JPH0892283A - エンドセリン拮抗ペプチド - Google Patents
エンドセリン拮抗ペプチドInfo
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- JPH0892283A JPH0892283A JP7178317A JP17831795A JPH0892283A JP H0892283 A JPH0892283 A JP H0892283A JP 7178317 A JP7178317 A JP 7178317A JP 17831795 A JP17831795 A JP 17831795A JP H0892283 A JPH0892283 A JP H0892283A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- endothelin
- peptide
- compound
- formula
- antagonism
- Prior art date
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 優れたエンドセリン拮抗作用を有するペプチ
ドを提供する。 【解決手段】 エンドセリン拮抗作用を有し、下記式
（Ｉ）で表されるペプチド化合物またはその薬理学的に
許容される塩を提供する。 〔式中、Ｘは （式中、Ｙはヒドロキシ、低級アルコキシ、ベンジルオ
キシ、ベンズヒドリルオキシまたはアミノを表す）を表
す〕
ドを提供する。 【解決手段】 エンドセリン拮抗作用を有し、下記式
（Ｉ）で表されるペプチド化合物またはその薬理学的に
許容される塩を提供する。 〔式中、Ｘは （式中、Ｙはヒドロキシ、低級アルコキシ、ベンジルオ
キシ、ベンズヒドリルオキシまたはアミノを表す）を表
す〕
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エンドセリン拮抗
作用を有するペプチドに関する。本発明のペプチドは、
優れたエンドセリン拮抗作用を有し、高血圧、喘息、脳
卒中、狭心症、急性腎不全、心筋梗塞、脳血管攣縮等の
治療剤として有用である。
作用を有するペプチドに関する。本発明のペプチドは、
優れたエンドセリン拮抗作用を有し、高血圧、喘息、脳
卒中、狭心症、急性腎不全、心筋梗塞、脳血管攣縮等の
治療剤として有用である。
【０００２】
【従来の技術】エンドセリンは、強力かつ持続的な血管
収縮作用を有する環状ペプチドであり、高血圧、喘息、
脳卒中、狭心症、急性腎不全、心筋梗塞および脳血管攣
縮に関与する物質の一つと考えられている。したがっ
て、エンドセリンに拮抗しこの作用を阻害する物質は、
これらの病気の治療ならびに予防において有用と期待さ
れる。下記式（Ａ）
収縮作用を有する環状ペプチドであり、高血圧、喘息、
脳卒中、狭心症、急性腎不全、心筋梗塞および脳血管攣
縮に関与する物質の一つと考えられている。したがっ
て、エンドセリンに拮抗しこの作用を阻害する物質は、
これらの病気の治療ならびに予防において有用と期待さ
れる。下記式（Ａ）
【０００３】
【化３】
【０００４】（式中、Ｚは天然型アミノ酸残基を表す）
で表されるペプチドがエンドセリン拮抗作用を有するこ
とが知られている（WO93/13218）。しかし、非天然型ア
ミノ酸残基を有するペプチドについては開示がない。
で表されるペプチドがエンドセリン拮抗作用を有するこ
とが知られている（WO93/13218）。しかし、非天然型ア
ミノ酸残基を有するペプチドについては開示がない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、優れ
たエンドセリン拮抗作用を有するペプチドを提供するこ
とにある。
たエンドセリン拮抗作用を有するペプチドを提供するこ
とにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、下記式
（Ｉ）で表されるペプチド化合物またはその薬理学的に
許容されうる塩が提供される。
（Ｉ）で表されるペプチド化合物またはその薬理学的に
許容されうる塩が提供される。
【０００７】
【化４】
【０００８】〔式中、Ｘは
【０００９】
【化５】
【００１０】（式中、Ｙはヒドロキシ、低級アルコキ
