JPH09227382A - 免疫抑制剤 - Google Patents
免疫抑制剤Info
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- JPH09227382A JPH09227382A JP8042654A JP4265496A JPH09227382A JP H09227382 A JPH09227382 A JP H09227382A JP 8042654 A JP8042654 A JP 8042654A JP 4265496 A JP4265496 A JP 4265496A JP H09227382 A JPH09227382 A JP H09227382A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 副作用の少ない、食品形態を含めて、常用が
可能な免疫抑制剤を提供する。 【解決手段】 ３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ
−グルコースの還元末端グルコース残基がαまたはβグ
リコシル結合で有機化合物に結合した化合物または３−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースの非還
元末端グルコース残基に、少なくとも１つのガラクトー
ス残基がグリコシド結合した糖類をその構成単位として
含有する化合物を有効成分とする免疫抑制剤。
可能な免疫抑制剤を提供する。 【解決手段】 ３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ
−グルコースの還元末端グルコース残基がαまたはβグ
リコシル結合で有機化合物に結合した化合物または３−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースの非還
元末端グルコース残基に、少なくとも１つのガラクトー
ス残基がグリコシド結合した糖類をその構成単位として
含有する化合物を有効成分とする免疫抑制剤。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、オリゴ糖およびそ
の誘導体を有効成分とする免疫抑制剤に関する。
の誘導体を有効成分とする免疫抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫抑制剤は、免疫系の破綻により自己
の成分に対して免疫反応が起こることにより誘導される
自己免疫疾患、例えば、慢性関節リウマチ、溶血性貧
血、多発性硬化症、全身性エリテマトーデスなどの治
療、腎臓移植や骨髄移植等の臓器移植における拒絶反応
の予防、外来異物に対して免疫系が過剰な反応を起こし
て発症するアレルギーの治療等に非常に有用である。し
かしながら、現在用いられている免疫抑制剤であるステ
ロイド剤は作用が多岐にわたるため、様々な副作用を伴
う。また、核酸合成系に作用する薬剤は造血器などの臓
器に重篤な副作用を引き起こし、近年開発されたシクロ
スポリンやＦＫ５０６も腎障害、肝障害を引き起こす。
近年、糖質と免疫細胞を含めた細胞との関係があきらか
にされつつあり、ある種の糖質に免疫賦活効果または抑
制効果があることが報告されている。例えば、ＷＯ ９
２／２２５６３およびＷＯ ９２／２２３０１には、ア
ミノ糖を含有するオリゴ糖が免疫抑制効果を示すことが
開示されている。また、酵母マンナン分解物より得られ
るマンノースを構成糖として含有するオリゴ糖が、Ｔ細
胞の増殖を抑制することが知られている（Ｔhe Ｊourna
l of Ｉmmunology Ｖol．１４４，Ｎo．２ ７０７−７
１６ １９９０）。さらに、特開平７−１０１９８９号
には、マンノースを少なくとも１つ含有するオリゴ糖に
タンパク質を結合させた糖蛋白が、強いリンパ球増殖抑
制効果を示すことが開示されている。また、３−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースをタンパク質
に結合させると、免疫原性が上昇することが報告されて
いる（Ｔhe Ｊournal of Ｉmmunology Ｖol．１３５，
Ｎo．４ ２５８２−２５８８ １９８５）。
の成分に対して免疫反応が起こることにより誘導される
自己免疫疾患、例えば、慢性関節リウマチ、溶血性貧
血、多発性硬化症、全身性エリテマトーデスなどの治
療、腎臓移植や骨髄移植等の臓器移植における拒絶反応
の予防、外来異物に対して免疫系が過剰な反応を起こし
て発症するアレルギーの治療等に非常に有用である。し
かしながら、現在用いられている免疫抑制剤であるステ
ロイド剤は作用が多岐にわたるため、様々な副作用を伴
う。また、核酸合成系に作用する薬剤は造血器などの臓
器に重篤な副作用を引き起こし、近年開発されたシクロ
スポリンやＦＫ５０６も腎障害、肝障害を引き起こす。
近年、糖質と免疫細胞を含めた細胞との関係があきらか
にされつつあり、ある種の糖質に免疫賦活効果または抑
制効果があることが報告されている。例えば、ＷＯ ９
２／２２５６３およびＷＯ ９２／２２３０１には、ア
ミノ糖を含有するオリゴ糖が免疫抑制効果を示すことが
開示されている。また、酵母マンナン分解物より得られ
るマンノースを構成糖として含有するオリゴ糖が、Ｔ細
胞の増殖を抑制することが知られている（Ｔhe Ｊourna
l of Ｉmmunology Ｖol．１４４，Ｎo．２ ７０７−７
１６ １９９０）。さらに、特開平７−１０１９８９号
には、マンノースを少なくとも１つ含有するオリゴ糖に
タンパク質を結合させた糖蛋白が、強いリンパ球増殖抑
制効果を示すことが開示されている。また、３−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースをタンパク質
に結合させると、免疫原性が上昇することが報告されて
いる（Ｔhe Ｊournal of Ｉmmunology Ｖol．１３５，
Ｎo．４ ２５８２−２５８８ １９８５）。
【０００３】しかしながら、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｄ−グルコースを含有した化合物が、免疫細
胞の活性を抑制することは未だ知られていない。３−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースは食品成
分であることから、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｄ−グルコースを含有した化合物が免疫抑制作用を有
すれば、副作用が少なく、また、食品形態を含めて、常
用が可能な免疫抑制剤としての使用が期待できる。
ラノシル−Ｄ−グルコースを含有した化合物が、免疫細
胞の活性を抑制することは未だ知られていない。３−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースは食品成
分であることから、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｄ−グルコースを含有した化合物が免疫抑制作用を有
すれば、副作用が少なく、また、食品形態を含めて、常
用が可能な免疫抑制剤としての使用が期待できる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、副作用が少
なく、免疫担当細胞が抗原特異的および抗原非特異的な
刺激をうけ活性化された場合、より強く免疫抑制効果を
示す免疫抑制剤を提供するものである。
なく、免疫担当細胞が抗原特異的および抗原非特異的な
刺激をうけ活性化された場合、より強く免疫抑制効果を
示す免疫抑制剤を提供するものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、糖類と免
疫に関して研究を重ねる間に、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｄ−グルコース残基の還元末端が遊離の場
合は、免疫抑制効果を示さないが、 その還元末端グルコース残基がαまたはβグリコシド
結合で有機化合物に結合した化合物、または 還元末端残基が、遊離またはαもしくはβグリコシド
結合で他の有機化合物に結合した場合に、３−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースの非還元末端グ
ルコース残基に、少なくとも１個のガラクトースがαグ
リコシド結合した化合物 が免疫細胞の活性を抑制することを見いだし、本発明を
完成するに至った。
疫に関して研究を重ねる間に、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｄ−グルコース残基の還元末端が遊離の場
合は、免疫抑制効果を示さないが、 その還元末端グルコース残基がαまたはβグリコシド
結合で有機化合物に結合した化合物、または 還元末端残基が、遊離またはαもしくはβグリコシド
結合で他の有機化合物に結合した場合に、３−Ｏ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースの非還元末端グ
ルコース残基に、少なくとも１個のガラクトースがαグ
リコシド結合した化合物 が免疫細胞の活性を抑制することを見いだし、本発明を
完成するに至った。
【０００６】すなわち、本発明は、その第１の態様とし
て、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコー
スの還元末端グルコース残基がαまたはβグリコシル結
合した基を有する式（１）で表される化合物を有効成分
とする免疫抑制剤を提供するものである。
て、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコー
スの還元末端グルコース残基がαまたはβグリコシル結
合した基を有する式（１）で表される化合物を有効成分
とする免疫抑制剤を提供するものである。
【０００７】
【化７】
【０００８】また、本発明は、その第２の態様として、
３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースの
非還元末端グルコース残基に、少なくとも１つのガラク
トース残基がグリコシド結合した糖類をその構成単位と
して含有する化合物を有効成分とする免疫抑制剤を提供
するものである。
３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースの
非還元末端グルコース残基に、少なくとも１つのガラク
トース残基がグリコシド結合した糖類をその構成単位と
して含有する化合物を有効成分とする免疫抑制剤を提供
するものである。
【０００９】本発明の免疫抑制剤は、食品成分を有効成
分とすることができ、副作用が少なく、医薬品としては
もとより、食品形態で常用可能な免疫抑制剤として使用
しえ、特に、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球の活性抑制に有用
である。
分とすることができ、副作用が少なく、医薬品としては
もとより、食品形態で常用可能な免疫抑制剤として使用
しえ、特に、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球の活性抑制に有用
である。
【００１０】
【発明の実施の形態】式（１）の化合物におけるＲ1で
示される有機残基としては、それ自体が免疫細胞を賦活
するものでない限り、化合物の水溶性を損なわないもの
であれば、特に限定するのものではないが、好ましく
は、分子量１０００以下の有機化合物残基である。これ
らの化合物の例としては、アルコール類（例、Ｒ1が炭
素数１〜６の低級アルキル）、単糖類、オリゴ糖類、多
糖類、ポリペプチド、フェノール類、ステロイド類、脂
肪酸等が挙げられ、その水酸基は、水溶性を損なわない
限り、各種の置換基で置換されてもよい。
示される有機残基としては、それ自体が免疫細胞を賦活
するものでない限り、化合物の水溶性を損なわないもの
であれば、特に限定するのものではないが、好ましく
は、分子量１０００以下の有機化合物残基である。これ
らの化合物の例としては、アルコール類（例、Ｒ1が炭
素数１〜６の低級アルキル）、単糖類、オリゴ糖類、多
糖類、ポリペプチド、フェノール類、ステロイド類、脂
肪酸等が挙げられ、その水酸基は、水溶性を損なわない
限り、各種の置換基で置換されてもよい。
【００１１】式（１）で表される化合物の好適な例とし
ては、以下の式（２）〜（４）で表される化合物が挙げ
られる。
ては、以下の式（２）〜（４）で表される化合物が挙げ
られる。
【００１２】
【化８】
【００１３】
【化９】
【００１４】
【化１０】
【００１５】本発明の第２の態様の有効成分として使用
する化合物は、例えば、式（５）で表される。
する化合物は、例えば、式（５）で表される。
【００１６】
【化１１】
【００１７】式（５）におけるＲ2は、水素または上記
Ｒ1で定義したと同様な有機残基である。式（５）で表
される化合物の好適な例としては、以下の式（６）およ
び（７）で表される化合物が挙げられる。
Ｒ1で定義したと同様な有機残基である。式（５）で表
される化合物の好適な例としては、以下の式（６）およ
び（７）で表される化合物が挙げられる。
【００１８】
【化１２】
【００１９】
【化１３】
【００２０】本発明において有効成分として使用する化
合物は、酵素を用いた合成、有機化学反応を用いた合
成、天然物からの抽出あるいは多糖類を酵素または化学
的に分解して得るなど、自体公知の種々の方法によって
得ることができる。例えば、以下のような方法が挙げら
れる。 １．多糖からの分解によって得る方法 ニゲランなどのα（１−３）結合したグルコースを、そ
の構成単位に含有する多糖をマイルドスミス分解、緩和
酸加水分解、酵素分解等により、所望のオリゴ糖に分解
後、溶媒抽出、ゲル濾過、薄層クロマトグラフィー等の
各種クロマトグラフィーを単独、または組み合わせて単
離する。
合物は、酵素を用いた合成、有機化学反応を用いた合
成、天然物からの抽出あるいは多糖類を酵素または化学
的に分解して得るなど、自体公知の種々の方法によって
得ることができる。例えば、以下のような方法が挙げら
れる。 １．多糖からの分解によって得る方法 ニゲランなどのα（１−３）結合したグルコースを、そ
の構成単位に含有する多糖をマイルドスミス分解、緩和
酸加水分解、酵素分解等により、所望のオリゴ糖に分解
後、溶媒抽出、ゲル濾過、薄層クロマトグラフィー等の
各種クロマトグラフィーを単独、または組み合わせて単
離する。
【００２１】２．酵素による合成 ニゲロースおよび類縁体の調製 グルコースまたはマルトースなどのα−グリコシド結合
したオリゴ糖や、澱粉などの少なくとも非還元末端残基
がαグリコシド結合した糖類を、適当な溶媒に溶解後、
α−グルコシダーゼ等の酵素の転移活性を用いてニゲロ
ース等の所望のオリゴ糖を酵素合成する（酵素の起源や
反応条件でα１−３以外にも様々な結合様式をした糖が
得られる）。ついで、所望のオリゴ糖を溶媒抽出、ゲル
濾過、薄層クロマトグラフィー等の各種クロマトグラフ
ィーを単独または組み合わせて単離する。転移させるグ
ルコース残基の受容体として、α−メチルグルコサイド
を使用すれば、式（３）の化合物が、β−メチルグルコ
サイドを使用すれば式（２）の化合物が得られる。
したオリゴ糖や、澱粉などの少なくとも非還元末端残基
がαグリコシド結合した糖類を、適当な溶媒に溶解後、
α−グルコシダーゼ等の酵素の転移活性を用いてニゲロ
ース等の所望のオリゴ糖を酵素合成する（酵素の起源や
反応条件でα１−３以外にも様々な結合様式をした糖が
得られる）。ついで、所望のオリゴ糖を溶媒抽出、ゲル
濾過、薄層クロマトグラフィー等の各種クロマトグラフ
ィーを単独または組み合わせて単離する。転移させるグ
ルコース残基の受容体として、α−メチルグルコサイド
を使用すれば、式（３）の化合物が、β−メチルグルコ
サイドを使用すれば式（２）の化合物が得られる。
【００２２】ニゲロースの非還元末端残基にα結合で
ガラクトースを結合させる方法 上記の方法で得られたオリゴ糖と、メリビオースなど
の少なくとも非還元末端残基がα結合したガラクトース
残基である糖類とを適当な溶媒に溶解後、α−ガラクト
シダーゼの転移活性を用いてオリゴ糖の非還元末端残基
にα結合でガラクトースを転移縮合させる。ついで、所
望のオリゴ糖を溶媒抽出、ゲル濾過、薄層クロマトグラ
フィー等の各種クロマトグラフィーを単独または組み合
わせて、単離する。なお、市販の試薬のニゲロースや、
蜂蜜、麹汁等のニゲロースを高含有する天然物から抽出
したニゲロースにガラクトースを転移させてもよい。
ガラクトースを結合させる方法 上記の方法で得られたオリゴ糖と、メリビオースなど
の少なくとも非還元末端残基がα結合したガラクトース
残基である糖類とを適当な溶媒に溶解後、α−ガラクト
シダーゼの転移活性を用いてオリゴ糖の非還元末端残基
にα結合でガラクトースを転移縮合させる。ついで、所
望のオリゴ糖を溶媒抽出、ゲル濾過、薄層クロマトグラ
フィー等の各種クロマトグラフィーを単独または組み合
わせて、単離する。なお、市販の試薬のニゲロースや、
蜂蜜、麹汁等のニゲロースを高含有する天然物から抽出
したニゲロースにガラクトースを転移させてもよい。
【００２３】３．有機合成 ニゲロースの合成 自体公知の方法で、グルコースの３位の水酸基のみを遊
離とした化合物にグルコースをグリコシレーションする
ことによって合成することができる。グリコシレーショ
ンの方法として、（ａ）グルコースの１位にハロゲンを
導入し、金属を触媒として、縮合させる方法、（ｂ）グ
ルコースの１位にイミデートを導入し、ルイス酸類を触
媒として縮合させる方法、（ｃ）グルコースの１位にチ
オフェノールを導入し、親硫黄化合物を用いて縮合する
方法などがある。その後、保護基を脱離させ目的物を得
る。β結合で縮合させる場合は、ハロゲン、イミデー
ト、チオフェノール等を導入したグルコース残基の２位
の水酸基に、アセチル基、ベンゾイル基などの隣接基関
与がおこる置換基を導入し、縮合させる。α結合させる
場合は、上記の反応物の副反応物として得るか、または
２位の置換基を、隣接基関与しないベンジル基などとし
て、溶媒、温度を調節し、縮合させる。 非還元末端残基へのガラクトースの導入 と同様の方法で、ガラクトースをニゲロースの３位に
導入する。この場合、ガラクトースの２位の水酸基はベ
ンジル基などが望ましい。上記１〜３の方法を適宜組み
合わせてもよい。
離とした化合物にグルコースをグリコシレーションする
ことによって合成することができる。グリコシレーショ
ンの方法として、（ａ）グルコースの１位にハロゲンを
導入し、金属を触媒として、縮合させる方法、（ｂ）グ
ルコースの１位にイミデートを導入し、ルイス酸類を触
媒として縮合させる方法、（ｃ）グルコースの１位にチ
オフェノールを導入し、親硫黄化合物を用いて縮合する
方法などがある。その後、保護基を脱離させ目的物を得
る。β結合で縮合させる場合は、ハロゲン、イミデー
ト、チオフェノール等を導入したグルコース残基の２位
の水酸基に、アセチル基、ベンゾイル基などの隣接基関
与がおこる置換基を導入し、縮合させる。α結合させる
場合は、上記の反応物の副反応物として得るか、または
２位の置換基を、隣接基関与しないベンジル基などとし
て、溶媒、温度を調節し、縮合させる。 非還元末端残基へのガラクトースの導入 と同様の方法で、ガラクトースをニゲロースの３位に
導入する。この場合、ガラクトースの２位の水酸基はベ
ンジル基などが望ましい。上記１〜３の方法を適宜組み
合わせてもよい。
【００２４】本発明の免疫抑制剤の有効成分として用い
る化合物、例えば、式（２）（３）（４）および（６）
で表される化合物は、単独でも、２種以上の併用または
混合でもよい。本発明の免疫抑制剤は、上記の有効成分
を、自体公知の食品または食品成分、医薬品担体または
賦形剤と、自体公知の方法で合して免疫力を抑制する医
薬品や食品に利用できる。用いる食品または食品成分、
医薬担体または賦形剤は特に限定するものではなく、目
的とする免疫抑制剤の具体的用途に応じて、種々の個体
や液体の形態とすることができる。
る化合物、例えば、式（２）（３）（４）および（６）
で表される化合物は、単独でも、２種以上の併用または
混合でもよい。本発明の免疫抑制剤は、上記の有効成分
を、自体公知の食品または食品成分、医薬品担体または
賦形剤と、自体公知の方法で合して免疫力を抑制する医
薬品や食品に利用できる。用いる食品または食品成分、
医薬担体または賦形剤は特に限定するものではなく、目
的とする免疫抑制剤の具体的用途に応じて、種々の個体
や液体の形態とすることができる。
【００２５】本発明の免疫抑制剤は、免疫担当細胞が抗
原特異的および抗原非特異的な刺激を受けたときのＢお
よびＴリンパ球の活性化を抑制する作用を有する。すな
わち、本発明の免疫抑制剤を脾臓細胞の培養系に添加す
ると、マイトジェン刺激を加えずに培養したときの生細
胞数および細胞代謝活性はそれほど損なわず、Ｂリンパ
球マイトジェン刺激下で培養したときのリンパ球の生細
胞数、特にＢリンパ球の生細胞数の増加および細胞代謝
活性の上昇を強度に抑制し、Ｔリンパ球マイトジェン刺
激下で培養したときの細胞代謝活性の上昇を強度に抑制
した。以上の結果は、本発明の免疫抑制剤が、リンパ球
が活性化されるときにより選択的に働くことから、従来
の免疫抑制剤が示した非特異性な作用とは異なることを
示しており、また、Ｂリンパ球の活性化を強度に抑制す
ることから、近年発明された免疫抑制剤のＴリンパ球に
対する選択的な作用とも異なることを示している。その
ため、本発明の免疫抑制剤は、ステロイド剤に認められ
る様々な副作用、核酸合成系に作用する薬剤に認められ
る造血器などの重篤な副作用、また、シクロスポリン、
ＦＫ５０６に認められる腎障害、肝障害等の副作用はな
いと考えられる。また、本発明はＢリンパ球の活性化を
強度に抑制するため、Ｂリンパ球の異常によって引き起
こされる悪性リンパ腫、全身性エリテマトーデス、慢性
関節リウマチ等の自己免疫疾患またはアレルギー疾患の
治療にきわめて有用である。さらにＴリンパ球の活性化
も抑制するため、臓器移植の拒絶反応の予防にも有用で
ある。
原特異的および抗原非特異的な刺激を受けたときのＢお
よびＴリンパ球の活性化を抑制する作用を有する。すな
わち、本発明の免疫抑制剤を脾臓細胞の培養系に添加す
ると、マイトジェン刺激を加えずに培養したときの生細
胞数および細胞代謝活性はそれほど損なわず、Ｂリンパ
球マイトジェン刺激下で培養したときのリンパ球の生細
胞数、特にＢリンパ球の生細胞数の増加および細胞代謝
活性の上昇を強度に抑制し、Ｔリンパ球マイトジェン刺
激下で培養したときの細胞代謝活性の上昇を強度に抑制
した。以上の結果は、本発明の免疫抑制剤が、リンパ球
が活性化されるときにより選択的に働くことから、従来
の免疫抑制剤が示した非特異性な作用とは異なることを
示しており、また、Ｂリンパ球の活性化を強度に抑制す
ることから、近年発明された免疫抑制剤のＴリンパ球に
対する選択的な作用とも異なることを示している。その
ため、本発明の免疫抑制剤は、ステロイド剤に認められ
る様々な副作用、核酸合成系に作用する薬剤に認められ
る造血器などの重篤な副作用、また、シクロスポリン、
ＦＫ５０６に認められる腎障害、肝障害等の副作用はな
いと考えられる。また、本発明はＢリンパ球の活性化を
強度に抑制するため、Ｂリンパ球の異常によって引き起
こされる悪性リンパ腫、全身性エリテマトーデス、慢性
関節リウマチ等の自己免疫疾患またはアレルギー疾患の
治療にきわめて有用である。さらにＴリンパ球の活性化
も抑制するため、臓器移植の拒絶反応の予防にも有用で
ある。
【００２６】医薬品として用いる場合、経口または非経
口投与することができ、その投与量は、経口投与の場合
は、成人に対して１日当たり、有効成分として４mg〜４
０gとりわけ、２０mg〜１０g、さらに好ましくは３００
mg〜１０gであり、これを１日１〜数回に分けて投与す
ることにより副作用がなく所望の免疫賦活作用を発揮さ
せることができる。本発明の免疫抑制剤を食品として用
いる場合、飲料、調味料、畜肉加工品、水産加工品、農
産加工品、ステープル、調味食品、調理済食品、デザー
ト類、乳油製品、菓子、スナック菓子等の形態で提供す
ることも可能である。
口投与することができ、その投与量は、経口投与の場合
は、成人に対して１日当たり、有効成分として４mg〜４
０gとりわけ、２０mg〜１０g、さらに好ましくは３００
mg〜１０gであり、これを１日１〜数回に分けて投与す
ることにより副作用がなく所望の免疫賦活作用を発揮さ
せることができる。本発明の免疫抑制剤を食品として用
いる場合、飲料、調味料、畜肉加工品、水産加工品、農
産加工品、ステープル、調味食品、調理済食品、デザー
ト類、乳油製品、菓子、スナック菓子等の形態で提供す
ることも可能である。
【００２７】
【実施例】つぎに、本発明で使用する化合物の製造例、
試験例および実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明
するが、本発明は、これらに限定されるものではない。 製造例１ 化合物(２) １,２;５,６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−グルコ
フラノース(和光純薬製、化合物１)をジメチルホルムア
ミド(ＤＭＦ)に溶解し、ＮaＨ(１.６eq)を加えて、０℃
にて１.５時間撹拌後、臭化アリル(ＡllＢr１.５eq)を
加え、室温で、９時間撹拌し、その後、メタノールを加
えて反応を終了した。ＤＭＦをトルエンで共沸させなが
ら減圧濃縮することにより除去した後、サンプルを酢酸
エチル(ＡcＯＥt)にて抽出し、ＡcＯＥt層を飽和ＮaＣl
水で洗浄した。この溶液を、Ｎa 2ＳＯ4で脱水した後、
Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をＡcＯＥtで洗浄し、濾液と
洗液は合わせて減圧濃縮した。得られたシラップを、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキ
サン＝１:５)に供し、化合物ＩＩをシラップで得た(収
率９９.１％)。
試験例および実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明
するが、本発明は、これらに限定されるものではない。 製造例１ 化合物(２) １,２;５,６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−グルコ
フラノース(和光純薬製、化合物１)をジメチルホルムア
ミド(ＤＭＦ)に溶解し、ＮaＨ(１.６eq)を加えて、０℃
にて１.５時間撹拌後、臭化アリル(ＡllＢr１.５eq)を
加え、室温で、９時間撹拌し、その後、メタノールを加
えて反応を終了した。ＤＭＦをトルエンで共沸させなが
ら減圧濃縮することにより除去した後、サンプルを酢酸
エチル(ＡcＯＥt)にて抽出し、ＡcＯＥt層を飽和ＮaＣl
水で洗浄した。この溶液を、Ｎa 2ＳＯ4で脱水した後、
Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をＡcＯＥtで洗浄し、濾液と
洗液は合わせて減圧濃縮した。得られたシラップを、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキ
サン＝１:５)に供し、化合物ＩＩをシラップで得た(収
率９９.１％)。
【００２８】化合物ＩＩを水に懸濁させ、陽イオン交換
樹脂ＩＲ１２０(Ｈ+)をpＨ３となるまで加え、６０℃に
て７時間撹拌した。その後、イオン交換樹脂を濾別し、
水で、イオン交換樹脂を洗浄後、濾液と洗液を飽和Ｎa
ＣＯ3にて中和した。さらに濾液をＣＨ2Ｃl2にて洗浄
し、水層部を凍結乾燥することにより、化合物ＩＩＩ
(収率８０.６％)を得た。化合物ＩＩＩをピリジンに溶
解し、０℃にて、Ａc2Ｏ(１.５eq)を加え、室温にて２
５時間撹拌した。その後、メタノールを加え反応を終了
させ、ピリジンをトルエンで共沸させながら減圧濃縮に
より除去した後、サンプルをＣＨ2Ｃl2にて抽出し、Ｃ
Ｈ2Ｃl2層を２Ｎ−ＨＣl、飽和ＮaＣlにて洗浄後、Ｎa2
ＳＯ4で脱水を行った。その後、Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残
渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄後、濾液と洗液を合わせて減圧濃
縮することによりシラップを得た。得られたシラップ
は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒ＡcＯＥ
t:ヘキサン＝１:２)に供し、化合物ＩＶをシラップで得
た(収率９２.６％)。
樹脂ＩＲ１２０(Ｈ+)をpＨ３となるまで加え、６０℃に
て７時間撹拌した。その後、イオン交換樹脂を濾別し、
水で、イオン交換樹脂を洗浄後、濾液と洗液を飽和Ｎa
ＣＯ3にて中和した。さらに濾液をＣＨ2Ｃl2にて洗浄
し、水層部を凍結乾燥することにより、化合物ＩＩＩ
(収率８０.６％)を得た。化合物ＩＩＩをピリジンに溶
解し、０℃にて、Ａc2Ｏ(１.５eq)を加え、室温にて２
５時間撹拌した。その後、メタノールを加え反応を終了
させ、ピリジンをトルエンで共沸させながら減圧濃縮に
より除去した後、サンプルをＣＨ2Ｃl2にて抽出し、Ｃ
Ｈ2Ｃl2層を２Ｎ−ＨＣl、飽和ＮaＣlにて洗浄後、Ｎa2
ＳＯ4で脱水を行った。その後、Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残
渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄後、濾液と洗液を合わせて減圧濃
縮することによりシラップを得た。得られたシラップ
は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒ＡcＯＥ
t:ヘキサン＝１:２)に供し、化合物ＩＶをシラップで得
た(収率９２.６％)。
【００２９】化合物ＩＶをＣＨ2Ｃl2に溶解しチオフェ
ノール(１.２eq)を加え、０℃に冷却した後、三フッ化
ホウ素ジエチルエーテル錯体(ＢＦ３・Ｅt2Ｏ、２.５e
q)を加え、１８時間撹拌した。反応終了後、サンプルを
ＣＨ2Ｃl2で抽出し、ＣＨ2Ｃl2層を飽和Ｎa2ＣＯ3、飽
和ＮaＣlにて洗浄し、Ｎa2ＳＯ4で脱水を行った。Ｎa2
ＳＯ4を濾別後、残渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液
をあわせて、減圧濃縮し、得られたシラップをシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝
１:４)に供し、化合物Ｖをシラップで得た。つぎに、化
合物Ｖをメタノールに溶解し、ＮaＯＭeをpＨ１０にな
るまで加え、５時間撹拌した。反応終了後、反応液を陽
イオン交換樹脂ＩＲ１２０(Ｈ+)にて中和した。その
後、陽イオン交換樹脂を濾別後、残渣をメタノールで洗
浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し、得られたシラ
ップを、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒Ａc
ＯＥt:ヘキサン＝１:２)に供し、化合物ＶＩをシラップ
で得た(収率９７％)。
ノール(１.２eq)を加え、０℃に冷却した後、三フッ化
ホウ素ジエチルエーテル錯体(ＢＦ３・Ｅt2Ｏ、２.５e
q)を加え、１８時間撹拌した。反応終了後、サンプルを
ＣＨ2Ｃl2で抽出し、ＣＨ2Ｃl2層を飽和Ｎa2ＣＯ3、飽
和ＮaＣlにて洗浄し、Ｎa2ＳＯ4で脱水を行った。Ｎa2
ＳＯ4を濾別後、残渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液
をあわせて、減圧濃縮し、得られたシラップをシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝
１:４)に供し、化合物Ｖをシラップで得た。つぎに、化
合物Ｖをメタノールに溶解し、ＮaＯＭeをpＨ１０にな
るまで加え、５時間撹拌した。反応終了後、反応液を陽
イオン交換樹脂ＩＲ１２０(Ｈ+)にて中和した。その
後、陽イオン交換樹脂を濾別後、残渣をメタノールで洗
浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し、得られたシラ
ップを、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒Ａc
ＯＥt:ヘキサン＝１:２)に供し、化合物ＶＩをシラップ
で得た(収率９７％)。
【００３０】化合物ＶＩをＤＭＦに溶解し、０℃に冷却
しＮaＨ(１.５eq)を加え、２時間撹拌した。この反応液
に臭化ベンジル(ＢnＢr、１.２eq)を加え、さらに５時
間撹拌を行った。反応終了後、メタノールを加え反応を
停止し、減圧濃縮して得られたシラップをＡcＯＥtで抽
出し、ＡcＯＥt層を飽和ＮaＣlにて洗浄後、Ｎa2ＳＯ4
で脱水を行った。Ｎa2ＳＯ4を濾別後、残渣をＡcＯＥt
で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得られたシ
ラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒Ａc
ＯＥt:ヘキサン＝１:５)に供し、化合物ＶＩＩをシラッ
プで得た。化合物ＩＶをＡcＯＨ:Ｈ2Ｏ＝２０:１に溶解
し、ＮaＯＡc(４eq)、ＰdＣl2(２eq)を加え１６時間撹
拌した。反応終了後、サンプルをＣＨ2Ｃl2で抽出し有
機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、Ｎa2Ｓ2Ｏ3溶液にて洗浄しＮa2
ＳＯ4にて脱水した。Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をＣＨ2
Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得られ
たシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶
媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:４)に供し、化合物ＶＩＩＩ
をシラップで得た。
しＮaＨ(１.５eq)を加え、２時間撹拌した。この反応液
に臭化ベンジル(ＢnＢr、１.２eq)を加え、さらに５時
間撹拌を行った。反応終了後、メタノールを加え反応を
停止し、減圧濃縮して得られたシラップをＡcＯＥtで抽
出し、ＡcＯＥt層を飽和ＮaＣlにて洗浄後、Ｎa2ＳＯ4
で脱水を行った。Ｎa2ＳＯ4を濾別後、残渣をＡcＯＥt
で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得られたシ
ラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒Ａc
ＯＥt:ヘキサン＝１:５)に供し、化合物ＶＩＩをシラッ
プで得た。化合物ＩＶをＡcＯＨ:Ｈ2Ｏ＝２０:１に溶解
し、ＮaＯＡc(４eq)、ＰdＣl2(２eq)を加え１６時間撹
拌した。反応終了後、サンプルをＣＨ2Ｃl2で抽出し有
機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、Ｎa2Ｓ2Ｏ3溶液にて洗浄しＮa2
ＳＯ4にて脱水した。Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をＣＨ2
Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得られ
たシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶
媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:４)に供し、化合物ＶＩＩＩ
をシラップで得た。
【００３１】化合物ＶＩＩとＶＩＩＩ(１.５eq)をＣＨ2
Ｃl2に溶解し、モレキュラーシーブス(ＭＳ)４Åを加
え、１晩撹拌した。これを、０℃に冷却した後、Ｎ−ヨ
ードこはく酸イミド(ＮＩＳ ０.３eq)とトリフルオロ
メタンスルフォン酸(ＴfＯＨ、０.６eq)を加えさらに、
１時間撹拌し、その後、反応液をセライトで濾過するこ
とにより、ＭＳ４Åを除去し、ＣＨ2Ｃl2残渣を洗浄
後、洗液と濾液を合わせて、ＣＨ2Ｃl2にて抽出し、有
機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、Ｎa2Ｓ2Ｏ3溶液にて洗浄しＮa2
ＳＯ4にて脱水した。Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をこの濾
液と洗液を残渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液を合
わせて減圧濃縮し得られたシラップをシリカゲルカラム
クロマトグラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:４)に
供し、化合物ＩＸをシラップで得た(収率９５.９％)。
化合物ＩＸをＤＭＦに溶解しＮＨ2・ＮＨ2・ＡcＯＨ
(１.５eq)を加えた後、５０℃で４時間撹拌した。反応
終了後、反応液を減圧濃縮し、得られたシラップをＡc
ＯＥtで抽出し、ＡcＯＥt層を２ＮＨＣl、飽和ＮaＣlに
て洗浄後、Ｎa2ＳＯ4で脱水を行った。Ｎa2ＳＯ4を濾別
後、残渣をＡcＯＥtで洗浄し、濾液と洗液を合わせて減
圧濃縮し得られたシラップをシリカゲルカラムクロマト
グラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:２)に供し、化
合物Ｘをシラップで得た(収率７０.９％)。
Ｃl2に溶解し、モレキュラーシーブス(ＭＳ)４Åを加
え、１晩撹拌した。これを、０℃に冷却した後、Ｎ−ヨ
ードこはく酸イミド(ＮＩＳ ０.３eq)とトリフルオロ
メタンスルフォン酸(ＴfＯＨ、０.６eq)を加えさらに、
１時間撹拌し、その後、反応液をセライトで濾過するこ
とにより、ＭＳ４Åを除去し、ＣＨ2Ｃl2残渣を洗浄
後、洗液と濾液を合わせて、ＣＨ2Ｃl2にて抽出し、有
機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、Ｎa2Ｓ2Ｏ3溶液にて洗浄しＮa2
ＳＯ4にて脱水した。Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をこの濾
液と洗液を残渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液を合
わせて減圧濃縮し得られたシラップをシリカゲルカラム
クロマトグラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:４)に
供し、化合物ＩＸをシラップで得た(収率９５.９％)。
化合物ＩＸをＤＭＦに溶解しＮＨ2・ＮＨ2・ＡcＯＨ
(１.５eq)を加えた後、５０℃で４時間撹拌した。反応
終了後、反応液を減圧濃縮し、得られたシラップをＡc
ＯＥtで抽出し、ＡcＯＥt層を２ＮＨＣl、飽和ＮaＣlに
て洗浄後、Ｎa2ＳＯ4で脱水を行った。Ｎa2ＳＯ4を濾別
後、残渣をＡcＯＥtで洗浄し、濾液と洗液を合わせて減
圧濃縮し得られたシラップをシリカゲルカラムクロマト
グラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:２)に供し、化
合物Ｘをシラップで得た(収率７０.９％)。
【００３２】化合物ＸをＣＨ2Ｃl2に溶解し、−１５℃
に冷却後、トリフルオロアセトニトリル(ＴＣＡ、４e
q)、１,８−ジアゾビシクロ[５,４,０]−７−ウンデセ
ン(ＤＢＵ、１.２eq)を加え３時間撹拌した。反応終了
後、反応液を室温にて減圧濃縮し得られたシラップをシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒塩化メチレン:
ＭeＯＨ＝１００:１)に供し、化合物ＸＩをシラップで
得た(収率８４.５％)。化合物ＸＩをＣＨ2Ｃl2に溶解
し、メタノール(６eq)、ＭＳ３Åを加え１晩撹拌した。
反応液を０℃に冷却し、ＢＦ3−Ｅt2Ｏ(２eq)を加えさ
らに１時間撹拌した。反応終了後、反応液をセライトで
濾過することにより、ＭＳ３Åを除去し、残渣をＣＨ2
Ｃl2で洗浄後、洗液と濾液を合わせて、ＣＨ2Ｃl2にて
抽出し、有機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、ＮaＣl溶液にて洗浄
し、Ｎa2ＳＯ4にて脱水した。さらに、Ｎa2ＳＯ4を濾別
し、残渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄し濾液と洗液を合わせて減
圧濃縮し得られたシラップをシリカゲルカラムクロマト
グラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:４)に供し、化
合物ＸＩＩ(収率６８.０％)及び少量の化合物ＸＩＩＩ
をシラップで得た。
に冷却後、トリフルオロアセトニトリル(ＴＣＡ、４e
q)、１,８−ジアゾビシクロ[５,４,０]−７−ウンデセ
ン(ＤＢＵ、１.２eq)を加え３時間撹拌した。反応終了
後、反応液を室温にて減圧濃縮し得られたシラップをシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー(溶媒塩化メチレン:
ＭeＯＨ＝１００:１)に供し、化合物ＸＩをシラップで
得た(収率８４.５％)。化合物ＸＩをＣＨ2Ｃl2に溶解
し、メタノール(６eq)、ＭＳ３Åを加え１晩撹拌した。
反応液を０℃に冷却し、ＢＦ3−Ｅt2Ｏ(２eq)を加えさ
らに１時間撹拌した。反応終了後、反応液をセライトで
濾過することにより、ＭＳ３Åを除去し、残渣をＣＨ2
Ｃl2で洗浄後、洗液と濾液を合わせて、ＣＨ2Ｃl2にて
抽出し、有機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、ＮaＣl溶液にて洗浄
し、Ｎa2ＳＯ4にて脱水した。さらに、Ｎa2ＳＯ4を濾別
し、残渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄し濾液と洗液を合わせて減
圧濃縮し得られたシラップをシリカゲルカラムクロマト
グラフィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:４)に供し、化
合物ＸＩＩ(収率６８.０％)及び少量の化合物ＸＩＩＩ
をシラップで得た。
【００３３】化合物ＸＩＩをＡcＯＨ:Ｈ2Ｏ＝２０:１に
溶解し、ＮaＯＡc(４eq)、ＰdＣl2(２eq)を加え１６時
間撹拌した。反応終了後、サンプルをＣＨ2Ｃl2で抽出
し有機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、Ｎa2Ｓ2Ｏ3溶液にて洗浄し
Ｎa2ＳＯ4にて脱水した。Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をＣ
Ｈ2Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得
られたシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー
(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:３)に供し、化合物ＸＩＶ
をシラップで得た。さらに化合物ＸＩＶをＥtＯＨ:Ａc
ＯＨ＝１:１混液に溶解し、１０％Ｐd−Ｃを加え、接触
水素添加を２０時間行った。触媒を濾別後、残渣をＭe
ＯＨで洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得られ
たシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶
媒塩化メチレン:ＭeＯＨ＝１０:１)に供し、化合物ＸＶ
(収率７６.５％)をシラップで得た。化合物ＸＶをＭeＯ
Ｈに溶解し、ＮaＯＭeをpＨ１０になるまで加え、１晩
撹拌した。反応終了後、陽イオン交換樹脂ＩＲ１２０
(Ｈ+)で中和した。その後、陽イオン交換樹脂を濾別
後、メタノールで洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃
縮し、得られたシラップをメタノールに溶解しセファデ
ックスＬＨ２０カラムによってゲル濾過し、当該画分を
凍結乾燥し、式(２)で表される化合物を得た。
溶解し、ＮaＯＡc(４eq)、ＰdＣl2(２eq)を加え１６時
間撹拌した。反応終了後、サンプルをＣＨ2Ｃl2で抽出
し有機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、Ｎa2Ｓ2Ｏ3溶液にて洗浄し
Ｎa2ＳＯ4にて脱水した。Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をＣ
Ｈ2Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得
られたシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー
(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:３)に供し、化合物ＸＩＶ
をシラップで得た。さらに化合物ＸＩＶをＥtＯＨ:Ａc
ＯＨ＝１:１混液に溶解し、１０％Ｐd−Ｃを加え、接触
水素添加を２０時間行った。触媒を濾別後、残渣をＭe
ＯＨで洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得られ
たシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶
媒塩化メチレン:ＭeＯＨ＝１０:１)に供し、化合物ＸＶ
(収率７６.５％)をシラップで得た。化合物ＸＶをＭeＯ
Ｈに溶解し、ＮaＯＭeをpＨ１０になるまで加え、１晩
撹拌した。反応終了後、陽イオン交換樹脂ＩＲ１２０
(Ｈ+)で中和した。その後、陽イオン交換樹脂を濾別
後、メタノールで洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃
縮し、得られたシラップをメタノールに溶解しセファデ
ックスＬＨ２０カラムによってゲル濾過し、当該画分を
凍結乾燥し、式(２)で表される化合物を得た。
【００３４】製造例２ 化合物(３) 化合物(２)を得る際に得られる化合物ＸＩＩＩを用い
て、化合物ＸＩＩに対し行った同様の方法で脱ベンジル
化、及び脱アセチル化を行い式(３)で表される化合物を
得た。
て、化合物ＸＩＩに対し行った同様の方法で脱ベンジル
化、及び脱アセチル化を行い式(３)で表される化合物を
得た。
【００３５】製造例３ 化合物(４) ニゲランテトラサッカライド(シグマ)を水に溶解後、Ｎ
aＢＨ4(４eqを加え、室温で１晩反応した。反応終了
後、陽イオン交換樹脂ＩＲ１２０(Ｈ+)で過剰のＮaＢＨ
４を分解し、その後、陽イオン交換樹脂を濾別後、残渣
を水で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮乾固し、
さらにＭeＯＨを加え濃縮乾固を繰り返した。その後、
サンプルを水に溶解後、ゲル濾過(Ｂaiogel Ｐ−２)に
供し、当該画分を凍結乾燥することによって、式(４)で
表される化合物を得た。
aＢＨ4(４eqを加え、室温で１晩反応した。反応終了
後、陽イオン交換樹脂ＩＲ１２０(Ｈ+)で過剰のＮaＢＨ
４を分解し、その後、陽イオン交換樹脂を濾別後、残渣
を水で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮乾固し、
さらにＭeＯＨを加え濃縮乾固を繰り返した。その後、
サンプルを水に溶解後、ゲル濾過(Ｂaiogel Ｐ−２)に
供し、当該画分を凍結乾燥することによって、式(４)で
表される化合物を得た。
【００３６】製造例４ 化合物(６) Ｄ−ガラクトースをピリジンに溶解し、０℃にて、Ａc2
Ｏ(１.５eq)を加え、室温にて２５時間撹拌した。その
後、メタノールを加え反応を終了させ、ピリジンをトル
エンで共沸させながら減圧濃縮により除去した後、ＣＨ
2Ｃl2にて抽出し、ＣＨ2Ｃl2層を２Ｎ−ＨＣl、飽和Ｎa
Ｃlにて洗浄後、Ｎa2ＳＯ4で脱水を行った。その後、溶
液を濾別し、残渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄後、洗液と濾液を
合わせて、ＣＨ2Ｃl2にて抽出し減圧濃縮することによ
りＣＨ2Ｃl2を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:２)に供し、化合物
をシラップで得た。その化合物に対して、製造例１に記
載した、化合物ＩＶ→Ｖ→ＶＩ→ＶＩＩを合成する方法
で反応を行い、化合物ＸＶＩを得た。化合物ＸＶＩ(１.
５eq)と化合物ＸＩＩ(１eq)をＣＨ2Ｃl2に溶解し、ＭＳ
４Åを加え、５時間撹拌した。これを０℃に冷却した
後、ＮＩＳ(４eq)とＴfＯＨ(０.６eq)を加えさらに、４
時間撹拌し、その後、反応液をセライトで濾過すること
により、ＭＳ４Åを除去し、ＣＨ2Ｃl2で残渣を洗浄
後、洗液と濾液を合わせて、ＣＨ2Ｃl2にて抽出し、有
機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、Ｎa2Ｓ2Ｏ3溶液にて洗浄しＮa2
ＳＯ4にて脱水した。Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をＣＨ2
Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得られ
たシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶
媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:３)に供し、化合物ＸＶＩＩ
をシラップで得た(収率４７.１％)。化合物ＸＶＩＩを
化合物ＸＩＩに対して行なった同様の方法で脱ベンジル
化、及び脱アセチル化を行い式(６)で表される化合物を
得た。上記製造例で例示した反応を以下のスキームに示
す。
Ｏ(１.５eq)を加え、室温にて２５時間撹拌した。その
後、メタノールを加え反応を終了させ、ピリジンをトル
エンで共沸させながら減圧濃縮により除去した後、ＣＨ
2Ｃl2にて抽出し、ＣＨ2Ｃl2層を２Ｎ−ＨＣl、飽和Ｎa
Ｃlにて洗浄後、Ｎa2ＳＯ4で脱水を行った。その後、溶
液を濾別し、残渣をＣＨ2Ｃl2で洗浄後、洗液と濾液を
合わせて、ＣＨ2Ｃl2にて抽出し減圧濃縮することによ
りＣＨ2Ｃl2を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィー(溶媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:２)に供し、化合物
をシラップで得た。その化合物に対して、製造例１に記
載した、化合物ＩＶ→Ｖ→ＶＩ→ＶＩＩを合成する方法
で反応を行い、化合物ＸＶＩを得た。化合物ＸＶＩ(１.
５eq)と化合物ＸＩＩ(１eq)をＣＨ2Ｃl2に溶解し、ＭＳ
４Åを加え、５時間撹拌した。これを０℃に冷却した
後、ＮＩＳ(４eq)とＴfＯＨ(０.６eq)を加えさらに、４
時間撹拌し、その後、反応液をセライトで濾過すること
により、ＭＳ４Åを除去し、ＣＨ2Ｃl2で残渣を洗浄
後、洗液と濾液を合わせて、ＣＨ2Ｃl2にて抽出し、有
機層を飽和Ｎa2ＣＯ3、Ｎa2Ｓ2Ｏ3溶液にて洗浄しＮa2
ＳＯ4にて脱水した。Ｎa2ＳＯ4を濾別し、残渣をＣＨ2
Ｃl2で洗浄し、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し得られ
たシラップをシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶
媒ＡcＯＥt:ヘキサン＝１:３)に供し、化合物ＸＶＩＩ
をシラップで得た(収率４７.１％)。化合物ＸＶＩＩを
化合物ＸＩＩに対して行なった同様の方法で脱ベンジル
化、及び脱アセチル化を行い式(６)で表される化合物を
得た。上記製造例で例示した反応を以下のスキームに示
す。
【００３７】
【化１４】
【００３８】
【化１５】
【００３９】
【化１６】
【００４０】
【化１７】
【００４１】試験例１ 本試験例では、製造例１で得た化合物(２)および製造例
４で得た化合物(６)を用いて、マウス脾臓リンパ球増殖
反応に対する化合物(２)および化合物(６)の作用を調べ
ることにより、化合物(２)および化合物(６)のリンパ球
代謝活性上昇およびリンパ球増殖の抑制効果を検証し
た。マウス(Ｃ５７ＢＬ／６、雌、８週齢)から無菌的に
脾臓を摘出し、ＲＰＭＩ１６４０培地中で脾臓を押しつ
ぶし、＃２００メッシュに通し脾臓細胞浮遊液を得た。
脾臓細胞浮遊液の細胞数を自動血球計測装置により測定
した後、細胞数を５×１０6／mlの濃度にＲＰＭＩ１６
４０培地で調製し、９６穴組織培養プレートに１穴あた
り１００マイクロリットルを播種した。Ｂリンパ球増殖
刺激物質のリポポリサッカライドを２００マイクログラ
ム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した液、Ｂ
リンパ球増殖刺激物質の抗マウスイムノグロブリンＭを
２００マイクログラム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培
地に溶解した液、Ｔリンパ球増殖刺激物質のコンカナバ
リンＡを８マイクログラム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４
０培地に溶解した液、あるいはＲＰＭＩ１６４０培地
を、それぞれ１穴当たり５０マイクロリットル播種した
脾臓細胞浮遊液に加えて、Ｂリンパ球刺激群(１)、Ｂリ
ンパ球刺激群(２)、Ｔリンパ球刺激群(１)、無刺激群と
した。Ｔリンパ球刺激群(２)として、細胞播種前にＴリ
ンパ球増殖刺激物質の抗マウスＣＤ３抗体を１０マイク
ログラム／mlの濃度でほう酸緩衝液に溶解した液を１穴
当たり１００マイクロリットル加え３７℃で３時間放置
し抗マウスＣＤ３抗体を各穴に付着させ、３時間後にＲ
ＰＭＩ１６４０培地で洗浄後、ＲＰＭＩ１６４０培地を
１穴当たり５０マイクロリットル加えた穴に細胞を播種
した。これらの５群にＲＰＭＩ１６４０培地(対照)ある
いは化合物(２)を８mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培
地に溶解した液、化合物(６)を８mg／mlの濃度でＲＰＭ
Ｉ１６４０培地に溶解した液をそれぞれ１穴当たり５０
マイクロリットル加え、３７℃の５％炭酸ガス培養器内
で２日間培養し、培養後の生細胞数と細胞代謝活性を調
べた。
４で得た化合物(６)を用いて、マウス脾臓リンパ球増殖
反応に対する化合物(２)および化合物(６)の作用を調べ
ることにより、化合物(２)および化合物(６)のリンパ球
代謝活性上昇およびリンパ球増殖の抑制効果を検証し
た。マウス(Ｃ５７ＢＬ／６、雌、８週齢)から無菌的に
脾臓を摘出し、ＲＰＭＩ１６４０培地中で脾臓を押しつ
ぶし、＃２００メッシュに通し脾臓細胞浮遊液を得た。
脾臓細胞浮遊液の細胞数を自動血球計測装置により測定
した後、細胞数を５×１０6／mlの濃度にＲＰＭＩ１６
４０培地で調製し、９６穴組織培養プレートに１穴あた
り１００マイクロリットルを播種した。Ｂリンパ球増殖
刺激物質のリポポリサッカライドを２００マイクログラ
ム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した液、Ｂ
リンパ球増殖刺激物質の抗マウスイムノグロブリンＭを
２００マイクログラム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培
地に溶解した液、Ｔリンパ球増殖刺激物質のコンカナバ
リンＡを８マイクログラム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４
０培地に溶解した液、あるいはＲＰＭＩ１６４０培地
を、それぞれ１穴当たり５０マイクロリットル播種した
脾臓細胞浮遊液に加えて、Ｂリンパ球刺激群(１)、Ｂリ
ンパ球刺激群(２)、Ｔリンパ球刺激群(１)、無刺激群と
した。Ｔリンパ球刺激群(２)として、細胞播種前にＴリ
ンパ球増殖刺激物質の抗マウスＣＤ３抗体を１０マイク
ログラム／mlの濃度でほう酸緩衝液に溶解した液を１穴
当たり１００マイクロリットル加え３７℃で３時間放置
し抗マウスＣＤ３抗体を各穴に付着させ、３時間後にＲ
ＰＭＩ１６４０培地で洗浄後、ＲＰＭＩ１６４０培地を
１穴当たり５０マイクロリットル加えた穴に細胞を播種
した。これらの５群にＲＰＭＩ１６４０培地(対照)ある
いは化合物(２)を８mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培
地に溶解した液、化合物(６)を８mg／mlの濃度でＲＰＭ
Ｉ１６４０培地に溶解した液をそれぞれ１穴当たり５０
マイクロリットル加え、３７℃の５％炭酸ガス培養器内
で２日間培養し、培養後の生細胞数と細胞代謝活性を調
べた。
【００４２】生細胞数の測定は、培養細胞液の細胞数を
自動血球計測装置で測定した後に、培養細胞液２００マ
イクロリットルにＲ−フィコエリトリンで標識したマウ
スＢリンパ球に対する特異抗体の抗マウスＣＤ４５Ｒ抗
体を１マイクログラム、フルオロセインイソチオシアネ
ートで標識したマウスＴリンパ球に対する特異抗体の抗
マウスＴ細胞レセプター(アルファ／ベータ)抗体を１マ
イクログラム、および死細胞を特異的に染色する７−ア
ミノアクチノマイシンＤを１マイクログラム加え、５℃
で３０分間放置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄
し、フローサイトメーターで総細胞に占めるＢリンパ球
およびＴリンパ球の割合ならびにＢリンパ球およびＴリ
ンパ球に占める死細胞の割合を測定し、Ｂリンパ球およ
びＴリンパ球の生細胞数を算出した。細胞代謝活性は、
培養の終わる３時間前に臭化３−(４,５−ジメチル−２
−チアゾリル)−２,５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウ
ムを５mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した
液を１穴当たり１０マイクロリットル加え、培養終了時
に２０％ドデシル硫酸ナトリウム溶液を１穴当たり５０
マイクロリットル加え、３７℃で１日放置後、マイクロ
プレートリーダーで培養液の吸光度５５０nmを測定する
ことにより細胞代謝活性を求めた。表１はその結果を示
す表である。無刺激群においては、化合物(２)および化
合物(６)はいずれもリンパ球の生細胞数および細胞代謝
活性にはほとんど影響を及ぼさなかったが、Ｂリンパ球
刺激群(１)においては、化合物(２)および化合物(６)は
いずれもＢリンパ球の生細胞数の増加および細胞代謝活
性の上昇を強度に抑制した。Ｂリンパ球刺激群(２)にお
いても、化合物(６)はＢリンパ球の生細胞数の増加およ
び細胞代謝活性の上昇を強度に抑制し、また、化合物
(２)はＢリンパ球の生細胞数の増加を抑制した。Ｔリン
パ球刺激群(１)および(２)においては、化合物(２)およ
び化合物(６)はいずれも細胞代謝活性の上昇を抑制し
た。この様に、化合物(２)および化合物(６)のいずれに
も、リンパ球が活性化されるときにより選択的に働き、
特にＢリンパ球を強度に抑制する作用が認められた。
自動血球計測装置で測定した後に、培養細胞液２００マ
イクロリットルにＲ−フィコエリトリンで標識したマウ
スＢリンパ球に対する特異抗体の抗マウスＣＤ４５Ｒ抗
体を１マイクログラム、フルオロセインイソチオシアネ
ートで標識したマウスＴリンパ球に対する特異抗体の抗
マウスＴ細胞レセプター(アルファ／ベータ)抗体を１マ
イクログラム、および死細胞を特異的に染色する７−ア
ミノアクチノマイシンＤを１マイクログラム加え、５℃
で３０分間放置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄
し、フローサイトメーターで総細胞に占めるＢリンパ球
およびＴリンパ球の割合ならびにＢリンパ球およびＴリ
ンパ球に占める死細胞の割合を測定し、Ｂリンパ球およ
びＴリンパ球の生細胞数を算出した。細胞代謝活性は、
培養の終わる３時間前に臭化３−(４,５−ジメチル−２
−チアゾリル)−２,５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウ
ムを５mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した
液を１穴当たり１０マイクロリットル加え、培養終了時
に２０％ドデシル硫酸ナトリウム溶液を１穴当たり５０
マイクロリットル加え、３７℃で１日放置後、マイクロ
プレートリーダーで培養液の吸光度５５０nmを測定する
ことにより細胞代謝活性を求めた。表１はその結果を示
す表である。無刺激群においては、化合物(２)および化
合物(６)はいずれもリンパ球の生細胞数および細胞代謝
活性にはほとんど影響を及ぼさなかったが、Ｂリンパ球
刺激群(１)においては、化合物(２)および化合物(６)は
いずれもＢリンパ球の生細胞数の増加および細胞代謝活
性の上昇を強度に抑制した。Ｂリンパ球刺激群(２)にお
いても、化合物(６)はＢリンパ球の生細胞数の増加およ
び細胞代謝活性の上昇を強度に抑制し、また、化合物
(２)はＢリンパ球の生細胞数の増加を抑制した。Ｔリン
パ球刺激群(１)および(２)においては、化合物(２)およ
び化合物(６)はいずれも細胞代謝活性の上昇を抑制し
た。この様に、化合物(２)および化合物(６)のいずれに
も、リンパ球が活性化されるときにより選択的に働き、
特にＢリンパ球を強度に抑制する作用が認められた。
【００４３】試験例２ 本試験例では、製造例３で得た化合物(４)を用いて、マ
ウス脾臓リンパ球増殖反応に対する化合物(４)の作用を
調べることにより、化合物(４)のリンパ球代謝活性上昇
およびリンパ球増殖の抑制効果を検証した。マウス(Ｃ
５７ＢＬ／６、雌、１３週齢)から無菌的に脾臓を摘出
し、ＲＰＭＩ１６４０培地中で脾臓を押しつぶし、＃２
００メッシュに通し脾臓細胞浮遊液を得た。脾臓細胞浮
遊液の細胞数を自動血球計測装置により測定した後、細
胞数を５×１０6／mlの濃度にＲＰＭＩ１６４０培地で
調製し、９６穴組織培養プレートに１穴あたり１００マ
イクロリットルを播種した。Ｂリンパ球増殖刺激物質の
リポポリサッカライドを２００マイクログラム／mlの濃
度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した液、Ｂリンパ球増
殖刺激物質の抗マウスイムノグロブリンＭを２００マイ
クログラム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解し
た液、Ｔリンパ球増殖刺激物質のコンカナバリンＡを８
マイクログラム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶
解した液、あるいはＲＰＭＩ１６４０培地を、それぞれ
１穴当たり５０マイクロリットル播種した脾臓細胞浮遊
液に加えて、Ｂリンパ球刺激群(１)、Ｂリンパ球刺激群
(１)、Ｂリンパ球刺激群(２)、Ｔリンパ球刺激群(１)、
無刺激群とした。Ｔリンパ球刺激群(２)として、細胞播
種前にＴリンパ球増殖刺激物質の抗マウスＣＤ３抗体を
１０マイクログラム／mlの濃度でほう酸緩衝液に溶解し
た液を１穴当たり１００マイクロリットル加え３７℃で
３時間放置し抗マウスＣＤ３抗体を各穴に付着させ、３
時間後にＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄後、ＲＰＭＩ１６
４０培地を１穴当たり５０マイクロリットル加えた穴に
細胞を播種した。これらの５群にＲＰＭＩ１６４０培地
(対照)あるいは化合物(４)を８mg／mlの濃度でＲＰＭＩ
１６４０培地に溶解した液をそれぞれ１穴当たり５０マ
イクロリットル加え、３７℃の５％炭酸ガス培養器内で
２日間培養し、培養後の生細胞数と細胞代謝活性を調べ
た。
ウス脾臓リンパ球増殖反応に対する化合物(４)の作用を
調べることにより、化合物(４)のリンパ球代謝活性上昇
およびリンパ球増殖の抑制効果を検証した。マウス(Ｃ
５７ＢＬ／６、雌、１３週齢)から無菌的に脾臓を摘出
し、ＲＰＭＩ１６４０培地中で脾臓を押しつぶし、＃２
００メッシュに通し脾臓細胞浮遊液を得た。脾臓細胞浮
遊液の細胞数を自動血球計測装置により測定した後、細
胞数を５×１０6／mlの濃度にＲＰＭＩ１６４０培地で
調製し、９６穴組織培養プレートに１穴あたり１００マ
イクロリットルを播種した。Ｂリンパ球増殖刺激物質の
リポポリサッカライドを２００マイクログラム／mlの濃
度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した液、Ｂリンパ球増
殖刺激物質の抗マウスイムノグロブリンＭを２００マイ
クログラム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解し
た液、Ｔリンパ球増殖刺激物質のコンカナバリンＡを８
マイクログラム／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶
解した液、あるいはＲＰＭＩ１６４０培地を、それぞれ
１穴当たり５０マイクロリットル播種した脾臓細胞浮遊
液に加えて、Ｂリンパ球刺激群(１)、Ｂリンパ球刺激群
(１)、Ｂリンパ球刺激群(２)、Ｔリンパ球刺激群(１)、
無刺激群とした。Ｔリンパ球刺激群(２)として、細胞播
種前にＴリンパ球増殖刺激物質の抗マウスＣＤ３抗体を
１０マイクログラム／mlの濃度でほう酸緩衝液に溶解し
た液を１穴当たり１００マイクロリットル加え３７℃で
３時間放置し抗マウスＣＤ３抗体を各穴に付着させ、３
時間後にＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄後、ＲＰＭＩ１６
４０培地を１穴当たり５０マイクロリットル加えた穴に
細胞を播種した。これらの５群にＲＰＭＩ１６４０培地
(対照)あるいは化合物(４)を８mg／mlの濃度でＲＰＭＩ
１６４０培地に溶解した液をそれぞれ１穴当たり５０マ
イクロリットル加え、３７℃の５％炭酸ガス培養器内で
２日間培養し、培養後の生細胞数と細胞代謝活性を調べ
た。
【００４４】生細胞数の測定は、培養細胞液の細胞数を
自動血球計測装置で測定した後に、培養細胞液２００マ
イクロリットルにＲ−フィコエリトリンで標識したマウ
スＢリンパ球に対する特異抗体の抗マウスＣＤ４５Ｒ抗
体を１マイクログラム、フルオロセインイソチオシアネ
ートで標識したマウスＴリンパ球に対する特異抗体の抗
マウスＴ細胞レセプター(アルファ／ベータ)抗体を１マ
イクログラム、および死細胞を特異的に染色する７−ア
ミノアクチノマイシンＤを１マイクログラム加え、５℃
で３０分間放置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄
し、フローサイトメーターで総細胞に占めるＢリンパ球
およびＴリンパ球の割合ならびにＢリンパ球およびＴリ
ンパ球に占める死細胞の割合を測定し、Ｂリンパ球およ
びＴリンパ球の生細胞数を算出した。細胞代謝活性は、
培養の終わる３時間前に臭化３−(４,５−ジメチル−２
−チアゾリル)−２,５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウ
ムを５mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した
液を１穴当たり１０マイクロリットル加え、培養終了時
に２０％ドデシル硫酸ナトリウム溶液を１穴当たり５０
マイクロリットル加え、３７℃で１日放置後、マイクロ
プレートリーダーで培養液の吸光度５５０nmを測定する
ことにより細胞代謝活性を求めた。表２はその結果を示
す表である。Ｂリンパ球刺激群(１)および(２)におい
て、化合物(４)はＢリンパ球の生細胞数の増加および細
胞代謝活性の上昇を強度に抑制し、また、Ｔリンパ球刺
激群(１)および(２)においても、化合物(４)はＴリンパ
球の生細胞数の増加および細胞代謝活性の上昇を強度に
抑制した。無刺激群においては、化合物(４)のリンパ球
の生細胞数および細胞代謝活性に及ぼす影響はリンパ球
刺激下での影響に比べると僅かだった。この様に、化合
物(４)にはリンパ球が活性化されるときにより選択的に
働き、リンパ球を強度に抑制する作用が認められた。
自動血球計測装置で測定した後に、培養細胞液２００マ
イクロリットルにＲ−フィコエリトリンで標識したマウ
スＢリンパ球に対する特異抗体の抗マウスＣＤ４５Ｒ抗
体を１マイクログラム、フルオロセインイソチオシアネ
ートで標識したマウスＴリンパ球に対する特異抗体の抗
マウスＴ細胞レセプター(アルファ／ベータ)抗体を１マ
イクログラム、および死細胞を特異的に染色する７−ア
ミノアクチノマイシンＤを１マイクログラム加え、５℃
で３０分間放置した後、ＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄
し、フローサイトメーターで総細胞に占めるＢリンパ球
およびＴリンパ球の割合ならびにＢリンパ球およびＴリ
ンパ球に占める死細胞の割合を測定し、Ｂリンパ球およ
びＴリンパ球の生細胞数を算出した。細胞代謝活性は、
培養の終わる３時間前に臭化３−(４,５−ジメチル−２
−チアゾリル)−２,５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウ
ムを５mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した
液を１穴当たり１０マイクロリットル加え、培養終了時
に２０％ドデシル硫酸ナトリウム溶液を１穴当たり５０
マイクロリットル加え、３７℃で１日放置後、マイクロ
プレートリーダーで培養液の吸光度５５０nmを測定する
ことにより細胞代謝活性を求めた。表２はその結果を示
す表である。Ｂリンパ球刺激群(１)および(２)におい
て、化合物(４)はＢリンパ球の生細胞数の増加および細
胞代謝活性の上昇を強度に抑制し、また、Ｔリンパ球刺
激群(１)および(２)においても、化合物(４)はＴリンパ
球の生細胞数の増加および細胞代謝活性の上昇を強度に
抑制した。無刺激群においては、化合物(４)のリンパ球
の生細胞数および細胞代謝活性に及ぼす影響はリンパ球
刺激下での影響に比べると僅かだった。この様に、化合
物(４)にはリンパ球が活性化されるときにより選択的に
働き、リンパ球を強度に抑制する作用が認められた。
【００４５】
【表１】
【００４６】
【表２】
【００４７】試験例３ 本試験例では、製造例２で得た化合物(３)および製造例
４で得た化合物(６)を用いて、マウス由来リンパ球株細
胞に対する化合物(３)および化合物(６)の作用を調べる
ことにより、化合物(３)および化合物(６)のリンパ球代
謝活性抑制効果を検証した。マウス由来Ｂリンパ球株細
胞のＷＥＨＩ−２３１(ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７０２)あ
るいはマウス由来Ｔリンパ球株細胞のＳ４９.１(ＡＴＣ
Ｃ ＴＩＢ２８)を５×１０5／mlの濃度にＲＰＭＩ１６
４０培地で調製し、９６穴組織培養ブレートに１穴あた
り１００マイクロリットルを播種した。これらの細胞に
ＲＰＭＩ１６４０培地(対照)あるいは化合物(３)を４mg
／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した液、化合
物(６)を４mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解
した液をそれぞれ１穴当たり１００マイクロリットル加
え、３７℃の５％炭酸ガス培養器内で１８時間培養し
た。培養を終わる３時間前に臭化３−(４,５−ジメチル
−２−チアゾリル)−２,５−ジフェニル−２Ｈテトラゾ
リウムを５mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解
した液を１穴当たり１０マイクロリットル加え、培養終
了時に２０％ドデシル硫酸ナトリウム溶液を１穴当たり
５０マイクロリットル加え、３７℃で１日放置後、マイ
クロプレートリーダーで培養液の吸光度５５０nmを測定
することにより細胞代謝活性を求めた。表３はその結果
を示す表である。Ｂリンパ球株細胞の細胞代謝活性を化
合物(３)および化合物(６)は有意に抑制し、また、Ｔリ
ンパ球株細胞の細胞代謝活性を化合物(３)および化合物
(６)は有意に抑制した。化合物(３)および化合物(６)に
Ｂリンパ球活性抑制効果とＴリンパ球活性抑制効果が認
められた。
４で得た化合物(６)を用いて、マウス由来リンパ球株細
胞に対する化合物(３)および化合物(６)の作用を調べる
ことにより、化合物(３)および化合物(６)のリンパ球代
謝活性抑制効果を検証した。マウス由来Ｂリンパ球株細
胞のＷＥＨＩ−２３１(ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７０２)あ
るいはマウス由来Ｔリンパ球株細胞のＳ４９.１(ＡＴＣ
Ｃ ＴＩＢ２８)を５×１０5／mlの濃度にＲＰＭＩ１６
４０培地で調製し、９６穴組織培養ブレートに１穴あた
り１００マイクロリットルを播種した。これらの細胞に
ＲＰＭＩ１６４０培地(対照)あるいは化合物(３)を４mg
／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した液、化合
物(６)を４mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解
した液をそれぞれ１穴当たり１００マイクロリットル加
え、３７℃の５％炭酸ガス培養器内で１８時間培養し
た。培養を終わる３時間前に臭化３−(４,５−ジメチル
−２−チアゾリル)−２,５−ジフェニル−２Ｈテトラゾ
リウムを５mg／mlの濃度でＲＰＭＩ１６４０培地に溶解
した液を１穴当たり１０マイクロリットル加え、培養終
了時に２０％ドデシル硫酸ナトリウム溶液を１穴当たり
５０マイクロリットル加え、３７℃で１日放置後、マイ
クロプレートリーダーで培養液の吸光度５５０nmを測定
することにより細胞代謝活性を求めた。表３はその結果
を示す表である。Ｂリンパ球株細胞の細胞代謝活性を化
合物(３)および化合物(６)は有意に抑制し、また、Ｔリ
ンパ球株細胞の細胞代謝活性を化合物(３)および化合物
(６)は有意に抑制した。化合物(３)および化合物(６)に
Ｂリンパ球活性抑制効果とＴリンパ球活性抑制効果が認
められた。
【００４８】
【表３】
【００４９】
【発明の効果】以上記載したごとく、本発明によれば、
副作用の少ない、食品形態を含めて、常用が可能な免疫
抑制剤が提供できる。
副作用の少ない、食品形態を含めて、常用が可能な免疫
抑制剤が提供できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｈ 15/04 Ｃ０７Ｈ 15/04 Ａ
Claims (9)
- 【請求項１】 ３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ
−グルコースの還元末端グルコース残基がαまたはβグ
リコシル結合した基を有する式（１）で表される化合物
を有効成分とする免疫抑制剤。 【化１】 - 【請求項２】 式（２）で表される化合物を有効成分と
する請求項１記載の免疫抑制剤。 【化２】 - 【請求項３】 式（３）で表される化合物を有効成分と
する請求項１記載の免疫抑制剤。 【化３】 - 【請求項４】 式（４）で表される化合物を有効成分と
する請求項１記載の免疫抑制剤。 【化４】 - 【請求項５】 ３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ
−グルコースの非還元末端グルコース残基に、少なくと
も１つのガラクトース残基がグリコシド結合した糖類を
その構成単位として含有する化合物を有効成分とする免
疫抑制剤。 - 【請求項６】 式（５）の化合物を有効成分とする請求
項５記載の免疫抑制剤。 【化５】 - 【請求項７】 式（６）の化合物を有効成分とする請求
項５記載の免疫抑制剤。 【化６】 - 【請求項８】 Ｂリンパ球活性抑制剤である請求項１〜
７いずれか１項記載の免疫抑制剤。 - 【請求項９】 Ｔリンパ球活性抑制剤である請求項１〜
７いずれか１項記載の免疫抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8042654A JPH09227382A (ja) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | 免疫抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8042654A JPH09227382A (ja) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | 免疫抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09227382A true JPH09227382A (ja) | 1997-09-02 |
Family
ID=12642005
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8042654A Pending JPH09227382A (ja) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | 免疫抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09227382A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006006267A1 (ja) * | 2004-07-07 | 2006-01-19 | House Wellness Foods Corporation | 抗ストレス剤 |
| EP2027862A1 (en) * | 2006-06-14 | 2009-02-25 | House Wellness Foods Corporation | Composition for enhancing immune function |
| WO2022092495A1 (ko) * | 2020-10-27 | 2022-05-05 | 쿼럼바이오 주식회사 | 갈락토스를 함유하는 면역과민 질병의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물 |
-
1996
- 1996-02-29 JP JP8042654A patent/JPH09227382A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006006267A1 (ja) * | 2004-07-07 | 2006-01-19 | House Wellness Foods Corporation | 抗ストレス剤 |
| EP2027862A1 (en) * | 2006-06-14 | 2009-02-25 | House Wellness Foods Corporation | Composition for enhancing immune function |
| EP2027862A4 (en) * | 2006-06-14 | 2012-12-05 | House Wellness Foods Corp | COMPOSITION FOR IMPROVING IMMUNE FUNCTION |
| WO2022092495A1 (ko) * | 2020-10-27 | 2022-05-05 | 쿼럼바이오 주식회사 | 갈락토스를 함유하는 면역과민 질병의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물 |
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