JPH08503957A

JPH08503957A - シクロブチルアンチセンスオリゴヌクレオチド、その作成および使用方法

Info

Publication number: JPH08503957A
Application number: JP6518919A
Authority: JP
Inventors: クック，フィリップ・ダン; バスチャン，ゲルハルド
Original assignee: Isis Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1993-02-19
Filing date: 1993-02-19
Publication date: 1996-04-30
Also published as: EP0689460A1; EP0689460A4; AU3729493A; WO1994019023A1

Abstract

(57)【要約】連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分を含むオリゴヌクレオチド代用物が製造され、アンチセンス、診断および研究用試薬として用いられる。オリゴヌクレオチド代用物およびその中間体の合成および使用方法が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】シクロブチルアンチセンスオリゴヌクレオチド、その作成および使用方法発明の分野本発明は、オリゴヌクレオチド代用化合物およびそれらの中間体、ならびにその設計、合成、および使用に関する。より具体的には本発明は、複素環式塩基が結合している連結化シクロブチル環を含むオリゴヌクレオチド代用化合物に関する。このようなオリゴヌクレオチド代用物は、治療、診断に、そして研究用試薬として有用である。発明の背景ほとんどの疾患状態を含む哺乳類における体の状態の大半のものは、蛋白質により影響を受けることが良く知られている。このような蛋白質は直接か、もしくはそれらの酵素機能を介するかのいずれかにより作用するが、これらの蛋白質は動物およびヒトにおける多くの疾患に大きな率で寄与している。古典的治療法は一般的にそれらの蛋白質の疾患原因機能もしくは疾増強機能を調節する試みにおいて、そのような蛋白質との相互作用に焦点を当てていた。しかしながら、最近、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）もしくは蛋白質合成を指令する他の細胞内ＲＮＡとの相互作用による、このような蛋白質の実際の産生を調節する試みがなされている。望ましくない蛋白質の形成を誘導する遺伝子発現を妨害するか、さもなければ調節することが、このような治療研究法の一般的な目的である。アンチセンス法は、比較的短いオリゴヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡもしくは一本鎖ＤＮＡへの相補的ハイブリダイゼーションであり、その結果これらの細胞内核酸の正常で必須の機能が破壊される。ハイブリダイゼーションは、ＲＮＡもしくはＤＮＡに対するオリゴヌクレオチドの複素環式塩基のワトソン−クリック（Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ）の塩基対を介する配列特異的水素結合形成である。このような塩基対は互いに相補的であると言われる。Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ＣＲＣＰｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、ＢｏｃａＲａｔｏｎ、Ｆ１（１９８９）にＣｏｈｅｎにより論議される、核酸機能の破壊を提供する天然に存在する現象には、２つの種類があると考えられている。最初のものはハイブリダイゼーション拘束（ａｒｒｅｓｔ）である。これは停止現象を意味しており、ここでは、あるオリゴヌクレオチド阻害剤が標的核酸に結合し、そしてそのため単純な立体障害により、リボソームであることが最も多い必須蛋白質の核酸への結合が妨害される。メチルホスホネートオリゴヌクレオチド：Ｍｉｌｌｅｒ，Ｐ．Ｓ．およびＴｓ’Ｏ，Ｐ．Ｏ．Ｐ（１９８７）Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ、２：１１７−１２８、および α−アノマーオリゴヌクレオチドが最も広範囲に研究されている２つのアンチセンス試薬であり、これらはハイブリダイゼーション拘束により核酸機能を破壊すると考えられている。オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション拘束の程度を決定する際に、相補的核酸に結合するオリゴヌクレオチドの相対的な能力を、ある特定のハイブリダイゼーション複合体の融解温度を決定することにより比較することができる。二重らせんの特徴的な物理学的特性である融解温度（Ｔ_m）は、コイル形態（非ハイブリダイゼーション）に対して５０％のヘリックス形態が存在する摂氏での温度を意味する。ＵＶスペクトルを用いることにより、Ｔ_mを測定してハイブリダイゼーションの形成および分解（融解）を決定する。ハイブリダイゼーション中に生じる塩基スタッキングにはＵＶ吸収の減少（淡色性）が伴う。その結果、ＵＶ吸収の減少はより高いＴ_mを意味する。Ｔ_mが高くなればなる程、それらの鎖の結合の強度も強くなる。非ワトソン−クリックの塩基対形成はＴ_mについての強力な脱安定化効果を有する。アンチセンスオリゴヌクレオチドについての第二の種類の停止現象は、細胞内のＲＮアーゼＨによる標的化ＲＮＡの酵素的開裂を伴う。２’−デオキシリボフラノシルオリゴヌクレオチドは標的とされるＲＮＡとハイブリダイズし、そしてこの二重らせんはそのＲＮアーゼＨ酵素を活性化させてそのＲＮＡ鎖を開裂し、従ってＲＮＡの正常機能を破壊する。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、この種のアンチセンス停止現象により作動するアンチセンス剤の最も有望な例である。多くの研究が、診断、研究用試薬、および強力な治療目的のためのアンチセンス剤としてのオリゴヌクレオチドの適用に向けられている。この研究には様々な修飾を有するオリゴヌクレオチドの合成が含まれる。このような修飾は最初には、オリゴヌクレオチドの個々のヌクレオシドを連結させるリン酸結合の修飾であった。様々なホスホロチオエート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、およびアルキルホスホネートが報告されている。更なる研究が、カルバメート、スルホネート、シロキサン、およびホルムアセタール基等の他の部分でヌクレオシド間ホスフェートを置換することに向けられている。コンジュゲート基を連結用の基を介してオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合させる他の修飾も行われている。このようなコンジュゲートには、蛍光染料、インターカレーター、蛋白質、架橋剤、鎖開裂剤、ならびにビオチンおよびコレステロールを初めとする他の基が含まれる。これらの修飾の全てを論述する広範囲な総説は、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ、Ｊ．（１９９０）ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、１：１６５、の総説である。アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドの複素環式塩基は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドの標的ＲＮＡもしくはＤＮＡに対する適切なワトソン−クリック結合形成に必須であるため、架橋剤を例外として、この複素環式塩基上の修飾に関してはほとんど報告がなされていない。「アルファ」ヌクレオシドを用いて「アルファ」糖が内部に取り込まれているオリゴヌクレオチドが形成されている。同様の様式で、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドも、オリゴヌクレオチド用の前駆体構築用ブロックとして用いられている。米国特許第５，０３４，５０６号およびＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ８６／００５４４号は、ヌクレオシドの糖部分を酸化を介して開環させ、次に隣接するヌクレオシド上のアミノもしくはヒドラジン基との反応により閉環させうることが示唆されている。これはヌクレオシドを連結させる。その上、アミノもしくはヒドラジン基での閉環の際に、新規の環、すなわちモルホリン環が、そのヌクレオシドの酸化ペントフラノース糖環の残基から形成される。ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／００５４４号にはまた、アミノ酸を基にする直線ポリマーを糖−ホスフェート主鎖の代わりに用いて、オリゴヌクレオチド様連結により複素環式塩基どうしを連結させうることも示唆されている。これらの修飾を別にすると、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドの糖部分の修飾もまたほとんど知られていない。オリゴヌクレオチドの修飾についての更に別の研究法では、糖部分およびホスフェートリンカーの両方が除去され、ポリマー性の主鎖で置換されている。この研究法を用いて、複素環式塩基が、ポリ（Ｎ−ビニル）、ポリ（メタクリルオキシエチル）、ポリ（メタクリルアミド）、ポリ（エチルエネイミン）、およびポリ（リシン）を初めとする様々なポリマーにつながれている。これらのタイプの化合物は、一般的に標的ＲＮＡもしくはＤＮＡとの適切なハイブリダイゼーションのための複素環式塩基の空間配向が不適切なものになってしまう。このようなポリマー性化合物、ならびに既出の「アルファ」糖含有オリゴヌクレオチドおよび２’−メチルリボヌクレオチドの総説は、Ｕｈｌｍａｎｎ，ＥおよびＰｅｙｍａｎ，Ａ．、（１９９０）ＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ、９０：５４３、に見いだされる。最近、オキセタノシン（ｏｘｅｔａｎｏｃｉｎ）およびその特定の炭素環式類似体が抗ウイルス性化学療法剤として研究されている。これらの化合物はヌクレオシドの糖部分の代わりにオキセタンもしくはシクロブタン環を取り込んでいる。シクロブット−Ａ（Ｃｙｃｌｏｂｕｔ−Ａ）、すなわち（±）−９−［（１β ，２α，３β）−２，３−ビス−（ヒドロキシメチル）−１−シクロブチル］アデニン、およびシクロブット−Ｇ（Ｃｙｃｌｏｂｕｔ−Ｇ）、すなわち（±）− ９−［（１β，２α，３β）−２，３−ビス−（ヒドロキシメチル）−１−シクロブチル］−グアニンが、Ｎｏｒｂｅｃｋ，Ｄ．Ｗ．、Ｋｅｒｎ，Ｅ．、Ｈａｙａｓｈｉ，Ｓ．、Ｒｏｓｅｎｂｒｏｏｋ，Ｗ．、Ｓｈａｍ，Ｈ．、Ｈｅｒｒｉｎ，Ｔ．、Ｐｌａｔｔｎｅｒ，Ｊ．Ｊ．、Ｅｒｉｃｋｓｏｎ，Ｊ．、Ｃｌｅｍｅｎｔ，Ｊ．、Ｓｗａｎｓｏｎ，Ｒ．、Ｓｈｉｐｋｏｗｉｔｚ，Ｎ．、Ｈａｒｄｙ，Ｄ．、Ｍａｒｓｈ，Ｋ．、Ａｒｎｅｔｔ，Ｇ．、Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｗ．、Ｂｒｏｄｅｒ，Ｓ．、およびＭｉｔｓｕｙａ，Ｈ．（１９９０）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３３：１２８１、により報告されている。これらの化合物の更に別の抗ウイルス性活性が、Ｈａｙａｓｈｉ，Ｓ．、Ｎｏｒｂｅｃｋ，Ｄ．Ｗ．、Ｒｏｓｅｎｂｒｏｏｋ，Ｗ．、Ｆｉｎｅ，Ｒ．Ｌ．、Ｍａｔｓｕｋｕｒａ，Ｍ．、Ｐｌａｔｔｎｅｒ，Ｊ．Ｊ．、Ｂｒｏｄｅｒ，Ｓ．、およびＭｉｔｓｕｙａ，Ｈ．（１９９０）ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３４：２８７、により報告されている。Ｈａｙａｓｈｉｅｔａｌ．、に報告されるように、シクロブット−Ａおよびシクロブット−Ｇは、ジアステレオマーのラセミ混合物として存在する。また、Ｈａｙａｓｈｉｅｔａｌ．、に報告されるように、シクロブット−Ａおよびシクロブット−Ｇのチミン、ウラシル、およびヒポキサンチン類似体は抗ウイルス活性を示さなかった。シクロブット−Ａおよびシクロブット−Ｇの、ラセミ体のジアステレオマーである２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１−シクロブチル部分が持つであろうキナーゼによるリン酸化に対する効果を除去する試みにおいて、シクロブット− Ａおよびシクロブット−Ｇの非ジアステレオマーの３，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１−シクロブチル類似体が合成され、Ｂｏｕｍｃｈｉｔａ，Ｈ．、Ｌｅｇｒａｖｅｒｅｎｃ，Ｍ．、Ｈｕｅｌ，Ｃ．、およびＢｉｓａｇｎｉ，Ｅ．（１９９０）Ｊ．ＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍ．２７：１８１５、により報告されている。しかしながらシクロブット−Ａおよびシクロブット−Ｇの活性とは相反して、アデニンおよびグアニンの３，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１ −シクロブチル類似体、すなわち各々９−［３、３−ビス（ヒドロキシメチル）シクロブット−１−イル］アデニンおよび９−［３、３−ビス（ヒドロキシメチル）シクロブット−１−イル］グアニンは抗ウイルス活性を欠損していることが見いだされている。発明の目的シクロブチル部分を組み入れたオリゴヌクレオチド代用物を提供することは、本発明の一つの目的である。ＤＮＡおよびＲＮＡ配列に対してアンチセンスハイブリダイゼーションしうる、シクロブチル系オリゴヌクレオチド代用化合物を提供することは、本発明の別の目的である。アンチセンス診断および治療に用いるための、シクロブチル系オリゴヌクレオチド代用化合物を提供することは、本発明の更に別の目的である。更に別の目的は、動物における体の状態、特に疾患状態をアッセイするための研究および診断の方法および材料を提供することである。別の目的は、ＤＮＡおよびＲＮＡの活性の調節を介する疾患治療のための治療および研究の方法および材料を提供することである。配列特異的なシクロブチル系オリゴヌクレオチド代用化合物を合成するための方法を提供することは更に別の目的である。これらの目的および他の目的は、本明細書およびこれに添付される請求の範囲の再考査により当業者に明らかになるであろう。発明の簡単な説明本発明に従うと、連結用部分により共有結合的に連結される複数のシクロブチル部分から形成されるオリゴヌクレオチド代用物が提供され、このシクロブチル部分の各々はそれに結合するプリンもしくはピリミジン複素環式塩基の一つを有する。本発明の好ましいオリゴヌクレオチド代用物においては、プリンもしくはピリミジン複素環式塩基は天然に存在するもしくは合成のプリン−９−イル、ピリミジン−１−イル、もしくはピリミジン−３−イル複素環式塩基である。このプリンもしくはピリミジン複素環式塩基はアデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、５−メチルシトシン、ヒポキサンチン、もしくは２−アミノアデニンであることが好ましい。好ましいオリゴヌクレオチド代用物においては、複素環式塩基はシクロブチル部分の炭素−１（Ｃ−１）の位置で各シクロブチル部分に結合しており、連結用部分は炭素−３（Ｃ−３）の位置で各シクロブチル部分に結合している。これらの好ましい態様においては、置換基が少なくとも一つのシクロブチル部分の炭素 −２（Ｃ−２）もしくは炭素−４（Ｃ−４）の内の一つの位置に存在することができる。好ましい置換基には、ハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルコキシ、アリルオキシ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、もしくはＣ₁−Ｃ₁₀アルキルアミン基がある。置換基が複素環式塩基に対してトランス位にあることが好ましい。本発明の好ましいオリゴヌクレオチド代用物においては、連結用部分は、隣接するシクロブチル部分に結合する４もしくは５原子鎖である。これらの連結用部分が５原子鎖である場合には、各連結用部分は構造Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり、そしてＬ₂は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、ホスホトリエステル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスフェート、カルバメート、スルホネート、Ｃ₁−Ｃ₆ −ジアルキルシリル、もしくはホルムアセタールである］のものであることが好ましい。各連結用部分が構造Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり、Ｌ₂は、ホスホジエステルもしくはホスホロチオエートである］のものであることが好ましい。連結用部分が４原子鎖である場合には、各連結用部分は、構造：Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇ ［式中、（ａ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり、そしてＬ₅およびＬ₆は独立に、ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＮＲ₃、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＲ₃、もしくはＳｉＲ₄Ｒ₅であるか、または（ｂ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり、そしてＬ₅およびＬ₆は一緒になって、ＣＲ₁＝ＣＲ₂、Ｃ≡Ｃ、Ｃ₆芳香族環の一部分、Ｃ₃−Ｃ₆炭素環式環の一部分、あるいは複素環式の３、４、５、もしくは６員環の一部分であるか、または（ｃ）Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇は一緒になって、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂もしくはＣＨ₂−Ｏ−Ｎ＝ＣＨであり、これらの式中、Ｒ₁およびＲ₂は独立に、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、Ｃ１−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁− Ｃ₁₀置換アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆チオアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノ、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキルアミノ、Ｃ₁−Ｃ₁₀置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ハロ、ホルミル、ケト、ベンズオキシ、カルボキシアミド、チオカルボキシアミド、エステル、チオエステル、カルボキシアミジノ、カルバミル、ウレイド、グアニジノ、ＲＮＡ開裂用の基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり、Ｒ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、置換低級アルキル、アルコキシ、低級アルケニル、アラルキル、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ＲＮＡ開裂用の基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、およびオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり、そしてＲ₄およびＲ₅は独立に、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルもしくはアルコキシである。］のものである。特に好ましい４原子連結用部分は、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｏ−ＮＨ−ＣＨ₂、もしくはＣＨ₂−Ｏ−Ｎ＝ＣＨである。さらに、本発明に従うと、ある生物体中の蛋白質の産生もしくは活性を変調するための方法が提供され、この方法は、その生物体をこれまでの考察事項に従って調剤されるオリゴヌクレオチド代用物と接触させることを含む。このようなオリゴヌクレオチド代用物は、その蛋白質をコードする核酸配列、すなわちＲＮＡもしくはＤＮＡの少なくとも一部分と特異的にハイブリダイズすることができる。このオリゴヌクレオチド代用物の少なくとも一部分は複数の連結するシクロブチル部分から形成され、この各部分にはプリンもしくはピリミジン複素環式塩基が結合している。さらに、本発明に従うと、蛋白質の望ましくない産生により特徴付けられる疾患を有する生物体を治療する方法が提供される。この方法は、その生物体をこれまでの考察事項に従って調剤されるオリゴヌクレオチド代用物と接触させることを含む。このようなオリゴヌクレオチド代用物は、その産生もしくは活性が変調されるべき蛋白質をコードする核酸配列、すなわちＲＮＡもしくはＤＮＡ配列の少なくとも一部分と特異的にハイブリダイズすることができる。そのオリゴヌクレオチド代用物の少なくとも一部分は複数の連結するシクロブチル部分から形成され、その各部分にはプリンもしくはピリミジン複素環式塩基が結合している。さらに、本発明に従うと、その活性成分としての複数の連結するシクロブチル部分から形成され、かつその各部分にはプリンもしくはピリミジン複素環式塩基が結合している有効量のオリゴヌクレオチド代用物、および薬剤学的に許容される賦形剤もしくは担体を含む薬剤学的組成物が提供される。さらにまた、本発明に従うと、配列特異的核酸、すなわちＲＮＡもしくはＤＮＡをインビトロでアッセイする方法が提供され、その方法は、その核酸を含むインビトロ組成物を、その核酸の少なくとも一部分と特異的にハイブリダイズしうるオリゴヌクレオチド代用物と接触させることを含む。オリゴヌクレオチド代用物は、好ましくはこれまでの考察事項に従って調剤される。従って、そのオリゴヌクレオチド代用化合物の少なくとも一部分は複数の連結するシクロブチル部分から形成され、その各部分にはプリンもしくはピリミジン複素環式塩基が結合している。さらにまた、本発明に従うと、複数の連結するシクロブチル部分から形成され、かつその各部分にはプリンもしくはピリミジン複素環式塩基が結合している化合物の製造方法が提供される。この方法は、脱離基でシクロブチル部分を官能化し、独立に選択されるプリンもしくはピリミジン複素環式塩基で各々のシクロブチル部分の上の脱離基を置換し、保護基で各々の塩基含有シクロブチル部分を官能化させ、保護された部分を活性化連結基で更に官能化し、そして段階的に複素環式塩基含有シクロブチル部分の脱保護および連結を行う、各段階を含む。このような方法を、高分子支持体上での塩基含有シクロブチル部分の段階的脱保護および連結を含むように拡大することができる。この方法の好ましい態様においては、塩基含有シクロブチル部分を、（ａ）第一の保護部分を脱保護し、（ｂ）活性化連結用基を有する別の保護部分を脱保護部分と連結させて、連結構造を形成させ、そして（ｃ）連結構造を脱保護することにより段階的に脱保護および互いを連結させる。脱保護および連結段階（ｂ）および（ｃ）を複数回繰り返すことが好ましい。さらにまた、本発明に従うと、その活性成分として構造（Ａ）：［式中、Ｂ_xはプリン−９−イル、ピリミジン−１−イル、もしくはピリミジン −３−イルである］の化合物の有効量、および薬剤学的に許容される希釈剤もしくは担体を含む抗ウイルス組成物が提供される。さらに、本発明に従うと、活性成分として構造（Ａ）の化合物を含む組成物の治療的な量を哺乳類に投与することを含む、哺乳類のウイルス性疾患を治療する方法が提供される。好ましい態様においては、ウイルス性疾患はヘルペスウイルス性疾患である。発明の詳細な説明本発明の文脈においては、用語「ヌクレオシド」は、複素環式塩基および糖からなる分子種を意味する。天然に存在するヌクレオシドにおいては、複素環式塩基は典型的には、グアニン、アデニン、シトシン、チミン、もしくはウラシルである。他の天然の塩基が知られており、同様に豊富な合成もしくは「修飾化」塩基も知られている。天然に存在するヌクレオシドにおいては、糖は通常はデオキシリボース（ＤＮＡタイプのヌクレオシド）もしくはリボース（ＲＮＡタイプのヌクレオシド）である。合成糖も知られており、それらには、アラビノ、キシロ、もしくはリキソペンタフラノシル糖、およびヘキソース糖か含まれる。歴史的には用語ヌクレオシドは、天然に存在する種、および天然に存在するかもしくは合成の複素環式塩基と糖サブユニットから形成される合成種の両方を意味するのに用いられている。用語「ヌクレオチド」は、２’、３’、もしくは５’糖ヒドロキシル基の一つにエステル化されるホスフエート基を有するヌクレオシドを意味する。ホスフェート基は通常、モノホスフェート、ジホスフェート、もしくはトリホスフェートである。用語「オリゴヌクレオチド」は通常、複数の連結されたモノホスフェートヌクレオチド単位を意味する。これらの単位は、天然のホスホジエステル結合により連結される、天然に存在する塩基とペントフラノシル糖から形成される。ホモ−オリゴヌクレオチドは共通の複素環式塩基を有するヌクレオチド単位から形成される。用語「オリゴヌクレオチドアナログ」は、オリゴヌクレオチドに構造的に類似するが、しかし天然には存在しない部分を有する分子種を意味するのに用いられている。この用語は、変化した糖部分、変化した塩基部分、もしくは変化した糖間連結を有するオリゴヌクレオチド様分子を同定するのに用いられている。従って、用語オリゴヌクレオチドアナログは、天然のホスホジエステルヌクレオシド間連結の代わりに、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、もしくはホスホルアミデート等の変化した糖間連結；グアニン、アデニン、シトシン、チミン、もしくはウラシル以外のプリンおよびピリミジン複素環式塩基；βペントフラノシル以外の立体配置を有する糖；または２’位あるいは一つもしくは複数の糖の水素原子に置換基を有する糖を有する構造を意味する。非ホスホジエステル結合、すなわち変化した糖間連結を有する特定のオリゴヌクレオチドアナログを、「オリゴヌクレオシド」と称することができる。従って用語オリゴヌクレオシドは、天然のホスホジエステル連結基以外の連結基により連結される複数の連結したヌクレオシド単位を意味する。さらに、用語「オリゴマー」は、オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体を含むように用いることができる。一般的には、オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体の糖間連結は、一つのヌクレオシドの３’炭素から第二のヌクレオシドの５’炭素までであるが、用語オリゴマーおよびオリゴヌクレオチド類似体はまた、２’−５’連結されたオリゴヌクレオチドを意味するのにも用いられている。アンチセンス療法は、ＲＮＡもしくはＤＮＡの相補鎖と連結させるためのオリゴヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドアナログの使用である。結合後、オリゴヌクレオチドおよびＲＮＡもしくはＤＮＡ鎖は、天然の二本鎖ＤＮＡに類似する様式で互いに「デュープレックス」する。オリゴヌクレオチド鎖およびＲＮＡもしくはＤＮＡ鎖は、個々の鎖が互いに関して、一つの鎖の複素環式塩基の相対する鎖の複素環式塩基へのワトソン−クリックタイプのハイブリダイゼーションを可能にする位置にある相補鎖であるとみなすことができる。アンチセンス療法は、単細胞の原核生物および真核生物から多細胞真核生物までの範囲にわたる多数の生物体において実施することができる。遺伝、代謝、もしくは細胞調節の基本部分としてＤＮＡ−ＲＮＡ転写もしくはＲＮＡ−蛋白質翻訳を利用するいずれの生物体も、アンチセンス療法および／または予防法に感受性を示す。外観上は、細菌、酵母、原生動物、藻、ならびに全ての植物および温血動物を含む全ての動物形態等の多様な生物体をアンチセンス療法により治療することができる。さらに、多細胞性真核生物の各細胞はＤＮＡ−ＲＮＡ転写とＲＮＡ−蛋白質翻訳の両方をそれらの細胞性活性の不可欠部分として含むため、アンチセンス療法および／または診断法をそのような細胞集団について実施することもできる。さらに、真核生物細胞の、ミトコンドリアおよびクロロプラストを例とする多くのオルガネラも転写および翻訳メカニズムを含む。