JPH089999A - シーケンス用反応基質液 - Google Patents
シーケンス用反応基質液Info
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- JPH089999A JPH089999A JP17194594A JP17194594A JPH089999A JP H089999 A JPH089999 A JP H089999A JP 17194594 A JP17194594 A JP 17194594A JP 17194594 A JP17194594 A JP 17194594A JP H089999 A JPH089999 A JP H089999A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】ｄｄＡＴＰ：ｄＡＴＰ＝５〜１５：１、ｄｄＣ
ＴＰ：ｄＣＴＰ＝２．５〜７．５：１、ｄｄＧＴＰ：ｄ
ＧＴＰ＝０．７５〜２．０：１、ｄｄＴＴＰ：ｄＴＴＰ
＝５〜２０：１の反応基質組成（モル濃度比）よりなる
Ｔｔｈポリメラーゼを用いたシーケンス用反応基質液。 【効果】本発明のシーケンス用反応基質液を使用すれ
ば、一度のシーケンス反応で決定できる塩基配列が１０
００塩基を越える範囲となるので、従来の約２倍の塩基
数の配列が一度に決定できる。従って、ＤＮＡシーケン
スの作業量、時間、費用等が低減できる。
ＴＰ：ｄＣＴＰ＝２．５〜７．５：１、ｄｄＧＴＰ：ｄ
ＧＴＰ＝０．７５〜２．０：１、ｄｄＴＴＰ：ｄＴＴＰ
＝５〜２０：１の反応基質組成（モル濃度比）よりなる
Ｔｔｈポリメラーゼを用いたシーケンス用反応基質液。 【効果】本発明のシーケンス用反応基質液を使用すれ
ば、一度のシーケンス反応で決定できる塩基配列が１０
００塩基を越える範囲となるので、従来の約２倍の塩基
数の配列が一度に決定できる。従って、ＤＮＡシーケン
スの作業量、時間、費用等が低減できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はシーケンス用反応基質液
に関する。さらに詳しくは、遺伝子構造を明らかにする
際に、ＤＮＡポリメラーゼにより１０００塩基を越える
範囲まで伸長反応を行なうことができ、塩基配列が安定
に決定できるように調製されたシーケンス用反応基質液
に関する。
に関する。さらに詳しくは、遺伝子構造を明らかにする
際に、ＤＮＡポリメラーゼにより１０００塩基を越える
範囲まで伸長反応を行なうことができ、塩基配列が安定
に決定できるように調製されたシーケンス用反応基質液
に関する。
【０００２】
【従来の技術・発明が解決しようとする課題】従来、塩
基配列の決定には、サンガー式シーケンス反応が利用さ
れている。このシーケンス反応は、鋳型ＤＮＡに蛍光
標識プライマーがアニールする工程、プライマーの
３’側にＤＮＡポリメラーゼがｄＮＴＰを付加し、伸長
させていく工程、ｄｄＮＴＰが取り込まれることによ
って反応が停止する工程、という反応工程からなってい
る。このシーケンス反応用の反応基質液は、ＤＮＡシー
ケンス反応キットとして既に市販されており、遺伝子構
造の解析に広く用いられている。
基配列の決定には、サンガー式シーケンス反応が利用さ
れている。このシーケンス反応は、鋳型ＤＮＡに蛍光
標識プライマーがアニールする工程、プライマーの
３’側にＤＮＡポリメラーゼがｄＮＴＰを付加し、伸長
させていく工程、ｄｄＮＴＰが取り込まれることによ
って反応が停止する工程、という反応工程からなってい
る。このシーケンス反応用の反応基質液は、ＤＮＡシー
ケンス反応キットとして既に市販されており、遺伝子構
造の解析に広く用いられている。
【０００３】従来の反応基質液は、通常次のような組成
（モル濃度比）のものが使用されている。 ｄｄＡＴＰ（ジデオキシ−アデノシン−５’−トリホス
フェート）：ｄＡＴＰ（デオキシ−アデノシン−５’−
トリホスフェート）＝３０〜６０：１ ｄｄＣＴＰ（ジデオキシ−シチジン−５’−トリホスフ
ェート）：ｄＣＴＰ（デオキシ−シチジン−５’−トリ
ホスフェート）＝１０〜２０：１ ｄｄＧＴＰ（ジデオキシ−グアノシン−５’−トリホス
フェート）：ｄＧＴＰ（デオキシ−グアノシン−５’−
トリホスフェート）＝２．５〜５：１ ｄｄＴＴＰ（ジデオキシ−チミジン−５’−トリホスフ
ェート）：ｄＴＴＰ（デオキシ−チミジン−５’−トリ
ホスフェート）＝６０〜１２０：１ ただし、７−ｄｅａｚａ−ｄＧＴＰ（７−デアザ−デオ
キシ−グアノシン−５’−トリホスフェート）を使用し
た場合はｄｄＧＴＰ：７−ｄｅａｚａ−ｄＧＴＰ＝３．
７５〜７．５：１程度である。
（モル濃度比）のものが使用されている。 ｄｄＡＴＰ（ジデオキシ−アデノシン−５’−トリホス
フェート）：ｄＡＴＰ（デオキシ−アデノシン−５’−
トリホスフェート）＝３０〜６０：１ ｄｄＣＴＰ（ジデオキシ−シチジン−５’−トリホスフ
ェート）：ｄＣＴＰ（デオキシ−シチジン−５’−トリ
ホスフェート）＝１０〜２０：１ ｄｄＧＴＰ（ジデオキシ−グアノシン−５’−トリホス
フェート）：ｄＧＴＰ（デオキシ−グアノシン−５’−
トリホスフェート）＝２．５〜５：１ ｄｄＴＴＰ（ジデオキシ−チミジン−５’−トリホスフ
ェート）：ｄＴＴＰ（デオキシ−チミジン−５’−トリ
ホスフェート）＝６０〜１２０：１ ただし、７−ｄｅａｚａ−ｄＧＴＰ（７−デアザ−デオ
キシ−グアノシン−５’−トリホスフェート）を使用し
た場合はｄｄＧＴＰ：７−ｄｅａｚａ−ｄＧＴＰ＝３．
７５〜７．５：１程度である。
【０００４】しかしながら、このような従来の反応基質
液の組成では、５〜６００塩基程度までしか、塩基配列
の決定ができないのが実情である。そのため、例えば、
５０００塩基からなる未知の遺伝子配列があった場合、
従来のシーケンス反応基質液では、約１０回の反応を行
うことが必要であり、塩基配列の決定操作に時間、労力
を要していた。
液の組成では、５〜６００塩基程度までしか、塩基配列
の決定ができないのが実情である。そのため、例えば、
５０００塩基からなる未知の遺伝子配列があった場合、
従来のシーケンス反応基質液では、約１０回の反応を行
うことが必要であり、塩基配列の決定操作に時間、労力
を要していた。
【０００５】本発明の目的は、かかる状況に鑑み、一度
のシーケンス反応で決定できる塩基配列が１０００塩基
を越える範囲となるようなシーケンス用反応基質液を提
供することにある。
のシーケンス反応で決定できる塩基配列が１０００塩基
を越える範囲となるようなシーケンス用反応基質液を提
供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者は、５〜６００
塩基程度までしか解析できない従来の反応基質液の組成
を、１０００塩基を越える範囲まで解析可能にするため
に、反応停止物質であるｄｄ−ＮＴＰ（ジデオキシヌク
レオチド−５’−トリホスフェート）と反応基質物質で
あるｄ−ＮＴＰ（デオキシヌクレオチド−５’−トリホ
スフェート）との濃度比を変更してｄｄ−ＮＴＰの濃度
比を適切な範囲に下げることにより、上記課題が達成で
きることを見出し、本発明を完成するに到った。
塩基程度までしか解析できない従来の反応基質液の組成
を、１０００塩基を越える範囲まで解析可能にするため
に、反応停止物質であるｄｄ−ＮＴＰ（ジデオキシヌク
レオチド−５’−トリホスフェート）と反応基質物質で
あるｄ−ＮＴＰ（デオキシヌクレオチド−５’−トリホ
スフェート）との濃度比を変更してｄｄ−ＮＴＰの濃度
比を適切な範囲に下げることにより、上記課題が達成で
きることを見出し、本発明を完成するに到った。
【０００７】即ち、本発明の要旨は、 （１）以下の反応基質組成（モル濃度比）よりなるＴｔ
ｈポリメラーゼを用いたシーケンス用反応基質液、 ｄｄＡＴＰ：ｄＡＴＰ＝５〜１５：１ ｄｄＣＴＰ：ｄＣＴＰ＝２．５〜７．５：１ ｄｄＧＴＰ：ｄＧＴＰ＝０．７５〜２．０：１ ｄｄＴＴＰ：ｄＴＴＰ＝５〜２０：１ （２）以下の反応基質組成（モル濃度比）よりなるＴｔ
ｈポリメラーゼを用いたシーケンス用反応基質液、 ｄｄＡＴＰ：ｄＡＴＰ＝５〜１５：１ ｄｄＣＴＰ：ｄＣＴＰ＝２．５〜７．５：１ ｄｄＧＴＰ：７−ｄｅａｚａ−ｄＧＴＰ＝１．０〜３．
０：１ ｄｄＴＴＰ：ｄＴＴＰ＝５〜２０：１ に関する。
ｈポリメラーゼを用いたシーケンス用反応基質液、 ｄｄＡＴＰ：ｄＡＴＰ＝５〜１５：１ ｄｄＣＴＰ：ｄＣＴＰ＝２．５〜７．５：１ ｄｄＧＴＰ：ｄＧＴＰ＝０．７５〜２．０：１ ｄｄＴＴＰ：ｄＴＴＰ＝５〜２０：１ （２）以下の反応基質組成（モル濃度比）よりなるＴｔ
ｈポリメラーゼを用いたシーケンス用反応基質液、 ｄｄＡＴＰ：ｄＡＴＰ＝５〜１５：１ ｄｄＣＴＰ：ｄＣＴＰ＝２．５〜７．５：１ ｄｄＧＴＰ：７−ｄｅａｚａ−ｄＧＴＰ＝１．０〜３．
０：１ ｄｄＴＴＰ：ｄＴＴＰ＝５〜２０：１ に関する。
【０００８】本発明は従来のシーケンス用反応基質液中
のｄｄＮＴＰ濃度比を適切な範囲に下げることにより、
ＤＮＡポリメラーゼによる伸長反応が１０００塩基を越
える範囲まで続くようにしたものである。即ち、ｄｄＮ
ＴＰの濃度の低下により１０００塩基を越える範囲まで
停止反応の起きる確率を低下させるものである。
のｄｄＮＴＰ濃度比を適切な範囲に下げることにより、
ＤＮＡポリメラーゼによる伸長反応が１０００塩基を越
える範囲まで続くようにしたものである。即ち、ｄｄＮ
ＴＰの濃度の低下により１０００塩基を越える範囲まで
停止反応の起きる確率を低下させるものである。
【０００９】本発明において、ｄｄＡＴＰとｄＡＴＰの
モル濃度比、ｄｄＣＴＰとｄＣＴＰのモル濃度比、ｄｄ
ＧＴＰとｄＧＴＰのモル濃度比（あるいはｄｄＧＴＰと
７−ｄｅａｚａ−ｄＧＴＰのモル濃度比）、ｄｄＴＴＰ
とｄＴＴＰのモル濃度比において、それぞれのｄｄＮＴ
Ｐの濃度が前記の濃度比よりもさらに低下すると短い塩
基配列の配列決定が不安定となり、逆に高くなると従来
以上に長い塩基配列を安定的に決定することはできな
い。
モル濃度比、ｄｄＣＴＰとｄＣＴＰのモル濃度比、ｄｄ
ＧＴＰとｄＧＴＰのモル濃度比（あるいはｄｄＧＴＰと
７−ｄｅａｚａ−ｄＧＴＰのモル濃度比）、ｄｄＴＴＰ
とｄＴＴＰのモル濃度比において、それぞれのｄｄＮＴ
Ｐの濃度が前記の濃度比よりもさらに低下すると短い塩
基配列の配列決定が不安定となり、逆に高くなると従来
以上に長い塩基配列を安定的に決定することはできな
い。
【００１０】本発明のシーケンス用反応基質液は、蛍光
標識プライマーを使用し、ＤＮＡポリメラーゼとしてＴ
ｔｈポリメラーゼを用いたＤＮＡシーケンス用に使用さ
れる。蛍光標識プライマーとしては、特に限定されるも
のではなく通常のＤＮＡシーケンスに使用されるものが
使用できる。また、Ｔｔｈポリメラーゼも特に限定され
るものではなく、例えば、Thermus thermophilus HB8由
来のTth DNA Polymerase（東洋紡績（株）製）が使用で
きる。ＤＮＡシーケンスの試薬組成、反応プロトコー
ル、操作手順等においても同様に公知の方法が適用でき
る。
標識プライマーを使用し、ＤＮＡポリメラーゼとしてＴ
ｔｈポリメラーゼを用いたＤＮＡシーケンス用に使用さ
れる。蛍光標識プライマーとしては、特に限定されるも
のではなく通常のＤＮＡシーケンスに使用されるものが
使用できる。また、Ｔｔｈポリメラーゼも特に限定され
るものではなく、例えば、Thermus thermophilus HB8由
来のTth DNA Polymerase（東洋紡績（株）製）が使用で
きる。ＤＮＡシーケンスの試薬組成、反応プロトコー
ル、操作手順等においても同様に公知の方法が適用でき
る。
【００１１】
【実施例】以下、実施例および比較例により本発明をさ
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等によ
りなんら限定されるものではない。 実施例１ 次の反応基質組成（モル濃度比）よりなるシーケンス反
応基質液を調製した。 Ａ Mix：ｄｄＡＴＰ ７５０μＭ，ｄＡＴＰ ８０μ
Ｍ，ｄＣＴＰ １６０μＭ，ｄＧＴＰ １６０μＭ，ｄ
ＴＴＰ １６０μＭ， Ｃ Mix：ｄｄＣＴＰ ２４０μＭ，ｄＡＴＰ １６０μ
Ｍ，ｄＣＴＰ ６０μＭ，ｄＧＴＰ １６０μＭ，ｄＴ
ＴＰ １６０μＭ， Ｇ Mix：ｄｄＧＴＰ １２０μＭ，ｄＡＴＰ １６０μ
Ｍ，ｄＣＴＰ １６０μＭ，ｄＧＴＰ １２０μＭ，ｄ
ＴＴＰ １６０μＭ， Ｔ Mix：ｄｄＴＴＰ ５００μＭ，ｄＡＴＰ １６０μ
Ｍ，ｄＣＴＰ １６０μＭ，ｄＧＴＰ １６０μＭ，ｄ
ＴＴＰ ４０μＭ，
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等によ
りなんら限定されるものではない。 実施例１ 次の反応基質組成（モル濃度比）よりなるシーケンス反
応基質液を調製した。 Ａ Mix：ｄｄＡＴＰ ７５０μＭ，ｄＡＴＰ ８０μ
Ｍ，ｄＣＴＰ １６０μＭ，ｄＧＴＰ １６０μＭ，ｄ
ＴＴＰ １６０μＭ， Ｃ Mix：ｄｄＣＴＰ ２４０μＭ，ｄＡＴＰ １６０μ
Ｍ，ｄＣＴＰ ６０μＭ，ｄＧＴＰ １６０μＭ，ｄＴ
ＴＰ １６０μＭ， Ｇ Mix：ｄｄＧＴＰ １２０μＭ，ｄＡＴＰ １６０μ
Ｍ，ｄＣＴＰ １６０μＭ，ｄＧＴＰ １２０μＭ，ｄ
ＴＴＰ １６０μＭ， Ｔ Mix：ｄｄＴＴＰ ５００μＭ，ｄＡＴＰ １６０μ
Ｍ，ｄＣＴＰ １６０μＭ，ｄＧＴＰ １６０μＭ，ｄ
ＴＴＰ ４０μＭ，
【００１２】上記の基質液を１サンプル当たり、各２μ
ｌずつ用いてシーケンス反応を行った。その結果、短鎖
のＤＮＡから１０００塩基を越える長鎖のＤＮＡまで安
定して作成することができ、低分子量側から１０００塩
基を越える範囲までの塩基配列の決定が可能であった。
このときの電気泳動図を図１および図２に示す。電気泳
動の条件とシーケンス反応の条件は次の通りである。
ｌずつ用いてシーケンス反応を行った。その結果、短鎖
のＤＮＡから１０００塩基を越える長鎖のＤＮＡまで安
定して作成することができ、低分子量側から１０００塩
基を越える範囲までの塩基配列の決定が可能であった。
このときの電気泳動図を図１および図２に示す。電気泳
動の条件とシーケンス反応の条件は次の通りである。
【００１３】（１）電気泳動条件 装置：島津ＤＮＡシーケンサＤＳＱ−１を改造した試作
機 ゲルサイズ：厚さ０．２ｍｍ，幅１５ｃｍ，長さ６０ｃ
ｍ ゲル担体：Hydrolink Long Ranger (AT Biochem 社製） ゲル濃度：４％(1.2×ＴＢＥ，７Ｍ尿素） 泳動緩衝液：１．２×ＴＢＥ 電力：７０Ｗコンスタント（リミット；3200Ｖ）
機 ゲルサイズ：厚さ０．２ｍｍ，幅１５ｃｍ，長さ６０ｃ
ｍ ゲル担体：Hydrolink Long Ranger (AT Biochem 社製） ゲル濃度：４％(1.2×ＴＢＥ，７Ｍ尿素） 泳動緩衝液：１．２×ＴＢＥ 電力：７０Ｗコンスタント（リミット；3200Ｖ）
【００１４】（２）シーケンス反応条件 使用ＤＮＡ：Ｍ１３ｍｐ１８（宝酒造（株）製） ＤＮＡポリメラーゼ：Ｔｔｈポリメラーゼ（宝酒造
（株）製） シーケンス条件：サイクルシーケンス法を使用（95° 3
6sec, 55℃ 36sec, 72℃ 84sec, 25サイクル、および95
° 36sec, 72℃ 84sec, 15サイクル）
（株）製） シーケンス条件：サイクルシーケンス法を使用（95° 3
6sec, 55℃ 36sec, 72℃ 84sec, 25サイクル、および95
° 36sec, 72℃ 84sec, 15サイクル）
【００１５】また、シーケンス反応時の反応溶液中の濃
度が下記のようになるシーケンス用緩衝液を用いた。 ６０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（pH 9.0) １．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ８０ｍＭ ＫＣｌ ０．５ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ ０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００
度が下記のようになるシーケンス用緩衝液を用いた。 ６０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（pH 9.0) １．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ８０ｍＭ ＫＣｌ ０．５ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ ０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００
【００１６】尚、上記の組成で各濃度はＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌは４０〜８０ｍＭ、ＭｇＣｌ2 は１．０〜５．０ｍ
Ｍ、ＫＣｌは２０〜１２０ｍＭ、ｐＨは８．８〜９．４
の範囲内で、またＢＳＡ、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を
含まなくても同様の結果が得られる。また、下記の組成
の反応液でも同様の結果が得られる。 ４０〜８０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（pH 8.8〜9.4) ４．０〜８．０ｍＭ ＭｇＣｌ2 １０〜３０ｍＭ（ＮＨ4)2 ＳＯ4
ｌは４０〜８０ｍＭ、ＭｇＣｌ2 は１．０〜５．０ｍ
Ｍ、ＫＣｌは２０〜１２０ｍＭ、ｐＨは８．８〜９．４
の範囲内で、またＢＳＡ、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を
含まなくても同様の結果が得られる。また、下記の組成
の反応液でも同様の結果が得られる。 ４０〜８０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（pH 8.8〜9.4) ４．０〜８．０ｍＭ ＭｇＣｌ2 １０〜３０ｍＭ（ＮＨ4)2 ＳＯ4
【００１７】比較例１ 次の反応基質組成（モル濃度比）よりなる、従来より市
販されているシーケンスキットを用い、蛍光プライマー
使用時のプロトコールに従って、実施例１と同様にシー
ケンス反応を行った。即ち、基質液を１サンプル当た
り、各２μｌずつ用いてシーケンス反応を行った。その
結果、短鎖のＤＮＡの作成量に比べ、長鎖のＤＮＡの作
成量が少なく、そのため塩基配列を決定できる範囲は、
５〜６００塩基程度までであった。このときの電気泳動
図を図３及び図４に示す。尚、シーケンス用緩衝液は、
実施例１と同様のものを用いた。
販されているシーケンスキットを用い、蛍光プライマー
使用時のプロトコールに従って、実施例１と同様にシー
ケンス反応を行った。即ち、基質液を１サンプル当た
り、各２μｌずつ用いてシーケンス反応を行った。その
結果、短鎖のＤＮＡの作成量に比べ、長鎖のＤＮＡの作
成量が少なく、そのため塩基配列を決定できる範囲は、
５〜６００塩基程度までであった。このときの電気泳動
図を図３及び図４に示す。尚、シーケンス用緩衝液は、
実施例１と同様のものを用いた。
【００１８】Ａ Mix：ｄｄＡＴＰ １２７５μＭ，ｄＡ
ＴＰ ４５μＭ，ｄＣＴＰ ２３４μＭ，*1Ｃ7 −ｄＧ
ＴＰ ３５１μＭ，ｄＴＴＰ ２３４μＭ， Ｃ Mix：ｄｄＣＴＰ ３１０μＭ，ｄＡＴＰ １５６μ
Ｍ，ｄＣＴＰ ３２μＭ，*1Ｃ7 −ｄＧＴＰ ２３４μ
Ｍ，ｄＴＴＰ １５６μＭ， Ｇ Mix：ｄｄＧＴＰ １６０μＭ，ｄＡＴＰ １５６μ
Ｍ，ｄＣＴＰ １５６μＭ，*1Ｃ7 −ｄＧＴＰ ９６μ
Ｍ，ｄＴＴＰ １５６μＭ， Ｔ Mix：ｄｄＴＴＰ １２００μＭ，ｄＡＴＰ ３１２
μＭ，ｄＣＴＰ ３１２μＭ，*1Ｃ7 −ｄＧＴＰ ４６
８μＭ，ｄＴＴＰ ２０μＭ， ＊１）Ｃ7 −ｄＧＴＰ（７−デアザデオキシ−グアノシ
ン−５’−トリホスフェート）
ＴＰ ４５μＭ，ｄＣＴＰ ２３４μＭ，*1Ｃ7 −ｄＧ
ＴＰ ３５１μＭ，ｄＴＴＰ ２３４μＭ， Ｃ Mix：ｄｄＣＴＰ ３１０μＭ，ｄＡＴＰ １５６μ
Ｍ，ｄＣＴＰ ３２μＭ，*1Ｃ7 −ｄＧＴＰ ２３４μ
Ｍ，ｄＴＴＰ １５６μＭ， Ｇ Mix：ｄｄＧＴＰ １６０μＭ，ｄＡＴＰ １５６μ
Ｍ，ｄＣＴＰ １５６μＭ，*1Ｃ7 −ｄＧＴＰ ９６μ
Ｍ，ｄＴＴＰ １５６μＭ， Ｔ Mix：ｄｄＴＴＰ １２００μＭ，ｄＡＴＰ ３１２
μＭ，ｄＣＴＰ ３１２μＭ，*1Ｃ7 −ｄＧＴＰ ４６
８μＭ，ｄＴＴＰ ２０μＭ， ＊１）Ｃ7 −ｄＧＴＰ（７−デアザデオキシ−グアノシ
ン−５’−トリホスフェート）
【００１９】
【発明の効果】本発明のシーケンス用反応基質液を使用
すれば、一度のシーケンス反応で決定できる塩基配列が
１０００塩基を越える範囲となるので、従来の約２倍の
塩基数の配列が一度に決定できる。従って、ＤＮＡシー
ケンスの作業量、時間、費用等が低減できる。
すれば、一度のシーケンス反応で決定できる塩基配列が
１０００塩基を越える範囲となるので、従来の約２倍の
塩基数の配列が一度に決定できる。従って、ＤＮＡシー
ケンスの作業量、時間、費用等が低減できる。
【図１】図１は、本発明のシーケンス用反応基質液を用
いた場合の電気泳動図である。
いた場合の電気泳動図である。
【図２】図２は、本発明のシーケンス用反応基質液を用
いた場合の電気泳動図である。
いた場合の電気泳動図である。
【図３】図３は、従来のシーケンス用反応基質液（市販
品）を用いた場合の電気泳動図である。
品）を用いた場合の電気泳動図である。
【図４】図４は、従来のシーケンス用反応基質液（市販
品）を用いた場合の電気泳動図である。
品）を用いた場合の電気泳動図である。
Claims (2)
- 【請求項１】 以下の反応基質組成（モル濃度比）より
なるＴｔｈポリメラーゼを用いたシーケンス用反応基質
液。 ｄｄＡＴＰ：ｄＡＴＰ＝５〜１５：１ ｄｄＣＴＰ：ｄＣＴＰ＝２．５〜７．５：１ ｄｄＧＴＰ：ｄＧＴＰ＝０．７５〜２．０：１ ｄｄＴＴＰ：ｄＴＴＰ＝５〜２０：１ - 【請求項２】 以下の反応基質組成（モル濃度比）より
なるＴｔｈポリメラーゼを用いたシーケンス用反応基質
液。 ｄｄＡＴＰ：ｄＡＴＰ＝５〜１５：１ ｄｄＣＴＰ：ｄＣＴＰ＝２．５〜７．５：１ ｄｄＧＴＰ：７−ｄｅａｚａ−ｄＧＴＰ＝１．０〜３．
０：１ ｄｄＴＴＰ：ｄＴＴＰ＝５〜２０：１
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17194594A JPH089999A (ja) | 1994-06-29 | 1994-06-29 | シーケンス用反応基質液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17194594A JPH089999A (ja) | 1994-06-29 | 1994-06-29 | シーケンス用反応基質液 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH089999A true JPH089999A (ja) | 1996-01-16 |
Family
ID=15932719
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17194594A Pending JPH089999A (ja) | 1994-06-29 | 1994-06-29 | シーケンス用反応基質液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH089999A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6291164B1 (en) | 1996-11-22 | 2001-09-18 | Invitrogen Corporation | Methods for preventing inhibition of nucleic acid synthesis by pyrophosphate |
-
1994
- 1994-06-29 JP JP17194594A patent/JPH089999A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US6764839B2 (en) | 1996-11-22 | 2004-07-20 | Invitrogen Corporation | Methods for preventing inhibition of nucleic acid synthesis by pyrophosphate |
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