JPH09262098A - 魚介類の鮮度測定方法及び装置 - Google Patents
魚介類の鮮度測定方法及び装置Info
- Publication number
- JPH09262098A JPH09262098A JP9941696A JP9941696A JPH09262098A JP H09262098 A JPH09262098 A JP H09262098A JP 9941696 A JP9941696 A JP 9941696A JP 9941696 A JP9941696 A JP 9941696A JP H09262098 A JPH09262098 A JP H09262098A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- concentration
- inosine
- sample
- carrier liquid
- phosphate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
(57)【要約】
【課題】 アルカリフォスフォターゼ（ＡＰ）、プリン
ヌクレオシドフォスフォリラーゼ（ＰＮＰ）及びキサン
チンオキシダーゼ（ＸＯＤ）の酵素反応を利用してＦＩ
Ａ法によって魚介類のＫI値を求める場合において、ＫI
値を１分程度の短時間で算出し、魚介類の鮮度判定を迅
速に行う。 【解決手段】 ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアク
タ２６を備えた第１チャンネル３８と、ＰＮＰ／ＸＯＤ
同時固定化リアクタ３２を備えた第２チャンネル４０を
用いて測定を行う。第１チャンネルのキャリヤ液２とし
てはリン酸イオン濃度が試料中のイノシン５’−リン酸
及びイノシンの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下である
もの、第２チャンネルのキャリヤ液４としてはリン酸イ
オン濃度５ｍＭ以上のものを用いる。そして、第１チャ
ンネルで試料中のイノシン酸、イノシン及びヒポキサン
チンの合計濃度を検出するとともに、第２チャンネル４
０で試料中のイノシン及びヒポキサンチンの合計濃度を
検出し、これらからＫI値を算出する。
ヌクレオシドフォスフォリラーゼ（ＰＮＰ）及びキサン
チンオキシダーゼ（ＸＯＤ）の酵素反応を利用してＦＩ
Ａ法によって魚介類のＫI値を求める場合において、ＫI
値を１分程度の短時間で算出し、魚介類の鮮度判定を迅
速に行う。 【解決手段】 ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアク
タ２６を備えた第１チャンネル３８と、ＰＮＰ／ＸＯＤ
同時固定化リアクタ３２を備えた第２チャンネル４０を
用いて測定を行う。第１チャンネルのキャリヤ液２とし
てはリン酸イオン濃度が試料中のイノシン５’−リン酸
及びイノシンの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下である
もの、第２チャンネルのキャリヤ液４としてはリン酸イ
オン濃度５ｍＭ以上のものを用いる。そして、第１チャ
ンネルで試料中のイノシン酸、イノシン及びヒポキサン
チンの合計濃度を検出するとともに、第２チャンネル４
０で試料中のイノシン及びヒポキサンチンの合計濃度を
検出し、これらからＫI値を算出する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、魚肉類に含まれる
ＡＴＰ関連化合物の濃度比から魚介類の鮮度を測定する
方法及び装置に関し、さらに詳述すると、ＦＩＡ法（流
れ分析法）によりＫI値を迅速に算出して魚介類の鮮度
判定を短時間で行うことができる方法及び装置に関す
る。
ＡＴＰ関連化合物の濃度比から魚介類の鮮度を測定する
方法及び装置に関し、さらに詳述すると、ＦＩＡ法（流
れ分析法）によりＫI値を迅速に算出して魚介類の鮮度
判定を短時間で行うことができる方法及び装置に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】食品の品質に対する人々の関心は年々高
くなっており、よりおいしく、新鮮で、安全な食品が求
められている。食品産業においては、これらの要望に応
えるために、原料、製造工程での中間製品及び最終製品
について、様々な面から品質の検査、管理を行う必要に
迫られている。この場合、食品の品質を官能検査によっ
て客観的に判断するにはかなりの工数と熟練したパネル
（検査員）が必要であるため、センサー等を用いた科学
的な食品品質の判定方法が要望されている。
くなっており、よりおいしく、新鮮で、安全な食品が求
められている。食品産業においては、これらの要望に応
えるために、原料、製造工程での中間製品及び最終製品
について、様々な面から品質の検査、管理を行う必要に
迫られている。この場合、食品の品質を官能検査によっ
て客観的に判断するにはかなりの工数と熟練したパネル
（検査員）が必要であるため、センサー等を用いた科学
的な食品品質の判定方法が要望されている。
【０００３】食品産業で取り扱う材料の内、水産物の鮮
度については、(イ)きわめて短時間の内に変化するこ
と、(ロ)魚種により鮮度の変化が様々な経過をたどるこ
と、(ハ)客観的な判断が難しいことから、これまで多く
の方法が検討されてきた。それらの中で、現在では、魚
肉中に含まれるＡＴＰ関連化合物の量の比率（Ｋ値）を
鮮度の指標として用いる方法が確立されている。
度については、(イ)きわめて短時間の内に変化するこ
と、(ロ)魚種により鮮度の変化が様々な経過をたどるこ
と、(ハ)客観的な判断が難しいことから、これまで多く
の方法が検討されてきた。それらの中で、現在では、魚
肉中に含まれるＡＴＰ関連化合物の量の比率（Ｋ値）を
鮮度の指標として用いる方法が確立されている。
【０００４】すなわち、魚の死後、筋肉中のＡＴＰは、
細胞内の代謝メカニズムにより、ＡＴＰ（アデノシン
５’−三リン酸）→ＡＤＰ（アデノシン５’−二リン
酸）→ＡＭＰ（アデノシン５’−リン酸）→ＩＭＰ（イ
ノシン５’−リン酸）→ＨXＲ（イノシン）→ＨX（ヒポ
キサンチン）と代謝され、さらに尿酸と過酸化水素にま
で分解されるが、その際ＨXＲとＨXが蓄積する。そこ
で、ＨXＲとＨXの濃度の合計値と全ての成分の濃度の合
計値との比をとった値がＫ値であり、下記式で表される
（単位％）。なお、[ATP]等は各成分の濃度である。 Ｋ値＝{([HXR]+[HX])／([ATP]+[ADP]+[AMP]+[IMP]+[H
XR]+[HX])}×100
細胞内の代謝メカニズムにより、ＡＴＰ（アデノシン
５’−三リン酸）→ＡＤＰ（アデノシン５’−二リン
酸）→ＡＭＰ（アデノシン５’−リン酸）→ＩＭＰ（イ
ノシン５’−リン酸）→ＨXＲ（イノシン）→ＨX（ヒポ
キサンチン）と代謝され、さらに尿酸と過酸化水素にま
で分解されるが、その際ＨXＲとＨXが蓄積する。そこ
で、ＨXＲとＨXの濃度の合計値と全ての成分の濃度の合
計値との比をとった値がＫ値であり、下記式で表される
（単位％）。なお、[ATP]等は各成分の濃度である。 Ｋ値＝{([HXR]+[HX])／([ATP]+[ADP]+[AMP]+[IMP]+[H
XR]+[HX])}×100
【０００５】また、魚の死後１０〜２０時間で、ＡＴ
Ｐ、ＡＤＰ、ＡＭＰまでの成分はほとんど無視できる程
度まで減少する。そこで、通常流通している水産物に対
しては、Ｋ値を簡易化した下記ＫI値（単位％）で鮮度
を表せることが知られている。 ＫI値＝{([HXR]+[HX])／([IMP]+[HXR]+[HX])}×100
Ｐ、ＡＤＰ、ＡＭＰまでの成分はほとんど無視できる程
度まで減少する。そこで、通常流通している水産物に対
しては、Ｋ値を簡易化した下記ＫI値（単位％）で鮮度
を表せることが知られている。 ＫI値＝{([HXR]+[HX])／([IMP]+[HXR]+[HX])}×100
【０００６】従来、前述したＫI値を指標とし、ＦＩＡ
法によって魚介類の鮮度を判定するシステムとして、図
９に示す構成のものが提案されている。図９のＦＩＡシ
ステムにおいて、Ａは第１のキャリヤ液、Ｂはポンプ、
Ｃはインジェクタ、Ｄはウリカーゼ固定化リアクタ、Ｅ
はアルカリフォスフォターゼ（ＡＰ）固定化リアクタ、
Ｆは遅延コイル、Ｇはブランクリアクタ、Ｈは第２のキ
ャリヤ液、Ｉはポンプ、Ｊはミキシングコイル、Ｋはプ
リンヌクレオシドフォスフォリラーゼ（ＰＮＰ）／キサ
ンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）同時固定化リアクタ、Ｌ
は尿酸測定用グラッシーカーボン電極、Ｍはポテンシオ
スタット、Ｎは記録計を示す。
法によって魚介類の鮮度を判定するシステムとして、図
９に示す構成のものが提案されている。図９のＦＩＡシ
ステムにおいて、Ａは第１のキャリヤ液、Ｂはポンプ、
Ｃはインジェクタ、Ｄはウリカーゼ固定化リアクタ、Ｅ
はアルカリフォスフォターゼ（ＡＰ）固定化リアクタ、
Ｆは遅延コイル、Ｇはブランクリアクタ、Ｈは第２のキ
ャリヤ液、Ｉはポンプ、Ｊはミキシングコイル、Ｋはプ
リンヌクレオシドフォスフォリラーゼ（ＰＮＰ）／キサ
ンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）同時固定化リアクタ、Ｌ
は尿酸測定用グラッシーカーボン電極、Ｍはポテンシオ
スタット、Ｎは記録計を示す。
【０００７】図９のシステムでは、第１のキャリヤ液Ａ
にインジェクタＣから試料が注入され、流路Ｐを通った
キャリヤ液Ａ中ではリアクタＫでＨXＲがＨXに、ＨXが
過酸化水素と尿酸に変換され、この尿酸が電極Ｌで検出
される。また、流路Ｑを通ったキャリヤ液Ａ中ではリア
クタＥでＩＭＰがＨXＲに変換された後、リアクタＫで
ＨXＲがＨXに、ＨXが過酸化水素と尿酸に変換され、こ
の尿酸が電極Ｌで検出される。このとき、本システムで
は遅延コイルＦを設けてあるので、ＨXＲ及びＨXの総濃
度に対応する第１のピークと、ＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの
総濃度に対応する第２のピークとが得られるから、これ
らのピーク高さに基づいて前記式によりＫI値を求める
ことができる。
にインジェクタＣから試料が注入され、流路Ｐを通った
キャリヤ液Ａ中ではリアクタＫでＨXＲがＨXに、ＨXが
