、出血がほとんど見られず、流体蓄積が全く観察されなかった。このときの腸に存在する流体の体積の測定は、ＬＰＳ処理されたラットと、胆汁が腸に入り込まないようにされたラットとの間に重要な差異を示した（図１）。これらの現象における胆汁のさらなる関わりのために、ＬＰＳ処理ラットの胆管をカニューレ挿入し、胆汁を上方の空腸に離した。腸の下方で出血および流体の蓄積があったが、ここで十二指腸は正常に見えた。組織の組織学的試験は、胆汁を奪う（そらす）ことにより、ＬＰＳ処理ラットにおけるひどい腸の疾患が妨げられることを示した。好中球辺縁趨向(neutrophil margination)は、完全なラットおよびＢＤＣラットの両方の腸の血管においてかなり明瞭であったが、完全なラットのグループにおいてのみ、絨毛で出血現象の証拠があった。組織の完全性の主要な障害がないことは明らかであるが、ＢＤＣグループの特別な絨毛には、その先端にいくらかの水腫があった。主観的であるかもしれないが、ＢＤＣグループは、手術を受けたにもかかわらず、対称となる完全なラットよりも４時間も生存し続けたことが観察されたが、この研究は、生存に関する胆汁を奪うことの効果を調べるために意図されたものではない。ＢＤＣ動物の便通がよくなされたことも観察された。正常およびＬＰＳ処理動物の胆汁および血清中のＴＮＦの測定（バイオアッセイによる）により、処理グループ中の胆汁ＴＮＦレベルが実質的に増加することが示された（表１）。この内毒素性ショックのモデルでは、胃で組織損傷も起こる。これは、巨視的および微視的レベルの両方から、上記実験で観察された。しかしながら、このような損傷は、ＢＤＣ動物では全く検出されなかった。しかして、ＴＮＦのレベルが増加した胆汁の逆流(reflux)が、胃における潰瘍形成を誘発すると考えられる。実施例２深刻な腸の損傷を引き起こす致死量の細菌性リポポリサッカリド（ＬＰＳ）が与えられたラットの胆汁中の高レベルの腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）を検出することで、以下の仮説、すなわち、ａ）ＴＮＦは腸の損傷の原因であること、およびｂ）ＴＮＦ活性のｉｎｓｉｔｕでの中和により、腸の損傷が妨げられることを直接的に調べる実験を行うことにした。仮説ａ）を調べるために、無菌食塩水中の組換えヒトＴＮＦαを、１ｍｌ／ｈｒの速度で４時間、ラットのグループの十二指腸に注入した。０−３０１μｇ／ｍｌ３０−６０５μｇ／ｍｌ６０−１２０１０μｇ／ｍｌ１２０−１８０５μｇ／ｍｌ１８０−２４０１μｇ／ｍｌ第二グループの動物に、ＬＰＳをＩＶ注入し（実施例１のように１５ｍｇ／ｋｇ）、上述のように胆管をカニューレ挿入してＴＮＦαを注入した。さらに別のグループの動物に、生理食塩水（対照）を与えた。４時間後、これらの動物を殺して、Ｈ＆Ｅ染色した十二指腸、空腸および回腸の断片を調製した。ＴＮＦ注入された動物のグループの両方の腸管の巨視的および微視的な試験は、ＬＰＳ注入されたラットに似た損傷パターンを示し、そこでは胆汁が正常に流れていた。食塩水の注入は、腸に影響を与えなかった。これらの結果は、仮説ａ）と一致する。仮説ｂ）を調べるために、ＬＰＳをＩＶ注入（実施例１のように１５ｍｇ／ｋｇ）したグループのラットに、Ｇｅｎｚｙｍｅウサギポリクローナル抗マウスＴＮＦα（組番号Ｂ４３７７とＢ４８０５）を十二指腸に注入した。さらに別のグループのＬＰＳ処理動物に、正常なウサギ血清（ＮＲＳ）を注入した。血清の注入速度は１ｍｌ／時で、希釈率（食塩水中）は以下の通りであった：０−３０１：１０希釈３０−６０１：５希釈６０−１２０１：２希釈１２０−１８０１：５希釈１８０−２４０１：１０希釈４時間後に、動物を殺して、上述のように腸組織を切断し染色した。抗ＴＮＦα血清を注入した動物の組織は、正常のように見えた。十二指腸および回腸の絨毛で低頻度の水腫が見られたが、出血はどこにも見られなかった。上皮の破れ目は、全く観察されなかった。通常の血清を注入されたラットの腸管は、ＬＰＳが注入され抗ＴＮＦα血清が注入されていない動物と同じように損傷（壊死、ひどい出血、ウイルス損傷または重度の水腫）を受けた。これらの結果は、仮説ｂ）と一致する。さらに、胃の組織の組織学的試験から、抗ＴＮＦ抗体の腸内注入も冑を損傷から保護することがわかった。実施例３胆汁ＴＮＦの起源としての肝臓マクロファージさらなる実験により、胆汁ＴＮＦが肝臓のクップファー細胞から生じるであろうこと、並びにＬＰＳ処理後の損傷成分としてＴＮＦがさらに含まれることがわかった。しかして、致死量のＬＰＳで処理する２４時間前に、塩化ガドリニウム（クップファー細胞を排除(eliminate)することが知られている（２１））で処理されたラットは、腸の損傷から保護される。同時に、塩化ガドリニウム処理したラットの胆汁のＴＮＦレベルは、バックグラウンドレベルより高くならないことがわかった。これは、肝臓におけるＴＮＦ生成の阻害が、腸組織の完全性を維持する選択的／付加的な手段であるという本発明者らの主張を強力に支持する。実施例４腸の病原の病因性における胆汁ＴＮＦの影響バックグラウンド：侵襲性の腸の病原に関する現在の考察および調査は、上皮表面への付着、増殖および局所組織への侵入の工程を増幅する微生物（ウイルス性因子）の特徴に集中している。この工程に影響する宿主のファクター（特に誘発因子）には、ほとんど注意が注がれていなかった。グラム陰性細菌の病原の構成要素の一つである細菌性リポポリサッカリド（ＬＰＳ、内毒素）の腸の効果における胆汁腫瘍壊死因子αの役割に係る本発明者らの報告は、ａ）ＬＰＳによって誘発された胆汁のファクターが、腸の上皮を変えて、この障壁を介して生物を早く侵入させること、およびｂ）感染の後の段階で胆汁（および特に腫瘍壊死因子αの成分）が下痢の進行の原因であることの仮説を調べる実験を刺激した。感染モデル：感染（非致死）量（１０⁶−１０⁷）の生きたSaimonella enterid itis（Ｓｅ）が経口投与されたラットは、８−１２日から疾患の徴候を示し、２１日までに十分に回復する。生物体の高い投与量（１０¹⁰のオーダー）が投与されたラットは、１週間以内で病気になり、処置しなければ１０−１２日で死亡するであろう。５−６日で下痢段階が始まる。Ｓｅでのラットの感染は、ヒト腸チフスの標準動物モデルの一つとして見なされる。実験：１．正常ラットの低い投与量感染は、標的組織（肝臓および脾臓）が最も早くて３日までに侵害されることを示した。しかしながら、ラットに、腸からのＳｅＬＰＳの吸収を模造する、低い投与量のＬＰＳ（１−３００μｇ）を静脈内に前処理した場合には、より早く侵害が起こり、１０μｇ／ラット以上の投与量では２４時間以内に侵害が起こった。重要なことに、感染およびＬＰＳ処理（全投与量）の際の、胆管カニューレ挿入、すなわち外的な胆汁のドレナージのラットは、２４時間以内に標的生物中におけるＳｅの発生を妨げた。さらなる一連の実験から、上記投与量のＬＰＳが、最後に疾患を引き起こすか否かに係わらず、病原が侵入する機会を提供する腸の透過性を一時的に増加することがわかった。確かに、腸の細菌である正常なミクロビオタ(microbiota)は、これらの実験でＳｅの侵害に伴って検出された。これらの生物体は、腸が傷つけられるとわかっている環境で細菌性敗血症の誘発の第一の候補である。また、これらの生物体は、胆汁が奪われる（そらされる）と、侵入（すなわち細菌性転座）できない。他の実験は、ＬＰＳ処理後の胆汁ＴＮＦが増加すること、並びに、胆汁が腸からそらされるか、ＴＮＦ成分が中和されれば、腸はその完全性を維持することを示したので、これらの実験で、腸の透過性および増幅された侵襲性が、胆汁ＴＮＦレベルの増加によるものであると信じられる。２．対照の動物では下痢が続いたが、下痢が明らかである高い投与量（１０¹⁰ ）のＳｅが与えられたラット（６日）の外的な胆汁のドレナージにより、２０時間以内に下痢が停止した。カニューレ挿入後のラットの状態の評価（例えば素早さ等）は、非カニューレ挿入グループと比べて優れた健康状態を示した。カニューレ挿入は腸の流体の体積を顕著に低減し、便通がなされるようにした。下痢の工程におけるＴＮＦの役割を評価すべく、ラットのグループを以下のように処理した：（ａ）１ｍｌの中和ポリクローナルウサギ抗ＴＮＦ抗体（Ｇｅｎｚｙｍｅ）をＩＶ注入（ｂ）１ｍｌ／時の速度で１ｍｌの上記抗血清（１／２０に希釈）を上方の十二指腸に注入（ｃ）１ｍｌの正常ウサギ血清をＩＶ注入（対照）（ｄ）１ｍｌの希釈された正常ウサギ血清を注入（上記と同様に）（対照）。この実験は２０時間で終了した。結果：対照グループ（ｃ）および（ｄ）の動物は、健康状態および下痢の観点、すなわち過剰な下痢を伴った内毒素血症の徴候（毛なみの乱れ、食欲の喪失、無気力）の観点から区別できなかった。グループ（ａ）の動物の５０％が２０時間以内に死亡した。生存しているものも、内毒素血症の明らかな症状および明らかな下痢を示し（グループ（ｃ）および（ｄ）よりもひどい）、目に見えて苦しんだ。グループ（ｂ）の動物は、グループ（ｃ）および（ｄ）よりもずっと健康であると評価された。全ての動物において、下痢が止まった。グループ（ｂ）における下痢が止んだ証拠は、他のグループの動物の腸内に存在する腸の流体の体積と比べて、その体積が統計学的に非常に減少していることから判断される（表２）。腸内抗ＴＮＦグループと静脈内抗ＴＮＦグループとの差異は統計学的に重要である（ｐ＝０．０２６）。また、グループｂ）の動物で、より便通がなされていることにも注目すべきである。また、腸内に２０ｍｌ投与されたグループｂ）の動物では、腸の流体の体積が他のグループの体積より非常に少ないことが注目される。グループ（ｂ）の動物は、グループ（ａ）の動物より腸間膜のリンパ節におけるＳｅが顕著に低い。グループ（ｂ）の動物のパイエル板における生物体数も低いが、統計学的にグループ（ａ）における数と変わらない（表３）。腸組織の組織学的試験は、上皮の完全性における実質的な改良がグループｂの動物で起こったことを示した。さらに、血清ＴＮＦレベルは、これらの動物において検出不可能なレベルにまで減少した。結論：これらの実験結果は、上記の仮説に当てはまるものである。これらの実験の特定のメリットは、確立された下痢の状態におけるＴＮＦ活性の阻害（腸から胆汁をそらすこと、またはin situ中和による）が、劇的にこのエピソードを終結することである。最初の実験（ＬＰＳ毒性モデル）では、腸内抗ＴＮＦ治療が腸の損傷の開始を妨げることが証明された。抗ＴＮＦ抗体の十二指腸内への投与とは対照的に、同じ量の抗体の全身輸送では動物が保護されず、その代わりに、このグループの動物において、内毒素血症の全身的な症状がより急速に進行した。抗ＴＮＦ抗体の全身輸送の効果についての上記結果は、他の研究者らの発見と一致しており（２−６）、抗ＴＮＦ抗体と他のＴＮＦ阻害剤を全身的に投与することを備えた最近の診療上の試みが、なぜ失望させる結果を生むのか（７）を説明する助けになることであろう。実施例５種々の腸疾患を有するヒトの便のＴＮＦレベルを評価する研究便のサンプルを公表された方法によるアッセイ用に調製した。アッセイシステム−酵素結合免疫測定法−は、公表されたプロトコル（８）によって確立された。以下の条件を備えた患者は、正常な個人の便物質中に存在するレベルよりも、統計学的に（Kruskal-Wallis One Way Analysis of Varianceを使用）かなり高いレベルの便のＴＮＦを有することがわかった。炎症腸疾患（公表されたデータ（９）を確認）。Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａの陽性診断結果を有するヒト免疫不全ウイルス／ＡＩＤＳ患者。移植対宿主疾患の診断を受けた骨髄移植患者。これらの結果は、腸障害がＴＮＦの上昇したレベルの存在と関係するという見地と一致した。実施例１−５の結果からわかるように、本願発明者らは、胃腸の病変と胆汁中のＴＮＦレベルの上昇との間の強力な関係を証明した。さらに、胆汁にＴＮＦの作用を遮断する成分を添加することによっても、関連する胃腸の病変が遮断されることを効果的に示した。また、本願発明者らは、胆管のカニューレ挿入後腸から胆汁をそらすことにより、あるいは胃腸管にＴＮＦに対する抗体が投与されたＬＰＳ処理動物において、胆汁ＴＮＦレベルの上昇に係わる一般的な全身的症状（毛なみの乱れ、食欲の喪失、無気力、他の動物からの孤立）が低減することを観察した。敗血症性ショック症候群(the septic shock syndrome)と係わるものを含む、ヒトの多くの毒血症は、肝臓を含む多くの組織および器官におけるＴＮＦの過剰な産生と関連する。多くの刊行物は、ＴＮＦ産生と種々の病理学的症状との間に係る原因を報告している。ヒトでは、動物のように、胃腸管（Ｇ．Ｉ．）に胆管を介して肝臓のＴＮＦを放出するか、他の源から腸の管腔にＴＮＦを直接的に放出することが、敗血症性ショックを含む多数の内毒素血症の直接的な原因であると提案し、ここにＧ．Ｉ．管のＴＮＦの毒性量の肝臓中における生成の効果を妨げる方法および深刻な疾患の病状を確立することにおけるその結果を記載する。細菌性細胞壁リポポリサッカリド画分（ＬＰＳ）のような細菌細胞構成物の体循環に存在するような刺激物は、肝臓における大過剰のＴＮＦの産生を誘発するということが我々の論点である。このＴＮＦは、十二指腸中に胆管を介して分泌され、そこで入り口から遠位のＧ．Ｉ．管の領域に炎症反応を引き起こす。順に、これにより、腸の完全性を乱す（ブリーチング）ことを含む腸壁の裏の損傷が引き起こされ、Ｇ．Ｉ．管の内容物を体循環に分散させてしまう。これらの内容物は、次いで肝臓中のＴＮＦのさらなる段階の誘発を開始する他の細菌および細菌性細胞構成物を含み、順に、腸に放出されて、個人の健康に深刻な結果をもたらすサイクルを進行し続ける。この疾患のサイクルを終結し、この疾患の症状を治癒するいくつかの方法を工夫した。選択的、あるいはより効果的な結果を達成するように組み合わせて用いることもできるこれらの工程は、以下のものである。１．Ｇ．Ｉ．管中に胆管を介して、肝臓で生成されたＴＮＦの分泌の防止。これは、ＴＮＦを含む胆管の内容物が外に出る（ドレイン）ような、標準的なあらゆる工程で胆管にカニューレを挿入することにより、容易に実施できる。このドレナージを、疾患の症状がなくなるまで続ける。２．Ｇ．Ｉ．管のＴＮＦの中和。胃の幽門括約筋に隣接し遠位にある十二指腸のＧ．Ｉ．管の上部に、胆管がその内容物を放出する。十二指腸の内容物は、ｐＨでほぼ中性を示し、十二指腸に直接的に輸送された抗体はかなり安定である。結果的に、十二指腸におけるＴＮＦの中和の効果的な方法の一つは、例えば、胃と幽門括約筋を経て腸の十二指腸に至るように、胃管を腸の管腔まで挿入して、あるいは、キーホール(keyhole)外科器具によってガイドした十二指腸の壁部を外側から貫通する針を介して、ＴＮＦに直接結合し得る抗体を注入することである。適切な抗体は、肝臓のＴＮＦの放出が正常な限界値に落ちるまで、それを不活性化するためにＴＮＦの存在量を超え続けるように一つ以上の上記管を介して十二指腸に連続的に滴下される。上述の実験では、ウサギで産生された不均一なポリクローナル抗体が、実験動物、この場合には深刻な毒血症を誘発するためにＬＰＳが注入されたラットに注入される。ヒト毒血症を治療するには、通常の方法で種々の動物をヒトＴＮＦで過剰免疫(hyperimmunising)して産生されるポリクローナル抗体、あるいはいくつかのモノクローナルヒト抗体を混合することによって調製されるポリクローナル抗体を用いることが好ましいと考えられる。ポリクローナル抗ＴＮＦ抗体の動物源は、ウマ、ウシ、ヒツジ、ラクダ、ヤギもしくはウサギとすることができる。モノクローナル抗体も効果的である。ヒトＴＮＦの生物学的活性を遮断しうるヒトモノクローナル抗体の方が、免疫学的な副作用を起こしそうもないが、実際に、Ｇ．Ｉ．管に輸送された他の動物のモノクローナル抗体は同様に効果的である。十二指腸または十二指腸とは遠位であって腸壁の損傷が発生しているＧ．Ｉ．管の他の部分に直接的に、抗体あるいは、ＴＮＦを不活性化し得る他の治療成分を輸送することとは別に、間接的な不活性化方法も効果的であることは明瞭である。また、抗ＴＮＦ抗体、あるいは他のＴＮＦ阻害剤は、必要な部位で放出されるような適切な製剤として経口的に輸送することもできる。ある場合では、腸のＴＮＦ分泌細胞によるＴＮＦの局在化した産生によって炎症が引き起こされることがある（１０、１１）。いくつかの単純な製剤およびコーティングは、胃における分解から不安定な薬品を保護するために使用されるが、活性成分がＧ．Ｉ．管の下方で利用できるようになっている。このようなコーティングおよび／または製剤の使用は、ほとんど外傷性の毒血症がない治療用であって、患者に意識があり、タブレットをのみ込むことができ、疾患の消散がそれほど緊急ではない場合に、抗体、ペプチド等の経口治療の使用を可能にする利点を有する。これらの内毒素血症は、胃を経てあるいは体壁を貫通して挿入されたチューブを介して、治療成分をＧ．Ｉ．管の上方に輸送することによって治療できることを提案することにおいて、類似した治療も、抗体の放出部位に隣接または遠位の腸の領域に対するＴＮＦによる損傷を妨げるために、直腸を経て下方の腸に挿入されたチューブを介して、ＴＮＦへの露呈によって最も影響を受けたＧ．Ｉ．管の部位に輸送されうることも明確である。Ｇ．Ｉ．管でＴＮＦを中和できる抗体に加えて、ＴＮＦの機能を調節し毒性効果を弱めることができる他の治療成分を、抗体に関して記載したのと同じ方法で胃腸管に輸送することによってこのような毒血症を治療するのに用いることができる。このような化合物の例としては、ＴＮＦとそのレセプターとの結合を抑制することができるいくつかのペプチドが挙げられる。ＴＮＦもしくはＴＮＦレセプターから誘導されたペプチドおよびその類似体は、ＴＮＦの機能を遮断する活性を有することが示されており、この治療的役割に使用される。他には、ペプチドＴ等（欧州特許第０２４９３９０号、欧州特許第０２４９３９４号および国際特許第ＷＯ８８／０９３３８号）は、ＴＮＦのある機能を遮断することができ、上記方法で輸送して使用することもできる。ヒトの治療において、治療抗体またはペプチドを、連続して十二指腸またはＧＩ管の別の領域に直接的に輸送する必要があってもよい。深刻な毒血症の患者は一般的に昏睡状態にあるため、これは十二指腸に通された胃管を使用することにより最も都合よく達成することができる。抗体は、胆管から十二指腸に通るＴＮＦを完全に不活性化する必要量を超えるような速度で連続的に十二指腸に滴下される。この効果は、遊離ＴＮＦのレベルおよび遊離抗ＴＮＦ抗体のレベルをアッセイするために、胃管を介して十二指腸中の流体を周期的にサンプリングすることによって、実際的な意味で達成することができる。