JPH085917B2

JPH085917B2 - 新規な蛋白質およびその製法

Info

Publication number: JPH085917B2
Application number: JP20909186A
Authority: JP
Inventors: 淳司淀井
Original assignee: Kuraray Co Ltd
Current assignee: Kuraray Co Ltd
Priority date: 1986-04-30
Filing date: 1986-09-04
Publication date: 1996-01-24
Anticipated expiration: 2011-01-24
Also published as: JPS6399099A

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、新規な蛋白質およびその製法に関し、得ら
れた蛋白質は、ヒトIgE結合因子またはヒトFcεレセプ
ター（以下、レセプターをＲと略記）蛋白をコードする
遺伝情報を単離するために用いられる。

（従来の技術）ヒトIgEはアレルギー反応を担う免疫グロブリンであ
り、高IgE血症として、気管支ぜん息、アレルギー性鼻
炎、非アレルギー性の木村氏病、その他の肺疾患に関連
するもの、自己免疫疾患に関するものなどがあり、臨床
上大きな問題となつている。免疫グロブリンは、抗原結
合部位を形成するFab部分と対応するＲと結合するFc部
分がある。肥満細胞にはFcεＲが発現されており、IgE
が結合すると、ヒスタミン、セロトニン、SRS-A（スロ
ーリアクテイングサブスタンスオブアナフイラ
キシー Slow Reacting Substance of Anaphylaxis）な
どの生理活性物質が放出され、その生理作用により発症
する。IgE産生調節に関与している物質が解明されるこ
とにより、アレルギーの治療薬、診断薬としての応用が
可能となる。

IgE産生調節にFcεＲが関与していることは、石坂、
淀井らによつてラツトの系を用い、IgE結合因子がFcε
Ｒ陽性Ｔ細胞から産生されていることによつて示された
〔淀井、石坂：ジヤーナル・オブ・イムノロジイ（J.Yo
doi and K.Ishizaka:J.Immuol.,）124巻、1322頁、1980
年〕。

一方臨床的には、永井（T.Nagai）らによつて木村氏
病およびアトピー患者について、IgE-ORBCロゼツト法お
よびH107抗体を用いてFcεＲの発現が調べられている。
その結果によると、正常人では、FcεＲ陽性率が１％以
下であるのに比べて、高IgE血症の患者では、10〜20％
の高値を示すことが明らかになつている〔永井他、クリ
ニカルイムノロジイアンドイムノパソロジイ（T.Na
gai etal:Clin,Immunol,Immunopathol.,）35巻、261
頁、1985年〕。

したがつて、IgE結合因子を単離できれば、これを医
薬として用いることが期待されるが、IgE結合因子は微
量しか産生されず、しかも不純物との分離精製が極めて
困難であるため、現在ではまだ単離されていない。

（発明が解決しようとする問題点）本発明者らは、IgE結合因子がFcε陽性細胞から産生
されることから、IgE結合因子はFcεＲの一部であるか
もしくはFcεＲと相同部分があるか、またはIgE結合因
子をコードする遺伝情報がFcεＲをコードする遺伝情報
の近傍に存在することを予想した。かかる予想から、Fc
εＲ陽性細胞が産生する蛋白質のなかで、抗Fcεレセプ
ター抗体との反応性を有する蛋白質を得て、その構造を
明らかにすることができれば、これにもとづき遺伝子を
合成し、これをプローブとしてIgE結合因子またはFcε
Ｒ蛋白をコードする遺伝情報を単離できることが期待さ
れる。したがつて、本発明が解決すべき問題点は、抗Fc
εＲ抗体との反応性を有する構造の明らかな蛋白質を得
ることである。

（問題点を解決するための手段）かかる問題点は下記に示す本発明により解決される。

（ｉ）分子量が25,000±2,000であり、等電点が5.4〜6.
0であり、ポリペプチド構造の一部がMet-Glu-Leu-Gln-V
al-Ser-Ser-Gly-Phe-Valで表わされるアミノ酸配列構造
を有し、かつ抗Fcεレセプター抗体との反応性を有する
蛋白質。

（ii）クラス特異的Fcεレセプターを表面に持つ細胞を
培養し、その培養上清から分離採取することを特徴とす
る、分子量が25,000±2,000であり、等電点が5.4〜6.0
であり、ポリペプチド構造の一部がMet-Glu-Leu-Gln-Va
l-Ser-Ser-Gly-Phe-Valで表わされるアミノ酸配列構造
を有し、かつ抗Fcεレセプター抗体との反応性を有する
蛋白質を製造する方法。

（なお、上記略号は下記のことを表わす。

Met:メチオニン、Glu:グルタミン酸、Leu:ロイシン、 Gln:グルタミン、Val:バリン、 Ser:セリン、 Gly:グリシン、 Phe:フエニールアラニン）本発明の蛋白質は、クラス特異的FcεＲを表面に持つ
細胞を培養し、その培養上清から得られるが、培養に用
いられる細胞としては、クラス特異的FcεＲを表面に持
つヒトＢ細胞もしくはそのハイブリドドーマまたはヒト
悪性化Ｂ細胞、ヒトＴ細胞もしくはそのハイブリドーマ
またはヒト悪性化Ｔ細胞のいずれもが用いられる。ヒト
Ｂ細胞としては、RPMI8866〔サルフアチ等（Sarfati et
al）、イムノロジイ（Immunology）第53巻、第197頁、1
984年〕、RPMI1788（ATCCカタログNo.CCL156）などが挙
げられ、ヒトＴ細胞としては、F18-19-19〔ミクロバイ
オロジカルイムノロジイ（Microbiol.Immunol.）27
巻、10号、877〜891頁、1983年〕などが挙げられる。ま
た、一般的にヒト末梢血より得られるＢリンパ球をIgE
存在下に培養することによりFcεＲが誘導されることか
ら、かかる方法により得られる細胞も本発明において用
いられる。

これらの細胞を培養するのに用いられる培地として
は、例えば10％FCSを含むRPMI1640培地があげられ、こ
の培地を用いて上記の細胞を30〜38℃、好ましくは36〜
37℃で、pH4〜８好ましくはpH7〜８で、CO₂濃度３〜10
％、好ましくは５〜７％で、１週間、細胞密度が１×10
⁴〜１×10⁶個/ml程度までに培養する。これらの細胞
は、場合により無血清で培養することも可能であり、蛋
白質精製の点からは、無血清培地の方が有利である。培
養上清をそのままあるいは濃縮し、ゲルロ過や液体クロ
マトグラフイなどのクロマトグラフイ好ましくは抗Fcε
Ｒ抗体、更に望ましくは抗FcεＲ単クローン性抗体、例
えば特開昭60-255734号に示されるごとき単クローン性
抗体H107を用いたアフイニテイクロマトグラフイで処理
することにより分離できる。H107がFcεＲに特異的に反
応する単クローン性抗体であることは上記公開特許明細
書に示されている。H107のごとき単クローン性抗体を用
いたアフイニテイクロマトグラフイで単離する場合、例
えば次の様に行うことができる。H107抗体を結合したセ
フアロース（Sepharose）4BカラムにFcεＲを有する細
胞、例えば、RPMI8866の培養上清を通し、リン酸バツフ
アーで洗浄したのち、0.5MNaCl、0.1M酢酸水溶液（pH4.
0）で溜出する。溜出液を濃縮し、逆相高速液体クロマ
トグラフイで分離精製することができる。

このようにして分離精製された蛋白質のアミノ酸配列
を決定すべく、RPMI8866を大量に培養し、上清を上述し
た如く、H107抗体結合カラムで分離し、逆相高速液体ク
ロマトグラフイで精製したのち、エドマン分解法にて分
析した。分析は手動によることもできるが、微量の蛋白
質を精度よく分析するために気相法で行うことが好まし
い。例えばアプライドバイオシステムズ（Applied Bi
osystems）社製ガスフエーズ470Aシーケンサーおよび12
0APTHアナライザーを用いて分析した結果、１部のアミ
ノ酸配列はMet-Glu-Leu-Gln-Val-Ser-Ser-Gly-Phe-Val
であつた。この様なアミノ酸配列の蛋白質はこれまで報
告されておらず新規な蛋白質である。