シ、ベンジルオキシ、ベンズヒドリルオキシまたはアミ
ノを表す）を表す〕 以下、上記式（Ｉ）で表されるペプチド化合物を化合物
（Ｉ）といい、他の式番号の化合物についても同様であ
る。
シ、ベンジルオキシ、ベンズヒドリルオキシまたはアミ
ノを表す）を表す〕 以下、上記式（Ｉ）で表されるペプチド化合物を化合物
（Ｉ）といい、他の式番号の化合物についても同様であ
る。
【発明の実施の形態】上記式（Ｉ）の定義において、低
級アルコキシのアルキル部分としては、直鎖もしくは分
岐状の炭素数１〜６の、例えば、メチル、エチル、プロ
ピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチ
ル、tert- ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシ
ル、イソヘキシルなどがあげられる。
級アルコキシのアルキル部分としては、直鎖もしくは分
岐状の炭素数１〜６の、例えば、メチル、エチル、プロ
ピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチ
ル、tert- ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシ
ル、イソヘキシルなどがあげられる。
【００１１】化合物（Ｉ）の薬理学的に許容されうる塩
としては、酸付加塩、金属塩、有機塩基付加塩があげら
れる。具体的には、薬理学的に許容されうる酸付加塩と
しては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸
塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩
等の有機酸塩があげられ、薬理学的に許容されうる金属
塩としてはナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属
塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金
属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられる。薬理学
的に許容されうる有機塩基付加塩としてはメチルアミ
ン、エチルアミン、アニリン等の一級アミン、ジメチル
アミン、ジエチルアミン、ピロリジン、ピペリジン、モ
ルホリン、ピペラジン等の二級アミン、トリメチルアミ
ン、トリエチルアミン、N,N-ジメチルアニリン、ピリジ
ン等の三級アミンとで形成される塩およびアンモニウム
塩等があげられる。
としては、酸付加塩、金属塩、有機塩基付加塩があげら
れる。具体的には、薬理学的に許容されうる酸付加塩と
しては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸
塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩
等の有機酸塩があげられ、薬理学的に許容されうる金属
塩としてはナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属
塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金
属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられる。薬理学
的に許容されうる有機塩基付加塩としてはメチルアミ
ン、エチルアミン、アニリン等の一級アミン、ジメチル
アミン、ジエチルアミン、ピロリジン、ピペリジン、モ
ルホリン、ピペラジン等の二級アミン、トリメチルアミ
ン、トリエチルアミン、N,N-ジメチルアニリン、ピリジ
ン等の三級アミンとで形成される塩およびアンモニウム
塩等があげられる。
【００１２】以下に、本発明を詳細に説明する。本明細
書において使用したアミノ酸及びその保護基に関する略
号は、生化学命名に関するIUPAC-IUB 委員会(IUPAC-IUB
Joint Commission on Biochemical Nomenclature ）の
勧告〔Eur. J. Biochem., 138, 9(1984)〕に従った。以
下の略号は、特にことわらない限り対応する下記のアミ
ノ酸及び保護基を表す。 Ｇｌｙ；グリシン Ａｌａ；Ｌ−アラニン Ｔｈｒ；Ｌ−スレオニン Ｐｒｏ；Ｌ−プロリン Ａｓｐ；Ｌ−アスパラギン酸 Ａｓｎ；Ｌ−アスパラギン Ａｓｘ；Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−アスパラギン Ｈｉｓ；Ｌ−ヒスチジン Ｐｈｅ；Ｌ−フェニルアラニン Ｔｙｒ；Ｌ−チロシン Ｔｒｐ；Ｌ−トリプトファン Ｎａｌ；Ｌ−β−（２−ナフチル）アラニン
書において使用したアミノ酸及びその保護基に関する略
号は、生化学命名に関するIUPAC-IUB 委員会(IUPAC-IUB
Joint Commission on Biochemical Nomenclature ）の
勧告〔Eur. J. Biochem., 138, 9(1984)〕に従った。以
下の略号は、特にことわらない限り対応する下記のアミ
ノ酸及び保護基を表す。 Ｇｌｙ；グリシン Ａｌａ；Ｌ−アラニン Ｔｈｒ；Ｌ−スレオニン Ｐｒｏ；Ｌ−プロリン Ａｓｐ；Ｌ−アスパラギン酸 Ａｓｎ；Ｌ−アスパラギン Ａｓｘ；Ｌ−アスパラギン酸またはＬ−アスパラギン Ｈｉｓ；Ｌ−ヒスチジン Ｐｈｅ；Ｌ−フェニルアラニン Ｔｙｒ；Ｌ−チロシン Ｔｒｐ；Ｌ−トリプトファン Ｎａｌ；Ｌ−β−（２−ナフチル）アラニン
【００１３】
【化６】
【００１４】Ｔｒｎ；２−（３−インドリル）エチルア
ミン
ミン
【００１５】
【化７】
【００１６】Ｆｍｏｃ；９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル 以下の略号は、対応する下記の側鎖保護アミノ酸を表
す。 Ｈ−Ｎａｌ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2 ）；Ｌ−β−（２−ナフ
チル）アラニン ４−ニトロベンジルエステル 以下の略号は、対応する下記の反応溶媒及び反応試薬を
表す。 ＰｙＢＯＰ；ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリ
ピロリジノフォスフォニウムヘキサフルオロフォスフェ
ート ＨＯＢｔ；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＮＭＭ；Ｎ−メチルモルホリン ＤＭＦ；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド ＴＦＡ；トリフルオロ酢酸
カルボニル 以下の略号は、対応する下記の側鎖保護アミノ酸を表
す。 Ｈ−Ｎａｌ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2 ）；Ｌ−β−（２−ナフ
チル）アラニン ４−ニトロベンジルエステル 以下の略号は、対応する下記の反応溶媒及び反応試薬を
表す。 ＰｙＢＯＰ；ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリ
ピロリジノフォスフォニウムヘキサフルオロフォスフェ
ート ＨＯＢｔ；Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＮＭＭ；Ｎ−メチルモルホリン ＤＭＦ；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド ＴＦＡ；トリフルオロ酢酸
【００１７】本発明の化合物（Ｉ）の製造法について説
明する。化合物（Ｉ）は、以下の反応式に従い得ること
ができる。
明する。化合物（Ｉ）は、以下の反応式に従い得ること
ができる。
【００１８】
【化８】
【００１９】ＲＥＳ−７０１−１（WO93/13218）にカル
ボキシペプチダーゼ等の蛋白質加水分解酵素等を作用さ
せることにより化合物（Ｂ）を得る。次いで、化合物
（Ｉ）は、化合物（Ｂ）と化合物（ＩＩ）または適当に
保護された化合物（ＩＩ）とを縮合剤（例えば、ＰｙＢ
ＯＰ／ＨＯＢｔ／ＮＭＭ）を用いて縮合させ、必要によ
り次いで常法（例えば、ペプチド合成の基礎と実験、泉
屋信夫ら、丸善）に従って脱保護することにより得られ
る。
ボキシペプチダーゼ等の蛋白質加水分解酵素等を作用さ
せることにより化合物（Ｂ）を得る。次いで、化合物
（Ｉ）は、化合物（Ｂ）と化合物（ＩＩ）または適当に
保護された化合物（ＩＩ）とを縮合剤（例えば、ＰｙＢ
ＯＰ／ＨＯＢｔ／ＮＭＭ）を用いて縮合させ、必要によ
り次いで常法（例えば、ペプチド合成の基礎と実験、泉
屋信夫ら、丸善）に従って脱保護することにより得られ
る。
【００２０】このようにして得られる化合物（Ｉ）は、
Ｃ−４、Ｃ−８あるいはＣ−１８逆相シリカゲルカラム
を用いた高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣ
という）あるいは分配、吸着樹脂、シリカゲル、化学修
飾シリカゲル、逆相シリカゲル、アルミナ、珪藻土、珪
酸マグネシウム、イオン交換樹脂、あるいはゲル濾過等
のカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラ
フィーにより精製することができる。
Ｃ−４、Ｃ−８あるいはＣ−１８逆相シリカゲルカラム
を用いた高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣ
という）あるいは分配、吸着樹脂、シリカゲル、化学修
飾シリカゲル、逆相シリカゲル、アルミナ、珪藻土、珪
酸マグネシウム、イオン交換樹脂、あるいはゲル濾過等
のカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラ
フィーにより精製することができる。
【００２１】化合物（Ｉ）の薬理学的に許容されうる塩
は常法により得ることができる。すなわち、化合物
（Ｉ）の酸付加塩および有機塩基付加塩は、対応する酸
あるいは有機塩基の水溶液に化合物（Ｉ）を溶解し、凍
結乾燥することによって得られる。また、化合物（Ｉ）
の金属塩は、対応する金属イオンを含む水溶液に化合物
（Ｉ）を溶解し、ゲル濾過もしくはＨＰＬＣで精製する
ことによって得られる。
は常法により得ることができる。すなわち、化合物
（Ｉ）の酸付加塩および有機塩基付加塩は、対応する酸
あるいは有機塩基の水溶液に化合物（Ｉ）を溶解し、凍
結乾燥することによって得られる。また、化合物（Ｉ）
の金属塩は、対応する金属イオンを含む水溶液に化合物
（Ｉ）を溶解し、ゲル濾過もしくはＨＰＬＣで精製する
ことによって得られる。
【００２２】次に、化合物（Ｉ）の具体例を第１表に示
す。
す。
【００２３】
【表１】
【００２４】次に、化合物（Ｉ）の薬理作用について試
験例で説明する。 試験例１ エンドセリン受容体拮抗作用 ４℃で牛小脳組織を緩衝液Ａ（1mM NaHCO3、5mM エチレ
ンジアミン四酢酸、５μg/ml ロイペプチン、５μg/ml
ペプスタチンＡ、40μM フェニルメチルスルフォニル
フルオリド、pH8.3 ）中、ポリトロン（タイプ PT10/35
Kinematica Gmbh 社製）で均質化した。
験例で説明する。 試験例１ エンドセリン受容体拮抗作用 ４℃で牛小脳組織を緩衝液Ａ（1mM NaHCO3、5mM エチレ
ンジアミン四酢酸、５μg/ml ロイペプチン、５μg/ml
ペプスタチンＡ、40μM フェニルメチルスルフォニル
フルオリド、pH8.3 ）中、ポリトロン（タイプ PT10/35
Kinematica Gmbh 社製）で均質化した。
【００２５】得られた懸濁液を４℃、8,000 ｇで10分間
遠心分離し、得られた上清液を４℃、40,000ｇで60分間
遠心分離し、ペレットを得た。得られたペレットを緩衝
液Ａに懸濁し、再び４℃、40,000ｇで60分間遠心分離し
た。得られた固形物をタンパク質含量が２mg/ml になる
ように懸濁溶液として調製し、膜画分液とした。緩衝液
Ｂ（50mM トリス−塩酸、1mM エチレンジアミン四酢
酸、0.2%牛血清アルブミン、pH7.6) 1mlあたり膜画分液
７μl を加えて膜画分溶液を調製した。
遠心分離し、得られた上清液を４℃、40,000ｇで60分間
遠心分離し、ペレットを得た。得られたペレットを緩衝
液Ａに懸濁し、再び４℃、40,000ｇで60分間遠心分離し
た。得られた固形物をタンパク質含量が２mg/ml になる
ように懸濁溶液として調製し、膜画分液とした。緩衝液
Ｂ（50mM トリス−塩酸、1mM エチレンジアミン四酢
酸、0.2%牛血清アルブミン、pH7.6) 1mlあたり膜画分液
７μl を加えて膜画分溶液を調製した。
【００２６】非標識エンドセリン−１（最終濃度100nM)
添加または試験化合物のいずれかを添加またはどちらも
無添加の膜画分溶液に、125I−エンドセリン−１（約3
0,000cpm)を加えた。これら混合物を25℃で２時間イン
キュベートした後、グラスフィルター GF/B(Whatman社
製) でろ過した。フィルターを緩衝液Ｃ（50mM トリス
−塩酸、1mM エチレンジアミン四酢酸、pH7.6)で洗浄
後、グラスフィルター上の放射活性を測定して、受容体
および非特異的に結合した125I−エンドセリン量を測定
し、以下の式に従ってエンドセリン結合阻害率を計算し
た。
添加または試験化合物のいずれかを添加またはどちらも
無添加の膜画分溶液に、125I−エンドセリン−１（約3
0,000cpm)を加えた。これら混合物を25℃で２時間イン
キュベートした後、グラスフィルター GF/B(Whatman社
製) でろ過した。フィルターを緩衝液Ｃ（50mM トリス
−塩酸、1mM エチレンジアミン四酢酸、pH7.6)で洗浄
後、グラスフィルター上の放射活性を測定して、受容体
および非特異的に結合した125I−エンドセリン量を測定
し、以下の式に従ってエンドセリン結合阻害率を計算し
た。
【００２７】
【数１】
【００２８】結果を第２表に示す。
【００２９】
【表２】
【００３０】試験例２ エンドセリン受容体拮抗作用 試験例１における牛小脳組織を牛肺臓組織に代え、膜画
分溶液の調製時にＲＥＳ−７０１−１を１．５μg/mlの
割合で加える以外は、試験例１と同様の方法により、エ
ンドセリン受容体結合阻害率を求めた。結果を第３表に
示す。
分溶液の調製時にＲＥＳ−７０１−１を１．５μg/mlの
割合で加える以外は、試験例１と同様の方法により、エ
ンドセリン受容体結合阻害率を求めた。結果を第３表に
示す。
【００３１】
【表３】
【００３２】以下に、本発明の実施例および参考例を示
す。
す。
【００３３】実施例１ 化合物（Ｉ−１）の合成 参考例１で得られた化合物（Ｂ）１ｍｇを含む0.5ml Ｄ
ＭＦ溶液に、ＰｙＢＯＰ 0.84mg を含む0.1ml ＤＭＦ溶
液、ＨＯＢｔ 0.22mg を含む0.1ml ＤＭＦ溶液、ＮＭＭ
0.3μl を含む0.1ml ＤＭＦ溶液を加え、０℃で１０分
間放置した。次いで、Ｈ−Ｔｒｎ・ＨＣｌ 0.53mg とＮ
ＭＭ 0.3μl を含む0.1ml ＤＭＦ溶液を加え、４℃で１
６時間攪拌した。２Ｍ酢酸 0.1mlを加えた後、逆相カラ
ム（資生堂製、ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ２５
０ｍｍ×３０ｍｍＩ．Ｄ．）を用いたＨＰＬＣで、０．
１％ＴＦＡと０〜９０％アセトニトリルを用いた直線濃
度勾配で溶出し、紫外部吸収波長２２０ｎｍで検出し、
標記化合物を含む画分を得た。この画分を凍結乾燥し
て、化合物（Ｉ−１）0.1mg を得た。
ＭＦ溶液に、ＰｙＢＯＰ 0.84mg を含む0.1ml ＤＭＦ溶
液、ＨＯＢｔ 0.22mg を含む0.1ml ＤＭＦ溶液、ＮＭＭ
0.3μl を含む0.1ml ＤＭＦ溶液を加え、０℃で１０分
間放置した。次いで、Ｈ−Ｔｒｎ・ＨＣｌ 0.53mg とＮ
ＭＭ 0.3μl を含む0.1ml ＤＭＦ溶液を加え、４℃で１
６時間攪拌した。２Ｍ酢酸 0.1mlを加えた後、逆相カラ
ム（資生堂製、ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ２５
０ｍｍ×３０ｍｍＩ．Ｄ．）を用いたＨＰＬＣで、０．
１％ＴＦＡと０〜９０％アセトニトリルを用いた直線濃
度勾配で溶出し、紫外部吸収波長２２０ｎｍで検出し、
標記化合物を含む画分を得た。この画分を凍結乾燥し
て、化合物（Ｉ−１）0.1mg を得た。
【００３４】質量分析［ＦＡＢＭＳ］：１９９８（Ｍ＋
Ｈ） アミノ酸分析：Gly 2.2(2), Ala 1.0(1), Asx 2.0(3),
His 1.0(1), Pro 1.1(1), Thr 1.1(1), Tyr 1.9(2), Ph
e 1.9(2) （Ｔｒｐ，Ｔｒｎは分析せず）
Ｈ） アミノ酸分析：Gly 2.2(2), Ala 1.0(1), Asx 2.0(3),
His 1.0(1), Pro 1.1(1), Thr 1.1(1), Tyr 1.9(2), Ph
e 1.9(2) （Ｔｒｐ，Ｔｒｎは分析せず）
【００３５】実施例２ 化合物（Ｉ−２）の合成 工程１：Ｈ−Ｎａｌ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2 ）の合成 Ｆｍｏｃ−Ｎａｌ−ＯＨ 43.75mgをＤＭＦ 1mlに溶解
し、炭酸水素ナトリウム16.8mg 及び臭化４−ニトロベ
ンジル 108mgを加え、室温で１７時間攪拌した。酢酸エ
チル30ml及び水70mlを加えて振とう後、酢酸エチル層を
回収し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。これを濾過
し、濾液の溶媒を留去後、シリカゲルカラム（メルク社
製、キーゼルゲル６０、溶離液：酢酸エチル／ヘキサ
ン）に付すことにより、Ｆｍｏｃ−Ｎａｌ−ＯＢｚｌ
（ＮＯ2 ）を白色粉末として得た。得られた粉末を２０
％ピペリジンを含むＤＭＦに溶解し、室温で２０分間放
置した。溶媒を減圧下留去し、実施例１と同様にして分
取精製し、Ｈ−Ｎａｌ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2 ）33.6mgを得
た。 質量分析［ＦＡＢＭＳ］：３５１（Ｍ＋Ｈ）
し、炭酸水素ナトリウム16.8mg 及び臭化４−ニトロベ
ンジル 108mgを加え、室温で１７時間攪拌した。酢酸エ
チル30ml及び水70mlを加えて振とう後、酢酸エチル層を
回収し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。これを濾過
し、濾液の溶媒を留去後、シリカゲルカラム（メルク社
製、キーゼルゲル６０、溶離液：酢酸エチル／ヘキサ
ン）に付すことにより、Ｆｍｏｃ−Ｎａｌ−ＯＢｚｌ
（ＮＯ2 ）を白色粉末として得た。得られた粉末を２０
％ピペリジンを含むＤＭＦに溶解し、室温で２０分間放
置した。溶媒を減圧下留去し、実施例１と同様にして分
取精製し、Ｈ−Ｎａｌ−ＯＢｚｌ（ＮＯ2 ）33.6mgを得
た。 質量分析［ＦＡＢＭＳ］：３５１（Ｍ＋Ｈ）
【００３６】工程２：化合物（Ｉ−２）の合成 参考例１で得られた化合物（Ｂ） 100μg を含む55μl
ＤＭＦ溶液に、ＰｙＢＯＰ 84 μg を含む10μl ＤＭＦ
溶液、ＨＯＢｔ 22 μg を含む10μl ＤＭＦ溶液、ＮＭ
Ｍ 0.03 μl を含む10μl ＤＭＦ溶液を加え、０℃で１
０分間放置した。次いで、工程１で得られたＨ−Ｎａｌ
−ＯＢｚｌ（ＮＯ2 ）125 μg とＮＭＭ0.03 μl を含
む10μl ＤＭＦ溶液を加え、４℃で５０時間攪拌した。
９０％酢酸100 μl を加えた後、氷冷下、亜鉛粉約5mg
を加え、１０分間放置後室温に戻し、１時間攪拌した。
遠心分離後、上清液を実施例１と同様に分取精製し化合
物（Ｉ−２）14μg を得た。
ＤＭＦ溶液に、ＰｙＢＯＰ 84 μg を含む10μl ＤＭＦ
溶液、ＨＯＢｔ 22 μg を含む10μl ＤＭＦ溶液、ＮＭ
Ｍ 0.03 μl を含む10μl ＤＭＦ溶液を加え、０℃で１
０分間放置した。次いで、工程１で得られたＨ−Ｎａｌ
−ＯＢｚｌ（ＮＯ2 ）125 μg とＮＭＭ0.03 μl を含
む10μl ＤＭＦ溶液を加え、４℃で５０時間攪拌した。
９０％酢酸100 μl を加えた後、氷冷下、亜鉛粉約5mg
を加え、１０分間放置後室温に戻し、１時間攪拌した。
遠心分離後、上清液を実施例１と同様に分取精製し化合
物（Ｉ−２）14μg を得た。
【００３７】質量分析［ＦＡＢＭＳ］：２０５３（Ｍ＋
Ｈ） アミノ酸分析：Gly 2.3(2), Ala 1.0(1), Asx 2.0(3),
His 1.0(1), Pro 1.1(1), Thr 1.0(1), Tyr 1.9(2), Ph
e 1.9(2) （Ｔｒｐ，Ｎａｌは分析せず）
Ｈ） アミノ酸分析：Gly 2.3(2), Ala 1.0(1), Asx 2.0(3),
His 1.0(1), Pro 1.1(1), Thr 1.0(1), Tyr 1.9(2), Ph
e 1.9(2) （Ｔｒｐ，Ｎａｌは分析せず）
【００３８】参考例１ 化合物（Ｂ）の合成 ＲＥＳ−７０１−１ 7.1mgをメタノール2.84mlに溶解
し、0.1Mトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）25.56ml を添
加し、さらにカルボキシペプチダーゼＡ（シグマ社製Ｃ
−９７６２）約0.3mg を加え、３７℃で一晩攪拌した。
反応液に適量の塩酸を加えて酸性にし、ＮＵＣＬＥＯＳ
ＩＬ ５Ｃ１８（Ｃｈｅｍｃｏ社製、２５０×２０ｍｍ
Ｉ．Ｄ．）を装着した逆相ＨＰＬＣを用いて、毎分１０
ｍｌの流速で０．１％ＴＦＡ溶液中アセトニトリル濃度
を０％から５０％に３０分で上昇させる直線濃度勾配で
溶出し、化合物（Ｂ）3.5mg を得た。
し、0.1Mトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）25.56ml を添
加し、さらにカルボキシペプチダーゼＡ（シグマ社製Ｃ
−９７６２）約0.3mg を加え、３７℃で一晩攪拌した。
反応液に適量の塩酸を加えて酸性にし、ＮＵＣＬＥＯＳ
ＩＬ ５Ｃ１８（Ｃｈｅｍｃｏ社製、２５０×２０ｍｍ
Ｉ．Ｄ．）を装着した逆相ＨＰＬＣを用いて、毎分１０
ｍｌの流速で０．１％ＴＦＡ溶液中アセトニトリル濃度
を０％から５０％に３０分で上昇させる直線濃度勾配で
溶出し、化合物（Ｂ）3.5mg を得た。
【００３９】質量分析［ＦＡＢＭＳ］：１８５８（Ｍ＋
Ｈ） アミノ酸分析：Gly 2.2(2), Ala 1.0(1), Asx 2.6(3),
His 0.9(1), Pro 1.1(1), Thr 1.0(1), Tyr 1.8(2), Ph
e 1.9(2) （Ｔｒｐは分析せず）
Ｈ） アミノ酸分析：Gly 2.2(2), Ala 1.0(1), Asx 2.6(3),
His 0.9(1), Pro 1.1(1), Thr 1.0(1), Tyr 1.8(2), Ph
e 1.9(2) （Ｔｒｐは分析せず）
【００４０】
【発明の効果】本発明によれば、エンドセリン拮抗作用
を有し、高血圧、喘息、脳卒中、狭心症、急性腎不全、
心筋梗塞、脳血管攣縮等の治療剤として有用な新規ペプ
チドを提供することができる。
を有し、高血圧、喘息、脳卒中、狭心症、急性腎不全、
心筋梗塞、脳血管攣縮等の治療剤として有用な新規ペプ
チドを提供することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＵ ＡＣＤ ＡＣＶ ＡＥＤ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＣＤ ＡＣＶ ＡＥＤ
Claims (1)
- 【請求項１】 下記式（Ｉ）で表されるペプチド化合物
またはその薬理学的に許容されうる塩。 【化１】 〔式中、Ｘは 【化２】 （式中、Ｙはヒドロキシ、低級アルコキシ、ベンジルオ
キシ、ベンズヒドリルオキシまたはアミノを表す）を表
す〕
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7178317A JPH0892283A (ja) | 1994-07-25 | 1995-07-14 | エンドセリン拮抗ペプチド |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17269894 | 1994-07-25 | ||
| JP6-172698 | 1994-07-25 | ||
| JP7178317A JPH0892283A (ja) | 1994-07-25 | 1995-07-14 | エンドセリン拮抗ペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0892283A true JPH0892283A (ja) | 1996-04-09 |
Family
ID=26494969
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7178317A Withdrawn JPH0892283A (ja) | 1994-07-25 | 1995-07-14 | エンドセリン拮抗ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0892283A (ja) |
-
1995
- 1995-07-14 JP JP7178317A patent/JPH0892283A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20021001 |