JPH0925295A - エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 - Google Patents
エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体Info
- Publication number
- JPH0925295A JPH0925295A JP8144537A JP14453796A JPH0925295A JP H0925295 A JPH0925295 A JP H0925295A JP 8144537 A JP8144537 A JP 8144537A JP 14453796 A JP14453796 A JP 14453796A JP H0925295 A JPH0925295 A JP H0925295A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ebv
- peptide
- antibody
- protein
- epstein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/085—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus, Epstein-Barr virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16211—Lymphocryptovirus, e.g. human herpesvirus 4, Epstein-Barr Virus
- C12N2710/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2474/00—Immunochemical assays or immunoassays characterised by detection mode or means of detection
- G01N2474/20—Immunohistochemistry assay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/811—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an inorganic carrier
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 この発明は、エプスタイン−バールウイルス
（ＥＢＶ）感染の血清診断に有用な特異的試薬を得るこ
とを目的とする。 【解決手段】 本発明は、エプスタイン−バールウイル
ス（ＥＢＶ）に対する抗体と免疫化学的に反応するペプ
チド、該ペプチドに対する（モノクローナル）抗体、及
びモノクローナル抗体を産生し得る細胞系に係わる。本
発明は更に、ＥＢＶまたは抗ＥＢＶ抗体を検出する免疫
学的な試薬及び方法にも係わる。
（ＥＢＶ）感染の血清診断に有用な特異的試薬を得るこ
とを目的とする。 【解決手段】 本発明は、エプスタイン−バールウイル
ス（ＥＢＶ）に対する抗体と免疫化学的に反応するペプ
チド、該ペプチドに対する（モノクローナル）抗体、及
びモノクローナル抗体を産生し得る細胞系に係わる。本
発明は更に、ＥＢＶまたは抗ＥＢＶ抗体を検出する免疫
学的な試薬及び方法にも係わる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エプスタイン−バ
ールウイルス（ＥＢＶ）に対する抗体と免疫化学的に反
応するペプチド、該ペプチドに対する（モノクローナ
ル）抗体、及びモノクローナル抗体を産生し得る細胞系
に係わる。本発明は更に、ＥＢＶまたは抗ＥＢＶ抗体を
検出する免疫学的な試薬及び方法にも係わる。
ールウイルス（ＥＢＶ）に対する抗体と免疫化学的に反
応するペプチド、該ペプチドに対する（モノクローナ
ル）抗体、及びモノクローナル抗体を産生し得る細胞系
に係わる。本発明は更に、ＥＢＶまたは抗ＥＢＶ抗体を
検出する免疫学的な試薬及び方法にも係わる。
【０００２】
【従来の技術】エプスタイン−バールウイルスは、最初
バーキットリンパ腫（ＢＬ）のアフリカ（風土病即ち
ｅ）型に関連して発見された遍在性ヒトヘルペスウイル
スである。このウイルスは後に上咽頭癌（ＮＰＣ）との
関連でも見出され、また伝染性単核細胞症（ＩＭ）の原
因物質であることが判明した。感染は普通幼児期早期に
起こり、その場合通常は無症状で、時に軽微な症状を伴
う。しかし、青年期や成人期の感染はＩＭを誘発する恐
れが有り、ＩＭは末梢血中に異型リンパ球が存在するこ
とを特徴とする。異型リンパ球の多くはＴリンパ球であ
るが、ＥＢＶに感染したＢリンパ球の小集団も含まれ
る。Ｂリンパ球の感染はｉｎ ｖｉｔｒｏで生起させる
ことも可能である。ｉｎ ｖｉｔｒｏで感染させた細胞
は形質転換され、培養すると無限に増殖するようになる
が、これは‘不死化’、‘潜伏感染した’、または‘増
殖転換された（ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅ
ｄ）’と呼称されている。知られているかぎりでは、Ｅ
ＢＶに感染した個体は総て終生潜伏感染したままであ
る。このことは、循環末梢血リンパ球中に少数のＥＢＶ
ゲノム陽性転換Ｂ細胞が終生継続して存在すること、及
び中咽頭においてウイルスが周期的に継続して放出され
ることに基づく。
バーキットリンパ腫（ＢＬ）のアフリカ（風土病即ち
ｅ）型に関連して発見された遍在性ヒトヘルペスウイル
スである。このウイルスは後に上咽頭癌（ＮＰＣ）との
関連でも見出され、また伝染性単核細胞症（ＩＭ）の原
因物質であることが判明した。感染は普通幼児期早期に
起こり、その場合通常は無症状で、時に軽微な症状を伴
う。しかし、青年期や成人期の感染はＩＭを誘発する恐
れが有り、ＩＭは末梢血中に異型リンパ球が存在するこ
とを特徴とする。異型リンパ球の多くはＴリンパ球であ
るが、ＥＢＶに感染したＢリンパ球の小集団も含まれ
る。Ｂリンパ球の感染はｉｎ ｖｉｔｒｏで生起させる
ことも可能である。ｉｎ ｖｉｔｒｏで感染させた細胞
は形質転換され、培養すると無限に増殖するようになる
が、これは‘不死化’、‘潜伏感染した’、または‘増
殖転換された（ｇｒｏｗｔｈ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅ
ｄ）’と呼称されている。知られているかぎりでは、Ｅ
ＢＶに感染した個体は総て終生潜伏感染したままであ
る。このことは、循環末梢血リンパ球中に少数のＥＢＶ
ゲノム陽性転換Ｂ細胞が終生継続して存在すること、及
び中咽頭においてウイルスが周期的に継続して放出され
ることに基づく。
【０００３】大抵の場合、ＥＢＶ感染はリンパ系増殖疾
患を誘発し、この疾患は一時的に衰弱をもたらし得るが
常に良性で、かつ自己限定性である。しかし、或る種の
免疫抑制個体では完全に悪性な疾患が誘発される恐れが
有る。このような事態は強度に免疫抑制された個体、特
にシクロスポリンＡで治療されている、臓器移植を受け
た小児において、またはＨＩＶ感染個体が日和見感染し
た場合、もしくは遺伝的にＸＬＰ（Ｘ染色体関連リンパ
系増殖症候群）遺伝子を有する雄性個体が感染した場合
に生起する。これらの場合に誘発される悪性疾患は、Ｅ
ＢＶ感染Ｂ細胞のポリクローナル増殖に起因する。加え
て、上記のような患者では口内毛様白斑症（ｏｒａｌ
ｈａｉｒｙ ｌｅｕｋｏｐｌａｋｉａ）の病変において
ウイルスの非抑制的な上皮複製が検出され得る。即ち、
ＥＢＶ感染の抑制では免疫応答が中心的な役割を果た
す。
患を誘発し、この疾患は一時的に衰弱をもたらし得るが
常に良性で、かつ自己限定性である。しかし、或る種の
免疫抑制個体では完全に悪性な疾患が誘発される恐れが
有る。このような事態は強度に免疫抑制された個体、特
にシクロスポリンＡで治療されている、臓器移植を受け
た小児において、またはＨＩＶ感染個体が日和見感染し
た場合、もしくは遺伝的にＸＬＰ（Ｘ染色体関連リンパ
系増殖症候群）遺伝子を有する雄性個体が感染した場合
に生起する。これらの場合に誘発される悪性疾患は、Ｅ
ＢＶ感染Ｂ細胞のポリクローナル増殖に起因する。加え
て、上記のような患者では口内毛様白斑症（ｏｒａｌ
ｈａｉｒｙ ｌｅｕｋｏｐｌａｋｉａ）の病変において
ウイルスの非抑制的な上皮複製が検出され得る。即ち、
ＥＢＶ感染の抑制では免疫応答が中心的な役割を果た
す。
【０００４】先に述べたように、ＥＢＶはヘルペスウイ
ルスの一つである。このウイルスは次の構造的特徴を有
する。
ルスの一つである。このウイルスは次の構造的特徴を有
する。
【０００５】―ＥＢＶゲノムは線状２本鎖ＤＮＡ分子
（１７２，０００塩基対）から成る。
（１７２，０００塩基対）から成る。
【０００６】―ビリオンは、正二十面体キャプシドによ
って囲繞されたコア（タンパク質及びＤＮＡ）と、キャ
プシドを包囲する膜エンベロープとから成る。正二十面
体キャプシドは六量体及び五量体キャプソメアによって
構成されている。膜エンベロープは、その外表面にスパ
イクを具えたタンパク質／脂質二重層膜から成る。キャ
プシドシェルとエンベロープとの間隙は、テグメントと
呼称される非晶質タンパク質で満たされている。
って囲繞されたコア（タンパク質及びＤＮＡ）と、キャ
プシドを包囲する膜エンベロープとから成る。正二十面
体キャプシドは六量体及び五量体キャプソメアによって
構成されている。膜エンベロープは、その外表面にスパ
イクを具えたタンパク質／脂質二重層膜から成る。キャ
プシドシェルとエンベロープとの間隙は、テグメントと
呼称される非晶質タンパク質で満たされている。
【０００７】―あらゆるヘルペスウイルス同様、ＥＢＶ
もその宿主において、一次感染後終生にわたる潜伏感染
を確立し得る。このような潜伏期はウイルスとヒト宿主
との、宿主の免疫系によって制御された完全なバランス
を表わすものである。
もその宿主において、一次感染後終生にわたる潜伏感染
を確立し得る。このような潜伏期はウイルスとヒト宿主
との、宿主の免疫系によって制御された完全なバランス
を表わすものである。
【０００８】これまで、ほとんどの生化学的及び生物学
的研究はＥＢＶの三つの原型株、即ちＢ９５−８（マー
モセット細胞系で産生される形質転換ウイルス）、Ｐ３
ＨＲ１（バーキットリンパ腫細胞系で産生される非形質
転換ウイルス）及びＲａｊｉ（バーキットリンパ腫細胞
系中の潜伏ウイルス）について行なわれてきた。
的研究はＥＢＶの三つの原型株、即ちＢ９５−８（マー
モセット細胞系で産生される形質転換ウイルス）、Ｐ３
ＨＲ１（バーキットリンパ腫細胞系で産生される非形質
転換ウイルス）及びＲａｊｉ（バーキットリンパ腫細胞
系中の潜伏ウイルス）について行なわれてきた。
【０００９】最近数年の間に、原型ウイルス株Ｂ９５−
８の全ＤＮＡ配列が決定された。この配列の分析の結
果、８０を越える読み取り枠（ＯＲＦ）が同定された
（Ｂａｅｒ等， Ｎａｔｕｒｅ ３１０， ｐｐ．２０
７−２１１， １９８４）。
８の全ＤＮＡ配列が決定された。この配列の分析の結
果、８０を越える読み取り枠（ＯＲＦ）が同定された
（Ｂａｅｒ等， Ｎａｔｕｒｅ ３１０， ｐｐ．２０
７−２１１， １９８４）。
【００１０】ＥＢＶの生物学的研究では研究者に特別の
問題が提起され、なぜならこのウイルスの生物学的特性
（潜伏感染）が従来のウイルス分析に適さないからであ
る。そのうえ、ＥＢＶが有効に感染する細胞及び宿主の
範囲はヒト（及び数種の比較的高等な霊長類）のＢリン
パ球及び上皮細胞に限られており、これらの細胞は通常
ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養が不可能である。加えて、ウイル
スがその中で溶解複製する完全許容型の細胞が存在しな
いことが、大量のウイルスを生産する可能性を甚だしく
制限している。
問題が提起され、なぜならこのウイルスの生物学的特性
（潜伏感染）が従来のウイルス分析に適さないからであ
る。そのうえ、ＥＢＶが有効に感染する細胞及び宿主の
範囲はヒト（及び数種の比較的高等な霊長類）のＢリン
パ球及び上皮細胞に限られており、これらの細胞は通常
ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養が不可能である。加えて、ウイル
スがその中で溶解複製する完全許容型の細胞が存在しな
いことが、大量のウイルスを生産する可能性を甚だしく
制限している。
【００１１】Ｂ９５−８、Ｐ３ＨＲ１及びＲａｊｉ単離
物のＤＮＡ分子は、詳細な制限エンドヌクレアーゼ地図
作成、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）プラスミド及びλファ
ージへのクローニング、並びにヌクレオチド配列決定の
ための原型とされている。
物のＤＮＡ分子は、詳細な制限エンドヌクレアーゼ地図
作成、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）プラスミド及びλファ
ージへのクローニング、並びにヌクレオチド配列決定の
ための原型とされている。
【００１２】ＥＢＶゲノムは、ユニークかつタンデム反
復型のＤＮＡ要素によって構成されたただ１個の２本鎖
ＤＮＡ分子から成る。ＤＮＡ分子の各末端は幾つかの末
端配列を有し、これらの配列によってゲノムの共有結合
及び環化が可能となる。ウイルス粒子中では、ＥＢＶゲ
ノムは線状形態でのみ検出され得る。これに対して、潜
伏感染細胞の核中では前記ゲノムは環状エピソームとし
て存在し、場合によっては宿主細胞の染色体に組み込ま
れる。
復型のＤＮＡ要素によって構成されたただ１個の２本鎖
ＤＮＡ分子から成る。ＤＮＡ分子の各末端は幾つかの末
端配列を有し、これらの配列によってゲノムの共有結合
及び環化が可能となる。ウイルス粒子中では、ＥＢＶゲ
ノムは線状形態でのみ検出され得る。これに対して、潜
伏感染細胞の核中では前記ゲノムは環状エピソームとし
て存在し、場合によっては宿主細胞の染色体に組み込ま
れる。
【００１３】ＥＢＶゲノムは内部反復配列ＩＲ１〜ＩＲ
４によって五つのユニークな領域に分割される。Ｕ２及
びＵ３領域は異なるＥＢＶ単離物間で著しく変化し、Ｕ
２領域はＥＢＶのＰ３ＨＲ１株ではほぼ完全に欠失す
る。
４によって五つのユニークな領域に分割される。Ｕ２及
びＵ３領域は異なるＥＢＶ単離物間で著しく変化し、Ｕ
２領域はＥＢＶのＰ３ＨＲ１株ではほぼ完全に欠失す
る。
【００１４】ＥＢＶ読み取り枠の命名は、当該読み取り
枠のウイルスゲノム中での位置に基づく。名称は、発現
が開始されるＢａｍＨＩまたはＥｃｏＲＩ制限断片の頭
文字で始まる。名称中の第三の文字はＬまたはＲであ
り、これは発現が標準的な地図上で左方向であるか右方
向であるかに依る。（従ってＢＬＬＦ２なら、ＢａｍＨ
Ｉ制限断片Ｌにおいて開始する第二の左方向読み取り枠
である）。
枠のウイルスゲノム中での位置に基づく。名称は、発現
が開始されるＢａｍＨＩまたはＥｃｏＲＩ制限断片の頭
文字で始まる。名称中の第三の文字はＬまたはＲであ
り、これは発現が標準的な地図上で左方向であるか右方
向であるかに依る。（従ってＢＬＬＦ２なら、ＢａｍＨ
Ｉ制限断片Ｌにおいて開始する第二の左方向読み取り枠
である）。
【００１５】ＥＢＶ生産サイクルにおけるウイルス抗原
の血清学的分類は、様々な蛍光利用技術に基づく。
の血清学的分類は、様々な蛍光利用技術に基づく。
【００１６】固定した潜伏感染Ｂ細胞（例えばＲａｊｉ
細胞）の核中に抗補体（ａｎｔｉ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎ
ｔ）免疫蛍光法で特異的に検出される抗原は、エプスタ
イン−バール核抗原（ＥＢＮＡ）として分類される。
細胞）の核中に抗補体（ａｎｔｉ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎ
ｔ）免疫蛍光法で特異的に検出される抗原は、エプスタ
イン−バール核抗原（ＥＢＮＡ）として分類される。
【００１７】ウイルス遺伝子発現を化学的因子またはウ
イルス因子によって活性化すると、その合成がウイルス
ＤＮＡ合成の抑制によって遮断されない一群の初期抗原
（ＥＡ）が検出される。用いる固定液の種類（メタノー
ルまたはアセトン）に応じて異なる２組のＥＡ、即ちＥ
ＡR及びＥＡDが検出され得る。ＥＡは間接免疫蛍光法に
よって、誘導細胞の細胞質及び核中に検出され得る。ウ
イルスＤＮＡ合成の開始に続いて（かつそれに依存し
て）ウイルス構造タンパク質（ＶＣＡ）が合成され、こ
のタンパク質は間接免疫蛍光法によって、ウイルス産生
細胞（例えばＰ3ＨＲ1細胞）の細胞質及び核中に検出さ
れ得る。生存可能な感染細胞の表面では、ウイルス産生
のために誘導された１組の抗原（ＭＡ）が間接免疫蛍光
法によって検出され得る。これらの抗原はウイルスエン
ベロープ上にも見出され得、ウイルス中和のための重要
な標的である。
イルス因子によって活性化すると、その合成がウイルス
ＤＮＡ合成の抑制によって遮断されない一群の初期抗原
（ＥＡ）が検出される。用いる固定液の種類（メタノー
ルまたはアセトン）に応じて異なる２組のＥＡ、即ちＥ
ＡR及びＥＡDが検出され得る。ＥＡは間接免疫蛍光法に
よって、誘導細胞の細胞質及び核中に検出され得る。ウ
イルスＤＮＡ合成の開始に続いて（かつそれに依存し
て）ウイルス構造タンパク質（ＶＣＡ）が合成され、こ
のタンパク質は間接免疫蛍光法によって、ウイルス産生
細胞（例えばＰ3ＨＲ1細胞）の細胞質及び核中に検出さ
れ得る。生存可能な感染細胞の表面では、ウイルス産生
のために誘導された１組の抗原（ＭＡ）が間接免疫蛍光
法によって検出され得る。これらの抗原はウイルスエン
ベロープ上にも見出され得、ウイルス中和のための重要
な標的である。
【００１８】ヒト血清におけるＥＢＶ特異的抗体の検出
は、Ｈｅｎｌｅ及びＨｅｎｌｅが述べている血清学的技
術（Ｈｕｍａｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ５， ｐｐ．５
５１−５６５， １９７４）によって通常のように行な
い得る。
は、Ｈｅｎｌｅ及びＨｅｎｌｅが述べている血清学的技
術（Ｈｕｍａｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ５， ｐｐ．５
５１−５６５， １９７４）によって通常のように行な
い得る。
【００１９】生化学的データ及び免疫蛍光法データに基
づき、異なる５群の抗原分子を区別することが可能であ
る。異なるウイルスポリペプチドがその分子量によって
示され、その独自の表記を可能にするべく、あらゆるＥ
ＢＶタンパク質に共通する命名法は確立されていない。
づき、異なる５群の抗原分子を区別することが可能であ
る。異なるウイルスポリペプチドがその分子量によって
示され、その独自の表記を可能にするべく、あらゆるＥ
ＢＶタンパク質に共通する命名法は確立されていない。
【００２０】異なる５群の抗原は次のとおりである。
【００２１】Ａ．潜伏状態の間に発現される抗原群（Ｅ
ＢＮＡ及びＬＭＰ）。
ＢＮＡ及びＬＭＰ）。
【００２２】Ｂ．ゲノム活性化、及びウイルス複製の初
期誘導の原因となる抗原群（ＩＥＡ）。
期誘導の原因となる抗原群（ＩＥＡ）。
【００２３】Ｃ．ＩＥＡ遺伝子産物によって誘導され
る、ウイルスＤＮＡの複製に必要な抗原群で、そのほと
んどがウイルス酵素である抗原群（ＥＡ）。
る、ウイルスＤＮＡの複製に必要な抗原群で、そのほと
んどがウイルス酵素である抗原群（ＥＡ）。
【００２４】Ｄ．ウイルス粒子の構造構成要素であり、
ウイルス複製サイクル後期においてウイルスＤＮＡ合成
開始後に発現される抗原群（ＶＣＡ）。
ウイルス複製サイクル後期においてウイルスＤＮＡ合成
開始後に発現される抗原群（ＶＣＡ）。
【００２５】Ｅ．感染細胞の細胞膜において発現される
抗原群（ＭＡ）。
抗原群（ＭＡ）。
【００２６】エプスタイン−バール初期抗原（ＥＢＶ−
ＥＡ） ＥＢＶ初期抗原（ＥＡ）はウイルスＤＮＡ合成開始前の
ＥＢＶ産生細胞において発現され、そのような細胞をウ
イルスＤＮＡポリメラーゼの阻害剤（例えばホスホノ酢
酸）で処理した場合に特異的に研究可能である。あるい
は他の場合には、ＥＡはＥＢＶに頓挫感染した細胞や、
ＩＵｄＲもしくはＢＵｄＲ、またはＴＰＡ及びブチレー
トなどの化学薬剤で活性化された、ＥＢＶ産生体でない
リンパ芽球様（ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ）細胞
（例えばＲａｊｉ細胞）において検出され得る。
ＥＡ） ＥＢＶ初期抗原（ＥＡ）はウイルスＤＮＡ合成開始前の
ＥＢＶ産生細胞において発現され、そのような細胞をウ
イルスＤＮＡポリメラーゼの阻害剤（例えばホスホノ酢
酸）で処理した場合に特異的に研究可能である。あるい
は他の場合には、ＥＡはＥＢＶに頓挫感染した細胞や、
ＩＵｄＲもしくはＢＵｄＲ、またはＴＰＡ及びブチレー
トなどの化学薬剤で活性化された、ＥＢＶ産生体でない
リンパ芽球様（ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ）細胞
（例えばＲａｊｉ細胞）において検出され得る。
【００２７】ＥＡ抗原は、宿主の巨大分子合成の停止と
ウイルスＤＮＡ合成の開始との両方に必要な一群のウイ
ルスタンパク質を表わす。
ウイルスＤＮＡ合成の開始との両方に必要な一群のウイ
ルスタンパク質を表わす。
【００２８】総てのＥＡ複合タンパク質の正確な性質は
現在でも未知であるが、その幾つかの構成要素について
は、近年その分子構造が解明されている。
現在でも未知であるが、その幾つかの構成要素について
は、近年その分子構造が解明されている。
【００２９】ヒトの血清とモノクローナル抗体との両方
を用いる免疫蛍光（ＩＦ）分析によって、アセトン及び
メタノールなどの固定液に対する感度の異なる２組の初
期抗原が説明される。一方のＩＦパターンは拡散型
（Ｄ）で、核と細胞質との両方が染色されるが、他方の
ＩＦパターンは細胞質中の繊維状物質のみに限定される
（Ｒ）。Ｒ型構成要素はメタノールまたはエタノール固
定によって破壊されるがアセトンには耐性であり、一方
Ｄ型構成要素はこれらの固定液に対して耐性であること
が判明した。
を用いる免疫蛍光（ＩＦ）分析によって、アセトン及び
メタノールなどの固定液に対する感度の異なる２組の初
期抗原が説明される。一方のＩＦパターンは拡散型
（Ｄ）で、核と細胞質との両方が染色されるが、他方の
ＩＦパターンは細胞質中の繊維状物質のみに限定される
（Ｒ）。Ｒ型構成要素はメタノールまたはエタノール固
定によって破壊されるがアセトンには耐性であり、一方
Ｄ型構成要素はこれらの固定液に対して耐性であること
が判明した。
【００３０】ＥＡ−Ｄ複合体は少なくとも、ＥＢＶゲノ
ムによってコードされる次のタンパク質： ＤＮＡポリ
メラーゼ関連タンパク質Ｐ４７−５４（ＢＭＲＦ１）、
主要ＤＮＡ結合タンパク質Ｐ１３８（ＢＡＬＦ２）、Ｄ
ＮＡポリメラーゼｐ１１０（ＢＡＬＦ５）、アルカリＤ
Ｎアーゼｐ５５（ＢＧＬＦ５）、チミジンキナーゼＰ６
５（ＢＸＬＦ１）及び初期トランスアクティベーターＰ
５２（ＢＭＬＦ１）を含む。
ムによってコードされる次のタンパク質： ＤＮＡポリ
メラーゼ関連タンパク質Ｐ４７−５４（ＢＭＲＦ１）、
主要ＤＮＡ結合タンパク質Ｐ１３８（ＢＡＬＦ２）、Ｄ
ＮＡポリメラーゼｐ１１０（ＢＡＬＦ５）、アルカリＤ
Ｎアーゼｐ５５（ＢＧＬＦ５）、チミジンキナーゼＰ６
５（ＢＸＬＦ１）及び初期トランスアクティベーターＰ
５２（ＢＭＬＦ１）を含む。
【００３１】ＥＡ−Ｒ複合体は少なくとも次のＥＢＶタ
ンパク質： リボヌクレオチドレダクターゼ大型サブユ
ニットＰ８５（ＢＯＲＦ２）、ＲＲ小型サブユニットｐ
３０（ＢａＲＦ１）及びＢｃｌ−２相同体Ｐ１７（ＢＨ
ＲＦ１）を含む。
ンパク質： リボヌクレオチドレダクターゼ大型サブユ
ニットＰ８５（ＢＯＲＦ２）、ＲＲ小型サブユニットｐ
３０（ＢａＲＦ１）及びＢｃｌ−２相同体Ｐ１７（ＢＨ
ＲＦ１）を含む。
【００３２】ＥＢＶ−ＥＡ複合タンパク質に対する抗体
は通常、活性な（急性または慢性）ＥＢＶ感染下に有る
患者において検出され得、その際抗ＥＡ−Ｒ抗体は見掛
け上健康な供血者においてより頻繁に検出され得る。
は通常、活性な（急性または慢性）ＥＢＶ感染下に有る
患者において検出され得、その際抗ＥＡ−Ｒ抗体は見掛
け上健康な供血者においてより頻繁に検出され得る。
【００３３】急性期の単核細胞症においてＥＡ−Ｄ複合
タンパク質に対するＩｇＧ、ＩｇＭ及びＩｇＡクラスの
抗体が検出され、これらのうちＩｇＭ及びＩｇＡは回復
期にＩｇＧより急速に消失した。（重篤な）慢性ＥＢＶ
感染ではＥＡ−Ｄ複合体とＥＡ−Ｒ複合体との両方に対
するＩｇＧ抗体が高力価で見出され、時にはＩｇＡも見
出されるが、ＩｇＭは存在しない。上咽頭癌ではＥＡ−
Ｄに対するＩｇＧとＩｇＡとの両方が高力価で見出さ
れ、その際ＩｇＡは診断上、また予後においても疾患監
視のために重要である。これに対して、別のＥＢＶ関連
悪性疾患であるバーキットリンパ腫はしばしば、ＥＡ−
Ｒ構成要素に対する高力価のＩｇＧとの間に関連性を有
する。
タンパク質に対するＩｇＧ、ＩｇＭ及びＩｇＡクラスの
抗体が検出され、これらのうちＩｇＭ及びＩｇＡは回復
期にＩｇＧより急速に消失した。（重篤な）慢性ＥＢＶ
感染ではＥＡ−Ｄ複合体とＥＡ−Ｒ複合体との両方に対
するＩｇＧ抗体が高力価で見出され、時にはＩｇＡも見
出されるが、ＩｇＭは存在しない。上咽頭癌ではＥＡ−
Ｄに対するＩｇＧとＩｇＡとの両方が高力価で見出さ
れ、その際ＩｇＡは診断上、また予後においても疾患監
視のために重要である。これに対して、別のＥＢＶ関連
悪性疾患であるバーキットリンパ腫はしばしば、ＥＡ−
Ｒ構成要素に対する高力価のＩｇＧとの間に関連性を有
する。
【００３４】大抵の場合、上述の抗体応答は、ＥＡ発現
を誘導し、アセトンまたはメタノールで固定した様々な
ＥＢＶ細胞系において間接免疫蛍光技術を用いて研究さ
れている。分子をより良く解明する血清学的研究は最近
始められたばかりである。
を誘導し、アセトンまたはメタノールで固定した様々な
ＥＢＶ細胞系において間接免疫蛍光技術を用いて研究さ
れている。分子をより良く解明する血清学的研究は最近
始められたばかりである。
【００３５】現在、ＥＡ−Ｄ及びＥＡ−Ｒ複合体に対す
る上記のように異なる免疫応答の（１種以上の）基礎機
構は解明されておらず、また様々なＥＢＶ疾患症候群に
おいてヒト抗体により検出されるのがＥＡ−Ｄタンパク
質とＥＡ−Ｒタンパク質とのいずれであるかも明らかに
解明されてはいない。
る上記のように異なる免疫応答の（１種以上の）基礎機
構は解明されておらず、また様々なＥＢＶ疾患症候群に
おいてヒト抗体により検出されるのがＥＡ−Ｄタンパク
質とＥＡ−Ｒタンパク質とのいずれであるかも明らかに
解明されてはいない。
【００３６】先に述べたように、ＥＡ−Ｄ及びＥＡ−Ｒ
複合体成分の分子特性の幾つかは近年或る程度説明され
てきており、そのコーディング読み取り枠のウイルスゲ
ノム上での位置も特定されている。
複合体成分の分子特性の幾つかは近年或る程度説明され
てきており、そのコーディング読み取り枠のウイルスゲ
ノム上での位置も特定されている。
【００３７】しかし、これらの構成要素をＥＢＶ産生細
胞から生産することは煩雑であり、また細胞培養におけ
るこれらのタンパク質の発現レベルの低さから収量は低
い。このような事実によって、面倒でかつ主観的なＩＦ
に基づく血清学的試験に替わるものとしての、より単純
な診断法の開発が妨げられてきた。
胞から生産することは煩雑であり、また細胞培養におけ
るこれらのタンパク質の発現レベルの低さから収量は低
い。このような事実によって、面倒でかつ主観的なＩＦ
に基づく血清学的試験に替わるものとしての、より単純
な診断法の開発が妨げられてきた。
【００３８】解明した構成要素を代替宿主系において発
現させることが開示されているが、この方法を診断試験
に通常のように適用するには、潜在的に干渉性である宿
主タンパク質（例えばＥ． ｃｏｌｉ）を除去するため
の高レベルの精製が必要となる。
現させることが開示されているが、この方法を診断試験
に通常のように適用するには、潜在的に干渉性である宿
主タンパク質（例えばＥ． ｃｏｌｉ）を除去するため
の高レベルの精製が必要となる。
【００３９】現在、ＥＢＶ特異的な血清診断は、どちら
かというと主観的な免疫蛍光試験によって行なわれる。
より単純かつ一律な診断法（例えばＥＬＩＳＡ）への進
歩は妨げられ、なぜならウイルス抗原の大量生産及び精
製は標準的なウイルス産生細胞系を用いては不可能であ
るからである。
かというと主観的な免疫蛍光試験によって行なわれる。
より単純かつ一律な診断法（例えばＥＬＩＳＡ）への進
歩は妨げられ、なぜならウイルス抗原の大量生産及び精
製は標準的なウイルス産生細胞系を用いては不可能であ
るからである。
【００４０】上記のような生産及び精製を行なう唯一の
方策は、別様に調製される（１種以上の）ＥＢＶ抗原を
用いることである。前記ＥＢＶ抗原は遺伝子操作技術ま
たは合成ペプチド技術によって調製し得る。
方策は、別様に調製される（１種以上の）ＥＢＶ抗原を
用いることである。前記ＥＢＶ抗原は遺伝子操作技術ま
たは合成ペプチド技術によって調製し得る。
【００４１】様々な段階のＥＢＶ感染において確実な診
断を可能にする特異的でかつ高感度の方法を開発するに
は、免疫優性（ｉｍｍｕｎｏ−ｄｏｍｉｎａｎｔ）なウ
イルスタンパク質とそのエピトープとを同定することが
きわめて重要である。
断を可能にする特異的でかつ高感度の方法を開発するに
は、免疫優性（ｉｍｍｕｎｏ−ｄｏｍｉｎａｎｔ）なウ
イルスタンパク質とそのエピトープとを同定することが
きわめて重要である。
【００４２】今回、ＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ４７−５４
（ＢＭＲＦ１）の幾つかの免疫反応性（ペプチド）ドメ
インが該タンパク質のＣ末端領域に局在することが患者
の血清を用いて見出されたが、個体によっては前記タン
パク質のいずれか他の箇所に位置するドメインに対する
抗体も有する（図１）。
（ＢＭＲＦ１）の幾つかの免疫反応性（ペプチド）ドメ
インが該タンパク質のＣ末端領域に局在することが患者
の血清を用いて見出されたが、個体によっては前記タン
パク質のいずれか他の箇所に位置するドメインに対する
抗体も有する（図１）。
【００４３】ＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ１３８（ＢＡＬＦ
２）の免疫反応性（ペプチド）ドメインは該タンパク質
の複数の部位に配置されており、そのほとんどはアミノ
酸配列４９０〜６００と、Ｃ末端のアミノ酸配列１００
０〜１１２８とに限定される（図２）。
２）の免疫反応性（ペプチド）ドメインは該タンパク質
の複数の部位に配置されており、そのほとんどはアミノ
酸配列４９０〜６００と、Ｃ末端のアミノ酸配列１００
０〜１１２８とに限定される（図２）。
【００４４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、診断試験に
おいて完全なタンパク質に替わり得る、ＥＡタンパク質
の免疫優性ドメインに相当する合成ペプチドフラグメン
トを解明することを目的とする。
おいて完全なタンパク質に替わり得る、ＥＡタンパク質
の免疫優性ドメインに相当する合成ペプチドフラグメン
トを解明することを目的とする。
【００４５】合成ペプチドは、化学的に十分解明されて
いる、即ち診断アッセイへの適用に十分適した、高収量
で容易かつ再現可能な生産が可能であるという利点を有
し、比較的高い再現性の下に製造及び使用され得る。
いる、即ち診断アッセイへの適用に十分適した、高収量
で容易かつ再現可能な生産が可能であるという利点を有
し、比較的高い再現性の下に製造及び使用され得る。
【００４６】
【課題を解決するための手段】本発明は、エプスタイン
−バールウイルスに対する抗体と免疫化学的に反応す
る、ＥＡ−ｐ４７−５４タンパク質の少なくとも一部を
含むペプチドであって、配列番号１、２、４または５に
示したアミノ酸配列の少なくとも一部を含むペプチドを
提供する。
−バールウイルスに対する抗体と免疫化学的に反応す
る、ＥＡ−ｐ４７−５４タンパク質の少なくとも一部を
含むペプチドであって、配列番号１、２、４または５に
示したアミノ酸配列の少なくとも一部を含むペプチドを
提供する。
【００４７】本発明はまた、エプスタイン−バールウイ
ルスに対する抗体と免疫化学的に反応する、ＥＡ−ｐ４
７−５４タンパク質の少なくとも一部を含むペプチドで
あって、配列番号５に示したアミノ酸配列の少なくとも
一部と連結された、配列番号４に示したアミノ酸配列の
少なくとも一部を含むペプチドも提供する。
ルスに対する抗体と免疫化学的に反応する、ＥＡ−ｐ４
７−５４タンパク質の少なくとも一部を含むペプチドで
あって、配列番号５に示したアミノ酸配列の少なくとも
一部と連結された、配列番号４に示したアミノ酸配列の
少なくとも一部を含むペプチドも提供する。
【００４８】本発明は、配列番号６に示したアミノ酸配
列の少なくとも一部を含むペプチドも提供する。
列の少なくとも一部を含むペプチドも提供する。
【００４９】更に本発明は、エプスタイン−バールウイ
ルスに対する抗体と免疫化学的に反応する、ＥＡ−ｐ１
３８タンパク質の少なくとも一部を含むペプチドであっ
て、配列番号７、８、９または１０に示したアミノ酸配
列の少なくとも一部を含むペプチドも提供する。
ルスに対する抗体と免疫化学的に反応する、ＥＡ−ｐ１
３８タンパク質の少なくとも一部を含むペプチドであっ
て、配列番号７、８、９または１０に示したアミノ酸配
列の少なくとも一部を含むペプチドも提供する。
【００５０】天然ＥＢＶとは異なり、本発明によるペプ
チドには、その起源が非感染性で安全であるという一大
利点が有る。
チドには、その起源が非感染性で安全であるという一大
利点が有る。
【００５１】本発明によるペプチドとそのフラグメント
は、試料中のＥＢＶまたはＥＢＶ抗体の存在を測定する
診断法に用いるのに特に適当であることが判明した。そ
のうえ、本発明によるペプチドとそのフラグメントは適
当な医薬投与形態でＥＢＶ関連疾患の治療に用いること
ができる。このようにして得られる、活性成分としペプ
チドまたはそのフラグメントを含有するワクチンの製造
は当業者には公知である。
は、試料中のＥＢＶまたはＥＢＶ抗体の存在を測定する
診断法に用いるのに特に適当であることが判明した。そ
のうえ、本発明によるペプチドとそのフラグメントは適
当な医薬投与形態でＥＢＶ関連疾患の治療に用いること
ができる。このようにして得られる、活性成分としペプ
チドまたはそのフラグメントを含有するワクチンの製造
は当業者には公知である。
【００５２】免疫試薬に含有させる本発明によるペプチ
ドは、現在入手可能なＥＡ（Ｄ）試薬に比較して改善さ
れた反応性及び特異性（性能）を有する。
ドは、現在入手可能なＥＡ（Ｄ）試薬に比較して改善さ
れた反応性及び特異性（性能）を有する。
【００５３】従って、上記のような免疫試薬を血清学的
試験に用いることによって、活性ＥＢＶ感染下に有る患
者のより優れた鑑別診断を可能にするアッセイの開発が
可能となる。
試験に用いることによって、活性ＥＢＶ感染下に有る患
者のより優れた鑑別診断を可能にするアッセイの開発が
可能となる。
【００５４】本発明者は、特定のＥＡ（Ｄ）ペプチドに
対する抗体の存在が活性ＥＢＶ感染と相関するというこ
とも発見した。
対する抗体の存在が活性ＥＢＶ感染と相関するというこ
とも発見した。
【００５５】ＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ４７−５４及びＥ
ＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ１３８由来の選択ドメインは、活
性ＥＢＶ感染下に有る患者における抗体検出に用い得
る。前記抗体は健康な個体には実質的に存在しない。
ＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ１３８由来の選択ドメインは、活
性ＥＢＶ感染下に有る患者における抗体検出に用い得
る。前記抗体は健康な個体には実質的に存在しない。
【００５６】このことは、世界各地出身の健康なＥＢＶ
血清反応陽性供血者の血清をＥＡ（Ｄ） Ｐ４７−５４
及びＰ１３８由来のペプチドに対するＩｇＧ反応性に関
して分析することにより更に証明される（図５）。
血清反応陽性供血者の血清をＥＡ（Ｄ） Ｐ４７−５４
及びＰ１３８由来のペプチドに対するＩｇＧ反応性に関
して分析することにより更に証明される（図５）。
【００５７】図５から、（無症状の）ＥＢＶ潜伏感染下
に有る健康なＥＢＶ血清反応陽性供血者は特定のＥＡ
（Ｄ）ペプチドに対する抗体をまれにしか有しないと結
論することができる。
に有る健康なＥＢＶ血清反応陽性供血者は特定のＥＡ
（Ｄ）ペプチドに対する抗体をまれにしか有しないと結
論することができる。
【００５８】本発明者は、様々なＥＢＶ疾患においてＥ
Ａ（Ｄ）に対するＩｇＧ、ＩｇＭ及びＩｇＡ抗体サブク
ラスを検出するのに本発明によるペプチドを単独でも、
また組み合わせても用い得ることも発見した。
Ａ（Ｄ）に対するＩｇＧ、ＩｇＭ及びＩｇＡ抗体サブク
ラスを検出するのに本発明によるペプチドを単独でも、
また組み合わせても用い得ることも発見した。
【００５９】伝染性単核細胞症（ＩＭ）患者の血清中に
ＥＢＶ−ＶＣＡ及びＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）反応性ＩｇＭ抗
体を検出することは、感染の急性期及び回復初期を示す
ものであり、従って重要な診断パラメーターである。Ｉ
ｇＧ抗ＥＡ（Ｄ）抗体はＩＭの急性期に一時的に存在
し、回復期には低い、もしくは検出不能なレベルまで減
少する。ＩｇＧ−ＥＡ（Ｄ）は、慢性または再活性化Ｅ
ＢＶ感染下に有る患者、及びＥＢＶ関連悪性疾患に罹患
した患者から成る特定グループでは再出現する場合も有
る。従って、ＩｇＧ抗ＥＡ（Ｄ）の存在は、様々な臨床
環境での（再）活性ＥＢＶ感染診断のためのマーカーと
して有用である。
ＥＢＶ−ＶＣＡ及びＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）反応性ＩｇＭ抗
体を検出することは、感染の急性期及び回復初期を示す
ものであり、従って重要な診断パラメーターである。Ｉ
ｇＧ抗ＥＡ（Ｄ）抗体はＩＭの急性期に一時的に存在
し、回復期には低い、もしくは検出不能なレベルまで減
少する。ＩｇＧ−ＥＡ（Ｄ）は、慢性または再活性化Ｅ
ＢＶ感染下に有る患者、及びＥＢＶ関連悪性疾患に罹患
した患者から成る特定グループでは再出現する場合も有
る。従って、ＩｇＧ抗ＥＡ（Ｄ）の存在は、様々な臨床
環境での（再）活性ＥＢＶ感染診断のためのマーカーと
して有用である。
【００６０】最後に、ＩｇＡ抗ＥＡ（Ｄ）の検出は或る
種のＥＢＶ関連悪性疾患に関連し、この検出は上咽頭癌
において診断上、また予後においても有用であることが
判明した。
種のＥＢＶ関連悪性疾患に関連し、この検出は上咽頭癌
において診断上、また予後においても有用であることが
判明した。
【００６１】本明細書中に用いた‘ペプチド’という語
は、生物活性を有するアミノ酸の分子鎖を意味し、特定
長の産物を意味するものではない。従って特に、タンパ
ク質、融合タンパク質またはペプチド、オリゴペプチド
及びポリペプチドが含まれる。
は、生物活性を有するアミノ酸の分子鎖を意味し、特定
長の産物を意味するものではない。従って特に、タンパ
ク質、融合タンパク質またはペプチド、オリゴペプチド
及びポリペプチドが含まれる。
【００６２】必要であれば、本発明によるペプチドは例
えばグリコシル化、アミド化、カルボキシル化またはリ
ン酸化によりｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで
修飾可能である。従って、本発明によるペプチドの例え
ば酸付加塩、アミド、エステル、特にＣ末端エステル、
及びＮ−アシル誘導体などの機能性変形例も本発明の一
部とみなす。本発明に含まれる特定のタンパク質または
ポリペプチドには自然の改変が存在することも有り得る
と理解される。そのような改変は、配列全体の中にみら
れる（一つ以上の）アミノ酸の相違によって、または
（１個以上の）アミノ酸の欠失、置換、挿入、逆位また
は付加によって明示され得る。生物活性及び免疫活性を
実質的に変更しないと考えられるアミノ酸置換が開示さ
れている。関連するアミノ酸間でのアミノ酸置換、もし
くは進化の過程でしばしば生起した置換は特に、Ｓｅｒ
／Ａｌａ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／
Ａｓｎ、Ｉｌｅ／Ｖａｌである（Ｍ． Ｄ． Ｄａｙｈ
ｏｆ， “Ａｔｌａｓ ｏｆｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，” Ｎａｔ．
Ｂｉｏｍｅｄ． Ｒｅｓ． Ｆｏｕｎｄ．， ｖｏ
ｌ．５， ｓｕｐｐｌ．３， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
Ｄ． Ｃ．， １９７８参照）。この情報に基づき、Ｌ
ｉｐｍａｎ及びＰｅａｒｓｏｎは迅速かつ高感度のタン
パク質比較法を開発し（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２７， ｐ
ｐ．１４３４−１４４１， １９８５）、相同タンパク
質同士の機能類似度を測定した。
えばグリコシル化、アミド化、カルボキシル化またはリ
ン酸化によりｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで
修飾可能である。従って、本発明によるペプチドの例え
ば酸付加塩、アミド、エステル、特にＣ末端エステル、
及びＮ−アシル誘導体などの機能性変形例も本発明の一
部とみなす。本発明に含まれる特定のタンパク質または
ポリペプチドには自然の改変が存在することも有り得る
と理解される。そのような改変は、配列全体の中にみら
れる（一つ以上の）アミノ酸の相違によって、または
（１個以上の）アミノ酸の欠失、置換、挿入、逆位また
は付加によって明示され得る。生物活性及び免疫活性を
実質的に変更しないと考えられるアミノ酸置換が開示さ
れている。関連するアミノ酸間でのアミノ酸置換、もし
くは進化の過程でしばしば生起した置換は特に、Ｓｅｒ
／Ａｌａ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／
Ａｓｎ、Ｉｌｅ／Ｖａｌである（Ｍ． Ｄ． Ｄａｙｈ
ｏｆ， “Ａｔｌａｓ ｏｆｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，” Ｎａｔ．
Ｂｉｏｍｅｄ． Ｒｅｓ． Ｆｏｕｎｄ．， ｖｏ
ｌ．５， ｓｕｐｐｌ．３， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
Ｄ． Ｃ．， １９７８参照）。この情報に基づき、Ｌ
ｉｐｍａｎ及びＰｅａｒｓｏｎは迅速かつ高感度のタン
パク質比較法を開発し（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２７， ｐ
ｐ．１４３４−１４４１， １９８５）、相同タンパク
質同士の機能類似度を測定した。
【００６３】本明細書中に用いた‘少なくとも一部’と
いう語は、本発明のペプチドのサブ配列から成るアミノ
酸配列を意味する。上記一部もしくはフラグメントと
は、ＥＢＶ−ＥＡタンパク質の免疫原決定基を１個以上
有するペプチドのことである。フラグメントは特に前駆
体分子の酵素切断によって製造され得、その際ＤＮＡに
は制限エンドヌクレアーゼ、ポリペプチドにはプロテア
ーゼが用いられる。他の方法にはフラグメントの化学合
成や、ＤＮＡフラグメントによるペプチドフラグメント
の発現などが有る。
いう語は、本発明のペプチドのサブ配列から成るアミノ
酸配列を意味する。上記一部もしくはフラグメントと
は、ＥＢＶ−ＥＡタンパク質の免疫原決定基を１個以上
有するペプチドのことである。フラグメントは特に前駆
体分子の酵素切断によって製造され得、その際ＤＮＡに
は制限エンドヌクレアーゼ、ポリペプチドにはプロテア
ーゼが用いられる。他の方法にはフラグメントの化学合
成や、ＤＮＡフラグメントによるペプチドフラグメント
の発現などが有る。
【００６４】本発明によるペプチドの、１個以上のエピ
トープを有する適当な免疫原フラグメントは国際特許出
願公開第８６／０６４８７号、Ｈ． Ｍ． Ｇｅｙｓｅ
ｎ等， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃ
ｉ． ８１， ｐｐ．３９９８−４００２， １９８４
及びＨ． Ｍ． Ｇｅｙｓｅｎ等， Ｊ． Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ． Ｍｅｔｈ． １０２， ｐｐ．２５９−２７
４， １９８７に開示された、いわゆるｐｅｐｓｃａｎ
法に基づく方法によって見出すことができ、その際完全
な当該ポリペプチドの部分配列に対応する一連の部分重
複ペプチドを合成し、それらの抗体との反応性を調べ
る。
トープを有する適当な免疫原フラグメントは国際特許出
願公開第８６／０６４８７号、Ｈ． Ｍ． Ｇｅｙｓｅ
ｎ等， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃ
ｉ． ８１， ｐｐ．３９９８−４００２， １９８４
及びＨ． Ｍ． Ｇｅｙｓｅｎ等， Ｊ． Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ． Ｍｅｔｈ． １０２， ｐｐ．２５９−２７
４， １９８７に開示された、いわゆるｐｅｐｓｃａｎ
法に基づく方法によって見出すことができ、その際完全
な当該ポリペプチドの部分配列に対応する一連の部分重
複ペプチドを合成し、それらの抗体との反応性を調べ
る。
【００６５】加えて、ペプチドの幾つかの領域を理論的
な要件に基づきエピトープと呼称し得るが、前記理論的
要件の予測的な価値は限られる。上記領域の決定は、Ｈ
ｏｐｐ及びＷｏｏｄｓによる親水性基準（Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ７８， ｐｐ．３
８２４−３８２８， １９８１）とＣｈｏｕ及びＦａｓ
ｍａｎによる二次構造アスペクト（Ａｄｖａｎｃｅｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ４７， ｐｐ．４５−１
４８， １９８７）との組み合わせに基づく。
な要件に基づきエピトープと呼称し得るが、前記理論的
要件の予測的な価値は限られる。上記領域の決定は、Ｈ
ｏｐｐ及びＷｏｏｄｓによる親水性基準（Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ７８， ｐｐ．３
８２４−３８２８， １９８１）とＣｈｏｕ及びＦａｓ
ｍａｎによる二次構造アスペクト（Ａｄｖａｎｃｅｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ４７， ｐｐ．４５−１
４８， １９８７）との組み合わせに基づく。
【００６６】本発明によるペプチドまたはそのフラグメ
ントは、公知の有機化学的ペプチド合成方法のいずれか
で、または組み換えＤＮＡ技術を用いて調製できる。
ントは、公知の有機化学的ペプチド合成方法のいずれか
で、または組み換えＤＮＡ技術を用いて調製できる。
【００６７】有機化学的ペプチド合成方法は、必要なア
ミノ酸同士を均質相中で、またはいわゆる固相を用いて
縮合反応により結合させることを含む。
ミノ酸同士を均質相中で、またはいわゆる固相を用いて
縮合反応により結合させることを含む。
【００６８】縮合反応は、 ａ） 遊離カルボキシル基を有し、その他の反応性基は
保護されている化合物（アミノ酸、ペプチド）を、遊離
アミノ基を有し、その他の反応性基は保護されている化
合物（アミノ酸、ペプチド）と、縮合剤存在下に縮合さ
せるか、または ｂ） 活性化されたカルボキシル基を有し、その他の反
応性基は遊離であるか、または保護されている化合物
（アミノ酸、ペプチド）を、遊離アミノ基を有し、その
他の反応性基は遊離であるか、または保護されている化
合物（アミノ酸、ペプチド）と縮合させる ことによって実施し得る。
保護されている化合物（アミノ酸、ペプチド）を、遊離
アミノ基を有し、その他の反応性基は保護されている化
合物（アミノ酸、ペプチド）と、縮合剤存在下に縮合さ
せるか、または ｂ） 活性化されたカルボキシル基を有し、その他の反
応性基は遊離であるか、または保護されている化合物
（アミノ酸、ペプチド）を、遊離アミノ基を有し、その
他の反応性基は遊離であるか、または保護されている化
合物（アミノ酸、ペプチド）と縮合させる ことによって実施し得る。
【００６９】カルボキシル基の活性化は特に、カルボキ
シル基を酸ハロゲン化物、アジド、酸無水物、イミダゾ
リド、またはＮ−ヒドロキシ−スクシンイミド、Ｎ−ヒ
ドロキシ−ベンゾトリアゾールもしくはｐ−ニトロフェ
ニルエステルなどの活性化エステルに変換することによ
って行なう。
シル基を酸ハロゲン化物、アジド、酸無水物、イミダゾ
リド、またはＮ−ヒドロキシ−スクシンイミド、Ｎ−ヒ
ドロキシ−ベンゾトリアゾールもしくはｐ−ニトロフェ
ニルエステルなどの活性化エステルに変換することによ
って行なう。
【００７０】上記縮合反応を生起させる最も普通の方法
は、カルボジイミド法、アジド法、混合酸無水物法、並
びにＥ． Ｇｒｏｓｓ及びＪ． Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ
編，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， Ａｎａｌｙｓｉｓ，
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌｓ．
１−３， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，
１９７９， １９８０， １９８１に記載されている
ような活性化エステルを用いる方法である。
は、カルボジイミド法、アジド法、混合酸無水物法、並
びにＥ． Ｇｒｏｓｓ及びＪ． Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ
編，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， Ａｎａｌｙｓｉｓ，
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌｓ．
１−３， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，
１９７９， １９８０， １９８１に記載されている
ような活性化エステルを用いる方法である。
【００７１】本発明による上述のペプチドの適当なフラ
グメントを、‘固相法’を用いて調製する方法は、例え
ばＪ． Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ８５，
ｐ．２１４９， １９６３及びＩｎｔ． Ｊ． Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ ＰｒｏｔｅｉｎＲｅｓ． ３５， ｐｐ．１
６１−２１４， １９９０に記載されている。調製する
べきペプチドのアミノ酸の結合は普通、カルボキシル末
端側から始まる。この方法の場合、反応性基を担持する
か、またはその上に反応性基が導入され得る固相が必要
である。固相は、例えばベンゼン及びジビニルベンゼン
と反応性クロロメチル基とのコポリマーか、またはヒド
ロキシメチルもしくはアミン官能基と反応する性質を付
与されたポリマー固相であり得る。
グメントを、‘固相法’を用いて調製する方法は、例え
ばＪ． Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ８５，
ｐ．２１４９， １９６３及びＩｎｔ． Ｊ． Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ ＰｒｏｔｅｉｎＲｅｓ． ３５， ｐｐ．１
６１−２１４， １９９０に記載されている。調製する
べきペプチドのアミノ酸の結合は普通、カルボキシル末
端側から始まる。この方法の場合、反応性基を担持する
か、またはその上に反応性基が導入され得る固相が必要
である。固相は、例えばベンゼン及びジビニルベンゼン
と反応性クロロメチル基とのコポリマーか、またはヒド
ロキシメチルもしくはアミン官能基と反応する性質を付
