JPH09290A - 複合糖質の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 糖鎖の転移反応を利用して高収率で複合糖質
を製造する方法を提供する。 【構成】 酵素律速条件下にエンドグリコシダーゼによ
る糖質あるいは複合糖質（糖鎖供与体）からＮ−アセチ
ルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基を有する糖質ある
いは複合糖質（糖鎖受容体）への糖鎖の転移反応を行わ
せることを特徴とする複合糖質の製造方法。 【効果】 複合糖質を高収率に容易に製造でき、生理活
性をもつ複合糖質の製造に有効である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、酵素の糖鎖転移反応を
利用して高収率で複合糖質を製造する方法に関する。本
発明は医薬分野に応用される。

【０００２】

【従来の技術】糖質および複合糖質は生物の細胞、体液
等に存在し、細胞の基質認識や細胞−細胞間の認識等に
深く関わっている。また糖質は生体内物質の吸収分解等
の代謝の速度に関係している。これらの生理的機能に着
目して糖質を医薬として利用する試みが遺伝子組換技術
の発展とともになされている。例えば動物細胞等を用い
たエリスロポエチンやティシュープラスミノーゲンアク
チベーターの生産がその例であるが、糖鎖がついてもそ
れが機能の面からは必ずしも最適のものではないことも
多く、タンパク質、生理活性ペプチドあるいはセラミド
等に糖鎖を付けたりあるいは今ある糖鎖を別の糖鎖に換
えることにより、生理機能の強化や生理活性の改変に役
立つことが期待される。

【０００３】糖鎖を酵素的に改変する方法としては、
１）転移酵素あるいはエキソグリコシダーゼによる方法
と、２）エンドグリコシダーゼによる方法が考えられ
る。

【０００４】１）の方法としては、例えばＤ．Ｈ．ジョ
ジアッセ（D. H. Joziasse）ら［ヨーロピアン ジャー
ナル オブ バイオケミストリー（Eur. J. Bioche
m.)、 第１９１巻、第７５〜８３頁（１９９０）］の報
告があるが、糖鎖の非還元末端からの逐次反応である。
また、最近、Ｍ．シャスター（M. Schuster）ら［ジャ
ーナル オブ アメリカン ケミカル ソサエテイ（J.
Amer. Chem. Soc.）、第１１６巻、第１１３５〜１１
３６頁（１９９４）］は数種のグリコシルトランスフェ
ラーゼを組み合わせた糖鎖の固相合成法を報告してい
る。

【０００５】一方、２）のエンドグリコシダーゼを用い
た糖転移反応としては、Ｒ．Ｂ．トリムブル（R. B. Tr
imble）ら［ジャーナル オブ バイオロジカル ケミ
ストリー（J. Biol. Chem.）、第２６１巻、第１２００
０〜１２００５頁（１９８６）］のフラボバクテリウム
メニンゴセプチカム（Flavobacterium meningoseptic
um）由来のエンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダー
ゼ（エンド−Ｆ）に関するもの、Ｒ．Ｍ．バーデールス
（R. M. Bardales）ら［ジャーナル オブ バイオロジ
カル ケミストリー（J. Biol. Chem.）、第２６４巻、
第１９８９３〜１９８９７頁（１９８９）］のディプロ
コッカス ニューモニエ（Diprococcuspneumoniae）由
来のエンド−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼに
関するものがあり、前者はグリセロールが受容体に、ま
た後者はグリセロール、ｐ−ニトロフェノール、セリ
ン、スレオニン等が受容体になるという報告である。そ
の後、竹川ら［特開平５−６４５９４号（１９９３）］
およびＫ．タケガワ（K. Takegawa）ら［ジャーナル
オブ バイオロジカル ケミストリー（J. Biol. Che
m.）、第２７０巻、第３０９４〜３０９９頁（１９９
５）］がアルスロバクタープロトホルミエ（Arthrobact
er protophormiae）由来のエンド−β−Ｎ−アセチルグ
ルコサミニダーゼ（エンド−Ａ）による糖質への糖鎖転
移反応を、また、Ｋ．ヤマモト（K. Yamamoto） ら［バ
イオケミカル バイオフィジカル リサーチ コミュニ
ケーション（Biochem. Biophys. Res. Commun.）、第２
０３巻、第２４４〜２５２頁（１９９４）］はムコール
ヒエマリス（Mucor hiemalis）由来のエンド−Ｍによ
る糖質への糖鎖転移反応を報告した。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】糖質に糖鎖を新たに付
与したりあるいは他の糖鎖と入れ換えたりする、いわゆ
る糖鎖の改変（リモデリング）により複合糖質の生体内
での安定性や生物活性が天然の複合糖質に比べて増強さ
れたり天然にない生物機能が付加されれば医薬品に応用
した場合に有用である。また、複合糖質における糖鎖の
もつ生理的機能は今まで糖鎖改変の有効な手段がなかっ
たために、十分には解明されていないが、その役割の解
析のための重要な手段を提供する。

