JP2008188017A - エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明は、エプスタイン−バールウイルス(EBV)に対する抗体と免疫化学的に反応するペプチド、該ペプチドに対する(モノクローナル)抗体、及びモノクローナル抗体を産生し得る細胞系に係わる。本発明は更に、EBVまたは抗EBV抗体を検出する免疫学的な試薬及び方法にも係わる。
【選択図】 図3
Description
―EBVゲノムは線状2本鎖DNA分子(172,000塩基対)から成る。
―ビリオンは、正二十面体キャプシドによって囲繞されたコア(タンパク質及びDNA)と、キャプシドを包囲する膜エンベロープとから成る。正二十面体キャプシドは六量体及び五量体キャプソメアによって構成されている。膜エンベロープは、その外表面にスパイクを具えたタンパク質/脂質二重層膜から成る。キャプシドシェルとエンベロープとの間隙は、テグメントと呼称される非晶質タンパク質で満たされている。
―あらゆるヘルペスウイルス同様、EBVもその宿主において、一次感染後終生にわたる潜伏感染を確立し得る。このような潜伏期はウイルスとヒト宿主との、宿主の免疫系によって制御された完全なバランスを表わすものである。
A.潜伏状態の間に発現される抗原群(EBNA及びLMP)。
B.ゲノム活性化、及びウイルス複製の初期誘導の原因となる抗原群(IEA)。
C.IEA遺伝子産物によって誘導される、ウイルスDNAの複製に必要な抗原群で、そのほとんどがウイルス酵素である抗原群(EA)。
D.ウイルス粒子の構造構成要素であり、ウイルス複製サイクル後期においてウイルスDNA合成開始後に発現される抗原群(VCA)。
E.感染細胞の細胞膜において発現される抗原群(MA)。
EBV初期抗原(EA)はウイルスDNA合成開始前のEBV産生細胞において発現され、そのような細胞をウイルスDNAポリメラーゼの阻害剤(例えばホスホノ酢酸)で処理した場合に特異的に研究可能である。あるいは他の場合には、EAはEBVに頓挫感染した細胞や、IUdRもしくはBUdR、またはTPA及びブチレートなどの化学薬剤で活性化された、EBV産生体でないリンパ芽球様(lymphoblastoid)細胞(例えばRaji細胞)において検出され得る。
a) 遊離カルボキシル基を有し、その他の反応性基は保護されている化合物(アミノ酸、ペプチド)を、遊離アミノ基を有し、その他の反応性基は保護されている化合物(アミノ酸、ペプチド)と、縮合剤存在下に縮合させるか、または
b) 活性化されたカルボキシル基を有し、その他の反応性基は遊離であるか、または保護されている化合物(アミノ酸、ペプチド)を、遊離アミノ基を有し、その他の反応性基は遊離であるか、または保護されている化合物(アミノ酸、ペプチド)と縮合させる
ことによって実施し得る。
以下の実施例で本発明を更に詳しく説明する。
#496(P47−54):配列番号1
#497(P47−54):配列番号2
#498(P47−54):配列番号3
#499(P47−54):配列番号4
#500(P47−54):配列番号5
#501(P47−54):配列番号6
G−34−R(P138):配列番号7
D−28−S(P138):配列番号8
A−27−G(P138):配列番号9
G−21−V(P138):配列番号10
標準的な固相法((J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149(1963);Int. J. Peptide Protein Res. 35, 161−214(1990))を用いて特定のペプチド(配列表を参照されたい)を合成して、複数のPEPSCAN反応性ドメインを組み合わせて単一分子とした。これらのペプチドを、通常は被覆用緩衝液中1μg/mlで、96ウェルミクロELISAプレートのウェル中で固相上に被覆し、未結合位置を被覆用緩衝液中1%ウシ血清アルブミンでブロックした。
特定試薬の付加的な利点は、単一アッセイに種々のEA(D)タンパク質のペプチドを組み合わて、抗EA(D)抗体検出の総感度を改善できることである。
Claims (19)
- エプスタイン−バールウイルスに対する抗体と免疫化学的に反応する、EA−p47−54タンパク質の少なくとも一部を含むペプチドであって、配列番号1、2、4または5に示したアミノ酸配列の少なくとも一部を含むことを特徴とするペプチド。
- エプスタイン−バールウイルスに対する抗体と免疫化学的に反応する、EA−p47−54タンパク質の少なくとも一部を含むペプチドであって、配列番号5に示したアミノ酸配列の少なくとも一部と連結された、配列番号4に示したアミノ酸配列の少なくとも一部を含むことを特徴とするペプチド。
- 配列番号6に示したアミノ酸配列の少なくとも一部を含むことを特徴とする請求項2に記載のペプチド。
- エプスタイン−バールウイルスに対する抗体と免疫化学的に反応する、EA−p138タンパク質の少なくとも一部を含むペプチドであって、配列番号7、8、9または10に示したアミノ酸配列の少なくとも一部を含むことを特徴とするペプチド。
- 請求項1から4のいずれか1項に記載のペプチドをコードする核酸配列。
- 請求項5に記載の核酸配列を含む組み換えベクター分子。
- 請求項6に記載の組み換えベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞。
- 請求項1から4のいずれか1項に記載のペプチドに対する抗体。
- モノクローナル抗体であることを特徴とする請求項8に記載の抗体。
- EBV−EA p47−54タンパク質のエピトープに結合するモノクローナル抗体であって、前記エピトープはthe European Collection of Animal Cell Cultrue(ECACC), Porton Down(UK)に受託番号第95051622号及び同第95051621号の下にそれぞれ寄託された、ハイブリドーマ細胞系によって産生されるモノクローナル抗体EBV.OT14EまたはEBV.OT13Nによって認識されることを特徴とするモノクローナル抗体。
- EBV−EA p138タンパク質のエピトープに結合するモノクローナル抗体であって、前記エピトープはthe European Collection of Animal Cell Cultrue(ECACC), Porton Down(UK)に受託番号第95051619号及び同第95051620号の下にそれぞれ寄託された、ハイブリドーマ細胞系によって産生されるモノクローナル抗体EBV.OT13BまたはEBV.OT13Dによって認識されることを特徴とするモノクローナル抗体。
- 請求項10または11に記載のモノクローナル抗体を産生し得る不死化細胞系。
- the European Collection of Animal Cell Cultrue(ECACC), Porton Down(UK)に受託番号第95051619号、同第95051620号、同第95051621号または同第95051622号の下に寄託された不死化細胞系。
- 請求項1から4に記載のペプチドのうちの1種以上を含有する免疫化学試薬。
- 請求項8から11のいずれか1項に記載の抗体を含有する免疫化学試薬。
- 試料中のエプスタイン−バールウイルスを検出する方法であって、試料を請求項8から11のいずれか1項に記載の抗体と接触させ、その後形成された免疫複合体の存在を検出することを含む方法。
- 試験液体中の抗エプスタイン−バールウイルス抗体を検出する方法であって、請求項14に記載の免疫化学試薬を試験液体と接触させ、試験液体中に形成された免疫複合体の存在を検出することを特徴とする方法。
- 試験液体中のエプスタイン−バールウイルスを検出する方法であって、請求項14に記載の免疫化学試薬を試験液体と接触させ、これに抗エプスタイン−バールウイルス抗体を接触させ、形成された免疫複合体の存在を検出することを特徴とする方法。
- 請求項16から18のいずれか1項に記載の方法を実施するための試験キット。
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