ＴＮＦの効果を不活性化する化合物による胆管またはＧ．Ｉ．管のカニューレ挿入は、単独で用いられた時に利点を有すると考えられるが、両方の方法を組み合わせて使用することにより、さらに治療結果を確実にするであろう。正確な投与量は、上述の方法で決定することができる。本願発明の使用は、ヒトの治療に関係して記載されているが、本願発明の方法がヒト以外の動物の治療に同様に適用できることも容易に理解できる。当業者であれば、広く記載された本発明の精神または範囲から外れることなく、特定の実施態様に示されているように、本発明に多数の変形および／または修飾をしてもよいことが理解できるであろう。それゆえ、この実施態様は、あらゆる点で、例証であり、限定するものではないと見なすべきである。請求の範囲１．患者の腸の管腔内のＴＮＦレベルの上昇によって引き起こされた腸疾患の治療または予防方法であって、管腔内のＴＮＦの作用を低減する、もしくは管腔内のＴＮＦの産生または蓄積を低減する成分を、静脈投与しないことを特徴として患者に投与することを含む方法。２．敗血症、下痢、ゲイ腸症候群、移植物対宿主疾患、大腸癌、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連感染症、疝痛、非ステロイド系抗炎症剤によって開始された潰瘍、炎症性腸疾患、宿主対移植片疾患、胃腸潰瘍、胃腸炎症、手術後の細菌性転座、多重器官不全および食物アレルギーからなる群から選択された症候群または状態の患者における、請求項１記載の方法。３．敗血症、下痢、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連感染症、並びに手術後の細菌性転座からなる群から選択された症候群または状態の患者における、請求項２記載の方法。４．個々の腸の管腔内のＴＮＦが胆汁由来である、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の方法。５．成分が、ａ）ＴＮＦまたはそのレセプターに対する抗体、例えばＴＮＦ遮断抗体；ｂ）ＴＮＦレセプターの可溶性形態；ｃ）レセプターにおけるＴＮＦの作用を遮断するペプチド；およびｄ）これらの組み合わせからなる群から選択された請求項１ないし４のいずれか一項に記載の方法。６．成分がポリクローナルまたはモノクローナル抗体である、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の方法。７．成分がモノクローナル抗体ＭＡｂ４７である、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の方法。８．成分がペプチド、好ましくはペプチド４９２またはペプチドＴである、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の方法。９．成分が、ａ）カニューレまたは針を介した胆管または胃腸管の関連領域への直接輸送；ｂ）腸で効果を有する経口輸送；ｃ）肝臓を経て胆汁に排出される非経口輸送；ｄ）胆汁へのＴＮＦの輸送を遮断する非経口輸送；およびｅ）これらの組み合わせからなる群から選択された経路で輸送される、請求項１ないし７のいずれか一項に記載の方法。１０．成分が、直接的に胃腸管または胆管に輸送される、請求項１ないし９のいずれか一項に記載の方法。１１．成分が胆汁ＴＮＦの産生を減少する、請求項３記載の方法。１２．成分が、ａ）ＴＮＦ産生を減少するペプチド：ｂ）サリドマイド等のＴＮＦ産生を遮断する成分、５−リポキシゲナーゼおよび５−シクロオキシゲナーゼといった抗炎症阻害剤、ペントキシフィリンを含むｃＡＭＰレベルを上昇させてＴＮＦ産生を減少する成分ｃ）ＴＮＦ産生を遮断するポリ不飽和脂肪酸等の脂質分子からなる群から選択される、請求項１１記載の方法。１３．肝臓で産生され胆汁に分泌されたＴＮＦの循環への取り込みの増加による全身的な症状を治療又は予防する方法であって、患者に胆汁ＴＮＦの産生または作用を妨げる成分を、静脈投与しないことを特徴として投与することを含む方法。１４．成分が、ａ）ＴＮＦまたはそのレセプターに対する抗体、例えばＴＮＦ遮断抗体；ｂ）ＴＮＦレセプターの可溶性形態；ｃ）レセプターにおけるＴＮＦの作用を遮断するペプチド；およびｄ）これらの組み合わせからなる群から選択される請求項１３記載の方法。１５．成分がポリクローナルまたはモノクローナル抗体である、請求項１３または１４のいずれか一項に記載の方法。１６．成分がモノクローナル抗体ＭＡｂ４７である、請求項１３ないし１５のいずれか一項に記載の方法。１７．成分がペプチド、好ましくはペプチド４９２またはペプチドＴである、請求項１３ないし１５のいずれか一項に記載の方法。１８．成分が、ａ）カニューレまたは針を介した胆管または胃腸管の関連領域への直接輸送；ｂ）腸で効果を有する経口輸送；ｃ）肝臓を経て胆汁に排出される非経口輸送；ｄ）胆汁へのＴＮＦの輸送を遮断する非経口輸送；およびｅ）これらの組み合わせからなる群から選択された経路で輸送される、請求項１３ないし１７のいずれか一項に記載の方法。１９．成分が、直接的に胃腸管または胆管に輸送される、請求項１３ないし１８のいずれか一項に記載の方法。２０．成分が、ａ）ＴＮＦ産生を減少するペプチド：ｂ）サリドマイド等のＴＮＦ産生を遮断する成分、５−リポキシゲナーゼおよび５−シクロオキシゲナーゼといった抗炎症阻害剤、ペントキシフィリンを含むｃＡＭＰレベルを上昇させてＴＮＦ産生を減少する成分ｃ）ＴＮＦ産生を遮断するポリ不飽和脂肪酸等の脂質分子からなる群から選択される、請求項１３記載の方法。２１．患者がヒトである、請求項１ないし２０のいずれか一項に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/44 ＡＢＪＡ６１Ｋ 39/395 ＡＣＱ 39/395 ＡＡＨＡＤＵＡＢＢＡＤＹＡＣＱ 9284−4ＣＡＤＺＮＡＤＵ 9284−4ＣＡＥＤＤＡＤＹ 9051−4Ｃ 37/02 ＡＢＥＡＤＺ 9051−4Ｃ 37/50 ＡＢＪＡＥＤ 9051−4Ｃ 37/22 ＡＢＦ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．患者の腸の管腔内のＴＮＦレベルの上昇によって引き起こされた腸疾患の治療または予防方法であって、管腔内のＴＮＦの作用を低減する、もしくは管腔内のＴＮＦの産生または蓄積を低減する成分を患者に投与することを含む方法。２．敗血症、下痢、ゲイ腸症候群、移植物対宿主疾患、大腸癌、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連感染症、疝痛、非ステロイド系抗炎症剤によって開始された潰瘍、炎症性腸疾患、宿主対移植片疾患、胃腸潰瘍、胃腸炎症、手術後の細菌性転座、多重器官不全および食物アレルギーからなる群から選択された症候群または状態の患者における、請求項１記載の方法。３．敗血症、下痢、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連感染症、並びに手術後の細菌性転座からなる群から選択された症候群または状態の患者における、請求項２記載の方法。４．個々の腸の管腔内のＴＮＦが胆汁由来である、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の方法。５．成分が、ａ）ＴＮＦまたはそのレセプターに対する抗体、例えばＴＮＦ遮断抗体；ｂ）ＴＮＦレセプターの可溶性形態；ｃ）レセプターにおけるＴＮＦの作用を遮断するペプチド；およびｄ）これらの組み合わせからなる群から選択された請求項１ないし４のいずれか一項に記載の方法。６．成分がポリクローナルまたはモノクローナル抗体である、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の方法。７．成分がモノクローナル抗体ＭＡｂ４７である、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の方法。７．成分がモノクローナル抗体ＭＡｂ４７である、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の方法。８．成分がペプチド、好ましくはペプチド４９２またはペプチドＴである、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の方法。９．成分が、ａ）カニューレまたは針を介した胆管または胃腸管の関連領域への直接輸送；ｂ）腸で効果を有する経口輸送；ｃ）肝臓を経て胆汁に排出される非経口輸送；ｄ）胆汁へのＴＮＦの輸送を遮断する非経口輸送；およびｅ）これらの組み合わせからなる群から選択された経路で輸送される、請求項１ないし７のいずれか一項に記載の方法。１０．成分が、直接的に胃腸管または胆管に輸送される、請求項１ないし９のいずれか一項に記載の方法。１１．成分が胆汁ＴＮＦの産生を減少する、請求項３記載の方法。１２．成分が、ａ）ＴＮＦ産生を減少するペプチド：ｂ）サリドマイド等のＴＮＦ産生を遮断する成分、５−リポキシゲナーゼおよび５−シクロオキシゲナーゼといった抗炎症阻害剤、ペントキシフィリンを含むｃＡＭＰレベルを上昇させてＴＮＦ産生を減少する成分ｃ）ＴＮＦ産生を遮断するポリ不飽和脂肪酸等の脂質分子からなる群から選択される、請求項１１記載の方法。１３．肝臓で産生され胆汁に分泌されたＴＮＦの循環への取り込みの増加による全身的な症状を治療又は予防する方法であって、患者に胆汁ＴＮＦの産生または作用を妨げる成分を投与することを含む方法。１４．成分が、ａ）ＴＮＦまたはそのレセプターに対する抗体、例えばＴＮＦ遮断抗体；ｂ）ＴＮＦレセプターの可溶性形態；ｃ）レセプターにおけるＴＮＦの作用を遮断するペプチド；およびｄ）これらの組み合わせからなる群から選択される請求項１３記載の方法。１５．成分がポリクローナルまたはモノクローナル抗体である、請求項１３または１４のいずれか一項に記載の方法。１６．成分がモノクローナル抗体ＭＡｂ４７である、請求項１３ないし１５のいずれか一項に記載の方法。１７．成分がペプチド、好ましくはペプチド４９２またはペプチドＴである、請求項１３ないし１５のいずれか一項に記載の方法。１８．成分が、ａ）カニューレまたは針を介した胆管または胃腸管の関連領域への直接輸送；ｂ）腸で効果を有する経口輸送；ｃ）肝臓を経て胆汁に排出される非経口輸送；ｄ）胆汁へのＴＮＦの輸送を遮断する非経口輸送；およびｅ）これらの組み合わせからなる群から選択された経路で輸送される、請求項１３ないし１７のいずれか一項に記載の方法。１９．成分が、直接的に胃腸管または胆管に輸送される、請求項１３ないし１８のいずれか一項に記載の方法。２０．成分が、ａ）ＴＮＦ産生を減少するペプチド：ｂ）サリドマイド等のＴＮＦ産生を遮断する成分、５−リポキシゲナーゼおよび５−シクロオキシゲナーゼといった抗炎症阻害剤、ペントキシフィリンを含むｃＡＭＰレベルを上昇させてＴＮＦ産生を減少する成分ｃ）ＴＮＦ産生を遮断するポリ不飽和脂肪酸等の脂質分子からなる群から選択される、請求項１３記載の方法。２１．患者がヒトである、請求項１ないし２０のいずれか一項に記載の方法。