【０００７】従来のエキソグリコシダーゼまたはグリコ
シルトランスフェラーゼを用いた糖鎖合成反応では糖残
基一つ一つについてその酵素反応を逐次的に行わねばな
らず、反応ステップが多く、大変煩雑である。また、エ
ンド−Ｆやエンド−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダ
ーゼを用いた糖鎖転移反応は糖質や複合糖質が糖鎖受容
体になるものではなかった。

【０００８】一方、エンド−Ａあるいはエンド−Ｍによ
る方法は糖質や複合糖質が転移反応の糖鎖受容体になる
点で新しい方法を提供するものであったが、エンド−Ａ
は高マンノース型糖鎖のみが糖鎖供与体であり、またエ
ンド−Ｍは複合型糖鎖に作用したが、シアル酸のない糖
鎖に対してであり、シアル酸を有する複合型糖鎖に対す
る作用は知られていなかった。しかしながら、ここで最
大の問題点はこれらエンドグリコシダーゼによる糖鎖の
転移反応の反応収率が１〜２％、高々数％と著しく低
く、工業的に実施するには難があることであった。

【０００９】本発明の目的は、エンドグリコシダーゼに
よる糖鎖転移反応の反応収率を向上させる方法を開発
し、該反応を利用して複合糖質を収率よく簡便に製造す
る工業的に実施可能な方法を提供することにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明は複合糖質の製造法に関する。エンドグリコシダー
ゼの存在下、下記式（式１）： Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ ＋ Ｚ → Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ
−Ｚ ＋ Ｙ （式１）（式中、Ｘは複合糖鎖、Ｇｌ
ｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン、Ｙは糖質あるい
は複合糖質、ＺはＹとは異なる糖質あるいは複合糖質を
示す）で表される転移反応を行うことを特徴とする。

【００１１】本発明者らはエンドグリコシダーゼによる
糖鎖転移反応の反応収率を高める方法を検討した結果、
与酵素量を減らし、糖鎖供与体と受容体の比率を一定範
囲にしつつ両基質の仕込濃度を高め、反応速度が与酵素
量に依存する酵素律速の条件で反応を行うことにより、
複合型糖鎖の場合にその反応収率（対糖鎖受容体、モル
収率）が２０％を越えるなど、糖鎖の転移反応収率が著
しく向上することを見出し本発明を完成した。

【００１２】本発明に用いるエンドグリコシダーゼとし
ては、例えばＳ．カドワキ（S. Kadowaki ）ら［アグリ
カルチュラル アンド バイオロジカル ケミストリー
（Agr. Biol. Chem.）、第５４巻、第９７〜１０６頁
（１９９０）］により報告されたムコール ヒエマリス
（Mucor hiemalis）により生産されるエンド−β−Ｎ−
アセチルグルコサミニダーゼ（エンド−Ｍ）がある。該
酵素は下記式（式２）： Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−（ペプチドまたはタンパク質）（ 式２） （式中Ｒは複合糖鎖を示す）のアスパラギン（Ａｓｎ）
結合型糖鎖のキトビオース部分（ＧｌｃＮＡｃ−Ｇｌｃ
ＮＡｃ）の間を加水分解する。その基質特異性について
は、Ｋ．ヤマモト（K. Yamamoto）ら［バイオサイエン
ス バイオテクノロジー アンド バイオケミストリー
（Biosci. Biotechnol. Biochem.）、第５８巻、第７２
〜７７頁（１９９４）］に、高マンノース型のみならず
複合型糖鎖にも作用することが述べられている。

