JPH08503969A - 増殖因子と組織形成抑制剤を含有する組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 水晶体上皮細胞増殖剌激物質（例えば、ＴＧＦ＝β）と代謝拮抗物質（例えば、マイトマイシンＣ）の組合せの眼内使用が記載される。この組合せは、白内障手術後の続発性（二次性）白内障の形成を防止または遅延させるために、カプセルバッグに投与される。水晶体上皮細胞刺激物質は、休眠中の水晶体上皮細胞でのＤＮＡ合成を活性化し、それによりこれらの細胞を代謝拮抗物質に感受性にする。これにより、代謝物質を単独で使用した時に観察される増殖に比べて、代謝拮抗物質は水晶体上皮細胞の増殖をはるかに大きく抑制する。水晶体上皮細胞の増殖の抑制の増加は、水晶体カプセルの白濁（すなわち、続発性白内障）の形成を防止または遅延する能力の著しい改良をもたらす。

Description

【発明の詳細な説明】 増殖因子と組織形成抑制剤を含有する組成物発明の背景 ： 本発明は眼科学の分野に関する。さらに詳しくは、本発明は、白内障手術の分 野に関し、この手術はヒトの眼の本来の水晶体を外科的に除去して人工水晶体を 移植するものである。 現代の白内障手術は、典型的には、「眼内水晶体」または「ＩＯＬ」と呼ばれ る人工水晶体の、眼の後眼房への移植を含む。移植の好ましい部位は、本来の水 晶体を取り囲むカプセル内である。本来の水晶体を外科的に除去すると、水晶体 カプセルの前面の一部も除去される。これにより、水晶体カプセルの残りの部分 内に人工水晶体を据え付ける空きまができ、これはまた「カプセルバッグ」と呼 ばれる。このカプセルバッグは、眼内水晶体の移植に理想的な位置と考えられる 。残念ながら、カプセルバッグへの眼内水晶体の移植に関しては、大きな問題が ある。 カプセルバッグは、普通は、眼の外科医によって、水晶体上皮細胞と他の組織 の残存物を除去するために、清浄されるかまたは「磨かれ」る。これにより、水 晶体カプセルの沈殿物が患者の視力を障害しないことが保証される。しかし、一 般には外科医が、特にカプセルバッグの外周辺視野計内の全ての水晶体上皮細胞 を除去することは不可能である。結局残った水晶体上皮細胞は、患者の視力に障 害をおこす白濁をもたらすかもしれない。このような障害は、「続発性（二次性 ）白内障」と呼ばれる。続発性白内障の形成は、さらに医療治療（例えば、白濁 を解体するためのＹＡＧレーザーの使用や、再度の手術）を必要とする。 過去には、代謝拮抗物質（例えば、５’−フルオロウラシルまたはマイトマイ シンＣ）の使用が続発性白内障形成を防止する方法として示唆されてきた。代謝 拮抗物質は活性な水晶体上皮細胞の生長と増殖を防止することができるが、この アプローチは有効であることが証明されていない。水晶体上皮細胞増殖を防止す る代謝拮抗物質の有効性は、これらの薬剤が活発に分裂している細胞のみを標的 とするという事実により大きく限定される。代謝拮抗物質は普通手術時に単独用 量で水晶体カプセルに投与されるため、これらの薬剤で、手術時に休眠中（すな わち、活発に分裂していない）の水晶体上皮細胞のその後の増殖を防止するのは 不可能である。従って、著しく多数の水晶体上皮細胞は、代謝拮抗物質の作用を 回避し、後で増殖する。この水晶体上皮細胞増殖は、最終的には水晶体の白濁ま たは続発性白内障の形成に寄与する。 このように、続発性白内障の形成を防止または遅延させる改良された方法が必 要とされている。本発明は、この必要を満たすことに関する。発明の要約 ： 本発明は、続発性白内障形成を防止または遅延させる改良された方法を与える 。この方法は、１つ以上の水晶体上皮細胞増殖剌激物質と代謝拮抗物質の組合せ を含有する組成物を、手術時に水晶体カプセルに投与することに基づく。種々の 水晶体上皮細胞増殖剌激物質またはその組合せがこの目的のために使用されるが 、最も好ましいアプローチは、トランスフォーミング・グロース・ファクター− べータ（「ＴＧＦ−β」）を含む組合せを使用することである。この組成物の水 晶体上皮細胞刺激物質成分は、手術時に休眠中の水晶体上皮細胞を刺激し、これ らの細胞にＤＮＡ合成を開始させる。水晶体上皮細胞のこの細胞分裂促進的活性 化は、組成物の代謝拮抗物質成分の作用に対してのこれらの感受性を増強する。 上述の方法は、代謝拮抗物質単独で得られるものに比べて、はるかに大きな水 晶体上皮細胞増殖の抑制をもたらす。その結果本方法は、続発性白内障の形成を 防止または遅延させる能力の著しい改良を与える。図面の簡単な説明 ： 図面の唯一の図である図１は、実施例１で検討されるデータの棒グラフ表示で ある。好適な実施態様の説明 ： 本発明に使用される水晶体上皮細胞剌激物質は、ＤＮＡ合成の開始を剌激する ことにより休眠中の水晶体上皮細胞を活性化する全ての物質を含む。このような 物質を、本明細書ではまとめて「水晶体上皮細胞増殖刺激物質」と呼ぶ。ＴＧＦ −βの種々のアイソフォーム、およびその修飾物を含む混合物の使用が好ましい 。 ＴＧＦ−βには、５つの公知のアイソフォームがある。これらの型は、ＴＧＦ −β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃、ＴＧＦ−β₄およびＴＧＦ−β₅と呼ばれ、 最初の３つはヒトに共通である。これらの増殖因子の物理的特性、その起源、お よび精製方法は、公知である。例えば、合衆国特許５，１０８，９８９号（アメ ント（Ａｍｅｎｔｏ）ら；ジェネンテク社（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）） およびその第１段落の２１−４５行目に引用された参照文献を参照されたし。Ｔ ＧＦ−βの種々の型に関するこの特許の全内容は、参考のため本明細書中に取り 込まれる。本明細書で使用される「ＴＧＦ−β」という用語は、水晶体上皮細胞 剌激活性を有する、１つ以上のポリペプチド（例えば、完全なおよび前駆体型の ＴＧＦ−β₁、ＴＧＦ−β₂、ＴＧＦ−β₃、ＴＧＦ−β₄およびＴＧＦ−β₅；ハ イブリッドＴＧＦ−β；潜伏性のＴＧＦ−β複合体；ＴＧＦ−β類似体（例えば 、欠失変異体とハイブリッド）；および合衆国特許５，０６１，７８６号（バー ニアー（Ｂｕｒｎｉｅｒ）ら、ジェネンテク社）のようなトランスフォーミング ・グロース・ファクター−ベータの配列に基づく生理活性ポリペプチド）を包含 する。 本発明に使用される水晶体上皮細胞増殖剌激物質はまた、トランスフォーミン グ・グロース・ファクター−アルファ（ＴＧＦ−α）、ケラチン生成細胞増殖因 子（ＫＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ 、−ＡＡ、または−ＡＢ）、塩基性繊維芽細胞増殖因子（「ｂ−ＦＧＦ」）、酸 性繊維芽細胞増殖因子（ａ−ＦＧＦ）、アンギオゲニン、神経増殖因子（ＮＧＦ ）、インシュリン様増殖因子ＩとII（ＩＧＦ−ＩとＩＧＦ−II）、および水晶体 上皮細胞に関して細胞分裂促進的活性を有する他のタンパクまたはポリペプチド を含む。本明細書では「ポリペプチド」という用語は、全長の天然ポリペプチド または生物学的に活性なその断片に比較して、欠失、置換または改変したアミノ 酸配列を有するポリペプチドを含む、天然、合成および組み換えポリペプチドを 包含する。 本発明に使用される水晶体上皮細胞増殖剌激物質は、好ましくはヒト由来であ る。本明細書では「ヒト由来」という用語は、ヒト組織から回収した物質と組み 換えＤＮＡ技術によりヒト細胞株から産生した物質の両方を包含する。 本発明の最も好ましい水晶体上皮細胞増殖剌激物質は、ＥＧＦ、ｂ−ＦＧＦ、 ＴＧＦ−αおよびＰＤＧＦ−ＢＢとの組合せで、ＴＧＦ−βを含む混合物である 。 本発明で使用される組成物は、休眠中の水晶体上皮細胞を細胞分裂促進的に活 性化するのに十分な量の、１つ以上の上述の水晶体上皮細胞剌激物質を含有する 。この目的に必要な水晶体上皮細胞剌激物質の量は、使用される特定の物質に依 存して変化するが、一般に約０．０１から約１０，０００ナノグラム／ミリリッ トル（「ｎｇ／ｍｌ」）である。 本発明に使用される組成物はまた、水晶体上皮細胞の増殖を抑制する１つ以上 の代謝拮抗物質を含む。この目的のために種々の代謝拮抗物質が使用される。使 用される代謝拮抗物質は一般に、プリン、ピリミジンおよび葉酸のような代謝活 性分子の構造類似体として特徴付けられる。これらの化合物は、正常なＤＮＡ／ ＲＮＡ合成を妨害して、それにより細胞増殖を終結させる。この作用の正味の効 果は、細胞分裂活性を低下させて、水晶体上皮細胞の増殖を障害することである 。本発明で使用される代謝拮抗物質の例は、マイトマイシンＣ、５’−フルオロ ウラシル、アラビノシトシン、タキソール、アクチノマイシンＣ、およびメトト レキサートを含む。他の代謝拮抗物質（例えば５’−フルオロウラシル）に比べ て角膜上皮細胞に対して比較的毒性が弱いため、本発明の代謝拮抗物質成分とし てマイトマイシンＣの使用が好ましい。 本発明に使用される組成物は、水晶体上皮細胞の増殖を抑制するのに十分な量 の１つ以上の上述の代謝拮抗物質を含有する。この目的のために要する代謝拮抗 物質の量は、選択される特定の代謝拮抗物質に依存して変化するが、一般に約０ ．０１から約５００マイクログラム／ミリリットル（「ｍｃｇ／ｍｌ」）である 。 水晶体上皮細胞剌激物質と代謝拮抗物質の上述の組合せは、眼内投与に適切な 種々の薬剤担体に含まれてよい。担体は、好ましくは水性であり、そして眼組織 と化学的および物理的に融和性を有するように処方される。例えば、眼内手術方 法に関連して現在使用されている粘性と弾性を合わせ持つ処方（例えば、ヘアロ ン（Ｈｅａｌｏｎ）（登録商標）（ファルマシア社）またはビスコート（Ｖｉｓ ｃｏａｔ）（登録商標）（アルコン・サージカル社（Ａｌｃｏｎ Ｓｕｒｇｉｃ ａｌ，Ｉｎｃ．））が、上述の増殖因子と代謝拮抗物質の組合せの 担体として使用される。このような粘性の処方は凝集性であり組織に接着しやす い。これらの性質は、本発明の増殖因子／代謝拮抗物質組合せの作用への、水晶 体上皮細胞を暴露を確実にする。これは、本来の水晶体の除去後に組成物を投与 する時、その時点ではカプセルバッグが少なくとも部分的に開いており、そのた め潅注によりバッグの内面に投与される液体をすぐに消失しやすいため、特に真 実である。従って、粘性溶液または半固体組成物の使用は、ある場合には好まし い。 本来の水晶体の除去の前にカプセルバッグに増殖因子／代謝拮抗物質組合せを 注入するような他の場合には、カプセルバッグからの組成物の漏洩はあまり重大 な問題ではないため、組成物の粘性は第一の関心事ではない。従ってこのような 場合には、増殖因子／代謝拮抗物質組合せのための担体としての水溶液の使用が 好ましい。使用される水溶液は、眼内組織と融和性でなければならず、好ましく は手術過程で眼内組織の形態と機能を維持する助けとなるべきである。上述の目 的に使用される水溶液は、平衡化生理食塩水（例えば、ＢＳＳ（登録商標）平衡 化塩溶液（Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、重炭酸、デキス トロースおよびグルタチオンで強化したＢＳＳプラス（ＢＳＳ Ｐｌｕｓ）（登 録商標）平衡化塩溶液（Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｅｎ ｒｉｃｈｅｄ ｗｉｔｈ Ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ， Ｄｅｘｔｒｏｓｅ ａｎ ｄ Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ）（この両者ともテキサス州、フォート・ワース、 アルコン・サージカル社（Ａｌｃｏｎ Ｓｕｒｇｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）から入手 できる）、およびビオン・ティアーズ（Ｂｉｏｎ Ｔｅａｒｓ）（商標）（テキ サス州、フォート・ワース、アルコン・ラボラトリーズ社（Ａｌｃｏｎ Ｌａｂ ｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）から入手できる））を含む。 当業者には認識されるように、上述の組成物は無菌でなければならず、敏感な 眼内組織、特に角膜上皮細胞に毒性を有するいかなる物質（例えば、抗菌性の保 存剤）も含むべきでない。上述の組成物は、当業者に公知の技術により処方され る。以下の刊行物は、ＴＧＦ−βのようなポリペプチドを含有する組成物の処方 に関してさらに詳細に記載している：合衆国特許４，７１７，７１７号（フィン ケナウア（Ｆｉｎｋｅｎａｕｒ）；エチコン社（Ｅｔｈｉｃｏｎ，Ｉｎｃ．）； 合衆国特許４，９６２，０９１号（エプスタイン（Ｅｐｐｓｔｅｉｎ）ら；シン テックス（Ｕ．Ｓ．Ａ．）社）；およびＷＯ ９２／１５６１４号（タクルリ（ Ｔａｋｒｕｒｉ）；カイロン・オフタルミックス社（Ｃｈｉｒｏｎ Ｏｐｈｔｈ ａｌｍｉｃｓ，Ｉｎｃ．）；および前記特許公報に引用されている参照文献。 上述の組成物は、種々の技術により水晶体カプセルに投与される。例えば、こ の組成物は、水晶体の除去後にシリンジによりカプセルバッグの内側に投与され るか、あるいは、水晶体超音波吸引術または他の方法により水晶体の除去の前に カプセル水晶体中に注入される。この組成物の投与方法についての唯一決定的な 条件は、この組成物が水晶体カプセル全体に分布され、水晶体上皮細胞の細胞分 裂促進的活性化に十分な長さの時間、休眠中のこれらの細胞と接触を保つことで ある。この目的を達成するために要する時間は、使用される特定の水晶体上皮細 胞剌激物質と代謝拮抗物質や、この水晶体上皮細胞剌激物質／代謝拮抗物質組合 せがカプセルバッグに投与される方法（すなわち、水晶体超音波吸引術の前の注 入または白内障除去後の潅注）のような情況に依存して多少変化する。しかし、 一般にこの組成物は、約５から１０分間またはそれ以上、カプセルバッグの内側 と接触を保つ必要がある。上述の組成物は、従来法の灌注と吸引により除去され てよい。 以下の実施例は、水晶体上皮細胞に及ぼす、上述の水晶体上皮細胞剌激物質と 代謝拮抗物質の効果を説明するために与えられる。 実施例１ 培養したウサギ水晶体上皮細胞の細胞分裂促進能力に及ぼす、特定の代謝拮抗 物質であるマイトマイシンＣの効果を試験するために検討が行われた。この実験 のために、標準的なインビトロの細胞分裂促進測定法を行った。継代数６と１３ の間の、正常なウサギ水晶体上皮細胞（コリエル・インスティテュート・フォー ・メディカル・リサーチ・セル・レポジトリー（Ｃｏｒｉｅｌｌ Ｉｎｓｔｉｔ ｕｔｅ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｓｉ ｔｏｒｙ）から得た名称ＡＧ０４６７６）を９６ウェルの組織培養プレートに播 種した。この細胞は、約８０％コンフルエントになるまで、３から ４日毎に、１０％正常ウサギ血清、２ｍＭの１−グルタチオン、および０．０５ ｍｇ／ｍｌのゲンタマイシンを補充したアールの塩（Ｅａｒｌｅ’ｓｓａｌｔｓ ）を含む新鮮なＭＥＭイーグル培地を与えられた。細胞がそれらの最大細胞分裂 促進能力を有することを確信するために、この実験は最後の培地置換の３から５ 日後に開始した。 無血清培地に処方された試験化合物（増殖因子混合物と代謝拮抗物質）を、３ 重測定でウェル中の細胞に１０分間暴露した。次に試験物質は、細胞から吸引し て、無血清培地に置き換えられた。１８時間インキュベーション後、トリチウム 化チミジンを細胞に６時間暴露した。次にトリクロロ酢酸と一緒にＤＮＡを沈殿 させて；ＤＮＡに取り込まれなかったチミジンを洗浄により除去し、そして標識 されたＤＮＡをドデシル硫酸ナトリウムで可溶化した。活発に分裂している細胞 のＤＮＡに取り込まれたトリチウム化チミジンは、ベータ・シンチレーション・ カウンターを使用して定量して、３重測定の平均と標準偏差を計算した。 この特定の検討で増殖因子の混合物を使用した時に、これらの細胞の細胞分裂 促進性を最も大きく刺激した。この混合物は、３０ｎｇ／ｍｌの上皮増殖因子と 、各々２０ｎｇ／ｍｌの血小板由来増殖因子（−ＢＢホモダイマー）、塩基性繊 維芽細胞増殖因子、およびトランスフォーミング・グロース・ファクター−アル ファよりなる。図１に示されるように、２０ｎｇ／ｍｌのトランスフォーミング ・グロース・ファクター−ベータの添加により、増殖因子混合物の刺激活性は著 しく上昇した。増殖因子混合物の存在下で、マイトマイシンＣを種々の濃度で細 胞に添加した。 図１に示される結果は、増殖因子混合物に暴露された細胞は、対照群（すなわ ち、未剌激の）細胞と比較すると、ＤＮＡをより活発に合成した。さらに、ＴＧ Ｆ−β，自体は細胞増殖にほとんどまたは全く影響をもたない；しかし増殖因子 混合物に添加されると、ＴＧＦ−β、はＤＮＡ合成剌激作用を増強する。ＴＧＦ −β，を含む細胞分裂促進性混合物が、水晶体上皮細胞ＤＮＡ合成を最大に刺激 した。この刺激効果は、２．５ｕｇ／ｍｌを超える濃度のマイトマイシンＣ（Ｍ ＩＴ Ｃ）により有効に阻害された（阻害＝７５．５％）。増殖因子混合物とマ イトマイシンＣが１０分間のみ細胞に暴露されたということに注意するこ とが重要である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/535 9454−4Ｃ (72)発明者 ニクソン，ジョン シー. アメリカ合衆国 76115―0172 テキサス 州フォート ワース，ピー．オー．ボック ス 60172 (72)発明者 サムズ，カレン シー. アメリカ合衆国 76017 テキサス州アー リントン，メドウデール ロード 803

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． カプセル外白内障手術後の続発性（二次性）白内障の形成を低下させる 眼用薬剤組成物であって、ＤＮＡ合成の開始を剌激することにより水晶体上皮細 胞を活性化するのに十分な量の水晶体上皮細胞増殖剌激物質；水晶体上皮細胞の 増殖を抑制するのに十分な量の代謝拮抗物質；および薬剤として許容されるその 担体よりなる、上記組成物。 ２． 水晶体上皮細胞増殖剌激物質は増殖因子よりなる、請求項１に記載の組 成物。 ３． 増殖因子はヒト由来である、請求項２に記載の組成物。 ４． 水晶体上皮細胞増殖剌激物質はＴＧＦ−βよりなる、請求項１に記載の 組成物。 ５． 水晶体上皮細胞増殖剌激物質は、ＴＧＦ−βを含む増殖因子の混合物よ りなる、請求項１に記載の組成物。 ６． 混合物はＴＧＦ−β₁よりなる、請求項５に記載の組成物。 ７． 混合物は、ＥＧＦ、ｂ−ＦＧＦ、ＴＧＦ−αおよびＰＤＧＦ−ＢＢと組 合せたＴＧＦ−β₁よりなる、請求項６に記載の組成物。 ８． 代謝拮抗物質は、マイトマイシンＣ、５’−フルオロウラシル、アラビ ノシトシン、タキソール、アクチノマイシンＣ、およびメトトレキサートよりな る群から選択される、請求項１に記載の組成物。 ９． 代謝拮抗物質はマイトマイシンＣよりなる、請求項８に記載の組成物。 １０． 組成物は、０．０１から１０，０００ｎｇ／ｍｌの水晶体上皮細胞増 殖剌激物質と、０．０１から５００ｍｃｇ／ｍｌの代謝拮抗物質よりなる、請求 項１に記載の組成物。 １１． 治療的に有効量の組成物を手術時に手術部位に投与することにより、 カプセル外白内障手術後の続発性白内障の形成を低下させるための、眼用薬剤組 成物の使用であって、この組成物が、ＤＮＡ合成の開始を剌激することにより水 晶体上皮細胞を活性化するのに十分な量の水晶体上皮細胞増殖剌激物質；水晶体 上皮細胞の増殖を抑制するのに十分な量の代謝拮抗物質；および薬剤として許容 されるその担体よりなる、上記使用。