JPH0915155A

JPH0915155A - タンパク質の測定方法

Info

Publication number: JPH0915155A
Application number: JP18634195A
Authority: JP
Inventors: Kaoru Ou; かおる王; Giyoumei Toku; 暁鳴竇
Original assignee: KDK Corp; Kyoto Daiichi Kagaku KK
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 1995-06-28
Filing date: 1995-06-28
Publication date: 1997-01-17

Abstract

(57)【要約】【目的】タンパク質の定量測定を簡単で迅速に行なえ
るようにする。【構成】タンパク質を含む試料溶液５に光源２２から
の単一波長の励起光を照射してその試料溶液５からの散
乱光を受光し、分光器５２で分光して光散乱スペクトル
を得る。その光散乱スペクトルのうち、励起波長に対す
るシフト波数にして１００〜３１００ｃｍ-¹の光散乱ス
ペクトルの強度又はそのうちの適当な範囲の積分値を用
いてタンパク質を定量測定する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は試料溶液中のタンパク質
濃度を測定する方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】尿タンパクは正常時でも１日に２０〜８
０ｍｇ排泄されるが、様々な病的状態において尿中に排
泄されるタンパク質が変動する。つまり、尿中タンパク
量は病態の診断を行なう指標となるものであるため、そ
の測定精度及び確度は高水準である必要がある。また、
尿中に排泄される各種タンパク質は、それぞれが指標と
なる疾患が異なるので、それぞれを個別に認識できるこ
と、すなわち特異性のある検査法が必要である。

【０００３】尿タンパク量を測定する方法としては、古
くは尿にタンパク沈殿試薬を添加し、生ずる沈澱層の厚
さからタンパク質濃度を概測するEsbach法（ピクリン酸
使用）や末吉法(塩化第二水銀使用）などが用いられた
が、これらの方法は特異性と精度に問題があった。現在
では、サリチルスルホン酸やトリクロル酢酸による混濁
を比濁する方法（比濁法）や、タンパク質と色素との結
合を利用した比色法が利用されている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】比濁法では、タンパク
質の種類によって濁度が異なる。特異性に欠ける。被測
定物質が強アルカリ性である場合は酸性の沈殿試薬を完
全に中和し、偽陰性の原因となる。また、混濁度の観察
も標準化されておらず、個人差がでるという問題もあ
る。比色法では、ヘモグロビンや各種グロブリンはアル
ブミンほど鋭敏に反応せず、また、被測定物質が高度に
緩衝化されたアルカリ性である場合は偽陽性の原因にな
る。しかも、色調の判別が困難である。

【０００５】尿は時間が経つと有形成分が変化をきた
し、その性質を変えてしまうため、尿検査は迅速に行わ
れる必要がある。しかし、比色法ではｐＨ指示薬と反応
させ、変化したその色調で判定し、比濁法では加熱や酸
の添加によってタンパク質を沈殿させその混濁度を判定
している。つまり、比色法や比濁法ではそれらの反応が
必要であるため、煩雑で、迅速性に欠ける。このよう
に、従来の方法はいずれも潜在的な誤差要因を包含して
いる。本発明は上記のような媒介反応を介さず、簡単で
迅速に測定できるタンパク質の定量方法を提供すること
を目的とするものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明では被測定物質中
のタンパク質が固有の光散乱スペクトルをもつことを見
いだし、その光散乱スペクトルを利用してそのピーク強
度又は適当な波数範囲にわたる積算強度からタンパク質
濃度を定量測定するものである。タンパク質水溶液試料
からの光散乱スペクトルの主なものはブロードな蛍光ス
ペクトルであるが、タンパク質の種類と励起波長によっ
ては蛍光スペクトルにシャープなラマン散乱スペクトル
が重なって現れる。そこで、本発明が対象にする光散乱
スペクトルは、蛍光とラマン散乱をともに含んだもので
ある。

【０００７】すなわち、本発明は、タンパク質を含む試
料溶液に単一波長の励起光を照射してその試料溶液から
の散乱光を受光し分光して光散乱スペクトルを得、その
光散乱スペクトルのうち、励起波長に対するシフト波数
にして１００〜３１００ｃｍ-¹のスペクトルのピーク強
度又はそのうちの適当な範囲の積分値を用いてタンパク
質を定量測定する測定方法である。

【０００８】タンパク質がアルブミンである場合は、励
起波長から８１０〜８４０ｃｍ-¹にシフトしたスペクト
ルのピーク強度、又は励起波長６３２.８ｎｍから２５
６〜１６２０ｃｍ-¹もしくは励起波長５１４.５ｎｍか
ら８３７〜３０６０ｃｍ-¹にシフトしたスペクトルの適
当な範囲の積分値を用いるのが好ましい。

【０００９】タンパク質がγ−グロブリンである場合
は、励起波長から１７５〜１９５ｃｍ-¹、４２５〜４５
０ｃｍ-¹、６４０〜６７０ｃｍ-¹、８２０〜８４５ｃｍ
-¹、８４５〜８７０ｃｍ-¹、１３７０〜１４００ｃｍ
-¹、１５７５〜１６２０ｃｍ-¹、１８５０〜１９００ｃ
ｍ-¹、２０００〜２２００ｃｍ-¹、２３５０〜２４００
ｃｍ-¹又は２４００〜２４６０ｃｍ-¹にシフトしたスペ
クトルのピーク強度を用いるのが好ましい。

【００１０】タンパク質がヘモグロビンである場合は、
励起波長から６４０〜６７０ｃｍ-¹、８２０〜８４５ｃ
ｍ-¹、１３７０〜１４００ｃｍ-¹、１５７５〜１６２０
ｃｍ-¹、１８５０〜１９００ｃｍ-¹、２０００〜２２０
０ｃｍ-¹、２３５０〜２４００ｃｍ-¹又は２４００〜２
４６０ｃｍ-¹にシフトしたスペクトルのピーク強度を用
いるのが好ましい。

【００１１】

【実施例】ここで、本発明の測定方法を実施する測定装
置の幾つかの例を図１から図６に示す。図１はその測定
装置を概略的に表わしたものであり、単一波長光を発生
する励起光源及びその励起光源からの光束を試料用光束
と補正用光束とに分割するビームスプリッタを備えた励
起光源部２と、試料に試料用光束が照射される試料部４
と、試料に試料用光束が照射されて発生した散乱光から
励起光と同じ波長成分を除去して蛍光とラマン散乱光を
含んだ測定対象光を取り出すフィルタ及びビームを調整
する光学系を備えた測定対象光学調整部６と、励起光源
部２でハーフミラーにより分割された補正用光束を調整
する補正光学調整部８と、測定対象光学調整部６から出
射した光束と補正光学調整部８から出射した補正用光束
とを同一光軸上におく合波手段１０と、合波手段１０か
ら出射した光束を分光する分光器及びその分光器により
分光されたスペクトル光を検出する検出器を備えた１個
の分光処理部１２と、分光処理部１２の検出器により検
出された分光スペクトル中の励起光成分の検出強度を基
準にして測定対象光強度を補正する機能を有するデータ
処理部１４とを備えている。

【００１２】補正用光束は光源の発光強度の変動を補正
するためのものであり、そのような補正を行なわないの
であれば、励起光源部２でのビームスプリッタ、補正光
学調整部８及び合波手段１０は不要になる。測定対象光
学調整部６におけるフィルタ手段は、励起光波長をノッ
チ領域に含むホログラフィック・ノッチ・フィルタ、励
起光波長を含みそれより短波長側を遮蔽するカットフィ
ルタ、励起光波長成分を透過させて除去し測定対象光成
分を反射させる特性をもつバンドパスフィルタ、及び励
起光波長を透過又は反射により除去するホログラフィッ
ク・ビームスプリッタのいずれかであることが好まし
い。

【００１３】また、分光処理部１２はマルチチャンネル
光検出器を備え、測定しようとする波長領域を同時に検
出するポリクロメータであることが好ましい。分光処理
部１２がポリクロメータであるときは、測定しようとす
る波長領域を同時に検出することができ、所定領域の測
定対象光スペクトルと励起光とを同時に検出することが
できる。その結果、測定対象光の各波長の検出時間と励
起光との検出時間に差が生じない。しかし、測定対象光
の各波長の検出時間と励起光との検出時間に差が生じて
もよい場合は、分光処理部１２として波長走査型の分光
器と単チャンネル光検出器を備えて測定しようとする波
長領域を順次検出するようにしてもよい。

【００１４】ホログラフィック・ノッチ・フィルタは、
所望の波長領域のみを遮蔽し、その他の領域の波長光を
透過させるものである。その遮蔽される領域（ノッチ領
域）に励起光波長が含まれるように設定されたものを使
用することにより、測定対象光学調整部６から出射する
光束は励起光成分を含まず、測定対象光成分のみを含ん
だものとなる。一方、補正用光束は光源からの励起光の
みを含み、試料を経ていないため、試料には依存せず、
光源からの強度変動を忠実に表わしたものとなる。

【００１５】図２から図６に図１のブロック図を詳細に
表わした具体的な例を示す。図２は測定対象光学調整部
６のフィルタ手段として、励起光波長をノッチ領域に含
むホログラフィック・ノッチ・フィルタ、又は励起光波
長を含みそれより短波長側を遮蔽するカットフィルタを
用い、試料に対して励起光と１８０度方向に測定対象光
を受光する実施例を表わしたものである。励起光源部２
には光源２２が設けられ、光源２２からの励起光を試料
用光束２０ｓと補正用光束２０ｒに分割するビームスプ
リッタとしてハーフミラー２６が配置されている。光源
２２としては、例えばレーザ装置が用いられる。レーザ
装置としては、連続発振をするＡｒイオンレーザ、Ｋｒ
イオンレーザ、Ｈｅ−Ｎｅレーザ、Ｈｅ−Ｃｄレーザ、
Ｎｄ：ＹＡＧレーザ、半導体レーザ、又はパルスレーザ
などを用いることができ、近紫外域から近赤外域に渡る
広い波長範囲のレーザから選択して利用することができ
る。レーザ装置以外の光源としてハロゲンランプなどの
多波長光を発生する光源を分光器と組み合わせて用いる
こともできる。

【００１６】励起光源部２には、試料部４の試料５に試
料用光束２０ｓを収束させるために、ハーフミラー２６
を挾んで光源集光レンズ２４と収束レンズ２８が配置さ
れている。試料部４には試料５がセルに入れて設置され
る。励起光源部２からの試料用光束２０ｓは、測定対象
光学調整部６に配置されたハーフミラー３２で反射され
て試料部４の試料５に照射される。測定対象光学調整部
６では、ハーフミラー３２を透過してきた試料５からの
散乱光を分光器の入口スリット５０に収束させるため
に、集光レンズ３４，３６が設けられている。測定対象
光学調整部６では集光レンズ３４と３６の間に励起光と
同じ波長成分を除去して測定対象光を取り出すフィルタ
として、ノッチ領域に励起光の波長を含むように設定さ
れたホログラフィック・ノッチ・フィルタ３８が配置さ
れている。ホログラフィック・ノッチ・フィルタは例え
ば KAISER OPTICAL SYSTEMS. INC.（アメリカ）から入
手することができる。ホログラフィック・ノッチ・フィ
ルタ３８は、例えばノッチ領域に含まれる波長光を完全
に遮蔽し、ノッチ領域以外の波長領域の光は８０％以上
を透過させる特性をもっている。

【００１７】測定対象光学調整部６の集光レンズ３６と
分光器の入口スリット５０との間には合波手段としてハ
ーフミラー４０が配置されており、測定対象光はそのハ
ーフミラー４０を透過して分光器５２に入射する。励起
光源部２でハーフミラー２６により分割された補正用光
束２０ｒを合波手段のハーフミラー４０へ導く補正光学
調整部８が設置されており、補正光学調整部８には光量
を減衰させる減光フィルタ４２、励起光源部２のハーフ
ミラー２６で発生した波長光を遮蔽し、光源２２がレー
ザ装置である場合にそのレーザ光からサイドバンドを遮
蔽するためのバンドパス・フィルタ４６、及び光路を曲
げるミラー４４が配置されている。補正光学調整部８に
よりハーフミラー４０を経て入口スリット５０に導かれ
る補正用光束２０ｒは、光源集光レンズ２４によって入
口スリット５０に集光する。

【００１８】ハーフミラー４０では測定対象光学調整部
６から出射した測定対象光と、補正光学調整部８から導
かれた補正用光束２０ｒとが同一光軸上に導かれ、入口
スリット５０を経て分光処理部１２の分光器５２に導か
れる。分光器５２はポリクロメータであり、入射光を分
光する回折格子５４と、回折格子５４により分光された
スペクトル光を所定の波長領域にわたって同時に検出す
るために、回折格子５４の分散方向に沿って複数の光検
出素子が配置されたマルチチャンネル光検出器５６とを
備えている。図２の回折格子５４は凹面回折格子である
が、平面回折格子と球面鏡を組み合わせたツェルニー・
ターナー型と称される分光器や、透過型回折格子を用い
た分光器であってもよい。

【００１９】６０は各部の動作を制御したり、光検出器
５６が検出した信号を処理する処理演算コントロール部
であり、その中には光検出器５６により検出された分光
スペクトル中の励起光成分の検出強度を基準にして測定
対象光の検出強度を補正するデータ処理部としての機能
も含んでおり、光源の変動が補正されたラマン散乱スペ
クトルを演算したり、測定対象光強度から試料の定性や
定量も行なう。６２は処理演算コントロール部６０で処
理されたデータを出力するプリンタやディスプレイなど
の出力装置である。図２の実施例では、ホログラフィッ
ク・ノッチ・フィルタ３８に代えて、励起光波長を含み
それより短波長側を遮蔽するシャープな波長特性をもつ
シャープカットフィルタを用いていもよい。

【００２０】図３は図２の実施例と同様に、測定対象光
学調整部６のフィルタ手段としてホログラフィック・ノ
ッチ・フィルタ又はカットフィルタを用いた実施例であ
るが、試料に対して励起光と９０度方向に測定対象光を
受光するようにした実施例を表わしたものである。この
場合、試料用光束２０ｓを試料５に照射し、試料５から
の散乱光を測定対象光学調整部６の集光レンズ３４に入
射させるハーフミラー３２は不要であり、試料用光束２
０ｓは励起光源部２の光源集光レンズ２４と収束レンズ
２８で収束されて試料５に直接照射され、試料５からの
散乱光は測定対象光学調整部６の集光レンズ３４に直接
入射する。

【００２１】バンドパス・フィルタ４６は図２では補正
光学調整部の光路上に配置しているが、図３では励起光
源部で励起光源からの光束がビームスプリッタ２６によ
り試料用光束と補正用光束とに分割される前の光路上に
配置されている。バンドパス・フィルタ４６を図３の位
置に配置することにより、試料用光束と補正用光束の両
方からレーザ光のサイドバンドを遮蔽することができ
る。また、図３では補正光学調整部の光路上にさらに集
光レンズ４５を配置しているが、このレンズ４５は補正
用光束をスリット５０の位置に集光させる光量調整用の
レンズであり、補正用光束の光量が十分に大きい場合は
このレンズ４５は不要である。

【００２２】図４（Ａ）は測定対象光学調整部６のフィ
ルタ手段として、励起光を反射しラマン光を透過させる
特性をもつホログラフィック・ビームスプリッタ７０を
用い、試料に対して励起光と１８０度方向に測定対象光
を受光する実施例を表わしたものである。ホログラフィ
ック・ビームスプリッタ７０は、同図（Ｂ）に示される
ように、試料用光束２０ｓを反射して試料５に照射し、
測定対象光とレイリ散乱光を含む試料５からの散乱光７
２のうち、測定対象光７４のみを透過させて測定対象光
学調整部６の集光レンズ３４に入射させる。

【００２３】図５（Ａ）は測定対象光学調整部６のフィ
ルタ手段として、励起光波長成分を透過させて除去し測
定対象光成分を反射させる特性をもつバンドパスフィル
タ８２を用い、試料に対して励起光と９０度方向に測定
対象光を受光する実施例を表わしたものである。バンド
パスフィルタ８２は、同図（Ｂ）に示されるように、透
過集光型ミラー８０のミラー面側に配置され、透過集光
型ミラー８０と反対側にはビームストッパ８４が配置さ
れている。測定対象光とレイリ散乱光を含む試料５から
の散乱光７２は、集光レンズ３４ａ，３４ｂで集光され
て透過集光型ミラー８０の背面からその入射穴を通って
バンドパスフィルタ８２に入射する。バンドパスフィル
タ８２ではレイリ光７６は透過してビームストッパ８４
で吸収され、測定対象光７４は反射し、透過集光型ミラ
ー８０のミラー面で集光され、ハーフミラー４０を経て
入口スリット５０から分光器に入射する。補正光学調整
部８では光路を１８０度曲げるため、２つのミラー４４
ａ，４４ｂが配置されている。

【００２４】図６は図５と同じく、測定対象光学調整部
６のフィルタ手段として、励起光波長成分を透過させて
除去し測定対象光成分を反射させる特性をもつバンドパ
スフィルタ８２を用いた例であるが、試料に対して励起
光と１８０度方向に測定対象光を受光するようにした実
施例を表わしたものである。試料用光束２０ｓを試料５
に照射し、試料５からの散乱光を測定対象光学調整部６
の集光レンズ３４ａに入射させるハーフミラー３２が配
置されている。

【００２５】図７から図１３に尿中タンパクであるアル
ブミン、γ−グロブリン及びヘモグロビンのそれぞれの
水溶液について測定を行った結果を示す。図７と図８は
アルブミン水溶液（ヒト血清由来）についての測定結果
である。図７（Ａ）は励起光源としてＨｅ−Ｎｅレーザ
（出力７ｍＷ）を用い、その６３２.８ｎｍの波長光を
励起光として試料水溶液に照射して得られた光散乱スペ
クトル、図７（Ｂ）は同じ試料に励起光源としてＡｒレ
ーザ（出力１０ｍＷ）を用い、その５１４.５ｎｍの波
長光を励起光として試料水溶液に照射して得られた光散
乱スペクトルである。いずれのスペクトルも励起波長か
ら１００〜３１００ｃｍ-¹又はそれ以上の範囲にわたっ
てブロードな形状をしている。

【００２６】図８（Ａ）は図７（Ａ）の光散乱スペクト
ルを利用し、そのシフト波数が８２９ｃｍ-¹の位置のス
ペクトル強度と試料中のアルブミン濃度との相関関係を
測定した結果を表わしたものである。図８（Ｂ）は同じ
図７（Ａ）のスペクトルのうち、シフト波数２５６〜１
６２０ｃｍ-¹の範囲の面積と試料中のアルブミン濃度と
の相関関係を測定した結果を表わしたものである。

【００２７】図８の相関関係は、いずれも相関係数Ｒ²
が０.９９以上の良好な結果を示しており、これらの相
関関係を検量線として利用することにより、試料中のア
ルブミン濃度を定量分析することができる。相関係数Ｒ
²は次の（１）式に示された相関係数Ｒを自乗したもの
である。Ｒ＝Σ[(ｘｉ−Ｘ)(ｙｉ−Ｙ)]／{[Σ(ｘｉ−Ｘ）²][Σ(ｙｉ−Ｙ)²]} ……（１）ｘｉ：測定試料の各測定点の濃度ｙｉ：ｘｉに対する測定光強度Ｘ：測定試料の各測定点の濃度の平均値Ｙ：測定光強度の平均値

【００２８】図９から図１１はγ−グロブリン水溶液
（ヒト血清由来）についての測定結果である。図９
（Ａ）は励起光源としてＨｅ−Ｎｅレーザ（出力７ｍ
Ｗ）を用い、その６３２.８ｎｍの波長光を励起光とし
て試料水溶液に照射して得られたラマンスペクトル、図
９（Ｂ）は同じ試料に励起光源としてＡｒレーザ（出力
１０ｍＷ）を用い、その５１４.５ｎｍの波長光を励起
光として試料水溶液に照射して得られた光散乱スペクト
ルである。

【００２９】図９（Ａ）のスペクトルは、励起波長から
１００〜４０００ｃｍ-¹にわたるブロードな形状のスペ
クトルに、励起波長から１７５〜１９５ｃｍ-¹、４２５
〜４５０ｃｍ-¹、６４０〜６７０ｃｍ-¹、８２０〜８４
５ｃｍ-¹、８４５〜８７０ｃｍ-¹、１３７０〜１４００
ｃｍ-¹、１５７５〜１６２０ｃｍ-¹、１８５０〜１９０
０ｃｍ-¹、２０００〜２２００ｃｍ-¹、２３５０〜２４
００ｃｍ-¹及び２４００〜２４６０ｃｍ-¹にシフトした
位置に鋭いピークをもっている。図９（Ｂ）のスペクト
ルは励起波長から１００〜４０００ｃｍ-¹にわたるブロ
ードな形状をしている。

【００３０】図１０と図１１の（Ａ）から（Ｆ）は、図
９（Ａ）のスペクトルを利用し、そのシフト波数がそれ
ぞれ８３７.２５７ｃｍ-¹、１３８３.４９ｃｍ-¹、１５
９２ｃｍ-¹、１８７７ｃｍ-¹、２１２５ｃｍ-¹及び２３
７０ｃｍ-¹の位置のスペクトル強度と試料中のγ−グロ
ブリン濃度との相関関係を測定した結果を表わしたもの
である。（Ｄ）の相関関係の相関係数Ｒ²は０.９７以
上、それ以外の相関関係の相関係数Ｒ²は０.９９以上の
良好な結果を示している。他のシフト波数位置でのピー
ク強度、及び適当な波数範囲の積分強度についても、γ
−グロブリン濃度との間に良好な相関関係が得られてい
る。これらの相関関係を検量線として利用することによ
り、試料中のγ−グロブリン濃度を定量分析することが
できる。

【００３１】図１２と図１３はヘモグロビン水溶液（牛
血清由来）についての測定結果である。図１２（Ａ）は
励起光源としてＨｅ−Ｎｅレーザ（出力７ｍＷ）を用
い、その６３２.８ｎｍの波長光を励起光として試料水
溶液に照射して得られた光散乱スペクトル、図１２
（Ｂ）は同じ試料に励起光源としてＡｒレーザ（出力１
０ｍＷ）を用い、その５１４.５ｎｍの波長光を励起光
として試料水溶液に照射して得られた光散乱スペクトル
である。

【００３２】図１２（Ａ）のスペクトルは、励起波長か
ら１００〜４１００ｃｍ-¹にわたるブロードな形状のス
ペクトルに、励起波長から６４０〜６７０ｃｍ-¹、８２
０〜８４５ｃｍ-¹、１３７０〜１４００ｃｍ-¹、１５７
５〜１６２０ｃｍ-¹、１８５０〜１９００ｃｍ-¹、２０
００〜２２００ｃｍ-¹、２３５０〜２４００ｃｍ-¹及び
２４００〜２４６０ｃｍ-¹にシフトした位置に鋭いピー
クをもっている。図１２（Ｂ）のスペクトルは励起波長
から１００〜４１００ｃｍ-¹にわたるブロードな形状を
している。

【００３３】図１３（Ａ）から（Ｃ）は、図１２（Ａ）
の光散乱スペクトルを利用し、そのシフト波数がそれぞ
れ１８７０ｃｍ-¹、２１２５ｃｍ-¹及び２３７０ｃｍ-¹
の位置のスペクトル強度と試料中のヘモグロビン濃度と
の相関関係を測定した結果を表わしたものである。いず
れの相関関係の相関係数Ｒ²も０.９９以上の良好な結果
を示している。これらの相関関係を検量線として利用す
ることにより、試料中のヘモグロビン濃度を定量分析す
ることができる。

【００３４】

【発明の効果】本発明では、試料溶液に単一波長の励起
光を照射してその試料溶液からの散乱光を受光し分光し
て光散乱スペクトルを得、その光散乱スペクトルの固有
のピークのピーク強度、又は光散乱スペクトルの適当な
範囲の積分値を用いてタンパク質を定量測定するので、
酵素反応や化学反応などの媒介反応や中間反応を介さず
に試料を直接定量することができる。試薬を使用しない
ので、共存物質の影響を受けにくく、反応に伴う誤差を
排除できる。サンプリングから測定までの間に反応など
の操作を要しないので、測定を簡便で、迅速に行なうこ
とができる。本発明はまた高感度であるため、微量の変
化や微量成分の検出にも効果的である。このように、本
発明は尿中微量タンパクの定性及び定量検査に応用する
のに適する。

【００３５】

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明が実施される測定装置を概略的に示すブ
ロック図である。

【図２】測定対象光学調整部のフィルタ手段としてホロ
グラフィック・ノッチ・フィルタを用い、試料に対して
励起光と１８０度方向に測定対象光を受光する測定装置
を示す配置図である。

【図３】測定対象光学調整部のフィルタ手段としてホロ
グラフィック・ノッチ・フィルタを用い、試料に対して
励起光と９０方向に測定対象光を受光する測定装置を示
す配置図である。

【図４】測定対象光学調整部のフィルタ手段としてホロ
グラフィック・ビームスプリッタを用い、試料に対して
励起光と１８０度方向に測定対象光を受光する測定装置
を表わしたものであり、（Ａ）は配置図、（Ｂ）はホロ
グラフィック・ビームスプリッタ部分を示す概略断面図
である。

【図５】測定対象光学調整部のフィルタ手段としてバン
ドパスフィルタを用い、試料に対して励起光と９０度方
向に測定対象光を受光する測定装置を表わしたものであ
り、（Ａ）は配置図、（Ｂ）はバンドパスフィルタ部分
を示す概略断面図である。

【図６】測定対象光学調整部のフィルタ手段としてバン
ドパスフィルタを用い、試料に対して励起光と１８０度
方向に測定対象光を受光する測定装置を示す配置図であ
る。

【図７】アルブミン水溶液試料から得られた光散乱スペ
クトルであり、（Ａ）はＨｅ−Ｎｅレーザの６３２.８
ｎｍの波長光を励起光として照射した場合、（Ｂ）はＡ
ｒレーザの５１４.５ｎｍの波長光を励起光として照射
した場合である。

【図８】図７（Ａ）の光散乱スペクトルにおけるスペク
トル強度又は面積と試料中のアルブミン濃度との相関関
係を示す図であり、（Ａ）はシフト波数が８２９ｃｍ-¹
の位置でのスペクトル強度の結果、（Ｂ）はシフト波数
２５６〜１６２０ｃｍ-¹の範囲の面積の結果である。

【図９】γ−グロブリン水溶液試料から得られた光散乱
スペクトルであり、（Ａ）はＨｅ−Ｎｅレーザの６３
２.８ｎｍの波長光を励起光として照射した場合、
（Ｂ）はＡｒレーザの５１４.５ｎｍの波長光を励起光
として照射した場合である。

【図１０】（Ａ）から（Ｃ）は図９（Ａ）の光散乱スペ
クトルにおいて、シフト波数がそれぞれ８３７.２５７
ｃｍ-¹、１３８３.４９ｃｍ-¹、１５９２ｃｍ-¹の位置
のスペクトル強度と試料中のγ−グロブリン濃度との相
関関係を示す図である。

【図１１】（Ｄ）から（Ｆ）は図９（Ａ）の光散乱スペ
クトルにおいて、シフト波数がそれぞれ１８７７ｃｍ
-¹、２１２５ｃｍ-¹、２３７０ｃｍ-¹の位置のスペクト
ル強度と試料中のγ−グロブリン濃度との相関関係を示
す図である。

【図１２】ヘモグロビン水溶液試料から得られた光散乱
スペクトルであり、（Ａ）はＨｅ−Ｎｅレーザの６３
２.８ｎｍの波長光を励起光として照射した場合、
（Ｂ）はＡｒレーザの５１４.５ｎｍの波長光を励起光
として照射した場合である。

【図１３】（Ａ）から（Ｃ）は図１２（Ａ）の光散乱ス
ペクトルにおいて、シフト波数がそれぞれ１８７０ｃｍ
-¹、２１２５ｃｍ-¹、２３７０ｃｍ-¹の位置のスペクト
ル強度と試料中のヘモグロビン濃度との相関関係を示す
図である。

【符号の説明】

２励起光源部４試料部６測定対象光学調整部１０合波手段１２分光処理部１４データ処理部２０ｓ試料用光束２０ｒ補正用光束３８ホログラフィック・ノッチ・フィルタ４０ハーフミラー５２分光器７０ホログラフィック・ビームスプリッタ８０透過集光型ミラー８２バンドパスフィルタ

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【手続補正書】

【提出日】平成７年９月６日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２７】図８の相関関係は、いずれも相関係数Ｒ²
が０.９９以上の良好な結果を示しており、これらの相
関関係を検量線として利用することにより、試料中のア
ルブミン濃度を定量分析することができる。相関係数Ｒ
²は次の（１）式に示された相関係数Ｒを自乗したもの
である。Ｒ＝Σ[(ｘｉ−Ｘ)(ｙｉ−Ｙ)]／{[Σ(ｘｉ−Ｘ)²][Σ(ｙｉ−Ｙ)²]}^1/2 ……（１）ｘｉ：測定試料の各測定点の濃度ｙｉ：ｘｉに対する測定光強度Ｘ：測定試料の各測定点の濃度の平均値Ｙ：測定光強度の平均値

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】タンパク質を含む試料溶液に単一波長の
励起光を照射してその試料溶液からの散乱光を受光し分
光して光散乱スペクトルを得、その光散乱スペクトルの
うち、励起波長に対するシフト波数にして１００〜３１
００ｃｍ-¹のスペクトルのピーク強度又はそのうちの適
当な範囲の積分値を用いてタンパク質を定量測定するこ
とを特徴とするタンパク質の測定方法。
【請求項２】タンパク質がアルブミンであって、励起
波長から８１０〜８４０ｃｍ-¹にシフトしたスペクトル
のピーク強度、又は励起波長６３２.８ｎｍから２５６
〜１６２０ｃｍ-¹もしくは励起波長５１４.５ｎｍから
８３７〜３０６０ｃｍ-¹にシフトしたスペクトルの適当
な範囲の積分値を用いる請求項１に記載のタンパク質の
測定方法。
【請求項３】タンパク質がγ−グロブリンであって、
励起波長から１７５〜１９５ｃｍ-¹、４２５〜４５０ｃ
ｍ-¹、６４０〜６７０ｃｍ-¹、８２０〜８４５ｃｍ-¹、
８４５〜８７０ｃｍ-¹、１３７０〜１４００ｃｍ-¹、１
５７５〜１６２０ｃｍ-¹、１８５０〜１９００ｃｍ-¹、
２０００〜２２００ｃｍ-¹、２３５０〜２４００ｃｍ-¹
又は２４００〜２４６０ｃｍ-¹にシフトしたスペクトル
のピーク強度を用いる請求項１に記載のタンパク質の測
定方法。
【請求項４】タンパク質がヘモグロビンであって、励
起波長から６４０〜６７０ｃｍ-¹、８２０〜８４５ｃｍ
-¹、１３７０〜１４００ｃｍ-¹、１５７５〜１６２０ｃ
ｍ-¹、１８５０〜１９００ｃｍ-¹、２０００〜２２００
ｃｍ-¹、２３５０〜２４００ｃｍ-¹又は２４００〜２４
６０ｃｍ-¹にシフトしたスペクトルのピーク強度を用い
る請求項１に記載のタンパク質の測定方法。