蛋白質の分子量は例えばSDS−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動（以下、SDS-PAGEと略記）で25kd付近にバン
ドとして観察されることにより測定できる。分子量測定
のための標準蛋白質としては低分子量蛋白マーカー〔例
えばフアルマシア（Pharmacia）社エレクトロホレイ
シスカリブレーシヨン（Electro-phoresis Calibrati
on）KIT〕を用いることができる。後述のごとく実施例
で得られた蛋白質の分子量は、SDS-PAGEの分子量測定の
精度を考慮して、25,000±2,000であることが確認され
ている。

また、分離された蛋白質の等電点をセレクテツドメ
ソツドインセルラーイムノロジー（Selected Met
hods in Cellular Immunology）〔ミツシエル（B.B.Mis
hell）、シイギ（S.M.Shiigi）著、416頁、1980年、フ
リーマン・アンド・カンパニー（Freeman＆Co.,）刊〕
によるNEPHGE2次元電気泳動法でPIマーカーとして、フ
アルマシア（Pharmacia）社エレクトリツクフオカ
シングカリブレーシヨン（electric focusing calibr
ation）KIT中の蛋白を用い、pH3-10の範囲で測定するこ
とができる。本発明の蛋白質の等電点は、5.4〜6.0の範
囲にある。

つぎに、得られた蛋白質の性状を前記のH107抗体を用
いて調べたところ、本蛋白はRPMI8866へのH107抗体の結
合を阻害することが明らかになつた。RPMI8866細胞を、
１％FCSを含むRPMI1640培地で培養し、得られた培養上
清を濃縮し、H107抗体、ヒトイムノグロブリン、抗Tac
抗体を各々結合したセフアロース4Bカラムにそれぞれ通
し、通過液と¹²⁵IラベルしたH107を混合する。次いで、
この混合液にRPMI8866細胞を加え、一定時間放置後、細
胞部分と上清を遠心によつて分離し、細胞部分と上清の
放射能活性をγカウンターで測定する。以上の様な操作
の結果H107抗体結合Sepharose4Bカラムを通過した液は
¹²⁵Iラベル化H107抗体とRPMI8866との結合を阻害しない
が、本蛋白と結合しないヒトイムノグロブリン及び抗Ta
c抗体結合カラムを通過した培養上清は¹²⁵Iラベル化H10
7抗体とRPMI8866との結合を阻害することが明らかにな
つた。又、FcεＲが発現されていないATL-2細胞の培養
上清を濃縮したのち、ウサギ抗RPMI8866細胞抗体−上清
−¹²⁵Iラベル化H107抗体のサンドイツチRIA法によつて
調べたところH107抗体と反応する抗原は検出されなかつ
たが、RPMI8866細胞上清には抗原が検出された。

（実施例）実施例１ RPMI8866細胞を10％FCS（牛胎児血清）を含むRPMI164
0培地（GIBCO社製RPMI1640培地に硫酸ストレプトマイシ
ン100μg/ml、ペニシリンＧカリウム100u/mlを加えた）
で温度37℃、CO₂濃度７％において細胞密度５×10⁵cell
s/mlまで培養した培養液2lを遠心操作により細胞と培養
上清に分離した。得られた培養上清をそのまま、0.2ml
のH107抗体を結合したセフアロース4Bカラムに通した。
H107抗体結合カラムは次の様にして準備した。H1075mg
をフアルマシア社のトリシルーセフアロース4B（Trisyl
-Sepharose4B）のデータシートにしたがい、膨潤したゲ
ル1mlと0.1M NaHCO₃、0.5M NaCl水溶液（pH8.0）中で４
℃一夜反応させた後、未反応の活性基を0.1M Tris塩酸
水溶液（pH8.0）中で４℃一夜反応させてブロツクし
た。しかる後に、0.1M酢酸pH4.0、0.5M NaCl;0.1M Tris
Hcl pH8.0、0.5M NaClで交互に３回洗浄し、最後にNaC
lリン酸バツフアー（PBS）で洗浄した。得られたH107抗
体結合カラムを用いて、該カラムに培養上清を流した。
培養上清を流したカラムを10mlの0.5M NaClリン酸バツ
フアー（pH7.5）で洗浄したのち、0.5M NaCl、0.1M酢酸
水溶液（pH4.0）で溜出した。溜出後速やかに2M Tris b
aseで中和し、アミコン社製セントリコン（Centricon）
10を用いて濃縮とともにバツフアーを水に交換し、逆相
高速液体クロマトグラフイー〔シンクロパツク（Synchr
opak）RD-PC18カラム、0.1％トリフルオロ酢酸（TF
A），水−アセトニトリル連続グラジエント〕で分離し
た。この精製液20μｌをセレクテツドメソツドイン
セルラーイムノロジイ（ミツシエル、シイギ著、434
頁、1980年、フリーマンアンドカンパニー刊）にし
たがつて15％ポリアクリルアミドゲル上にのせ、バツフ
アーとして25mM Tris、190mMグリシン、0.1％SDSを用
い、電流25mAで3hr電気泳動を行つた。標準蛋白質とし
て前述のフアルマシア社製のエレクトロホレイシスカ
リブレーシヨンKITを同時に用いた。その結果25kd近辺
に近接した２本のバンドを与える蛋白を100ng得た。（S
DS-PAGEの銀染色によるバンドの濃さより推定。）SDS-P
AGEの蛋白分離能を考慮すると、25kd近辺に示される蛋
白の分子量は25,000±2,000と考えられる。

実施例２ RPMI8866細胞をHB101無血清培地（Hana社製）で細胞
密度５×10⁵cells/mlまで培養した後、遠心操作によつ
て培養上清を得た。培養上清10lをアミコン社製CH2PR-H
IP10-20ホローフアイバーシステムを用いて、400mlに濃
縮し、0.4mlのH107抗体を結合したセフアロース4Bカラ
ムに通した。しかる後、20mlの0.5M NaCl、NP400.1％、
リン酸バツフアー（pH7.5）で洗浄し、次いで0.5M NaC
l、NP400.1M酢酸水溶液（pH4.0）で溜出した。溜出液を
実施例１と同様に行い逆相高速液体クロマトグラフイー
によつて分離精製し、実施例１と同一条件で、SDS-PAGE
にかけた。その結果、25kd近辺に近接した２本のバンド
を与える蛋白を３μｇ得た。SDS-PAGEを第１図に示す。
第１図において、lane AはH107アフイニテイカラムで精
製して得られた蛋白質を示し、lane Bは分子量マーカー
を示す。

実施例３実施例２に於いて逆相高速液体クロマトグラフイーで
分離精製した蛋白をアプライドバイオシステムズ（Ap
plied Biosystems）社製ガスフエーズ470Aシークエンサ
ー及び120APTHアナライザーを用いてアミノ酸配列分析
を行つた結果、SDS PAGEで25kdに近接した２本のバンド
を与える蛋白のそれぞれのＮ末のアミノ酸配列はいずれ
もMet-Glu-Leu-Gln-Val-Ser-Ser-Gly-Phe-Val（先の出
願では、最後のValをアスパラギンと同定したが、Valが
正しい。）を含んでいた。この蛋白の等電点を前述のNE
PHGE2次元電気泳動法でPIマーカーとして、フアルマシ
ア社のエレクトリツクフオカシイングカリブレーシヨ
ン KIT中の蛋白を用い、pH3-10の範囲で測定した。そ
の結果、PIは前者の蛋白は5.50、後者の蛋白は5.85であ
つた。

実施例４実施例１及び実施例２で得られた蛋白がFcεＲを認識
するH107抗体に特異的な抗原であり、FcεＲを多量に発
現するRPMI8866細胞に固有の抗原であることは次の事実
によつて証明された。

（１）RPMI8866細胞を１％FCS RPMI1640培地で、細胞密
度５×10⁵cellまで培養した培養上清をアミコン社製CH2
PR-HIP10-20ホローフアイバーシステムを用いて75倍に
濃縮し、次の３種の抗体−H107、ヒトイムノグロブリ
ン、抗Tac抗体をそれぞれ結合したセフアロース4Bカラ
ム（濃縮培養上清50mlに大使、0.2mlのカラムを使用）
にそれぞれ通した。培養上清及びそれぞれの通過液に存
在するH107抗原の相対量をRPMI8866細胞へのH107抗体の
結合を阻害する割合で算出した。即ち、¹²⁵Iでラベルし
たH107抗体50μl5000cpmと、濃縮した培養上清、通過液
及びそれぞれの希釈物20μｌを混合し、氷冷下30分放置
した。次いでRPMI8866細胞を１×10⁶ケ含む液50μｌを
加え軽く混合し、氷冷下30分放置した。この混合物を20
％オリーブオイル、80％ジブチルフタレートの混合液に
重層し、遠心した。細胞ペレツトと上清とをそれぞれγ
カウンターでcpmを測定し、¹²⁵IラベルしたH107抗体の
結合率を算出した。その結果、H107抗体結合カラムを通
過した液の細胞ペレツト部分のカウントは1970cpmであ
り上清は750cpmであつた。ヒトイムノグロブリン結合カ
ラムを通過した液の細胞ペレツト部分のカウントは、57
0cpmであつた。抗Tac抗体結合カラムを通過した液の細
胞ペレツト部分のカウントは700cpmであつた。従つてRP
MI8866細胞の培養上清に存在するH107抗原はヒトイムノ
グロブリンおよび抗Tac抗体には吸収されないがH107抗
体には吸収された。

（２）RPMI8866細胞の培養上清よりH107抗体を用いたア
フイニテイクロマトで得た分画のウエスタンブロツトを
行いH107抗原を検出した。すなわち、実施例２において
H107抗体を結合したセフアロース4Bカラムより留出した
粗な分画を非還元状態で15％SDS-PAGEにかけた後ニトロ
セルロース膜に電気泳動的にブロツトした。ニトロセル
ロース膜を牛血清アルブミン（BSA）でブロツクした
後、H107抗体と反応させ、次いでヤギ抗マウスIgG抗体
−HRPと反応させた。しかる後に過酸化水素及びジアミ
ノベンジジンで発色させた。その結果、25kd付近に近接
した２本のバンドを検出した。ウエスタンブロツト図を
第２図に示した。第２図において、lane Aは上記により
検出された２本のバンドを示し、lane BはH107抗体との
反応をさせなかつた例であり、lane CはマウスIgGを還
元状態で本蛋白の代わりに用いた例である。

（３）RPMI8866細胞とATL-2細胞（FcεＲの発現は見ら
れない）（ATL-2は人白血病細胞を意味する）の培養上
清中のH107抗原量を比較した。すなわち、RPMI8866及び
ATL-2をHB101無血清培地（Hana社製）で培養しそれぞれ
58倍、66倍に濃縮したのち、ウサギ抗RPMI8866細胞抗体
及び¹²⁵IラベルしたH107抗体を用いるサンドイツチRIA
法によつてH107抗原の量を比較した。その結果、ATL-2
の培養上清にはH107抗原は検出されなかつた。一方、RP
MI8866の培養上清には有為にH107抗原が存在した。

実施例５ RPMI8866細胞の培養上清から、H107抗体を結合したセ
フアロース（Sepharose）カラムによつて精製される25k
d蛋白を２μｇを200μlPBS溶液（NaCl、リン酸緩衝液）
に溶解し、１％となる様にFCS（牛胎児血清）を加え
た。これをフアルマシア社製ゲル過用カラムセフア
ロース（Sepharose）で0.5mlずつ分画した。それぞれの
分画について、H107抗原量、、RPMI8866細胞に対する牛
赤血球結合IgE（Eo′‐IgE）のロゼツト形成を阻害する
活性、更にPWMで刺激したヒト末梢血のIgE産生に及ぼす
影響を調べた。

H107抗原量の定量は次の様に行つた。ELISA用96穴プ
レートを用い、プロテインＡセフアロース（ProtinA
sepharose）で精製したウサギ抗RPMI8866細胞抗体（IgG
分画）の２μg/mlカツプリングバツフアー（0.1M NaHCO
₃、NaOHでpH9.6に調節）溶液を各ウエルに200μｌずつ
加え、４℃で４時間インキユベートした。洗浄バツフア
ー〔PBS,pH7.5,ツイーン（tween）20,0.05％〕で７回洗
浄後、３％BSA（ウシ血清アルブミン）／洗浄バツフア
ー液200μｌ加え、４℃,4時間インキユベートした。次
いで、洗浄バツフアーで７回洗浄したのち、各分画を0.
1％BSA/洗浄バツフアーで、それぞれの希釈度に希釈し
た検体を100μｌづつ加え４℃,4時間インキユベートし
た。次いで、洗浄バツフアーで７回洗浄し、アルカリホ
スフアターゼを結合したH107抗体〔1.3μg/ml,（株）ニ
チレイ製〕を100μｌ加え４℃,4時間インキユベートし
た。洗浄バツフアーで３回洗浄した後、基質溶液〔ホス
フエート基質錠剤（Sigma Chem Co.,アメリカ）を、デ
ベロツプバツフアー（ジエタノールアミン97ml、MgCl₂・
6H₂O100mg、NaN₃200mgを蒸留水で１にしたもの）5ml
に溶かした溶液〕を100μｌずつ加え、室温で発色させ
た。これをELISA Readerで２波長OD405-660nmで測定し
た。H107抗原の検出される分画は分子量マーカー20kd近
辺に存在した。（第３図参照）ロゼツト形成阻害反応は以下の様に行つた。石坂ら
〔ジヤーナルオブイムノロジー（J.Immunol.）126
1692,1981〕の方法によつて、調整したホルマリン固定
化牛赤血球（PBS中10％溶液）を酢酸バツフアー（0.1M
ACOH、pH5.0）に分散した。この溶液250μｌとヒトIgE
（1mg/ml）250μｌ、酢酸バツフアー500μｌを混合し、
室温で２時間インキユベートした。PBSで３回洗浄した
後、1mlのダルベコー変法イーグル培地に分散した。（E
o′‐IgE）Eo′‐IgE溶液25μｌに各分画25μｌを加
え、室温で30分インキユベートした混合物に、あらかじ
め２％FCSを含むRPMI1640培地にRPMI8866細胞５×10⁶ケ
/mlになるように調整した液25μｌを加え、37℃、10分
間インキユベートした。卓上微量遠心機で、2500rpm2分
間遠心した後、氷中で２時間放置した。顕微鏡下で、E
o′‐IgEが３ケ以上結合した細胞をロゼツト形成細胞と
してカウントし、検体を入れなかつた場合のロゼツト形
成率を100として各分画のロゼツト形成阻害率を計算し
た。ロゼツト形成を阻害する分画は分子量マーカーで20
kd近辺に存在した。（第３図参照） PWMで刺激した末梢血のIgE産生に及ぼす影響をみるた
め、次の様な実験を行つた。ヒト末梢血の50mlをPBS50m
lで希釈し、フイコールパーク50mlに加え、1500rpm30分
間遠心し、リンパ球画分を分離した。リンパ球をPBSで
１度洗浄し、更RPMI1640で洗浄した。FCSを10％含むRPM
I1640で、細胞濃度が１×10⁶/mlになるように懸濁し、
その液を200μｌずつ96穴マイクロプレートに分注し
た。培養液に、PWM10μg/mlおよび0.01％cowan Iを加
え、更に上記各フラクシヨン画分を５μｌずつ加えた。
６日間CO₂インキユベータ内37℃で培養し、その後培養
液中のIgEをELISA法により定量した。即ち、ELISA用96
穴プレートにウサギ抗ヒトIgE（DAKO社製）250ng/ml
（0.1M NaHCO₃pH9.6NaOHで調整）を100μｌづつ加え、
４℃、４時間インキユベートし、洗浄バツフアーで７回
洗浄した。次いで、BSA3％を含む洗浄バツフアーを200
μｌずつ加え、４℃、４時間インキユベートした後、洗
浄バツフアーで７回洗浄した。先きに調整した末梢血の
培養上清を、BSA0.1％含む洗浄バツフアーで３倍に希釈
し、100μｌずつ加え、４℃、４時間インキユベートし
た。洗浄バツフアーで７回洗浄後アルカリホスフアター
ゼ結合ゴート抗ヒトIgE（Tago社製）を、BSA0.1％含む
洗浄バツフアーで100倍に希釈したものを、100μｌづつ
加え、４℃、４時間インキユベートした。洗浄バツフア
ーで７回洗浄後、基質溶液（前述）を100μｌづつ加
え、室温で発色させた。ELISA Readerで２波長OD405-66
0nmで測定し、あらかじめ決定しておいた検量線と比較
し、産生したIgEの定量を行つた。IgEの産生を増強する
活性は20kd近辺にみられた。（第３図参照）（発明の効果）クラス特異的FcεＲを表面に持つ細胞を培養し、その
培養上清から、ポリペプチド構造の一部がMet-Glu-Leu-
Gln-Val-Ser-Ser-Gly-Phe-Valで表わされるアミノ酸配
列構造を有する新規な蛋白質を得ることができた。かか
る蛋白質は、抗Fcεレセプター抗体との反応性を有する
ことからヒトIgE結合因子またはヒトFcεＲ蛋白をコー
ドする遺伝情報を単離するための蛋白質として有用であ
り、上記の様に一部のアミノ酸配列が明らかにされてい
るので、これにもとづき相当する遺伝子を合成し、これ
をプローブとして遺伝情報を単離することができる。ま
た、かかる蛋白質は、IgEと結合し、Ｂリンパ球のIgE産
生に影響を与えるIgE結合因子であり、かかるIgE結合因
子はFcεＲの一部であることも明らかとなつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例２で得られた蛋白質のSDSゲル電気泳
動を示す図であり、第２図は実施例４（２）においてH1
07アフイニテイカラムで精製して得られた蛋白質のウエ
スタンブロツト図である。第３図は実施例５においてRP
MI8866細胞の培養上清から得られた25k蛋白の各分画分
について、H107抗原量、IgE産生量およびロゼツト形成
阻害率を測定した結果を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】分子量が25,000±2,000であり、等電点が
5.4〜6.0であり、ポリペプチド構造の一部がMet-Glu-Le
u-Gln-Val-Ser-Ser-Gly-Phe-Valで表わされるアミノ酸
配列構造を有し、かつ抗Fcεレセプター抗体との反応性
を有する蛋白質。
【請求項２】クラス特異的Fcεレセプターを表面に持つ
細胞を培養し、その培養上清から分離採取することを特
徴とする、分子量が25,000±2,000であり、等電点が5.4
〜6.0であり、ポリペプチド構造の一部がMet-Glu-Leu-G
ln-Val-Ser-Ser-Gly-Phe-Valで表わされるアミノ酸配列
構造を有し、かつ抗Fcεレセプター抗体との反応性を有
する蛋白質を製造する方法。
【請求項３】該培養上清を、抗Fcεレセプター抗体を結
合した担体を充填したアフイニテイクロマトグラフイで
処理し、しかる後該担体への吸着物を分離採取する特許
請求の範囲第２項記載の方法。