与されたポリマー固相であり得る。
【００７２】特に適当な固相は、例えばＪ． Ａｍ．
Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ９５， ｐ．１３２８， １９
７４にＷａｎｇが述べているｐ−アルコキシベンジルア
ルコール樹脂（４−ヒドロキシ−メチル−フェノキシ−
メチル−コポリスチレン−１％ジビニルベンゼン樹脂）
である。合成後、ペプチドは上記固相から穏和条件下に
分離され得る。
Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ９５， ｐ．１３２８， １９
７４にＷａｎｇが述べているｐ−アルコキシベンジルア
ルコール樹脂（４−ヒドロキシ−メチル−フェノキシ−
メチル−コポリスチレン−１％ジビニルベンゼン樹脂）
である。合成後、ペプチドは上記固相から穏和条件下に
分離され得る。
【００７３】所望のアミノ酸配列の合成後、続いて樹脂
からペプチドを、例えばトリフルオロメタンスルホン
酸、またはトリフルオロ酢酸に溶解させたメタンスルホ
ン酸で分離する。ペプチドは、低級アルコール、好まし
くはメタノールまたはエタノールを用いるエステル交換
反応によっても支持体から分離でき、この場合ペプチド
の低級アルキルエステルが直接生成する。同様に、アン
モニアを用いる分離によって本発明によるペプチドのア
ミドが得られる。
からペプチドを、例えばトリフルオロメタンスルホン
酸、またはトリフルオロ酢酸に溶解させたメタンスルホ
ン酸で分離する。ペプチドは、低級アルコール、好まし
くはメタノールまたはエタノールを用いるエステル交換
反応によっても支持体から分離でき、この場合ペプチド
の低級アルキルエステルが直接生成する。同様に、アン
モニアを用いる分離によって本発明によるペプチドのア
ミドが得られる。
【００７４】縮合反応に関与しない反応性基は、先に述
べたように、酸、塩基を用いる加水分解または還元によ
ってきわめて容易に再度除去することができる基によっ
て有効に保護する。即ち、カルボキシル基であれば、例
えばメタノール、エタノール、ｔ−ブタノール、ベンジ
ルアルコールまたはｐ−ニトロベンジルアルコールとの
エステル化、及び固体支持体に結合したアミンによって
有効に保護し得る。
べたように、酸、塩基を用いる加水分解または還元によ
ってきわめて容易に再度除去することができる基によっ
て有効に保護する。即ち、カルボキシル基であれば、例
えばメタノール、エタノール、ｔ−ブタノール、ベンジ
ルアルコールまたはｐ−ニトロベンジルアルコールとの
エステル化、及び固体支持体に結合したアミンによって
有効に保護し得る。
【００７５】アミノ基を有効に保護し得る基は、エトキ
シカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブトキ
シ−カルボニル（ｔ−ｂｏｃ）もしくはｐ−メトキシ−
ベンジルオキシカルボニル基であるか、またはベンゼン
−スルホニルもしくはｐ−トルエン−スルホニル基など
の、スルホン酸に由来する酸基であるが、置換または非
置換アリールまたはアラルキル基、例えばベンジル及び
トリフェニルメチルや、オルト−ニトロフェニル−スル
フェニル及び２−ベンゾイル−１−メチル−ビニルなど
の基のような他の基を用いることも可能である。特に適
当なα−アミノ保護基は、例えば塩基感受性の９−フル
オレニル−メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基（Ｃａｒ
ｐｉｎｏ及びＨａｎ， Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ．
Ｓｏｃ． ９２， ｐ．５７４８， １９７０）であ
る。
シカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブトキ
シ−カルボニル（ｔ−ｂｏｃ）もしくはｐ−メトキシ−
ベンジルオキシカルボニル基であるか、またはベンゼン
−スルホニルもしくはｐ−トルエン−スルホニル基など
の、スルホン酸に由来する酸基であるが、置換または非
置換アリールまたはアラルキル基、例えばベンジル及び
トリフェニルメチルや、オルト−ニトロフェニル−スル
フェニル及び２−ベンゾイル−１−メチル−ビニルなど
の基のような他の基を用いることも可能である。特に適
当なα−アミノ保護基は、例えば塩基感受性の９−フル
オレニル−メトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基（Ｃａｒ
ｐｉｎｏ及びＨａｎ， Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ．
Ｓｏｃ． ９２， ｐ．５７４８， １９７０）であ
る。
【００７６】用い得る保護基についてのより広範な記述
が、Ｇｒｏｓｓ， Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄ及びＭｅｉｅ
ｎｈｏｆｅｒ編， Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， Ａｎ
ａｌｙｓｉｓ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ， ｖｏｌｓ．１−９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ Ｉｎｃ．， １９７９−１９８７中に見出され得
る。
が、Ｇｒｏｓｓ， Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄ及びＭｅｉｅ
ｎｈｏｆｅｒ編， Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， Ａｎ
ａｌｙｓｉｓ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ， ｖｏｌｓ．１−９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ Ｉｎｃ．， １９７９−１９８７中に見出され得
る。
【００７７】リシンのε−アミノ基を保護することも必
要であり、またアルギニンのグアニジン基は保護するこ
とが適当である。このような保護に通常用いられる保護
基は、リシンの場合はＢｏｃ基、アルギニンの場合はＰ
ｍｃ基、Ｐｍｓ基、Ｍｂｓ基またはＭｔｒ基である。
要であり、またアルギニンのグアニジン基は保護するこ
とが適当である。このような保護に通常用いられる保護
基は、リシンの場合はＢｏｃ基、アルギニンの場合はＰ
ｍｃ基、Ｐｍｓ基、Ｍｂｓ基またはＭｔｒ基である。
【００７８】保護基は、当該基の性質に応じて様々な通
常方法で、例えばトリフルオロ酢酸を用いて、または水
素とパラジウムなどの触媒とを用いる穏和な還元によっ
て、または氷酢酸中のＨＢｒを用いて除去可能である。
常方法で、例えばトリフルオロ酢酸を用いて、または水
素とパラジウムなどの触媒とを用いる穏和な還元によっ
て、または氷酢酸中のＨＢｒを用いて除去可能である。
【００７９】本発明による免疫反応性ペプチドは、複数
を組み合わせてただ１個の分子とすることもできる。２
個以上のペプチドを共有結合させて混成ペプチドまたは
複合ペプチドとすることは、例えば先に述べた方法を用
いてペプチド配列を固相ペプチド合成することにより可
能であり、その際個々のペプチドのアミノ酸配列は互い
に整列させる。個々のペプチド配列間にはリンカー配列
を挿入することもできる。そのようなリンカー配列は、
例えばグリシンの２〜５残基の伸長部（ｓｔｒｅｔｃ
ｈ）であり得る。
を組み合わせてただ１個の分子とすることもできる。２
個以上のペプチドを共有結合させて混成ペプチドまたは
複合ペプチドとすることは、例えば先に述べた方法を用
いてペプチド配列を固相ペプチド合成することにより可
能であり、その際個々のペプチドのアミノ酸配列は互い
に整列させる。個々のペプチド配列間にはリンカー配列
を挿入することもできる。そのようなリンカー配列は、
例えばグリシンの２〜５残基の伸長部（ｓｔｒｅｔｃ
ｈ）であり得る。
【００８０】混成または複合ペプチドは、フラグメント
縮合技術を用いる固相合成によっても調製可能である。
（その配列が本発明の個々のペプチドの配列に対応し得
る）複数のフラグメントを個別に調製及び精製するこの
方法は、比較的長い混成または複合ペプチド配列を合成
する場合に好ましい。比較的長いペプチドを調製する方
法は当業者に公知であり、例えばＴｈｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ， Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，
Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌｓ．１−９（上記参照）に記
載されている。
縮合技術を用いる固相合成によっても調製可能である。
（その配列が本発明の個々のペプチドの配列に対応し得
る）複数のフラグメントを個別に調製及び精製するこの
方法は、比較的長い混成または複合ペプチド配列を合成
する場合に好ましい。比較的長いペプチドを調製する方
法は当業者に公知であり、例えばＴｈｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ， Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，
Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌｓ．１−９（上記参照）に記
載されている。
【００８１】あるいは他の場合には、適宜修飾した本発
明のペプチド同士を結合させることによって混成または
複合ペプチドを調製し得る。
明のペプチド同士を結合させることによって混成または
複合ペプチドを調製し得る。
【００８２】システインアミノ酸を欠いた２個の異なる
ペプチド配列を結合させる好ましい方法ではペプチド
を、カルボキシル末端かまたはアミノ末端に付加的なシ
ステイン残基を有する誘導体に変換する。その後、一方
のペプチドを単一システインチオール官能基において
２，２′−ジチオジピリジンで活性化する。得られたピ
リジル−ジチオ−ペプチド誘導体を、システインチオー
ル基を有する第二のペプチドと反応させて、個別のペプ
チドがジスルフィド結合によって連結された混成ペプチ
ドを得る。
ペプチド配列を結合させる好ましい方法ではペプチド
を、カルボキシル末端かまたはアミノ末端に付加的なシ
ステイン残基を有する誘導体に変換する。その後、一方
のペプチドを単一システインチオール官能基において
２，２′−ジチオジピリジンで活性化する。得られたピ
リジル−ジチオ−ペプチド誘導体を、システインチオー
ル基を有する第二のペプチドと反応させて、個別のペプ
チドがジスルフィド結合によって連結された混成ペプチ
ドを得る。
【００８３】他の多くの混成ペプチド調製方法も実施可
能である。タンパク質−タンパク質結合の分野で開発さ
れた化学的方法も用い得る。このような方法については
Ｍｅａｎｓ及びＦｅｅｎｅｙ（Ｂｉｏｃｏｎｊ． Ｃｈ
ｅｍ． １， ｐｐ．２−１２， １９９０）を参照さ
れたい。例えば、良く知られたホモまたはヘテロ二官能
架橋剤を用いれば、個々のペプチドをジスルフィド結
合、またはチオエーテル結合、またはアミド結合等で結
合させることができる。
能である。タンパク質−タンパク質結合の分野で開発さ
れた化学的方法も用い得る。このような方法については
Ｍｅａｎｓ及びＦｅｅｎｅｙ（Ｂｉｏｃｏｎｊ． Ｃｈ
ｅｍ． １， ｐｐ．２−１２， １９９０）を参照さ
れたい。例えば、良く知られたホモまたはヘテロ二官能
架橋剤を用いれば、個々のペプチドをジスルフィド結
合、またはチオエーテル結合、またはアミド結合等で結
合させることができる。
【００８４】先に触れたように、本発明によるペプチド
は組み換えＤＮＡ技術を用いても調製し得る。この可能
性は、ペプチドを反復配列中に（‘タンデムに’）組み
込む場合、またはペプチドを（はるかに大きい）タンパ
ク質またはポリペプチドの構成要素として、もしくは例
えばβ−ガラクトシダーゼ（の一部）との融合タンパク
質として調製し得る場合特に重要である。従って、上記
のようなペプチドも本発明の範囲内である。この調製方
法では、組み換えＤＮＡの構成要素として、本発明によ
るペプチドをコードする核酸配列であってしかも、天然
のＥＢＶゲノムにおいて該配列に隣接（ｆｌａｎｋ）す
る核酸セグメントを実質的に含まない核酸配列を用い
る。
は組み換えＤＮＡ技術を用いても調製し得る。この可能
性は、ペプチドを反復配列中に（‘タンデムに’）組み
込む場合、またはペプチドを（はるかに大きい）タンパ
ク質またはポリペプチドの構成要素として、もしくは例
えばβ−ガラクトシダーゼ（の一部）との融合タンパク
質として調製し得る場合特に重要である。従って、上記
のようなペプチドも本発明の範囲内である。この調製方
法では、組み換えＤＮＡの構成要素として、本発明によ
るペプチドをコードする核酸配列であってしかも、天然
のＥＢＶゲノムにおいて該配列に隣接（ｆｌａｎｋ）す
る核酸セグメントを実質的に含まない核酸配列を用い
る。
【００８５】上記方法は、宿主として適当な微生物にお
いて調製したい１種以上のペプチドをコードする核酸配
列を含む組み換えポリヌクレオチドを発現させることに
より所望のペプチドを調製することを含む。
いて調製したい１種以上のペプチドをコードする核酸配
列を含む組み換えポリヌクレオチドを発現させることに
より所望のペプチドを調製することを含む。
【００８６】本発明によるペプチドをコードする核酸配
列は、該配列が天然には会合または連結しない様々な複
製実現ＤＮＡ配列と連結させていわゆる組み換えベクタ
ー分子とすることができ、この分子は適当な宿主の形質
転換に用い得る。有用な組み換えベクター分子は好まし
くは、例えばプラスミド、バクテリオファージ、コスミ
ドまたはウイルスに由来する。
列は、該配列が天然には会合または連結しない様々な複
製実現ＤＮＡ配列と連結させていわゆる組み換えベクタ
ー分子とすることができ、この分子は適当な宿主の形質
転換に用い得る。有用な組み換えベクター分子は好まし
くは、例えばプラスミド、バクテリオファージ、コスミ
ドまたはウイルスに由来する。
【００８７】核酸配列のクローニングに用い得る特異的
ベクターまたはクローニングビヒクルは当業者に公知で
あり、特にｐＢＲ３２２、様々なｐＵＣ、ｐＧＥＭおよ
びＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔプラスミドなどのプラスミドベ
クター、バクテリオファージ、例えばｋｇｔ−Ｗｅｓ、
Ｃｈａｒｏｎ ２８及びＭ１３由来ファージ、またはＳ
Ｖ４０、アデノウイルスもしくはポリオーマウイルスな
どのウイルスベクターを含む（Ｒ． Ｌ． Ｒｏｄｒｉ
ｑｕｅｚ及びＤ． Ｔ． Ｄｅｎｈａｒｄｔ編， Ｖｅ
ｃｔｏｒｓ： Ａ ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔ
ｈｅｉｒ ｕｓｅｓ， Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，
１９８８； Ｊ． Ａ． Ｌｅｎｓｔｒａ等， Ａｒｃ
ｈ． Ｖｉｒｏｌ． １１０， ｐｐ．１−２４， １
９９０も参照されたい）。組み換えベクター分子の構築
に用いるべき方法は当業者に公知であり、特にＴ． Ｍ
ａｎｉａｔｉｓ等が提示している（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ： ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ， ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ， １９８９）。
ベクターまたはクローニングビヒクルは当業者に公知で
あり、特にｐＢＲ３２２、様々なｐＵＣ、ｐＧＥＭおよ
びＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔプラスミドなどのプラスミドベ
クター、バクテリオファージ、例えばｋｇｔ−Ｗｅｓ、
Ｃｈａｒｏｎ ２８及びＭ１３由来ファージ、またはＳ
Ｖ４０、アデノウイルスもしくはポリオーマウイルスな
どのウイルスベクターを含む（Ｒ． Ｌ． Ｒｏｄｒｉ
ｑｕｅｚ及びＤ． Ｔ． Ｄｅｎｈａｒｄｔ編， Ｖｅ
ｃｔｏｒｓ： Ａ ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔ
ｈｅｉｒ ｕｓｅｓ， Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，
１９８８； Ｊ． Ａ． Ｌｅｎｓｔｒａ等， Ａｒｃ
ｈ． Ｖｉｒｏｌ． １１０， ｐｐ．１−２４， １
９９０も参照されたい）。組み換えベクター分子の構築
に用いるべき方法は当業者に公知であり、特にＴ． Ｍ
ａｎｉａｔｉｓ等が提示している（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ： ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ， ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ， １９８９）。
【００８８】例えば、本発明によるペプチドをコードす
る核酸配列をクローニングベクターに挿入することは、
遺伝子と所望のクローニングビヒクルとの両方を（１種
以上の）同じ制限酵素で切断すれば、それによって相補
的ＤＮＡ末端が形成されるので容易に実施可能となる。
る核酸配列をクローニングベクターに挿入することは、
遺伝子と所望のクローニングビヒクルとの両方を（１種
以上の）同じ制限酵素で切断すれば、それによって相補
的ＤＮＡ末端が形成されるので容易に実施可能となる。
【００８９】組み換えベクター分子は、ｐＢＲ３２２の
アンピシリン及びテトラサイクリン耐性、並びにｐＵＣ
８のアンピシリン耐性及びβ−ガラクトシダーゼのα−
ペプチドをコードする領域の活性のような、所望の形質
転換体の選択に用い得る１種以上のマーカー活性を付加
的に有していてもよい。
アンピシリン及びテトラサイクリン耐性、並びにｐＵＣ
８のアンピシリン耐性及びβ−ガラクトシダーゼのα−
ペプチドをコードする領域の活性のような、所望の形質
転換体の選択に用い得る１種以上のマーカー活性を付加
的に有していてもよい。
【００９０】当然ながら、形質転換宿主が１個以上の免
疫原決定基を有するポリペプチドを産生するかぎり、ク
ローニングベクターの選択した部位に挿入するヌクレオ
チド配列は本発明のペプチドをコードする完全な核酸配
列の断片しか含まなくてもよいと理解されるべきであ
る。
疫原決定基を有するポリペプチドを産生するかぎり、ク
ローニングベクターの選択した部位に挿入するヌクレオ
チド配列は本発明のペプチドをコードする完全な核酸配
列の断片しか含まなくてもよいと理解されるべきであ
る。
【００９１】本発明のペプチドに対する抗体も本発明の
一部である。
一部である。
【００９２】上述のように調製したペプチドまたはその
フラグメントは、ポリクローナルとモノクローナルとの
両方の抗体の製造に用い得る。本発明によるペプチドに
対するモノクローナル抗体は、当業者には容易に製造可
能である。
フラグメントは、ポリクローナルとモノクローナルとの
両方の抗体の製造に用い得る。本発明によるペプチドに
対するモノクローナル抗体は、当業者には容易に製造可
能である。
【００９３】従って、本発明のモノクローナル抗体はＥ
ＢＶ感染診断のための新規な手段を提供する。
ＢＶ感染診断のための新規な手段を提供する。
【００９４】本発明の好ましい抗体は、ＥＢＶ−ＥＡ
ｐ４７−５４タンパク質のエピトープに結合するモノク
ローナル抗体であり、前記エピトープはｔｈｅ Ｅｕｒ
ｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａ
ｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｒｕｅ（ＥＣＡＣＣ）， Ｐｏ
ｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ（ＵＫ）に受託番号第９５０５１６
１９号、同第９５０５１６２０号、同第９５０５１６２
１号及び同第９５０５１６２２号の下に寄託されたハイ
ブリドーマ細胞系が産生するモノクローナル抗体によっ
て認識される。
ｐ４７−５４タンパク質のエピトープに結合するモノク
ローナル抗体であり、前記エピトープはｔｈｅ Ｅｕｒ
ｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａ
ｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｒｕｅ（ＥＣＡＣＣ）， Ｐｏ
ｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ（ＵＫ）に受託番号第９５０５１６
１９号、同第９５０５１６２０号、同第９５０５１６２
１号及び同第９５０５１６２２号の下に寄託されたハイ
ブリドーマ細胞系が産生するモノクローナル抗体によっ
て認識される。
【００９５】本発明のモノクローナル抗体を分泌し得る
不死化細胞系も本発明の一部である。
不死化細胞系も本発明の一部である。
【００９６】モノクローナル抗体を産生する細胞系の製
造は、例えばＫｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎの技術
［Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎは、モノクローナ
ル抗体産生ハイブリドーマの形成をもたらす技術を創案
した（Ｇ． Ｋｏｈｌｅｒ及びＣ． Ｍｉｌｓｔｅｉ
ｎ， Ｎａｔｕｒｅ ２５６， ｐｐ．４９５−４９
７， １９７５； Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．
６， ｐｐ．５１１−５１９， １９７６）］、エプ
スタイン−バールウイルスを用いる形質転換、もしくは
オンコジーンＤＮＡでのＢリンパ球の直接形質転換、ま
たはヒトＢリンパ球とヒトもしくはマウス−ヒト雑種骨
髄腫細胞系である融合相手との直接融合、もしくはＥＢ
Ｖ形質転換Ｂ細胞系と前記骨髄腫細胞系との直接融合に
よって実施し得る。
造は、例えばＫｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎの技術
［Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎは、モノクローナ
ル抗体産生ハイブリドーマの形成をもたらす技術を創案
した（Ｇ． Ｋｏｈｌｅｒ及びＣ． Ｍｉｌｓｔｅｉ
ｎ， Ｎａｔｕｒｅ ２５６， ｐｐ．４９５−４９
７， １９７５； Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．
６， ｐｐ．５１１−５１９， １９７６）］、エプ
スタイン−バールウイルスを用いる形質転換、もしくは
オンコジーンＤＮＡでのＢリンパ球の直接形質転換、ま
たはヒトＢリンパ球とヒトもしくはマウス−ヒト雑種骨
髄腫細胞系である融合相手との直接融合、もしくはＥＢ
Ｖ形質転換Ｂ細胞系と前記骨髄腫細胞系との直接融合に
よって実施し得る。
【００９７】本発明の好ましい細胞系は、受託番号９５
０５１６１９、９５０５１６２０、９５０５１６２１及
び９５０５１６２２でＥｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕ
ｒｅｓ， Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ （ＵＫ）に寄託さ
れた細胞系である。
０５１６１９、９５０５１６２０、９５０５１６２１及
び９５０５１６２２でＥｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕ
ｒｅｓ， Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ （ＵＫ）に寄託さ
れた細胞系である。
【００９８】これらのハイブリドーマ細胞系は、骨髄腫
細胞を、ＥＢＶ産生細胞由来のＥＢＶ−ＥＡタンパク質
を予め接種したマウスに由来するリンパ球と融合させて
産生された。
細胞を、ＥＢＶ産生細胞由来のＥＢＶ−ＥＡタンパク質
を予め接種したマウスに由来するリンパ球と融合させて
産生された。
【００９９】ＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）複合体のタンパク質に
対するモノクローナル抗体は、精製目的のために、また
これらのタンパク質の機能研究のための様々な生化学／
免疫分析技術のために、細胞及び細胞抽出物でのＥＡ
（Ｄ）発現をｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏの両
方で検出するのに有用な手段である。
対するモノクローナル抗体は、精製目的のために、また
これらのタンパク質の機能研究のための様々な生化学／
免疫分析技術のために、細胞及び細胞抽出物でのＥＡ
（Ｄ）発現をｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏの両
方で検出するのに有用な手段である。
【０１００】ＥＢＶ−ＥＡタンパク質に対するモノクロ
ーナル抗体が産生され、ＢＭＲＦ１によってコードされ
るＥＡ（Ｄ）タンパク質Ｐ４７−５４の特定のペプチド
ドメイン内のエピトープと反応することが判明した。
ーナル抗体が産生され、ＢＭＲＦ１によってコードされ
るＥＡ（Ｄ）タンパク質Ｐ４７−５４の特定のペプチド
ドメイン内のエピトープと反応することが判明した。
【０１０１】これらのモノクローナル抗体の２種（ＥＢ
Ｖ．ＯＴ１３Ｎ及びＥＢＶ．ＯＴ１４Ｅと称する）のた
めのＰ４７−５４タンパク質上の結合ドメインはそれぞ
れＡＡ位置３４０−３４６及び３４６−３５０にマッピ
ングされた（図８Ａ）。
Ｖ．ＯＴ１３Ｎ及びＥＢＶ．ＯＴ１４Ｅと称する）のた
めのＰ４７−５４タンパク質上の結合ドメインはそれぞ
れＡＡ位置３４０−３４６及び３４６−３５０にマッピ
ングされた（図８Ａ）。
【０１０２】このような抗体を使用して、潜伏感染細胞
（図８Ｂ、レーンＸ５０／７）ではなく、増殖感染細胞
（図８Ｂ、レーンＶＣＡ及びＥＡ）で発現されるＢＭＲ
Ｆ１によってコードされるＰ４７−５４タンパク質をイ
ンタクトなリン酸化及び非リン酸化形態で検出すること
ができる。抗体はＥＢＶ Ｐ４７−５４に特異的であ
り、ＥＢＶ陰性細胞の細胞成分とは交差反応しない（図
８Ｂ、レーンＢＪＡＢ）。
（図８Ｂ、レーンＸ５０／７）ではなく、増殖感染細胞
（図８Ｂ、レーンＶＣＡ及びＥＡ）で発現されるＢＭＲ
Ｆ１によってコードされるＰ４７−５４タンパク質をイ
ンタクトなリン酸化及び非リン酸化形態で検出すること
ができる。抗体はＥＢＶ Ｐ４７−５４に特異的であ
り、ＥＢＶ陰性細胞の細胞成分とは交差反応しない（図
８Ｂ、レーンＢＪＡＢ）。
【０１０３】ＥＢＶ−ＥＡタンパク質に対するモノクロ
ーナル抗体が産生され、ＢＡＬＦ２によってコードされ
るＥＡ（Ｄ）タンパク質Ｐ１３８の特定ペプチドドメイ
ン内のエピトープと反応することが判明した。
ーナル抗体が産生され、ＢＡＬＦ２によってコードされ
るＥＡ（Ｄ）タンパク質Ｐ１３８の特定ペプチドドメイ
ン内のエピトープと反応することが判明した。
【０１０４】これらのモノクローナル抗体の２種（ＥＢ
Ｖ．ＯＴ１３Ｂ及びＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄと称する）のた
めのＰ１３８タンパク質上の結合ドメインはそれぞれＡ
Ａ位置５１５−５２１及び１０９２−１０９８にマッピ
ングされた（図９Ａ）。
Ｖ．ＯＴ１３Ｂ及びＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄと称する）のた
めのＰ１３８タンパク質上の結合ドメインはそれぞれＡ
Ａ位置５１５−５２１及び１０９２−１０９８にマッピ
ングされた（図９Ａ）。
【０１０５】このような抗体を使用して、潜伏感染細胞
（図９Ｂ、レーンＸ５０／７）ではなく、増殖感染細胞
（図９Ｂ、レーンＶＣＡ及びＥＡ）で発現される、ＢＡ
ＬＦ２によってコードされるＰ１３８タンパク質をイン
タクトな形態で検出することができる。抗体はＥＢＶ
Ｐ１３８に特異的であり、ＥＢＶ陰性細胞の細胞成分と
は交差反応しない（図９Ｂ、レーンＢＪＡＢ）。
（図９Ｂ、レーンＸ５０／７）ではなく、増殖感染細胞
（図９Ｂ、レーンＶＣＡ及びＥＡ）で発現される、ＢＡ
ＬＦ２によってコードされるＰ１３８タンパク質をイン
タクトな形態で検出することができる。抗体はＥＢＶ
Ｐ１３８に特異的であり、ＥＢＶ陰性細胞の細胞成分と
は交差反応しない（図９Ｂ、レーンＢＪＡＢ）。
【０１０６】本発明は更に、試験液又は組織試料中の全
長タンパク質の検出を目的とする免疫学的及び生化学的
方法での前記ペプチドに対する抗体の使用を包含する。
長タンパク質の検出を目的とする免疫学的及び生化学的
方法での前記ペプチドに対する抗体の使用を包含する。
【０１０７】本発明以前では、ＥＢＶ感染細胞の初期抗
原の検出は、ヒト血清を抗ＥＢＶ−ＥＡ抗体源として使
用する間接免疫蛍光法（ＩＩＦ）を用いて実施されてい
た。擬陽性反応や擬陰性反応が頻繁に見られるために、
これは複雑である。
原の検出は、ヒト血清を抗ＥＢＶ−ＥＡ抗体源として使
用する間接免疫蛍光法（ＩＩＦ）を用いて実施されてい
た。擬陽性反応や擬陰性反応が頻繁に見られるために、
これは複雑である。
【０１０８】ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｂ、１３Ｄ、１３Ｎ、１
４Ｅ抗体によって、間接免疫蛍光法や同様の技術による
種々のＥＢＶ感染細胞中のＥＢＶ−ＥＡの高感度検出が
可能となる。
４Ｅ抗体によって、間接免疫蛍光法や同様の技術による
種々のＥＢＶ感染細胞中のＥＢＶ−ＥＡの高感度検出が
可能となる。
【０１０９】本発明のペプチドに対するモノクローナル
及びポリクローナル抗体は、組織試料中のその場での検
出のための診断や免疫細胞化学法に非常に適しており、
中和抗体は受動免疫治療に非常に有用である。
及びポリクローナル抗体は、組織試料中のその場での検
出のための診断や免疫細胞化学法に非常に適しており、
中和抗体は受動免疫治療に非常に有用である。
【０１１０】問題のモノクローナル抗体の「人体適応化
（ｈｕｍａｎｉｚｉｎｇ）」も本発明の一部となる。
「人体に適応した」モノクローナル抗体の産生技術は当
業界では公知である。
（ｈｕｍａｎｉｚｉｎｇ）」も本発明の一部となる。
「人体に適応した」モノクローナル抗体の産生技術は当
業界では公知である。
【０１１１】本発明のペプチド又は抗体を１種以上含む
免疫化学試薬も本発明の一部である。
免疫化学試薬も本発明の一部である。
【０１１２】本発明の「免疫化学試薬」という用語は通
常、本発明の１種以上のペプチド及び適切な支持体又は
標識物質からなる。
常、本発明の１種以上のペプチド及び適切な支持体又は
標識物質からなる。
【０１１３】使用できる支持体は例えば、マイクロ試験
ウェル又はキュベットの内壁、管又は細管、膜、フィル
ター、試験ストリップ又は粒子［例えばラテックス粒
子、アルデヒド粒子（例えば活性アルデヒド表面基を有
するセラミック磁化性粒子）］の表面、赤血球、色素ゾ
ル、金属ゾル又はゾル粒子としての金属化合物，ＢＳＡ
又はＫＬＨのようなキャリヤータンパク質である。
ウェル又はキュベットの内壁、管又は細管、膜、フィル
ター、試験ストリップ又は粒子［例えばラテックス粒
子、アルデヒド粒子（例えば活性アルデヒド表面基を有
するセラミック磁化性粒子）］の表面、赤血球、色素ゾ
ル、金属ゾル又はゾル粒子としての金属化合物，ＢＳＡ
又はＫＬＨのようなキャリヤータンパク質である。
【０１１４】使用できる標識物質はとりわけ、放射性同
位体、蛍光化合物、酵素、色素ゾル、金属ゾル又はゾル
粒子としての金属化合物である。
位体、蛍光化合物、酵素、色素ゾル、金属ゾル又はゾル
粒子としての金属化合物である。
【０１１５】試料中のＥＢＶに対する抗体の検出方法で
は、本発明の免疫化学試薬を試料と接触させる。その
後、試料中のペプチドと抗体との間に生成した免疫複合
体の存在を検出し、この検出によって試料中のＥＢＶ抗
体の存在を確認し、定量することができる。
は、本発明の免疫化学試薬を試料と接触させる。その
後、試料中のペプチドと抗体との間に生成した免疫複合
体の存在を検出し、この検出によって試料中のＥＢＶ抗
体の存在を確認し、定量することができる。
【０１１６】免疫化学試薬の種類や更なる特徴によって
は、生起する免疫化学反応はいわゆるサンドイッチ反
応、凝集反応、競合反応又は阻害反応である。
は、生起する免疫化学反応はいわゆるサンドイッチ反
応、凝集反応、競合反応又は阻害反応である。
【０１１７】試料中のＥＢＶ検出のために、本発明のペ
プチドを１種以上含む本発明の免疫化学試薬を試料及び
抗ＥＢＶと接触させ、その後、生成した免疫複合体の存
在を検出し、これから試料中のＥＢＶの存在を調べるこ
とができる。
プチドを１種以上含む本発明の免疫化学試薬を試料及び
抗ＥＢＶと接触させ、その後、生成した免疫複合体の存
在を検出し、これから試料中のＥＢＶの存在を調べるこ
とができる。
【０１１８】試料中ＥＢＶの特に適した検出方法は、標
識物質を備えた本発明のペプチドと（試料中に存在す
る）ＥＢＶ抗原との間の競合反応に基づき、ペプチド及
び抗原は固体支持体に結合したＥＢＶに対する抗体と競
合する。
識物質を備えた本発明のペプチドと（試料中に存在す
る）ＥＢＶ抗原との間の競合反応に基づき、ペプチド及
び抗原は固体支持体に結合したＥＢＶに対する抗体と競
合する。
【０１１９】本発明は更に、本発明の抗体を試料と接触
させた後に、生成した免疫複合体の存在を検出し、これ
が試料中のエプスタイン−バールウイルスの存在の尺度
となることを特徴とする試料中のエプスタイン−バール
ウイルスの検出方法を包含する。
させた後に、生成した免疫複合体の存在を検出し、これ
が試料中のエプスタイン−バールウイルスの存在の尺度
となることを特徴とする試料中のエプスタイン−バール
ウイルスの検出方法を包含する。
【０１２０】本発明の試験キットは、上述したような免
疫化学試薬を主成分として含んでいる。ＥＢＶ抗体検出
のためのサンドイッチ反応を実施する際に、試験キット
は例えば、固体支持体（例えばマイクロ試験ウェルの内
壁）に被覆された本発明のペプチド、及び本発明の標識
ペプチド又は標識抗抗体を含み得る。
疫化学試薬を主成分として含んでいる。ＥＢＶ抗体検出
のためのサンドイッチ反応を実施する際に、試験キット
は例えば、固体支持体（例えばマイクロ試験ウェルの内
壁）に被覆された本発明のペプチド、及び本発明の標識
ペプチド又は標識抗抗体を含み得る。
【０１２１】競合反応実施のために、試験キットは、固
体支持体に被覆された本発明のペプチド、及びＥＢＶに
対する標識抗体、好ましくは前記ペプチドに対するモノ
クローナル抗体を含み得る。
体支持体に被覆された本発明のペプチド、及びＥＢＶに
対する標識抗体、好ましくは前記ペプチドに対するモノ
クローナル抗体を含み得る。
【０１２２】凝集反応では、試験キットは、粒子又はゾ
ルに被覆された本発明のペプチドを含み得る免疫化学試
薬を包含する。
ルに被覆された本発明のペプチドを含み得る免疫化学試
薬を包含する。
【０１２３】試験キットの他の実施態様は例えば、固体
支持体に被覆されたＥＢＶに対する抗体上の結合部位に
対する検出すべきＥＢＶ抗原との競合反応で本発明の標
識ペプチドを免疫化学試薬として使用することである。
支持体に被覆されたＥＢＶに対する抗体上の結合部位に
対する検出すべきＥＢＶ抗原との競合反応で本発明の標
識ペプチドを免疫化学試薬として使用することである。
【０１２４】
【実施例】以下の実施例で本発明を更に詳しく説明す
る。
る。
【０１２５】実施例に記載のペプチドコードは、下記の
ように定義する。
ように定義する。
【０１２６】＃４９６（Ｐ４７−５４）：配列番号１ ＃４９７（Ｐ４７−５４）：配列番号２ ＃４９８（Ｐ４７−５４）：配列番号３ ＃４９９（Ｐ４７−５４）：配列番号４ ＃５００（Ｐ４７−５４）：配列番号５ ＃５０１（Ｐ４７−５４）：配列番号６ Ｇ−３４−Ｒ（Ｐ１３８）：配列番号７ Ｄ−２８−Ｓ（Ｐ１３８）：配列番号８ Ａ−２７−Ｇ（Ｐ１３８）：配列番号９ Ｇ−２１−Ｖ（Ｐ１３８）：配列番号１０実施例１ ：ＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４（ＢＭＲＦ
１）上の免疫反応性（ペプチド）ドメインの局在。
１）上の免疫反応性（ペプチド）ドメインの局在。
【０１２７】長さが１２アミノ酸（ＡＡ）で、完全ＢＭ
ＲＦ１読み取り枠のＡＡ配列の１１ＡＡが重複したペプ
チドを、最初にＧｅｉｊｓｅｎ等が記載したように
（Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，ＵＳＡ，８３（１９９４）ｐ．３
９９８−４００２）、化学的に活性化したピン上で自動
化固相ペプチド合成によって合成した。
ＲＦ１読み取り枠のＡＡ配列の１１ＡＡが重複したペプ
チドを、最初にＧｅｉｊｓｅｎ等が記載したように
（Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，ＵＳＡ，８３（１９９４）ｐ．３
９９８−４００２）、化学的に活性化したピン上で自動
化固相ペプチド合成によって合成した。
【０１２８】Ｍｉｄｄｅｌｄｏｒｐ及びＭｅｌｏｅｎが
記載する方法（Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈ． ２１
（１９８８）ｐ．１４７ー１５９）で、ＥＢＶ特異抗体
の免疫反応性を調べた。
記載する方法（Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈ． ２１
（１９８８）ｐ．１４７ー１５９）で、ＥＢＶ特異抗体
の免疫反応性を調べた。
【０１２９】活性ＥＢＶ感染した個体の４つの血清での
このようなＰＥＰＳＣＡＮ分析の結果を図１に示す。
このようなＰＥＰＳＣＡＮ分析の結果を図１に示す。
【０１３０】大半の血清が、タンパク質のＣ末端領域に
位置する領域（ドメイン）と反応性の抗体を含んでいた
が、タンパク質の他のドメインに対する抗体を更に有す
る個体もあることがこの図から判明し得る。
位置する領域（ドメイン）と反応性の抗体を含んでいた
が、タンパク質の他のドメインに対する抗体を更に有す
る個体もあることがこの図から判明し得る。
【０１３１】ＥＢＶ患者血清の別の試料では同様のデー
タが見出されたが、健康な対照の血清ではこのような反
応性は見出されなかった。
タが見出されたが、健康な対照の血清ではこのような反
応性は見出されなかった。
【０１３２】実施例２：ＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）Ｐ１３８
（ＢＡＬＦ２）上の免疫反応性（ペプチド）ドメインの
局在。
（ＢＡＬＦ２）上の免疫反応性（ペプチド）ドメインの
局在。
【０１３３】ＢＡＬＦ２の全読み取り枠に由来するペプ
チドを実施例１に記載のように合成して分析した。
チドを実施例１に記載のように合成して分析した。
【０１３４】１個のＥＢＶ患者血清の結果を図２に示
す。
す。
【０１３５】抗体反応性領域がタンパク質ＡＡ配列上の
複数の部位に見出され、大半がＡＡ４９０−６００及び
ＡＡ１０００−１１２８のＣ末端に局限されることがこ
の図から判明し得る。
複数の部位に見出され、大半がＡＡ４９０−６００及び
ＡＡ１０００−１１２８のＣ末端に局限されることがこ
の図から判明し得る。
【０１３６】ＥＢＶ患者の別の血清でも同様のデータが
見出された。
見出された。
【０１３７】実施例３：ヒト血清抗体との反応性の改善
のためのＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４由来の可溶性
合成ペプチドの使用。
のためのＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４由来の可溶性
合成ペプチドの使用。
【０１３８】標準的な固相法（（Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｃ
ｈｅｍ． Ｓｏｃ． ８５， ２１４９（１９６３）；
Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒ
ｅｓ．３５， １６１−２１４（１９９０））を用いて
特定のペプチド（配列表を参照されたい）を合成して、
複数のＰＥＰＳＣＡＮ反応性ドメインを組み合わせて単
一分子とした。これらのペプチドを、通常は被覆用緩衝
液中１μｇ／ｍｌで、９６ウェルミクロＥＬＩＳＡプレ
ートのウェル中で固相上に被覆し、未結合位置を被覆用
緩衝液中１％ウシ血清アルブミンでブロックした。
ｈｅｍ． Ｓｏｃ． ８５， ２１４９（１９６３）；
Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒ
ｅｓ．３５， １６１−２１４（１９９０））を用いて
特定のペプチド（配列表を参照されたい）を合成して、
複数のＰＥＰＳＣＡＮ反応性ドメインを組み合わせて単
一分子とした。これらのペプチドを、通常は被覆用緩衝
液中１μｇ／ｍｌで、９６ウェルミクロＥＬＩＳＡプレ
ートのウェル中で固相上に被覆し、未結合位置を被覆用
緩衝液中１％ウシ血清アルブミンでブロックした。
【０１３９】全ての場合で、ペプチドを０．１Ｍ炭酸塩
緩衝液（ｐＨ９．６）中で固相上に被覆した。
緩衝液（ｐＨ９．６）中で固相上に被覆した。
【０１４０】ウェルを０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含
む０．１Ｍリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）で洗浄した
後に、標準的な手順を用いてヒト血清の血清希釈液（通
常１：１００）で抗体反応性を分析した。
む０．１Ｍリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）で洗浄した
後に、標準的な手順を用いてヒト血清の血清希釈液（通
常１：１００）で抗体反応性を分析した。
【０１４１】このような分析の結果を図３に示す。
【０１４２】ペプチド＃４９９のＣ末端にシステイン残
基を導入し、ペプチド＃５００のＮ末端にシステイン残
基を導入してペプチド＃５０１（ペプチドの＃４９９と
＃５００とを組み合わせたもの）を構築して、これらの
ペプチドをジスルフィド結合で結合する。ペプチドの組
み合わせ又は結合については他の同様の技術（例えば標
準的な固相合成による）が公知である。標準的な固相合
成技術を使用する場合、２個のシステイン残基の導入は
不要であり、従ってこれら２個の残基をアミノ酸配列か
ら除去することができる（配列番号６；ＡＡ２０及び２
１）。
基を導入し、ペプチド＃５００のＮ末端にシステイン残
基を導入してペプチド＃５０１（ペプチドの＃４９９と
＃５００とを組み合わせたもの）を構築して、これらの
ペプチドをジスルフィド結合で結合する。ペプチドの組
み合わせ又は結合については他の同様の技術（例えば標
準的な固相合成による）が公知である。標準的な固相合
成技術を使用する場合、２個のシステイン残基の導入は
不要であり、従ってこれら２個の残基をアミノ酸配列か
ら除去することができる（配列番号６；ＡＡ２０及び２
１）。
【０１４３】ペプチドの＃５００及び＃５０１が、ＥＢ
Ｖ感染患者の血清との陽性抗ＥＡ（Ｄ）反応と、ＥＢＶ
に潜伏感染した（ＪＭ及び２１９）又はＥＢＶ陰性（Ｔ
Ｒ）の健康な対照ドナーの血清との陰性反応との間の最
良の識別を示していることがこの図から判明し得る。ペ
プチドの＃４９６及び＃４９７は、当業者によって抗体
反応性ＡＡ配列を含むことが判明している（Ｊ. Ｃｌ
ｉｎ． Ｌａｂ． Ａｎａｌ． １（１９８７）ｐ．１
４０−１４５）、Ｐ４７−５４ペプチドのＮ末端伸長で
ある基準ペプチド＃４９８と同様の性能を示した。
Ｖ感染患者の血清との陽性抗ＥＡ（Ｄ）反応と、ＥＢＶ
に潜伏感染した（ＪＭ及び２１９）又はＥＢＶ陰性（Ｔ
Ｒ）の健康な対照ドナーの血清との陰性反応との間の最
良の識別を示していることがこの図から判明し得る。ペ
プチドの＃４９６及び＃４９７は、当業者によって抗体
反応性ＡＡ配列を含むことが判明している（Ｊ. Ｃｌ
ｉｎ． Ｌａｂ． Ａｎａｌ． １（１９８７）ｐ．１
４０−１４５）、Ｐ４７−５４ペプチドのＮ末端伸長で
ある基準ペプチド＃４９８と同様の性能を示した。
【０１４４】従って、特にペプチドの＃５００及び＃５
０１は、抗ＥＡ（Ｄ）抗体検出のために改善された反応
性を示す新たな試薬となる。
０１は、抗ＥＡ（Ｄ）抗体検出のために改善された反応
性を示す新たな試薬となる。
【０１４５】実施例４：ヒト血清抗体との反応性を改善
するためのＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ１３８由来の合成ペ
プチドの使用。
するためのＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ１３８由来の合成ペ
プチドの使用。
【０１４６】特定の合成ペプチド試薬を実施例３に記載
した同様の方法で製造してＰ１３８（配列表を参照され
たい）の免疫反応性ドメインを含ませ、これらを標準的
な手順を用いてＥＬＩＳＡで試験した。
した同様の方法で製造してＰ１３８（配列表を参照され
たい）の免疫反応性ドメインを含ませ、これらを標準的
な手順を用いてＥＬＩＳＡで試験した。
【０１４７】いずれの場合も、炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．
６）を用いてペプチドを固相上に被覆し、血清は１：１
００の希釈度で試験した。
６）を用いてペプチドを固相上に被覆し、血清は１：１
００の希釈度で試験した。
【０１４８】図４ＡはペプチドをｐＨ９．６で固相に被
覆した実験の結果を示し、図４ＢはｐＨ９．６ではなく
ｐＨ７．２で被覆すると、これらのペプチドの一つの反
応性が改善されることを示している。
覆した実験の結果を示し、図４ＢはｐＨ９．６ではなく
ｐＨ７．２で被覆すると、これらのペプチドの一つの反
応性が改善されることを示している。
【０１４９】これらの研究から、（被覆条件に依存し
て）ＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ１３８由来の特定ペプチド
を使用して、とりわけＥＢＶ患者の血清で抗ＥＡ（Ｄ）
抗体を検出できることが判明し得る。ＥＢＶに潜伏感染
した健康な対照の血清は、ＥＢＶ血清陰性ドナーと同様
の陰性反応を示す。
て）ＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ１３８由来の特定ペプチド
を使用して、とりわけＥＢＶ患者の血清で抗ＥＡ（Ｄ）
抗体を検出できることが判明し得る。ＥＢＶに潜伏感染
した健康な対照の血清は、ＥＢＶ血清陰性ドナーと同様
の陰性反応を示す。
【０１５０】実施例５：感度改善のための単一アッセイ
での選択ペプチドの組み合わせ 特定試薬の付加的な利点は、単一アッセイに種々のＥＡ
（Ｄ）タンパク質のペプチドを組み合わて、抗ＥＡ
（Ｄ）抗体検出の総感度を改善できることである。
での選択ペプチドの組み合わせ 特定試薬の付加的な利点は、単一アッセイに種々のＥＡ
（Ｄ）タンパク質のペプチドを組み合わて、抗ＥＡ
（Ｄ）抗体検出の総感度を改善できることである。
【０１５１】これは、単独で又は１：１で組み合わせて
同一ウェル内に被覆したペプチド＃５０１（Ｐ４７−５
４；配列番号６）及びＧ−３４−Ｒ（Ｐ１３８；配列番
号７）に対する無作為の単核細胞症患者の血清ＩｇＧ反
応性を示した図５で分かる。
同一ウェル内に被覆したペプチド＃５０１（Ｐ４７−５
４；配列番号６）及びＧ−３４−Ｒ（Ｐ１３８；配列番
号７）に対する無作為の単核細胞症患者の血清ＩｇＧ反
応性を示した図５で分かる。
【０１５２】更には、図６−図７には単一アッセイでの
特定ペプチドの組み合わせが明示されている（実施例３
−４による臨床環境でのＩｇＭ、ＩｇＧ及びＩｇＡ抗Ｅ
Ａ（Ｄ）の検出は図７Ａ−Ｃに明示されている）。
特定ペプチドの組み合わせが明示されている（実施例３
−４による臨床環境でのＩｇＭ、ＩｇＧ及びＩｇＡ抗Ｅ
Ａ（Ｄ）の検出は図７Ａ−Ｃに明示されている）。
【０１５３】特定のペプチドを組み合わせると抗ＥＡ
（Ｄ）抗体の検出感度が増したことがこれらの図面から
明白である。
（Ｄ）抗体の検出感度が増したことがこれらの図面から
明白である。
【０１５４】実施例６：モノクローナル抗体ＥＢＶ．Ｏ
Ｔ１３Ｂ、ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄ、ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｎ及
びＥＢＶ．ＯＴ１４Ｅのイムノブロット分析。
Ｔ１３Ｂ、ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄ、ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｎ及
びＥＢＶ．ＯＴ１４Ｅのイムノブロット分析。
【０１５５】還元条件下で変性ＳＤＳ−ＰＡＧＥによっ
て、数個の核抽出物（ウイルス構造タンパク質の発現の
ために誘導されたＨＨ５１４細胞の核抽出物（ＶＣ
Ａ）、ウイルスＤＮＡ複製をＰＡＡにより阻止してＥＡ
タンパク質の発現のために誘導されたＨＨ５１４細胞の
核抽出物（ＥＡ）、潜伏期ＥＢＶ遺伝子のみを発現する
Ｘ５０／７細胞の核抽出物（Ｘ５０／７）及びＥＢＶ陰
性バーキットリンパ腫細胞系ＢＪＡＢの核抽出物（ＢＪ
ＡＢ））を分離し、当業界で公知の標準的な手順でニト
ロセルロースシートに移した。
て、数個の核抽出物（ウイルス構造タンパク質の発現の
ために誘導されたＨＨ５１４細胞の核抽出物（ＶＣ
Ａ）、ウイルスＤＮＡ複製をＰＡＡにより阻止してＥＡ
タンパク質の発現のために誘導されたＨＨ５１４細胞の
核抽出物（ＥＡ）、潜伏期ＥＢＶ遺伝子のみを発現する
Ｘ５０／７細胞の核抽出物（Ｘ５０／７）及びＥＢＶ陰
性バーキットリンパ腫細胞系ＢＪＡＢの核抽出物（ＢＪ
ＡＢ））を分離し、当業界で公知の標準的な手順でニト
ロセルロースシートに移した。
【０１５６】このイムノブロットから、上述のＥＢＶ核
抽出物で、モノクローナル抗体ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｂ（図
９Ｂ）、ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄ（図９Ｄ）、ＥＢＶ．ＯＴ
１３Ｎ（図８Ｂ）及びＥＢＶ．ＯＴ１４Ｅ（図８Ｂ）を
用いてイムノブロット分析を実施した。
抽出物で、モノクローナル抗体ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｂ（図
９Ｂ）、ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄ（図９Ｄ）、ＥＢＶ．ＯＴ
１３Ｎ（図８Ｂ）及びＥＢＶ．ＯＴ１４Ｅ（図８Ｂ）を
用いてイムノブロット分析を実施した。
【０１５７】
配列番号：１ 配列の長さ：２３アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列：
【０１５８】
【表１】
【０１５９】配列番号：２ 配列の長さ：２８アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列：
【０１６０】
【表２】
【０１６１】配列番号：３ 配列の長さ：１３アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列：
【０１６２】
【表３】
【０１６３】配列番号：４ 配列の長さ：１９アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列：
【０１６４】
【表４】
【０１６５】配列番号：５ 配列の長さ：２６アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列：
【０１６６】
【表５】
【０１６７】配列番号：６ 配列の長さ：４７アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列の特徴： 特徴を表す記号：Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ−ｂｏｎｄ 存在位置：２０．．２１ 他の情報：／注：「２個の別個のペプチドを結合するた
めに２個のシステイン残基（ＡＡ２０及びＡＡ２１）が
導入されている」 配列：
めに２個のシステイン残基（ＡＡ２０及びＡＡ２１）が
導入されている」 配列：
【０１６８】
【表６】
【０１６９】配列番号：７ 配列の長さ：３４アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列：
【０１７０】
【表７】
【０１７１】配列番号：８ 配列の長さ：２８アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列：
【０１７２】
【表８】
【０１７３】配列番号：９ 配列の長さ：２７アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列：
【０１７４】
【表９】
【０１７５】配列番号：１０ 配列の長さ：２１アミノ酸 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ 配列：
【０１７６】
【表１０】
【図１】４人の活性ＥＢＶ感染患者の血清中ＩｇＧ抗体
と、１１アミノ酸が重複してＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ４
７−５４（ＢＭＲＦ１）の完全ＡＡ配列を示す個々の１
２量体ペプチドとの結合の同定。
と、１１アミノ酸が重複してＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ４
７−５４（ＢＭＲＦ１）の完全ＡＡ配列を示す個々の１
２量体ペプチドとの結合の同定。
【図２】１人の活性ＥＢＶ感染患者の血清中ＩｇＧ抗体
と、１１アミノ酸が重複してＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ１
３８（ＢＡＬＦ２）の完全ＡＡ配列を示す個々の１２量
体ペプチドとの結合の同定。
と、１１アミノ酸が重複してＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ） Ｐ１
３８（ＢＡＬＦ２）の完全ＡＡ配列を示す個々の１２量
体ペプチドとの結合の同定。
【図３】ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４の免疫反応性ドメイン
の組み合わせを示す個々の合成ペプチドに対する（Ｉｇ
Ｇ）抗体の検出。ペプチド配列は配列表に記載する。 ＪＭ及び２１９：健康で血清陽性のＥＢＶ対照ドナーの
血清。 ＴＲ：健康で血清陰性のＥＢＶ対照ドナーの血清。 ＩＭ：単核細胞症患者の血清。 ＲＲ：重症慢性ＥＢＶ感染患者の血清。
の組み合わせを示す個々の合成ペプチドに対する（Ｉｇ
Ｇ）抗体の検出。ペプチド配列は配列表に記載する。 ＪＭ及び２１９：健康で血清陽性のＥＢＶ対照ドナーの
血清。 ＴＲ：健康で血清陰性のＥＢＶ対照ドナーの血清。 ＩＭ：単核細胞症患者の血清。 ＲＲ：重症慢性ＥＢＶ感染患者の血清。
【図４Ａ】ＥＡ（Ｄ）Ｐ１３８の免疫反応性ドメインの
組み合わせを示す個々の合成ペプチドに対する（Ｉｇ
Ｇ）抗体の検出。ペプチド配列は同定表に記載し、上述
したようなＰ１３８ ＡＡ位置を示す。 ＪＭ及びＱＣＤ２１９：健康で血清陽性のＥＢＶ対照ド
ナーの血清。 ＴＲ：健康で血清陰性のＥＢＶ対照ドナーの血清。 ＩＭ：単核細胞症患者の血清。 ＲＲ：重症慢性ＥＢＶ感染患者の血清。
組み合わせを示す個々の合成ペプチドに対する（Ｉｇ
Ｇ）抗体の検出。ペプチド配列は同定表に記載し、上述
したようなＰ１３８ ＡＡ位置を示す。 ＪＭ及びＱＣＤ２１９：健康で血清陽性のＥＢＶ対照ド
ナーの血清。 ＴＲ：健康で血清陰性のＥＢＶ対照ドナーの血清。 ＩＭ：単核細胞症患者の血清。 ＲＲ：重症慢性ＥＢＶ感染患者の血清。
【図４Ｂ】ｐＨ９．６（０．１Ｍ炭酸塩緩衝液）又はｐ
Ｈ７．２（０．１Ｍリン酸塩緩衝液）で被覆したＰ１３
８由来ペプチドＧ−２１−Ｖ（配列番号１０）及びＧ−
３４−Ｒ（配列番号７）を用いて行った図４Ａと同一の
分析。
Ｈ７．２（０．１Ｍリン酸塩緩衝液）で被覆したＰ１３
８由来ペプチドＧ−２１−Ｖ（配列番号１０）及びＧ−
３４−Ｒ（配列番号７）を用いて行った図４Ａと同一の
分析。
【図５】ＥＡ（Ｄ）複合体又はそれを組み合わせたもの
の個々の成分に対する（ＩｇＧ）抗体の検出。この図で
は、ペプチド＃５０１（Ｐ４７−５４；配列番号６）及
びＧ−３４−Ｒ（Ｐ１３８；配列番号７）を別個に又は
１：１で組み合わせて固相上に直接被覆した。無作為の
３８人の単核細胞症患者の血清を１：１００の希釈度で
使用した。
の個々の成分に対する（ＩｇＧ）抗体の検出。この図で
は、ペプチド＃５０１（Ｐ４７−５４；配列番号６）及
びＧ−３４−Ｒ（Ｐ１３８；配列番号７）を別個に又は
１：１で組み合わせて固相上に直接被覆した。無作為の
３８人の単核細胞症患者の血清を１：１００の希釈度で
使用した。
【図６Ａ】香港（Ａ）及びＵＳＡ（Ｂ）の健康な血液ド
ナー集団で、ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４及びＰ１３８（即
ち＃５００（配列番号５）及びＧ−３４−Ｒ（配列番号
７））由来の特定ペプチドを別個に又は１：１で組み合
わせて用いたＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）に対するＩｇＧ抗体の
検出。
ナー集団で、ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４及びＰ１３８（即
ち＃５００（配列番号５）及びＧ−３４−Ｒ（配列番号
７））由来の特定ペプチドを別個に又は１：１で組み合
わせて用いたＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）に対するＩｇＧ抗体の
検出。
【図６Ｂ】香港（Ａ）及びＵＳＡ（Ｂ）の健康な血液ド
ナー集団で、ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４及びＰ１３８（即
ち＃５００（配列番号５）及びＧ−３４−Ｒ（配列番号
７））由来の特定ペプチドを別個に又は１：１で組み合
わせて用いたＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）に対するＩｇＧ抗体の
検出。
ナー集団で、ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４及びＰ１３８（即
ち＃５００（配列番号５）及びＧ−３４−Ｒ（配列番号
７））由来の特定ペプチドを別個に又は１：１で組み合
わせて用いたＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）に対するＩｇＧ抗体の
検出。
【図７Ａ】別個に固相上に被覆した又は１：１で組み合
わせて同一ウェルに被覆した特定ペプチド（即ちＰ４７
−５４の場合は＃５０１（配列番号６）及びＰ１３８の
場合はＧ−３４−Ｒ（配列番号７））を用いた３８人の
単核細胞症患者の血清中のＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−
５４及びＰ１３８に対するＩｇＭ抗体の検出。
わせて同一ウェルに被覆した特定ペプチド（即ちＰ４７
−５４の場合は＃５０１（配列番号６）及びＰ１３８の
場合はＧ−３４−Ｒ（配列番号７））を用いた３８人の
単核細胞症患者の血清中のＥＢＶ−ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−
５４及びＰ１３８に対するＩｇＭ抗体の検出。
【図７Ｂ】前記試薬を用いた３８人の単核細胞症患者の
血清中のＩｇＧ抗体の検出。
血清中のＩｇＧ抗体の検出。
【図７Ｃ】前記試薬を用いた３８人の上咽頭癌患者の血
清中のＩｇＡ抗体の検出。
清中のＩｇＡ抗体の検出。
【図８Ａ】重複する１２量体ペプチドによるＰＥＰＳＣ
ＡＮ技術を用いた、ＢＭＲＦ１によってコードされるＥ
ＢＶ ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４上でのＥＢＶ．ＯＴ１３
Ｎ及びＥＢＶ．ＯＴ１４Ｅの結合ドメインの同定。
ＡＮ技術を用いた、ＢＭＲＦ１によってコードされるＥ
ＢＶ ＥＡ（Ｄ）Ｐ４７−５４上でのＥＢＶ．ＯＴ１３
Ｎ及びＥＢＶ．ＯＴ１４Ｅの結合ドメインの同定。
【図８Ｂ】ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｎ及びＥＢＶ．ＯＴ１４Ｅ
によるイムノブロット染色。 Ｍ＝分子量マーカー。 ＶＣＡ＝ウイルス構造タンパク質の発現のために誘導さ
れたＨＨ５１４細胞の核抽出物。 ＥＡ＝ウイルスＤＮＡ複製をＰＡＡで阻止してＥＡタン
パク質の発現のために誘導されたＨＨ５１４細胞の核抽
出物。 Ｘ５０／７＝潜伏期ＥＢＶ遺伝子のみを発現するＸ５０
／７細胞の核抽出物。 ＢＪＡＢ＝ＥＢＶ陰性バーキットリンパ腫細胞系ＢＪＡ
Ｂの核抽出物。
によるイムノブロット染色。 Ｍ＝分子量マーカー。 ＶＣＡ＝ウイルス構造タンパク質の発現のために誘導さ
れたＨＨ５１４細胞の核抽出物。 ＥＡ＝ウイルスＤＮＡ複製をＰＡＡで阻止してＥＡタン
パク質の発現のために誘導されたＨＨ５１４細胞の核抽
出物。 Ｘ５０／７＝潜伏期ＥＢＶ遺伝子のみを発現するＸ５０
／７細胞の核抽出物。 ＢＪＡＢ＝ＥＢＶ陰性バーキットリンパ腫細胞系ＢＪＡ
Ｂの核抽出物。
【図９Ａ】重複する１２量体ペプチドによるＰＥＰＳＣ
ＡＮ技術を用いた、ＢＡＬＦ２によってコードされるＥ
ＢＶ ＥＡ（Ｄ）Ｐ１３８上でのＥＢＶ．ＯＴ１３Ｂの
結合ドメインの同定。
ＡＮ技術を用いた、ＢＡＬＦ２によってコードされるＥ
ＢＶ ＥＡ（Ｄ）Ｐ１３８上でのＥＢＶ．ＯＴ１３Ｂの
結合ドメインの同定。
【図９Ｂ】ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｂによるイムノブロット染
色。 Ｍ＝分子量マーカー。 ＶＣＡ＝ウイルス構造タンパク質の発現のために誘導さ
れたＨＨ５１４細胞の核抽出物。 ＥＡ＝ウイルスＤＮＡ複製をＰＡＡで阻止してＥＡタン
パク質の発現のために誘導されたＨＨ５１４細胞の核抽
出物。 Ｘ５０／７＝潜伏期ＥＢＶ遺伝子のみを発現するＸ５０
／７細胞の核抽出物。 ＢＪＡＢ＝ＥＢＶ陰性バーキットリンパ腫細胞系ＢＪＡ
Ｂの核抽出物。
色。 Ｍ＝分子量マーカー。 ＶＣＡ＝ウイルス構造タンパク質の発現のために誘導さ
れたＨＨ５１４細胞の核抽出物。 ＥＡ＝ウイルスＤＮＡ複製をＰＡＡで阻止してＥＡタン
パク質の発現のために誘導されたＨＨ５１４細胞の核抽
出物。 Ｘ５０／７＝潜伏期ＥＢＶ遺伝子のみを発現するＸ５０
／７細胞の核抽出物。 ＢＪＡＢ＝ＥＢＶ陰性バーキットリンパ腫細胞系ＢＪＡ
Ｂの核抽出物。
【図９Ｃ】重複する１２量体ペプチドによるＰＥＰＳＣ
ＡＮ技術を用いた、ＢＡＬＦ２によってコードされるＥ
ＢＶ ＥＡ（Ｄ）Ｐ１３８上でのＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄの
結合ドメインの同定。
ＡＮ技術を用いた、ＢＡＬＦ２によってコードされるＥ
ＢＶ ＥＡ（Ｄ）Ｐ１３８上でのＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄの
結合ドメインの同定。
【図９Ｄ】ＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄによるイムノブロット染
色。 Ｍ＝分子量マーカー。 ＶＣＡ＝ウイルス構造タンパク質の発現のために誘導さ
れたＨＨ５１４細胞の核抽出物。 ＥＡ＝ウイルスＤＮＡ複製をＰＡＡで阻止してＥＡタン
パク質の発現のために誘導されたＨＨ５１４細胞の核抽
出物。 Ｘ５０／７＝潜伏期ＥＢＶ遺伝子のみを発現するＸ５０
／７細胞の核抽出物。 ＢＪＡＢ＝ＥＢＶ陰性バーキットリンパ腫細胞系ＢＪＡ
Ｂの核抽出物。
色。 Ｍ＝分子量マーカー。 ＶＣＡ＝ウイルス構造タンパク質の発現のために誘導さ
れたＨＨ５１４細胞の核抽出物。 ＥＡ＝ウイルスＤＮＡ複製をＰＡＡで阻止してＥＡタン
パク質の発現のために誘導されたＨＨ５１４細胞の核抽
出物。 Ｘ５０／７＝潜伏期ＥＢＶ遺伝子のみを発現するＸ５０
／７細胞の核抽出物。 ＢＪＡＢ＝ＥＢＶ陰性バーキットリンパ腫細胞系ＢＪＡ
Ｂの核抽出物。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｐ 21/08 33/569 Ｌ Ｇ０１Ｎ 33/53 33/577 Ｂ 33/569 9281−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 33/577 9162−4Ｂ 15/00 ＺＮＡＡ //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (19)
- 【請求項１】 エプスタイン−バールウイルスに対する
抗体と免疫化学的に反応する、ＥＡ−ｐ４７−５４タン
パク質の少なくとも一部を含むペプチドであって、配列
番号１、２、４または５に示したアミノ酸配列の少なく
とも一部を含むことを特徴とするペプチド。 - 【請求項２】 エプスタイン−バールウイルスに対する
抗体と免疫化学的に反応する、ＥＡ−ｐ４７−５４タン
パク質の少なくとも一部を含むペプチドであって、配列
番号５に示したアミノ酸配列の少なくとも一部と連結さ
れた、配列番号４に示したアミノ酸配列の少なくとも一
部を含むことを特徴とするペプチド。 - 【請求項３】 配列番号６に示したアミノ酸配列の少な
くとも一部を含むことを特徴とする請求項２に記載のペ
プチド。 - 【請求項４】 エプスタイン−バールウイルスに対する
抗体と免疫化学的に反応する、ＥＡ−ｐ１３８タンパク
質の少なくとも一部を含むペプチドであって、配列番号
７、８、９または１０に示したアミノ酸配列の少なくと
も一部を含むことを特徴とするペプチド。 - 【請求項５】 請求項１から４のいずれか１項に記載の
ペプチドをコードする核酸配列。 - 【請求項６】 請求項５に記載の核酸配列を含む組み換
えベクター分子。 - 【請求項７】 請求項６に記載の組み換えベクターで形
質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞。 - 【請求項８】 請求項１から４のいずれか１項に記載の
ペプチドに対する抗体。 - 【請求項９】 モノクローナル抗体であることを特徴と
する請求項８に記載の抗体。 - 【請求項１０】 ＥＢＶ−ＥＡ ｐ４７−５４タンパク
質のエピトープに結合するモノクローナル抗体であっ
て、前記エピトープはｔｈｅ ＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｌ
ｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕ
ｌｔｒｕｅ（ＥＣＡＣＣ）， Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ
（ＵＫ）に受託番号第９５０５１６２２号及び同第９５
０５１６２１号の下にそれぞれ寄託された、ハイブリド
ーマ細胞系によって産生されるモノクローナル抗体ＥＢ
Ｖ．ＯＴ１４ＥまたはＥＢＶ．ＯＴ１３Ｎによって認識
されることを特徴とするモノクローナル抗体。 - 【請求項１１】 ＥＢＶ−ＥＡ ｐ１３８タンパク質の
エピトープに結合するモノクローナル抗体であって、前
記エピトープはｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔ
ｒｕｅ（ＥＣＡＣＣ）， Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ（Ｕ
Ｋ）に受託番号第９５０５１６１９号及び同第９５０５
１６２０号の下にそれぞれ寄託された、ハイブリドーマ
細胞系によって産生されるモノクローナル抗体ＥＢＶ．
ＯＴ１３ＢまたはＥＢＶ．ＯＴ１３Ｄによって認識され
ることを特徴とするモノクローナル抗体。 - 【請求項１２】 請求項１０または１１に記載のモノク
ローナル抗体を産生し得る不死化細胞系。 - 【請求項１３】 ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔ
ｒｕｅ（ＥＣＡＣＣ）， Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ（Ｕ
Ｋ）に受託番号第９５０５１６１９号、同第９５０５１
６２０号、同第９５０５１６２１号または同第９５０５
１６２２号の下に寄託された不死化細胞系。 - 【請求項１４】 請求項１から４に記載のペプチドのう
ちの１種以上を含有する免疫化学試薬。 - 【請求項１５】 請求項８から１１のいずれか１項に記
載の抗体を含有する免疫化学試薬。 - 【請求項１６】 試料中のエプスタイン−バールウイル
スを検出する方法であって、試料を請求項８から１１の
いずれか１項に記載の抗体と接触させ、その後形成され
た免疫複合体の存在を検出することを含む方法。 - 【請求項１７】 試験液体中の抗エプスタイン−バール
ウイルス抗体を検出する方法であって、請求項１４に記
載の免疫化学試薬を試験液体と接触させ、試験液体中に
形成された免疫複合体の存在を検出することを特徴とす
る方法。 - 【請求項１８】 試験液体中のエプスタイン−バールウ
イルスを検出する方法であって、請求項１４に記載の免
疫化学試薬を試験液体と接触させ、これに抗エプスタイ
ン−バールウイルス抗体を接触させ、形成された免疫複
合体の存在を検出することを特徴とする方法。 - 【請求項１９】 請求項１６から１８のいずれか１項に
記載の方法を実施するための試験キット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP95201486 | 1995-06-06 | ||
| NL95201486.8 | 1995-06-06 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2008060578A Division JP4612071B2 (ja) | 1995-06-06 | 2008-03-11 | エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0925295A true JPH0925295A (ja) | 1997-01-28 |
| JP4319703B2 JP4319703B2 (ja) | 2009-08-26 |
Family
ID=8220358
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14453796A Expired - Lifetime JP4319703B2 (ja) | 1995-06-06 | 1996-06-06 | エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 |
| JP2008060578A Expired - Lifetime JP4612071B2 (ja) | 1995-06-06 | 2008-03-11 | エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2008060578A Expired - Lifetime JP4612071B2 (ja) | 1995-06-06 | 2008-03-11 | エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5843405A (ja) |
| EP (1) | EP0747481B1 (ja) |
| JP (2) | JP4319703B2 (ja) |
| KR (1) | KR100523972B1 (ja) |
| AT (1) | ATE211172T1 (ja) |
| AU (1) | AU707301B2 (ja) |
| CA (1) | CA2178057C (ja) |
| DE (1) | DE69618080T2 (ja) |
| DK (1) | DK0747481T3 (ja) |
| ES (1) | ES2170195T3 (ja) |
| HK (1) | HK1001164A1 (ja) |
| PT (1) | PT747481E (ja) |
| ZA (1) | ZA964683B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005060314A (ja) * | 2003-08-13 | 2005-03-10 | Masao Tanihara | 化粧料 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2824912B1 (fr) * | 2001-05-18 | 2004-10-29 | Jacques Gregoire | Dispositif de kit elisa, base sur un antigene : proteines m dbp, du virus ebv, particulierement destine au diagnostic serologique du cancer npc, et le procede de preparation de cette proteine |
| JP5112076B2 (ja) | 2004-11-15 | 2013-01-09 | バイオセンス・ウエブスター・インコーポレーテツド | 微細加工温度センサを備えたカテーテル |
| EP2101177A1 (en) * | 2008-03-10 | 2009-09-16 | Universite Joseph Fourier | Use of synthetic peptide derived from zebra protein for the in vitro diagnosis of the epstein-barr virus (EBV) reactivation |
| WO2013088114A1 (en) | 2011-12-12 | 2013-06-20 | Cell Medica Limited | Process of expanding t cells |
| GB201121308D0 (en) | 2011-12-12 | 2012-01-25 | Cell Medica Ltd | Process |
| DK3591047T3 (da) | 2012-02-09 | 2022-10-24 | Baylor College Medicine | Peptidblandinger til generering af multivirale CTL¿er med bred specificitet |
| JP6999941B2 (ja) | 2015-09-18 | 2022-02-10 | ベイラー カレッジ オブ メディスン | 病原体からの免疫原性抗原同定および臨床的有効性との相関 |
| US10772914B1 (en) * | 2019-04-18 | 2020-09-15 | Baylor College Of Medicine | EBV-specific immune cells |
| CN111574621B (zh) * | 2020-04-30 | 2022-03-29 | 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） | 一种中和eb病毒的单克隆抗体及其应用 |
| CN111690056B (zh) * | 2020-04-30 | 2021-12-21 | 清华大学 | 一种中和eb病毒的单克隆抗体及其应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61257188A (ja) * | 1984-08-23 | 1986-11-14 | ハンス ヨツト ヴオルフ | Ｅｂｖゲノムのｄｎａ配列、組換えｄｎａ分子、ならびにｅｂｖ関連抗原および該抗原を含有する診断用組成物および製剤組成物の製造法 |
| DE3583564D1 (de) * | 1984-08-23 | 1991-08-29 | Hans Joachim Wolf | Dna-sequenzen des ebv-genoms, rekombinante dna-molekuele, verfahren zur herstellung von ebv-verwandten antigenen sowie diagnostische zusammensetzungen und pharmazeutische zusammensetzungen, die die genannten antigene enthalten. |
| US5256768A (en) * | 1985-12-13 | 1993-10-26 | The Johns Hopkins University | Expression of antigenic Epstein-Barr virus polypeptides in bacteria and their use in diagnostics |
| US4761470A (en) * | 1985-12-16 | 1988-08-02 | Merck & Co., Inc. | Immunogenic synthetic peptide capable of eliciting herpes simplex virus neutralizing antibody |
| US5087557A (en) * | 1986-06-23 | 1992-02-11 | Genetic Systems Corporation | Human monoclonal antibody to lymphadenopathy-associated virus |
| US4879213A (en) * | 1986-12-05 | 1989-11-07 | Scripps Clinic And Research Foundation | Synthetic polypeptides and antibodies related to Epstein-Barr virus early antigen-diffuse |
-
1996
- 1996-05-28 PT PT96201457T patent/PT747481E/pt unknown
- 1996-05-28 ES ES96201457T patent/ES2170195T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-28 DK DK96201457T patent/DK0747481T3/da active
- 1996-05-28 AT AT96201457T patent/ATE211172T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-05-28 DE DE69618080T patent/DE69618080T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-28 EP EP96201457A patent/EP0747481B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-03 CA CA2178057A patent/CA2178057C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 KR KR1019960019978A patent/KR100523972B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-06-05 ZA ZA964683A patent/ZA964683B/xx unknown
- 1996-06-06 JP JP14453796A patent/JP4319703B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-06 AU AU54793/96A patent/AU707301B2/en not_active Expired
- 1996-06-06 US US08/660,789 patent/US5843405A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-01-05 HK HK98100040A patent/HK1001164A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-05-07 US US09/074,114 patent/US6143865A/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-03-11 JP JP2008060578A patent/JP4612071B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005060314A (ja) * | 2003-08-13 | 2005-03-10 | Masao Tanihara | 化粧料 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2008188017A (ja) | 2008-08-21 |
| DE69618080T2 (de) | 2002-06-13 |
| DE69618080D1 (de) | 2002-01-31 |
| US5843405A (en) | 1998-12-01 |
| US6143865A (en) | 2000-11-07 |
| HK1001164A1 (en) | 1998-05-29 |
| ZA964683B (en) | 1997-01-07 |
| JP4319703B2 (ja) | 2009-08-26 |
| PT747481E (pt) | 2002-05-31 |
| EP0747481B1 (en) | 2001-12-19 |
| AU5479396A (en) | 1996-12-19 |
| CA2178057C (en) | 2010-08-03 |
| ES2170195T3 (es) | 2002-08-01 |
| AU707301B2 (en) | 1999-07-08 |
| ATE211172T1 (de) | 2002-01-15 |
| CA2178057A1 (en) | 1996-12-07 |
| KR100523972B1 (ko) | 2006-04-14 |
| DK0747481T3 (da) | 2002-04-08 |
| JP4612071B2 (ja) | 2011-01-12 |
| EP0747481A1 (en) | 1996-12-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4612071B2 (ja) | エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 | |
| AU666920B2 (en) | Peptides and nucleic acid sequences related to the Epstein Barr virus | |
| JP4957974B2 (ja) | エプスタイン・バールウイルスのペプチド及びこれらのペプチドに対する抗体 | |
| AU735981B2 (en) | Peptide reagent for the detection of human cytomegalovirus (CMV) | |
| US6365717B1 (en) | Peptides and nucleic acid sequences related to the Epstein Barr virus | |
| CA2259967C (en) | Peptide reagent for the detection of human cytomegalovirus (cmv) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060718 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20061011 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20061016 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070118 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070911 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20071204 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20071207 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080311 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080610 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20080903 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20080908 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081205 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090519 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090529 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120605 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120605 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130605 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130605 Year of fee payment: 4 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130605 Year of fee payment: 4 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |