JPH09107979A - 少なくとも一つのファージ耐性機構をもつ核酸配列およびプラスミド、それらを含む細菌およびその使用 - Google Patents
少なくとも一つのファージ耐性機構をもつ核酸配列およびプラスミド、それらを含む細菌およびその使用Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 乳業などにおいて利益対象となる菌にファー
ジ耐性機構を付与すること。 【解決手段】 菌にファージ耐性機構を付与する新規な
核酸配列および該配列とハイブリッド形成するプラスミ
ド、このような配列またはこのようなプラスミドを含む
乳酸菌（特に、ラクトコッカス・ラクチス（Lactococcu
s lactis）類に属する乳酸球菌(lactococci)）、ならび
にこのようなプラスミドを得るための菌株ラクトコッカ
ス・ラクチスの使用。
ジ耐性機構を付与すること。 【解決手段】 菌にファージ耐性機構を付与する新規な
核酸配列および該配列とハイブリッド形成するプラスミ
ド、このような配列またはこのようなプラスミドを含む
乳酸菌（特に、ラクトコッカス・ラクチス（Lactococcu
s lactis）類に属する乳酸球菌(lactococci)）、ならび
にこのようなプラスミドを得るための菌株ラクトコッカ
ス・ラクチスの使用。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、工業的（特に乳
業）利益対象となる菌株に、少なくとも一つのファージ
耐性機構を与えるような、新規な核酸配列および該配列
とハイブリッド形成するプラスミド、このような配列ま
たはこのようなプラスミドを含む乳酸菌（特に、ラクト
コッカス・ラクチス（Lactococcus lactis）類に属する
乳酸球菌(lactococci)）、ならびにこのようなプラスミ
ドを得るための菌株ラクトコッカス・ラクチスの使用に
関する。
業）利益対象となる菌株に、少なくとも一つのファージ
耐性機構を与えるような、新規な核酸配列および該配列
とハイブリッド形成するプラスミド、このような配列ま
たはこのようなプラスミドを含む乳酸菌（特に、ラクト
コッカス・ラクチス（Lactococcus lactis）類に属する
乳酸球菌(lactococci)）、ならびにこのようなプラスミ
ドを得るための菌株ラクトコッカス・ラクチスの使用に
関する。
【０００２】
【従来の技術】乳酸菌は、チーズ、バター、ヨーグル
ト、ソーセージまたは塩漬キャベツ（ザウエルクラウ
ト）などの多数の食品の製造および保存において必要と
されている。このような食品のうち、特に乳製品が重要
な位置を占めている。牛乳の工業的変換は、大きな発酵
バットの中で行われるが、そのバットの中に乳酸菌のフ
ァージが存在すると危険あるいは破壊的な影響を与える
ことになる（すなわち、最終製品の特性、特に感覚刺激
特性が変化したり、バット中に存在する製品の量が損な
われたり、バットや周囲の設備の清浄化の必要性が生じ
るなど）。したがって、乳業においては、ファージに対
する乳酸菌の耐性をより高めるような新規な手段および
新規な方法が緊急に必要とされている。
ト、ソーセージまたは塩漬キャベツ（ザウエルクラウ
ト）などの多数の食品の製造および保存において必要と
されている。このような食品のうち、特に乳製品が重要
な位置を占めている。牛乳の工業的変換は、大きな発酵
バットの中で行われるが、そのバットの中に乳酸菌のフ
ァージが存在すると危険あるいは破壊的な影響を与える
ことになる（すなわち、最終製品の特性、特に感覚刺激
特性が変化したり、バット中に存在する製品の量が損な
われたり、バットや周囲の設備の清浄化の必要性が生じ
るなど）。したがって、乳業においては、ファージに対
する乳酸菌の耐性をより高めるような新規な手段および
新規な方法が緊急に必要とされている。
【０００３】乳酸菌のファージは、レラーノ（RELANO,
P）らの（１９８７年）「J.Gen.Microbiol.」，１３
３，３０５３〜３０６３に記載のＤＮＡ／ＤＮＡハイブ
リッド形成研究によって定義される三つの主要な相同的
グループ（Ｉ）、（II）および（III）に属する。グル
ープ（Ｉ）および（III）は、ビルレントファージのみ
を含む。グループ(II)は、ビルレントファージとテンペ
レートファージを含む。一つの同じグループ内での相同
性は強く、グループ間では弱い。グループ(Ｉ)のファー
ジは伸長形ヌクレオキャプシドをもつが、グループ（I
I）および（III）のファージは等長形ヌクレオキャプシ
ドをもつ。幾つかの天然のファージ耐性機構が存在する
ことが知られており、主な三つの機構は次のとおりであ
る。すなわち、 ファージ吸着の阻害：この機構では、細菌によるファー
ジ吸着が阻害あるいは遅延化される。 制限／修飾システム：このシステムは制限酵素を必要と
し、ファージが細菌に侵入するやいなや酵素がファージ
のＤＮＡを分解する。 不稔感染：この第３の機構では、ファージ吸着は通常ど
おりであるが、ファージの増殖は行われない。 これらの機構は、サンダース(SANDERS,M)の「Biochemi
e」,７０，（１９８８），４１１〜４２１に詳細に記載
されている。
P）らの（１９８７年）「J.Gen.Microbiol.」，１３
３，３０５３〜３０６３に記載のＤＮＡ／ＤＮＡハイブ
リッド形成研究によって定義される三つの主要な相同的
グループ（Ｉ）、（II）および（III）に属する。グル
ープ（Ｉ）および（III）は、ビルレントファージのみ
を含む。グループ(II)は、ビルレントファージとテンペ
レートファージを含む。一つの同じグループ内での相同
性は強く、グループ間では弱い。グループ(Ｉ)のファー
ジは伸長形ヌクレオキャプシドをもつが、グループ（I
I）および（III）のファージは等長形ヌクレオキャプシ
ドをもつ。幾つかの天然のファージ耐性機構が存在する
ことが知られており、主な三つの機構は次のとおりであ
る。すなわち、 ファージ吸着の阻害：この機構では、細菌によるファー
ジ吸着が阻害あるいは遅延化される。 制限／修飾システム：このシステムは制限酵素を必要と
し、ファージが細菌に侵入するやいなや酵素がファージ
のＤＮＡを分解する。 不稔感染：この第３の機構では、ファージ吸着は通常ど
おりであるが、ファージの増殖は行われない。 これらの機構は、サンダース(SANDERS,M)の「Biochemi
e」,７０，（１９８８），４１１〜４２１に詳細に記載
されている。
【０００４】ファージ耐性乳酸菌については、すでに多
数の研究がなされ、発展している。参考として、幾つか
の研究を以下に例示する。ブレーゲルズ(VLEGELS)らの
「Neth.Milk and Dairy J.」４３，（１９８９），２４
５〜２５９；サンダース(SANDERS)およびクラエンハマ
ー(KLAENHAMMER)の「Applied and Environ.Microbiol.」
(１９８３)，vol４６，１１２５〜１１３３；これらの
文献は、ファージ吸着を阻害するプラスミドに関する。
ジャルビス(Audrey W.JARVIS)の「Applied and Environ.
Microbiol.」(１９８３年３月)，７７７〜７８３；ＥＰ
−Ａ３−０２０８４６８；コフェイ(COFFEY)らの「Net
h.Milk and Dairy J.」４３，（１９８９），２２９〜
２４４；クラエンハマーおよびサノツキー(SANOZKY)の
「Journal of General Microbiol.」(１９８５)，１３
１，１５３１〜１５４１；ダーマツ（DURMAZ）らの「J.
Bact.」(１９９２)，７４６３〜７４６９；マクランズ
ボロー(McLANDSBOROUGH)らの「Applied and Environ.Mic
robiol.」(１９９５)，２０２３〜２０２６；これらの文
献は、不稔感染機構によってファージ耐性を与えるプラ
スミドについて記載している。ヨーゼフセン(JOSEPHSE
N)およびクラエンハマーの「Plasmid」２３,７１〜７
５，（１９９０）；モイニュー(MOINEAU)らの「Applied
and Environ.Microbiol.」(１９９５)，２１９３〜２２
０２；米国特許第４８８３７５６号；ゴーチエ(GAUTIE
R)およびチョピン（CHOPIN）の「Applied and Environ.M
icrobiol.」(１９８７)，５３，９２３〜９２７；最後の
これらの文献は特に、制限／修飾機構によってファージ
耐性を与えるプラスミドについて記載している。
数の研究がなされ、発展している。参考として、幾つか
の研究を以下に例示する。ブレーゲルズ(VLEGELS)らの
「Neth.Milk and Dairy J.」４３，（１９８９），２４
５〜２５９；サンダース(SANDERS)およびクラエンハマ
ー(KLAENHAMMER)の「Applied and Environ.Microbiol.」
(１９８３)，vol４６，１１２５〜１１３３；これらの
文献は、ファージ吸着を阻害するプラスミドに関する。
ジャルビス(Audrey W.JARVIS)の「Applied and Environ.
Microbiol.」(１９８３年３月)，７７７〜７８３；ＥＰ
−Ａ３−０２０８４６８；コフェイ(COFFEY)らの「Net
h.Milk and Dairy J.」４３，（１９８９），２２９〜
２４４；クラエンハマーおよびサノツキー(SANOZKY)の
「Journal of General Microbiol.」(１９８５)，１３
１，１５３１〜１５４１；ダーマツ（DURMAZ）らの「J.
Bact.」(１９９２)，７４６３〜７４６９；マクランズ
ボロー(McLANDSBOROUGH)らの「Applied and Environ.Mic
robiol.」(１９９５)，２０２３〜２０２６；これらの文
献は、不稔感染機構によってファージ耐性を与えるプラ
スミドについて記載している。ヨーゼフセン(JOSEPHSE
N)およびクラエンハマーの「Plasmid」２３,７１〜７
５，（１９９０）；モイニュー(MOINEAU)らの「Applied
and Environ.Microbiol.」(１９９５)，２１９３〜２２
０２；米国特許第４８８３７５６号；ゴーチエ(GAUTIE
R)およびチョピン（CHOPIN）の「Applied and Environ.M
icrobiol.」(１９８７)，５３，９２３〜９２７；最後の
これらの文献は特に、制限／修飾機構によってファージ
耐性を与えるプラスミドについて記載している。
【０００５】特許出願ＥＰ−Ａ１−４５２２２４にも、
少なくとも一つのファージ耐性機構をもつＤＮＡ配列が
記載されている；このＤＮＡ配列は、１９９１年４月９
日にＣＮＣＭ（コレクシオン・ナシオナル・ドゥ・クル
チュール・ドゥ・ミクロオルガニスム、アンスティテュ
・パステュール、パリ、フランス）に寄託番号Ｉ−１０
７０にて寄託された大腸菌に存在するプラスミドｐＰＦ
１４４−１の機能性部分である約３.３ｋｂのＨindIII-
ＨindIII断片を含んでいる。１９９０年４月１２日にＣ
ＮＣＭに寄託番号Ｉ−９４０にて寄託された供与菌株ラ
クトコッカス・ラクチスｓｓｐラクチスＳ９１と、マッ
ケイ（McKEY)らの(１９７７)「J.Bacteriol.」２５７〜２
６５に記載されている菌株ラクトコッカス・ラクチスｓ
ｓｐラクチスＣ２−ＬＬから誘導された受容菌株ラクト
コッカス・ラクチスｓｓｐラクチスＳ４５の交差によっ
て得られる交差接合体である、１９９０年４月１２日に
ＣＮＣＭに寄託番号Ｉ−９４５にて寄託されたラクトコ
ッカス・ラクチスｓｓｐラクチス菌株に含まれるプラス
ミドｐＰＦ１４４−１から、この約３.３ｋｂのＨindII
I−ＨindIII断片は単離された。この研究では、この３.
３ｋｂのＨindIII−ＨindIIIＤＮＡ配列から、それ単独
でファージ耐性を与える１.９ｋｂのＤＮＡ配列が単離
された。この約１.９ｋｂの新規なＤＮＡ配列は、ＥＰ
−Ａ１−６４３１３４に記載された。
少なくとも一つのファージ耐性機構をもつＤＮＡ配列が
記載されている；このＤＮＡ配列は、１９９１年４月９
日にＣＮＣＭ（コレクシオン・ナシオナル・ドゥ・クル
チュール・ドゥ・ミクロオルガニスム、アンスティテュ
・パステュール、パリ、フランス）に寄託番号Ｉ−１０
７０にて寄託された大腸菌に存在するプラスミドｐＰＦ
１４４−１の機能性部分である約３.３ｋｂのＨindIII-
ＨindIII断片を含んでいる。１９９０年４月１２日にＣ
ＮＣＭに寄託番号Ｉ−９４０にて寄託された供与菌株ラ
クトコッカス・ラクチスｓｓｐラクチスＳ９１と、マッ
ケイ（McKEY)らの(１９７７)「J.Bacteriol.」２５７〜２
６５に記載されている菌株ラクトコッカス・ラクチスｓ
ｓｐラクチスＣ２−ＬＬから誘導された受容菌株ラクト
コッカス・ラクチスｓｓｐラクチスＳ４５の交差によっ
て得られる交差接合体である、１９９０年４月１２日に
ＣＮＣＭに寄託番号Ｉ−９４５にて寄託されたラクトコ
ッカス・ラクチスｓｓｐラクチス菌株に含まれるプラス
ミドｐＰＦ１４４−１から、この約３.３ｋｂのＨindII
I−ＨindIII断片は単離された。この研究では、この３.
３ｋｂのＨindIII−ＨindIIIＤＮＡ配列から、それ単独
でファージ耐性を与える１.９ｋｂのＤＮＡ配列が単離
された。この約１.９ｋｂの新規なＤＮＡ配列は、ＥＰ
−Ａ１−６４３１３４に記載された。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、工業的（特
に乳業）利益対象となる菌株に、少なくとも一つのファ
ージ耐性機構を与えるような、新規な核酸配列および該
配列とハイブリッド形成するプラスミド、このような配
列またはこのようなプラスミドを含む乳酸菌（特に、ラ
クトコッカス・ラクチス（Lactococcus lactis）類に属
する乳酸球菌(lactococci)）、ならびにこのようなプラ
スミドを得るための菌株ラクトコッカス・ラクチスの使
用を提供することを課題とする。
に乳業）利益対象となる菌株に、少なくとも一つのファ
ージ耐性機構を与えるような、新規な核酸配列および該
配列とハイブリッド形成するプラスミド、このような配
列またはこのようなプラスミドを含む乳酸菌（特に、ラ
クトコッカス・ラクチス（Lactococcus lactis）類に属
する乳酸球菌(lactococci)）、ならびにこのようなプラ
スミドを得るための菌株ラクトコッカス・ラクチスの使
用を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本出願人は、１９９０年
４月１２日にＣＮＣＭに寄託番号Ｉ−９４３にて寄託さ
れたファージ耐性菌株ラクトコッカス・ラクチスｓｓｐ
クレモリス(cremoris)Ｓ１１４のゲノムから、制限酵素
Ｓau３Ａを用いた部分的切断によって、７.７２６ｋｂ
のＤＮＡ断片を単離した。このＤＮＡ断片は、それ単独
でファージ耐性を与え、一つまたはそれ以上のファージ
耐性機構をもつ。その配列は完全に決定されている。続
いて出願人は、この７.７２６ｋｂの配列から、それ単
独でファージ耐性を与える８１７bpのＤＮＡ配列を単離
した。本発明は、少なくとも一つのファージ耐性機構を
もつ新規な核酸配列であって、 ａ）配列番号１の核酸配列を有するＤＮＡ配列； ｂ）上記ＤＮＡ配列またはその断片とハイブリッド形成
するＤＮＡ配列；および ｃ）対応するｍＲＮＡおよびｃＤＮＡ配列からなる８１
７ｂｐの配列。
４月１２日にＣＮＣＭに寄託番号Ｉ−９４３にて寄託さ
れたファージ耐性菌株ラクトコッカス・ラクチスｓｓｐ
クレモリス(cremoris)Ｓ１１４のゲノムから、制限酵素
Ｓau３Ａを用いた部分的切断によって、７.７２６ｋｂ
のＤＮＡ断片を単離した。このＤＮＡ断片は、それ単独
でファージ耐性を与え、一つまたはそれ以上のファージ
耐性機構をもつ。その配列は完全に決定されている。続
いて出願人は、この７.７２６ｋｂの配列から、それ単
独でファージ耐性を与える８１７bpのＤＮＡ配列を単離
した。本発明は、少なくとも一つのファージ耐性機構を
もつ新規な核酸配列であって、 ａ）配列番号１の核酸配列を有するＤＮＡ配列； ｂ）上記ＤＮＡ配列またはその断片とハイブリッド形成
するＤＮＡ配列；および ｃ）対応するｍＲＮＡおよびｃＤＮＡ配列からなる８１
７ｂｐの配列。
【０００８】配列番号２の配列は、配列番号１に対応す
るアミノ酸配列である。配列番号１のＤＮＡ配列は、次
の二つのオリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲ法によって
得ることができる。
るアミノ酸配列である。配列番号１のＤＮＡ配列は、次
の二つのオリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲ法によって
得ることができる。
【０００９】さらに詳しくは、本発明は、少なくとも一
つのファージ耐性機構をもち、配列番号１の配列を有す
るＤＮＡ配列に関する。さらに本発明は、上記配列番号
１のＤＮＡ配列と高度の相同性を有するＤＮＡ配列を有
するＤＮＡ配列に関する。ここで、高度の相同性とは、
ニードルマン(Needleman)およびブンシュ(Wunsch)の(１
９７０)「J.Mol.Biol.」４８，４４３〜４５３に記載され
ている最適配列整頓法によって最大相同となるようによ
うに整頓する場合に、少なくとも７０％、好ましくは少
なくとも８０％のヌクレオチド配列（ヌクレオチドの総
数に対する同一ヌクレオチド対の比率）が相同であるこ
とを意味する。この方法は、特に、ウイスコンシン大学
のＵＷＧＣＧソフトウエアにおいて使用する；ドゥブロ
ー(Devereux)らの(１９８４)「Nucl.Ac.Res.」１２，８
７１１〜８７２１−オプションＧＡＰ。
つのファージ耐性機構をもち、配列番号１の配列を有す
るＤＮＡ配列に関する。さらに本発明は、上記配列番号
１のＤＮＡ配列と高度の相同性を有するＤＮＡ配列を有
するＤＮＡ配列に関する。ここで、高度の相同性とは、
ニードルマン(Needleman)およびブンシュ(Wunsch)の(１
９７０)「J.Mol.Biol.」４８，４４３〜４５３に記載され
ている最適配列整頓法によって最大相同となるようによ
うに整頓する場合に、少なくとも７０％、好ましくは少
なくとも８０％のヌクレオチド配列（ヌクレオチドの総
数に対する同一ヌクレオチド対の比率）が相同であるこ
とを意味する。この方法は、特に、ウイスコンシン大学
のＵＷＧＣＧソフトウエアにおいて使用する；ドゥブロ
ー(Devereux)らの(１９８４)「Nucl.Ac.Res.」１２，８
７１１〜８７２１−オプションＧＡＰ。
【００１０】本発明は特に、配列番号１のＤＮＡ配列ま
たはその断片とハイブリッド形成するＤＮＡ配列に関す
る。本明細書中で用いる語句「ハイブリッド形成」と
は、常套のハイブリッド形成状態を示し、さらに詳しく
は緊縮ハイブリッド形成状態を示す。本発明はさらに、
本発明の核酸配列のひとつで形質転換されたプラスミド
に関する。このようなプラスミドの一例として、当業者
には公知である慣例の技術によって本発明のＤＮＡ配列
がクローン化されたプラスミドｐＬＡＢ２０５を挙げる
ことができる。本発明はさらに、少なくとも一つの上記
ＤＮＡ配列またはプラスミドを含むファージ耐性乳酸
菌、好ましくはラクトコッカス・ラクチス類に属する乳
酸菌に関する。この核酸配列またはプラスミドは、接
合、転換、プロトプラスト融合または当業者には公知の
他の遺伝子移転法によって該乳酸菌に移入されたもので
ある。
たはその断片とハイブリッド形成するＤＮＡ配列に関す
る。本明細書中で用いる語句「ハイブリッド形成」と
は、常套のハイブリッド形成状態を示し、さらに詳しく
は緊縮ハイブリッド形成状態を示す。本発明はさらに、
本発明の核酸配列のひとつで形質転換されたプラスミド
に関する。このようなプラスミドの一例として、当業者
には公知である慣例の技術によって本発明のＤＮＡ配列
がクローン化されたプラスミドｐＬＡＢ２０５を挙げる
ことができる。本発明はさらに、少なくとも一つの上記
ＤＮＡ配列またはプラスミドを含むファージ耐性乳酸
菌、好ましくはラクトコッカス・ラクチス類に属する乳
酸菌に関する。この核酸配列またはプラスミドは、接
合、転換、プロトプラスト融合または当業者には公知の
他の遺伝子移転法によって該乳酸菌に移入されたもので
ある。
【００１１】本発明の核酸配列またはそれを含むプラス
ミドで有利に形質転換できる乳酸菌は、たとえばラクト
コッカス・ラクチスｓｓｐクレモリス、ラクトコッカス
・ラクチスｓｓｐラクチスおよびラクトコッカス・ラク
チスｓｓｐラクチスｖａｒ.ジアセチラクチスである。
このように形質転換されたこれらの菌株を用い、接合、
転換、導入、プロトプラスト融合または当業者には公知
の他の遺伝子移転法を行うことによって、工業的利益対
象となる菌株にファージ耐性機構を伝達することができ
る。この伝達機構は、プラスミドまたは他の細菌ゲノム
の一部によって行なわれる。プラスミドで行うならば、
接合が有利である。本発明はさらに、このようにして得
られた工業的利益対象となるファージ耐性菌株に関す
る。
ミドで有利に形質転換できる乳酸菌は、たとえばラクト
コッカス・ラクチスｓｓｐクレモリス、ラクトコッカス
・ラクチスｓｓｐラクチスおよびラクトコッカス・ラク
チスｓｓｐラクチスｖａｒ.ジアセチラクチスである。
このように形質転換されたこれらの菌株を用い、接合、
転換、導入、プロトプラスト融合または当業者には公知
の他の遺伝子移転法を行うことによって、工業的利益対
象となる菌株にファージ耐性機構を伝達することができ
る。この伝達機構は、プラスミドまたは他の細菌ゲノム
の一部によって行なわれる。プラスミドで行うならば、
接合が有利である。本発明はさらに、このようにして得
られた工業的利益対象となるファージ耐性菌株に関す
る。
【００１２】本発明は、次の実施例の補助によってさら
に明確に理解することができよう。実施例は、実験結果
およびそれに関する論議からなる。これらの実施例の幾
つかは、本発明の実行の目的で行われた実験であり、そ
の他は、本発明の具体例であるが、勿論これらは純粋に
本発明を説明するために行われたものである。これらの
実施例に記載された技術（当業者には公知である）のう
ち大部分のものは、サムブルック(Sambrook)、フリッチ
ュ(Fritsch)およびマニアチス(Maniatis)の“モレキュ
ラー・クローニング：実験室マニュアル"，１９８９年
発行，コールド・スプリング・ハーバー・プレス，ニュ
ーヨーク（第２版）に詳細に説明されている。
に明確に理解することができよう。実施例は、実験結果
およびそれに関する論議からなる。これらの実施例の幾
つかは、本発明の実行の目的で行われた実験であり、そ
の他は、本発明の具体例であるが、勿論これらは純粋に
本発明を説明するために行われたものである。これらの
実施例に記載された技術（当業者には公知である）のう
ち大部分のものは、サムブルック(Sambrook)、フリッチ
ュ(Fritsch)およびマニアチス(Maniatis)の“モレキュ
ラー・クローニング：実験室マニュアル"，１９８９年
発行，コールド・スプリング・ハーバー・プレス，ニュ
ーヨーク（第２版）に詳細に説明されている。
【００１３】
【実施例】実施例１ ：７.２７６ｋｂ断片の調製 １９９０年４月１２日に寄託番号Ｉ−９４３にてＣＮＣ
Ｍに寄託された菌株ラクトコッカス・ラクチスｓｓｐク
レモリスＳ１１４は、一つまたはそれ以上のファージ耐
性を含んでいる。さらに詳しくは、該菌株は、マッケイ
らの（１９７７)「J.Bacteriol.」,２５７〜２６５に記
載されている菌株ラクトコッカス・ラクチスＣ２−ＬＬ
から誘導された受容菌株ラクトコッカス・ラクチスＳ４
５へ、ファージφ５３（グループＩ）およびφ５９（グ
ループIII）に対する耐性を付与するプラスミドｐＰＦ
６６を、接合によって移した。他のファージ耐性機構
が、菌株Ｉ−９４３に存在することもできる。それは、
菌株Ｉ−９４３のゲノムからＤＮＡライブラリが構築さ
れたからである。菌株Ｉ−９４３のＤＮＡを抽出し、制
限酵素Ｓau３Ａで部分的に切断した。プラスミドｐＬＤ
Ｐ１を用いた。プラスミドｐＬＤＰ１は、プラスミドｐ
ＶＡ８３８［マクリーナ（Macrina）らの「Gene」１９，
３４５〜３５３］から、ＨindIII部位(０)とＥcoＲＩ部
位（１５２３）の間の１５２３ｂｐの断片の欠失および
ＥcoＲＩ−ＨindIIIによって切断されるプラスミドｐＵ
Ｃ１８［ヤニッシュ−ペロン（Yanisch-Perron）らの
(１９８５)「Gene」，３３，１０３〜１１９］の多重ク
ローニング部位に対応する５４塩基対と該断片の置換に
よって誘導される。プラスミドｐＬＤＰ１はＢamＨＩ部
位で切断され、付着端はアルカリホスファターゼで脱ホ
スホリル化される。プラスミドの混合物とＳau３Ａ断片
をＴ４ＣＮＡリガーゼで連結し、これを用いて菌株大腸
菌ＴＧ１を形質転換する（ＬＢ培地＋エリスロマイシン
２００μg／mlで選択）。１００００００個のクローン
が得られる。
Ｍに寄託された菌株ラクトコッカス・ラクチスｓｓｐク
レモリスＳ１１４は、一つまたはそれ以上のファージ耐
性を含んでいる。さらに詳しくは、該菌株は、マッケイ
らの（１９７７)「J.Bacteriol.」,２５７〜２６５に記
載されている菌株ラクトコッカス・ラクチスＣ２−ＬＬ
から誘導された受容菌株ラクトコッカス・ラクチスＳ４
５へ、ファージφ５３（グループＩ）およびφ５９（グ
ループIII）に対する耐性を付与するプラスミドｐＰＦ
６６を、接合によって移した。他のファージ耐性機構
が、菌株Ｉ−９４３に存在することもできる。それは、
菌株Ｉ−９４３のゲノムからＤＮＡライブラリが構築さ
れたからである。菌株Ｉ−９４３のＤＮＡを抽出し、制
限酵素Ｓau３Ａで部分的に切断した。プラスミドｐＬＤ
Ｐ１を用いた。プラスミドｐＬＤＰ１は、プラスミドｐ
ＶＡ８３８［マクリーナ（Macrina）らの「Gene」１９，
３４５〜３５３］から、ＨindIII部位(０)とＥcoＲＩ部
位（１５２３）の間の１５２３ｂｐの断片の欠失および
ＥcoＲＩ−ＨindIIIによって切断されるプラスミドｐＵ
Ｃ１８［ヤニッシュ−ペロン（Yanisch-Perron）らの
(１９８５)「Gene」，３３，１０３〜１１９］の多重ク
ローニング部位に対応する５４塩基対と該断片の置換に
よって誘導される。プラスミドｐＬＤＰ１はＢamＨＩ部
位で切断され、付着端はアルカリホスファターゼで脱ホ
スホリル化される。プラスミドの混合物とＳau３Ａ断片
をＴ４ＣＮＡリガーゼで連結し、これを用いて菌株大腸
菌ＴＧ１を形質転換する（ＬＢ培地＋エリスロマイシン
２００μg／mlで選択）。１００００００個のクローン
が得られる。
【００１４】１００００００個のクローンを混合し、全
プラスミドＤＮＡを抽出し、菌株ラクトコッカス・ラク
チスＭＧ１３６３を形質転換するのに用いる。このこと
は、ガッソン(Gasson,M.J.)の(１９８３)「J.Bacterio
l.」,１５４，１〜９に記載されている。形質転換菌株
は、以後ラクトコッカス・ラクチスＳ５６またはＳ５９
と称する。形質転換体を、Ｍ１７＋エリスロマイシン５
μg/ml＋グルコース０.５％の入ったディッシュに、１
ディッシュ当たり５００個のクローンの割合で配し、３
０℃のオーブン中で３０時間放置する。Ｍ１７培地は、
ターザヒ（TERZAGHI)らの（１９７５）「Appl.Environ.
Microbiol.」２９，８０７〜８１３に記載されている。
次いで、Ｍ１７＋グルコース０.５％の入ったディッシ
ュ上に、１ディッシュ当たり１０8個のファージφ５９
（グループIII）を加え、ベルベット複製技術によっ
て、これらのクローンを複製する。この試験を行った３
６００個のクローンものうち、６個のクローンにファー
ジφ５９に対する耐性が見出される。このような耐性ク
ローンの一つをファージの型について試験すると、全体
としての耐性はφ５９に対するものであるが、一部φ５
３に対する耐性を示す。このクローン中に存在するプラ
スミドｐＬＤＰ１は、約７.５ｋｂの断片を含む。ｐＬ
ＤＰ１および約７.５ｋｂのこの断片を含むこの新規な
プラスミドをｐＬＡＢ２０１と呼ぶ。この断片の核酸配
列を、サンガー（Sanger）らの方法（ＰＮＡＳ−ＵＳ
Ａ，１４，５４６３−１９７７）で決定する；それは
７.２７６ｋｂである。該配列を分析すると、この７.２
７６ｋｂの断片は、３００塩基対以上のサイズの１０個
の転写解読枠（ＯＲＦ）を有することがわかる。
プラスミドＤＮＡを抽出し、菌株ラクトコッカス・ラク
チスＭＧ１３６３を形質転換するのに用いる。このこと
は、ガッソン(Gasson,M.J.)の(１９８３)「J.Bacterio
l.」,１５４，１〜９に記載されている。形質転換菌株
は、以後ラクトコッカス・ラクチスＳ５６またはＳ５９
と称する。形質転換体を、Ｍ１７＋エリスロマイシン５
μg/ml＋グルコース０.５％の入ったディッシュに、１
ディッシュ当たり５００個のクローンの割合で配し、３
０℃のオーブン中で３０時間放置する。Ｍ１７培地は、
ターザヒ（TERZAGHI)らの（１９７５）「Appl.Environ.
Microbiol.」２９，８０７〜８１３に記載されている。
次いで、Ｍ１７＋グルコース０.５％の入ったディッシ
ュ上に、１ディッシュ当たり１０8個のファージφ５９
（グループIII）を加え、ベルベット複製技術によっ
て、これらのクローンを複製する。この試験を行った３
６００個のクローンものうち、６個のクローンにファー
ジφ５９に対する耐性が見出される。このような耐性ク
ローンの一つをファージの型について試験すると、全体
としての耐性はφ５９に対するものであるが、一部φ５
３に対する耐性を示す。このクローン中に存在するプラ
スミドｐＬＤＰ１は、約７.５ｋｂの断片を含む。ｐＬ
ＤＰ１および約７.５ｋｂのこの断片を含むこの新規な
プラスミドをｐＬＡＢ２０１と呼ぶ。この断片の核酸配
列を、サンガー（Sanger）らの方法（ＰＮＡＳ−ＵＳ
Ａ，１４，５４６３−１９７７）で決定する；それは
７.２７６ｋｂである。該配列を分析すると、この７.２
７６ｋｂの断片は、３００塩基対以上のサイズの１０個
の転写解読枠（ＯＲＦ）を有することがわかる。
【００１５】実施例２：エキソヌクレアーゼＢＡＬ３１
による処理 ｐＬＤＰ１にはＯＲＦ１に続いて単一のＳalＩ切断部位
が存在する。プラスミドｐＬＡＢ２０１をＳalＩで切断
し、エキソヌクレアーゼＢＡＬ３１で処理する。ＢＡＬ
３１で処理したＤＮＡをＴ４ＤＮＡリガーゼで再連結
し、ＴＧ１を再形質転換する（エリスロマイシン２００
μg／mlで選択）。得られたすべてのプラスミドを抽出
し、これを用いてＳ５６を形質転換する（エリスロマイ
シン５μg／mlで選択）。ＢＡＬ３１欠失のサイズおよ
び位置と、耐性表現型の喪失または維持の間の関係を比
較する。ファージ耐性はＯＲＦ７と呼ばれる転写解読枠
が欠失する場合に消失することがわかる。
による処理 ｐＬＤＰ１にはＯＲＦ１に続いて単一のＳalＩ切断部位
が存在する。プラスミドｐＬＡＢ２０１をＳalＩで切断
し、エキソヌクレアーゼＢＡＬ３１で処理する。ＢＡＬ
３１で処理したＤＮＡをＴ４ＤＮＡリガーゼで再連結
し、ＴＧ１を再形質転換する（エリスロマイシン２００
μg／mlで選択）。得られたすべてのプラスミドを抽出
し、これを用いてＳ５６を形質転換する（エリスロマイ
シン５μg／mlで選択）。ＢＡＬ３１欠失のサイズおよ
び位置と、耐性表現型の喪失または維持の間の関係を比
較する。ファージ耐性はＯＲＦ７と呼ばれる転写解読枠
が欠失する場合に消失することがわかる。
【００１６】実施例３：ＰＣＲによる７.２７６断片の
内部断片の増幅 ＰＣＲ（ポリメラーゼ鎖反応）（たとえば前述のマニア
チスらの研究に記載されている）によって、２つの適当
に選択したオリゴヌクレオチドの間に含まれるＤＮＡ断
片の増幅することができる。この増幅されたＤＮＡは、
該オリゴヌクレオチドが制限部位を提供するならば、容
易にクローン化することができる。事実、このようなオ
リゴヌクレオチドの配列には、その５'末端に、１０〜
１２塩基対（たとえば制限部位を構成する６塩基対）か
らなる増幅される異種部分のＤＮＡを含めることができ
る。この実施例では、次のオリゴヌクレオチドを合成す
る。 オリゴヌクレオチドＥおよびＤによって、ＯＲＦ７を含
む８１７ｂｐのＤＮＡ断片を増幅することができるよう
になる。このＤＮＡは、オリゴヌクレオチドが提供する
制限部位のおかげで、ＥcoＲＩ−ＥcoＲＩ断片の形状で
増幅され、シャトルプラスミドｐＬＤＰ１中にクローニ
ングすることが可能になる。このＤＮＡ断片は、菌株Ｉ
−９４３の全ＤＮＡから出発するＰＣＲによって増幅す
る。ＰＣＲ産物は、フェノール／クロロホルム抽出によ
って精製し、ＥcoＲＩで切断し、ベクターｐＬＤＰ１中
にクローニングする。該断片をｐＬＤＰ１中にクローニ
ングすることにより、菌株ラクトコッカス・ラクチスＳ
５６中に移入することが可能になり、菌株エシャリヒア
・コリＴＧ１中でも該組換えプラスミドの増幅を行った
後、該断片がファージ耐性を付与するかどうかを審査す
る。
内部断片の増幅 ＰＣＲ（ポリメラーゼ鎖反応）（たとえば前述のマニア
チスらの研究に記載されている）によって、２つの適当
に選択したオリゴヌクレオチドの間に含まれるＤＮＡ断
片の増幅することができる。この増幅されたＤＮＡは、
該オリゴヌクレオチドが制限部位を提供するならば、容
易にクローン化することができる。事実、このようなオ
リゴヌクレオチドの配列には、その５'末端に、１０〜
１２塩基対（たとえば制限部位を構成する６塩基対）か
らなる増幅される異種部分のＤＮＡを含めることができ
る。この実施例では、次のオリゴヌクレオチドを合成す
る。 オリゴヌクレオチドＥおよびＤによって、ＯＲＦ７を含
む８１７ｂｐのＤＮＡ断片を増幅することができるよう
になる。このＤＮＡは、オリゴヌクレオチドが提供する
制限部位のおかげで、ＥcoＲＩ−ＥcoＲＩ断片の形状で
増幅され、シャトルプラスミドｐＬＤＰ１中にクローニ
ングすることが可能になる。このＤＮＡ断片は、菌株Ｉ
−９４３の全ＤＮＡから出発するＰＣＲによって増幅す
る。ＰＣＲ産物は、フェノール／クロロホルム抽出によ
って精製し、ＥcoＲＩで切断し、ベクターｐＬＤＰ１中
にクローニングする。該断片をｐＬＤＰ１中にクローニ
ングすることにより、菌株ラクトコッカス・ラクチスＳ
５６中に移入することが可能になり、菌株エシャリヒア
・コリＴＧ１中でも該組換えプラスミドの増幅を行った
後、該断片がファージ耐性を付与するかどうかを審査す
る。
【００１７】実施例４：８１７ｂｐ断片によるファージ
耐性の付与 プラスミドｐＬＡＢ２０５およびｐＬＤＰ１を菌株ラク
トコッカス・ラクチスＳ５６に移入する。得られたクロ
ーンのファージ耐性は、ファージφ５３およびφ５９を
用いる力価滴定（ＰＦＵ／ml）を行って試験する。
耐性の付与 プラスミドｐＬＡＢ２０５およびｐＬＤＰ１を菌株ラク
トコッカス・ラクチスＳ５６に移入する。得られたクロ
ーンのファージ耐性は、ファージφ５３およびφ５９を
用いる力価滴定（ＰＦＵ／ml）を行って試験する。
【表１】 菌株 ファージφ５３(I) ファージφ(III) 力価 プレートのサイズ(mm) 力価 プレートのサイズ(mm) Ｓ５６ 4.109 ３ 6.108 ２ S56(pLDP1) 4.109 ３ 4.108 ２ S56(pLAB205) 2.108 ０.５ 6.103 ０.５ ＰＦＵ／ml＝ml当たりのプレート形成単位
【００１８】
【００１９】配列番号：１ 配列の長さ：８１７塩基対 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ（ゲノム） ハイポセティカル：ノー アンチセンス：ノー 起源： 生物名：ラクトコッカス・ラクチス 配列の特徴： 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１５７．．６９０ 配列： ＧＴＡＡＡＡＡＧＴＡ ＡＡＡＡＣＧＴＴＡＧ ＡＡＡＴＧＧＴＧＡＴ ＴＴＡ
ＴＴＴＴＴＣＴ ＴＴＴＡＡＴＴＡＡＴ ＧＡＴＡＴＴＡＴＴＡ ６０ ＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡ ＴＴＡＡＴＴＡＧＧＡ ＧＡＴＴＴＡＡＧＴＴ ＧＴＧ
ＡＡＧＧＡＴＧ ＴＴＴＴＧＧＡＴＴＡ ＴＡＴＴＡＴＴＴＣＴ １２０ ＧＧＴＡＴＡＡＧＴＡ ＴＡＴＧＴＡＴＡＴＴ ＴＡＴＴＴＴＧＧＣＡ ＧＴＴ
ＴＡＴ ＡＴＧ ＡＴＡ ＡＡＧ ＡＡＡ ＡＴＴ ＣＣＡ １７４
Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｒｏ
１ ５ ＧＡＡ ＡＴＧ ＧＴＧ ＡＧＴ ＧＡＴ ＡＡＡ ＴＴＡ ＡＡＡ ＡＧＴ
ＧＡＣ ＡＧＡ ＧＡＡ ＴＴＴ ＧＡＡ ＴＴＴ ＡＡＴ ２２２ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ
Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｓｎ １０ １５
２０ ＡＡＧ ＧＡＧ ＴＴＡ ＣＡＧ ＡＴＴ ＧＡＴ ＧＡＡ ＴＴＴ ＴＡＴ
ＣＧＡ ＡＡＡ ＧＡＴ ＧＧＧ ＡＡＴ ＣＴＧ ＣＡＡ ２７０ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｔｙｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ ２５ ３０
３５ ＣＡＧ ＡＴＴ ＡＴＧ ＡＴＧ ＡＡＣ ＴＧＧ ＡＣＣ ＧＡＡ ＣＴＴ
ＧＣＡ ＡＴＴ ＧＡＴ ＡＣＡ ＡＡＴ ＧＣＡ ＡＴＧ ３１８ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｍｅｔ ４０ ４５
５０ ＧＡＧ ＴＣＧ ＣＴＴ ＧＡＴ ＴＣＴ ＡＡＧ ＡＡＣ ＧＧＡ ＣＡＧ
ＡＡＡ ＡＡＡ ＴＴＡ ＣＧＧ ＡＡＧ ＣＴＴ ＧＴＴ ３６６ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｖａｌ ５５ ６０
６５ ７０ ＣＡＡ ＧＡＡ ＡＣＡ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＡＴ ＧＧＴ ＴＣＡ ＧＧＡ
ＡＧＡ ＡＣＡ ＧＴＴ ＡＡＡ ＴＴＡ ＣＴＡ ＡＣＡ ４１４ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｔｈｒ ７５
８０ ８５ ＧＡＡ ＡＴＧ ＣＴＴ ＣＡＡ ＧＡＡ ＡＧＴ ＴＡＴ ＣＧＡ ＡＧＴ
ＡＡＴ ＧＡＴ ＡＣＴ ＧＡＡ ＴＣＡ ＧＡＡ ＡＡＴ ４６２ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ
Ａｓｎ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ ９０ ９５
１００ ＡＣＴ ＧＡＡ ＴＣＡ ＧＧＡ ＡＡＴ ＡＡＴ ＧＡＡ ＴＣＡ ＧＡＡ
ＡＡＴ ＡＡＴ ＧＡＡ ＴＣＴ ＡＴＡ ＡＡＴ ＡＧＧ ５１０ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｒｇ １０５ １１０
１１５ ＴＣＴ ＴＣＴ ＧＣＣ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＴＧ ＴＴＧ ＣＴＧ ＴＴＧ
ＧＣＡ ＡＴＧ ＧＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＴＣＴ ＣＴＡ ５５８ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ａｌａ Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ １２０ １２５
１３０ ＡＡＧ ＧＡＡ ＧＡＴ ＴＴＴ ＡＣＴ ＧＧＡ ＣＡＡ ＡＡＡ ＧＴＴ
ＧＡＣ ＣＣＡ ＴＴＡ ＧＡＴ ＧＴＣ ＣＴＴ ＡＡＡ ６０６ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ
Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｌｙｓ １３５ １４０
１４５ １５０ ＡＴＡ ＡＡＡ ＣＴＣ ＡＣＴ ＧＡＣ ＴＡＴ ＴＡＴ ＡＡＴ ＣＡＴ
ＧＡＧ ＧＧＡ ＴＴＡ ＴＴＴ ＡＡＡ ＧＡＡ ＣＴＴ ６５４ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｈｉｓ
Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ １５５
１６０ １６５ ＴＴＴ ＧＡＡ ＡＧＴ ＧＴＡ ＡＡＴ ＡＡＣ ＡＡＡ ＣＴＡ ＧＧＡ
ＧＴＴ ＧＡＡ ＧＴＴ ＴＡＡ ＴＡＡＴＧＧＡＡＡＴ ７０３ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｖａｌ １７０ １７５ ＴＡＡＴＴＴＴＡＴＡ ＧＣＴＣＴＧＧＣＣＴ ＴＴＧＣＡＴＣＴＧＴ ＴＡＴ
ＴＧＴＡＧＧＴ ＧＧＧＧＴＡＴＴＣＡ ＴＴＧＧＡＡＴＡＴＴ ７６３ ＴＡＴＴＣＴＧＧＴＴ ＴＡＣＡＡＡＴＧＧＴ ＴＧＡＡＧＡＡＡＴＧ ＡＴＡ
ＡＧＴＡＴＡＧ ＣＴＡＧＡＣＴＡＴＧ ＡＡＡＡ ８１７
ＴＴＴＴＴＣＴ ＴＴＴＡＡＴＴＡＡＴ ＧＡＴＡＴＴＡＴＴＡ ６０ ＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡ ＴＴＡＡＴＴＡＧＧＡ ＧＡＴＴＴＡＡＧＴＴ ＧＴＧ
ＡＡＧＧＡＴＧ ＴＴＴＴＧＧＡＴＴＡ ＴＡＴＴＡＴＴＴＣＴ １２０ ＧＧＴＡＴＡＡＧＴＡ ＴＡＴＧＴＡＴＡＴＴ ＴＡＴＴＴＴＧＧＣＡ ＧＴＴ
ＴＡＴ ＡＴＧ ＡＴＡ ＡＡＧ ＡＡＡ ＡＴＴ ＣＣＡ １７４
Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｒｏ
１ ５ ＧＡＡ ＡＴＧ ＧＴＧ ＡＧＴ ＧＡＴ ＡＡＡ ＴＴＡ ＡＡＡ ＡＧＴ
ＧＡＣ ＡＧＡ ＧＡＡ ＴＴＴ ＧＡＡ ＴＴＴ ＡＡＴ ２２２ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ
Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｓｎ １０ １５
２０ ＡＡＧ ＧＡＧ ＴＴＡ ＣＡＧ ＡＴＴ ＧＡＴ ＧＡＡ ＴＴＴ ＴＡＴ
ＣＧＡ ＡＡＡ ＧＡＴ ＧＧＧ ＡＡＴ ＣＴＧ ＣＡＡ ２７０ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｔｙｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ ２５ ３０
３５ ＣＡＧ ＡＴＴ ＡＴＧ ＡＴＧ ＡＡＣ ＴＧＧ ＡＣＣ ＧＡＡ ＣＴＴ
ＧＣＡ ＡＴＴ ＧＡＴ ＡＣＡ ＡＡＴ ＧＣＡ ＡＴＧ ３１８ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｍｅｔ ４０ ４５
５０ ＧＡＧ ＴＣＧ ＣＴＴ ＧＡＴ ＴＣＴ ＡＡＧ ＡＡＣ ＧＧＡ ＣＡＧ
ＡＡＡ ＡＡＡ ＴＴＡ ＣＧＧ ＡＡＧ ＣＴＴ ＧＴＴ ３６６ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｖａｌ ５５ ６０
６５ ７０ ＣＡＡ ＧＡＡ ＡＣＡ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＡＴ ＧＧＴ ＴＣＡ ＧＧＡ
ＡＧＡ ＡＣＡ ＧＴＴ ＡＡＡ ＴＴＡ ＣＴＡ ＡＣＡ ４１４ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｔｈｒ ７５
８０ ８５ ＧＡＡ ＡＴＧ ＣＴＴ ＣＡＡ ＧＡＡ ＡＧＴ ＴＡＴ ＣＧＡ ＡＧＴ
ＡＡＴ ＧＡＴ ＡＣＴ ＧＡＡ ＴＣＡ ＧＡＡ ＡＡＴ ４６２ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ
Ａｓｎ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ ９０ ９５
１００ ＡＣＴ ＧＡＡ ＴＣＡ ＧＧＡ ＡＡＴ ＡＡＴ ＧＡＡ ＴＣＡ ＧＡＡ
ＡＡＴ ＡＡＴ ＧＡＡ ＴＣＴ ＡＴＡ ＡＡＴ ＡＧＧ ５１０ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｒｇ １０５ １１０
１１５ ＴＣＴ ＴＣＴ ＧＣＣ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＴＧ ＴＴＧ ＣＴＧ ＴＴＧ
ＧＣＡ ＡＴＧ ＧＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＴＣＴ ＣＴＡ ５５８ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ａｌａ Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ １２０ １２５
１３０ ＡＡＧ ＧＡＡ ＧＡＴ ＴＴＴ ＡＣＴ ＧＧＡ ＣＡＡ ＡＡＡ ＧＴＴ
ＧＡＣ ＣＣＡ ＴＴＡ ＧＡＴ ＧＴＣ ＣＴＴ ＡＡＡ ６０６ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ
Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｌｙｓ １３５ １４０
１４５ １５０ ＡＴＡ ＡＡＡ ＣＴＣ ＡＣＴ ＧＡＣ ＴＡＴ ＴＡＴ ＡＡＴ ＣＡＴ
ＧＡＧ ＧＧＡ ＴＴＡ ＴＴＴ ＡＡＡ ＧＡＡ ＣＴＴ ６５４ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｈｉｓ
Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ １５５
１６０ １６５ ＴＴＴ ＧＡＡ ＡＧＴ ＧＴＡ ＡＡＴ ＡＡＣ ＡＡＡ ＣＴＡ ＧＧＡ
ＧＴＴ ＧＡＡ ＧＴＴ ＴＡＡ ＴＡＡＴＧＧＡＡＡＴ ７０３ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｖａｌ １７０ １７５ ＴＡＡＴＴＴＴＡＴＡ ＧＣＴＣＴＧＧＣＣＴ ＴＴＧＣＡＴＣＴＧＴ ＴＡＴ
ＴＧＴＡＧＧＴ ＧＧＧＧＴＡＴＴＣＡ ＴＴＧＧＡＡＴＡＴＴ ７６３ ＴＡＴＴＣＴＧＧＴＴ ＴＡＣＡＡＡＴＧＧＴ ＴＧＡＡＧＡＡＡＴＧ ＡＴＡ
ＡＧＴＡＴＡＧ ＣＴＡＧＡＣＴＡＴＧ ＡＡＡＡ ８１７
【００２０】配列番号：２ 配列の長さ：１７８アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｖａｌ
Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ １ ５
１０ １５ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｒｇ ２０ ２５
３０ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｍｅｔ
Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｌｙｓ ５０ ５５
６０ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ
Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ ６５ ７０
７５ ８０ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｓｎ ８５
９０ ９５ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ １００ １０５
１１０ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｌａ １１５ １２０
１２５ Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ
Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｓｐ １３０ １３５
１４０ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｈｉｓ Ｇｌｕ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ｖａｌ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｖａｌ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｕ Ｖａｌ
Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ １ ５
１０ １５ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｒｇ ２０ ２５
３０ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｍｅｔ
Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｌｙｓ ５０ ５５
６０ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ
Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ ６５ ７０
７５ ８０ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｓｎ ８５
９０ ９５ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｎ １００ １０５
１１０ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｌａ １１５ １２０
１２５ Ｍｅｔ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ
Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｓｐ １３０ １３５
１４０ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｈｉｓ Ｇｌｕ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ｖａｌ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｖａｌ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｕ Ｖａｌ
【００２１】配列番号：３ 配列の長さ：３１塩基対 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ（ゲノム） ハイポセティカル：ノー 配列の特徴： 特徴を表す記号：misc signal 存在位置：６..１１ 他の情報：／機能＝ＥcoＲＩ制限部位 配列の特徴： 特徴を表す記号：misc structure 存在位置：１２..３１ 他の情報：／機能＝配列番号１のヌクレオチド１〜２０
に対する配列相同性 配列： TACGTGAATT CGTAAAAAGT AAAAACGTTA G 31
に対する配列相同性 配列： TACGTGAATT CGTAAAAAGT AAAAACGTTA G 31
【００２２】配列番号：４ 配列の長さ：３１塩基対 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ（ゲノム） ハイポセティカル：ノー 配列の特徴： 特徴を表す記号：misc ｓｉｇｎａｌ 存在位置：６．．１１ 他の情報：／機能＝ＥcoＲＩ制限部位 配列の特徴： 特徴を表す記号：misc structure 存在位置：１２..３１ 他の情報：／機能＝配列番号１のヌクレオチド７８９〜
８１７に対応するｃＤＮＡに対する配列相同性 配列： ＴＡＣＧＴＧＡＡＴＴ ＣＴＴＴＴＣＡＴＡＧ ＴＣＴＡＧＣＴＡＴＡ Ｃ
３１
８１７に対応するｃＤＮＡに対する配列相同性 配列： ＴＡＣＧＴＧＡＡＴＴ ＣＴＴＴＴＣＡＴＡＧ ＴＣＴＡＧＣＴＡＴＡ Ｃ
３１
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マルレーヌ・ダロイオー フランス31320カスタネ（番地の表示なし) レジデンス・デゾルム
Claims (6)
- 【請求項１】 少なくとも一つのファージ耐性機構をも
つ核酸配列であって、 ａ）配列番号１の核酸配列を有するＤＮＡ配列； ｂ）上記ＤＮＡ配列またはその断片とハイブリッド形成
するＤＮＡ配列；および ｃ）対応するｍＲＮＡおよびｃＤＮＡ配列からなる配
列。 - 【請求項２】 少なくとも一つのファージ耐性機構をも
ち、配列番号１の核酸配列または該配列番号１の核酸配
列と高度の相同性を有する核酸配列を有するＤＮＡ配
列。 - 【請求項３】 少なくとも一つのファージ耐性機構をも
ち、請求項１に記載の核酸配列を含むプラスミド。 - 【請求項４】 少なくとも一つのファージ耐性機構をも
ち、請求項２に記載のＤＮＡ配列を含むプラスミド。 - 【請求項５】 請求項３または４のいずれかに記載のプ
ラスミドを少なくとも一つ含むファージ耐性乳酸菌。 - 【請求項６】 工業的利益対象となる菌株にファージ耐
性機構を与えるための請求項５に記載の乳酸菌の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9509913 | 1995-08-18 | ||
| FR9509913A FR2737896B1 (fr) | 1995-08-18 | 1995-08-18 | Sequence d'adn et plasmides comprenant au moins un mecanisme de resistance aux phases, bacteries les contenant et leur utilisation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09107979A true JPH09107979A (ja) | 1997-04-28 |
Family
ID=9481991
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP8216308A Pending JPH09107979A (ja) | 1995-08-18 | 1996-08-16 | 少なくとも一つのファージ耐性機構をもつ核酸配列およびプラスミド、それらを含む細菌およびその使用 |
Country Status (7)
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|---|---|
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| JP (1) | JPH09107979A (ja) |
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| NZ (1) | NZ299182A (ja) |
Families Citing this family (3)
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Family Cites Families (6)
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