過酸化水素と尿酸に変換され、この尿酸が電極Ｌで検出
される。また、流路Ｑを通ったキャリヤ液Ａ中ではリア
クタＥでＩＭＰがＨXＲに変換された後、リアクタＫで
ＨXＲがＨXに、ＨXが過酸化水素と尿酸に変換され、こ
の尿酸が電極Ｌで検出される。このとき、本システムで
は遅延コイルＦを設けてあるので、ＨXＲ及びＨXの総濃
度に対応する第１のピークと、ＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの
総濃度に対応する第２のピークとが得られるから、これ
らのピーク高さに基づいて前記式によりＫI値を求める
ことができる。
【０００８】この場合、リアクタＥにおけるＡＰによる
酵素反応はリン酸イオンによって阻害され、リアクタＫ
におけるＰＮＰによる酵素反応は加リン酸分解であるた
めリン酸イオンを必要とする。したがって、本システム
では、試料をリアクタＥに導入する第１のキャリヤ液Ａ
としてはリン酸イオンを含まないものを用い、一方第２
のキャリヤ液Ｈとしてはリン酸イオンを含むものを使用
して、リアクタＫの手前で第１のキャリヤ液Ａにリン酸
イオンを含む第２のキャリヤ液Ｈを混合している。
酵素反応はリン酸イオンによって阻害され、リアクタＫ
におけるＰＮＰによる酵素反応は加リン酸分解であるた
めリン酸イオンを必要とする。したがって、本システム
では、試料をリアクタＥに導入する第１のキャリヤ液Ａ
としてはリン酸イオンを含まないものを用い、一方第２
のキャリヤ液Ｈとしてはリン酸イオンを含むものを使用
して、リアクタＫの手前で第１のキャリヤ液Ａにリン酸
イオンを含む第２のキャリヤ液Ｈを混合している。
【０００９】なお、図９の装置においてウリカーゼ固定
化リアクタＤを配置しているのは、試料中にもともと共
存している尿酸は正の誤差を与えるため、この尿酸を分
解除去するためである。また、同様のＦＩＡシステムに
おいて、グラッシーカーボン電極Ｌによる尿酸の測定に
代えて、反応後のキャリヤ液に過酸化水素と反応して発
光する試薬を加えてこのときの発光量を光応答性の素子
で計測することにより、前記と同様の２つのピークを得
てＫI値を求めることも提案されている。
化リアクタＤを配置しているのは、試料中にもともと共
存している尿酸は正の誤差を与えるため、この尿酸を分
解除去するためである。また、同様のＦＩＡシステムに
おいて、グラッシーカーボン電極Ｌによる尿酸の測定に
代えて、反応後のキャリヤ液に過酸化水素と反応して発
光する試薬を加えてこのときの発光量を光応答性の素子
で計測することにより、前記と同様の２つのピークを得
てＫI値を求めることも提案されている。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】図９に示した従来のＦ
ＩＡシステムでは、ＡＰによる酵素反応はリン酸イオン
によって阻害され、ＰＮＰによる酵素反応はリン酸イオ
ンを必要とするため、ＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXを過酸化水
素と尿酸に変換するのに必要な３種の酵素を２個のリア
クタに分割して固定化し、前段のＡＰ固定化リアクタＥ
に試料を導入するキャリヤ液としてはリン酸イオンを含
まないものを用い、後段のＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リ
アクタＫに試料を導入する際にキャリヤ液にリン酸イオ
ンを添加している。
ＩＡシステムでは、ＡＰによる酵素反応はリン酸イオン
によって阻害され、ＰＮＰによる酵素反応はリン酸イオ
ンを必要とするため、ＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXを過酸化水
素と尿酸に変換するのに必要な３種の酵素を２個のリア
クタに分割して固定化し、前段のＡＰ固定化リアクタＥ
に試料を導入するキャリヤ液としてはリン酸イオンを含
まないものを用い、後段のＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リ
アクタＫに試料を導入する際にキャリヤ液にリン酸イオ
ンを添加している。
【００１１】しかしながら、ＡＰ、ＰＮＰ及びＸＯＤを
２のリアクタに分割して固定化している従来のＦＩＡシ
ステムは、１試料のＫI値の測定に５分程度を要し、測
定の迅速性に劣るという欠点を有していた。すなわち、
ＩＭＰをＨXＲに変換し、ＨXＲをＨXに変換し、ＨXを過
酸化水素と尿酸に変換するというような連続的な酵素反
応は、１つのリアクタに連続反応に必要な全ての酵素を
固定化して行うことが反応効率の点で望ましく、これに
より反応速度を高めることができるが、従来のＦＩＡシ
ステムでは連続反応に必要な酵素を２つのリアクタに分
割しているため、反応効率が低く、反応速度が遅いた
め、測定に時間がかかるものであった。
２のリアクタに分割して固定化している従来のＦＩＡシ
ステムは、１試料のＫI値の測定に５分程度を要し、測
定の迅速性に劣るという欠点を有していた。すなわち、
ＩＭＰをＨXＲに変換し、ＨXＲをＨXに変換し、ＨXを過
酸化水素と尿酸に変換するというような連続的な酵素反
応は、１つのリアクタに連続反応に必要な全ての酵素を
固定化して行うことが反応効率の点で望ましく、これに
より反応速度を高めることができるが、従来のＦＩＡシ
ステムでは連続反応に必要な酵素を２つのリアクタに分
割しているため、反応効率が低く、反応速度が遅いた
め、測定に時間がかかるものであった。
【００１２】本発明は、上記事情に鑑みてなされたもの
で、ＡＰ、ＰＮＰ及びＸＯＤの酵素反応を利用してＦＩ
Ａ法によって魚介類のＫI値を求める場合において、１
試料のＫI値を１分程度の短時間で算出することがで
き、したがって魚介類の鮮度判定をきわめて迅速に行う
ことが可能な魚介類の鮮度測定方法及び装置を提供する
ことを目的とする。
で、ＡＰ、ＰＮＰ及びＸＯＤの酵素反応を利用してＦＩ
Ａ法によって魚介類のＫI値を求める場合において、１
試料のＫI値を１分程度の短時間で算出することがで
き、したがって魚介類の鮮度判定をきわめて迅速に行う
ことが可能な魚介類の鮮度測定方法及び装置を提供する
ことを目的とする。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
を達成するために鋭意検討を行った結果、下記知見を得
た。 （１）ＡＰによる酵素反応は、これまでリン酸イオンに
よって阻害されると考えられており、実際、リン酸イオ
ンが高濃度である場合には該反応は著しく阻害される。
しかし、本発明者らは、キャリヤ液中のリン酸イオン濃
度を、試料中のイノシン５’−リン酸及びイノシンの合
計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下（本明細書において単位
Ｍはｍｏｌ／ｌを示す）の範囲の低濃度にした場合に
は、ＡＰによる酵素反応がリン酸イオンによってほとん
ど阻害されることなく進行し、ＩＭＰがＨXＲに良好に
変換され、またＰＮＰによる酵素反応は、キャリヤ液中
のリン酸イオン濃度が試料中のＩＭＰ及びＨXＲの合計
濃度の２倍以上で５ｍＭ以下の範囲でも良好に進行し、
ＨXＲがＨXに変換されることを知見した。したがって、
キャリヤ液としてリン酸イオン濃度が試料中のＩＭＰ及
びＨXＲの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下のものを使
用すれば、ＡＰ、ＰＮＰ及びＸＯＤを１本のリアクタに
固定化したＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタに
よってＩＭＰ→ＨXＲ→ＨX→尿酸／過酸化水素という連
続酵素反応を高い反応効率、反応速度で行うことでき、
試料中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度を迅速に検出
できることが判明した。
を達成するために鋭意検討を行った結果、下記知見を得
た。 （１）ＡＰによる酵素反応は、これまでリン酸イオンに
よって阻害されると考えられており、実際、リン酸イオ
ンが高濃度である場合には該反応は著しく阻害される。
しかし、本発明者らは、キャリヤ液中のリン酸イオン濃
度を、試料中のイノシン５’−リン酸及びイノシンの合
計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下（本明細書において単位
Ｍはｍｏｌ／ｌを示す）の範囲の低濃度にした場合に
は、ＡＰによる酵素反応がリン酸イオンによってほとん
ど阻害されることなく進行し、ＩＭＰがＨXＲに良好に
変換され、またＰＮＰによる酵素反応は、キャリヤ液中
のリン酸イオン濃度が試料中のＩＭＰ及びＨXＲの合計
濃度の２倍以上で５ｍＭ以下の範囲でも良好に進行し、
ＨXＲがＨXに変換されることを知見した。したがって、
キャリヤ液としてリン酸イオン濃度が試料中のＩＭＰ及
びＨXＲの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下のものを使
用すれば、ＡＰ、ＰＮＰ及びＸＯＤを１本のリアクタに
固定化したＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタに
よってＩＭＰ→ＨXＲ→ＨX→尿酸／過酸化水素という連
続酵素反応を高い反応効率、反応速度で行うことでき、
試料中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度を迅速に検出
できることが判明した。
【００１４】（２）本発明者らは、前記のようにリン酸
イオン濃度がＩＭＰ及びＨXＲの合計濃度の２倍以上で
５ｍＭ以下の範囲のキャリヤ液を用いてＡＰ／ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタによって測定を行った場合、
検出されるＨX等の成分の濃度が合計で０．０６〜３０
０μＭという低濃度のときに各成分に対する検量線が直
線になることを見い出した。したがって、ＡＰ／ＰＮＰ
／ＸＯＤ同時固定化リアクタに試料を導入するキャリヤ
液中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が０．０６〜３
００μＭとなるように該キャリヤ液に試料を導入するこ
とにより、ＫI値を正しく求めることができることが判
明した。ただし、かかる低濃度の成分を検出する場合に
は、検出器として高感度のものが必要となる。
イオン濃度がＩＭＰ及びＨXＲの合計濃度の２倍以上で
５ｍＭ以下の範囲のキャリヤ液を用いてＡＰ／ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタによって測定を行った場合、
検出されるＨX等の成分の濃度が合計で０．０６〜３０
０μＭという低濃度のときに各成分に対する検量線が直
線になることを見い出した。したがって、ＡＰ／ＰＮＰ
／ＸＯＤ同時固定化リアクタに試料を導入するキャリヤ
液中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が０．０６〜３
００μＭとなるように該キャリヤ液に試料を導入するこ
とにより、ＫI値を正しく求めることができることが判
明した。ただし、かかる低濃度の成分を検出する場合に
は、検出器として高感度のものが必要となる。
【００１５】（３）図９に示した従来のＦＩＡシステム
では、濃度の高い試料液を測定に使用しているため、試
料液中の成分を十分に分解するために必要な固定化酵素
量が多くなり、その結果リアクタが大型化し、この点で
も反応に時間を要していると考えられる。すなわち、従
来はＨX等の成分の濃度が合計で５ｍＭ程度になるよう
な調製条件の魚肉類抽出試料を使用しており、その結果
リアクタのカラムとしては内径３ｍｍ、長さ５０ｍｍ程
度のものが必要となっている。これに対し、（２）で述
べたようにＨX等の成分の濃度が合計で０．０６〜３０
０μＭという低濃度になるような調製条件の魚肉類抽出
試料を使用して測定を行う場合は、試料中の成分を十分
に分解するために必要な固定化酵素量が少なくてすみ、
リアクタを小型化して反応時間を短くすることができる
ため、測定の迅速化を図ることができる。
では、濃度の高い試料液を測定に使用しているため、試
料液中の成分を十分に分解するために必要な固定化酵素
量が多くなり、その結果リアクタが大型化し、この点で
も反応に時間を要していると考えられる。すなわち、従
来はＨX等の成分の濃度が合計で５ｍＭ程度になるよう
な調製条件の魚肉類抽出試料を使用しており、その結果
リアクタのカラムとしては内径３ｍｍ、長さ５０ｍｍ程
度のものが必要となっている。これに対し、（２）で述
べたようにＨX等の成分の濃度が合計で０．０６〜３０
０μＭという低濃度になるような調製条件の魚肉類抽出
試料を使用して測定を行う場合は、試料中の成分を十分
に分解するために必要な固定化酵素量が少なくてすみ、
リアクタを小型化して反応時間を短くすることができる
ため、測定の迅速化を図ることができる。
【００１６】（４）ＫI値を求めるためには、ＡＰ／Ｐ
ＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタを用いて（１）で述べ
たようにして試料中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度
を検出するとともに、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアク
タを用いて同じ試料中のＨXＲ及びＨXの合計濃度を検出
すればよい。この場合、ＫI値を正しく求めるために
は、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタを配置した流路
でＩＭＰの分解が生じないことが必要である。この点に
関し、本発明者らは、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアク
タに試料を導入するキャリヤ液としてリン酸イオン濃度
が５ｍＭ以上のものを用いることにより、（２）で述べ
たような低濃度のＩＭＰの分解を抑制できることを見い
出した。
ＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタを用いて（１）で述べ
たようにして試料中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度
を検出するとともに、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアク
タを用いて同じ試料中のＨXＲ及びＨXの合計濃度を検出
すればよい。この場合、ＫI値を正しく求めるために
は、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタを配置した流路
でＩＭＰの分解が生じないことが必要である。この点に
関し、本発明者らは、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアク
タに試料を導入するキャリヤ液としてリン酸イオン濃度
が５ｍＭ以上のものを用いることにより、（２）で述べ
たような低濃度のＩＭＰの分解を抑制できることを見い
出した。
【００１７】（５）ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リ
アクタとＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタの２本のリ
アクタを用いてＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度に対応
するピークとＨXＲ及びＨXの合計濃度に対応するピーク
を同時に得るようにすれば、図９のシステムのように遅
延コイルを用いて２つのピークを時間をずらして検出す
る場合に比べ、測定時間を短縮化することができる。
アクタとＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタの２本のリ
アクタを用いてＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度に対応
するピークとＨXＲ及びＨXの合計濃度に対応するピーク
を同時に得るようにすれば、図９のシステムのように遅
延コイルを用いて２つのピークを時間をずらして検出す
る場合に比べ、測定時間を短縮化することができる。
【００１８】本発明は、上記（１）〜（５）の知見に基
づいてなされたもので、下記の方法及び装置を提供す
る。方法 リン酸イオン濃度が試料中のイノシン５’−リン酸及び
イノシンの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下である第１
キャリヤ液に魚介類から得られた試料を導入し、この第
１キャリヤ液をアルカリフォスフォターゼ／プリンヌク
レオシドフォスフォリラーゼ／キサンチンオキシダーゼ
同時固定化リアクタに通して試料中のイノシン５’−リ
ン酸、イノシン及びヒポキサンチンを過酸化水素及び尿
酸に変換した後、第１キャリヤ液中の過酸化水素又は尿
酸の濃度を検出することにより試料中のイノシン５’−
リン酸、イノシン及びヒポキサンチンの合計濃度に対応
する第１物理量を得るとともに、リン酸イオンを含む第
２キャリヤ液に前記試料を導入し、この第２キャリヤ液
をプリンヌクレオシドフォスフォリラーゼ／キサンチン
オキシダーゼ同時固定化リアクタに通して試料中のイノ
シン及びヒポキサンチンを過酸化水素及び尿酸に変換し
た後、第２キャリヤ液中の過酸化水素又は尿酸の濃度を
検出することにより試料中のイノシン及びヒポキサンチ
ンの合計濃度に対応する第２物理量を得、前記第１物理
量及び第２物理量から下記式で示されるＫI値を算出す
ることを特徴とする魚介類の鮮度測定方法。 ＫI値＝{([HXR]+[HX])／([IMP]+[HXR]+[HX])}×100 [IMP]：イノシン５’−リン酸濃度 [HXR]：イノシン濃度 [HX] ：ヒポキサンチン濃度
づいてなされたもので、下記の方法及び装置を提供す
る。方法 リン酸イオン濃度が試料中のイノシン５’−リン酸及び
イノシンの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下である第１
キャリヤ液に魚介類から得られた試料を導入し、この第
１キャリヤ液をアルカリフォスフォターゼ／プリンヌク
レオシドフォスフォリラーゼ／キサンチンオキシダーゼ
同時固定化リアクタに通して試料中のイノシン５’−リ
ン酸、イノシン及びヒポキサンチンを過酸化水素及び尿
酸に変換した後、第１キャリヤ液中の過酸化水素又は尿
酸の濃度を検出することにより試料中のイノシン５’−
リン酸、イノシン及びヒポキサンチンの合計濃度に対応
する第１物理量を得るとともに、リン酸イオンを含む第
２キャリヤ液に前記試料を導入し、この第２キャリヤ液
をプリンヌクレオシドフォスフォリラーゼ／キサンチン
オキシダーゼ同時固定化リアクタに通して試料中のイノ
シン及びヒポキサンチンを過酸化水素及び尿酸に変換し
た後、第２キャリヤ液中の過酸化水素又は尿酸の濃度を
検出することにより試料中のイノシン及びヒポキサンチ
ンの合計濃度に対応する第２物理量を得、前記第１物理
量及び第２物理量から下記式で示されるＫI値を算出す
ることを特徴とする魚介類の鮮度測定方法。 ＫI値＝{([HXR]+[HX])／([IMP]+[HXR]+[HX])}×100 [IMP]：イノシン５’−リン酸濃度 [HXR]：イノシン濃度 [HX] ：ヒポキサンチン濃度
【００１９】装置 アルカリフォスフォターゼ／プリンヌクレオシドフォス
フォリラーゼ／キサンチンオキシダーゼ同時固定化リア
クタを備え、リン酸イオン濃度が試料中のイノシン５’
−リン酸及びイノシンの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以
下である第１キャリヤ液に魚介類から得られた試料を導
入するとともに、この第１キャリヤ液を前記リアクタに
通して試料中のイノシン５’−リン酸、イノシン及びヒ
ポキサンチンを過酸化水素及び尿酸に変換した後、第１
キャリヤ液中の過酸化水素又は尿酸の濃度を検出するこ
とにより試料中のイノシン５’−リン酸、イノシン及び
ヒポキサンチンの合計濃度に対応する第１物理量を得る
第１チャンネルと、プリンヌクレオシドフォスフォリラ
ーゼ／キサンチンオキシダーゼ同時固定化リアクタを備
え、リン酸イオンを含む第２キャリヤ液に前記試料を導
入するとともに、この第２キャリヤ液を前記リアクタに
通して試料中のイノシン及びヒポキサンチンを過酸化水
素及び尿酸に変換した後、第２キャリヤ液中の過酸化水
素又は尿酸の濃度を検出することにより試料中のイノシ
ン及びヒポキサンチンの合計濃度に対応する第２物理量
を得る第２チャンネルと、前記第１物理量及び第２物理
量から前記式で示されるＫI値を算出する演算部とを具
備することを特徴とする魚介類の鮮度測定装置。
フォリラーゼ／キサンチンオキシダーゼ同時固定化リア
クタを備え、リン酸イオン濃度が試料中のイノシン５’
−リン酸及びイノシンの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以
下である第１キャリヤ液に魚介類から得られた試料を導
入するとともに、この第１キャリヤ液を前記リアクタに
通して試料中のイノシン５’−リン酸、イノシン及びヒ
ポキサンチンを過酸化水素及び尿酸に変換した後、第１
キャリヤ液中の過酸化水素又は尿酸の濃度を検出するこ
とにより試料中のイノシン５’−リン酸、イノシン及び
ヒポキサンチンの合計濃度に対応する第１物理量を得る
第１チャンネルと、プリンヌクレオシドフォスフォリラ
ーゼ／キサンチンオキシダーゼ同時固定化リアクタを備
え、リン酸イオンを含む第２キャリヤ液に前記試料を導
入するとともに、この第２キャリヤ液を前記リアクタに
通して試料中のイノシン及びヒポキサンチンを過酸化水
素及び尿酸に変換した後、第２キャリヤ液中の過酸化水
素又は尿酸の濃度を検出することにより試料中のイノシ
ン及びヒポキサンチンの合計濃度に対応する第２物理量
を得る第２チャンネルと、前記第１物理量及び第２物理
量から前記式で示されるＫI値を算出する演算部とを具
備することを特徴とする魚介類の鮮度測定装置。
【００２０】以下、本発明についてさらに詳しく説明す
る。酵素 アルカリフォスフォターゼ（ＡＰ）としては牛小腸粘膜
由来のもの、プリンヌクレオシドフォスフォリラーゼ
（ＰＮＰ）としては小牛脾臓由来のもの、好熱性微生物
由来のもの、キサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）として
は牛乳由来のもの、好熱性微生物由来のもの等の公知の
ものを使用することができるが、ＰＮＰ及びＸＯＤとし
てはいずれも好熱性微生物由来のものが安定性及び比活
性が高い点で好ましい。
る。酵素 アルカリフォスフォターゼ（ＡＰ）としては牛小腸粘膜
由来のもの、プリンヌクレオシドフォスフォリラーゼ
（ＰＮＰ）としては小牛脾臓由来のもの、好熱性微生物
由来のもの、キサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）として
は牛乳由来のもの、好熱性微生物由来のもの等の公知の
ものを使用することができるが、ＰＮＰ及びＸＯＤとし
てはいずれも好熱性微生物由来のものが安定性及び比活
性が高い点で好ましい。
【００２１】リアクタ ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタは１本のリア
クタにＡＰ、ＰＮＰ及びＸＯＤを固定化したものであ
り、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタは１本のリアク
タにＰＮＰ及びＸＯＤを固定化したものである。この場
合、各リアクタは酵素を固定化した担体をカラムに充填
することにより作製できるが、単一の酵素を固定化した
担体をカラム内にＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤの順あるいはＰ
ＮＰ／ＸＯＤの順に配置する方式よりは、１つの担体に
ＡＰ、ＰＮＰ及びＸＯＤあるいはＰＮＰ及びＸＯＤを固
定化したものをカラムに充填する方式の方が反応効率が
高い点で好ましい。なお、担体としてはアミノプロピル
基を修飾した多孔質ガラス等の任意のものを用いること
ができる。
クタにＡＰ、ＰＮＰ及びＸＯＤを固定化したものであ
り、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタは１本のリアク
タにＰＮＰ及びＸＯＤを固定化したものである。この場
合、各リアクタは酵素を固定化した担体をカラムに充填
することにより作製できるが、単一の酵素を固定化した
担体をカラム内にＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤの順あるいはＰ
ＮＰ／ＸＯＤの順に配置する方式よりは、１つの担体に
ＡＰ、ＰＮＰ及びＸＯＤあるいはＰＮＰ及びＸＯＤを固
定化したものをカラムに充填する方式の方が反応効率が
高い点で好ましい。なお、担体としてはアミノプロピル
基を修飾した多孔質ガラス等の任意のものを用いること
ができる。
【００２２】キャリヤ液 第１キャリヤ液としては、リン酸イオン濃度が試料中の
ＩＭＰ及びＨXＲの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下、
好ましくは１〜２ｍＭのものを用いる。リン酸イオン濃
度が試料中のＩＭＰ及びＨXＲの合計濃度の２倍より少
ないと試料中のＨXＲの分解が十分に起こらず、ＩＭ
Ｐ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が正しく得られない。ま
た、５ｍＭより多いと試料中のＩＭＰの分解が十分に起
こらず、同様にＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が正し
く得られない。第１キャリヤ液のｐＨは７．０〜９．
０、特に７．５〜８．５であることが望ましい。第１キ
ャリヤ液として、より具体的には、ｐＨ８程度の０．１
Ｍトリス塩酸緩衝溶液に１〜２ｍＭのリン酸イオンを添
加したもの等を用いることができる。第１キャリヤ液に
は、必要に応じ、ＡＰによる酵素反応の活性化を目的と
してマグネシウムイオンを添加することができる。
ＩＭＰ及びＨXＲの合計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下、
好ましくは１〜２ｍＭのものを用いる。リン酸イオン濃
度が試料中のＩＭＰ及びＨXＲの合計濃度の２倍より少
ないと試料中のＨXＲの分解が十分に起こらず、ＩＭ
Ｐ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が正しく得られない。ま
た、５ｍＭより多いと試料中のＩＭＰの分解が十分に起
こらず、同様にＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が正し
く得られない。第１キャリヤ液のｐＨは７．０〜９．
０、特に７．５〜８．５であることが望ましい。第１キ
ャリヤ液として、より具体的には、ｐＨ８程度の０．１
Ｍトリス塩酸緩衝溶液に１〜２ｍＭのリン酸イオンを添
加したもの等を用いることができる。第１キャリヤ液に
は、必要に応じ、ＡＰによる酵素反応の活性化を目的と
してマグネシウムイオンを添加することができる。
【００２３】第２キャリヤ液としては、リン酸イオン濃
度を含有するもの、好ましくはリン酸イオン濃度が５ｍ
Ｍ以上、特に５ｍＭ〜１Ｍ、さらに好適には５０〜２０
０ｍＭのものを用いる。リン酸イオン濃度が５ｍＭより
少ないと、低濃度のＩＭＰの場合、数％が分解してＨX
Ｒを生成し、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が正しく求められ
ないことがある。２００ｍＭより多いと、化学発光法で
検出を行う場合に化学発光に適したｐＨに調整できなく
なることがある。また、第２キャリヤ液のｐＨは７．０
〜９．０、特に７．５〜７．８であることが望ましい。
第２キャリヤ液として、より具体的には、ｐＨ７．８程
度の０．１Ｍリン酸緩衝溶液を用いることができる。
度を含有するもの、好ましくはリン酸イオン濃度が５ｍ
Ｍ以上、特に５ｍＭ〜１Ｍ、さらに好適には５０〜２０
０ｍＭのものを用いる。リン酸イオン濃度が５ｍＭより
少ないと、低濃度のＩＭＰの場合、数％が分解してＨX
Ｒを生成し、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が正しく求められ
ないことがある。２００ｍＭより多いと、化学発光法で
検出を行う場合に化学発光に適したｐＨに調整できなく
なることがある。また、第２キャリヤ液のｐＨは７．０
〜９．０、特に７．５〜７．８であることが望ましい。
第２キャリヤ液として、より具体的には、ｐＨ７．８程
度の０．１Ｍリン酸緩衝溶液を用いることができる。
【００２４】試料 試料としては、魚肉類の一部を切り取り、ホモジナイ
ズ、磨砕等の手段で魚肉生体成分を取り出したものなど
を使用することができる。このとき、過塩素酸、トリス
塩酸等の強酸で魚肉類を処理することにより除タンパク
を行ってもよい。
ズ、磨砕等の手段で魚肉生体成分を取り出したものなど
を使用することができる。このとき、過塩素酸、トリス
塩酸等の強酸で魚肉類を処理することにより除タンパク
を行ってもよい。
【００２５】キャリヤ液への試料の導入 第１キャリヤ液に試料を導入する場合、第１キャリヤ液
中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が０．０６〜３０
０μＭ、好ましくは１〜１００μＭとなるように導入す
ることが適当である。このようにした場合、各成分に対
する検量線が直線状となってＫI値を正しく算出するこ
とが可能となる。また、ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定
化リアクタを小型化して反応時間の短縮を図ることがで
きる。
中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの合計濃度が０．０６〜３０
０μＭ、好ましくは１〜１００μＭとなるように導入す
ることが適当である。このようにした場合、各成分に対
する検量線が直線状となってＫI値を正しく算出するこ
とが可能となる。また、ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定
化リアクタを小型化して反応時間の短縮を図ることがで
きる。
【００２６】第２キャリヤ液に試料を導入する場合、第
２キャリヤ液中のＨXＲ及びＨXの合計濃度が０．０６〜
３００μＭ、好ましくは１〜１００μＭとなるように導
入することが適当である。このようにした場合、ＰＮＰ
／ＸＯＤ同時固定化リアクタを小型化して反応時間の短
縮を図ることが可能となる。
２キャリヤ液中のＨXＲ及びＨXの合計濃度が０．０６〜
３００μＭ、好ましくは１〜１００μＭとなるように導
入することが適当である。このようにした場合、ＰＮＰ
／ＸＯＤ同時固定化リアクタを小型化して反応時間の短
縮を図ることが可能となる。
【００２７】検出手段 反応後のキャリヤ液中の過酸化水素又は尿酸の濃度を検
出して第１物理量及び第２物理量を得る検出手段として
は、例えば下記手段を挙げることができるが、これらに
限定されるものではない。
出して第１物理量及び第２物理量を得る検出手段として
は、例えば下記手段を挙げることができるが、これらに
限定されるものではない。
【００２８】反応後のキャリヤ液に過酸化水素と反応
して発光する試薬を導入し、このときの発光量を光応答
性素子で計測する。発光試薬としては例えばルミノール
類、過シュウ酸エステル類等を用いることができ、光応
答性素子としては例えばフォトダイオード、フォトトラ
ンジスタ、ＰＩＮフォトダイオード、アバランシェフォ
トダイオード、光導電性セル、光電子増倍管等を用いる
ことができる。 反応後のキャリヤ液中の過酸化水素濃度を過酸化水素
電極等の電極を用いて計測する。 反応後のキャリヤ液中の尿酸濃度をグラッシーカーボ
ン電極等の電極を用いて計測する。
して発光する試薬を導入し、このときの発光量を光応答
性素子で計測する。発光試薬としては例えばルミノール
類、過シュウ酸エステル類等を用いることができ、光応
答性素子としては例えばフォトダイオード、フォトトラ
ンジスタ、ＰＩＮフォトダイオード、アバランシェフォ
トダイオード、光導電性セル、光電子増倍管等を用いる
ことができる。 反応後のキャリヤ液中の過酸化水素濃度を過酸化水素
電極等の電極を用いて計測する。 反応後のキャリヤ液中の尿酸濃度をグラッシーカーボ
ン電極等の電極を用いて計測する。
【００２９】なお、、のように発光法、電極法で過
酸化水素濃度を検出する場合は、試料中に共存している
過酸化物が応答して正の誤差を生ずる可能性があるた
め、リアクタの手前にペルオキシダーゼ固定化カラムや
カタラーゼ固定化カラムを配置して試料中から過酸化物
を除去することが好ましい。また、のように尿酸濃度
を検出する場合は、試料中に共存している尿酸が妨害物
質となるため、リアクタの手前にウリカーゼ固定化カラ
ムを配置して試料中から尿酸を除去することが好まし
い。これらの場合、妨害物質の除去のために使用するカ
ラムは小型のカラムでよいため、測定の迅速性には影響
しない。
酸化水素濃度を検出する場合は、試料中に共存している
過酸化物が応答して正の誤差を生ずる可能性があるた
め、リアクタの手前にペルオキシダーゼ固定化カラムや
カタラーゼ固定化カラムを配置して試料中から過酸化物
を除去することが好ましい。また、のように尿酸濃度
を検出する場合は、試料中に共存している尿酸が妨害物
質となるため、リアクタの手前にウリカーゼ固定化カラ
ムを配置して試料中から尿酸を除去することが好まし
い。これらの場合、妨害物質の除去のために使用するカ
ラムは小型のカラムでよいため、測定の迅速性には影響
しない。
【００３０】
【発明の実施の形態】図１は本発明に係る魚介類の鮮度
測定装置の一例を示すフロー図である。図１において、
２はリン酸イオン濃度が試料中のＩＭＰ及びＨXＲの合
計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下の第１キャリヤ液、４は
リン酸イオン濃度が５ｍＭ以上の第２キャリヤ液、６、
８は過酸化水素と反応して発光する発光試薬を含む発光
試薬液、１０は魚介類から得られた試料液、１２はペリ
スタポンプ、１４は第１キャリヤ液流路、１６は第２キ
ャリヤ液流路、１８、２０は発光試薬液流路、２２は試
料液流路、２４は第１キャリヤ液に試料液１０を導入す
るインジェクタ、２６は第１キャリヤ液流路１４に介装
されたＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ（内径
２ｍｍ、長さ３０ｍｍ）、２８はリアクタ２６を出た第
１キャリヤ液に発光試薬液６を導入し、このときの発光
量を光応答性素子で計測する検出部、３０は第２キャリ
ヤ液に試料液１０を導入するインジェクタ、３２は第２
キャリヤ液流路１６に介装されたＰＮＰ／ＸＯＤ同時固
定化リアクタ（内径２ｍｍ、長さ３０ｍｍ）、３４はリ
アクタ３２を出た第２キャリヤ液に発光試薬液８を導入
し、このときの発光量を光応答性素子で計測する検出
部、３６は検出部２８、３４で計測した発光量（第１物
理量及び第２物理量）からＫI値を算出する演算部（パ
ーソナルコンピュータ）を示す。
測定装置の一例を示すフロー図である。図１において、
２はリン酸イオン濃度が試料中のＩＭＰ及びＨXＲの合
計濃度の２倍以上で５ｍＭ以下の第１キャリヤ液、４は
リン酸イオン濃度が５ｍＭ以上の第２キャリヤ液、６、
８は過酸化水素と反応して発光する発光試薬を含む発光
試薬液、１０は魚介類から得られた試料液、１２はペリ
スタポンプ、１４は第１キャリヤ液流路、１６は第２キ
ャリヤ液流路、１８、２０は発光試薬液流路、２２は試
料液流路、２４は第１キャリヤ液に試料液１０を導入す
るインジェクタ、２６は第１キャリヤ液流路１４に介装
されたＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ（内径
２ｍｍ、長さ３０ｍｍ）、２８はリアクタ２６を出た第
１キャリヤ液に発光試薬液６を導入し、このときの発光
量を光応答性素子で計測する検出部、３０は第２キャリ
ヤ液に試料液１０を導入するインジェクタ、３２は第２
キャリヤ液流路１６に介装されたＰＮＰ／ＸＯＤ同時固
定化リアクタ（内径２ｍｍ、長さ３０ｍｍ）、３４はリ
アクタ３２を出た第２キャリヤ液に発光試薬液８を導入
し、このときの発光量を光応答性素子で計測する検出
部、３６は検出部２８、３４で計測した発光量（第１物
理量及び第２物理量）からＫI値を算出する演算部（パ
ーソナルコンピュータ）を示す。
【００３１】本装置では、第１キャリヤ液流路１４、発
光試薬液流路１８、インジェクタ２４、ＡＰ／ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタ２６、検出部２８によって第
１チャンネル３８が構成され、第２キャリヤ液流路１
６、発光試薬液流路２０、インジェクタ３０、ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタ３２、検出部３４によって第
２チャンネル４０が構成されている。
光試薬液流路１８、インジェクタ２４、ＡＰ／ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタ２６、検出部２８によって第
１チャンネル３８が構成され、第２キャリヤ液流路１
６、発光試薬液流路２０、インジェクタ３０、ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタ３２、検出部３４によって第
２チャンネル４０が構成されている。
【００３２】本装置においては、第１キャリヤ液流路１
４を流れる第１キャリヤ液にインジェクタ２４から試料
液１０を導入し、この第１キャリヤ液をＡＰ／ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタ２６に通して試料中のＩＭ
Ｐ、ＨXＲ及びＨXをそれぞれ過酸化水素及び尿酸に変換
した後、検出部２８で第１キャリヤ液中の過酸化水素濃
度を検出することにより試料中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨX
の合計濃度に対応する第１物理量（発光量）を得る。ま
た、第２キャリヤ液流路１６を流れる第２キャリヤ液に
インジェクタ３０から試料液１０を導入し、この第２キ
ャリヤ液をＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ３２に通
して試料中のＨXＲ及びＨXをそれぞれ過酸化水素及び尿
酸に変換した後、検出部３４で第２キャリヤ液中の過酸
化水素濃度を検出することにより試料中のＨXＲ及びＨX
の合計濃度に対応する第２物理量（発光量）を得る。そ
して、演算部３６において、第１物理量（[IMP]+[HXR]+
[HX]に対応）及び第２物理量（[HXR]+[HX]に対応）から
下記式によりＫI値を算出するものである。 ＫI値＝（第２物理量／第１物理量）×100
４を流れる第１キャリヤ液にインジェクタ２４から試料
液１０を導入し、この第１キャリヤ液をＡＰ／ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタ２６に通して試料中のＩＭ
Ｐ、ＨXＲ及びＨXをそれぞれ過酸化水素及び尿酸に変換
した後、検出部２８で第１キャリヤ液中の過酸化水素濃
度を検出することにより試料中のＩＭＰ、ＨXＲ及びＨX
の合計濃度に対応する第１物理量（発光量）を得る。ま
た、第２キャリヤ液流路１６を流れる第２キャリヤ液に
インジェクタ３０から試料液１０を導入し、この第２キ
ャリヤ液をＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ３２に通
して試料中のＨXＲ及びＨXをそれぞれ過酸化水素及び尿
酸に変換した後、検出部３４で第２キャリヤ液中の過酸
化水素濃度を検出することにより試料中のＨXＲ及びＨX
の合計濃度に対応する第２物理量（発光量）を得る。そ
して、演算部３６において、第１物理量（[IMP]+[HXR]+
[HX]に対応）及び第２物理量（[HXR]+[HX]に対応）から
下記式によりＫI値を算出するものである。 ＫI値＝（第２物理量／第１物理量）×100
【００３３】
【実施例】図１に示した装置を用いて下記実験を行い、
本発明の効果を確認した。この場合、検出部２８、３４
の光応答性素子としてはシリコンフォトダイオードを使
用し、シリコンフォトダイオードで検出した光に対応す
る電圧信号を検出部２８、３４から演算部３６に転送し
た。また、演算部３６で上記電圧値を記録し、ピーク高
さの算出に用いた。
本発明の効果を確認した。この場合、検出部２８、３４
の光応答性素子としてはシリコンフォトダイオードを使
用し、シリコンフォトダイオードで検出した光に対応す
る電圧信号を検出部２８、３４から演算部３６に転送し
た。また、演算部３６で上記電圧値を記録し、ピーク高
さの算出に用いた。
【００３４】実験例１：第１キャリヤ液中のリン酸イオ
ンの影響 第１キャリヤ液を０．１Ｍトリス塩酸緩衝溶液（ｐＨ
８．０、１０ｍＭマグネシウムイオン含有）とし、これ
にリン酸ナトリウムを添加して、リン酸イオン濃度を１
ｍＭ〜１００ｍＭの範囲で変化させた。ＡＰ／ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタ２６としては、酵素固定化担
体を内径２ｍｍ、長さ５ｍｍのカラムに充填したものを
用いた。これらの条件で１００μＭのＩＭＰ、ＨXＲ及
びＨXをそれぞれ０．０２ｍＭビス−トリス塩酸緩衝溶
液（２０μｌ、１ｍＭリン酸イオン含有）としたものを
測定し、ＩＭＰ／ＨXＲ、ＨXＲ／ＨXのピーク高さの比
を比較した。結果を図２に示す。図２より、ＡＰの活性
に対応するＩＭＰ／ＨXＲの比は、この範囲で直線的に
減少するが、リン酸イオン濃度１〜２ｍＭでは０．８〜
０．９程度であることがわかった。また、ＰＮＰの活性
に対応するＨXＲ／ＨXの比は、リン酸イオン濃度１〜２
ｍＭにおいて０．８付近であることがわかった。したが
って、第１キャリヤ液中のリン酸イオン濃度を１〜２ｍ
Ｍとした場合には、ＡＰによる酵素反応がリン酸イオン
によってほとんど阻害されることなく進行し、かつＰＮ
Ｐによる酵素反応も良好に進行することが確認された。
なお、第１キャリヤ液にＩＭＰが添加された時点で、Ｈ
XＲやＨXへの分解が起こる可能性があるが（後述）、最
終的に[IMP]+[HXR]+[HX]として測定するので、測定結果
に影響はないと考えられる。
ンの影響 第１キャリヤ液を０．１Ｍトリス塩酸緩衝溶液（ｐＨ
８．０、１０ｍＭマグネシウムイオン含有）とし、これ
にリン酸ナトリウムを添加して、リン酸イオン濃度を１
ｍＭ〜１００ｍＭの範囲で変化させた。ＡＰ／ＰＮＰ／
ＸＯＤ同時固定化リアクタ２６としては、酵素固定化担
体を内径２ｍｍ、長さ５ｍｍのカラムに充填したものを
用いた。これらの条件で１００μＭのＩＭＰ、ＨXＲ及
びＨXをそれぞれ０．０２ｍＭビス−トリス塩酸緩衝溶
液（２０μｌ、１ｍＭリン酸イオン含有）としたものを
測定し、ＩＭＰ／ＨXＲ、ＨXＲ／ＨXのピーク高さの比
を比較した。結果を図２に示す。図２より、ＡＰの活性
に対応するＩＭＰ／ＨXＲの比は、この範囲で直線的に
減少するが、リン酸イオン濃度１〜２ｍＭでは０．８〜
０．９程度であることがわかった。また、ＰＮＰの活性
に対応するＨXＲ／ＨXの比は、リン酸イオン濃度１〜２
ｍＭにおいて０．８付近であることがわかった。したが
って、第１キャリヤ液中のリン酸イオン濃度を１〜２ｍ
Ｍとした場合には、ＡＰによる酵素反応がリン酸イオン
によってほとんど阻害されることなく進行し、かつＰＮ
Ｐによる酵素反応も良好に進行することが確認された。
なお、第１キャリヤ液にＩＭＰが添加された時点で、Ｈ
XＲやＨXへの分解が起こる可能性があるが（後述）、最
終的に[IMP]+[HXR]+[HX]として測定するので、測定結果
に影響はないと考えられる。
【００３５】実験例２：第２キャリヤ液中での低濃度Ｉ
ＭＰの安定性 本発明の装置では、第２チャンネル４０においてＩＭＰ
が分解しないことが必要であるが、ＩＭＰはアルカリ性
及び酸性で不安定で、一部がＨXＲ又はＨXに分解すると
されている。そこで、１μＭの低濃度ＩＭＰ溶液を各種
緩衝溶液を用いて調製し、高速液体クロマトグラフによ
ってＨXＲ及びＨXへの分解量を測定した。その結果、
０．１Ｍトリス塩酸緩衝溶液（ｐＨ７．８及びｐＨ８．
０、１ｍＭリン酸イオン含有）中ではＨXＲへの分解が
８％程度認められたが、０．１Ｍトリス塩酸緩衝溶液
（ｐＨ７．８、リン酸イオンを５、１０、３０ｍＭ含
有）及び０．１Ｍリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．８）中では
ＨXＲやＨXへの分解はほとんど認められなかった（１％
以下）。したがって、第２キャリヤ液４としてリン酸イ
オン濃度が５〜１００ｍＭのもの、例えばｐＨ７．８程
度の０．１Ｍリン酸緩衝溶液を用いれば、１μＭ程度の
低濃度のＩＭＰでも、ＨXＲやＨXへの分解をほとんど生
じさせることなく測定を行うことができることがわかっ
た。
ＭＰの安定性 本発明の装置では、第２チャンネル４０においてＩＭＰ
が分解しないことが必要であるが、ＩＭＰはアルカリ性
及び酸性で不安定で、一部がＨXＲ又はＨXに分解すると
されている。そこで、１μＭの低濃度ＩＭＰ溶液を各種
緩衝溶液を用いて調製し、高速液体クロマトグラフによ
ってＨXＲ及びＨXへの分解量を測定した。その結果、
０．１Ｍトリス塩酸緩衝溶液（ｐＨ７．８及びｐＨ８．
０、１ｍＭリン酸イオン含有）中ではＨXＲへの分解が
８％程度認められたが、０．１Ｍトリス塩酸緩衝溶液
（ｐＨ７．８、リン酸イオンを５、１０、３０ｍＭ含
有）及び０．１Ｍリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．８）中では
ＨXＲやＨXへの分解はほとんど認められなかった（１％
以下）。したがって、第２キャリヤ液４としてリン酸イ
オン濃度が５〜１００ｍＭのもの、例えばｐＨ７．８程
度の０．１Ｍリン酸緩衝溶液を用いれば、１μＭ程度の
低濃度のＩＭＰでも、ＨXＲやＨXへの分解をほとんど生
じさせることなく測定を行うことができることがわかっ
た。
【００３６】実験例３：ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定
化リアクタにおけるｐＨの影響 第１キャリヤ液２のｐＨについて、実験例１と同様の方
法で検討を行った。第１キャリヤ液には０．１Ｍトリス
塩酸緩衝溶液（１ｍＭリン酸イオン、１０ｍＭマグネシ
ウムイオン含有）を用い、ｐＨを７．０〜８．７の間で
変化させて、実験例１と同様の検討を行った。結果を図
３に示す。その結果、第１キャリヤ液としてはｐＨ７．
５〜８．７程度の範囲のものが使用可能であり、特にｐ
Ｈ８付近が適当であることがわかった。
化リアクタにおけるｐＨの影響 第１キャリヤ液２のｐＨについて、実験例１と同様の方
法で検討を行った。第１キャリヤ液には０．１Ｍトリス
塩酸緩衝溶液（１ｍＭリン酸イオン、１０ｍＭマグネシ
ウムイオン含有）を用い、ｐＨを７．０〜８．７の間で
変化させて、実験例１と同様の検討を行った。結果を図
３に示す。その結果、第１キャリヤ液としてはｐＨ７．
５〜８．７程度の範囲のものが使用可能であり、特にｐ
Ｈ８付近が適当であることがわかった。
【００３７】実験例４：ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リア
クタにおけるｐＨの影響 第２キャリヤ液２のｐＨについて、実験例３と同様の方
法で検討を行った。第２キャリヤ液には０．１Ｍリン酸
緩衝溶液を用い、ｐＨを７．５〜８．７間で変化させ
て、実験例３と同様の検討を行った。結果を図４に示
す。その結果、第２キャリヤ液としてはｐＨ７．５〜
８．７程度の範囲のものが使用可能であり、特にｐＨ
７．８付近が適当であることがわかった。
クタにおけるｐＨの影響 第２キャリヤ液２のｐＨについて、実験例３と同様の方
法で検討を行った。第２キャリヤ液には０．１Ｍリン酸
緩衝溶液を用い、ｐＨを７．５〜８．７間で変化させ
て、実験例３と同様の検討を行った。結果を図４に示
す。その結果、第２キャリヤ液としてはｐＨ７．５〜
８．７程度の範囲のものが使用可能であり、特にｐＨ
７．８付近が適当であることがわかった。
【００３８】実験例５：リアクタ長さの影響 ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ２６の長さの
影響を調べた。第１キャリヤ液は０．１Ｍトリス塩酸緩
衝溶液（ｐＨ８．０、１又は２ｍＭリン酸イオン、１０
ｍＭマグネシウムイオン含有）とした。結果を図５に示
す。その結果、リアクタ長さ３０ｍｍではピーク高さは
３成分ともほぼ同じで、比は約０．９９であった。した
がって、ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタは３
０ｍｍの長さで十分にＩＭＰ→ＨXＲ→ＨXの変換が行え
ることが認められた。また、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化
リアクタ３２についても同様の検討を行った結果、ＡＰ
／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタと同様に３０ｍｍ
の長さで十分にＨXＲ→ＨXの変換が行えることがわかっ
た。
影響を調べた。第１キャリヤ液は０．１Ｍトリス塩酸緩
衝溶液（ｐＨ８．０、１又は２ｍＭリン酸イオン、１０
ｍＭマグネシウムイオン含有）とした。結果を図５に示
す。その結果、リアクタ長さ３０ｍｍではピーク高さは
３成分ともほぼ同じで、比は約０．９９であった。した
がって、ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタは３
０ｍｍの長さで十分にＩＭＰ→ＨXＲ→ＨXの変換が行え
ることが認められた。また、ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化
リアクタ３２についても同様の検討を行った結果、ＡＰ
／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタと同様に３０ｍｍ
の長さで十分にＨXＲ→ＨXの変換が行えることがわかっ
た。
【００３９】実験例６：ＩＭＰ、ＨXＲ、ＨXに対する検
量線 下記測定条件でＩＭＰ、ＨXＲ、ＨXに対する検量線の作
成を行った。 (1)発光試薬（第１、第２チャンネルともに同じ）：ル
ミノール３５μＭ、ペルオキシダーゼ２５μｇｍｌ-1を
含有する０．８Ｍ炭酸ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ１０．
０） (2)第１キャリヤ液：０．１Ｍトリス塩酸緩衝溶液（ｐ
Ｈ８．０、１ｍＭリン酸イオン、１０ｍＭマグネシウム
イオン含有） (3)第２キャリヤ液：０．１Ｍリン酸緩衝溶液（ｐＨ
７．８） (4)流速：流路１４、１６、１８、２０とも、０．６ｍ
ｌ／分 (5)リアクタ：リアクタ２６、３２とも、内径２ｍｍ、
長さ３０ｍｍ (6)温度：２５±０．５℃ (7)サンプル量：２０μｌ
量線 下記測定条件でＩＭＰ、ＨXＲ、ＨXに対する検量線の作
成を行った。 (1)発光試薬（第１、第２チャンネルともに同じ）：ル
ミノール３５μＭ、ペルオキシダーゼ２５μｇｍｌ-1を
含有する０．８Ｍ炭酸ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ１０．
０） (2)第１キャリヤ液：０．１Ｍトリス塩酸緩衝溶液（ｐ
Ｈ８．０、１ｍＭリン酸イオン、１０ｍＭマグネシウム
イオン含有） (3)第２キャリヤ液：０．１Ｍリン酸緩衝溶液（ｐＨ
７．８） (4)流速：流路１４、１６、１８、２０とも、０．６ｍ
ｌ／分 (5)リアクタ：リアクタ２６、３２とも、内径２ｍｍ、
長さ３０ｍｍ (6)温度：２５±０．５℃ (7)サンプル量：２０μｌ
【００４０】得られた検量線を図６、７に示す。図６は
ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ２６による検
量線、図７はＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ３２に
よる検量線である。その結果、０．０６〜３００μＭの
範囲において直線の検量線が得られ、本発明によればこ
の範囲の濃度の成分を測定可能であることが認められ
た。
ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ２６による検
量線、図７はＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ３２に
よる検量線である。その結果、０．０６〜３００μＭの
範囲において直線の検量線が得られ、本発明によればこ
の範囲の濃度の成分を測定可能であることが認められ
た。
【００４１】実験例７：ＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXを含む試
料の測定 ＩＭＰ２０μＭ、ＨXＲ２μＭ及びＨX２μＭを含む模擬
試料を調製し、この試料の測定を実験例６と同様にして
を行った。検出部の応答を図８に示す。この場合、第１
チャンネルの出力Ｘのピーク高さと第２チャンネルの出
力Ｙのピーク高さとの比からＫI値を算出するものであ
るが、図８より、本発明によれば１分程度の短時間でＫ
I値を算出できることが確認された。
料の測定 ＩＭＰ２０μＭ、ＨXＲ２μＭ及びＨX２μＭを含む模擬
試料を調製し、この試料の測定を実験例６と同様にして
を行った。検出部の応答を図８に示す。この場合、第１
チャンネルの出力Ｘのピーク高さと第２チャンネルの出
力Ｙのピーク高さとの比からＫI値を算出するものであ
るが、図８より、本発明によれば１分程度の短時間でＫ
I値を算出できることが確認された。
【００４２】
【発明の効果】本発明によれば、ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ
同時固定化リアクタを用いたことにより、ＩＭＰ、ＨX
Ｒ及びＨXを過酸化水素及び尿酸に変換する酵素反応を
高い反応効率で高速に行うことができるため、１試料の
ＫI値を１分程度の短時間で算出することができ、魚介
類の鮮度判定をきわめて迅速に行うことが可能である。
また、本発明では低濃度の試料を用いればよいため、試
料中の成分を十分に分解するために必要な固定化酵素量
が少なくてすみ、リアクタを小型化して反応時間を短く
することができるため、この点でも測定の迅速化を図る
ことができる。
同時固定化リアクタを用いたことにより、ＩＭＰ、ＨX
Ｒ及びＨXを過酸化水素及び尿酸に変換する酵素反応を
高い反応効率で高速に行うことができるため、１試料の
ＫI値を１分程度の短時間で算出することができ、魚介
類の鮮度判定をきわめて迅速に行うことが可能である。
また、本発明では低濃度の試料を用いればよいため、試
料中の成分を十分に分解するために必要な固定化酵素量
が少なくてすみ、リアクタを小型化して反応時間を短く
することができるため、この点でも測定の迅速化を図る
ことができる。
【図１】本発明に係る魚介類の鮮度測定装置の一例を示
すフロー図である。
すフロー図である。
【図２】第１キャリヤ液中のリン酸イオン濃度とＩＭＰ
／ＨXＲ、ＨXＲ／ＨXのピーク高さの比との関係を示す
グラフである。
／ＨXＲ、ＨXＲ／ＨXのピーク高さの比との関係を示す
グラフである。
【図３】第１キャリヤ液のｐＨとＩＭＰ／ＨXＲ、ＨXＲ
／ＨXのピーク高さの比との関係を示すグラフである。
／ＨXのピーク高さの比との関係を示すグラフである。
【図４】第２キャリヤ液のｐＨとＨXＲ／ＨXのピーク高
さの比との関係を示すグラフである。
さの比との関係を示すグラフである。
【図５】ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタの長
さとＩＭＰ／ＨXＲ、ＨXＲ／ＨXのピーク高さの比との
関係を示すグラフである。
さとＩＭＰ／ＨXＲ、ＨXＲ／ＨXのピーク高さの比との
関係を示すグラフである。
【図６】ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタによ
って反応を行った場合におけるＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの
濃度とピーク高さとの関係を示すグラフである。
って反応を行った場合におけるＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXの
濃度とピーク高さとの関係を示すグラフである。
【図７】ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタによって反
応を行った場合におけるＨXＲ及びＨXの濃度とピーク高
さとの関係を示すグラフである。
応を行った場合におけるＨXＲ及びＨXの濃度とピーク高
さとの関係を示すグラフである。
【図８】図１の装置を用いてＩＭＰ、ＨXＲ及びＨXを含
む試料の測定を行った場合の応答の一例を示す波形図で
ある。
む試料の測定を行った場合の応答の一例を示す波形図で
ある。
【図９】従来の魚介類の鮮度測定装置の一例を示すフロ
ー図である。
ー図である。
【符号の説明】 ２ 第１キャリヤ液 ４ 第２キャリヤ液 ６ 発光試薬液 ８ 発光試薬液 １０ 試料液 １２ ペリスタポンプ １４ 第１キャリヤ液流路 １６ 第２キャリヤ液流路 １８ 発光試薬液流路 ２０ 発光試薬液流路 ２２ 試料液流路 ２４ インジェクタ ２６ ＡＰ／ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ ２８ 検出部 ３０ インジェクタ ３２ ＰＮＰ／ＸＯＤ同時固定化リアクタ ３４ 検出部 ３６ 演算部 ３８ 第１チャンネル ４０ 第２チャンネル
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 奥河 卓司 埼玉県三郷市彦成３丁目８番12−502号 (72)発明者 輕部 征夫 神奈川県川崎市宮前区東有馬１丁目３番16 号
Claims (6)
- 【請求項１】 リン酸イオン濃度が試料中のイノシン
５’−リン酸及びイノシンの合計濃度の２倍以上で５ｍ
Ｍ以下である第１キャリヤ液に魚介類から得られた試料
を導入し、この第１キャリヤ液をアルカリフォスフォタ
ーゼ／プリンヌクレオシドフォスフォリラーゼ／キサン
チンオキシダーゼ同時固定化リアクタに通して試料中の
イノシン５’−リン酸、イノシン及びヒポキサンチンを
過酸化水素及び尿酸に変換した後、第１キャリヤ液中の
過酸化水素又は尿酸の濃度を検出することにより試料中
のイノシン５’−リン酸、イノシン及びヒポキサンチン
の合計濃度に対応する第１物理量を得るとともに、 リン酸イオンを含む第２キャリヤ液に前記試料を導入
し、この第２キャリヤ液をプリンヌクレオシドフォスフ
ォリラーゼ／キサンチンオキシダーゼ同時固定化リアク
タに通して試料中のイノシン及びヒポキサンチンを過酸
化水素及び尿酸に変換した後、第２キャリヤ液中の過酸
化水素又は尿酸の濃度を検出することにより試料中のイ
ノシン及びヒポキサンチンの合計濃度に対応する第２物
理量を得、 前記第１物理量及び第２物理量から下記式で示されるＫ
I値を算出することを特徴とする魚介類の鮮度測定方
法。 ＫI値＝{([HXR]+[HX])／([IMP]+[HXR]+[HX])}×100 [IMP]：イノシン５’−リン酸濃度 [HXR]：イノシン濃度 [HX] ：ヒポキサンチン濃度 - 【請求項２】 第１キャリヤ液中のイノシン５’−リン
酸、イノシン及びヒポキサンチンの合計濃度が０．０６
〜３００μＭとなるように第１キャリヤ液に試料を導入
する請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 第２キャリヤ液として、リン酸イオン濃
度が５ｍＭ以上のものを用いる請求項１又は２記載の方
法。 - 【請求項４】 アルカリフォスフォターゼ／プリンヌク
レオシドフォスフォリラーゼ／キサンチンオキシダーゼ
同時固定化リアクタを備え、リン酸イオン濃度が試料中
のイノシン５’−リン酸及びイノシンの合計濃度の２倍
以上で５ｍＭ以下である第１キャリヤ液に魚介類から得
られた試料を導入するとともに、この第１キャリヤ液を
前記リアクタに通して試料中のイノシン５’−リン酸、
イノシン及びヒポキサンチンを過酸化水素及び尿酸に変
換した後、第１キャリヤ液中の過酸化水素又は尿酸の濃
度を検出することにより試料中のイノシン５’−リン
酸、イノシン及びヒポキサンチンの合計濃度に対応する
第１物理量を得る第１チャンネルと、 プリンヌクレオシドフォスフォリラーゼ／キサンチンオ
キシダーゼ同時固定化リアクタを備え、リン酸イオンを
含む第２キャリヤ液に前記試料を導入するとともに、こ
の第２キャリヤ液を前記リアクタに通して試料中のイノ
シン及びヒポキサンチンを過酸化水素及び尿酸に変換し
た後、第２キャリヤ液中の過酸化水素又は尿酸の濃度を
検出することにより試料中のイノシン及びヒポキサンチ
ンの合計濃度に対応する第２物理量を得る第２チャンネ
ルと、 前記第１物理量及び第２物理量から下記式で示されるＫ
I値を算出する演算部とを具備することを特徴とする魚
介類の鮮度測定装置。 ＫI値＝{([HXR]+[HX])／([IMP]+[HXR]+[HX])}×100 [IMP]：イノシン５’−リン酸濃度 [HXR]：イノシン濃度 [HX] ：ヒポキサンチン濃度 - 【請求項５】 第１キャリヤ液中のイノシン５’−リン
酸、イノシン及びヒポキサンチンの合計濃度が０．０６
〜３００μＭとなるように第１キャリヤ液に試料を導入
する請求項４記載の装置。 - 【請求項６】 第２キャリヤ液として、リン酸イオン濃
度が５ｍＭ以上のものを用いる請求項４又は５記載の装
置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9941696A JP2857607B2 (ja) | 1996-03-28 | 1996-03-28 | 魚介類の鮮度測定方法及び装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9941696A JP2857607B2 (ja) | 1996-03-28 | 1996-03-28 | 魚介類の鮮度測定方法及び装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09262098A true JPH09262098A (ja) | 1997-10-07 |
| JP2857607B2 JP2857607B2 (ja) | 1999-02-17 |
Family
ID=14246877
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9941696A Expired - Fee Related JP2857607B2 (ja) | 1996-03-28 | 1996-03-28 | 魚介類の鮮度測定方法及び装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2857607B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010044365A1 (ja) | 2008-10-17 | 2010-04-22 | 国立大学法人東京海洋大学 | 鮮度測定用試薬キット |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101734415B1 (ko) | 2015-06-30 | 2017-05-24 | 동국대학교 산학협력단 | 신선도 측정용 조성물 |
| JP2021076536A (ja) * | 2019-11-12 | 2021-05-20 | 東芝テック株式会社 | 鮮度計測システム |
| JP2021139894A (ja) | 2020-03-05 | 2021-09-16 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | 食用動物の鮮度・熟成度評価装置、及び、鮮度・熟成度評価方法 |
-
1996
- 1996-03-28 JP JP9941696A patent/JP2857607B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010044365A1 (ja) | 2008-10-17 | 2010-04-22 | 国立大学法人東京海洋大学 | 鮮度測定用試薬キット |
| EP2351849A1 (en) * | 2008-10-17 | 2011-08-03 | Tokyo University of Marine Science and Technology | Reagent kit for measuring freshness |
| EP2351849A4 (en) * | 2008-10-17 | 2013-10-30 | Tokyo University Of Marine Science And Technology | REAGENT KIT FOR FRESH MEASUREMENT |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2857607B2 (ja) | 1999-02-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Estabrook et al. | [74] The fluorometric determination of mitochondrial adenine and pyridine nucleotides | |
| Eisenthal et al. | Enzyme assays: a practical approach | |
| Ebadi et al. | MICROASSAY OF ADENOSINE‐3′, 5′‐MONOPHOSPHATE (CYCLIC AMP) IN BRAIN AND OTHER TISSUES BY THE LUCIFERIN‐LUCIFERASE SYSTEM 1 | |
| EP0756637B1 (en) | Methods for calibrating chemical assays | |
| Cutler | Comments on the validity of the use of lead nitrate for the cytochemical study of adenylate cyclase. | |
| Karl | Adenosine triphosphate (ATP) and total adenine nucleotide (TAN) pool turnover rates as measures of energy flux and specific growth rate in natural populations of microorganisms | |
| Ishihara et al. | Enzymatic determination of ammonia in blood plasma | |
| Rangel-Aldao et al. | Rapid assay for cyclic AMP and cyclic GMP phosphodiesterases | |
| Kather et al. | Chemiluminescent determination of adenosine, inosine, and hypoxanthine/xanthine | |
| JP2857607B2 (ja) | 魚介類の鮮度測定方法及び装置 | |
| Karl | [9] Determination of GTP, GDP, and GMP in cell and tissue extracts | |
| Bostick et al. | Methodologies for the determination of adenosine phosphates | |
| JP2003174900A (ja) | ピロリン酸と核酸の定量方法およびその装置 | |
| EP0125923A2 (en) | Method for determining the degree of freshness of raw, frozen and processed perishable foodstuffs and instrument therefor | |
| Page et al. | An improved procedure for detection of hypoxanthine--guanine phosphoribosyl transferase heterozygotes. | |
| US4059490A (en) | Measurement of alkaline phosphatase levels in body fluids | |
| JP3679855B2 (ja) | 食品中の成分測定方法及び装置、魚介類の鮮度測定方法及び装置並びに食品試料のサンプリング方法及び装置 | |
| Hohorst et al. | Oxaloacetate | |
| CN219861387U (zh) | 一种基于羟基萘酚蓝指示剂色彩变化的核酸定量检测仪器 | |
| EP0022757B1 (en) | Method for determining creatine kinase in samples containing atp | |
| JPH0576397A (ja) | 物質の測定法 | |
| SU1045127A1 (ru) | Способ определени антиокислительной активности вещества | |
| AU551176B2 (en) | A method for determination of deoxythymidine kinase (dtk) isoenzyme activity and use thereof for the diagnosis of diseases | |
| JP2837414B2 (ja) | 細胞内の物質測定方法 | |
| SU958976A1 (ru) | Способ определени активности гуанилатциклазы |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081127 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081127 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091127 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091127 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101127 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101127 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111127 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111127 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121127 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131127 Year of fee payment: 15 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |