JPH0889288A - 試料中の成分の定量法 - Google Patents
試料中の成分の定量法Info
- Publication number
- JPH0889288A JPH0889288A JP25900294A JP25900294A JPH0889288A JP H0889288 A JPH0889288 A JP H0889288A JP 25900294 A JP25900294 A JP 25900294A JP 25900294 A JP25900294 A JP 25900294A JP H0889288 A JPH0889288 A JP H0889288A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hemoglobin
- sample
- reagent
- specimen
- component
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】ヘモグロビンによる影響を受けない試料中の成
分の定量法を提供すること 【構成】血清等の試料中の成分（例えば１，５−アンヒ
ドログルシトール）を酸化酵素を用いて定量する際に、
アルキルスルフォン酸塩及びアルキルナフタレンスルフ
ォン酸塩を共存させる。
分の定量法を提供すること 【構成】血清等の試料中の成分（例えば１，５−アンヒ
ドログルシトール）を酸化酵素を用いて定量する際に、
アルキルスルフォン酸塩及びアルキルナフタレンスルフ
ォン酸塩を共存させる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、定量しようとする試料
が仮にヘモグロビンを含んでいる場合があっても、試料
中のヘモグロビンによる測定の干渉を抑え、試料中の特
定の成分、例えば１，５−アンヒドログルシトール（以
下１，５ＡＧと略す。）等を酵素反応を利用して精度良
く定量する方法に関する。
が仮にヘモグロビンを含んでいる場合があっても、試料
中のヘモグロビンによる測定の干渉を抑え、試料中の特
定の成分、例えば１，５−アンヒドログルシトール（以
下１，５ＡＧと略す。）等を酵素反応を利用して精度良
く定量する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】生体試料中には、時としてヘモグロビン
が含まれている場合がある。その場合、成分を酵素反応
を利用して分析する際に試料中のヘモグロビンが成分の
測定結果に影響を与える。かかる場合目的成分の定量に
先だってヘモグロビンを分解あるいは当該定量に影響し
ない物質に変換するか、あるいは影響のでない測定波長
領域で定量を行なう必要がある。
が含まれている場合がある。その場合、成分を酵素反応
を利用して分析する際に試料中のヘモグロビンが成分の
測定結果に影響を与える。かかる場合目的成分の定量に
先だってヘモグロビンを分解あるいは当該定量に影響し
ない物質に変換するか、あるいは影響のでない測定波長
領域で定量を行なう必要がある。
【０００３】試料中のヘモグロビンを消去する方法とし
ては、（ａ）イオン交換カラムを用いてヘモグロビンを
吸着除去する方法（特開昭６３−１８５３０７号公報、
特開昭６４−６７５６号公報）、( ｂ) 酸化剤を用いて
酸化ヘモグロビン（メトヘモグロビン）とする方法があ
る。又、特定波長領域を用いる方法としては、（ｃ）発
色定量する際の発色基質に長波長高感度の基質を用いて
試料の使用量を下げて影響を少なくする方法等が考案さ
れている。
ては、（ａ）イオン交換カラムを用いてヘモグロビンを
吸着除去する方法（特開昭６３−１８５３０７号公報、
特開昭６４−６７５６号公報）、( ｂ) 酸化剤を用いて
酸化ヘモグロビン（メトヘモグロビン）とする方法があ
る。又、特定波長領域を用いる方法としては、（ｃ）発
色定量する際の発色基質に長波長高感度の基質を用いて
試料の使用量を下げて影響を少なくする方法等が考案さ
れている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】（ａ）のカラムを用い
る方法は、用手法で操作が煩雑であり、（ｂ）の方法は
発色基質をも酸化する場合があり発色を抑えることが難
しい。又、（ｃ）の方法により高感度で長波長の発色基
質によって影響を回避しようとしても完全に影響が回避
されていないため、必ずしも 満足できる結果は得られ
ない。例えば、１，５ＡＧは糖尿病の診断マーカーとし
て知られている。１，５ＡＧの定量法としては該物質に
酸化酵素を作用させた後、酸素の消費量、過酸化水素の
生成量または電子受容体の還元体の生成量を測定する方
法が知られている（特公平３−２４２００号公報）。し
かしながら、血液等のヘモグロビンを含有する試料を用
いた時に、正確な測定値が得られない場合が多い。従っ
て、多数の試料を自動分析装置を用いて分析する場合等
に、その中にヘモグロビンを含む試料が存在していて
も、該試料中のヘモグロビンの影響を回避し、全ての試
料について目的の成分を正確に定量できる方法の開発が
求められている。
る方法は、用手法で操作が煩雑であり、（ｂ）の方法は
発色基質をも酸化する場合があり発色を抑えることが難
しい。又、（ｃ）の方法により高感度で長波長の発色基
質によって影響を回避しようとしても完全に影響が回避
されていないため、必ずしも 満足できる結果は得られ
ない。例えば、１，５ＡＧは糖尿病の診断マーカーとし
て知られている。１，５ＡＧの定量法としては該物質に
酸化酵素を作用させた後、酸素の消費量、過酸化水素の
生成量または電子受容体の還元体の生成量を測定する方
法が知られている（特公平３−２４２００号公報）。し
かしながら、血液等のヘモグロビンを含有する試料を用
いた時に、正確な測定値が得られない場合が多い。従っ
て、多数の試料を自動分析装置を用いて分析する場合等
に、その中にヘモグロビンを含む試料が存在していて
も、該試料中のヘモグロビンの影響を回避し、全ての試
料について目的の成分を正確に定量できる方法の開発が
求められている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、測定系に
アルキルスルフォン酸塩及びアルキルナフタレンスルフ
ォン酸塩を共存させることによって、目的成分を酸化酵
素により酸化し同時に過酸化水素を生成せしめ、試料中
のヘモグロビンの影響を回避してヘモグロビンを含む試
料であっても含まない試料であってもいずれも正確に目
的成分を定量することができることを見出し本発明を完
成した。
アルキルスルフォン酸塩及びアルキルナフタレンスルフ
ォン酸塩を共存させることによって、目的成分を酸化酵
素により酸化し同時に過酸化水素を生成せしめ、試料中
のヘモグロビンの影響を回避してヘモグロビンを含む試
料であっても含まない試料であってもいずれも正確に目
的成分を定量することができることを見出し本発明を完
成した。
【０００６】すなわち本発明は、（１）試料中の成分を
酸化酵素を用いて定量する際にアルキルスルフォン酸塩
及びアルキルナフタレンスルフォン酸塩を共存させるこ
とを特徴とする試料中の成分の定量法、（２）試料中の
定量すべき成分が１，５ＡＧである上記（１）記載の定
量法、（３）試料が血液由来の試料である上記（１）又
は（２）記載の定量法、に関するものである。
酸化酵素を用いて定量する際にアルキルスルフォン酸塩
及びアルキルナフタレンスルフォン酸塩を共存させるこ
とを特徴とする試料中の成分の定量法、（２）試料中の
定量すべき成分が１，５ＡＧである上記（１）記載の定
量法、（３）試料が血液由来の試料である上記（１）又
は（２）記載の定量法、に関するものである。
【０００７】本発明によれば、ヘモグロビンを含有して
いる試料中の成分の測定値がヘモグロビンの含有量依存
的に下がる影響が回避され、ヘモグロビンの影響を受け
ない測定が可能である。よって、本発明によれば自動分
析装置等を用いて多数の試料の分析を行なう場合、多数
の試料中にヘモグロビンを含む試料が存在していても、
該試料についても、目的とする試料中の成分の定量を正
確に行なうことができ、更に、測定系にアルキルスルフ
ォン酸塩及びアルキルナフタレンスルフォン酸塩を共存
させても、ヘモグロビンを含まない試料の正確な定量に
実質的な悪影響を及ぼさない。従って、本発明によれ
ば、ヘモグロビンを含む試料と含まない試料を区別しな
くても、全ての試料について成分の正確な定量が可能と
なるため、多数の試料の分析を同一の方法（本発明の方
法）により簡単に正確に行なうことができる。
いる試料中の成分の測定値がヘモグロビンの含有量依存
的に下がる影響が回避され、ヘモグロビンの影響を受け
ない測定が可能である。よって、本発明によれば自動分
析装置等を用いて多数の試料の分析を行なう場合、多数
の試料中にヘモグロビンを含む試料が存在していても、
該試料についても、目的とする試料中の成分の定量を正
確に行なうことができ、更に、測定系にアルキルスルフ
ォン酸塩及びアルキルナフタレンスルフォン酸塩を共存
させても、ヘモグロビンを含まない試料の正確な定量に
実質的な悪影響を及ぼさない。従って、本発明によれ
ば、ヘモグロビンを含む試料と含まない試料を区別しな
くても、全ての試料について成分の正確な定量が可能と
なるため、多数の試料の分析を同一の方法（本発明の方
法）により簡単に正確に行なうことができる。
【０００８】本発明において使用されるアルキルスルフ
ォン酸塩あるいはアルキルナフタレンスルフォン酸塩は
一般的には陰イオン界面活性剤で分類される化合物で蛋
白質の変性剤として用いられている。したがって、使用
量が多すぎると試薬として用いる酵素蛋白をも変性し酵
素活性を低下させる危険性があり、少なすぎると十分な
効果が出ず、使用量はそれぞれ、通常、酸化酵素による
反応が行なわれる系中の濃度が０．００５％〜０．５
％、好ましくは０．０１％〜０．１％となる量である。
アルキルスルフォン酸塩のアルキルとしては、Ｃ６〜１
８の長鎖アルキルが好ましく、特にＣ１０〜１８の長鎖
アルキルが好ましい。アルキルナフタレンスルフォン酸
塩のアルキルとしてはＣ３〜１２のアルキルが好まし
く、特にＣ４〜８のアルキルが好ましい。塩としては、
ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩等が挙げら
れる。たとえば、アルキルスルフォン酸ナトリウムとし
て、ラテムルＰＳ（花王（株））、ニッコールＯＳ−１
４（日光ケミカルズ（株））、ＩＰＣ−ＡＩＫＳ−６〜
１３（東京化成工業（株））などが市販されており、
又、アルキルナフタレンスルフォン酸ナトリウムとして
ペレックスＮＢペースト、ペレックスＮＢ−Ｌ（花王
（株））などが市販されている。
ォン酸塩あるいはアルキルナフタレンスルフォン酸塩は
一般的には陰イオン界面活性剤で分類される化合物で蛋
白質の変性剤として用いられている。したがって、使用
量が多すぎると試薬として用いる酵素蛋白をも変性し酵
素活性を低下させる危険性があり、少なすぎると十分な
効果が出ず、使用量はそれぞれ、通常、酸化酵素による
反応が行なわれる系中の濃度が０．００５％〜０．５
％、好ましくは０．０１％〜０．１％となる量である。
アルキルスルフォン酸塩のアルキルとしては、Ｃ６〜１
８の長鎖アルキルが好ましく、特にＣ１０〜１８の長鎖
アルキルが好ましい。アルキルナフタレンスルフォン酸
塩のアルキルとしてはＣ３〜１２のアルキルが好まし
く、特にＣ４〜８のアルキルが好ましい。塩としては、
ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩等が挙げら
れる。たとえば、アルキルスルフォン酸ナトリウムとし
て、ラテムルＰＳ（花王（株））、ニッコールＯＳ−１
４（日光ケミカルズ（株））、ＩＰＣ−ＡＩＫＳ−６〜
１３（東京化成工業（株））などが市販されており、
又、アルキルナフタレンスルフォン酸ナトリウムとして
ペレックスＮＢペースト、ペレックスＮＢ−Ｌ（花王
（株））などが市販されている。
【０００９】本発明は特に目的の成分を分析する際に用
いられる酸化酵素が生成する過酸化水素をペルオキシダ
ーゼと発色基質によって色素として検出する場合に適用
できる。試料としては各種体液等が挙げられ、特に血液
由来の試料である血清、血漿や尿が挙げられる。試料中
の定量すべき成分としては、たとえばグルコース、クレ
アチニン、コレステロール、グリセロール、リン脂質、
中性脂肪、遊離脂肪酸、シアル酸、尿素窒素、尿酸、
１，５ＡＧの定量、等が挙げられる。特に、本発明は、
目的成分が微量で高感度な検出を必要とする１，５ＡＧ
の定量等に適用すると効果が著しい。
いられる酸化酵素が生成する過酸化水素をペルオキシダ
ーゼと発色基質によって色素として検出する場合に適用
できる。試料としては各種体液等が挙げられ、特に血液
由来の試料である血清、血漿や尿が挙げられる。試料中
の定量すべき成分としては、たとえばグルコース、クレ
アチニン、コレステロール、グリセロール、リン脂質、
中性脂肪、遊離脂肪酸、シアル酸、尿素窒素、尿酸、
１，５ＡＧの定量、等が挙げられる。特に、本発明は、
目的成分が微量で高感度な検出を必要とする１，５ＡＧ
の定量等に適用すると効果が著しい。
【００１０】使用する酸化酵素は、定量すべき成分を酸
化する能力を有する酵素であり、公知の酸化酵素を使用
することができる。試料中の例えば上記成分を酸化酵素
を用いて定量する方法は公知であり、本発明の定量法は
この公知の方法に準じて行なうことができる。酵素反応
は、試薬を試料に添加し、通常１５〜５０℃で１分〜３
０分、好ましくは３分〜１０分反応させることでなされ
る。
化する能力を有する酵素であり、公知の酸化酵素を使用
することができる。試料中の例えば上記成分を酸化酵素
を用いて定量する方法は公知であり、本発明の定量法は
この公知の方法に準じて行なうことができる。酵素反応
は、試薬を試料に添加し、通常１５〜５０℃で１分〜３
０分、好ましくは３分〜１０分反応させることでなされ
る。
【００１１】つぎに試料中の１，５ＡＧの定量を例に挙
げて説明する。先ず試料中のグルコースを消去し、次い
で１，５ＡＧに１，５ＡＧ酸化酵素を作用させ、生成す
る過酸化水素と発色基質とをペルオキシダーゼの存在下
に反応させ、生成する色素の可視部の吸収を測定するこ
とにより、１，５ＡＧを定量することができる。
げて説明する。先ず試料中のグルコースを消去し、次い
で１，５ＡＧに１，５ＡＧ酸化酵素を作用させ、生成す
る過酸化水素と発色基質とをペルオキシダーゼの存在下
に反応させ、生成する色素の可視部の吸収を測定するこ
とにより、１，５ＡＧを定量することができる。
【００１２】発色基質はペルオキシダーゼの存在下に酸
化されて発色する化合物であれば何れも用いることがで
きる。例えば２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾ
チアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）、ｏ−フェ
ニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−アミノサリチル酸（５
−ＡＳ）、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジ
ン（ＴＭＢ）、４−アミノアンチピリンまたは３−メチ
ル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾンとフェノールも
しくはその誘導体またはアニリンもしくはその誘導体の
カップリング系が使用できる。具体的には４−アミノア
ンチピリンとフェノール類、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプ
ロピル−ｍ−トルイジンあるいはＮ−エチル−Ｎ−（２
−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン
（ＴＯＯＳ）等の組み合わせによるいわゆるトリンダー
系発色剤などがある。
化されて発色する化合物であれば何れも用いることがで
きる。例えば２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾ
チアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）、ｏ−フェ
ニレンジアミン（ＯＰＤ）、５−アミノサリチル酸（５
−ＡＳ）、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジ
ン（ＴＭＢ）、４−アミノアンチピリンまたは３−メチ
ル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾンとフェノールも
しくはその誘導体またはアニリンもしくはその誘導体の
カップリング系が使用できる。具体的には４−アミノア
ンチピリンとフェノール類、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプ
ロピル−ｍ−トルイジンあるいはＮ−エチル−Ｎ−（２
−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン
（ＴＯＯＳ）等の組み合わせによるいわゆるトリンダー
系発色剤などがある。
【００１３】また高感度基質と呼ばれているＮ−（カル
ボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジ
メチルアミノ）−ジフェニルアミンナトリウム塩（ＤＡ
−６４）、Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）
−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン
ナトリウム塩（ＤＡ−６７）、Ｎ−（メチルアミノカル
ボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）−フェノ
チアジン（ＭＣＤＰ）、ビス［３−ビス（４−クロロフ
ェニル）メチル−４−ジメチルアミノフェニル］アミン
（ＢＣＭＡ）、ビス〔４−（３−スルホプロピルエチル
アミノ）フェニル〕メタン二ナトリウム塩（Ｂｉｓ−Ａ
ＬＰＳ）、ビス〔２，６−ジメチル−４−（３−スルホ
プロピルプロピルアミノ）フェニル〕メタン二ナトリウ
ム塩（Ｂｉｓ−ＭＡＰＳ）等が使用可能である。使用す
る発色基質の量は生成する過酸化水素に対して好ましく
は１〜１００倍モル量である。
ボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジ
メチルアミノ）−ジフェニルアミンナトリウム塩（ＤＡ
−６４）、Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）
−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジン
ナトリウム塩（ＤＡ−６７）、Ｎ−（メチルアミノカル
ボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）−フェノ
チアジン（ＭＣＤＰ）、ビス［３−ビス（４−クロロフ
ェニル）メチル−４−ジメチルアミノフェニル］アミン
（ＢＣＭＡ）、ビス〔４−（３−スルホプロピルエチル
アミノ）フェニル〕メタン二ナトリウム塩（Ｂｉｓ−Ａ
ＬＰＳ）、ビス〔２，６−ジメチル−４−（３−スルホ
プロピルプロピルアミノ）フェニル〕メタン二ナトリウ
ム塩（Ｂｉｓ−ＭＡＰＳ）等が使用可能である。使用す
る発色基質の量は生成する過酸化水素に対して好ましく
は１〜１００倍モル量である。
【００１４】
【実施例】以下、実施例及び比較例により本発明を具体
的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるも
のではない。なお、以下の実施例及び比較例において使
用したアルキルスルフォン酸塩は、アルキルの平均炭素
数が１６のアルキルスルフォン酸ナトリウム塩（商品名
ラテムルＰＳ：花王（株））であり、又、アルキルナフ
タレンスルフォン酸塩はアルキルの炭素数が４のアルキ
ルナフタレンスルフォン酸ナトリウム塩（商品名ペレッ
クスＮＢ−Ｌ：花王（株））である。
的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるも
のではない。なお、以下の実施例及び比較例において使
用したアルキルスルフォン酸塩は、アルキルの平均炭素
数が１６のアルキルスルフォン酸ナトリウム塩（商品名
ラテムルＰＳ：花王（株））であり、又、アルキルナフ
タレンスルフォン酸塩はアルキルの炭素数が４のアルキ
ルナフタレンスルフォン酸ナトリウム塩（商品名ペレッ
クスＮＢ−Ｌ：花王（株））である。
【００１５】実施例１ クレアチニン測定用に以下の第一、第二試薬を調製し
た。 第一試薬 クレアチナーゼ ６０Ｕ／ｍＬ ザルコシンオキシダーゼ １０Ｕ／ｍＬ ＴＯＯＳ １．５ｍＭ アルキルスルフォン酸塩 ０．０５％ アルキルナフタレンスルフォン酸塩 ０．０５％ リン酸緩衝液 ２５ｍＭ（ｐＨ７．８） 界面活性剤 ０．１％ 第二試薬 ４−アミノアンチピリン ８．０ｍＭ クレアチニダーゼ １２０Ｕ／ｍＬ ＨＲＰ ４０Ｕ／ｍＬ リン酸緩衝液 ２５ｍＭ（ｐＨ７．８）
た。 第一試薬 クレアチナーゼ ６０Ｕ／ｍＬ ザルコシンオキシダーゼ １０Ｕ／ｍＬ ＴＯＯＳ １．５ｍＭ アルキルスルフォン酸塩 ０．０５％ アルキルナフタレンスルフォン酸塩 ０．０５％ リン酸緩衝液 ２５ｍＭ（ｐＨ７．８） 界面活性剤 ０．１％ 第二試薬 ４−アミノアンチピリン ８．０ｍＭ クレアチニダーゼ １２０Ｕ／ｍＬ ＨＲＰ ４０Ｕ／ｍＬ リン酸緩衝液 ２５ｍＭ（ｐＨ７．８）
【００１６】上記試薬を用いて、以下のパラメーターに
て日立７１５０型自動分析装置を用いてクレアチニン濃
度を測定した。 試料 １０μｌ 第一試薬 ３００μｌ 第二試薬 １００μｌ 温度 ３７℃ 検量線 ０、１０μｇ／ｍｌ 測定波長 ５７０／７００ｎｍ 吸光度差 １０〜５ｍｉｎ 試料として クレアチニン １．０ｍｇ／ｄＬ を含有する血清試料にヘモグロビン溶液を９：１で混合
し、ヘモグロビン０〜５００ｍｇ／ｄＬ（１００ｍｇ／
ｄＬ毎）を含有する試料を用いて、クレアチニン濃度を
測定した。
て日立７１５０型自動分析装置を用いてクレアチニン濃
度を測定した。 試料 １０μｌ 第一試薬 ３００μｌ 第二試薬 １００μｌ 温度 ３７℃ 検量線 ０、１０μｇ／ｍｌ 測定波長 ５７０／７００ｎｍ 吸光度差 １０〜５ｍｉｎ 試料として クレアチニン １．０ｍｇ／ｄＬ を含有する血清試料にヘモグロビン溶液を９：１で混合
し、ヘモグロビン０〜５００ｍｇ／ｄＬ（１００ｍｇ／
ｄＬ毎）を含有する試料を用いて、クレアチニン濃度を
測定した。
【００１７】その結果以下のようにヘモグロビンの影響
はほとんどなかった。 ヘモグロビン含有量 クレアチニン濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ０．９ｍｇ／ｄＬ １００ ０．９ ２００ ０．９ ３００ ０．８ ４００ ０．８ ５００ ０．８
はほとんどなかった。 ヘモグロビン含有量 クレアチニン濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ０．９ｍｇ／ｄＬ １００ ０．９ ２００ ０．９ ３００ ０．８ ４００ ０．８ ５００ ０．８
【００１８】実施例２ １，５ＡＧの測定用に以下の第一、第二試薬を調製し
た。 第一試薬 ４−アミノアンチピリン １．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ７．５ｍＭ ＫＣｌ ８０ｍＭ ＡＴＰ ５ｍＭ Ｄ−キシロース ０．３μｇ／ｍＬ ＨＲＰ ４Ｕ／ｍＬ グルコキナーゼ １Ｕ／ｍＬ ピルベートキナーゼ ３Ｕ／ｍＬ ホスフォエノールピルビン酸 ２ｍＭ アルキルスルフォン酸塩 ０．０５％ アルキルナフタレンスルフォン酸塩 ０．０５％ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ８．０） 界面活性剤 ０．１％ 第二試薬 ＴＯＯＳ ４．５ｍＭ ピラノースオキシダーゼ １００Ｕ／ｍＬ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ８．０）
た。 第一試薬 ４−アミノアンチピリン １．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ７．５ｍＭ ＫＣｌ ８０ｍＭ ＡＴＰ ５ｍＭ Ｄ−キシロース ０．３μｇ／ｍＬ ＨＲＰ ４Ｕ／ｍＬ グルコキナーゼ １Ｕ／ｍＬ ピルベートキナーゼ ３Ｕ／ｍＬ ホスフォエノールピルビン酸 ２ｍＭ アルキルスルフォン酸塩 ０．０５％ アルキルナフタレンスルフォン酸塩 ０．０５％ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ８．０） 界面活性剤 ０．１％ 第二試薬 ＴＯＯＳ ４．５ｍＭ ピラノースオキシダーゼ １００Ｕ／ｍＬ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ８．０）
【００１９】上記試薬を用いて、以下のパラメーターに
て日立７１５０型自動分析装置を用いて１，５ＡＧ濃度
を測定した。 試料 １０μｌ 第一試薬 ２６０μｌ 第二試薬 １３０μｌ 温度 ３７℃ 検量線 ０、５０μｇ／ｍｌ 測定波長 ５７０／７００ｎｍ 吸光度差 １０〜５ｍｉｎ 試料として １，５ＡＧ ２２．２μｇ／ｍｌ グルコース １００ｍｇ／Ｌ を含有する血清試料にヘモグロビン溶液を９：１で混合
し、ヘモグロビン０〜５００ｍｇ／ｄＬ（１００ｍｇ／
ｄＬ毎）を含有する試料を用いて、１，５ＡＧ濃度を測
定した。
て日立７１５０型自動分析装置を用いて１，５ＡＧ濃度
を測定した。 試料 １０μｌ 第一試薬 ２６０μｌ 第二試薬 １３０μｌ 温度 ３７℃ 検量線 ０、５０μｇ／ｍｌ 測定波長 ５７０／７００ｎｍ 吸光度差 １０〜５ｍｉｎ 試料として １，５ＡＧ ２２．２μｇ／ｍｌ グルコース １００ｍｇ／Ｌ を含有する血清試料にヘモグロビン溶液を９：１で混合
し、ヘモグロビン０〜５００ｍｇ／ｄＬ（１００ｍｇ／
ｄＬ毎）を含有する試料を用いて、１，５ＡＧ濃度を測
定した。
【００２０】その結果以下のようにヘモグロビンの影響
はほとんどなかった。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ２０．０μｇ／ｍｌ １００ １９．９ ２００ １９．８ ３００ １９．８ ４００ １９．７ ５００ １９．６
はほとんどなかった。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ２０．０μｇ／ｍｌ １００ １９．９ ２００ １９．８ ３００ １９．８ ４００ １９．７ ５００ １９．６
【００２１】実施例３ １，５ＡＧの測定用に以下の第一、第二試薬を調製し
た。 第一試薬 ＤＡ−６７ ０．０５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ７．５ｍＭ ＫＣｌ ８０ｍＭ ＡＴＰ ５ｍＭ Ｄ−ガラクトース ２μｇ／ｍＬ グルコキナーゼ １Ｕ／ｍＬ ピルベートキナーゼ ３Ｕ／ｍＬ ホスフォエノールピルビン酸 ２ｍＭ アルキルスルフォン酸塩 ０．０５％ アルキルナフタレンスルフォン酸塩 ０．０５％ 界面活性剤 ０．１％ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ８．０） 第二試薬 ピラノースオキシダーゼ １００Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ ５Ｕ／ｍＬ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ８．０）
た。 第一試薬 ＤＡ−６７ ０．０５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ７．５ｍＭ ＫＣｌ ８０ｍＭ ＡＴＰ ５ｍＭ Ｄ−ガラクトース ２μｇ／ｍＬ グルコキナーゼ １Ｕ／ｍＬ ピルベートキナーゼ ３Ｕ／ｍＬ ホスフォエノールピルビン酸 ２ｍＭ アルキルスルフォン酸塩 ０．０５％ アルキルナフタレンスルフォン酸塩 ０．０５％ 界面活性剤 ０．１％ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ８．０） 第二試薬 ピラノースオキシダーゼ １００Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ ５Ｕ／ｍＬ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ８．０）
【００２２】上記試薬を用いて、実施例２のパラメータ
ーで測定波長を６６０／７５０ｎｍにかえて同様に日立
７１５０型自動分析装置を用いて１，５ＡＧ濃度を測定
した。 試料として １，５ＡＧ ３５．２ｍｇ／Ｌ グルコース ８５ｍｇ／ｄＬ を含有する血清試料にヘモグロビン溶液を９：１で混合
し、ヘモグロビン０〜５００ｍｇ／ｄＬ（１００ｍｇ／
ｄＬ毎）を含有する試料を用いて、１，５ＡＧ濃度を測
定した。
ーで測定波長を６６０／７５０ｎｍにかえて同様に日立
７１５０型自動分析装置を用いて１，５ＡＧ濃度を測定
した。 試料として １，５ＡＧ ３５．２ｍｇ／Ｌ グルコース ８５ｍｇ／ｄＬ を含有する血清試料にヘモグロビン溶液を９：１で混合
し、ヘモグロビン０〜５００ｍｇ／ｄＬ（１００ｍｇ／
ｄＬ毎）を含有する試料を用いて、１，５ＡＧ濃度を測
定した。
【００２３】その結果以下のようにヘモグロビンの影響
はほとんどなかった。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ３１．７μｇ／ｍｌ １００ ３１．５ ２００ ３１．４ ３００ ３１．２ ４００ ３１．０ ５００ ３１．０
はほとんどなかった。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ３１．７μｇ／ｍｌ １００ ３１．５ ２００ ３１．４ ３００ ３１．２ ４００ ３１．０ ５００ ３１．０
【００２４】実施例４ １，５ＡＧの測定用に以下の第一、第二試薬を調製し
た。 第一試薬 ＭＣＤＰ ０．０５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ７．５ｍＭ ＫＣｌ ５０ｍＭ ＡＴＰ ５ｍＭ ＮＡＤ １ｍＭ ピルビン酸 １０ｍＭ Ｄ−キシロース ０．４μｇ／ｍＬ グルコキナーゼ １０Ｕ／ｍＬ グルコース６リン酸脱水素酵素 １２Ｕ／ｍＬ 乳酸脱水素酵素 ２Ｕ／ｍＬ アルキルスルフォン酸塩 ０．０３％ アルキルナフタレンスルフォン酸塩 ０．０３％ 界面活性剤 ０．１％ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ７．５） 第二試薬 ペルオキシダーゼ １０Ｕ／ｍＬ ピラノースオキシダーゼ ８０Ｕ／ｍＬ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ７．５）
た。 第一試薬 ＭＣＤＰ ０．０５ｍＭ ＭｇＣｌ2 ７．５ｍＭ ＫＣｌ ５０ｍＭ ＡＴＰ ５ｍＭ ＮＡＤ １ｍＭ ピルビン酸 １０ｍＭ Ｄ−キシロース ０．４μｇ／ｍＬ グルコキナーゼ １０Ｕ／ｍＬ グルコース６リン酸脱水素酵素 １２Ｕ／ｍＬ 乳酸脱水素酵素 ２Ｕ／ｍＬ アルキルスルフォン酸塩 ０．０３％ アルキルナフタレンスルフォン酸塩 ０．０３％ 界面活性剤 ０．１％ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ７．５） 第二試薬 ペルオキシダーゼ １０Ｕ／ｍＬ ピラノースオキシダーゼ ８０Ｕ／ｍＬ ＨＥＰＥＳ緩衝液 ５０ｍＭ（ｐＨ７．５）
【００２５】上記試薬を用いて、実施例３と同様のパラ
メーターにて１，５ＡＧ濃度を測定した。 試料として １，５ＡＧ ５．２ｍｇ／Ｌ グルコース １４８ｍｇ／ｄＬ を含有する血清試料にヘモグロビン溶液を９：１で混合
し、ヘモグロビン０〜５００ｍｇ／ｄＬ（１００ｍｇ／
ｄＬ毎）を含有する試料を用いて、１，５ＡＧ濃度を測
定した。
メーターにて１，５ＡＧ濃度を測定した。 試料として １，５ＡＧ ５．２ｍｇ／Ｌ グルコース １４８ｍｇ／ｄＬ を含有する血清試料にヘモグロビン溶液を９：１で混合
し、ヘモグロビン０〜５００ｍｇ／ｄＬ（１００ｍｇ／
ｄＬ毎）を含有する試料を用いて、１，５ＡＧ濃度を測
定した。
【００２６】その結果以下のようにヘモグロビンの影響
はほとんどなかった。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ４．７μｇ／ｍｌ １００ ４．６ ２００ ４．６ ３００ ４．５ ４００ ４．４ ５００ ４．４
はほとんどなかった。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ４．７μｇ／ｍｌ １００ ４．６ ２００ ４．６ ３００ ４．５ ４００ ４．４ ５００ ４．４
【００２７】比較例１ 実施例１の第一試薬からアルキルスルフォン酸塩及びア
ルキルナフタレンスルフォン酸塩を除いた試薬を用いて
実施例１と同様に同試料にヘモグロビンを添加して測定
した。 ヘモグロビン含有量 クレアチニン濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ０．９ｍｇ／ｄＬ １００ ０．８ ２００ ０．８ ３００ ０．７ ４００ ０．７ ５００ ０．６ 以上のようにヘモグロビンの影響を受け正確な測定が出
来なかった。
ルキルナフタレンスルフォン酸塩を除いた試薬を用いて
実施例１と同様に同試料にヘモグロビンを添加して測定
した。 ヘモグロビン含有量 クレアチニン濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ０．９ｍｇ／ｄＬ １００ ０．８ ２００ ０．８ ３００ ０．７ ４００ ０．７ ５００ ０．６ 以上のようにヘモグロビンの影響を受け正確な測定が出
来なかった。
【００２８】比較例２ 実施例２の第一試薬からアルキルスルフォン酸塩及びア
ルキルナフタレンスルフォン酸塩を除いた試薬を用いて
実施例２と同様に同試料を測定した。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ２０．０μｇ／ｍｌ １００ １９．１ ２００ １８．２ ３００ １７．４ ４００ １６．４ ５００ １５．５ 以上のようにヘモグロビンの影響を受け正確な測定が出
来なかった。
ルキルナフタレンスルフォン酸塩を除いた試薬を用いて
実施例２と同様に同試料を測定した。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ２０．０μｇ／ｍｌ １００ １９．１ ２００ １８．２ ３００ １７．４ ４００ １６．４ ５００ １５．５ 以上のようにヘモグロビンの影響を受け正確な測定が出
来なかった。
【００２９】比較例３ 実施例３の第一試薬からアルキルスルフォン酸塩及びア
ルキルナフタレンスルフォン酸塩を除いた試薬を用いて
実施例３と同様に同試料を測定した。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ３１．７μｇ／ｍｌ １００ ３０．６ ２００ ２９．１ ３００ ２７．９ ４００ ２６．８ ５００ ２５．９ 以上のようにヘモグロビンの影響を受け正確な測定が出
来なかった。
ルキルナフタレンスルフォン酸塩を除いた試薬を用いて
実施例３と同様に同試料を測定した。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ３１．７μｇ／ｍｌ １００ ３０．６ ２００ ２９．１ ３００ ２７．９ ４００ ２６．８ ５００ ２５．９ 以上のようにヘモグロビンの影響を受け正確な測定が出
来なかった。
【００３０】比較例４ 実施例４の第一試薬からアルキルスルフォン酸塩及びア
ルキルナフタレンスルフォン酸塩を除いた試薬を用いて
実施例４と同様に同試料を測定した。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ４．７μｇ／ｍｌ １００ ３．９ ２００ ３．０ ３００ ２．３ ４００ １．７ ５００ １．２ 以上のようにヘモグロビンの影響を受け正確な測定が出
来なかった。
ルキルナフタレンスルフォン酸塩を除いた試薬を用いて
実施例４と同様に同試料を測定した。 ヘモグロビン含有量 １，５ＡＧ濃度 ０ｍｇ／ｄＬ ４．７μｇ／ｍｌ １００ ３．９ ２００ ３．０ ３００ ２．３ ４００ １．７ ５００ １．２ 以上のようにヘモグロビンの影響を受け正確な測定が出
来なかった。
【００３１】
【発明の効果】本発明によれば、ヘモグロビンの影響を
受ける事のない、１，５−アンヒドログルシトールを初
めとする各種試料中成分の酸化酵素を利用した定量法が
提供される。
受ける事のない、１，５−アンヒドログルシトールを初
めとする各種試料中成分の酸化酵素を利用した定量法が
提供される。
Claims (3)
- 【請求項１】試料中の成分を酸化酵素を用いて定量する
際にアルキルスルフォン酸塩及びアルキルナフタレンス
ルフォン酸塩を共存させることを特徴とする試料中の成
分の定量法。 - 【請求項２】試料中の定量すべき成分が１，５−アンヒ
ドログルシトールである請求項１記載の定量法。 - 【請求項３】試料が血液由来の試料である請求項１又は
２記載の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25900294A JP3690754B2 (ja) | 1994-09-29 | 1994-09-29 | 試料中の成分の定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25900294A JP3690754B2 (ja) | 1994-09-29 | 1994-09-29 | 試料中の成分の定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0889288A true JPH0889288A (ja) | 1996-04-09 |
| JP3690754B2 JP3690754B2 (ja) | 2005-08-31 |
Family
ID=17327996
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25900294A Expired - Fee Related JP3690754B2 (ja) | 1994-09-29 | 1994-09-29 | 試料中の成分の定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3690754B2 (ja) |
-
1994
- 1994-09-29 JP JP25900294A patent/JP3690754B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3690754B2 (ja) | 2005-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR920001449B1 (ko) | 효소적산화에 의한 검체의 비색적 측정방법 및 시약 | |
| EP1002874B1 (en) | Redox reactions for analyte determination using tetrazolium compounds | |
| US6008006A (en) | Determination of glycated proteins | |
| US8026078B2 (en) | Method of quantifying glycosylated protein using redox reaction and quantification kit | |
| EP1329722A1 (en) | Assay method with the use of redox reaction | |
| CA2559908A1 (en) | Method of stabilizing oxidizable color-assuming reagent | |
| EP1515144B2 (en) | Method of assay with sulfonic acid compound and nitro compound | |
| Sugita et al. | Reference values of serum and urine creatinine, and of creatinine clearance by a new enzymatic method | |
| JP2023022178A (ja) | 測定感度を改善した生体成分測定キット及び生体成分測定方法 | |
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| WO2006030866A1 (ja) | 尿酸の定量方法 | |
| JP3690754B2 (ja) | 試料中の成分の定量法 | |
| US7381539B2 (en) | Method of assay by oxidation-reduction reaction with formazan | |
| JP7206631B2 (ja) | ４－ヒドロキシアンチピリンの定量方法、並びに生体成分測定キットの製造方法及び生体成分測定キット | |
| EP0761821B1 (en) | Assay method avoiding interference by hemoglobin with light detection | |
| US7226790B2 (en) | Method for measurement using sodium azide | |
| US7407774B2 (en) | Method for reducing influence of hemoglobin with albumin in an assay | |
| JP7314932B2 (ja) | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 | |
| JP2573009B2 (ja) | 基質試薬液の安定化方法 | |
| JP4250693B2 (ja) | 酸化還元反応を用いた測定方法 | |
| JP2585723B2 (ja) | 検出系の反応停止方法 | |
| JP4104393B2 (ja) | 生体試料中の特定成分の定量方法及び定量用試薬 | |
| JPH0564598A (ja) | Ｎａｄｈ及びｎａｄｐｈの測定法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050318 |
|
| A521 | Written amendment |
Effective date: 20050517 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Effective date: 20050613 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20050613 |
|
| R150 | Certificate of patent (=grant) or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080624 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110624 Year of fee payment: 6 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |