JPH08511545A

JPH08511545A - プロテイノイド担体並びにその製造方法および使用方法

Info

Publication number: JPH08511545A
Application number: JP7502192A
Authority: JP
Inventors: ミルスタイン，サム，ジェー; カンター，マーチン，エル
Original assignee: エミスフェアー・テクノロジーズ・インコーポレイテッド
Priority date: 1993-06-14
Filing date: 1994-06-14
Publication date: 1996-12-03
Also published as: EP0706375A1; CA2164957A1; AU697044B2; AU7108294A; EP0706375A4; WO1994028878A1

Abstract

(57)【要約】医薬の経口的送達システムとしての改良プロテイノイド担体並びにそれらの調製および使用の方法が開示される。当該プロテイノイド担体は、冑腸管内の選択的ｐＨ範囲内で可溶性で、光分解または時間経過による分解の少なくとも１つに対して強化された安定性を示す。このプロテイノイド担体は、２から２０個のアミノ酸および約２５０から２４００ダルトンの間の分子量を有するプロテイノイドから製造される。

Description

【発明の詳細な説明】プロテイノイド担体並びにその製造方法および使用方法本出願は、1992年6月15日出願で放棄された米国特許出願第０７／８９８，９０９号の一部継続出願である、1992年7月27日出願の米国特許出願第０７／９２０，３４６号の一部継続出願である、1993年6月14日出願の米国特許出願第０８／０７６，８０３号の一部継続出願である。発明の分野本発明は、プロテイノイドおよびそれから製造されるプロテイノイド担体に関する。プロテイノイド担体は活性薬剤を遊離可能な状態で被包し、延長された保存期間および／または光安定性を有する。そのようなプロテイノイド担体の製造方法もまた開示される。発明の背景医薬および治療薬の利用可能な送達態様は、しばしば生体が有する化学的もしくは生理的障害またはその両方によって極めて制限される。たとえば、そのような多くの薬剤の経口的送達は、もし化学的および物理化学的障害、たとえば消化管内の極端なｐＨ、強力な消化酵素との接触、および該活性成分に対する胃腸壁の非透過性がなければ、選択ルートとなるであろう。経口投与が適切でないことが分かっている多数の薬剤では、とりわけ生物学的に活性なペプチドおよび蛋白（たとえばインシュリン）が知られている。これらの薬剤は、酸加水分解および／または蛋白分解酵素によって消化管内で急速に破壊される。これら攻撃をうけやすい薬剤のための有効な経口的送達方法および送達システムを開発するために、多数の研究が行われた：（ａ）腸壁透過性を高めるためのアジュバント（例えば、レゾルシノールおよび非イオン性界面活性剤ポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテル）の同時投与；（ｂ）酵素分解を避けるための酵素抑制物質の同時投与、例えば、膵トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＥＦ）およびトラシロール；しかしながら、薬剤送達システムにおけるこのような物質の使用は以下のようないずれかの理由によって制限される：（ａ）有効な量を用いた場合のそれら物質固有の毒性；（ｂ）それら物質による活性成分保護または活性成分吸収促進の失敗；（ｃ）それら物質の薬剤との不利な反応。薬剤送達システムとしてのリポゾームもまた報告された。それは、被包された薬剤の周りに脂質層を提供する。ヘパリンを含むリポゾームの使用は米国特許第４２３９７５４号に開示され、さらに幾つかの研究がインシュリン含有リポゾームの使用について実施された（例えば、Patelら、1976，FEBS Letters 62:p60；Hashimotoら、1979，Endocrinol．Japan 26:p337）。しかしながら、リポゾームの使用はまだ開発段階にあり、以下を含む問題がなお存在する：（ａ）低い安定性；（ｂ）不適切な保存期間；（ｃ）低分子量（＜30000）の含有物に制限される；（ｄ）製造の困難性；（ｅ）含有物との不利な反応。より最近では、微小球体を形成する合成アミノ酸ポリマーつまりプロテイノイドが、医薬品の被包用に報告された。例えば、米国特許第４９２５６７３号（’ ６７３号特許、この文献は参照によって本出願に含まれる）は、そのような微小球体構築物並びにその調製と使用について開示している。’６７３特許はまた、胃腸管または血中に送達するために薬剤を被包する微小球体について開示している。 ’６７３特許に記載されているプロテイノイド微小球体がその使用目的について有用である一方、プロテイノイド微小球体の物理化学的性状（例えば、光感受性、保存期間および胃腸管のいろいろな場所における選択的溶解性）は改善の余地がある。さらに、この技術分野では、より広範囲の活性成分（例えば極性薬剤）を被包することができる微小球体が望まれている。 ’６７３号特許で用いられているプロテイノイド調製方法では、高分子量（MW ）（＞1000ダルトン）と低分子量（≦1000ダルトン）のペプチド様ポリマーの分離が困難な複合体混合物を生じる。のみならず、この方法は少量の低分子量プロテイノイドを生じるが、これは微小球体形成分画である。したがって、プロテイノイド調製方法の改良がまた望まれる。したがって、当該技術分野においては改良プロテイノイド担体並びにその改良調製方法が望まれる。発明の目的本発明の目的は、光分解と時間経過による分解の少なくとも１つについて強化された安定性を有する、送達システムとしてのプロテイノイド担体を形成するプロテイノイドを提供することである。本発明のまた別の目的は、種々の条件（例えばｐＨ）下でより選択的な溶解性をもつプロテイノイド担体を形成するプロテイノイドを提供することである。本発明のさらに別の目的は、胃腸管の特定部分で選択的に遊離される生物学的に活性な薬剤を被包するプロテイノイド担体を提供することである。本発明のさらなる目的は、それがなければ冑腸管での吸収が悪い医薬の生体利用性を高めるプロテイノイド担体を提供することである。本発明のまた別の目的は、望ましいプロテイノイド担体の収量を改善し、さらに特定の性質を有するプロテイノイド担体を製造する改良された方法を提供することである。本出願で明白となるこれらの目的および利点は、以下に開示する発明によって達成されることが分かった。発明の要旨本発明は、改良されたプロテイノイド担体並びにその製造および使用の方法に関する。約２５０と約２４００ダルトンの間の範囲の分子量をもち、さらにアミノ酸が限定されているプロテイノイドは、光分解および／または時間経過による分解に対する安定性が改善されたプロテイノイド担体の製造に有用である。このプロテイノイドは以下から成る群から選ばれるペプチドポリマーを含む：（ｉ）チロシンとフェニルアラニンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーとから製造されるペプチドポリマー；及び（ｉｉ）チロシンとフェニルアラニンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーと、リシン、アルギニンおよびオルニチンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第三のモノマーとから製造されるペプチドポリマーであって、該プロテイノイドは微小球体および／またはマイクロカプセルを形成し、さらに選択ｐＨ領域で溶解する。本発明のプロテイノイド分子は、約２個から約２０個のアミノ酸残基、好ましくは約２個から約８個のアミノ酸残基を含み、約２５０から約２４００ダルトン、好ましくは約２５０から約６００ダルトン、最も好ましくは約２５０から４００ダルトンの間の範囲の分子量を有する。このプロテイノイド担体は、医薬、色素試薬および化粧品成分を含む広範囲の含有物を遊離できるように被包し、運搬するための送達システムとして有用である。このプロテイノイド担体は、通常経口的には投与できない感受性の高い医薬を胃腸管の目的の領域で選択的に遊離するための経口的送達システムとして特に有用である。また本発明では、このような組成を含む投与ユニット形態が意図されている。図面の説明図１は、分子量分布を、実施例３で述べるようなＮＣＡ法で調製したポリ（As p.Bz-co-Phe）ポリマーのモノマー濃度の関数として表す。図２は、分子量分布を、実施例５で述べるようなＤＰＰＡ法で調製したポリ（ Asp.Bz）ポリマーのモノマー濃度の関数として表す。図３は、実施例５で述べるようなＤＰＰＡ法で調製したポリ（Asp.Bz）ポリマーの収量に対する反応持続時間の影響を示す。図４は、実施例５で述べるようなＤＰＰＡ法で調製したポリ（Asp.Bz）ポリマーの分子量における温度の影響を表す。図５は、実施例５で述べるようなＤＰＰＡ法で調製したポリ（Asp.Bz）ポリマーの分子量における［ＤＰＰＡ］／［Ｍ］のモル比変化の影響を表す。図６は、実施例９で述べるウェスタンイムノブロット分析のｘ線フィルム写真である：精製ネズミｍＡｂ９ＢＧ５、２μｇ（レーン１）；１ｍｇ（レーン２）；０．２５μｇ（レーン３）；被包化工程後の空のプロテイノイド担体上清、ｍＡｂ無し（レーン４）；空のプロテイノイド担体ペレット（レーン５）；被包化工程後のプロテイノイド担体被包化ｍＡｂ上清（レーン６）；およびプロテイノイド担体被包化ｍＡｂペレット。レーンＭＷは基準分子量マーカーを含む。図７は、実施例１０で述べるサンプルのウェスタンイムノブロット分析のｘ線フィルム写真である。図８（ａ−ｃ）は、実施例１１で述べるようなＥＬＩＳＡの条件下で固定レオウイルス３型およびＶ_LＳＨに結合する血清蛋白量を表す。「空球体」は空のプロテイノイド担体（mAb 9BG5無し）を経口的に投与された動物を指し、「ｍＡｂ球体」はｍＡｂ９ＢＧ５被包化プロテイノイド担体を経口的に投与された動物を指し、「ＩＶ」は非被包化ｍＡｂ９ＢＧ５を静注投与された動物を指し、「経口」は、非被包化ｍＡｂ９ＢＧ５を経口投与された動物を指す。図９は、実施例１１で述べるように、０．８５Ｎクエン酸塩−０．５％ゴム中（図９（ａ））または燐酸緩衝食塩水（図９（ｂ））中で連続的に希釈した精製ｍＡｂと固定レオウイルス３型およびＶ_LＳＨ蛋白を用い、慣用のＥＬＩＳＡ手法で結合するｍＡｂを表す。図１０は、実施例１５で述べるように、プロテイノイド担体被包化エリトロポエチン（ＥＰＯ）（１５μｇＥＰＯ／ｋｇ体重）および被包化ＥＰＯ（１５μｇＥＰＯ／ｋｇ体重）を投与されたラットから採取したラット血清中で検出されたＥＰＯレベルを表す。図１１は、実施例１５で述べるように十二指腸近位部に直接エリトロポエチン（５０μｇ／ｋｇ）または被包化エリトロポエチン（５０μｇ／ｋｇ）のいずれかを投与したラットのＥＰＯ血清レベルを表す。血清エリトロポエチンレベルはエリトロポエチン酵素免疫アッセーキットで時間について測定した。図１２は、実施例１５で述べるように被包化もしくは非被包化エリトロポエチン（１００μｇ／ｋｇ）のいずれかを胃管により経口投与されるか、または２μ ｇ／ｋｇもしくは１０μｇ／ｋｇのいずれかを皮下注射されたラットのＥＰＯ血清レベルを表す。血清エリトロポエチンレベルはエリトロポエチン酵素免疫アッセーキットで時間について測定した。図１３は、実施例１７で述べるように、サケカルシトニンプロテイノイド担体（０．２５ｍｇカルシトニン／ｋｇ体重）の経口投与後のシノモルガスモンキーにおける血清カルシウム変化を表す。結果は血清カルシウムの基礎値からの絶対変化として表されている。データは平均＋／−ＳＥＭを表している。^**血清カルシウムレベルは基礎値とは顕著に異なる。図１４は、実施例１８で述べるように、サケカルシトニンプロテイノイド担体（０．６０ｍｇ／ｋｇ体重）をラットに経口投与した後の血清カルシウム変化を表す。結果は血清カルシウムの基礎値からの絶対変化として表されている。データは平均＋／−ＳＥＭを表している。^**血清カルシウムレベルは、対応する時間におけるコントロールと比較して顕著に異なる。図１５は、実施例１８で述べるように、サケカルシトニンまたはカルシトニンプロテイノイド担体（３μｇ／ｋｇ体重）をラットに十二指腸投与した後の血清カルシウム変化を表す。結果は血清カルシウムの基礎値からの絶対変化として表されている。データは平均＋／−ＳＥＭを表している。^**図示した時間における非被包化コントロールとは顕著に異なる。図１６は、実施例２０で述べるように、プロテイノイド担体被包化第ＩＸ因子（FIX sph PO）の経口投与および第ＩＸ因子溶液の静脈内投与（FIX IV）後の凝固時間を表す。図１７は、実施例２１で述べるように、プロテイノイド担体被包化第ＩＸ因子（FIX sph PO）および第ＩＸ因子（FIX）溶液（FIX unencap PO）の経口投与または第ＩＸ因子溶液の静脈内投与（FIX IV）後の凝固時間を表す。