【００１３】エンドグリコシダーゼの本来の機能は糖鎖
の加水分解反応である。即ち（式１）のＺの代わりに水
が入り、下記式（式３）： Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ ＋ Ｈ₂ Ｏ → Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−ＯＨ ＋ Ｈ−Ｙ （式３） の加水分解反応が転移反応とともに副反応として進行す
る。

【００１４】また、（式１）で生成した転移反応生成物
Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｚは（式３）の加水分解の基質とな
り再分解を受けるため、この分解を防ぐ必要がある。

【００１５】転移反応を効率よく行わせるには（式３）
の反応を抑えて（式１）の反応を優先的に行わせること
が必要である。与酵素量を減らし、基質である糖鎖供与
体（Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ）と糖鎖受容体（Ｚ）の仕込
濃度を、そのモル比を１近くにしつつ高濃度にすること
により反応の場（酵素の活性中心）における水の影響を
排して転移反応を効率よく進行させることが期待でき
る。また転移反応生成物の再分解の防止にも与酵素量の
制限の効果が期待できる。これらの考えに基づき本発明
を完成した。この発明により糖鎖供与体から糖鎖受容体
へ高収率で糖鎖を転移させることが可能となった。即
ち、本発明のポイントは次の３点である。

【００１６】１．与酵素量を制限すること。糖鎖供与体
から受容体への糖鎖転移反応の速度が与酵素量に依存す
るように、即ち反応速度が酵素律速になるように酵素の
添加量を制限する。酵素に対して高濃度に基質が存在し
糖鎖転移反応が促進される。与酵素量の制限は糖鎖転移
反応生成物の再分解の防止にも効果がある。過剰の酵素
の添加は副反応が強く起き反応収率を下げる。余りに酵
素量が少ないと反応速度が遅く反応に時間がかかり過ぎ
る。例えばエンド−Ｍの場合、糖鎖供与体に対して５０
０ユニット（Ｕ）／モル（供与体）以下、望ましくは８
０〜４００Ｕ／モル（供与体）程度の酵素量、下記第２
項の基質濃度の時であれば２〜１０ｍＵ／ｍｌ程度に加
えるのがよい。なおここで、酵素の１ユニット（Ｕ）
は、ヒトトランスフェリン由来のアシアロ複合型糖鎖の
ダンシル化（ＤＮＳ）誘導体を加水分解して、３７℃、
１分間に１マイクロモル（μｍｏｌ）のＮ−アセチルグ
ルコサミニル−アスパラギンのＤＮＳ誘導体（ＧｌｃＮ
Ａｃ−Ａｓｎ−ＤＮＳ）を生成させるに必要な酵素量で
ある。実施例１にその内容を示す。

【００１７】２．糖鎖供与体と受容体の仕込濃度を著し
く高めること。従来の報告にあるような糖鎖供与体と受
容体の両基質濃度の薄いところでは反応収率が低く、与
酵素量を制限しつつ両基質を高濃度に仕込むことにより
反応収率は飛躍的に向上した。その濃度は、糖鎖供与体
が１０ｍＭ以上望ましくは１５〜７５ｍＭ、また糖鎖受
容体は５ｍＭ以上望ましくは７．５〜３５ｍＭ程度が至
適であった。実施例２にその内容を示す。

【００１８】３．糖鎖供与体と受容体の量（モル）比を
一定範囲にすること。糖鎖供与体と受容体が１：１の反
応であり、その量比を１付近即ち糖鎖供与体／受容体の
比が２〜０．５にするのがよく、２〜１付近がより至適
であった。

【００１９】基質に対する与酵素量を制限することとと
もに、糖鎖供与体と受容体の両基質濃度を高くする要件
を共に満たすことも重要である。与酵素量／糖鎖供与体
の値を基準内にしても基質濃度が薄ければ反応率は低
く、その例を実施例３に示す。

【００２０】これらの要件を組み合わせることにより反
応が高収率で進行する。このような反応条件下では、高
マンノース型糖鎖およびアシアロ複合型糖鎖のみなら
ず、従来反応が知られていなかったシアロ複合型糖鎖に
おいても高い反応収率で転移反応が進行した。

【００２１】本発明の糖鎖供与体としては、高マンノー
ス型、複合型、混成型いずれの糖鎖も用いられる。高マ
ンノース型糖鎖は例えば卵白アルブミン等から、またシ
アル酸を含有する複合型糖鎖は例えばヒトトランスフェ
リンや牛フェツイン等から調製され、シアリダーゼ処理
等によりシアル酸を外せばアシアロ複合型糖鎖が得られ
る。糖鎖供与体としては糖タンパク質をそのまま用いて
もよいが、プロナーゼ等のタンパク質加水分解酵素によ
りタンパク質部分をアスパラギン（Ａｓｎ）残基にまで
小さくしたものがより適しており、通常この形で用い
る。

【００２２】糖鎖受容体は糖質あるいは複合糖質であ
り、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基を
有する糖、糖ペプチドとその誘導体あるいは糖タンパク
質等が用いられる。複合糖質としては例えばリボヌクレ
アーゼ（ＲＮａｓｅ）等の糖タンパク質のエンドあるい
はエキソグリコシダーゼ処理により調製したＧｌｃＮＡ
ｃ−Ａｓｎ残基を有するタンパク質あるいはそのプロテ
アーゼで部分分解したペプチド断片であり、そのままあ
るいはダンシル（ＤＮＳ）化誘導体等が用いられる。Ｇ
ｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＮＳもその一つである。Ｇｌｃ
ＮＡｃ残基を有する化学合成したペプチドも用いること
が出来る。

【００２３】用いるエンドグリコシダーゼとしては、エ
ンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ＥＣ３．
２．１．９６）であり、例えば、エンド−Ｍ等が用いら
れる。

【００２４】本発明の反応は、基質の糖鎖供与体、糖鎖
受容体および酵素のエンドグリコシダーゼを緩衝溶液中
で混合することにより行われる。先述のごとく、糖鎖供
与体の濃度を１０ｍＭ以上、望ましくは１５〜７５ｍ
Ｍ、糖鎖受容体の濃度を５ｍＭ以上、望ましくは７．５
〜３５ｍＭ、糖鎖供与体／受容体の量比（モル比）を２
〜０．５になるように加える。酵素量は５００Ｕ／モル
（供与体）以下、望ましくは８０〜４００Ｕ／モル（供
与体）程度に制限し、例えば、エンド−Ｍの場合、２〜
１０ｍＵ／ｍｌ程度の量で用いる。緩衝液としては、ｐ
Ｈ５〜８程度、濃度２５〜２００ｍＭ、望ましくは５０
〜１００ｍＭの適当な緩衝液が用いられる。エンド−Ｍ
の場合、通常ｐＨ５．５〜６．５、濃度５０〜１００ｍ
Ｍの酢酸あるいはリン酸緩衝液中で反応が行われる。基
本的な反応液組成の一例は、糖鎖供与体２５ｍＭ、糖鎖
受容体１２．５ｍＭ、エンド−Ｍ ４ｍＵ／ｍｌおよび
６０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．２５）である。

【００２５】反応温度は通常、室温〜５０℃程度、好ま
しくは３０〜４０℃で行われ、反応時間は１〜２４時間
である。例えば、エンド−Ｍ酵素の場合、通常、３７℃
で３〜１８時間程度反応が行われる。

【００２６】生成した複合糖質は公知の手段に従って反
応終了液から容易に分離精製することが出来る。例え
ば、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー、イオン交換樹
脂カラムクロマトグラフィー、レクチンカラムクロマト
グラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
等により反応終了液から反応生成物の複合糖質を分離
し、更に濃縮、脱塩、凍結乾燥等を行えばよい。

【００２７】

【実施例】以下に実施例をあげて本発明を更に具体的に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。

【００２８】

【実施例１】糖鎖転移反応に及ぼす与酵素量の影響：
糖鎖供与体として、卵白アルブミンをプロナーゼ処理、
セファデックスＧ−２５ゲルろ過、更にＤｏｗｅｘ５０
イオン交換クロマトで分離精製して得た高マンノース型
糖鎖（Ｍａｎ）₆−（ＧｌｃＮＡｃ）₂−Ａｓｎ、糖鎖受
容体としてＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＮＳを用いた。糖
鎖供与体（Ｍａｎ）₆−（ＧｌｃＮＡｃ）₂−Ａｓｎを２
５ｍＭ、糖鎖受容体ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＮＳを１
２．５ｍＭの基質仕込濃度の反応系で、エンド−Ｍの与
酵素量を２〜１６ｍＵ／ｍｌの濃度、即ち糖鎖供与体に
対する与酵素量を８０〜６４０Ｕ／モル（供与体）にと
り反応させた（３７℃、３時間）。仕込糖鎖受容体量に
対する転移反応生成物（Ｍａｎ）₆−（ＧｌｃＮＡｃ）₂
−Ａｓｎ−ＤＮＳの生成量のモル比（％）を転移反応収
率とした。与酵素量４ｍＵ／ｍｌ［１６０Ｕ／モル（供
与体）］の時の転移反応収率を基準（１００）にした各
与酵素量における相対反応収率を図１に示す。

【００２９】

【図１】反応収率が与酵素量で律速されるように、酵素
量を基質に対して制限量に与えたところで高い反応収率
が得られた。酵素の過剰添加条件では副反応が起き反応
収率は低下した。余りに与酵素量が少ないと反応速度が
遅く反応に時間がかかり過ぎた。与酵素量は５００Ｕ／
モル（供与体）以下の酵素律速条件にするのがよく、８
０〜４００Ｕ／モル（供与体）付近が至適であった。

【００３０】

【実施例２】糖鎖転移反応に及ぼす糖鎖供与体と糖鎖受
容体の濃度の影響： 糖鎖供与体として、高マンノース
型糖鎖（Ｍａｎ）₆−（ＧｌｃＮＡｃ）₂−Ａｓｎを５〜
５０ｍＭ、糖鎖受容体としてＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−Ｄ
ＮＳを５〜５０ｍＭの濃度で用いた。酵素としてエンド
−Ｍ（４ｍＵ／ｍｌ）、緩衝液としてｐＨ６．２５リン
酸緩衝液（６０ｍＭ）を用いて反応（３７℃、１８時
間）させた時の、糖鎖供与体と受容体の濃度の糖鎖転移
反応収率（糖鎖受容体の仕込濃度に対する転移反応生成
物のモル％）に及ぼす影響を調べた結果を表１に示す。

【００３１】

【表１】 表１では各濃度における反応収率を、糖鎖供与体２５ｍ
Ｍ、受容体１２．５ｍＭの時の反応収率（７．９％）を
１００とした相対値（％）として表示した。糖鎖供与体
および受容体の濃度の低いところでの反応収率は低く、
高濃度にすると高い反応収率が得られた。糖鎖供与体の
濃度が１０ｍＭ以上、１５〜７５ｍＭ付近、また受容体
の濃度が５ｍＭ以上、７．５〜３５ｍＭ付近の濃度が至
適であった。

【００３２】

【実施例３】糖鎖転移反応に及ぼす与酵素量と基質濃度
の影響： 実施例１の基準の条件即ち、糖鎖供与体（Ｍ
ａｎ）₆−（ＧｌｃＮＡｃ）₂−Ａｓｎ ２５ｍＭ、糖鎖
受容体ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＮＳ １２．５ｍＭ、
エンド−Ｍ ４ｍＵ／ｍｌ［１６０Ｕ／モル（供与
体）］、リン酸緩衝液 ６０ｍＭ（ｐＨ６．２５）の反
応液全体を蒸留水で５倍に薄めて反応（反応３７℃、６
時間）させた。与酵素量／糖鎖供与体の比は変わらず基
質濃度が１／５（供与体 ５ｍＭ、受容体 ２．５ｍ
Ｍ）となる。この条件での相対反応収率は基準の条件の
反応収率に対し１９％に過ぎなかった。

【００３３】

【実施例４】高マンノース型糖鎖および複合型糖鎖の糖
鎖転移反応： 糖鎖供与体として、高マンノース型糖鎖
（Ｍａｎ）₆−（ＧｌｃＮＡｃ）₂−Ａｓｎ（分子量１６
５１）、あるいはヒトトランスフェリンのプロナーゼ処
理、シアリダーゼ処理およびセファデックスＧ−２５ゲ
ルろ過により調製したアシアロ複合型糖鎖（分子量１７
５６）を１μｍｏｌ（終濃度２５ｍＭ）、糖鎖受容体と
してＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＮＳ（分子量５７１）を
５００ｎｍｏｌ（同１２．５ｍＭ）、エンド−Ｍ を１
６０μＵ（同４ｍＵ／ｍｌ）加え、６０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ６．２５）４０μｌ中で３７℃、１８時間反応
させた。加熱処理により反応停止後、反応液を蒸留水で
１ｍｌに希釈し反応生成物をＨＰＬＣで分析した。（Ｍ
ａｎ）₆−（ＧｌｃＮＡｃ）₂−Ａｓｎからは７．９％、
アシアロ複合型糖鎖からは２３．５％の反応収率（対糖
鎖受容体、モル比）でＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＮＳへ
の転移反応生成物が得られた。各反応生成物をＨＰＬＣ
分取し、質量分析したところ、前者には分子量１７４
７、後者には分子量１９９１に相当するイオンピーク
（ｍ／ｚ）が認められ、各（Ｍａｎ）₆−（ＧｌｃＮＡ
ｃ）₂−Ａｓｎ およびアシアロ複合型糖鎖からＧｌｃＮ
Ａｃ−Ａｓｎ−ＤＮＳへの転移反応生成物、即ち各（Ｍ
ａｎ）₆−（ＧｌｃＮＡｃ）₂−Ａｓｎ−ＤＮＳおよびア
シアロ複合型糖鎖−ＤＮＳ誘導体であることが確認され
た。

【００３４】

【発明の効果】本発明により、糖質あるいは複合糖質
（糖鎖供与体）の糖鎖を他の糖質あるいは複合糖質（糖
鎖受容体）に高収率で転移させることができ、複合糖質
を効率よく簡便に製造することが可能となった。本発明
は、医薬等への応用とともに複合糖質の糖鎖の果たして
いる生理的役割を解明するための研究手法を提供する。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成７年１１月２２日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図面の簡単な説明

【補正方法】追加

【補正内容】

【図面の簡単な説明】

【図１】糖鎖転移反応に及ぼす与酵素量の影響を示す。
糖鎖供与体として高マンノース型糖鎖、受容体としてＧ
ｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＮＳを用いた。横軸は酵素エン
ド−Ｍの与酵素量を、縦軸は反応収率を示す。各与酵素
量における反応収率を、糖鎖供与体に対する与酵素量が
１６０Ｕ／モルの時の反応収率を基準（１００）として
それに対する相対値で示した。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】酵素律速条件下にエンドグリコシダーゼに
   よる糖質あるいは複合糖質（糖鎖供与体）からＮ−アセ
   チルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基を有する糖質あ
   るいは複合糖質（糖鎖受容体）への糖鎖の転移反応を行
   わせることを特徴とする複合糖質の製造方法。
2. 【請求項２】糖鎖供与体に対するエンドグリコシダーゼ
   の与酵素量を５００ユニット（Ｕ）／モル（供与体）以
   下、望ましくは８０〜４００Ｕ／モル（供与体）にして
   反応を行う請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】糖鎖供与体を１５〜７５ｍＭおよび糖鎖受
   容体を７．５〜３５ｍＭの濃度にして反応を行う請求項
   １に記載の方法。
4. 【請求項４】糖鎖供与体を１５〜７５ｍＭおよび糖鎖受
   容体を７．５〜３５ｍＭの濃度、糖鎖供与体に対するエ
   ンドグリコシダーゼの与酵素量を８０〜４００ユニット
   （Ｕ）／モル（供与体）にして反応を行う請求項１に記
   載の方法。
5. 【請求項５】エンドグリコシダーゼがエンド−β−Ｎ−
   アセチルグルコサミニダーゼ（ＥＣ３．２．１．９６）
   である請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】エンドグリコシダーゼがムコール ヒエマ
   リス（Ｍｕｃｏｒ ｈｉｅｍａｌｉｓ）の生産するエン
   ド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、エンド−Ｍ
   である請求項１に記載の方法。