JPH09127089A - アミノ酸分析計 - Google Patents
アミノ酸分析計Info
- Publication number
- JPH09127089A JPH09127089A JP28560895A JP28560895A JPH09127089A JP H09127089 A JPH09127089 A JP H09127089A JP 28560895 A JP28560895 A JP 28560895A JP 28560895 A JP28560895 A JP 28560895A JP H09127089 A JPH09127089 A JP H09127089A
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- Japan
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- amino acid
- column
- eluent
- lithium
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- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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Abstract
(57)【要約】
【課題】従来、ナトリウムタイプの溶離液を用いる標準
アミノ酸分析とリチウムタイプの溶離液を用いる生体液
アミノ酸分析を、別々の２本のカラムで測定していた
が、標準アミノ酸分析と生体液アミノ酸分析を同一カラ
ムで効率良く測定できるようにする。 【解決手段】アミノ酸分析計の流路系を用いて１から４
にリチウムタイプの溶離液を入れ、５をカラム洗浄用と
した。これらを任意の割合で混合できる低圧グラジエン
トポンプ６で送液する。途中にオートサンプラ７でサン
プルを注入し、注入されたサンプルは、溶離液とともに
温度コントロール可能なカラムオーブン８に設置された
カラム９で各アミノ酸成分を分離する。反応液は２液分
割型のニンヒドリン試薬１１・１２をポンプ１５を用い
てミキサ１０へ送り、カラム９により分離されたアミノ
酸成分とでニンヒドリン反応を行う。
アミノ酸分析とリチウムタイプの溶離液を用いる生体液
アミノ酸分析を、別々の２本のカラムで測定していた
が、標準アミノ酸分析と生体液アミノ酸分析を同一カラ
ムで効率良く測定できるようにする。 【解決手段】アミノ酸分析計の流路系を用いて１から４
にリチウムタイプの溶離液を入れ、５をカラム洗浄用と
した。これらを任意の割合で混合できる低圧グラジエン
トポンプ６で送液する。途中にオートサンプラ７でサン
プルを注入し、注入されたサンプルは、溶離液とともに
温度コントロール可能なカラムオーブン８に設置された
カラム９で各アミノ酸成分を分離する。反応液は２液分
割型のニンヒドリン試薬１１・１２をポンプ１５を用い
てミキサ１０へ送り、カラム９により分離されたアミノ
酸成分とでニンヒドリン反応を行う。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】イオン交換によるアミノ酸分
析は、ナトリウムタイプの溶離液を用いる、タンパク構
成アミノ酸の一次構造の最終確認や食品の品質管理など
に利用される方法の標準アミノ酸分析法と、リチウムタ
イプの溶離液を用いる、代謝異常症の診断のために利用
される生体液アミノ酸分析法がある。
析は、ナトリウムタイプの溶離液を用いる、タンパク構
成アミノ酸の一次構造の最終確認や食品の品質管理など
に利用される方法の標準アミノ酸分析法と、リチウムタ
イプの溶離液を用いる、代謝異常症の診断のために利用
される生体液アミノ酸分析法がある。
【０００２】これら分析法はそれぞれの特長があり、タ
ンパク質構成アミノ酸成分を測定する標準アミノ酸分析
法は、成分数が少ないため分析時間が約３０分から６０
分である。一方、生体液中のアミノ酸成分を測定する生
体液アミノ酸分析法は、成分数が多く分析に要する時間
が前者と比べると著しく長く１１０分から１５０分であ
る。これらの分析は、同一の分析計を用いて測定される
ため、それぞれの目的に合わせたカラムと溶離液を準備
しなければならなかった。本発明を用いると今までタイ
プの異なる２本のカラムと溶離液を必要とせず１種類の
カラムと溶離液を変化させずに行えることが可能とな
る。さらに、カラムを１本化することで１分析のコスト
を大幅に低減できることも可能となる。
ンパク質構成アミノ酸成分を測定する標準アミノ酸分析
法は、成分数が少ないため分析時間が約３０分から６０
分である。一方、生体液中のアミノ酸成分を測定する生
体液アミノ酸分析法は、成分数が多く分析に要する時間
が前者と比べると著しく長く１１０分から１５０分であ
る。これらの分析は、同一の分析計を用いて測定される
ため、それぞれの目的に合わせたカラムと溶離液を準備
しなければならなかった。本発明を用いると今までタイ
プの異なる２本のカラムと溶離液を必要とせず１種類の
カラムと溶離液を変化させずに行えることが可能とな
る。さらに、カラムを１本化することで１分析のコスト
を大幅に低減できることも可能となる。
【０００３】
【従来の技術】リチウム緩衝液による生体液アミノ酸分
析は、分析時間に約１１０分を要し、たとえ成分数の少
ない標準アミノ酸成分を分析する場合でも同程度の分析
時間を必要とした。この標準アミノ酸成分を迅速に分析
する場合は、溶離液にナトリウムタイプの緩衝液を用い
それに合ったカラムを用意し、リチウム緩衝液とカラム
を交換して行ってきた。このためリチウム緩衝液による
生体液アミノ酸分析で標準アミノ酸成分を行う場合、長
時間かけて測定するか、ナトリウム緩衝液の溶離液とカ
ラムを交換して行ってきた。
析は、分析時間に約１１０分を要し、たとえ成分数の少
ない標準アミノ酸成分を分析する場合でも同程度の分析
時間を必要とした。この標準アミノ酸成分を迅速に分析
する場合は、溶離液にナトリウムタイプの緩衝液を用い
それに合ったカラムを用意し、リチウム緩衝液とカラム
を交換して行ってきた。このためリチウム緩衝液による
生体液アミノ酸分析で標準アミノ酸成分を行う場合、長
時間かけて測定するか、ナトリウム緩衝液の溶離液とカ
ラムを交換して行ってきた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、塩基性アミ
ノ酸グループの溶出に係わる溶離液に塩化リチウムを用
いてリチウムイオン濃度を１.３Ｍ 以上に調製し、その
イオン濃度の効果により、従来、分析時間が約１１０分
必要としていた生体液アミノ酸分析のタンパク質構成ア
ミノ酸成分の測定を約３５分に短縮することを可能にす
る。このことによりナトリウムタイプの溶離液を用いる
標準アミノ酸分析とリチウムタイプの溶離液を用いる生
体液アミノ酸分析をリチウム緩衝液の溶離液で統一する
ことが可能になる。また、カラムもナトリウム・リチウ
ムの２タイプを必要とせずリチウムタイプのみで生体液
中のアミノ酸成分とタンパク質構成アミノ酸成分を最も
適切な分析時間で測定が可能となる。
ノ酸グループの溶出に係わる溶離液に塩化リチウムを用
いてリチウムイオン濃度を１.３Ｍ 以上に調製し、その
イオン濃度の効果により、従来、分析時間が約１１０分
必要としていた生体液アミノ酸分析のタンパク質構成ア
ミノ酸成分の測定を約３５分に短縮することを可能にす
る。このことによりナトリウムタイプの溶離液を用いる
標準アミノ酸分析とリチウムタイプの溶離液を用いる生
体液アミノ酸分析をリチウム緩衝液の溶離液で統一する
ことが可能になる。また、カラムもナトリウム・リチウ
ムの２タイプを必要とせずリチウムタイプのみで生体液
中のアミノ酸成分とタンパク質構成アミノ酸成分を最も
適切な分析時間で測定が可能となる。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、塩基性アミノ
酸グループを溶出する溶離液に塩化リチウムを用いてリ
チウムイオン濃度を１.３Ｍ 以上に調製し、そのイオン
濃度の効果(図５)により、同一カラムで標準アミノ酸分
析と生体液アミノ酸分析を効率良く行えるようにした。
また、塩基性アミノ酸グループを溶出する溶離液に塩化
リチウムを用いてリチウムイオン濃度を１.３Ｍ 以上に
調製し、そのイオン濃度の効果(図５)により、ナトリウ
ムタイプの標準アミノ酸分析を不要とすることでリチウ
ムタイプの一種類に統一できた。さらに、塩基性アミノ
酸グループを溶出する溶離液に塩化リチウムを用いてリ
チウムイオン濃度を１.３Ｍ 以上に調製し、そのイオン
濃度の効果(図５)により、タンパク構成アミノ酸成分を
リチウムタイプの溶離液で高速に分析することが可能と
なる。
酸グループを溶出する溶離液に塩化リチウムを用いてリ
チウムイオン濃度を１.３Ｍ 以上に調製し、そのイオン
濃度の効果(図５)により、同一カラムで標準アミノ酸分
析と生体液アミノ酸分析を効率良く行えるようにした。
また、塩基性アミノ酸グループを溶出する溶離液に塩化
リチウムを用いてリチウムイオン濃度を１.３Ｍ 以上に
調製し、そのイオン濃度の効果(図５)により、ナトリウ
ムタイプの標準アミノ酸分析を不要とすることでリチウ
ムタイプの一種類に統一できた。さらに、塩基性アミノ
酸グループを溶出する溶離液に塩化リチウムを用いてリ
チウムイオン濃度を１.３Ｍ 以上に調製し、そのイオン
濃度の効果(図５)により、タンパク構成アミノ酸成分を
リチウムタイプの溶離液で高速に分析することが可能と
なる。
【０００６】イオン交換法によるアミノ酸分析は、溶離
液中のイオン濃度とｐＨおよびカラム温度が分離に与え
る影響が大である。請求項１〜４にあげた１カラムによ
る標準アミノ酸分析と生体液アミノ酸分析の効率良い測
定を可能にするには、一種類の溶離液で行うことが必要
であり、これを達成するには標準アミノ酸成分をリチウ
ムタイプの溶離液で短時間に測定できることが条件とな
る。この標準アミノ酸成分をリチウムタイプで高速分析
するには、イオン交換法により影響度の大きさで対応可
能となる。つまり、リチウムタイプ溶離液の組成を変化
させて標準アミノ酸成分を早く溶出するようにする。す
べてのアミノ酸は、水溶液中で電気的に解離しておりそ
れぞれのアミノ酸はそれぞれの特有な解離係数を持って
おり、溶離液中のｐＨを変化させると電気的な値が変化
し溶出時間に影響を与える。また、溶離液中のリチウム
イオン濃度によりイオン交換樹脂に対するカウンターイ
オンの働きがあり溶出時間に影響を与える。本発明は、
この内のリチウムタイプの塩基性アミノ酸グループを溶
出する４番目の溶離液に塩化リチウムを添加してイオン
濃度を１.６Ｍ と高めることによりアミノ酸の溶出が早
めることを見い出し、標準アミノ酸成分をリチウムタイ
プの溶離液でも高速に分析することを可能にすることで
請求項に示した内容も可能にしたものである。
液中のイオン濃度とｐＨおよびカラム温度が分離に与え
る影響が大である。請求項１〜４にあげた１カラムによ
る標準アミノ酸分析と生体液アミノ酸分析の効率良い測
定を可能にするには、一種類の溶離液で行うことが必要
であり、これを達成するには標準アミノ酸成分をリチウ
ムタイプの溶離液で短時間に測定できることが条件とな
る。この標準アミノ酸成分をリチウムタイプで高速分析
するには、イオン交換法により影響度の大きさで対応可
能となる。つまり、リチウムタイプ溶離液の組成を変化
させて標準アミノ酸成分を早く溶出するようにする。す
べてのアミノ酸は、水溶液中で電気的に解離しておりそ
れぞれのアミノ酸はそれぞれの特有な解離係数を持って
おり、溶離液中のｐＨを変化させると電気的な値が変化
し溶出時間に影響を与える。また、溶離液中のリチウム
イオン濃度によりイオン交換樹脂に対するカウンターイ
オンの働きがあり溶出時間に影響を与える。本発明は、
この内のリチウムタイプの塩基性アミノ酸グループを溶
出する４番目の溶離液に塩化リチウムを添加してイオン
濃度を１.６Ｍ と高めることによりアミノ酸の溶出が早
めることを見い出し、標準アミノ酸成分をリチウムタイ
プの溶離液でも高速に分析することを可能にすることで
請求項に示した内容も可能にしたものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】図１に示す、アミノ酸分析計の流
路系を用いて１から４に溶離液であるリチウムタイプの
緩衝液を入れる。分析終了後のカラム洗浄用として５に
塩基性の高い水酸化リチウム水溶液を入れる。これらを
任意の割合で混合できる低圧グラジエントポンプ６で溶
離液を送液する。途中にオートサンプラ７にてサンプル
を注入します。注入されたサンプルは、溶離液とともに
温度コントロール可能なカラムオーブン８に設置された
カラム９で各アミノ酸成分を分離する。
路系を用いて１から４に溶離液であるリチウムタイプの
緩衝液を入れる。分析終了後のカラム洗浄用として５に
塩基性の高い水酸化リチウム水溶液を入れる。これらを
任意の割合で混合できる低圧グラジエントポンプ６で溶
離液を送液する。途中にオートサンプラ７にてサンプル
を注入します。注入されたサンプルは、溶離液とともに
温度コントロール可能なカラムオーブン８に設置された
カラム９で各アミノ酸成分を分離する。
【０００８】また、反応液は２液分割型のニンヒドリン
試薬１１・１２をポンプ１５を用いてミキサ１０へ送
る。カラム９により分離されたアミノ酸成分は、ミキサ
１０でニンヒドリン反応を行う。この反応を効率良く行
うために反応槽１３を用いて１３５度の温度で行い、可
視分光光度計１４にて５７０ｎｍと４４０ｎｍで検出す
る。
試薬１１・１２をポンプ１５を用いてミキサ１０へ送
る。カラム９により分離されたアミノ酸成分は、ミキサ
１０でニンヒドリン反応を行う。この反応を効率良く行
うために反応槽１３を用いて１３５度の温度で行い、可
視分光光度計１４にて５７０ｎｍと４４０ｎｍで検出す
る。
【０００９】本発明のポイントは、図２に示すリチウム
タイプの溶離液組成を用いていることであり、溶離液４
のリチウムイオン濃度が塩化リチウムを添加でリチウム
濃度１.６Ｍ となり、この高いイオン濃度の効果によっ
てアミノ酸の溶出を早めている。このように高いリチウ
ムイオンで測定例がなく、溶離液の切り換え時間が難し
くなっている。そのため、次のような切り換え方法をと
っている。最初は、第１溶離液１と第２溶離液２を６０
／４０に混合し、２分まで送液する。その後、２.１ 分
から混合比を３２／６８に変化させ８分まで送液する。
その後、８.１分から１３分まで第２溶離液２を１００
％で送液する。さらに、１３.１ 分から３７分まで第４
溶離液４を送液する。溶離液は、全体的にリチウムイオ
ン濃度が高くなっていることが特長である。
タイプの溶離液組成を用いていることであり、溶離液４
のリチウムイオン濃度が塩化リチウムを添加でリチウム
濃度１.６Ｍ となり、この高いイオン濃度の効果によっ
てアミノ酸の溶出を早めている。このように高いリチウ
ムイオンで測定例がなく、溶離液の切り換え時間が難し
くなっている。そのため、次のような切り換え方法をと
っている。最初は、第１溶離液１と第２溶離液２を６０
／４０に混合し、２分まで送液する。その後、２.１ 分
から混合比を３２／６８に変化させ８分まで送液する。
その後、８.１分から１３分まで第２溶離液２を１００
％で送液する。さらに、１３.１ 分から３７分まで第４
溶離液４を送液する。溶離液は、全体的にリチウムイオ
ン濃度が高くなっていることが特長である。
【００１０】また、本実施例はアミノ酸分析計のみなら
ず汎用タイプの高速液体クロマトグラフにも適応可能で
ある。
ず汎用タイプの高速液体クロマトグラフにも適応可能で
ある。
【００１１】
【発明の効果】本発明により、タンパク構成アミノ酸と
生体液アミノ酸成分を効率良く、同一カラムで測定する
ことが可能となる。その結果、形態の異なるサンプルを
測定する場合、全体的な分析時間の短縮が図られる。ま
た、溶離液も一種類で対応可能となり、測定者は標準ア
ミノ酸分析用のナトリウムタイプの溶離液からリチウム
タイプの溶離液への交換とカラムの交換を不要にし、作
業時間の大幅な時間短縮が図られた。なお、かつ、ナト
リウムタイプのカラムを用意することがなくなり、測定
コストが低減できる。
生体液アミノ酸成分を効率良く、同一カラムで測定する
ことが可能となる。その結果、形態の異なるサンプルを
測定する場合、全体的な分析時間の短縮が図られる。ま
た、溶離液も一種類で対応可能となり、測定者は標準ア
ミノ酸分析用のナトリウムタイプの溶離液からリチウム
タイプの溶離液への交換とカラムの交換を不要にし、作
業時間の大幅な時間短縮が図られた。なお、かつ、ナト
リウムタイプのカラムを用意することがなくなり、測定
コストが低減できる。
【図１】アミノ酸分析計の流路系のブロック図。
【図２】リチウム溶離液の組成の説明図。
【図３】リチウム溶離液による標準アミノ酸分析例の特
性図。
性図。
【図４】リチウム溶離液による生体液アミノ酸分析例の
特性図。
特性図。
【図５】塩化リチウム添加による溶出時間を示す図。
１〜４…溶離液、５…カラム洗浄用液、６…低圧グラジ
エントポンプ、７…オートサンプラ、８…カラムオーブ
ン、９…カラム、１０…ミキサ、１１…ニンヒドリン試
薬、１２…ニンヒドリン用緩衝液、１３…反応槽、１４
…検出器、１５…ポンプ。
エントポンプ、７…オートサンプラ、８…カラムオーブ
ン、９…カラム、１０…ミキサ、１１…ニンヒドリン試
薬、１２…ニンヒドリン用緩衝液、１３…反応槽、１４
…検出器、１５…ポンプ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 浜野 吉政 茨城県ひたちなか市堀口字長久保832番地 ２ 日立計測エンジニアリング株式会社内 (72)発明者 石川 昌子 茨城県ひたちなか市堀口字長久保832番地 ２ 日立計測エンジニアリング株式会社内 (72)発明者 藤井 芳雄 茨城県ひたちなか市大字市毛882番地 株 式会社日立製作所計測器事業部内
Claims (2)
- 【請求項１】塩化リチウムを用いた複数種類の緩衝液を
段階的またはグラジエント方式で切り替えて、送液ポン
プで分離カラムに送り、アミノ酸類縁物質を分離分析す
るアミノ酸分析計において、緩衝液の１種以上がリチウ
ムイオン濃度が１.３Ｍ 以上を有し、タンパク質構成ア
ミノ酸と生体液中のアミノ酸試料を同一の分離カラムで
分析するように構成したことを特徴とするアミノ酸分析
計。 - 【請求項２】請求項１において、タンパク質構成アミノ
酸の正味分析時間が、生体液中のアミノ酸の正味分析時
間の１／２以下であるアミノ酸分析計。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28560895A JPH09127089A (ja) | 1995-11-02 | 1995-11-02 | アミノ酸分析計 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28560895A JPH09127089A (ja) | 1995-11-02 | 1995-11-02 | アミノ酸分析計 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09127089A true JPH09127089A (ja) | 1997-05-16 |
Family
ID=17693736
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28560895A Pending JPH09127089A (ja) | 1995-11-02 | 1995-11-02 | アミノ酸分析計 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09127089A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009005936A1 (en) * | 2007-06-29 | 2009-01-08 | 3M Innovative Properties Company | Accelerating a ninhydrin reaction |
-
1995
- 1995-11-02 JP JP28560895A patent/JPH09127089A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009005936A1 (en) * | 2007-06-29 | 2009-01-08 | 3M Innovative Properties Company | Accelerating a ninhydrin reaction |
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