図１８は、α−インターフェロン（IFN）およびＩＦＮプロテイノイド担体を擬似胃液（SGF）中で保温した後に残存する無傷のＩＦＮの％を表す。図１９は、０．０８ＮＨＣｌ中でＩＦＮおよびＩＦＮプロテイノイド担体を保温した後残存する無傷のＩＦＮの％を表す。図２０は、擬似腸液（SIF）中でＩＦＮおよびＩＦＮプロテイノイド担体を保温した後残存する無傷のＩＦＮの％を表す。図２１は、ヘパリンまたはプロテイノイド／ヘパリン（両方とも水溶液）を与えたラットの凝血時間を表す。データは６匹のラットの平均を示す。データは平均＋／−ＳＥＭを示す。図２２は、ＵＳＰヘパリンまたはヘパリンプロテイノイド担体（両方ともクエン酸中で）を十二指腸投与したラットの凝血時間を表す。各時間点は１２匹のラットの平均を示す。データは平均＋／−ＳＥＭを示す。図２３は、ヘパリンスパイク空プロテイノイド担体またはヘパリンプロテイノイド担体を経口投与したラットの凝血時間を表す。各時間点は１２匹のラットの平均を示す。データは平均＋／−ＳＥＭを示す。図２４は、Ｍ１プロテイノイド担体と非被包化Ｍ１とを対照して経口的に免疫したラットの平均力価を表す。各群の反応動物のみの平均である。図２５は、ＨＡ−ＮＡ微小球体と非被包化ＨＡ−ＮＡとを対照して経口的に免疫したラットのＨＡ−ＮＡ力価を表す。発明の詳細な説明本明細書で引用したすべての特許および参照文献は、本明細書に参照によって含まれる。一致しない場合には、定義および解釈を含み本明細書が優先する。本発明は、分子量が約２５０から約２４００ダルトンで限定されたアミノ酸組成を有するプロテイノイドは、既知の反応を修飾し、さらに開始物質を選択することによって得ることができるという発見から得られた。これらのプロテイノイドは、光分解および時間経過による分解の少なくとも１つに対して極めて強化された安定性をもつプロテイノイド担体を形成する。さらに、そのようなプロテイノイドから調製されたプロテイノイド担体は、不安定なポリペプチド、例えばインシュリン、α−インターフェロン、カルシトニン、抗原（例えばインフルエンザウイルスＭ１蛋白）および第ＩＸ因子を含む、より広範囲の医薬を運搬し、従来のプロテイノイド微小球体と比較して、冑腸管のいろいろな部分で選択的な遊離性を示すことができる。本発明の組成は、鳥類、霊長類等の哺乳類、特にヒト、昆虫等のいかなる動物にも、生物学的に活性な薬剤を投与するのに有用である。本発明のプロテイノイドは以下から成る群から選ばれるペプチドポリマーを含む：（ｉ）チロシンとフェニルアラニンとから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーとから製造されるペプチドポリマー；及び（ｉｉ）チロシンとフェニルアラニンとから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーと、リシン、アルギニンおよびオルニチンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第三のモノマーからと製造されるペプチドポリマーであって、該プロテイノイドは微小球体および／またはマイクロカプセルを形成し、さらに選択ｐＨ領域で溶解する。本発明のプロテイノイド分子は、約２個から約２０個のアミノ酸残基、好ましくは約２個から約８個のアミノ酸残基を含み、さらに、２５０から約２４００ダルトンの間、好ましくは約２５０から約６００の間、最も好ましくは約２５０から４００ダルトンの間の範囲の分子量を有する。本明細書において用いるアミノ酸という術語は、自然発生的及び合成アミノ酸を含む、少くとも一つの遊離アミン基を有するいかなるカルボキシル酸をも含む。好ましいアミノ酸はα−アミノ酸であり、好ましくは自然発生的α−アミノ酸であるが、非α−アミノ酸も同様に有用である。本発明において、アミノ酸またはペプチドの成分として使用する好ましい自然発生的アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、シスチン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、オキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、又はＯ−ホスホセリンである。最も好ましいアミノ酸は、アルギニン、ロイシン、リジン、フェニルアラニン、チロシン、及びバリンである。本発明において、アミノ酸またはペプチドの成分として使用する好ましい非自然発生的アミノ酸は、β−アラニン、フェニルグリシン、α−アミノブチル酸、γ−アミノブチル酸、４−（４−アミノフェニル）ブチル酸、α−アミノイソブチル酸、ε−アミノカプロン酸、７−アミノヘプタン酸、β−アスパラギン酸、アミノ安息香酸、（アミノメチル）安息香酸、アミノフェニル酢酸、アミノ馬尿酸、γ−グルタミン酸、システイン（ＡＣＭ）、ε−リジン、ε−リジン（Ａ−Ｆｍｏｃ）、メチオニンスルホン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、ｄ−オルニチン、ｐ−ニトロフェニルアラニン、ヒドロキシプロリン、及びチオプロリンである。本発明を実施するのに有用なアミノ酸は以下の化学式で表わされる：Ｒ²は化学式−Ｒ³−Ｃ−を有し、式中Ｒ³は、Ｃ₁〜Ｃ₂₄のアルキル、Ｃ₁〜Ｃ₂ ₄ のアルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀のアルキル）フェニル、（Ｃ₁ 〜Ｃ₁₀のアルケニル）フェニル、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀のアルキル）ナフチル、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀のアルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ₁〜Ｃ₁₀のアルキル）、フェニル（Ｃ₁〜Ｃ₁₀のアルケニル）、ナフチル（Ｃ₁〜Ｃ₁₀のアルキル）、及びナフチル（Ｃ₁〜Ｃ₁₀のアルケニル）であり；Ｒ³はＣ₁〜Ｃ₄のアルキル、Ｃ₁〜Ｃ₄のアルケニル、Ｃ₁〜Ｃ₄のアルコキシ、 −ＯＨ、−ＳＨ、及び−ＣＯ₂Ｒ⁵又はこれらの組合せと任意に置換することができ；Ｒ⁵は、水素、Ｃ₁〜Ｃ₄のアルキル、又はＣ₁〜Ｃ₄のアルケニルであり；Ｒ³は、酸素、窒素、硫黄、又はこれらの組合せによって任意に中断してもよく；Ｒ⁴は水素、Ｃ₁〜Ｃ₄のアルキル、又はＣ₁〜Ｃ₄のアルケニルである。フェニル基又はナフチル基は任意に置換することができる。適当な置換の例としては、Ｃ₁〜Ｃ₆のアルキル、Ｃ₁〜Ｃ₆のアルケニル、１〜６の炭素原子を有するアルコキシ、ヒドロシキ、チオ、又はＣＯ₂Ｒ⁶（Ｒ⁶は水素、Ｃ₁〜Ｃ₆のアルキル、Ｃ₁〜Ｃ₆のアルケニル）であるが、これらに限定されるものではない。本発明にしたがってプロテイノイド分子から調製されたプロテイノイド担体は、プロテイノイド中の第二および第三のモノマーの選択および量にしたがって、特異的酸性または塩基性ｐＨ範囲で選択的溶解性を示す。例えば腸管の遠位端部分で認められるようなアルカリｐＨの環境下で選択的に溶解できるプロテイノイド担体は、塩基可溶性プロテイノイドから製造される。これらのプロテイノイドは、反応混合物中の開始モノマーとして、グルタミン酸、グルタミン、ピログルタミン酸およびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーを含む。塩基可溶性プロテイノイドは、約７．２から約１１．０の間の範囲のｐＨでは、大部分が陰イオンとして存在し可溶性である。約７．０以下のｐＨでは、このプロテイノイドの大部分は陽子付加され水に不溶性である。同様に、酸性ｐＨの環境下（例えば胃）で選択的に可溶性であるプロテイノイド担体は、酸可溶性プロテイノイドから製造できる。この場合、このプロテイノイドは、プロテイノイド反応混合物中に開始モノマーとして、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマー並びに、リシン、アルギニンおよびオルニチンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第三のモノマーを含む。約１から約７の範囲のｐＨで、塩基可溶性プロテイノイドは主に陽イオンとして存在し可溶性である。約７．２より上のｐＨで、このプロテイノイドは大部分が陽子を失い水に不溶性になる。酸可溶性プロテイノイドのｐＨおよび可溶性特性は、プロテイノイドの合成中に付加される最後のアミノ酸のｐＨ及び可溶性に大きく（完全にではないが）左右される。例えば、塩基性アミノ酸（例えば、リシン、アルギニンおよびオルニチンから成る群から選ばれる第三のモノマー）の酸可溶性プロテイノイド中への組入れは、プロテイノイドのｐＩ（等電点のｐＨ）を上昇させる。本発明のプロテイノイドは、’６７３号特許で開示された条件下で適切なアミノ酸の混合物を加熱して熱縮合反応によって製造できる。１８個ものアミノ酸を用いる’６７３号特許の方法と比べて、前述の各群から選ばれる少なくとも１個のアミノ酸をもつ２個から５個の特異的アミノ酸の混合物によって、特定のｐＨ領域で選択的可溶性をもつプロテイノイド担体が高い収量で得られる。熱縮合反応の実施に際して、テトラメチレンスルホン（高い沸点の不活性な極性溶媒）を包含することによって低分子量プロテイノイドの収量（＞８０％）が最大になることが分かった。溶媒を省略すると高収量の低分子量プロテイノイドは産生されない。これは、おそらくこれら溶媒中のアミノ酸モノマーの低い溶解性、および／またはこの反応条件の下でのモノマーと溶媒との避けられない副反応による。一般に、個々のアミノ酸は、テトラメチレンスルホン（スルホラン）を含む反応フラスコに加えられる。このフラスコは、アルゴンまたは窒素ガスの不活性雰囲気下で既に約１３０℃から約２００℃、好ましくは約１７５℃から１９５℃の範囲の温度に加熱されている。各々の添加後、アミノ酸のタイプおよび添加順序にしたがい、溶液を約１０分から約５時間の範囲で撹拌する。上記のようにアミノ酸混合物を約１９０℃の温度まで加熱すると、反応が生じ、水、アンモニアおよび二酸化炭素が副産物として発生する。水が形成されるにしたがい反応から除去し、水の発生が停止したとき反応を終了させる。その後、プロテイノイドを激しく撹拌しながら過剰の水で反応を停止させることによって、反応溶液から沈殿させる。約１時間撹拌した後、プロテイノイドを濾過によって集め、水で洗浄し、真空下で乾燥させる。誘導アミノ酸を用いる化学縮合法もまた、それによって分子量のより強力な制御が可能になるので、本発明のプロテイノイド製造に有用である。一般に、そのような反応は、開始剤とともにより低い反応温度で誘導される。特に、Ｎ−カルボキシα−アミノ酸無水物（ＮＣＡ）法およびアジ化ジフェニルホスホリル（ＤＰＰＡ）法（N．Nishiら、199、Makro-mol．Chem．192：PP1 789-1798）によって製造される低分子量プロテイノイドは、特定ｐＨ領域で選択的可溶性を有するプロテイノイド担体を形成することが分かった。ＮＣＡ法は、α−アミノ酸エステルのＮ−カルボキシアンハイドライドの製造、その後の開始剤として低分子量アミンを用いる重合化反応を含む。非ＮＣＡ誘導アミノエステル（例えば、α−メチルチロシンエステル）は、多くの有機溶媒（例えばテトラヒドロフラン、ＴＨＦ）中で安定でかつ可溶性である有効な開始剤であることが分かった。開始剤としてのアミノ酸の使用は、おそらくそれらの有機溶媒中での貧弱な可溶性と低い安定性のためにこれまで知られていなかった。ＮＣＡ反応は純度の高いプロテイノイドを高収量で生じる。ＤＰＰＡ法は、ＤＰＰＡと低分子量アミンの存在下でα−アミノ酸のベンジルエステルの直接縮合およびそれに続く、プロテイノイド産物に含まれる保護ベンジル基のアルカリ加水分解による除去を含む。アルカリ加水分解に代わって触媒性水素付加が用いられる場合は、極めて高い純度及び収量の低分子量プロテイノイドが得られる。上記の方法のいずれかによって得られるプロテイノイドは、活性な薬剤をマイクロカプセル化するために直ちに用いることができる。またこのプロテイノイドを慣用的な方法で濃縮または乾燥させ将来の使用に備えて保存してもよい。本発明のプロテイノイドは以下のように精製される：粗プロテイノイドを室温（例えば２５℃）で水でスラリー化する。一方、この温度で、スラリーのｐＨを酸可溶性プロテイノイドにはアルカリ水溶液（例えば４０％水酸化ナトリウムおよび１０％重炭酸ナトリウム水溶液）を用いて約ｐＨ８に調節する。塩基可溶性プロテイノイドには、酸性水溶液（例えば１０％酢酸溶液）を用いてスラリーを酸性ｐＨに調節する。続いて、混合物を濾過し、濾過塊を多量の水で洗浄する。その後洗浄液と濾液を合わせ真空中で蒸発乾燥させプロテイノイドを得る。必要な場合には、この工程を所望の純度レベルのプロテイノイドが得られるまで繰り返す。所望の場合は、プロテイノイドは、シリカゲルまたはアルミナ（移動相としてメタノールまたはプロパノールを用いる）；イオン交換樹脂（移動相として水を用いる）；逆相カラム支持体（移動相としてトリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物を用いる）を含む固体支持体を有するカラムで分画してさらに精製することができる。プロテイノイドはまた、低分子量夾雑物を除去するためにプロパノールまたはブタノールのような低級アルコールで抽出して精製することができる。プロテイノイド担体は、以下のように精製プロテイノイドから製造できる：プロテイノイドを脱イオン水で約７５から約２００ｍｇ／ｍｌの間、好ましくは約１００ｍｇ／ｍｌの濃度で、約２５℃から約６０℃の間、好ましくは約４０℃の温度で溶解する。溶液中に残存する微粒子物は慣用的な方法（例えば濾紙上での重力濾過）で濾過して除去できる。その後、約４０℃の温度を維持しながら、約１Ｎから約２Ｎの間、好ましくは約１．７Ｎの酸濃度を含む酸水溶液（また約４０℃）とプロテイノイド溶液を混合する。さらに、生じた混合物を、光学顕微鏡で観察しながら、微小球体およびマイクロカプセル形成のために有効な時間４０℃で保温する。本発明を実施するに際して、好ましい添加順序は、プロテイノイド溶液を酸水溶液に加えることである。適切な酸は、（ａ）プロテイノイドに不利な影響（例えば化学的分解）を与えない；（ｂ）微小球体またはマイクロカプセル形成を妨害しない；（ｃ）微小球体またはマイクロカプセルの含有物の被包化を妨害しない；および（ｄ）含有物と不利な反応を生じない、いずれの酸も含む。本発明で使用する好ましい酸は、酢酸、クエン酸、塩酸、燐酸、リンゴ酸およびマレイン酸を含む。本発明実施において、プロテイノイド担体安定化用添加剤は、微小球体またはマイクロカプセル形成工程前に、好ましくは酸水溶液またはプロテイノイド溶液に含まれる。そのような添加物の存在は、溶液中のプロテイノイド担体の安定性と分散性を高める。この添加物は、約０．１から５％（ｗ／ｖ）の間、好ましくは約０．５％（ｗ／ｖ）の濃度で用いることができる。適切な（しかしこれに限定されるわけではないが）安定化用添加剤の例は、アラビアゴム、ゼラチン、ポリエチレングリコールおよびポリリシンである。その後、プロテイノイド担体は直ちに用いるか、または４℃で保存、または凍結乾燥して室温もしくはそれ以下で乾燥下で保存する。上記の条件において、担体は中空又は中実なマトリックス形式の微小球体を形成し、含有物は、担体マトリックス、或いは液体又は固体の含有物を被包するカプセル形式の微小球体内に分配される。担体微小球体が、前述の酸水溶液中の薬剤等の可溶性材料の存在下において形成される場合、この材料は微小球体内に組み込まれる。このようにして、経口では通常生物学的利用能が低い、ペプチド、蛋白質、多糖類、並びに抗菌剤等の配合有機分子等の薬理学的に活性な材料を組み込むことができる。微小球体内に組み込むことのできる薬剤の量は、微小球体形成溶液中の薬剤の濃度、並びに含有物の担体に対する親和性等の多くの要因によって決まる。上記の条件下では、プロテイノイド分子は、直径が１０ミクロンより小さいプロテイノイドマイクロカプセルまたはプロテイノイド微小球体を含む球状プロテイノイド担体を形成する。本明細書で定義するように、「微小球体」とは、明確な内部空洞を持たない球状の均質な網目状構造である。「マイクロカプセル」とは、中空または空洞を形成するプロテイノイド壁をもつ球状構造を指す。プロテイノイド担体が可溶性物質（例えば医薬）の存在下で上記の酸水溶液中で形成される場合、この物質は、このマイクロカプセルの中空内に被包され、球状構造によって区切られたプロテイノイド壁内に閉じ込められるか、または微小球体構造中のプロテイノイド分子マトリックス内に捕捉されると考えられる。このようにして、経口投与では生体利用度が低い薬学的に活性な物質、例えばペプチド、蛋白および多糖類並びに荷電有機分子（例えばキノロンまたは抗微生物剤）を、被包または捕捉することができる。プロテイノイド担体によって被包または捕捉できる医薬の量は、被包化溶液中の薬剤の濃度を含む多数の因子に左右される。本発明のプロテイノイド担体は、薬学的に無害で活性薬剤の生理学的および生物学的特性に変化を与えない。さらに、この被包化工程は活性薬剤の薬理学的特性に変化を与えない。いずれの薬理学的に活性な適切な薬剤もプロテイノイド担体内に被包化されるが、一方、それがなければ標的ゾーンに到達する前に動物体内で遭遇する条件で破壊されるか、または効果が減少し、さらに冑腸管でほとんど吸収されないような医薬の送達に特に価値がある。本発明のプロテイノイド担体は、それ自体では胃腸管粘膜をゆっくり通過するか、または全く通過できないか、および／または胃腸管の酸や酵素の化学的切断を受け易い一定の薬剤（例えば小型ペプチドホルモン）の経口投与に特に有用である。そのような薬剤の非限定的な例は、ヒトまたはウシの成長ホルモン、インターフェロンおよびインターロイキン−ＩＩ、カルシトニン、心房性ナチュレチック因子、抗原、モノクローナル抗体および第ＩＸ因子、ビタミンＫ依存血液凝固プロ酵素を含む。本明細書に開示される担体と共に使用するのに適した生物学的に活性な薬剤としては、それ自身では冑腸粘膜を通過できない、又はゆっくりとしか通過できず、及び／又は胃腸管内において酸及び酵素による化学的分裂を受けやすい、ペプチド、特に小型ペプチドホルモン；多糖類及び特にムコ多糖類混合物；炭水化物；脂質；又はその組合せを挙げることができるが、これに限定されるものではない。その例として、ヒト成長ホルモン；牛成長ホルモン；成長ホルモン放出ホルモン；インターフェロン；インターロイキン−Ｉ；インシュリン；ヘパリン、特に低分子量ヘパリン；カルシトニン；エリトロポエチン；心房性ナチュレティック因子（atrial naturetic factor）；抗原；モノクローナル抗体；ソマトスタチン；アドレノコルチコトロピン；ゴナドトロピン放出ホルモン；オキシトシン；バソプレッシン；クロモリンナトリウム（ナトリウム又はジソディウムクロモグリケート（di-sodium cromoglycate）；バンコマイシン；デフェロキサミン（ＤＦＯ）；又はその組合せを挙げることができるが、これに限定されるものではない。また本発明の担体は、農薬等の他の活性薬剤を送達するのに使用することもできる。組成物中の活性薬剤の量は代表的には、薬理学的又は生物学的に有効な量である。しかしながら、この組成物をカプセル、タブレット、又は液体等の投与ユニット形態で用いる場合には、投与ユニット形態が、多数の担体／生物学的活性薬剤組成物を包含するか、若しくは分割された薬理学的又は生物学的に有効な量を包含するので、この量は薬理学的又は生物学的に有効な量よりも少なくてもよい。総有効量は、全体として、生物学的に活性な薬剤を薬理学的又は生物学的に活性な量を含む累積的ユニットによって投与される。投与ユニット形態はまた、賦形剤；希釈剤；崩壊剤；滑沢剤；可塑剤；着色料；及び水、１，２−プロパンジオール、エタノール、オリーブオイル、又はその組合せを含むがこれに限定されない投与ビヒクルのいずれを含んでいてもよい。薬剤の被包または捕捉に使用する特定のプロテイノイドの選択は以下に含まれる因子の数に依存する：（１）薬剤の酸性度または塩基性度；（２）遊離のための胃腸管標的領域；（３）一定ｐＨ領域での薬剤の可溶性；（４）被包効率；（５）薬剤とプロテイノイドとの相互反応。例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸、チロシンおよびフェニルアラニンから製造されたプロテイノイドは、特にヘパリンのような多糖類の被包化に適している。選択的ｐＨ可溶性に加え、プロテイノイド担体の粒子サイズは、胃腸管の標的領域での活性薬剤の放出を決定するために重要な役割を果たす。約≦０．１ミクロンから約１０ミクロンの間、好ましくは約５．０ミクロンから約０．１ミクロンの間の直径をもち、被包化または捕捉された活性薬剤を含むプロテイノイド担体は、十分に小さく、冑腸管内の標的領域で活性薬剤を有効に放出する。＞１０ミクロンの大きなプロテイノイド担体は経口送達系ではあまり効果的ではないことが多い。プロテイノイドを活性薬剤を含む水または水溶液と接触させることによって形成されたプロテイノイド担体のサイズは、種々の物理的または化学的パラメーター、例えば被包化溶液のｐＨ、浸透圧または塩濃度を操作することによって、さらに被包化工程で用いる酸を選択することによって制御することができる。プロテイノイドの可溶性特性およびプロテイノイド担体の粒子サイズの両方を適合させることによって、高度に酸性の胃（通常のｐＨは約２から約６）で安定であるが腸の遠位部で溶解する塩基可溶性プロテイノイドから、活性剤含有プロテイノイド担体を製造することができる。そのようなシステムは、それがなければ胃腸管で急速に破壊されるような、ペプチドホルモン（例えばインシュリン）および多糖類（例えばヘパリン）の経口投与に適している。それらはまた、冑の刺激物、例えばアスピリンから胃を保護するために適している。そのようなアスピリン含有プロテイノイド担体を経口的に投与するとき、それらは、慣用の腸溶皮被覆アスピリンよりはるかに迅速に冑腸管粘膜を通過し、アスピリンを放出する。通常被覆アスピリンは、まず冑を通過し続いて腸溶皮が溶解した後腸から血流に入らなければならない。弱塩基性条件（ｐＨ約８）で安定で、酸性条件（約２から５のｐＨ）で活性剤を放出する酸可溶性プロテイノイドからシステムを製造することもまた可能である。そのようなシステムは、カルシウム調節剤のような医薬の静脈内投与およびドパミンまたはガンマ−アミノブチル酸のためのレドックス担体システムに適している。本発明のプロテイノイド担体は、錠剤、ペレット剤、カプセルおよび食用油のような液体に懸濁するに適した顆粒剤の形状で、固体として単独で経口的に投与することができる。同様に、プロテイノイド担体は、１つまたは２つ以上の生理学的に適した担体または賦形剤を含む経口投与可能な組成物として製剤化できる。これらの組成物は慣用の成分、例えばゼラチン、ポリビニルピロリドン、および澱粉やメチルセルロースのような充填剤を含むことができる。本発明のプロテイノイド担体は注射によって投与することもできる。以下の実施例は本発明を詳述するためで、本発明の範囲を制限しようとするものではない。実施例１：熱縮合反応による塩基可溶性プロテイノイドの製造７５０ｍｌのテトラメチレンスルホンを撹拌しながら４リットルフラスコ中で不活性窒素ガスの中で１９０℃に加熱した。２９４ｇのグルタミン酸を添加し、混合物を３０分加熱した。２６６ｇのアスパラギン酸を加え、混合物をできる限り迅速に１９０℃に加熱し、そのまま１５分保持した。３６２ｇのチロシンを加え、混合物を１９０℃で３時間加熱した。３３０ｇのフェニルアラニンを加え、混合物を１９０℃で１時間半加熱した。続いて、この熱い融解物を激しく撹拌しながら５リットルの水に注ぎ入れた。約１時間撹拌後、混合物を濾過し、濾液を捨てた。塊を５リットルの水で再びスラリー化し、濾過し、塊をさらにもう一度５リットルの水でスラリー化した。このスラリーのｐＨ（２５℃）を４０％水酸化ナトリウムを用いて８に調節した。混合物を濾過し、塊を少量の水で洗った。洗浄液と濾液を合わせ、真空中で蒸発乾燥させGlu/Asp/Tyr/ Pheプロテイノイドを得た。付録Ａ、ＢおよびＣは、熱縮合法によって調製した他のプロテイノイドの例を記載する。実施例２：熱縮合反応による酸可溶性プロテイノイドの製造７５０ｍｌのテトラメチレンスルホンを撹拌しながら４リットルフラスコ中で不活性窒素ガスの中で１９０℃に加熱する。２９４ｇのグルタミン酸を添加し、混合物を３０分加熱する。３６２ｇのチロシンを加え、混合物を１９０℃で３時間加熱する。３３０ｇのフェニルアラニンを加え、混合物を１９０℃で１時間半加熱する。２６６ｇのアルギニンを加え、混合物をさらに１時間半加熱する。続いて、この熱い融解物を激しく撹拌しながら５リットルの水に注ぎ入れる。約１時間撹拌後、混合物を濾過し、濾液を捨てる。塊を５リットルの水で再びスラリー化し、濾過し、塊をさらにもう一度５リットルの水でスラリー化する。このスラリーのｐＨ（２５℃）を１０％酢酸溶液を用いて５に調節する。混合物を濾過し、塊を少量の水で洗う。洗浄液と濾液を合わせ、真空中で蒸発乾燥させプロテイノイドを得る。添付書類Ａ、ＢおよびＣは、熱縮合法によって調製した他のプロテイノイドの例を記載する。実施例３：アミン開始剤を用いたＮＣＡ法によるプロテイノイドの製造本実施例は、Asp.Bz、Glu.Bz、PheおよびTyr成分から成るコポリペプチドを製造するＮＣＡ法を説明する。これらアミノ酸のＮＣＡモノマーは報告された方法にしたがって製造した。反応は、開始剤としてベンジルアミン（BzNH₂）または４−メチルベンジルアミン（MeBzNH₂）を用いテトラヒドロフラン（THF）またはジクロロメタン中で室温で実施した（［Ｍ］＝１０％）。生じたコポリマーの性状決定は”ＨＮＭＲおよびＧＰＣで実施した。得られた結果は表１に挙げる。表１に示すように、第二のモノマーとしてAspおよび／またはGluを有し、第一のモノマーとしてPheおよび／またはTyrを有するプロテイノイドが、［Ｍ］/［Ｉ］＝５の比率でＢｚＮＨ₂で開始した重合反応から高収量で得られた（No.2-1 から2-7）。ポリ（Asp.Bz-co-Phe）のＧＰＣ曲線（図１）から１．９１の多分散性が決定された。同様な分子量分布が他のコポリマーについて観察された。多分散性は、本明細書では、サンプルの分子量分布と定義される。この分布は、分子の数（Mn）で割った分子量（MW）に由来する数値で表される値を割り当てられている。ホモポリマーの多分散性値は、分子量と分子数が等しいので１である。多分散性値が１のいずれのポリマーも非常に狭い分布をもつと考えられる。多分散性値が１．６から１．７であるポリマーは、中程度の分布をもつと考えられる。２．０−２．１の多分散性値をもつポリマーは広い分布を有すると考えられる。 Asp.BzのＮＣＡの同種重合反応およびAsp.Bz、Glu.Bz、PheおよびTyrのＮＣＡの異種重合反応はまた、開始剤としてＭｅＢｚＮＨ₂を用いて実施した（No.2-11 、2-15および2-16）。同様な結果がＢｚＮＨ₂によって開始した反応について得られた。実施例４：開始剤としてα−メチルチロシンエステルを用いるＮＣＡ法によるプロテイノイドの製造本実施例は、開始剤としてα−メチルチロシンエステル（Tyr.Me）を用いるＮＣＡ重合反応の実施方法を説明する。反応条件は、実施例４で述べたものと本質的には同じであるが、テトラヒドロフラン（THF）溶媒が用いられた点が異なる。結果は表２に挙げる。 Tyr.Meによる開始は非常に速く（No.2-17から2-20）、すべてのＮＣＡが２時間後には変換されることが分かった。ＧＰＣのデータから、ポリマーの分子量は［Ｍ］/［Tyr.Me］の比が増すにつれ増加し多分散性は極めて狭いことが認められた。ポリマー中のTyr.Me残基の存在は、¹ＨＮＭＲスペクトルによって確認した。結論として、Tyr.Meはアミノ酸ＮＣＡの重合反応のための新規で効果的な開始剤である。サンプル番号２−１３は、β−アラニンで開始し、無水琥珀酸で停止させた重合反応を表す。β−アラニンは、ほとんどの有機溶媒に不溶であるので、反応は還流ＴＨＦ中で実施した。結果として、得られたポリマーの多分散性は、Tyr.Me で開始したポリマーのそれより広かった。実施例５：ＤＰＰＡ法（＃１）によるプロテイノイドの製造これは、種々の重合条件（（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ））で、基材としてＤＰＰＡおよびトリエチルアミン（TEA）の存在下でAsp.Bzの直接重縮合の実施例である。このポリマーの分子量は、多分散性と同様各々の事例においてＧＰＣによって調べた。ポリマーはＩＲおよびＮＭＲ分光測定によって特性を調べた。 Asp.Bzは、以下のようにＬ−アスパラギン酸のエステル化によって製造した：Ｌ−アスパラギン酸（２６．６ｇ、０．２モル）を５００ｍｌの丸底フラスコ中の３００ｍｌの蒸留したばかりのベンジルアルコールに懸濁し、続いて４５ｍｌの濃縮塩酸（１２Ｎ）を加えた。混合物を激しく撹拌しながら６０℃まで３０分加熱した。その後、反応溶液を室温まで冷却した。トリエチルアミン（約５６ｍｌ）を加え溶液を中和した（ｐＨ約７）。粗生成物を濾過で集め、エタノールとアセトンで洗浄した。真空中で乾燥させ、熱水中で２度結晶化させた。１８ｇの生成物が得られた（％収量＝４４％）。融点＝２１７℃。市販のＤＰＰＡはさらに精製することなく用いた。ＴＥＡは使用前に蒸留した。重合反応の溶媒は慣用的な方法で精製した。Asp.Bzの直接重縮合反応はＤＰＰＡおよびＴＥＡの存在下でモノマーのジメチルホルムアミド（DMF）溶液を撹拌して実施した。混合物は０−１０℃で１時間撹拌し、その後室温で２日間撹拌した。生じたポリマーを大量の水で沈殿させ、濾過で集め、続いて真空中で乾燥させた。ａ．モノマー濃度の影響表３に挙げたものは、室温で２日間ＤＭＦ中でAsp.Bzを重合させた結果である。ポリ（Asp.Bz）はこれら直接重縮合反応から高収量で得られた。このポリマーの分子量はモノマーの濃度［Ｍ］に依存することが分かった。広い分布をもつ低分子量ポリマーは、低い［Ｍ］で得られた（図２、曲線Ａ）。他方、［Ｍ］が０．２ｇ／ｍｌ以上のとき、二相性分子量分布をもつポリマーが得られた（図２、曲線Ｂ）。低分子量オリゴマー（−１０００）は、末端アミノとβ−カルボキシル基との間の分子内停止によるかもしれない。ＴＨＦ／メタノールから数回の再沈殿を行った後、高分子量（Ｍ_n＝２２０００）の狭い多分散性（Ｍ_w／Ｍ_n＝１．６８）のポリマーが、［Ｍ］＝１ｇ／ｍｌで調製したポリマー混合物から上手く分離された。分離はまた、バイオビーズを用いてＧＰＣカラムで実施した。ｂ．反応時間と温度の影響生成されるポリマーの収量は反応時間とともに増加する：５時間で７５％変換、４日で９５％（図３、曲線Ａ）。生成されるポリマーの分子量はまた、開始相における時間とともに増加し（４時間まで）、その後ほぼ定常となった（図４）。重合反応は温度の上昇とともに低下した（図３、曲線Ｂ）。６０℃と８０℃で得られたポリマーは黄色でＴＨＦに不溶であるが、ＤＭＦおよびＤＭＳＯに可溶である。これは、アスパラギン酸の熱重縮合の間に発生することが報告されたイミド環の形成によるものかもしれない。Ｃ．モル比［ＤＰＰＡ］／［Ｍ］と［ＴＥＡ］／［Ｍ］の影響ポリマーの収量と分子量のモル比［ＤＰＰＡ］／［Ｍ］並びに［ＴＥＡ］／［Ｍ］に対する依存を調べた（表４）。最も高い収量は、［ＤＰＰＡ］／［Ｍ］が１．３、［ＴＥＡ］／［Ｍ］が２．３で得られた（図５）。これらの観察結果は Nishiらが報告した結果と一致する。より大きな分子量生成物は、それぞれ［ＤＰＰＡ］／［Ｍ］＝１．３−２．０および［ＴＥＡ］／［Ｍ］＝２．０−３．０の範囲で得られた。ｄ．溶媒の影響種々の溶媒における重合反応の比較を表５に示す。この表から、ポリマーの収量と分子量は用いる溶媒によって影響を受けることが分かる。より高い収量がＤＭＦで得られ、一方、より大きい分子量はＴＨＦ中および塊状重合で得られた。他方、ジオキサン中での重合は低分子量生成物を生じ、したがって好ましい。実施例６：ＤＰＰＡ法（＃２）によるプロテイノイドの製造ＤＰＰＡの存在下でのAsp.Bzと他のアミノ酸モノマー、例えばγ−ベンジルグルタメート（Glu.Bz）、β−アラニン（Ala）、フェニルアラニン（Phe）、Ｏ− ベンジルチロシン（Tyr.OBz）との共重合をAsp.Bzの同種重合反応（実施例５）と同じ工程を用いて実施した。表６に示すように、ランダム共重合（アミノ酸）が高収量（＞７７％）で得られた。これは、ＤＰＰＡを用いるアミノ酸の共重合反応は、コポリペプチド合成に有用なアプローチであること示している。二相性分子量分布がまた、Asp.Bzの同種重合反応と同様にこれらの場合でも観察された。実施例７：ＤＰＰＡ法により生成されるプロテイノイドの還元的脱ベンジル化本実施例は、触媒的水素付加によるポリ（Asp.Bz）およびポリ（Glu.Bz）のベンジル保護基の除去のための好ましい方法を説明する。ポリマーの水素付加は以下の方法にしたがって実施した：ＴＨＦ／メタノール（１：１、ｖ／ｖ）中のポリマー溶液に活性炭素上のＰｄ（１０％）をポリマー重量の１／１０の量で加えた。空気を窒素で置き換えた後、水素ガスをこの系に導入し、バルーンとともに維持した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。濾過で触媒を除き、さらに溶液を濃縮した後、混合物を大量の石油エーテルに注ぎ入れ、ポリマーを沈殿させた。得られたポリマーを続いて真空中で乾燥させた。水素付加の完了はポリマーの¹ＨＮＭＲで確認した。ほとんどの場合、有用な水溶性ポリマーが生成された。水素付加は、ベンジル基の除去について効果的で清浄な方法である。実施例８： Glu、AsD、Tvr、Pheプロテイノイドをもつ空のプロテイノイド担体の製造本実施例は、空プロテイノイド担体の製造および洗浄方法を説明する。方法１．試薬：ａ．実施例１で述べたように調製したプロテイノイド粉末ｂ．無水クエン酸（ＵＳＰ）ｃ．アラビアゴムＮＦｄ．脱イオン水ｅ．氷酢酸２．装置：ａ．ｐＨメーターｂ．水浴、４０℃ ３．溶液の調製：ａ．プロテイノイド溶液−１００ｍｇのプロテイノイドを１ｍｌの脱イオン水（またはその倍数）に溶解する。ワットマン（Whatman）＃１濾紙で濾過（必要な場合）し、４０℃の水浴中で保持する。これを溶液Ａとする。ｂ．０．５％アラビアゴム含有１．７Ｎクエン酸−５ｇのアラビアゴムと１０９ｇのクエン酸を１リットルの脱イオン水に溶解する。４０℃で保温。これを溶液Ｂとする。４．プロテイノイド担体の製造ａ．４０℃の水浴中で溶液Ｂを手でかきまぜながら、溶液Ａの全てを溶液Ｂに１段階で迅速に加える。実施例９：ネズミＩｇＧモノクローナル抗体含有プロテイノイド担体の製造本実施例は、抗レオウイルスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）９ＢＧ５（レオウイルス３型のシグマ−１遺伝子産物（ヘマグルチニン、ＨＡ３）に対して作製されたｍＡｂ）の被包化を説明する。ＨＡ３は、レオウイルス３型のための細胞表面受容体に結合し、ｍＡｂ９ＧＢ５はウイルスのこの受容体との結合を妨害する。マウスＩｇＧモノクローナル抗体９ＢＧ５は、ウイリアムズらの記載（W.V.Wi lliamsら、1991、J．Biol．Chem．266(8):pp5182-5190）の他に本明細書に引用した文献にしたがい、精製レオウイルス３型調製物（W.V.Williamsら、1988、Pr oc．Natl．Acad．Sci.USA，85:pp6488-6492）を用いて調製および精製した。本実施例で用いた精製９ＢＧ５は、燐酸緩衝食塩水（ｐＨ７．２）中で１．５ｍｇ／ｍｌの蛋白濃度を有していた。ｍＡｂ９ＢＧ５を被包するプロテイノイド担体は、０．８５Ｎのクエン酸中の最終濃度がGlu／Asp／Tyr／Pheプロテイノイド（反応混合物中のGlu,Asp,Tyr, Pheのモル比は１:1:1:1）は５０ｍｇ／ｍｌ、ｍＡｂは０．７ｍｇ／ｍｌ、アラビアゴムは０．５％で製造した。空のプロテイノイド担体は、ｍＡｂを除いて他は同じ最終濃度を含むように製造した。ｍＡｂ入りと空のプロテイノイド担体調製物の２組の部分標本（０．５ｍｌ）を５０００ｒｐｍで遠心した。ペレットと上清を凍結し、抗体被包化効率を決定するためにウェスタンブロットで分析した。図６は、精製ｍＡｂ９ＢＧ５、空のプロテイノイド担体（ｍＡｂの添加無し）、および９ＢＧ５含有プロテイノイド担体のウェスタンブロット分析のｘ−線フィルムである。この分析は、特異的にｍＡｂ９ＢＧ５と反応する抗マウスＩｇＧを用いてイムノブロットによって実施した。レーンは以下と対応する：レーンサンプル１２μｇの９ＢＧ５ｍＡｂ２１μｇの９ＢＧ５３０．２５μｇの９ＢＧ５ＭＷ分子量マーカー４被包化後の空のプロテイノイド担体上清５空のプロテイノイド担体ペレット６被包化後のｍＡｂ含有上清７ｍＡｂ含有プロテイノイド担体ペレットデータは、９ＢＧ５プロテイノイド担体はペレット中に約４０％のｍＡｂを含み、残りの６０％はプロテイノイド担体中に取り込まれず、上清に残ることを示している。空のプロテイノイド担体は、予想通り上清にもペレット中にも抗体を含んでいなかった。純粋なｍＡｂの相対的移動度（分子量）は、プロテイノイド担体中のｍＡｂよりもわずかに異なっていた。これは被包化工程は０．８Ｍの塩溶液を用いたので、サンプル中の塩濃度の違いによる可能性が最も高い。実施例１０：被包化ネズミｍＡｂ９ＢＧ５をもつプロテイノイド担体の安定化における添加物の影響担体形成に必要なｍＡｂの濃度および最適担体形成条件を決定するために、添加剤ありと添加剤無しについて、種々のプロテイノイド担体製剤をスクリーニングした。被包化プロテイノイド担体を調製するために用いたｍＡｂ９ＢＧ５調製物は、燐酸緩衝食塩水中で約２ｍｇ／ｍｌの蛋白濃度を有していた。最終プロテイノイド濃度は５０ｍｇ／ｍｌ、アラビアゴム（「gum」）またはゼラチン（「gel」）は５％（ｗ／ｗ）であった。すべてのプロテイノイド担体は０．８５Ｎのクエン酸中で調製した。空の担体はコントロールとして使用するために含まれ、それらはｍＡｂを除いて同じ態様で調製した。プロテイノイド担体懸濁物の２組（０．５ｍｌ）の部分標本を５０００ｒｐｍで遠心した。分析の前にペレットと上清を凍結した。表７は調製したサンプルを挙げる。括弧内の数字は添加ｍＡｂの量を示す。ｍＡｂ含有プロテイノイド担体の統合性に対する凍結融解の抵抗性を調べるために、２組のペレットのそれぞれの対のうちの１つを０．８５Ｎのクエン酸０．２５ｍｌに穏やかに再懸濁して洗浄した。ペレットを非洗浄ペレットに続いて分析し、ｍＡｂが洗浄で失われるか否かを調べた。実施例９で述べたように慣用のウェスタンブロッティングで分析した。ペレットを０．０５ＮＮａＯＨを含むドデシル硫酸ナトリウム中に溶解し、還元状態で分析した（ｍＡｂを５０ｋＤａと２５ｋＤａのバンドに分解する）。上清の部分標本（５０μｌ）を非還元状態で分析した（無傷の１５０ｋＤａｍＡｂは除いて）。これは、後に残るｍＡｂが変性しているか無傷かを別々に決定するために実施した。図７のウェスタンブロットのｘ−線フィルムから分かるように、サンプル９および１０、並びに１１および１２のペレットは、５から１０μｇの間のｍＡｂを含んでいる。洗浄サンプルは顕著な量のｍＡｂを失わなかったが、これは、プロテイノイド担体は凍結融解後無傷のままであることを示唆している。サンプル９および１１の上清は顕著な量のｍＡｂを持たないが、これは、取り込まれなかった物質は調製中に失われたことを示している。サンプル１７は、洗浄後に失われるいくらかの被包化ｍＡｂを有していた（No .１８参照）。この球体調製物は、凍結融解耐性ではなかった。さらに、サンプル１７の上清について、分子量１５０ｋＤａのバンドは、顕著な量のｍＡｂがプロテイノイド形成後取り残されることを示している。これらの結果に基づき、ｍＡｂは無傷のままであり、したがって、被包化工程はｍＡｂを分解しないようにみえる。空のプロテイノイド担体コントロールは、それらはｍＡｂを含んでいないので、予想通りいずれのバンドも生じなかった。実施例１１：被包化ネズミモノクローナル抗体の効力本実施例では、ｍＡｂ９ＢＧ５プロテイノイド担体調製物と非被包化ｍＡｂ９ＢＧ５をラットで評価した。実施例９で述べたように調製したｍＡｂ９ＢＧ５（１ｍｇ／ｍｌ）をGlu／Asp／Tyr／Pheプロテイノイド（反応混合物中のGlu 、 Asp、TyrおよびPheのモル比は1:1:1:1）を担体製剤中にアラビアゴムとともに被包した。ｍＡｂプロテイノイド担体懸濁物は０．８５Ｎクエン酸−０．５％ゴム中に０．２５ｍｇ／ｍｌのｍＡｂおよび５０ｍｇ／ｍｌのプロテイノイドを含んでいた。空のプロテイノイド担体は同様に調製したが、ｍＡｂは含まれていない。ｍＡｂの３０％が被包されることが分かったので、ｍＡｂプロテイノイド担体は０．０７５ｍｇ／ｍｌのｍＡｂを含んでいると算定され、この数値を投与量決定に用いた。このｍＡｂプロテイノイド担体を顕微鏡的に調べたが、十分に均質な調製物であることが分かった。動物への投与には、適切な量のプロテイノイド担体を５０００ｒｐｍで１５分遠心し、ペレットを０．８５Ｎクエン酸−０．５％ゴムの１．０ｍｌに再懸濁した。精製ｍＡｂ溶液（０．８５Ｎクエン酸−０．５％ゴム中のｍＡｂ０．９５ｍｇ／ｍｌ）を胃管経由経口投与のために用いた。この溶液を投与前に４０℃に予め加温した。静脈投与のためには、精製ｍＡｂ溶液（燐酸緩衝食塩水中のｍＡｂ、１ｍｇ／ｍｌ）を用いた。本実験で用いた量および投与経路は以下の通りである：１．空のプロテイノイド担体（ｍＡｂ無し）：５０ｍｇの空のプロテイノイド担体を含む１ｍｌ、胃管による経口投与（ラット＃２３１２と２３１３）。２．ｍＡｂ９ＢＧ５プロテイノイド担体：３．７ｍｇｍＡｂ／ｋｇラット体重を胃管による経口投与（ラット＃２２８７、２２８８、２２９０および２２９１）。３．非被包化ｍＡｂ９ＢＧ５：０．７３ｍｇ／ｋｇラット体重を静脈内投与（ラット＃２２９２、２２９３および２３１１）。４．非被包化ｍＡｂ９ＢＧ５：３．７ｍｇ／ｋｇラット体重を胃管による経口投与（ラット＃２３１４および２３１５）。基線用血液サンプル（１ｍｌ量）を投与直前（”０”時）に各ラットから採取した。投与後、血液サンプルを１時間、６時間および２４時間で採取した。血液サンプルは直ちに処理し血清を−２０℃で凍結した。実験動物から得た融解血清を３組一体として、多穴（ウェル）プレートに固定した精製レオウイルス３型およびＶ_LＳＨ二量体ペプチドを用いて慣用のＥＬＩＳＡ技術で調べた（W.V．Williamsら、1991、J．Biol．Chem.，266(8):pp5182-5 190）。コントロールプレートは、固定レオウイルスおよびＶ_LＳＨペプチドを含まないウェルを有するが、それらにｍＡｂ（１ｍｇ／ｍｌ）を添加した。Ｖ_LＳＨペプチド（W.V．Wil-liamsら、上掲書、表１）はＶＬペプチドの合成変種で、後者は８７．９２．６抗体の軽鎖可変ＣＤＲ II領域部分に対応する。８７．９２．６抗体は、レオウイルス３型受容体とｍＡｂ９ＢＧ５に対してそれぞれイディオタイプおよび抗イディオタイプとして作用する（W.V．Williamsら、上掲書）。各ウェルの結合蛋白含有量は標準的な蛋白法、例えば、ローリー（Lowry ）法で測定し、各多穴プレートの結果はそれぞれ図８（ａ−ｃ）に示す。図８（ａ−ｃ）は、蛋白濃度測定で検出した固定レオウイルス３型およびＶ_L ＳＨに結合した血清蛋白レベルを示す。これらの図は、投与２４時間後の結合蛋白の血清レベルはｍＡｂプロテイノイド担体を経口投与した動物および非被包化ｍＡｂを静脈内に投与した動物について最も高かった。より低い結合血清蛋白は非被包化ｍＡｂを経口投与された動物で認められた。空のプロテイノイド担体（ｍＡｂ無し）を投与された動物から採取した血清では、このアッセー条件下では予想通り特異的血清ＩｇＧは認められなかった。図９は、固定レオウイルス３型およびＶ_LＳＨ蛋白を用いた慣用のＥＬＩＳＡ工程で結合するｍＡｂを示す。０．８５Ｎクエン酸−０．５％ゴム（図９（ａ））または燐酸緩衝食塩水（図９（ｂ））で処理した段階希釈ｍＡｂを用いた。図は、結合蛋白レベルは燐酸緩衝液中のｍＡｂよりもクエン酸緩衝液中のｍＡｂの場合が高いことを示している。本発明に拘らず、結合強化はクエン酸−蛋白結合による三次元構造の変化に起因すると考えられる。要約すれば、ｍＡｂの血清レベルは、結合蛋白の吸着によって示されるように、被包化ｍＡｂを経口的に投与された動物、または非被包化ｍＡｂを静脈投与された動物の方が、非被包化ｍＡｂを経口的に投与された動物よりも高かった。実施例１２：ヘパリン含有プロテイノイド担体の製造本実施例はヘパリンプロテイノイド担体の調製とクリーニングの方法を説明する。工程１．試薬：ａ．実施例１で述べたように調製したプロテイノイド粉末ｂ．ヘパリンｃ．無水クエン酸（ＵＳＰ）ｄ．アラビアゴムＮＦｅ．脱イオン水ｆ．乾燥剤ｇ．液体窒素２．装置：ａ．磁気撹拌装置ｂ．ビュレットｃ．顕微鏡ｄ．医療用遠心機ｅ．透析膜チューブ（スペクトラム社製６、１０ｍｍ、排除分子量５００００）ｆ．ｐＨメーターｇ．凍結乾燥機（Labconco #75035）ｈ．凍結乾燥用フラスコ（１５０−３００ｍｌ）ｉ．回転シェル付フリーザーｊ．イソプロパノール／ドライアイス浴または液体窒素ｋ．モーターおよび乳棒ｌ．保存用容器（５００ｍｌ）ｍ．エッペンドルフピペット（０−１００μｌ）ｎ．透析チューブ用プラスチック封入装置（スペクトラム社製）ｏ．０．４５μｍアクロディスク付２ｍｌ注射筒３．溶液の調製：ａ．プロテイノイド溶液Ａ^*（８０ｍｇ／ｍｌ）：１６０ｍｇプロテイノイドを１ｍｌの脱イオン水に溶解。０．４５μｍアクロディスク装着２ｍｌ注射筒を用いてこのプロテイノイド溶液を１０ｍｌ試験管内に濾過し、４０℃に維持。ｂ．溶液Ｂ（１％ゴム入り１．７Ｎクエン酸）：１０ｇのアラビアゴムと１０９ｇのクエン酸を１リットルの脱イオン水に溶解。ｃ．溶液Ｃ（ヘパリン溶液）：溶液Ｂに１５０ｍｇ／ｍｌでヘパリンを溶解、４０℃に維持する。 ^*またはその倍数４．プロテイノイド担体の調製：ａ．４０℃の水浴中で溶液Ａを全て溶液Ｃに迅速に加え、その間ゆっくりと溶液Ｃを手で撹拌する。５．ヘパリンプロテイノイド担体の透析：被包化プロテイノイド担体中のクエン酸はその後の凍結乾燥工程を阻害することが分かった。したがって、クエン酸溶液で調製したプロテイノイド担体被包化物は、好ましくは５％酢酸溶液に対して少なくとも４回透析溶液を交換し少なくとも２時間透析し、交換工程によってクエン酸を除去する。したがって、ａ．注射筒（針無し）で懸濁物を透析チューブに移し、プラスチック封入装置で封止する。チューブは７０％以上満たしてはならない。ｂ．表面に沈殿および／または凝集した一切の非晶質物質は廃棄する。ｃ．プロテイノイド担体懸濁物を酢酸溶液に対して透析する（プロテイノイド担体懸濁物１ｍｌにつき２０ｍｌの酢酸を用いる）。その間、酢酸溶液を磁気撹拌装置で撹拌する。ｄ．１時間毎に酢酸溶液を取換える。全体で３時間透析を続ける。６．凍結乾燥：ａ．５０％トレハロース（シグマケミカル社製、セントルイス、ミズーリー、US A）１容を９容の透析プロテイノイド担体に添加する。約１９０ｒｐｍで回転するように調整し、液体窒素浴に沈めたシェルフリーザーを用いて、凍結乾燥フラスコ中でプロテイノイド担体をフラッシュ凍結する。ｂ．２４時間または自己冷却がみられないことによって乾燥が明らかとなるまで凍結乾燥させる。ｃ．乾燥プロテイノイド担体の重量を記録する。ｄ．モーターと乳棒で微粉末となるまですりつぶす。ｅ．褐色容器にプロテイノイドを移し、乾燥剤とともに封をし室温で保存する。７．再懸濁：ａ．凍結乾燥粉末の重量を計り、粉末中のプロテイノイド量を算出する。ｂ．０．８５Ｎのクエン酸水溶液を凍結乾燥粉末に４０℃で添加する。溶液中の最終プロテイノイド濃度は８０ｍｇ／ｍｌである。実施例１３：インシュリン含有プロテイノイド担体の調製本実施例は、インシュリンプロテイノイド担体の調製方法を説明する。方法１．試薬：ａ．プロテイノイド担体ｂ．無水クエン酸（ＵＳＰ）ｃ．ゼラチン（ＵＳＰ）ｄ．ブタインシュリン（ノボノルディスク）ｅ．脱イオン水（ＵＳＰ）２．装置：ａ．水浴ｂ．０．２ミクロンアクロディスクフィルターｃ．滅菌注射筒（１０ｃｃ）ｄ．所望量のプロテイノイド担体溶液のための適切な容量のガラスまたはプラスチック容器３．溶液の調製：ａ．５．０％ゼラチン入り１．７Ｎクエン酸：脱イオン水１ｍｌにつき１０９ｍｇ無水クエン酸と５０ｍｇゼラチンの割合で所望の容量^**に溶解し、４０℃の水浴中でゼラチンが完全に溶解するまで保温する。これは後で使用するために調製し、４０℃で保存できる。ｂ．インシュリン溶液：４０℃で、５％ゼラチン入り１．７Ｎクエン酸１ｍｌに１２ｍｇインシュリンの割合で所望の容量に溶解する。ｃ．プロテイノイド溶液：室温で脱イオン水１ｍｌにつき１００ｍｇのプロテイノイドの割合で所望の容量に溶解する。注射筒と０．２ミクロンのアクロディスクを用いて溶液を濾過し、清澄な液体とし４０℃の水浴中で保温する。５ｂを参照。４．プロテイノイド担体の調製：ａ．最終的に所望量のプロテイノイド担体を製造するために十分な等容量のプロテイノイド溶液とインシュリン溶液を合わせる。ｂ．濾過したプロテイノイド溶液を迅速にインシュリン溶液に４０℃で加え、その間、同時かつ定常的にインシュリン溶液を撹拌し完全に混合させる。 ^**プロテイノイドおよびインシュリン溶液は、所望の最終微小球溶液の全量の１／２で各々調製される。実施例１４：エリトロポエチン含有プロテイノイド担体の製造方法プロテイノイド担体におけるヒトエリトロポエチン（ＥＰＯ）の被包化を実施例１３で述べた態様と同じように実施した。ＥＰＯはジェネティックインスティチュート（Genetic Institute）（ケンブリッジ、マサチューセッツ、USA；現在はアムジェンコープ(Amgen Corp)(サウザンド・オークス、カリフォルニア、USA )より入手可能）から入手した。Gln／Asp／Tyr／Pheプロテイノイド（プロテイノイド反応混合物中でGln、Asp、TyrおよびPheのモル比1:1:1:1）の溶液および１％ゴム入り１．７Ｎクエン酸中の１５０μｇ／ｍｌのＥＰＯ溶液を、ＥＰＯ含有プロテイノイド担体調製に用いた。実施例１５：エリトロポエチン含有プロテイノイド担体の評価本実施例では、ＥＰＯ含有プロテイノイド担体（実施例１４で述べたように調製）をラットで調べた。ＥＰＯ実験の概要は下記に示す。１５０−２００ｇのラットをケタミン（8.5mg/kg）およびソラジン（3.75mg/k g）の筋肉注射で麻酔した。続いてラットに非被包化エリトロポエチンまたは被包化エリトロポエチンのいずれかを胃管で経口投与した。簡単に記せば、８フレンチネラトンカテーテルを、カテーテルの１０ｃｍマークが門歯と同じ位置になるまでラットの食道に挿入する。被検溶液またはコントロール溶液を注射筒に吸い上げ、カテーテルに繋ぐ。動物を直立に保持し、溶液をラットの胃に送り込む。実験結果は図１０−１２に纏める。図１０は、Gln/Asp/Tyr/Pheプロテイノイド担体被包化ＥＰＯ（15μg EPO/kg 体重）および被包化ＥＰＯ（15μg EPO/kg体重）を投与したラットからｔ＝０．５、１および２時間で採取したラット血清中に検出されたエリトロポエチン（EP O）レベルを表す。血清エリトロポエチンレベルは、エリトロポエチン酵素免疫アッセーキット（アムジェン(Amgen)、サウザンドオークス、カリフォルニア、U SA）を用いて時間に対して測定した。結果は、エリトロポエチンプロテイノイド担体を投与したラットのＥＰＯ血清レベルは、非被包化物質を投与したラット（コントロール）と比較して全ての時点で相対的に高かった。ｔ＝２時間では、ＥＰＯレベルは、エリトロポエチンプロテイノイド担体を投与したラットでは約３００ｐｇ／ｍｌ血清で、一方、コントロールラットはＥＰＯレベルは検出できなかった。図１１は、エリトロポエチン（50μg/kg）またはGln/Asp/Tyr/Pheプロテイノイド（反応混合物中のGln、Asp、TyrおよびPheのモル比は1:1:1:1）担体被包化エリトロポエチン（50μg/kg）のいずれかを十二指腸基部に直接投与したラットのＥＰＯ血清レベルを表す。血清エリトロポエチンレベルは、上記のエリトロポエチン酵素免疫アッセーキットで時間に対して測定した。結果は、エリトロポエチンプロテイノイド担体を投与したラットのＥＰＯ血清レベルは２時間の範囲にわたって、１時間につき約５０ｐｇ／ｍｌの速度で定常的に上昇した。反対に、非被包化ＥＰＯを投与したラット（コントロール）では、ＥＰＯレベルは投与後１時間で最高値１００ｐｇ／ｍｌに達し、２時間終了時には約５０ｐｇ／ｍｌまで定常的に減少した。図１２は、Gln/Asp/Tyr/Pheプロテイノイド（反応混合物中のGln、Asp、TyrおよびPheのモル比は1:1:1:1）担体被包化または非被包化エリトロポエチン（100 μg/kg）を胃管で経口投与したラット、または２μｇ／ｋｇもしくは１０μｇ／ｋｇのいずれかを皮下注射したラットのＥＰＯ血清レベルを示す。血清エリトロポエチンレベルは上記のエリトロポエチン酵素免疫アッセーキットで時間に対して測定した。結果は、経口的にエリトロポエチンプロテイノイド担体を投与したラット（＃６４０−６４５）のＥＰＯ血清レベルは、非被包化物質を与えられたラット（EPO）と比較してｔ＝２時間まで相対的に高かった。本実施例で得られた結果は、プロテイノイド被包化はＥＰＯの経口的生体利用性を顕著に改善することを立証した。実施例１６：カルシトニン含有プロテイノイド担体の調製プロテイノイド担体内のサケカルシトニンの被包化は実施例１３と同じ態様で実施した。カルシトニン（血清カルシウム濃度を減少させるために主に骨に作用するペプチドホルモン）は、サンド（Sandz）（バーゼル、スイス）から入手した。カルシトニンプロテイノイド担体は、実施例１３で述べたように、Gln/Asp/ Tyr/Pheプロテイノイド（プロテイノイド反応混合物で用いられるGln、Asp、Tyr およびPheのモル比は1:1:1:1）の水溶液１００ｍｇ／ｍｌと１％アラビゴム含有１．７Ｎクエン酸溶液中のカルシトニン１５０μｇ／ｍｌ溶液とを１：１の容積比で混合して調製した。カルシトニン被包化効率は約４０％であった。カルシトニン濃度は、カルシトニンプロテイノイド担体を６０％アセトニトリル水溶液に溶解後、ＨＰＬＣで直接測定した。実施例１７：カルシトニン含有プロテイノイド担体のサルでの評価本実施例では、カルシトニンプロテイノイド担体（実施例１６で述べたように調製）はシノモルガスモンキーで効果を調べた。体重４−５ｋｇの雄のシノモルガスモンキーを一晩絶食させ、麻酔（約１０ｍｇ／ｋｇの塩酸ケタミン）し、投薬および血液採取のため霊長類用拘束イスに固定した。カルシトニンプロテイノイド担体の経口投与を１回（0.25mg/kg体重）のみ鼻管カテーテルにより胃管経由で４匹のサルのそれぞれに実施した。投薬量決定は、投薬の朝に測定した体重に基づいて行った。血液サンプルは伏在静脈カテーテルによりプロテイノイド担体投与前をｔ＝０として開始し１時間間隔で投与後１から７時間まで、血清カルシウム測定のために採取した。経口的カルシトニン投与に続く低カルシウム反応は薬理学的反応のインデックスとして用いた。血清カルシウム濃度は慣用的なＯ −クレゾールフタレインコンプレクソン法によって定量した。図１３は、マイクロカプセル化カルシトニンの鼻管胃管経由投与後にシノモルガスモンキーで得られた反応を示す。血清カルシウムの基準濃度から顕著な変化が認められた。投薬後６時間で、血清カルシウム濃度は１３μｇ／ｍｌまで減少した。顕著な薬理反応は、カルシトニンプロテイノイド担体の投与後７時間でもなお明白であった。実施例１８：カルシトニン含有プロテイノイド担体のラットにおける評価本実施例では、実施例１６にしたがって調製したカルシトニンプロテイノイド担体の効果を、体重が１００−１５０ｇの絶食させた雄のスプラークドーリーラット（Spraque Daw-ley rats）で調べる。カルシトニンプロテイノイド担体およびカルシトニンを胃管経口投与または十二指腸注射のいずれかによって投与した。ラットを以下の群に分けた：１．カルシトニンプロテイノイド担体：６０μｇカルシトニン／ｋｇ体重を冑管により経口投与（ラット３匹）；２．カルシトニンプロテイノイド担体：３μｇカルシトニン／ｋｇ体重を十二指腸内投与（ラット３匹）；３．カルシトニン：６０μｇカルシトニン／ｋｇ体重を胃管経口投与（ラット３匹）（コントロール）；４．カルシトニン：３μｇカルシトニン／ｋｇ体重を十二指腸投与（ラット３匹）（コントロール）。ラットの胃管経口投与を実施する。カルシトニンプロテイノイド担体を投薬直前に調製し、１群および２群の各々にプロテイノイド担体懸濁物の適切な投薬量を与える。３群および４群は非被包化カルシトニン（プロテイノイド担体無し）を与える。約０．５ｍｌの血液を、投薬直前（”０”時間）、並びに投薬後１、２、および３時間で各ラットの尾動脈から連続的に採取する。血液サンプルの血清は、血清カルシウム濃度測定のために− ２０℃に保存する。図１４は、ラットに経口的に投与したマイクロカプセル化カルシトニンおよび非被包化カルシトニンについての血清濃度−時間曲線である。ラットの実験結果は、プロテイノイド被包化カルシトニンを非被包化賦形剤コントロール群と比較したとき薬理反応に顕著な上昇（すなわち、血清カルシウムレベルの減少）があることを明らかにする。投薬後１時間で血清カルシウム濃度は、コントロール群のわずか６．５μｇ／ｍｌの減少と比べ、被包化カルシトニンを投与したラットでは２３μｇ／ｍｌも減少した。さらに、反応は用量依存性であった（結果は示さず）。被包化もしくは非被包化カルシトニンのラット十二指腸注射の結果は図１５に示す。結果は、被包化調製物について血清カルシウムレベルの時間依存性減少を示す。コントロール群は反応しなかった。十二指腸投与後１時間で、カルシトニンプロテイノイド担体群の血清カルシウムレベルは１８μｇ／ｍｌ減少し、一方非被包化カルシトニンでは変化はなかった。これらの結果は、プロテイノイド被包化によってカルシトニンの膜通過輸送は強化されることを示している。本実施例および実施例１７で得られた結果は、プロテイノイド被包化はカルシトニンの経口的生体利用性を顕著に改善するという証明を提供する。これらのデータはまた経口的薬剤送達システムは種依存性ではないことを示唆している。実施例１９：第ＩＸ因子含有プロテイノイド担体の調整と評価第ＩＸ因子はビタミンＫ依存血液凝固プロ酵素（ＭＷ５６ｋＤ）である。第ＩＸ因子欠乏（血友病Ｂとして知られている）は、２５０００人の男子の約１人に発生する。今日まで、この疾患の治療は第ＩＸ因子の静脈内投与によって実施されていたが、最近の報告では皮下注射による補充の試みが詳述されている（Thom pson 1986，Blood，67(3):pp565-572）。プロテイノイド担体内の第ＩＸ因子（ＦＩＸ）の被包化は、実施例１３の工程にしたがって、Glu/Asp/Tyr/Pheプロテイノイド（プロテイノイド反応混合物で用いられるGlu、Asp、TyrおよびPheのモル比は1:1:1:1）の脱イオン水溶液１００ｍｇ／ｍｌとＦＩＸの水溶液とを混合（１：１、ｖ／ｖ）して調製した。２つのプロテイノイド担体懸濁物を調製し、実施例２０および２１で述べたように別々にインビボで効果を調べた。ＦＩＸプロテイノイド担体懸濁物Ａは、５０ｍｇ／ｍｌのプロテイノイドと、４％酢酸、２％アラビアゴム、０．２％ＰＥＧ１４（ユニオンカーバイド、ダンベリー、CN、USAより入手可能）、及び１４ｍＭ塩化カルシウム含有５００Ｕ／ｍｌのＦＩＸ（ＦＩＸはアメリカ赤十字、、ロックビル、メリーランド、USAから入手可能）溶液（最終ｐＨ３．８１）とを含む。第二の懸濁物、ＦＩＸプロテイノイド担体懸濁物Ｂは、５０ｍｇ／ｍｌのプロテイノイドと、３．８％酢酸、１．５％アラビアゴム、０．１５％ＰＥＧ１４、及び１１ｍＭ塩化カルシウム含有１１６Ｕ／ｍｌのＦＩＸ溶液（最終ｐＨ４．５８）とを含む。ＦＩＸプロテイノイド担体調製物の安定性はインビトロでの短時間について調べた。ＦＩＸを被包する蛋白担体は、光学顕微鏡とレーザー光分散で調べた。プロテイノイド担体懸濁物の一部分を１．５時間に渡って３０分ごとに取り出し、ＦＩＸプロテイノイド担体を４５００×ｇで遠心して分離し、部分的活性化トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）アッセー緩衝液（０．０５Ｍヒスチジン−０．０１ＭＮａＣｌ−０．１％ウシ血清アルブミン−０．０１％トゥイーン（TWEEN ）４０、ｐＨ７．４７）に溶解し、可溶性ＦＩＸとプロテイノイドを遊離させる。ＡＰＴＴによるＦＩＸ活性の定量は、ＦＩＸ標準物（０．０２５、０．０５、０．１Ｕ／ｍｌ）と”空”プロテイノイド担体懸濁物の両方をコントロールとして用いた。ＡＰＴＴアッセーキットは市販されている（例えば、シグマダイアグノスティックス(Sigma Diagnostics)（セントルイス、ミズーリー、USA））。上記の分析に基づき、強い安定性をもつＦＩＸプロテイノイド担体がより高いｐＨ（例えばペは４．９）でＦＩＸを被包化することによって得られることが分かった。さらに、被包化効率は利用可能ＦＩＸ単位の約２０％で、活性レベルは、ＦＩＸプロテイノイド担体ペレットが約４℃で保存される場合、少なくとも１．５時間一定である。実施例２０：ＦＩＸ含有プロテイノイド担体（Ａ）のラットにおける評価この実施例では、ＦＩＸプロテイノイド担体Ａ（実施例１９のように調製）を雄のスプラークドーリーラット（平均体重３００ｇ）で調べた。適切な量の懸濁物を４５００×ｇで遠心し、ＦＩＸ蛋白担体を沈殿させる。これを動物に投薬するために続いて同じ緩衝液に再懸濁した。ラットは以下のように２群に分けた：１．経口用ＦＩＸプロテイノイド担体（FIX sph PO）：２７０９ＵＦＩＸ／ｋｇ体重を胃内投与（ラット４匹）；２．静注用ＦＩＸ（プロテイノイド担体無し）（FIX IV）：２００Ｕ／ｋｇ体重を静脈内注射、３２匹のラットに０．１１ＮａＣｌ−０．０２Ｍクエン酸ナトリウム（ｐＨ６．８５）中のＦＩＸ０．７ｍｌを尾静脈注射により投与。ＦＩＸプロテイノイド担体懸濁物および溶液は投薬直前に調製する。各ラットから１ｍｌの血液を投薬直前（”０”時間）並びに投薬後１、２および４時間で採取した。クエン酸塩抗凝固剤を血液に添加し、血液サンプルから得た血漿を− ７０℃で保存した。血漿サンプルを、ＦＩＸ凝固不全血漿を用いて修飾ＡＰＴＴアッセーによって調べた（アッセーキットはオルトダイアグノーシス（Ortho Diagnosis）（ラリタン、ニュージャージー、USAから入手可能）。後の凝固時間値から個々の基準値（０時間値）を差し引いて凝固時間の変化を算出した。図１６に示したデータは、与えられた群の平均値である。基準値以下の値は外来ＦＩＸの存在を示す。図１６に示すように、顕著な量のＦＩＸが、ＦＩＸプロテイノイド担体の経口投与を介して血液に送られた。相対的な血漿値は、ＦＩＸプロテイノイド担体群で低いが、０．５、１．０および２．０時間における凝固時間の減少は顕著である。これはＩＶ投与の約１４倍を用いた経口投与で達成される。さらにまた、第ＩＸ因子は酸感受性（ｐＨ５．０、３７℃で半減期は約１時間未満である）蛋白であるので、これらの結果は興味深いものである。本実施例のＦＩＸプロテイノイド担体は、ｐＨ３．８１で調製中利用可能なＦＩＸ単位の１４．８％が被包化された。この結果はＦＩＸプロテイノイド担体は胃腸管で活性を維持し、送達を促進させることを支持する。実施例２１：ＦＩＸ含有プロテイノイド担体（Ｂ）のラットにおける評価本実施例では、実施例１９で述べたように調製したＦＩＸプロテイノイド担体懸濁物Ｂを雄のスプラークドーリーラット（平均体重３００ｇ）で調べた。再懸濁ＦＩＸプロテイノイド担体は実施例２０で述べたように調製した。ラットは以下のように２つの群に分ける：１．経口用ＦＩＸプロテイノイド担体（FIX sph PO）：１００６ＵＦＩＸ／ｋｇ体重を胃内投与（ラット５匹）；２．静脈内投与用ＦＩＸ（プロテイノイド担体無し）（FIX IV）：１８５Ｕ／ｋｇ体重を静脈注射により投与。３匹のラットに０．１１ＮａＣｌ−０．０２Ｍクエン酸ナトリウム（ｐＨ６．８５）中のＦＩＸ０．３ｍｌを尾静脈注射により投与；３．経口用ＦＩＸ（プロテイノイド担体無し）（FIX unencap PO）：２７６０ＵＦＩＸ／ｋｇ体重を胃内投与。４匹のラットに３．８％酢酸（ｐＨ６．８５）含有食塩水中のＦＩＸ１．０ｍｌを投与。ＦＩＸプロテイノイド担体懸濁物および溶液を投薬直前に調製した。血漿サンプルを採取し、実施例２０で述べたようにアッセーした。その後の凝固時間値から個々の基準（０時間）値を差し引いて、凝固時間における変化を算出した。図１７に示すデータは与えられた群の平均値である。基準以下の値は外来ＦＩＸの存在を示している。ＦＩＸプロテイノイド担体（ｐＨ４．５８で調製）は２３．１％のＦＩＸ単位を被包化した。図１７に示すように、ＩＶ投与量のわずか５倍の経口投与量で、顕著な経口的薬剤送達が認められた。さらに、ＩＶ投与レベルの１５倍で投与された天然ＦＩＸ（ｐＨ６．８５）では、血漿中に検出可能レベルの外来ＦＩＸを認めることはできなかった。したがって、本実施例および実施例２０で示された結果は、経口的ＦＩＸ送達はＦＩＸプロテイノイド担体の使用によって達成できることを支持している。これらのプロテイノイド担体は、胃腸間通過および血流へのＦＩＸ送達に際して、適切にＦＩＸを保護するようである。実施例２２： α−インターフェロン（ＩＦＮ）含有プロテイノイド担体の調製本実施例では、胃腸間擬似条件下での酵素的分解に対するプロテイノイド担体の保護能力を評価するために実験を行った。プロテイノイド担体中のＩＦＮのインビトロ安定性を、０．０８ＮＨＣｌ中のペプシンを含む擬似胃液（ＳＧＦ）および燐酸緩衝液中のパンクレアチンを含む擬似腸液（ＳＩＦ）で調べた。試薬および安定性アッセー工程は”合衆国ファーマコポシア（United States Pharma copocia）”（XXII巻,1990,pp1788-1789）に記載されている。ＩＦＮ含有プロテイノイド担体の調製プロテイノイド担体内へのＩＦＮの被包化は実施例１３で述べたものと同じ態様で実施した。α−ＩＦＮは多数の販売元から入手できる。市販ＩＦＮ製品はロフェロン−Ａ（Rofe-ron-A）（ホフマンラロシュ［Hoffman LaRoche］）を含む。ＩＦＮプロテイノイド担体は、Glu/Asp/Tyr/Pheプロテイノイド（プロテイノイド反応混合物で用いられるGlu、Asp、TyrおよびPheのモル比は1:1:1:1）の水溶液と、５％ゼラチン添加１．７Ｎクエン酸溶液を含むＩＦＮ溶液とで調製した。ＩＦＮプロテイノイド担体懸濁物は、８０ｍｇ／ｍｌプロテイノイド、６００ μｇ／ｍｌのＩＦＮおよび２．５％ゼラチン（ｐＨ３．０）を含んでいた。ＩＦＮプロテイノイド担体のＳＧＦ中での安定性ＳＧＦ（２ｍｌ）を１ｍｌのＩＦＮプロテイノイド担体懸濁物に加えた。この溶液を振盪しながら４０℃で保温し、”合衆国ファーマココピア（U.S．Pharmac ocopia）”（上掲書）に記載されているようにＳＧＦ添加後段階的に部分標本を採取した。等容量の停止液（燐酸緩衝液中のペプスタチンＡ）をサンプル採取後直ちに各部分標本に加え、酵素分解を停止し、プロテイノイド担体を開放する。続いて、全サンプル中のＩＦＮ濃度をＨＰＬＣで決定した。比較として、ＳＧＦ中のＩＦＮ単独の安定性を調べた。この実験はプロテイノイド無しで上記のように実施した。別のコントロールとして、ＩＦＮプロテイノイド担体の安定性を０．０８ＮＨＣｌ中で調べた。ＩＦＮ含有プロテイノイド担体のＳＩＦ中の安定性ＳＩＦ（２ｍｌ）を１ｍｌのＩＦＮプロテイノイド担体に加えた。この溶液を振盪しながら４０℃で保温し、”合衆国ファーマココピア”（上掲書）に記載されているように連続的にサンプルを採取した。等容量の停止液（燐酸緩衝液中のアプロチニンおよびトリプシン／キモトリプシン阻害剤）をサンプル採取後直ちに各部分標本に加え、酵素分解を停止した。ＩＦＮ濃度をＨＰＬＣで決定した。ＳＩＦ中のＩＦＮ単独の安定性を調べるために、６００μｇのＩＦＮを０．８５Ｎクエン酸または０．０１Ｍの燐酸緩衝液に溶解した。ＳＩＦ（２ｍｌ）を１ｍｌのＩＦＮ溶液に加えた。この溶液をサンプルして上記のように分析した。結果と考察（ａ）ＳＧＦ中でのプロテイノイド担体の保護効果図１８に示すように、ＳＧＦで１時間保温した後、約５０％のＩＦＮが無傷で残った。ＳＧＦで６時間保温した後、約２０％のＩＦＮが分解されなかった。予想通り、ＩＦＮ単独（プロテイノイド担体無し）では、２０分以内でＳＧＦ中のペプシンで完全に破壊されることが分かった。０．０８ＮＨＣｌ中で単独ＩＦＮを用いて別のコントロールを実施した。ＩＦＮ単独ではペプシン無しのＳＧＦ中で安定であった（０．０８ＮＨＣｌ）。２時間保温した後、わずかに減少しただけであった。これは、ＩＦＮはｐＨ１．２のＨＣｌ中で６時間までは寧ろ安定であることを示唆している（図１９）。これらの結果は、プロテイノイド担体はＩＦＮのペプシン消化を遅らせ、一方ＩＦＮ単独では胃の中で２０分以上残存することはできないことを示唆している。これらの観察は、蛋白薬剤の胃の中での酵素消化に対するプロテイノイド担体の保護能力を示している。（ｂ）ＳＩＦ中のプロテイノイド担体の保護効果図２０に示すように、ＩＦＮプロテイノイド担体は、ＳＩＦ中でＩＦＮ単独（プロテイノイド無し）よりもはるかに安定であった。ｐＨ７．４においてＩＦＮ単独の場合は、ＳＩＦと保温したとき１０分以内に完全に分解した。しかしながら、ＩＦＮ／プロテイノイド担体の約７０％がＳＩＦ中で６時間後も残存したが、これは、プロテイノイド担体によって顕著な安定性が提供されることを示している。ＩＦＮ単独ではｐＨ７．４よりｐＨ３でＳＩＦ中でわずかに安定性が増した。ＳＩＦでｐＨ３で６時間保温した後、約１０％のＩＦＮが残存した。ｐＨ３におけるＳＩＦ中でのＩＦＮの安定性は、腸のプロテアーゼの酵素活性を抑制すると思われるｐＨの低さに起因する。実施例２３：ヘパリン含有プロテイノイド担体のラットでの評価本実施例では、プロテイノイド担体が保護能力のために必要とされるか、または（１）プロテイノイド（可溶性プロテイノイドで担体形ではない）を用いることができるか、もしくは（２）担体への薬剤積載のまた別の方法（例えば治療用化合物を予め形成したプロテイノイド担体と保温する）を使用することができるかを確認するために、実験を行った。ヘパリン含有プロテイノイド担体の調製プロテイノイド担体へのヘパリンの被包化を実施例１２と同じ方法で実施した。ヘパリン（局方）を用いたが、この物質は、イーライリリー（Eli Lilly）（インジアナポリス、USA）を含む種々の販売元から入手できる。ヘパリンプロテイノイド担体は、Glu/Asp/Tyr/Phe/Orn_0.5プロテイノイド（プロテイノイド反応混合物で用いられるGlu、Asp、Tyr、Phe、Ornのモル比は1:1:1:1:0.5）の脱イオン水溶液１５０ｍｇ／ｍ１と、１．７Ｎクエン酸溶液及び０．５％アラビアゴムを含むヘパリン水溶液２０ｍｇ／ｍｌとの１：１容量比を用いて、実施例１２の方法にしたがって調製した。ヘパリンプロテイノイド担体懸濁液は、実施例１２で述べたように酢酸溶液中で透析した。続いて、ヘパリンプロテイノイド担体は、４８００×ｇ（１５分）で遠心し、修飾ＡｚｕｒｅＡ法（Gundryら、Amer． J．Surgery，1984，148：pp191-194）を用いて、ペレットおよび上清を分析することによって全てのヘパリンを測定した。プロテイノイドは、０．１ＮＮａＯＨでプロテイノイド担体を溶解し、２９４ｎｍでの吸収を測定することによって測定した。ヘパリン−スパイク空プロテイノイド担体の調製ヘパリンプロテイノイド担体のために上記で述べた同じ方法（ただしヘパリンは含まない）にしたがって、空のプロテイノイド担体を調製した。凍結乾燥した空プロテイノイド担体を、２０ｍｇ／ｍｌの濃度のヘパリンを含む０．８５Ｎクエン酸および０．５％ゴムに再懸濁した。プロテイノイド担体とともに分離されたヘパリンの量は上記のように測定した。実験工程体重が約３５０ｇの雄のスプラークドーリーラットに胃管経口投与および十二指腸内（ＩＤ）注射（幽門括約筋のすぐ前方および十二指腸内）による投薬を実施した。ラットに経口的またはＩＤで以下の１つを投薬した：凍結乾燥ヘパリンプロテイノイド担体、ヘパリン−スパイク空プロテイノイド担体、プロテイノイド／ヘパリン水溶液、ヘパリン含有０．８５Ｎクエン酸および０．５％ゴム、並びにヘパリン単独水溶液。経口投与およびＩＤ注射の両方の実験において、ヘパリン：プロテイノイドの重量比は一定であった。経口実験での全ヘパリン投与量は１００ｍｇ／ｋｇ体重で、ＩＤ注射実験では５０ｍｇ／ｋｇであった。プロテイノイド投与量は胃管経口投与では４０ｍｇ／ｋｇで、ＩＤ注射では２０ｍｇ／ｋｇであった。投薬容積は約０．３から０．５ｍｌであった。約０．５ｍｌの血液を各ラットの尾動脈から連続的に、投薬直前（”０”時間）並びに投薬後１、２および３時間で採取した。ヘパリン活性測定のために血液サンプルからの血清を−２０℃に保存した。結果と考察得られた結果は、ヘパリン単独並びに可溶性プロテイノイドとヘパリン（両方共水溶液、経口的またはＩＤ注射により投与）では、ＡＰＴＴ値を上昇させるに十分な量でＧＩ管から吸収されないらしいということを示唆している（図２１）。十二指腸に直接投与したときのみ、ヘパリンクエン酸液は幾分ＡＰＴＴ値上昇させる。ヘパリンプロテイノイド担体は最も高いＡＰＴＴ値を示したが、これは、十二指腸内に直接投与したとき同様、経口的に投薬した場合もヘパリンの吸収を増加させることを示している（図２２および２３）。一方、ヘパリンスパイク空プロテイノイド担体は、ヘパリンプロテイノイド担体で認められた活性よりも低い活性を示したが（図２３）、基準値を越えるＡＰＴＴ上昇を示した。両タイプのプロテイノイド担体は、クエン酸／ヘパリンで認められたＡＰＴＴ値上昇よりもはるかに高いＡＰＴＴ値上昇を示した。本実施例で得られた結果は、実験の範囲内では可溶性プロテイノイドは検出可能な活性を示さなかったので、このプロテイノイド系では、観察されたようなヘパリン吸収の増加にはプロテイノイド担体が必要であることを示唆している。実施例２４：Ｍ１−含有プロテイノイド担体の調製と評価本実施例では、インフルエンザウイルス抗原含有プロテイノイド担体を調製し、ラットで評価した。Ｍ１プロテイノイド担体の調製プロテイノイド担体内へのＭＩの被包化は、実施例１３で述べたのと同じ態様で実施した。Ｍ１蛋白（インフルエンザウイルスの主要内部成分）は、カナダ生物学局、薬物理事会（Drug Directorate，Health Protection Branch，Bureau o f Biologics，Ottawa，Ontario Canada）より寄贈されたブタインフルエンザワクチンを精製して得た。このワクチンは高収量組換え体株Ｘ−５３Ａａで製造された。この株では、そのＨＡおよびＮＡは親株Ａ／ＮＪ／１１／７６（Ｈ１Ｎ１）に由来し、その内部蛋白（Ｍ１を含む）は親株Ａ／ＰＲ／８／３４に由来する（R.B．Coucら、1983、Ann．Rev．Micro-biol.，37:pp529-549；B．R．Murphy 1 982，Infec．Immun.，36:pp1102-1108）。Ｍ１はカンらの記載（Khanら、1982 J ．Clin．Microbiol.，16:pp813-820）にしたがって精製した。Ｍ１プロテイノイド担体は、Glu/Asp/Tyr/Pheプロテイノイドの１００ｍｇ／ｍｌ脱イオン水溶液および１．７Ｎクエン酸と５％アラビアゴム中のＭ１蛋白溶液（ｐＨ２．０）１０ｍｇ／ｍｌの等容量を混合（４０℃で）して調製した。懸濁液中の最終Ｍ１濃度は１．０ｍｇ／ｍｌであった。ＨＡ−ＮＡ含有プロテイノイド担体と非被包化抗原の調製ＨＡ−ＮＡ抗原はギャラガーらの方法にしたがって分離した（Gallagherら、1 984 J．Clin．Microbiol.，20:pp80-93）。インフルエンザウイルス（A/PR8/34）を９００００Ｇで６０分遠心した。ウイルスペレットを７．５％オクチルグルコシドを含む０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ７．０）で可溶化し、同じ条件で再度遠心した。得られた上清は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで決定したところ、約９０％のＨＡと１０％のＮＡを含んでいた。ＨＡ−ＮＡプロテイノイド担体は、Ｍ１をＨＡ−ＮＡで置き換えながら、Ｍ１プロテイノイド担体のためのものと同じプロトコールにしたがって調製した。懸濁物中のＨＡ−ＮＡの最終濃度はまた１．０ｍｇ／ｍｌであった。 ”空”プロテイノイド担体は、Ｍ１／クエン酸／ゴム溶液の代わりに１．７Ｎクエン酸／ゴム溶液を用いる修飾を行いながら、Ｍ１プロテイノイド担体について述べた同じ方法にしたがって調製した。非被包化抗原、Ｍ１およびＨＡ−ＮＡは１．７Ｎクエン酸、１０ｍｇ／ｍｌアラビアゴム中で同じ最終濃度の１ｍｇ／ｍｌに希釈した。実験工程雄のスプラークドーリーラット（体重約３５０ｇ）を本実施例では用いた。経口投薬は胃管で行った。１群がそれぞれ５匹のラットから成る４群（皮下コントロール群は４匹）に以下のように投薬した：１群にはラット当たり１ｍｇのＭ１プロテイノイド担体（１ｍｌ）を経口的に投与した。２群には”空”プロテイノイド担体をラット当たり１ｍｇ経口投与した。３群にはラット当たり”空”担体の非被包化Ｍ１１ｍｇを投与した。３群にはラット当たり１ｍｇの非被包化Ｍ１１ｍｌを投与し、４群にはラット当たり２５μｇのＭ１（０．３ｍｌ）を皮下（ＳＣ）に投与した。血液サンプル（３００μｌ）を、投薬前並びに投薬後１、２、３、および４時間（抗原分析のため）で、さらに投薬後１４、２８および４２日（抗体分析のため）で各ラットの尾の血管から採取した。ＴＲＩＳ（ＳＤＳ無し）中の皮下コントロール−Ｍ１用溶液を１６７μｇ／ｍｌの濃度に希釈した。等量のフロイント完全アジュバント（FCA，シグマ）を加え、混合物を完全に均質化した。混合物中のＭ１の最終濃度は８３．３μｇ／ｍｌであった。皮下投与用ＨＡ−ＮＡ溶液は、ＴＲＩＳ−ＳＤＳ緩衝液の代わりに燐酸緩衝液を用いた点を除き同じ態様で調製した。ＨＡ−ＮＡプロテイノイド担体投与に際しては、以下の修飾を行いながら、同じ免疫および採血スケジュールに従った：全てのラットに最初の経口投与後４２日にＨＡ−ＮＡプロテイノイド担体（２５０ｐｇ／ラット）の経口追加免疫を実施し、この追加免疫投薬後１４日に再び血液サンプルを採取した。サンプルから得た血清を分析まで−２０℃で保存した。抗Ｍ１および抗ＨＡ−ＮＡ特異的ＩｇＧ血清をカーンらの記載したＥＬＩＳＡ法（Khanら、1982，J．Clin．Microbiol.，16:pp813-820）で分析した。結果と考察血漿サンプル中の抗原を測定するための試みは成功しなかった。Ｍ１抗原は、投薬１−４時間後に採取されたラットの血漿サンプル中で、皮下投与群コントロールを含む全ての群において検出できなかった。 ”空”プロテイノイド担体を経口的に投薬したラットの血漿サンプルは、ＥＬＩＳＡ分析では、Ｍ１またはＨＡ−ＮＡ抗原のいずれに対しても顕著な抗体を示さなかった（表８）。予想通り、２５μｇのＭ１またはＨＡ−ＮＡ抗原のいずれか（ＦＣＡとともに）を皮下に投与したラットは、Ｍ１の場合は５４０００−３３００００の範囲、ＨＡ−ＮＡの場合は１７６７５０−９０９０００の範囲の力価で劇的な抗体反応を生じた（表８）。Ｍ１プロテイノイド担体を投与した５匹のラットの３匹から得た血漿はＭ１抗原に対する顕著な一次反応を示した。これら３匹のラットの全ては、非被包化Ｍ１を投与されたラットの全てが＜３０であったことと比較して、投薬後わずか１４日で７６０から２１５０の範囲の力価を示した（表８）。プロテイノイド担体を投与された群の力価は４２日までに１１５０−５２００に増加した（図２４）。非被包化ＨＡ−ＮＡで免疫した６匹のラットのうち４匹は中等度の抗ＨＡ−ＮＡＩｇＧ反応を示し、力価は３４００−１７６７５であったが、一方、ＨＡ− ＮＡプロテイノイド担体を投薬された６匹のラットのうち２匹は顕著な反応を示した（図２５）。しかしながら、反応ラットの力価は、コントロールで得られた力価より少なくとも８倍高かった。経口投薬後４２日で実施したＨＡ−ＮＡプロテイノイド担体の経口的追加免疫後、数匹のラットはより高い力価を示したが、ほとんどは力価に顕著な増加を示さなかった。これらの結果は、Ｍ１プロテイノイド担体の単回投与で投薬後わずか２週間でＭ１に対する顕著なＩｇＧ反応を誘発することができるが、一方、同じ全投与量のＭ１（プロテイノイド無し）では検出可能な抗体反応を生じなかった。同様に、ＨＡ−ＮＡプロテイノイド担体の単回投与でこの実験で用いたラットの３３％に反応を誘発した。この反応は非被包化ＨＡ−ＮＡを投薬したラットより８倍高かった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．ｉ）チロシンおよびフェニルアラニンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーとから製造されるペプチドポリマー、および ii）チロシンおよびフェニルアラニンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーと、リシン、アルギニンおよびオルニチンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第三のモノマーから製造されるペプチドポリマーとから成る群から選ばれるペプチドポリマーを含むプロテイノイドであって、前記プロテイノイドが微小球体またはマイクロカプセルを形成し、さらに選択ｐＨ範囲内で可溶性であるプロテイノイド。２．前記プロテイノイドが約２５０と約２４００の間の範囲の分子量を有する請求の範囲第１項のプロテイノイド。３．前記プロテイノイドが約２５０と約４００の間の範囲の分子量を有する請求の範囲第２項のプロテイノイド。４．前記プロテイノイドが２から２０個のアミノ酸を有する請求の範囲第１項のプロテイノイド。５．前記プロテイノイドが２から８個のアミノ酸を有する請求の範囲第４項のプロテイノイド。６．前記プロテイノイドが酸可溶性プロテイノイドで、前記第二のモノマーがグルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれ、さらに、前記第三のモノマーがリシン、アルギニンおよびオルニチンから成る群から選ばれる、請求の範囲第１項のプロテイノイド。７．前記プロテイノイドが塩基可溶性プロテイノイドで、前記第二のモノマーがグルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる請求の範囲第１項のプロテイノイド。８．ｉ）チロシンおよびフェニルアラニンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーとから製造されるペプチドポリマー；および ii）チロシンおよびフェニルアラニンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーと、リシン、アルギニンおよびオルニチンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第三のモノマーとから製造されるペプチドポリマーを含むプロテイノイドを含むプロテイノイド担体であって、前記プロテイノイドが微小球体またはマイクロカプセルを形成し、さらに選択ｐＨ範囲内で可溶性であるプロテイノイド担体。９．前記プロテイノイド担体がプロテイノイド微小球体を含む請求の範囲第８項のプロテイノイド担体。 10．前記プロテイノイド担体がプロテイノイドマイクロカプセルを含む請求の範囲第８項のプロテイノイド担体。 11．前記プロテイノイドが酸可溶性プロテイノイドで、前記第二のモノマーがグルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれ、さらに、前記第二のモノマーがリシン、アルギニンおよびオルニチンから成る群から選ばれる、請求の範囲第８項のプロテイノイド担体。 12．前記プロテイノイドが塩基可溶性プロテイノイドで、前記第二のモノマーがグルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる請求の範囲第８項のプロテイノイド担体。 13．前記プロテイノイド担体が１０ミクロンに等しいか、またはそれ未満の直径を有する請求の範囲第８項のプロテイノイド担体。 14．さらに含有物を被包化している請求の範囲第８項のプロテイノイド担体。 15．前記含有物が香料、化粧剤、色素および水溶性ビタミンを含む請求の範囲第１４項のプロテイノイド担体。 16．前記含有物が生物学的に活性な薬剤である請求の範囲第１４項のプロテイノイド担体。 17．前記生物学的に活性な薬剤が抗原、モノクローナル抗体、カルシトニン、エリトロポエチン、アルファインターフェロン、ヘパリン、インシュリン、成長ホルモン、心房性ナチュレチック因子、第ＩＸ因子またはインターロイキン−ＩＩを含む請求の範囲第１６項プロテイノイド担体。 18．プロテイノイド微小球体またはマイクロカプセル内に被包された生物学的に活性な薬剤を含む組成物であって、前記微小球体またはマイクロカプセルが、ｉ）チロシンおよびフェニルアラニンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーとから製造されるペプチドポリマー；および ii）チロシンおよびフェニルアラニンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第一のモノマーと、グルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる少なくとも１個の第二のモノマーと、リシン、アルギニンおよびオルニチンから成る群から選ばれる少なくとも１個の第三のモノマーとから製造されるペプチドポリマーを含むプロテイノイドを含み、さらに、前記プロテイノイドが微小球体またはマイクロカプセルを形成し、かつ選択ｐＨ範囲内で可溶性である組成物。 19．前記プロテイノイドが酸可溶性プロテイノイドで、前記第二のモノマーがリシン、アルギニン、及びオルニチンから成る群から選ばれる請求の範囲第１８項に記載の組成物。 20．前記プロテイノイドが塩基可溶性プロテイノイドで、前記第二のモノマーがグルタミン酸、ピログルタミン酸、グルタミンおよびアスパラギン酸から成る群から選ばれる請求の範囲第１８に記載の項組成物。 21．前記生物学的に活性な薬剤が抗原、モノクローナル抗体、カルシトニン、エリトロポエチン、アルファーインターフェロン、ヘパリン、インシュリン、成長ホルモン、心房性ナチュレチック因子、第ＩＸ因子またはインターロイキン−II を含む請求の範囲第１８項に記載の組成物。 22．前記生物学的に活性な薬剤が、少くとも一つの蛋白質を含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 23．前記蛋白質がエリトロポエチンを含む、請求の範囲第２２項に記載の組成物。 24．前記蛋白質がアルファーインターフェロンを含む、請求の範囲第２２項に記載の組成物。 25．前記蛋白質がカルシトニンを含む、請求の範囲第２２項に記載の組成物。 26．前記蛋白質がインシュリンを含む、請求の範囲第２２項に記載の組成物。 27．前記蛋白質が心房性ナチュレティック因子（atrial naturetic factor）を含む、請求の範囲第２２項に記載の組成物。 28．前記蛋白質がインターロイキン−IIを含む、請求の範囲第２２項に記載の組成物。 29．前記蛋白質がＭ−蛋白質を含む、請求の範囲第２２項に記載の組成物。 30．前記蛋白質がヒト成長ホルモンを含む、請求の範囲第２２項に記載の組成物。 31．前記蛋白質が牛成長ホルモンを含む、請求の範囲第２２項に記載の組成物。 32．前記生物学的に活性な薬剤が、少くとも一つの多糖類を含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 33．前記多糖類がヘパリンを含む、請求の範囲第３２項に記載の組成物。 34．前記生物学的に活性な薬剤が抗原を含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 35．前記生物学的に活性な薬剤がアスピリンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 36．前記生物学的に活性な薬剤がキノロンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 37．前記生物学的に活性な薬剤が抗菌剤を含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 38．前記モノクローナル抗体がネズミＩｇＧである、請求の範囲第１７項に記載の組成物。 39．前記生物学的に活性な薬剤が第ＩＸ因子である、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 40．前記生物学的に活性な薬剤が抗体である、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 41．（Ａ）請求の範囲第１６項に記載の薬理学的組成物と、（Ｂ）（ａ）賦形剤、（ｂ）希釈剤、（ｃ）崩壊剤、（ｄ）滑沢剤、（ｅ）可塑剤、（ｆ）着色料、（ｇ）投与ビヒクル、又は（ｈ）その組合せを含む、投与ユニット形態。 42．タブレット、カプセル、又は液体を含む、請求の範囲第４１項に記載の投与ユニット形態。 43．前記投与ビヒクルが、水、１、２−プロパンジオール、エタノール、又はその組合せからなる群より選択される、請求の範囲第４１項に記載の投与ユニット形態。 44．前記生物学的に活性な薬剤がインターロイキン−１を含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 45．前記生物学的に活性な薬剤が低分子量ヘパリンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 46．前記生物学的に活性な薬剤がソマトスタチンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 47．前記生物学的に活性な薬剤がアドレノコルチコトロピンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 48．前記生物学的に活性な薬剤がゴナドトロピン放出ホルモンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 49．前記生物学的に活性な薬剤がオキシトシンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 50．前記生物学的に活性な薬剤がバソプレッシンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 51．前記生物学的に活性な薬剤がクロモリンナトリウムを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 52．前記生物学的に活性な薬剤がバンコマイシンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 53．前記生物学的に活性な薬剤がデフェロキサミンを含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。 54．前記生物学的に活性な薬剤が殺虫剤を含む、請求の範囲第１６項に記載の組成物。