単一細胞、細胞集団、およびオルガネラも、それ自体アンチセンス療法もしくは診断法で治療することが可能な生物体の定義内に含まれる。本明細書に用いられる場合、治療法とは、疾患状態の根絶、細菌、原生動物もしくは他の感染性生物等の生物体の抹殺、あるいは随伴性もしくは有害な細胞性増殖もしくは発現の調節の両方を含むことを意味する。「オリゴヌクレオチドアナログ」を利用するアンチセンス療法は以下に示す米国特許出願およびＰＣＴ特許出願、すなわち、「ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓＡｎｄＭｅｔｈｏｄｓＦｏｒＤｅｔｅｃｔｉｎｇＡｎｄＭｏｄｕｌａｔｉｎｇＲＡＮＡｃｔｉｖｉｔｙ」と題する１９９０年１月１１日に出願された第４６３，３５８号、「ＮｏｖｅｌＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅＡｎａｌｏｇｓ」と題する１９９０年８月１３日に出願された第５６６，８３６号、「ＳｕｇａｒＭｏｄｉｆｉｅｄＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｅｓＴｈａｔＤｅｔｅｃｔＡｎｄＭｏｄｕｌａｔｅＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」と題する１９９０年８月１３日に出願された第５６６、９７７号、「ＮｏｖｅｌＰｏｌｙａｍｉｎｅＣｏｎｊｕｇａｔｅｄＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」と題する１９９０年７月２７日に出願された第５５８，６６３号、「ＮｕｃｌｅａｓｅＲｅｓｉｓｔａｎｔＰｙｒｉｍｉｄｉｎｅＭｏｄｉｆｉｅｄＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓＴｈａｔＤｅｔｅｃｔＡｎｄＭｏｄｕｌａｔｅＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」と題する１９９１年７月２７日に出願された第５５８，８０６号、「ＢａｃｋｂｏｎｅＭｏｄｉｆｉｅｄＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＡｎａｌｏｇｓ」と題する１９９１年５月２１日に出願された第７０３，６１９号、「ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓＦｏｒＤｅｔｅｃｔｉｎｇＡｎｄＭｏｄｕｌａｔｉｎｇＲＮＡＡｃｔｉｖｉｔｙ」と題する１９９１年１月１１日に提出されたＰＣＴ／ＵＳ９１／００２４３号、ならびに「ＲｅａｇｅｎｔｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓＦｏｒＭｏｄｕｌａｔｉｎｇＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＴｈｒｏｕｇｈＲＮＡＭｉｍｉｃｒｙ」と題する１９９１年３月１９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０１８２２号の開示に例が挙げられている。上述の出願は本発明の譲渡人に譲渡される。各開示は引用により本明細書に取り込まれる。本発明は、オリゴヌクレオチドに関連するが糖部分は含まない特定の分子種に関する。本発明においては、複素環式塩基が連結しているシクロブタン環、すなわちシクロブチル部分は、連結用部分によりオリゴヌクレオチド様構造内に結合されている。このような構造は、オリゴヌクレオチド（もしくはオリゴヌクレオチド類似体）とは化学的に異なるが、機能的には類似している。従って、このような分子種はオリゴヌクレオチド代用物である。これらはオリゴヌクレオチド代用物として、オリゴヌクレオチドの置換物として働く。我々は、それらがオリゴヌクレオチドと同様の様式でＤＮＡもしくはＲＮＡの相補鎖に水素結合することが可能であることを見いだした。認識されるであろうが、ペントフラノース環系と比較する際にはシクロブタン環系は固定されているとしてみなすことができる。従って、ペントフラノース環系は環内化学結合についての回転が可能であるが、シクロブタン環系はそうではない。その結果、ペントフラノシル環系は「ひだを作る（ｐｕｃｋｅｒ）」ことができるが、シクロブタン環はそうではない。しかしながらペントフラノシル環同様に、シクロブタン環系はその環内に数々の置換官能基の設置を可能とするのに十分な数の官能基用の位置を有している。ヌクレオシド化学の命名法は、ヌクレオシドの複素環式塩基部分上の官能基の位置を同定するためにはプライムの付いていない数を、そしてヌクレオシドの糖部分上の官能基の位置を同定するためにはプライムの付いた数を利用する。さらに、リボフラノシル環のβ異性体は、Ｃ−５炭素に関してはシンであるアノマーのＣ−１の位置についてはシンであるが、α異性体はＣ−５の炭素に関してはトランスである。ＩＵＰＡＣは、このような標準的なヌクレオシド命名法とは異なるシクロブタンの官能基の位置についての命名法を推奨してきた。ＩＵＰＡＣの命名法を利用すると、このシクロブタン環における位置Ｃ−１の置換は常にαとなる。本発明の目的のためには、シクロブタン環の位置的同定は、構造（Ｂ）を参照して行う。以下に示される説明的実施例および本明細書に添付される請求の範囲においては、位置的命名法は構造（Ｂ）に一致する様式で決定される。本発明のオリゴヌクレオチド代用物は、連結用部分を介する複数のシクロブチル部分を一緒に連結させることにより形成される。各シクロブチル部分は共有結合により結合しているプリンもしくはピリミジン複素環式塩基を含む。各連結用部分は共有結合により２つの隣接するシクロブチル部分と結合する。この様式で一緒に連結させると、このシクロブチル部分は、ＤＮＡもしくはＲＮＡ鎖とのハイブリダイゼーション用の空間的な位置にそれらの複素環式塩基を提示する。本発明に従うと、シクロブチル系オリゴヌクレオチド代用物は複数のサブユニットを含む。各サブユニットは、一つのシクロブタン環、一つの複素環式塩基、および隣接するサブユニットを連結するための一つの連結用部分を含む。本発明のオリゴヌクレオチド代用物は、好ましくは約３から約１００のサブユニットを含む。オリゴヌクレオチド代用物は約６を上回るサブユニットを、好ましくは約８から約６０のサブユニットを、より好ましくは約１０から約３０のサブユニットを含むことが好ましい。各々のサブユニットの複素環式塩基は天然の複素環式塩基もしくは合成の複素環式塩基でありうる。好ましい態様においては、この複素環式塩基は、天然に存在するか、もしくは合成の、プリン−９−イル、ピリミジン−１−イル、もしくはピリミジン−３−イル複素環式塩基として選択される。複素環式塩基にはアデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、５−メチルシトシン、ヒポキサンチン、もしくは２−アミノアデニンが含まれるが、これらには限定されない。他のこのような複素環式塩基には、２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、６−メルカプトプリン、２，６−ジメルカプトプリン、３−デアザプリン、６−アミノ−３−デアザプリン、６−アミノ−３−デアザ−２−オキシプリン、２−アミノ−６−メルカプトプリン、５−メチルシトシン、４−アミノ−２−メルカプトピリミジン、２，４−ジメルカプトピリミジン、５−フルオロシトシンが含まれる。他の適切な複素環式塩基には、「ＮｕｃｌｅａｓｅＲｅｓｉｓｔａｎｔＰｙｒｉｍｉｄｉｎｅＭｏｄｉｆｉｅｄＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓＴｈａｔＤｅｔｅｃｔａｎｄＭｏｄｕｌａｔｅＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」と題する１９９０年７月２７日に出願された米国特許出願第５５８，８０６号、ならびにＰＣＴ特許出願ＵＳ６／００５４４号において同定されるものが含まれる。このような複素環式塩基を記載するこれらの特許出願の部分は、引用により本明細書に取り込まれる。本発明に従うと、連結用部分は、個々の複素環式塩基含有シクロブチル部分を、その複素環式塩基が、ＤＮＡもしくはＲＮＡの相補鎖とハイブリダイズしうる立体配置の空間の位置を占める向きで、共有結合により一緒に連結するように選択される。本発明の好ましい態様においては、この連結用部分は４もしくは５原子鎖として選択される。このような４および５原子鎖には、天然のＤＮＡおよびＲＮＡのホスホジエステル連結、ならびに「オリゴヌクレオチド類似体」の、関連する合成ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、およびホスホトリエステル連結が含まれる。他の連結用部分には、ホスフェート、カルバメート、スルホネート、Ｃ₁−Ｃ₆−ジアルキルシリル、もしくはホルムアセタール連結が含まれる。更に別の連結には、−Ｏ−ＣＨ₂− ＣＨ₂−Ｏ−連結ならびに上述の米国特許出願第５６６，８３６号および第７０３，６１９号に開示される新規の連結が含まれる。本発明の５原子の連結用部分の好ましい基には、構造Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり、そしてＬ₂は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、ホスホトリエステル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、カルバメート、スルホネート、Ｃ₁ −Ｃ₆−ジアルキルシリル、もしくはホルムアセタールである］の連結用部分が含まれる。このような５原子リンカーの特に好ましい基は、構造Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃ ［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり、そしてＬ₂はホスホジエステルもしくはホスホロチオエートである］のものである。本発明の４原子の連結用部分の好ましい基には、構造Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇ ［式中、Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり、そしてＬ₅およびＬ₆は独立に、ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＮＲ₃、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＲ₃、もしくはＳｉＲ₄Ｒ₅であるか、またはＬ₅およびＬ₆は一緒になって、ＣＲ₁＝ＣＲ₂、Ｃ≡Ｃ、Ｃ₆芳香族環の一部分、Ｃ₃−Ｃ₆炭素環式環の一部分、あるいは複素環式の３、４、５、もしくは６員環の一部分となるか、またはＬ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇は一緒になって、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂もしくはＣＨ₂− Ｏ−Ｎ＝ＣＨであり、これらの式中、Ｒ₁およびＲ₂は独立に、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁− Ｃ₁₀置換アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆チオアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノ、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキルアミノ、Ｃ₁−Ｃ₁₀置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ハロ、ホルミル、ケト、ベンズオキシ、カルボキシアミド、チオカルボキシアミド、エステル、チオエステル、カルボキシアミジノ、カルバミル、ウレイド、グアニジノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、もしくはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり、Ｒ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、置換低級アルキル、アルコキシ、低級アルケニル、アラルキル、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり、Ｒ₄およびＲ₅は独立に、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルもしくはアルコキシである］の連結用部分が含まれる。薬力学特性を増強させる基は、オリゴヌクレオチド代用物の取り込みを改良し、分解に対するそのオリゴヌクレオチド代用物の耐性を増大し、そして／またはＲＮＡとの配列特異的ハイブリダイゼーションを強化する。薬理動態学的特性を増強させる基は、そのオリゴヌクレオチド代用物の取り込み、分解、代謝、もしくは排泄を改良する。４原子の連結用部分の特に好ましい基には、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｏ−ＮＨ−ＣＨ₂、およびＣＨ₂ −Ｏ−Ｎ＝ＣＨが含まれる。複素式塩基および連結用部分に加え、本発明のシクロブチル部分は更に他の置換基を含むことができる。位置Ｃ−１にそれらの複素環式塩基を、そして位置Ｃ −３に連結用部分を有する本発明のオリゴヌクレオチド代用物については、このような置換基は、Ｃ−２もしくはＣ−４の位置の一つもしくは両方に位置することができる。好ましい置換基には、ハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルコキシ、アリルオキシ、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、もしくはＣ₁−Ｃ₁₀アルキルアミンが含まれる。置換基が前記複素環式塩基に対してトランスの位置であることが好ましい。本発明の特定の好ましい態様は、構造（Ｃ）におけるように、複素環式塩基でＣ−１の位置が置換されている３，３−ビス−ヒドロキシメチルシクロブタンの対称性を利用している。このタイプの化合物は、最初に１−ベンジルオキシ−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンの１−複素環式塩基置換誘導体を製造することを含む方法により合成することができる。次に、これらの塩基含有化合物を直接、これらの対応するモノ−Ｏ−置換メトキシトリチル誘導体に転化させる。本発明のある態様においては、このモノ−Ｏ−置換メトキシトリチル誘導体をその後に、ＶａｎＢｏｏｍ，Ｊ．Ｈ．、ＶａｎｄｅｒＭａｒｅｌ，Ｇ．Ａ．、ＶａｎＢｏｅｃｋｅｌ，Ｃ．Ａ．Ａ．、Ｗｉｌｌｅ，Ｇ．、ａｎｄＨｏｙｎｇ，Ｃ．ＣｈｅｍｉｃａｌａｎｄＥｎｚｙｍａｔｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＧｅｎｅＦｒａｇｍｅｎｔｓ、ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ｅｄｉｔｅｄｂｙＨ．Ｇ．ＧａｓｓｅｎａｎｄＡｎｎｅＬａｎｇ、ＶｅｒｌａｇＣｈｅｍｉｅＷｅｉｎｈｉｅｍ／ＤｅｅｒｆｉｅｌｄＢｅａｃｈ、Ｆｌｏｒｉｄａ／Ｂａｓｅｌ１９８２、のホスホトリエステル法を利用して、アミノメチル−ポリスチレン担体上で８量体のホスホジエステルに転化させる。１−ベンジルオキシ−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンを利用して、１−チミジル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンおよび１ −アデニル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンを、複素環式塩基の直接導入により合成することができ、ウリジル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタン、１−グアニル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタン、および１−シチジル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンが類似法により製造され、他の複素環式塩基で置換されるシクロブタン類も同様である。この複素環式塩基の直接導入を行うためには、既知の１−ベンシルオキシ−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンを１−ヒドロキシ−３，３ −ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンのＯ⁵，Ｏ^5'−イソプロピリデン−エーテルに転化させる。様々なスルホン酸エステルを複素環式塩基の導入について調べた。一連のメシレート、トシレート、ブロシレート、およびノシレートにおいては、安定性および置換用の反応条件に関する最良の特性が、ｐ−ブロモベンゼンスルホネートで観察された。アデニンの導入は、ＤＭＳＯ中、８０℃、２４時間で９０％の収率で達成された。Ｎ⁹−置換生成物のみがＴＬＣにより検出された。同一条件下での３等量のチミンでの置換により３つの生成物、Ｎ¹−置換（５５％）、二置換（３４％）、および微量のＮ³−置換生成物の混合物が生じた。４倍過剰のチミンの使用によっても二置換生成物の形成は抑制されなかった。所望の複素環式塩基置換化合物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、そしてジオキサン中の塩酸で脱保護して、Ｃ−１の位置に適切な複素環式塩基を有する対応する３，３−ビス −ヒドロキシメチル誘導体を得る。１−複素環式塩基置換３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンの塩化モノメトキシトリチルとの反応により、所望のモノメトキシトリチル誘導体を得た。異性体を分離した後、これらの化合物を直接使用して、ホスホトリエステルオリゴヌクレオチド合成法を介してオリゴヌクレオチド代用物を形成することができる。別法では、これらをホスホルアミデートオリゴヌクレオチド合成法において使用するための対応するホスホルアミデートへと転化させることができる。ホスホトリエステル化学を利用して、３，３−ビス−ヒドロキシメチル−１− チミジル−シクロブタンを、ピリジン中の１．３等量の塩化モノメトキシトリチルと反応させることにより、２つの一置換生成物（各々３５％および４２％の収率）、ならびに二置換誘導体（９％）および未反応の出発物質（６．５％）が生じた。より多くの塩化メトキシトリチルを添加しても出発物質のジオールの量は減少せず、むしろ二置換生成物の量が増加した。この２つの一置換異性体を各々独立に、ホスホトリエステル法により固体支持体上で出発用ヌクレオシドとしてのチミジンで処理して８量体ホスホジエステルを生じた。出発異性体の非対称性により、得られるオリゴヌクレオチド代用化合物は、プソイド−β−およびプソイド−α−立体配置のものであった。表示「プソイド− β」は、天然のオリゴヌクレオチドの５’の位置であろうものに対してシスの位置に複素環式塩基を有するシクロブタン単位から形成される本発明のオリゴヌクレオチド代用物を意味し、「プソイド−α」は、同一の５’の位置に対して複素環式塩基がトランスであるオリゴヌクレオチド代用物を意味する。このプソイド −αおよびプソイド−βの立体配置を構造（Ｄ）および（Ｅ）に示す。本発明のシクロブタン系オリゴヌクレオチド代用物の立体配置をより良く説明するために、「通常の」末端チミジンヌクレオチドをこの構造の「３’」末端に入れてある。アデニン系列においては（そして同様の様式においてグアニンおよびシトシン系列において）、１−（複素環式塩基）−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンのアミノ基をまずベンゾイル化により保護して、９５％の収率でＮ，Ｎ−ジベンゾエート誘導体を得る。このジベンゾエート化合物を、次に２つの異なる方法でＮ⁶−ベンゾイル−Ｏ⁵−メトキシトリチル−３−ヒドロキシメチル− １−アデニル−シクロブタンの所望の異性体へとさらに転化させる。ＴＨＦ中のアンモニアでのモノ脱ベンゾイル化の前にイソプロピリデン基を除去することは、イソプロピリデン基の除去の前にモノ脱ベンゾイル化することに比較してより効果的であることが判明した。モノ脱ベンゾイル化およびイソプロピリデン基の除去に次いで、得られるアルコールの異性体を再び、出発用のヌクレオシドとしての２−デオキシ−アデノシンを用いて別々に固体支持体上で処理して８量体のホスホジエステルを得た。これにより所望のプソイド−β−およびプソイド−α −オリゴヌクレオチド代用物が得られた。本発明の更に別の態様として、モノ−ヒドロキシメチル置換アデニルシクロブタンのシスおよびトランス異性体も製造した。カルボエトキシ中間体のシスおよびトランス異性体のクロマトグラフィーによる分離を利用した。この方法を、１ −ベンジルオキシ−３−カルボエトキシ−シクロブタンの両方の異性体に別々に適用した。水素化アルミニウムリチウムでのカルボエトキシ基の還元、塩化ｔ− ブチルジフェニルシリルでの保護、ベンジル基の水素添加的除去、塩化ｐ−ブロモベンゼンスルホニルでの脱離基の導入、およびＤＭＳＯ中のＤＢＵの存在下におけるアデニンでの置換により、ｔ−ブチル−ジフェニルシリル保護Ｎ⁹−置換アデニン誘導体、ならびに対応するＮ⁷−置換誘導体を生じた。両方の場合とも、所望の化合物をクロマトグラフィーにより分離した。尿素中のフッ素酸での最終脱保護により、所望のシスおよびトランス１−アデニル−３−ヒドロキシメチル−シクロブタンを得た。Ｎ⁴−イソブチリル−シトシンおよび２−アミノ−６−メトキシエトキシープリン（対応するグアニン化合物）導入については、フェニルスルホニル脱離基が最も効果的であることが判明した。１−アデニル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンの合成が最近、Ｍａｒｕｙａｍａ，Ｔ．、Ｓａｔｏ，Ｙ．、Ｈｏｒｉｉ，Ｔ．、Ｓｈｉｏｔａ，Ｈ．、Ｎｉｔｔａ，Ｋ．、Ｓｈｉｒａｓａｋａ，Ｔ、Ｍｉｔｓｕｙａ，Ｈ、およびＨｏｎｊｏ，Ｊ．（１９９０）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、３８：２７１９、ならびにＢｏｕｍｃｈｉｔａ，Ｈ．、Ｌｅｇｒａｖｅｒｅｎｄ，Ｍ．、Ｈｕｅｌ，Ｃ．、およびＢｉｓａｇｎｉ，Ｅ．（１９９０）Ｊ．ＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍ．、２７：１８１５、により報告されている。これらのグループの両方共が１−アミノ誘導体を利用しており、次に複素環の段階的合成により最終生成物を作り上げた。これは、これらの塩基の選択的アルキル化を利用することにより複素環式塩基を直接導入する本発明の教示と対照をなすものである。ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、ホスホトリエステル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルホスホネート、およびホスホロジチオエート基を有する本発明のオリゴヌクレオチド代用化合物の製造については、そのオリゴヌクレオチド合成法は以下に示すホスホルアミデート化学に基づくものであり、それらは、先に引用された米国特許出願およびＰＣＴ特許出願第５６６，８３６号、第４６３，３５８号、第５５８，８０６号、第５５８，６６３号、第５５６，９７７号、およびＵＳ９１／００２４３号である。簡便に記載すると、保護１−アデニル、グアニル、もしくはシチジル、または非保護チミジル、およびウリジル−３−モノメトキシトリチル−３−ヒドロキシメチル−シクロブタンをホスフィチル化し、得られる活性化ホスフェート単量体を次に適切なオリゴヌクレオチド代用物に連結させる。ホスホロチオエートタイプの主鎖は、ボーケージ試薬（Ｂｅａｕｃａｇｅｒｅａｇｅｎｔ）、すなわち３Ｈ−１，２−ベンゾジチオエート−３−オン１，１ −ジオキシドを利用して形成される。Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｐ．Ｉ．、Ｅｇａｎ，Ｗ．、Ｒｅｇａｎ，Ｊ．Ｂ．、およびＢｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．、（１９９０）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１１２：１２５３、を参照のこと。４原子の連結用部分を有する本発明のオリゴヌクレオチド代用化合物の製造のためには、米国特許出願第５６６，８３６号および第７０３，６１９号の合成法を実施する。具体的には、保護１−アデニル、グアニル、もしくはシチジル、または非保護チミジル、およびウリジル−３−モノメトキシトリチル−３−ヒドロキシメチル−シクロブタンの３−ヒドロキシメチル基を、Ｐｆｉｔｚｅｒ，Ｋ．Ｅ．およびＭｏｆｆａｔ，Ｊ．Ｇ．（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：３０２７、のものに類似する酸化方法を利用して、ＤＭＳＯ、ベンゼン、ＤＣＣ、ピリミジン、およびトリフルオロ酢酸での処理により、対応する３−アルデヒド誘導体に酸化する。この３−アルデヒド中間体をアルデヒドとして使用するために保護することができ、あるいはこれを更にヒドラジノ化合物へと転化させることができる。すなわち、３−アルデヒド中間体をその後に、１，２−ジアニリノエチレンで処理して３−ジフェニルイミダゾリジノ−保護３−アルデヒド化合物を得るか、あるいは３−アルデヒド中間体をアセトニトリル中のヒドラジン水和物およびシアノホウ水素化ナトリウムで処理して対応する３−ヒドラジノ化合物を得る。次にこれらの化合物を既述の米国特許出願第７０３，６１９号の教示にしたがって更なる合成に用いて、対応するヒドラジノおよびヒドラジン連結複素環式塩基置換シクロブタン二量体を得る。このような二量体をオリゴヌクレオチド代用物内に導入するかあるいは伸長させて、より長い鎖のヒドラジノもしくはヒドラジン連結オリゴヌクレオチド代用物を形成する。このようにして、構造ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂およびＣＨ₂−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂の結合用部分を有する本発明のオリゴヌクレオチド代用物が、容易な様式で製造される。更に、保護１−アデニル、グアニル、もしくはシチジル、または非保護チミジル、およびウリジル−３−モノメトキシトリチル−３−ヒドロキシメチル−シクロブタンを、乾燥ＤＭＦ中のＮ−ヒドロキシフタルイミド、トリフェニルホスフィン、およびアゾジカルボン酸ジイソプロピルを用いる３−モノメトキシ−トリチル−３−ヒドロキシメチル−シクロブタンの処理により、対応する３−Ｎ−ヒドロキシフタルイミド−３−モノメトキシトリチル−３−ヒドロキシメチル−シクロブタンに転化させる。Ｎ−ヒドロキシフタルイミド化合物は次に、先に引用した米国特許出願第７０３，６１９号の教示にしたがって、無水条件下において乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂中のメチルヒドラジンを用いて処理することにより、対応する３ −アミノ中間体化合物へと転化させる。３−アミノシクロブタン化合物を３−アルデヒドシクロブタン化合物と反応させることにより、オキシム連結化合物を生じた。所望ならば、このようなオキシムをシアノホウ水素化ナトリウムで還元してヒドロキシルアミン連結を形成することができる。このようにして、構造ＣＨ₂−Ｏ−ＮＨ−ＣＨ₂およびＣＨ₂−Ｏ −Ｎ＝ＣＨの連結用部分を有する本発明のオリゴヌクレオチド代用物が容易な様式で製造される。スルホネート連結を有する本発明のオリゴヌクレオチド代用物は、Ｍｕｓｉｃｋｉ，Ｂ．およびＷｉｄｌａｎｓｋｉ，Ｔ．Ｓ．（１９９０）Ｊ．ＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍ．、５５：４２３１、の方法にしたがって、保護１−アデニル、グアニル、もしくはシチジル、あるいは非保護チミジル、およびウリジル−３−モノメトキシトリチル−３−ヒドロキシメチル−シクロブタンを反応させることにより製造される。ホスホルアミデート連結は、Ｇｒｙａｚｎｏｖ，Ｓ．Ｍ．およびＳｏｋｏｌｏｖａ，Ｎ．Ｉ．（１９９０）ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ、３１：３２０５の方法により形成され、ホルムアセタール連結は、Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ，Ｍ．（１９９０）ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ、３１：２３８５の方法により、ホスホネート連結は、Ｍａｚｕｒ，Ａ．、Ｔｒｏｏｐ，Ｂ．Ｅ．、およびＥｎｇｅｌ，Ｒ．（１９８４）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、４０：３９４９、の方法により、カルバメート連結は、Ｓｔｉｒｃｈａｋ，Ｅ．Ｐ．およびＳｕｍｍｅｒｔｏｎ，Ｊ．Ｅ．（１９８７）Ｊ．ＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍ．、５２：４２０２、の方法により、アミノアシル連結は、Ｌｉ，Ｃ．およびＺｅｍｌｉｃｋａ（１９７７）Ｊ．ＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍ．、４２：７０６、ならびにＮｙｉｌａｓ，Ａ．、Ｇｌｅｍａｒｅ，Ｃ、およびＣｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ，Ｊ．（１９９０）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、４６：２１４９、の方法により、メチレン連結は、Ｖｅｅｎｅｍａｎ，Ｇ．Ｈ．、ｖａｎｄｅｒＭａｒｃｅｌ，Ｇ．Ａ．、ｖａｎｄｅｎＥｌｓｔ，Ｈ、およびｖａｎＢｏｏｍ，Ｊ．Ｈ．（１９９０）Ｒｅｃｌ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ．Ｐａｙｓ−Ｂａｓ、１０９：４４９、の方法により、そしてシリル連結は、Ｏｇｉｌｖｉｅ，Ｋ．Ｋ．およびＣｏｒｍｉｅｒ，Ｊ．Ｆ．（１９８５）ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ、２６：４１５９、の方法により形成される。本発明のオリゴヌクレオチド代用物は、診断、治療に、ならびに研究用試薬およびキットとして使用することができる。治療用使用のためには、オリゴヌクレオチド代用物を、蛋白質により調節される疾患を患う動物に投与する。このような疾患を患うことが疑われる患者に、その疾患の症状を減少させるのに有効な量のオリゴヌクレオチド代用物を投与することが好ましい。当業者は、このような治療法のための至適用量および治療計画を決定することができる。一般的には、本発明に従う治療用オリゴヌクレオチド代用物を、経口的、静脈内的、もしくは筋肉内的等の、内部的に投与することが好ましい。経皮的、局所的、もしくは病巣内的等の他の投与形態もまた有用である。座薬内の封入物もまた有用である。予防法における本発明のオリゴヌクレオチド代用物の使用も同様に有用である。薬剤学的に許容される担体の使用も幾つかの態様にとっては好ましい。本発明の追加的な目的、利点、および新規の特性は、制限となることは意図されない以下の実施例を調査することにより当業者に明らかとなるであろう。実験法一般事項−フラッシュクロマトグラフィー：シリカゲルＭｅｒｃｋ６０、２３０−４００メシュＡＳＴＭ；アルミナ（Ａｌｕｍｉｎａ）ＢアクトＩ（ａｃｔＩ）：ＩＣＮＢｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社Ｎ゜０２０７２；Ｈｙｆｌｏ：Ｆｌｕｋａ社Ｎ゜５６６７８；分子ふるい（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｉｅｖｅｓ）：０．４および０．３ｎｍ，ビーズ、約２ｍｍ、Ｍｅｒｃｋ社Ｎｏ５７０４および５７０８；ＴＬＣプレート：Ｍｅｒｃｋ社シリカゲル６０ｆ₂₅₄予備コート、薄層の厚み：０．２５ｍｍ；溶媒：ジクロロメタン：０．４ｎｍの分子ふるい上で保存；ジメトキシエタン（ＤＭＥ）：使用前に塩基性アルミナに通す；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）：引圧下で蒸留し、０．４ｎｍの分子ふるい上で保存；ジオキサン：使用前に塩基性アルミナに通す；エタノール：０．３ｎｍの分子ふるい上で保存；ピリミジン：蒸留し、０．４ｎｍの分子ふるい上で保存；テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）：カリウム−ナフタレン上で蒸留し、０．４ｎｍの分子ふるい上で保存；トルエン：蒸留し、０．４ｎｍの分子ふるい上で保存；トリメチルアミン：蒸留し、０．４ｎｍの分子ふるい上で保存；クロマトｈｉ装置；Ｉ．Ｒ．：Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ社モデル８８１、フィルム：２枚の塩化ナトリウムプレートの間に１滴の物質；ＮＭＲ：２００ＭＨｚ：ＶａｒｉａｎＧＥＭ２００；３００ＭＨｚ：ＶａｒｉａｎＧＥＭ３００；４００ＭＨｚ：ＢｒｕｋｅｒＷＭ４００、溶媒内部対照：ＣＤＣｌ₃：¹Ｈ：７．２６５ＰＰＭ、¹³Ｃ：７７．００ＰＰＭ；ＣＤ₃ＯＤ：¹Ｈ：３．３４ＰＰＭ、¹³Ｃ：４９．００ＰＰＭ；ＤＭＳＯ：¹Ｈ：２．５０ＰＰＭ、¹³Ｃ：３９．７０ＰＰＭ；略語：ｓ、シングレット；ｄ、ダブレット；ｔ、トリプレット；ｑ、クアドルプレット；ｑｕｉｎｔ、クイントゥプレット；ＣａｒｂｏｎＮＭＲ：完全にデカップリングさせ、そしてＡＰＴスペクトルを通常は記録し、異常共鳴（ｏｆｆ −ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）デカップリングスペクトルは必要である場合のみに記録した；Ｕ．Ｖ．：Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ社Ｌａｍｂｄａ９ＵＶ／ＶＩＳ／ＮＩＲスペクトロメーター；Ｍ．Ｓ．：２ＡＢ、ＨＦ装置、ＦＡＢ技術、溶媒としてチオグリシン：芳香族環の番号付：ｒ、対照；ｏ、オルト；ｍ、メタ；ｐ、パラ；複素環の番号付：アデニン：ａｄ＋番号；グアニン：ｇｕ＋番号；チミン：ｔｈｙ＋番号；ウラシル：ｕｒ＋番号；シトシン：ｃｙ＋番号。実施例１１−ベンジルオキシ−３，３−ビス−カルボエトキシ−シクロブタン１化合物１は、Ａｖｒａｍ，Ｍ．、Ｎｅｎｉｔｚｅｓｃｕ，Ｃ．Ｄ．、およびＭａｘｉｍ，Ｃ．Ｄ．（１９５７）Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．、９０：１４２４、ならびにＳａｆａｎｄａ，Ｊ．およびＳｏｂｏｔｋａ，Ｐ．（１９８２）Ｃｏｌｌｅｃｔ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．４７：２４４０の刊行物の方法に従って、わずかな改良を加えて製造した。マロン酸ジエチルエステル（２５８．６ｍｌ、１．７０３モル）を、そのままシオキサン（１０００ｍｌ）中の水素化ナトリウム（５１．１０ｇ、１．７０３モル、Ｆｌｕｋａ社Ｎ゜７１６１４：油中の８０％ＮａＨ）の懸濁液に２時間かけて加えた。この溶液を、室温で９０分間撹拌した。１−ブロモ−２−ベンジルオキシ−３−クロロ−プロパン（５００ｇ、１．７８９モル）をそのまま１時間かけて加えた。この混合物を１時間室温で、次いで２４時間１２５℃で撹拌した。室温にゆっくり冷却した後、同様の量の水素化ナトリウムを５ｇ分ずつそのまま１時間かけて加えた。この懸濁液をゆっくりと１２５℃に加熱し、この温度で１２０時間、機械的に撹拌した。後処理は引用文献に記載されているようにして行った。すなわち、化合物１をまず、１７２℃，０．６Ｔｏｒｒでの蒸留により、次いでフラッシュクロマトグラフィー（第三級ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝１／９９〜２／８）により精製して、無色油状物として１（３８２．５ｇ、７３．３％）を得た。実施例２１−ベンジルオキシ−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタン２ジメトキシエタン（８０ｍｌ）中の１（９５．８ｇ、３１３ミリモル）の溶液を、ジメトキシエタン（３６０ｍｌ）中の水素化アルミニウムリチウム（１５ｇ、３９５ミリモル）の懸濁液に、室温、アルゴン下で滴加した。添加は５０℃以下の反応温度を保持するように実施した。（ＴＬＣで判定：酢酸エチル；Ｒｆ＝０．３０）。この反応混合物をアルゴン下、室温で４８時間撹拌した。この反応の完了後、激しく撹拌しながら水（１０ｍｌ）をゆっくりと加えた。次に、この反応混合物をシリカゲル（８００ｍｌ）を含む２Ｌのフラスコに移し、溶媒を減圧下で微細粉末が得られるまで除去した。この粉末をフリットガラス上の５ｃｍのハイフロ（Ｈｙｆｌｏ）パッドに加え、酢酸エチルで洗浄した（ＴＬＣで判定、４００ｍｌの分画）。生成物を含む分画を蒸発させて５５ｇの結晶２（７９％粗収率）を得た。酢酸エチル／ヘキサンから再結晶させた後、４３．２ｇ、６２％の無色結晶を得た。母液をフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ヘキサン＝５／５〜７／３）により精製して、５ｇ、７．２％の結晶を得た。元素分析：Ｃ₁₃Ｈ₁₈Ｏ₃として、計算値：Ｃ７０．２５，Ｈ８．１６，Ｏ２１．６０；実測値：Ｃ７０．０９，Ｈ８．２２，Ｏ２１．６４実施例３１α−ベンジルオキシ−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンのＯ ⁵，Ｏ⁵’−イソプロピリデン−エーテル３２，２−ジメトキシプロパン（１９．９ｍｌ、１６２ミリモル）を、ジメチルホルムアミド（２４０ｍｌ）中の２（１２ｇ、５４ミリモル）およびｐ−トルエンスルホン酸（１ｇ）の溶液にゆっくりと加えた（ＴＬＣで判定：酢酸エチル；Ｒｆ＝０．１５）。この反応物をアルゴン下、室温で２０時間撹拌した。次に酢酸エチル（５００ｍｌ）をこの反応混合物に加え、得られる溶液を食塩水で４回洗浄した（４×１５０ｍｌ）。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発乾固して無色油状物として３、１３．７ｇ、９６．５％を得た。これは冷蔵庫内で数日後に結晶化した。この結晶はこれ以上精製を必要としなかった。元素分析：Ｃ₁₆Ｈ₂₂Ｏ₃として、計算値：Ｃ７３．２５，Ｈ８．４５，Ｏ１８．３０；実測値：Ｃ７３．１０，Ｈ８．５６，Ｏ１８．６０実施例４１α−ヒドロキシ−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンのＯ⁵，Ｏ⁵’−イソプロピリデン−エーテル４ジメトキシエタン（３５０ｍｌ）中のデグッサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）パラジウム（２ｇ）をまず水素雰囲気下に置き、次に３（４４ｇ、１６８ミリモル）をそのまま加えた。この反応混合物を室温、１気圧の水素圧下で、１等量が吸収されるまで（約１時間）激しく震盪した。ハイフロを通してこの触媒を濾過した後に、この溶液を蒸発乾固して、無色シロップ状物として４、２３．１ｇ、９７％を得た。実施例５１α−ｐ−ブロモ−ベンゼンスルホニル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル− シクロブタンのＯ⁵，Ｏ⁵’−イソプロピリデン−エーテル５ジクロロメタン（１５０ｍｌ）中の４（６５ｇ、３７．８ミリモル）およびトリエチルアミン（１５．８ｍｌ、１１３．２ミリモル）の混合物をアルゴン下、０℃で撹拌した。ジクロロメタン（５０ｍｌ）中の塩化ｐ−ブロモ−ベンゼンスルホニル（１１．５７ｇ、４５．３ミリモル）を０℃でゆっくりと加えた。この反応混合物を室温で６０時間撹拌した（ＴＬＣで判定：酢酸エチル／ヘキサン＝５／５；Ｒｆ＝０．５）。酢酸エチル（４００ｍｌ）を加え、この溶液を食塩水で４回洗浄した（４×２００ｍｌ）。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を蒸発させた。得られるシロップ状物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン／トリエチルアミン＝７／３／０．１〜１／１／０．１）により精製して、無色結晶として５、１１．４ｇ、７７．２％を得た。元素分析：Ｃ₁₅Ｈ₁₉ＢｒＳＯ₅として、計算値：Ｃ４６．０５，Ｈ４．９０，Ｏ２０．４５，Ｓ８．１９，Ｂｒ２０．４２；実測値：Ｃ４６．０９，Ｈ５．０５，Ｏ２０．３２，Ｓ８．２０，Ｂｒ２０．４２実施例６１α−アデニル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンのＯ⁵，Ｏ⁵ ’−イソプロピリデン−エーテル６ジメチルスルホキシド（８００ｍｌ）中の５（２０ｇ、５１．１ミリモル）、アデニン（２０．７２ｇ、１５３．３ミリモル）、およびジアザビシクロウンデセン（２３ｍｌ、２３．３４ミリモル）の混合物をアルゴン下、８０℃で４８時間撹拌した（ＴＬＣで判定：酢酸エチル／メタノール＝８／２、Ｒｆ＝０．２９、検出：１）塩素２）ヨウ化カリウム）。飽和重炭酸ナトリウム（２００ｍｌ）および水（８００ｍｌ）を加え、この溶液を酢酸エチルで７回抽出した（７× ２００ｍｌ）。回収した有機分画を食塩水で洗浄し（２００ｍｌ）、硫酸ナトリウムで乾燥し、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール／トリエチルアミン＝９５／５／０．１）により精製して無色結晶として６、１１．１ｇ、７５％を得た。ＭＷ＝２８９．３３９；ＭＰ＝２５１℃（水／エタノールからの結晶化後）元素分析：Ｃ₁₄Ｈ₁₉Ｎ₅Ｏ₂として、計算値：Ｃ５８．１２，Ｈ６．６２，Ｎ２４．２１，Ｏ１１．０６；実測値：Ｃ５８．１８，Ｈ６．８８，Ｎ２４．１９，Ｏ１１．３０実施例７１α−チミジル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンのＯ⁵，Ｏ⁵ ’−イソプロピリデン−エーテル７、および１，３−ビス−（３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブチルのＯ⁵，Ｏ⁵’−イソプロピリテン−エーテル）チミン８．ジメチルスルホキシド（８００ｍｌ）中の５（２０．２６ｇ、５１．８ミリモル）、チミン（２６．１２ｇ、２０７．１ミリモル）、およびジアザビシクロウンデセン（３１ｍｌ、３１．５ミリモル）の混合物をアルゴン下、８０℃で、１８時間撹拌した（ＴＬＣで判定：メタノール／酢酸エチル＝１／９、Ｒｆ＝０．５２および０．４８、検出：１）塩素２）ヨウ化カリウム）。飽和重炭酸ナトリウム（２００ｍｌ）および水（８００ｍｌ）を加え、この溶液を酢酸エチルで７回抽出した（７×２００ｍｌ）。回収した有機分画を食塩水で洗浄し（２００ｍｌ）、硫酸ナトリウムで乾燥し、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン／トリエチルアミン＝５／５／０．０１〜７／３／０．０１）により精製して、分画１：Ｒｆ＝０．４７（メタノール／酢酸エチル＝１／９）化合物８、３．８５ｇ、３４．２％；分画２：Ｒｆ＝０．５２（メタノール／酢酸エチル＝１／９）化合物７、７．９２ｇ、５４．６％を得た。１α−チミジル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンのＯ ⁵ ，Ｏ ⁵ ’ −イソプロピリデン−エーテル７：分画２：元素分析：Ｃ₁₄Ｈ₂₀Ｎ₂Ｏ₄として、計算値：Ｃ５９．９９，Ｈ７．１９，Ｎ１０．００，Ｏ２２．８３；実測値：Ｃ５９．６４，Ｈ７．２２，Ｎ９．７１，Ｏ２２．５５１，３−ビス−（３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブチルのＯ ⁵ ，Ｏ ⁵ ’ −イソプロピリデン−エーテル）−チミン８分画１：元素分析：Ｃ₂₃Ｈ₃₄Ｎ₂Ｏ₆として、計算値：Ｃ６３．５７，Ｈ７．８９，Ｎ６．４５，Ｏ２２．０９；実測値：Ｃ６３．７６，Ｈ７．７７，Ｎ６．４６，Ｏ２２．１２実施例８１α−アデニル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタン９１０滴の２Ｍ塩酸水溶液を室温で、ジオキサン（５ｍｌ）中の６（１．０９ｇ、２．７７ミリモル）の溶液に加えた。この溶液を１時間撹拌し、蒸発乾固し、そして水から結晶化した。得られる結晶はＴＬＣ（クロロホルム／メタノール／水＝７０／３０／５）により示されたところ純粋ではなかったため、この９と塩化ナトリウムとの混合物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製した（溶出液：クロロホルム／メタノール／水＝９３／６／１）。９、６５０ｍｇ、７０％を無色結晶として得た。元素分析：Ｃ₁₁Ｈ₁₅Ｎ₅Ｏ₂として、計算値：Ｃ５３．００，Ｈ６．０７，Ｎ２８．１０，Ｏ１２．８４；実測値：Ｃ５３．０５，Ｈ６．２９，Ｎ２７．８７，Ｏ１２．７１実施例９１，３−ビス（３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブチル）−チミン１０１０滴の２Ｍ塩酸水溶液を室温で、ジオキサン（５ｍｌ）中の８（１．４８ｇ、３．４１ミリモル）の溶液に加えた。化合物９についての方法と同様に、１０（８４６ｍｇ、７０％）を無色結晶として得た。元素分析：Ｃ₁₇Ｈ₂₆Ｎ₂Ｏ₆として、計算値：Ｃ５７．６１，Ｈ７．３９，Ｎ７．９０，Ｏ２７．０９，実測値：Ｃ５７．２４，Ｈ７．３８，Ｎ７．８９，Ｏ２７．１２実施例１０１α−チミジル−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタン１１１０滴の２Ｍ塩酸水溶液を室温で、ジオキサン（５ｍｌ）中の７（１．０５ｇ、３．７３ミリモル）の溶液に加えた。化合物１０についての方法と同様に、１１（７００ｍｇ、７８％）を無色結晶として得た。元素分析：Ｃ₁₁Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₄として、計算値：Ｃ５４．９９，Ｈ６．７１，Ｎ１１．６６，Ｏ２６．６４；実測値：Ｃ５４．８６，Ｈ６．７４，Ｎ１１．６５，Ｏ２６．５６実施例１１１α−チミジル−３β−ヒドロキシメチル−３α−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン１２、および１α−チミジル−３α−ヒドロキシメチル−３ β−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン１３１１（３１４ｍｇ、１．３０７ミリモル）をピリジン（３×１０ｍｌ）とともに３回蒸発させた。塩化メトキシトリチル（３１６．５ｍｇ、１．０３ミリモル）をアルゴン下で、ピリジン（１０ｍｌ）中の１１の溶液に加えた。この反応物を室温で８時間撹拌した（ＴＬＣで判定：酢酸エチル／ヘキサン＝８／２）。更に塩化メトキシトリチル（１００ｍｇ、０．３２ミリモル）を５時間後に２回に分けて加えた。この反応混合物を１５時間、室温で撹拌した。５つのスポットがＴＬＣ上で可視化された（クロロホルム／メタノール／トリエチルアミン＝９５／５／１；スポット１：Ｒｆ＝０．９９、塩化メトキシトリチルの分解生成物；スポット２：Ｒｆ＝０．９５、ビス−メトキシ−トリチル−誘導体；スポット３：Ｒｆ＝０．４０、化合物１２、スポット４：Ｒｆ＝０．３５、化合物１３、スポット５：Ｒｆ＝０．０５、未反応のジオール１１）。他の実験により、より多くの塩化メトキシトリチルを加えても未反応のジオール１１の量は減少せず、ビス −メトキシ−トリチル−誘導体の量が増加することが示された。重炭酸ナトリウム（１０ｍｌ、１Ｍ）を加え、この溶液を酢酸エチル（４×２０ｍｌ）で４回抽出し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥した。これらの生成物をフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：クロロホルム／アセトン／トリエチルアミン＝９９／１／１からゆっくりと８０／２０／１まで）により精製して、分画１：７０ｍｇ（８．９％）；分画２、１２：２３４ｍｇ（３４．９％）；分画３、１３：２８１ｍｇ（４１．９％）；分画４、１１：２０ｍｇ（６．４％）を取得した。１α−チミジル−３，３−ビス−ヒドロキシトリチルオキシメチル−シクロブタン：Ｃ₅₁Ｈ₄₈Ｎ₂Ｏ₆：ＭＷ＝７８４．９５４；分画１；Ｒｆ＝０．９５、クロロホルム／メタノール／トリエチルアミン＝９５／５／１；７０ｍｇ（８．９％）。１α−チミジル−３β−ヒドロキシメチル−３α−メトキシトリチルオキシ− メチル−シクロブタン１２：分画２：Ｒｆ＝０．４０、クロロホルム／メタノール／トリエチルアミン＝９５／５／１； ¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）ＮＯＥ実験：Ｈ₁についての照射：ＣＨ₂ＯＨ、Ｈ_2b＋Ｈ_4bに陽性ＮＯＥ、そしてＨ_2a＋Ｈ_4aには効果なし；ＣＨ₂ＯＨについての照射：Ｈ₁およびＨ_2b＋Ｈ_4bに陽性ＮＯＥ；ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅについての照射：ＣＨ₂ＯＨ、Ｈ_2a＋Ｈ_4aに陽性ＮＯＥ、そしてＨ₁には効果なし；Ｈ_2a＋Ｈ_4aについての照射：Ｈ_2b＋Ｈ_4b、ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅに陽性ＮＯＥ、そしてＨ₁には効果なし；Ｈ_2b＋Ｈ_4bについての照射：Ｈ_2a＋Ｈ_4a、Ｈ₁、ＣＨ₂ＯＨに陽性ＮＯＥ、そしてＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅには効果なし；元素分析：Ｃ₃₁Ｈ₃₂Ｎ₂Ｏ₅＋０．４２Ｈ₂Ｏとして、計算値：Ｃ７１．５８，Ｈ６．３６，Ｎ５．３９，Ｏ１６．６７；実測値：Ｃ７１．５８，Ｈ６．３７，Ｎ５．４６，Ｏ１６．７２１α−チミジル−３α−ヒドロキシメチル−３β−メトキシトリチルオキシ− メチル−シクロブタン１３：分画３：Ｒｆ＝０．３５、クロロホルム／メタノール／トリエチルアミン＝９５／５／１； ¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）ＮＯＥ実験：Ｈ₁についての照射：ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅおよびＨ₂＋Ｈ₄に陽性ＮＯＥ；ＣＨ₂ＯＨについての照射：ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｃおよびＨ₂＋Ｈ₄に陽性、そしてＨ₁には効果なし；；ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅについての照射：Ｈ₁、Ｈ₂＋Ｈ₄、およびＣＨ₂ＯＨに陽性ＮＯＥ；元素分析：Ｃ₃₁Ｈ₃₂Ｎ₂Ｏ₅＋０．５０Ｈ₂Ｏとして、計算値：Ｃ７１．３８，Ｈ６．３８，Ｎ５．３７，Ｏ１６．８７；実測値：Ｃ７１．２６，Ｈ６．４８，Ｎ５．４４，Ｏ１６．６５実施例１２１α−（Ｎ，Ｎ−ジベンゾイル−アデニル）−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンのＯ⁵，Ｏ⁵’−イソプロピリデン−エーテル１６：６（７０７ｍｇ、２．４４ミリモル）のピリジン溶液を３回蒸発させて乾燥させた（３×１５ｍｌ）。塩化ベンゾイル（７００ｍｌ、６．０２ミリモル）をそのままピリジン（５ｍｌ）中の６の溶液に滴加した。この反応混合物を１５時間、室温で撹拌した（ＴＬＣで判定：メタノール／酢酸エチル＝２／８、Ｒｆ＝０５５）。水（２０ｍｌ）を加え、この溶液を酢酸エチル（２×４０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固させた。この化合物をクロロホルム／メタノールから結晶化させて無色結晶として１６（１．２０５ｇ、９９％）を得た。ＭＷ＝４９４．５３３；ＭＰ＝２２１−２２２℃（クロロホルム／メタノールからの結晶化後）；元素分析：Ｃ₂₈Ｈ₂₄Ｎ₅Ｏ₄として、計算値：Ｃ６７．５９，Ｈ５．４７，Ｎ１４．０８，Ｏ１２．８６；実測値：Ｃ６７．６０，Ｈ５．５０，Ｎ１４．１０，Ｏ１２．９０実施例１３１α−（Ｎ−ベンゾイル−アデニル）−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンのＯ⁵，Ｏ⁵’−イソプロピリデン−エーテル１７濃アンモニア（３ｍｌ、２９％）を、ＴＨＦ（７．３ｍｌ）および水（１．５ｍｌ）中の１６（７１８ｍｇ、１．４７ミリモル）の溶液に滴加した。この反応混合物を４時間、室温で撹拌した（ＴＬＣで判定）。４つのスポットが可視化された。スポット１：Ｒｆ＝０．４６、酢酸エチル；Ｒｆ＝０．５４、酢酸エチル／メタノール＝９／１、ＰｈＣＯＮＨ₂；スポット２：Ｒｆ＝０．３６、酢酸エチル；Ｒｆ＝０．４５、酢酸エチル／メタノール＝９／１、化合物１６；スポット３：Ｒｆ＝０．１０、酢酸エチル；Ｒｆ＝０．４２、酢酸エチル／メタノール＝９／１、化合物１７；スポット４：Ｒｆ＝０．０２、酢酸エチル；Ｒｆ＝０２６、酢酸エチル／メタノール＝９／１、ＰｈＣＯＯ^-ＮＨ₄ ⁺。水（２０ｍｌ）を加え、この溶液を酢酸エチル（２×４０ｍｌ）で４回抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固させた。これらの（化合物をフラッシュクロマトグラフィーにより分離した（溶出液：酢酸エチル／ヘキサン＝５／５〜酢酸エチル／メタノール＝８／２）；ＭＷ＝３９３．４４８；ＭＰ＝１８０−１８２℃（酢酸エチル／メタノールからの結晶化後）；元素分析：Ｃ₂₁Ｈ₂₃Ｎ₅Ｏ₃として、計算値：Ｃ６４．１１，Ｈ５．８９，Ｎ１７．８０，Ｏ１２．２０；実測値：Ｃ６４．０７，Ｈ６．０４，Ｎ１７．３３，Ｏ１２．４７実施例１４１α−（Ｎ，Ｎ−ジベンゾイル−アデニル）−３α−ヒドロキシメチル−３β −メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン１９、および１α−（Ｎ，Ｎ− ジベンゾイル−アデニル）−３β−ヒドロキシメチル−３α−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン２０４Ｍの塩酸水溶液（１０滴）をジオキサン（５ｍｌ）中の１６（２０９．５ｍｇ、０．４２１ミリモル）の溶液に加えた。この反応混合物を室温で５時間撹拌し（ＴＬＣで判定：シクロロメタン／メタノール＝９／１）、そしてピリジンで中和させた。この化合物１８、１α−（Ｎ，Ｎ−ジベンゾイル−アデニル）−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタンは安定ではなく、そして冷蔵庫内に保存することができなかった。まず１８のピリジン溶液を３回蒸発乾固させ（３ ×１０ｍｌ）、次に塩化メトキシトリチル（１３０ｍｇ、０．４２１ミリモル）を、ジメチルアミノピリジン（２０ｍｌ）の存在下で１８のピリジン溶液（５ｍｌ）に一度に加えた。この反応混合物を１５時間、室温で撹拌した（ＴＬＣで判定：２つの異なる溶媒で２回泳動、１：第三級ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２０／８０；２：第三級ブチルメチルエーテル／エタノール＝８０／２０）。ＴＬＣ上に５つのスポットが可視化された。スポット１：Ｒｆ＝０．６１、塩化メトキシトリチルの分解生成物；スポット２：Ｒｆ＝０．４８、ビス−メトキシトリチル誘導体；スポット３：Ｒｆ＝０．４４、メトキシトリチル誘導体；スポット４：Ｒｆ＝０．３９、メトキシトリチル誘導体；スポット５：Ｒｆ＝０．２１、未反応のジオール。水（２０ｍｌ）、重炭酸ナトリウム（１Ｍ、２０ｍｌ）、および酢酸エチル（５０ｍｌ）を加えた。水相を酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で更に３回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固させた。これらの化合物をフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：第三級ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８〜第三級ブチルメチルエーテル／メタノール＝２／８）により分離して分画１：Ｒｆ＝０．４８、４０ｍｇ、９．５％；分画２：Ｒｆ＝０．４４、化合物１９、４６ｍｇ、１５．０％；分画３：Ｒｆ＝０．３９、化合物２０、４６ｍｇ、１５．０％；分画４：Ｒｆ＝０．２１、化合物１８、３０ｍｇ、１４．３％を取得した。１α−（Ｎ，Ｎ−ジベンゾイル−アデニル）−３，３−ビス−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン：分画１、１α−（Ｎ，Ｎ−ジベンゾイル−アデニル）−３α−ヒドロキシメチル−３β −メトキントリチルオキシメチル−シクロブタン１９：分画２、１α−（Ｎ，Ｎ−ジベンゾイル−アデニル）−３β−ヒドロキシメチル−３α −メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン２０：分画３、実施例１５１ａ−（Ｎ−ベンゾイル−アデニル）−３，３−ビス−ヒドロキシメチル−シクロブタン２１４Ｍの塩酸水溶液（２００ｍｌ）を、シオキサン（１０ｍｌ）および水（１ｍ１）中の１７（１．００ｇ、２．５４ミリモル）の溶液に加えた。この混合物を室温で５時間撹拌し（ＴＬＣで判定：酢酸エチル／メタノール＝７／３）、反応が完了した後に、この溶液を固形の重炭酸ナトリウムで中和し、蒸発乾固させた。得られる油状物をフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル〜酢酸エチル／メクノール＝８／２）により精製して無色結晶として２１（７００ｍｇ、７８％）を取得した。この化合物は非常に安定という訳ではなく、そして長い期間は冷凍庫内に保存することができなかった。実施例１６１α−（Ｎ−ベンゾイル−アデニル）−３α−ヒドロキシメチル−３β−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン２２および１α−（Ｎ−ベンゾイル− アデニル）−３β−ヒドロキシメチル−３α−メトキシトリチルオキシメチル− シクロブタン２３：メトキシトリチルクロリド（４８１ｍｇ、１．５６ミリモル）をアルゴン雰囲気下、２時間ごとに１００ｍｇずつ、ジメチルアミノピリジン（１００ｍｇ）を含む１７（５００ｍｇ、１．４１ミリモル）のピリジン（５ｍｌ）溶液に加えた。反応混合物は室温で１５時間撹拌した（ＴＬＣで判定：酢酸エチル／メタノール＝８／２）。ＴＬＣ上、５つのスポットが確認された：スポット１：Ｒｆ＝０．９５、メトキシトリチルクロリドの分解産物；スポット２：Ｒｆ＝０．８０、ビスーメトキシトリチル誘導体；スポット３：Ｒｆ＝０．４０、メトキシトリチル誘導体；スポット４：Ｒｆ＝０．３５、メトキシトリチル誘導体；スポット５：Ｒｆ＝０．１０、未反応ジオール。メトキシトリチルクロリドをさらに２回加えても（２ｘ１００ｍｇ）反応はこれ以上進行しなかった。水（１ｍｌ）を加え、溶液を酢酸エチルで６回抽出し（６ｘ１５ｍｌ）、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発乾固させた。混合物をフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ヘキサン＝１／１から酢酸エチル／メタノール＝７／３）で分離すると次の分画が得られた：分画１：１００ｍｇ、８％、ビスーメトキシトリチル誘導体；分画２：２４０ｍｇ、２７％、メトキシトリチル−β−誘導体２２；分画３：８０ｍｇ、９％、メトキシトリチル−α−誘導体２３；分画４：５０ｍｇ、１０％未反応ジオール１７。１α−（Ｎ−ベンゾイル−アデニル）−３，３−ビス−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン：分画１、Ｃ₅₆Ｈ₅₁Ｎ₅Ｏ₅、ＭＷ＝８７４．０５４；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：９．５５（ｓ：ＮＨ）；８．７０（ｓ：Ｈ_2ad）；８．０５（ｄ：２Ｈ_ar）；７．９５（ｓ：Ｈ_8ad）；７．４５（ｍ：１０Ｈ_ar）；７．２５（ｍ：１７Ｈ_ar）；６．８５（ｍ：４Ｈ_ar）；４．９５（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁ ）；３．７５（ｓ：２ＣＨ₃Ｏ）；３．４７（ｓ：ＣＨ₂Ｏ_a）；３．４２（ｓ：ＣＨ₂Ｏ_b）；２．５５（ｍ：Ｈ₂＋Ｈ₄）。１α−（Ｎ−ベンゾイル−アデニル）−３α−ヒドロキシメチル−３β−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン２２：分画２、ＭＰ＝１９４℃；Ｉ．Ｒ（フィルム）：３３９６、２９３５、１７００、１６１１、１５８１、１５０８、１４５３；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、３６０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：９．１０（ｓ：ＮＨ）；８．７９（ｓ：Ｈ_2ad）；８．１２（ｓ：Ｈ_8ad）；８．０５（ｄ：Ｈ_{o phco}）；７．６１（ｔ：Ｈ_{p phco}）；７．５３（ｔ：２Ｈ_ar）；７．４９（ｄ：４Ｈ_ar）；７．３９→７．２５（ｍ：８Ｈ_ar ）；６．９０（ｄ：４Ｈ_{m PhoMe}）；４．９８（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．８３（ｓ：ＣＨ₃Ｏ）；３．７６（ｓ：ＣＨ₂ＯＨ）；３．３２（ｓ：ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅ）；２．９０（ｍ：ＡＢＸ，Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；２．５２（ｍ：ＡＢＸ，Ｈ_2b＋Ｈ_4b ）。¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１６５．２９：ＣＯ；１５９．１６：Ｃ_6ad；１５２．６１：Ｃ_2ad；１５２．５５：Ｃ_{p PhoMe}；１５０．８０：Ｃ_4ad；１４４．７１：Ｃ_8ad；１４２．６５：Ｃ_{r ph}；１３５．７０：Ｃ_{r PhoMe}；１３４．１６：Ｃ_{r Phco}；１３３．２０：Ｃ_{p Phco}；１３０．９５：Ｃ_{m Phco}；１２９．２８：Ｃ_{o Phco}；１２８．８８：Ｃ_{m Ph}；１２８．４４：Ｃ_{o Ph}＋Ｃ_{o PhoMe}；１２７．５８：Ｃ_{p Ph}；１２３．５０：Ｃ_5ad；１１３．７１：Ｃ_{m PhoMe}；６７．７７：ＣＨ₂Ｏ_a；６７．２９：ＣＨ₂Ｏ_b；５５．７７：Ｃ₁；４５．３６：Ｃ₃；３９．３２：Ｃ₂；３３．６８：Ｃ₄；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、３６０ＭＨｚ）ＮＯＥ実験：Ｈ₁照射：ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅ、Ｈ_2b＋Ｈ_4b、Ｈ_8ad がＮＯＥ陽性であり、ＣＨ₂ＯＨには変化はなかった、ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅ照射：ＣＨ₂ＯＨおよびＨ₁がＮＯＥ陽性；Ｕ．Ｖ．（エタノール、０．５ｘ１０^-4モル／１）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２３１（２２７４０），２８１（１７０６０）；Ｃ₃₇Ｈ₃₅Ｎ₅Ｏ₄：ＭＷ：６２５．７３０。ＦＡＢ−ＭＳ：６２６＝ＭＨ⁺；５２２＝Ｍ−ＰｈＣＯ；３５２＝Ｍ−ＴｒＯＭｅ；２７３＝ＭｅＯＴｒ⁺；２４０＝ＰｈＣＯＮＨ−ＡｄＨ⁺。１α−（Ｎ−ベンゾイル−アデニル）−３β−ヒドロキシメチル−３α−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン２３：分画３、ＭＰ＝１１２℃；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、３６０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：９．１６（ｓ：ＮＨ）；８．７３（ｓ：Ｈ_2ad）；８．０５（ｄ：Ｈ_{o Phco}）；７．９８（ｓ：Ｈ_8ad）；７．４７→７．１５（ｍ：１３Ｈ_ar）；６．８７（ｄ：４Ｈ_{m PhoMe}）；５．１０（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．８５（ｓ：ＣＨ₂ＯＨ）；３．７２（ｓ：ＣＨ₃Ｏ）；３．３３（ｓ：ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅ）；２．５３（ｄ：Ｈ₂＋Ｈ₄）。¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１６５．３０：ＣＯ；１５９．１２：Ｃ_6ad；１５０．８０：Ｃ_2ad；１５０．４０：Ｃ_{p PhoMe}；１４８．００：Ｃ_4ad；１４２．０５：Ｃ_8ad；１３５．８３：Ｃ_{r PhoMe}；１３４．２９：Ｃ_{r Phco}；１３３．１３：Ｃ_{p Phco}；１３０．８１：Ｃ_{m Phco}；１２９．１９：Ｃ_{o Phco}；１２８．８９：Ｃ_{m Ph}；１２８．５４：Ｃ_{o Ph}；１２８．４３：Ｃ_{o PhoMe}；１２７．５８：Ｃ_{p Ph}；１２３．５２：Ｃ_5ad；１１３．７０：Ｃ_{m PhoMe}；６８．８２：ＣＨ₂Ｏ_a；６７．１９：ＣＨ₂Ｏ_b；５５．７２：Ｃ₁ ；４５．７７：Ｃ₃；３８．９５：Ｃ₂；３４．５３：Ｃ₄；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、３６０ＭＨｚ）ＮＯＥ実験：Ｈ₁照射：ＣＨ₂ＯＨ、Ｈ₂＋Ｈ₄、Ｈ_8adがＮＯＥ陽性であり、ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅには変化はなかった、ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅ照射：ＣＨ₂ ＯＨ、Ｈ₂＋Ｈ₄がＮＯＥ陽性であり、およびＨ₁には変化はなかった、ＣＨ₂ＯＨ照射：ＣＨ₂ＯＴｒＯＭｅ、Ｈ₂＋Ｈ₄、ＯＨおよびＨ₁がＮＯＥ陽性；Ｕ．Ｖ．（エタノール、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２３０（２４８８０）；２８１（１８０４０）；Ｃ₃₇Ｈ₃₅Ｎ₅Ｏ₄：ＭＷ：６２５．７３０。ＦＡＢ−ＭＳ：６２６＝ＭＨ⁺；５２２＝Ｍ−ＰｈＣＯ；３５２＝Ｍ− ＴｒＯＭｅ；２７３＝ＭｅＯＴｒ⁺；２４０＝ＰｈＣＯＮＨ−ＡｄＨ⁺。実施例１７１α−（Ｎ−ベンゾイル−アデニル）−３α−ヒドロキシメチル−３β−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン２２：１９（２００ｍｇ、０．２７４ミリモル）のテトラヒドロフラン（２ｍｌ）および水（５００ｍｌ）溶液に濃アンモニア水（２００ｍｌ）を加えた。混合物を室温で５時間撹拌し（ＴＬＣで判定：酢酸エチル／メタノール＝８／２）、蒸発乾固させた。得られた油状物をフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／メタノール＝７／３）で精製すると１００ｍｇ（５９％）の無色の結晶が得られた。実施例１８１α−（Ｎ−ベンゾイル−アデニル）−３β−ヒドロキシメチル−３α−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン２３：２２と同様の方法により、２０（２００ｍｇ、０．２７４ミリモル）から２３（１００ｍｇ、５９％）が無色の結晶として得られた。実施例１９１α−ベンジルオキシ−３−ビス−カルボキシ−シクロブタン２６：４（２３．７１ｇ、７７．３９ミリモル）の水（５７ｍｌ）およびエタノール（１７１ｍｌ）溶液に４Ｍ水酸化カリウム水溶液（７７．４ｍｌ、３０９．６ミリモル）を加えた。反応混合物は５時間撹拌しながら還流した後、蒸発乾固させた。残渣（約２１ｇ）を２Ｍ水性塩酸（約１６０ｍｌ）でｐＨ＝３に調整した。酢酸エチル（１５０ｍｌ）を加え、水相を４回酢酸エチルで抽出した（４ｘ１５０ｍｌ）。有機相は硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固させた。油状残渣をトルエンと２回（２ｘ１００ｍｌ）蒸発させると、二酸２６が結晶化した；Ｃ₁₃Ｈ₁₄ Ｏ₅；ＭＷ＝２５０．２５４、黄色結晶、ＭＰ＝１６０−１６２℃；ＩＲ（フィルム）：３４７０、２９２６、２８５６、１７２８、１４９７、１４５３；¹Ｈ（ＤＭＳＯ、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：７．３２（ｓ：５Ｈ_ar）；４．９８（ｓ：ＣＯＯＨ）；４．４５（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．１５（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；２．７５（ｍ：ＡＢＸ、Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；２．４５（ｍ：ＡＢＸ，Ｈ_2b＋Ｈ_4b）；¹³Ｃ（ＤＭＳＯ、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１７６．１０：ＣＯ；１７５．６０：ＣＯ；１３９．７８：Ｃ_r；１２９．７２：Ｃ_o；１２９．６６：Ｃ_m ；１２９．３８：Ｃ_p；７１．４９：Ｃ₁；６９．３３：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；４７．２５：Ｃ₃；３９．０８：Ｃ₂＋Ｃ₄。実施例２０１α−ベンジルオキシ−３α−カルボキシ−シクロブタン２７シスおよび１α−ベンジルオキシ−３β−カルボキシ−シクロブタン２７トランス：二酸２６をクーゲルロール蒸留装置中、２１５℃および０．４Ｔｏｒｒで脱炭酸した。二つの一酸２７シスおよび２７トランスの１：１混合物が得られた。この段階では二つの異性体はフラッシュクロマトグラフィーで分離できなかった（両方の化合物に対してＴＬＣ上では一つのスポット：クロロホルム／メタノール／水＝６５／３０／５）：ジエステル４から出発して、２７シス＋２７トランス：１４．６９ｇ、８８．６％；Ｃ₁₄Ｈ₁₄Ｏ₂；ＭＷ＝２１４．２６５：ＩＲ（フィルム）：３２００、２９２６、２８５４、２３５０、１７３２、１６０３、１４９６、１４５４；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１１．４０（ｓ：ＣＯＯＨ）；７．３５（ｓ：５Ｈ_ar）；４．４５（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．３５（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．９８（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．１０（ｍ：Ｈ₃）；２．６８（ｍ：Ｈ₃）；２．５５（ｍ：ＡＢＸ、Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；２．３５（ｍ：ＡＢＸ，Ｈ_2b＋Ｈ_4b）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１８２．８５：ＣＯ；１８１．１３：ＣＯ；１３８．５１：Ｃ_r；１３８．４５：Ｃ_r；１２９．００：Ｃ_o；１２８．４５：Ｃ_m；１２８．３３：Ｃ_p；７１．７８：Ｃ₁；７０．７０：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；７０．５２：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；６８．７８：Ｃ₁；３４．２４：Ｃ₂；３４．１３：Ｃ₂；３３．６０：Ｃ₄；３３．４６：Ｃ₄；３１．９５：Ｃ₃；２９．５６：Ｃ₃。実施例２１１α−ベンジルオキシ−シクロブタン−３α−カルボン酸クロリド２８シスおよび１α−ベンジルオキシ−シクロブタン−３β−カルボン酸クロリド２８トランス：２７シス＋２７トランス（２８．６１ｇ、１３３．５ミリモル）の四塩化炭素（２３０ｍｌ）溶液に０℃で１時間以上かけてオキザリルクロリド（４２．３ｍｌ、４８５ミリモル）をそのまま徐々に加えた。反応はＣＯ₂ガスの発生を伴ってすぐに始まった。混合物は０℃で１時間撹拌した後、室温で１２時間撹拌した。この溶液を蒸発乾固させると２８シス＋２８トランスの１：１混合物が得られた：３１．１３ｇ、９９．５％；Ｃ₁₂Ｈ₁₃ＣｌＯ₂；ＭＷ＝２３４．３６３；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：７．３５（ｓ：５Ｈ_ar）；４．４８（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．４２（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．２２（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．９８（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．５５（ｍ：Ｈ₃）；３．０８（ｍ：Ｈ₃）；２．６８（ｍ：ＡＢＸ、Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；２．３５（ｍ：ＡＢＸ，Ｈ_2b＋Ｈ_4b）：₁₃Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１５７．００：ＣＯ；１５６．２２：ＣＯ；１３８．１７：Ｃ_r；１３８．１４：Ｃ_r；１２９．０９：Ｃ_o；１２８．７９：Ｃ_o；１２８．６１：Ｃ_m；１２８．５２：Ｃ_m；１２８．１２：Ｃ_p；７０．９３：Ｃ₁；７０．７０：ＣＨ₂、Ｂｚｌ：６７．７２：Ｃ₁；４４．３７：Ｃ₃；４１．８６：Ｃ₃；３５．１４：Ｃ₂；３４．０８：Ｃ₄。実施例２２１α−ベンジルオキシ−３ａ−カルボエトキシ−シクロブタン２９シスおよび１α−ベンジルオキシ−３β−カルボエトキシ−シクロブタン２９トランス：酸クロリド２８シス＋２８トランス（３１．１３ｇ、１３２．８ミリモル）を四塩化炭素（５０ｍｌ）およびトルエン（５０ｍｌ）の存在下に２度蒸発させた。２８シス＋２８トランスの四塩化炭素（５０ｍｌ）溶液にアルゴン雰囲気下０℃にてエタノール（１００ｍｌ）を徐々に加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌した後（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８）、蒸発乾固させた。エチルエステル異性体はフラッシュクロマトグラフィーにより（溶出液：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８から８／２）分離された。両方の異性体を含んでいる分画は同じ溶媒で再びクロマトグラフィーを行うと、一酸２７シス＋２７トランスの混合物から出発して、分画１：Ｒｆ＝０．２８、化合物２９ランス、１２．０２ｇ、３８．４％および分画２：Ｒｆ＝０．２２、化合物２９シス、１１．９４ｇ、３８．２％が得られた。１α−ベンジルオキシ−３β−カルボエトキシ−シクロブタン２９トランス：分画１、ＭＷ＝２３４．２９６；ＩＲ（フィルム）：２９８６、２９４５、１７３１、１６０４、１４９６、１３７４、１３５４，¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：７．３５（ｓ：Ｐｈ）；４．４８（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．３２（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；４．１８（ｑ：ＣＨ₂、Ｅｔ）；３．０８（ｔｔ：Ｈ₃）；２．５５（ｍ：Ｈ_2b＋Ｈ_4b）；２．３５（ｍ：Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；１．３５（ｔ：ＣＨ₃、Ｅｔ）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、１００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１７６．８：ＣＯ；１３８．０：Ｃ_{r Ph}；１２８．２：Ｃ_{o Ph}；１２７．６：Ｃ_mP _h ；１２７．５：Ｃ_{p Ph}；７１．５：Ｃ₁；７０．４：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；６０．２：ＣＨ₂、Ｅｔ；３３．４：Ｃ₂＋Ｃ₄；３２．０：Ｃ₃；１４．１：ＣＨ₃、Ｅｔ；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）ＮＯＥ実験：Ｈ_2b照射：Ｈ₁がＮＯＥ陽性であり、Ｈ₃およびＥｔには変化はなかった；Ｈ_2a照射：Ｈ₃およびＥｔがＮＯＥ陽性であり、Ｈ₁には変化はなかった。元素分析Ｃ₁₄Ｈ₁₈Ｏ₃＋０．０６Ｈ₂Ｏとして計算値：Ｃ７１．４４、Ｈ７．７６、Ｏ２０．８０；実測値：Ｃ７１．２６、Ｈ７．７８、Ｏ２０．６３。１α−ベンジルオキシ−３α−カルボキエトキシ−シクロブタン２９シス：分画２、ＭＷ＝２３４．２９６；ＩＲ（フィルム）：２９８６、２９４３、２８６５、１７３１、１６０４、１４９６、１４５４；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：７．３５（ｓ：Ｐｈ）；４．３８（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．０８（ｑ：ＣＨ₂、Ｅｔ）；３．８６（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；２．６０（ｍ：Ｈ₃）；２．４０（ｍ：Ｈ_2b＋Ｈ_4b）；２．２０（ｍ：Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；１．３２（ｔ：ＣＨ₃、Ｅｔ）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、１００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１７４．３８：ＣＯ；１３８．０２：Ｃ_{r Ph}；１２８．３２：Ｃ_{o Ph}；１２７．６７：Ｃ_{m Ph}；１２７．６０：Ｃ_{p Ph}；６９．８２：Ｃ₁；６８．２８：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；６０．２９：ＣＨ₂、Ｅｔ；３３．６９：Ｃ₂＋Ｃ₄；２９．０４：Ｃ₃；１３．８８：ＣＨ₃、Ｅｔ；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）ＮＯＥ実験：Ｈ_2b照射：Ｈ₁およびＨ₃がＮＯＥ陽性；Ｈ_2a照射：Ｈ₃およびＨ₁には変化はなかった。元素分析Ｃ₁₄Ｈ₁₈Ｏ₃＋０．１１Ｈ₂Ｏとして計算値：Ｃ７１．１７、Ｈ７．７７、Ｏ２１．０６；実測値：Ｃ７１．０６、Ｈ７．６５、Ｏ２０．９３。実施例２３１α−ベンジルオキシ−３α−カルボエトキシ−シクロブタン２９シスおよび１α−ベンジルオキシ−３β−カルボエトキシ−シクロブタン２９トランス：４（１１．５６ｇ、３７．７６ミリモル）、水（１．３０ｍｌ、７５．５２ミリモル）および塩化ナトリウム（２．２１ｇ、３７．７６ミリモル）のジメチルスルホキシド（１９ｍｌ）溶液を２１０℃に４８時間加熱した（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８）。ＴＬＣ上に３つのスポットが観察された：スポット１：Ｒｆ＝０．２８、２９トランス、スポット２：Ｒｆ＝０．２２、２９シス、スポット３：Ｒｆ＝０．１８、ジエステル４。食塩水（１５０ｍｌ）を加え、溶液を７回ジエチルエーテルで抽出し（７ｘ１００ｍｌ）、硫酸マグネシウムで乾燥させた後蒸発乾固させた。混合物はフラッシュクロマトグラフィーにより（溶出液：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８から８／２）分離された。両方の異性体を含んでいる分画は同じ溶媒で再びクロマトグラフィーを行うと、分画１：Ｒｆ＝０．２８、化合物２９トランス、３．３４ｇ、３７．９％および分画２：Ｒｆ＝０．２２、化合物２９シス、４．４３ｇ、５０．１％が得られた。実施例２４１α−ベンジルオキシ−３α−ヒドロキシメチル−シクロブタン３０シスおよび１α−ベンジルオキシ−３β−ヒドロキシメチル−シクロブタン３０トランス：水素化アルミニウムリチウム（１．３９ｇ、３６．３６ミリモル）をアルゴン雰囲気下ジメトキシエタン（５０ｍｌ）中で撹拌した。２７シス＋２７トランス１：１混合物（５．１９ｇ、２４．２１ミリモル）のジメトキシエタン（１０ｍｌ）溶液を冷却なしで滴加した。懸濁液は８５℃で６０時間機械的に撹拌した（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝９／１、１つのスポットしか観察されなかった）。冷却した後、懸濁液が灰色から白色へ変わるまで水（１００ｍｌ）を徐々に加えた。この懸濁液を蒸発乾固させ、テトラヒドロフランおよび酢酸エチル９／１の混合物（１００ｍｌ）を加えてハイフロを通して濾過した。沈澱物は同じ溶媒混合物で３回洗浄し（３ｘ５０ｍｌ）、得られた溶液は蒸発乾固させた。異性体の１：１混合物をフラッシュクロマトグラフィーにより（溶出液：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝１／１から第三ブチルメチルエーテル）精製すると３０シス＋３０トランスが得られた：４．６０ｇ、９８．８％；ＭＷ＝１９２．２５８；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：７．３６（ｓ：Ｐｈ）；４．３２（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．３０（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．１５（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．８５（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．６０（ｄ：ＣＨ₂ＯＨ）；２．３３（ｍ：Ｈ_2b＋Ｈ_4b）；２．０８（ｍ：Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；１．９０（ｍ：Ｈ₃）：¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１３８．７９：Ｃ_r _Ph；１３８．７４：Ｃ_r _Ph；１２８．９３：Ｃ_o _Ph ；１２８．４６：Ｃ_m _Ph；１２８．４１：Ｃ_p _Ph；１２８．１８：Ｃ_p _Ph；７２．２２：Ｃ₁：６９．８５：Ｃ₁；７０．３７：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；６７．３６：ＣＨ₂ＯＨ；６６．８５：ＣＨ₂ＯＨ；３２．２５：Ｃ₂；３２．００：Ｃ₄；３０．０１：Ｃ₃；２８．５２：Ｃ₃。元素分析Ｃ₁₂Ｈ₁₆Ｏ₂として計算値：Ｃ７４．９７、Ｈ８．３９、Ｏ１６．６４；実測値：Ｃ７５．００、Ｈ８．４０、Ｏ１６．６９。実施例２５１α−ベンジルオキシ−３α−ヒドロキシメチル−シクロブタン３０シス：水素化アルミニウムリチウム（６０７ｍｇ、１６．００ミリモル）をアルゴン雰囲気下ジメトキシエタン（５０ｍｌ）中で撹拌した。エステル２９シス（５．１３ｇ、２１．９０ミリモル）をそのまま、冷却なしで加えた。懸濁液は８５ ℃で６０時間機械的に撹拌した（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝９／１）。冷却後、懸濁液が灰色から白色へ変わるまで水（１００ｍｌ）を徐々に加えた。この懸濁液を蒸発乾固させ、テトラヒドロフランおよび酢酸エチル９／１の混合物（１００ｍｌ）を加え、得られた懸濁液をハイフロを通して濾過した。沈澱物は同じ溶媒混合物で３回洗浄し（３ｘ５０ｍｌ）、得られた溶液は蒸発乾固させた。化合物はフラッシュクロマトグラフィーにより（溶出液：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝１／１から第三ブチルメチルエーテル）精製され、３０シスが得られた：３．８７ｇ、９１．９％；ＭＷ＝１９２．２５８，ＩＲ（フィルム）：３３９８、２９７４、２９９１、２９３３、２８６１、１９５１、１８７８、１８１２；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：７．３３（ｓ：Ｐｈ）；４．３０（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；３．８６（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．６０（ｄ：ＣＨ₂ＯＨ）；２．３３（ｍ：Ｈ_2b＋Ｈ_4b）；２．０８（ｍ：Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；１．９０（ｍ：Ｈ₃）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１３８．７２：Ｃ_{r Ph}；１２８．９３：Ｃ_{o Ph}；１２８．４２：Ｃ_{m Ph}；１２８．１４：Ｃ_{p Ph}；６９．８５：Ｃ₁；７０．３７：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；６６．８５：ＣＨ₂ＯＨ；３２．２５：Ｃ₂；３２．００：Ｃ₄；２８．５２：Ｃ₃。元素分析Ｃ₁₂Ｈ₁₆Ｏ₂として計算値：Ｃ７４．９７、Ｈ８．３９、Ｏ１６．６４；実測値：Ｃ７５．００、Ｈ８．４０、Ｏ１６．６９。実施例２６１α−ベンジルオキシ−３β−ヒドロキシメチル−シクロブタン３０トランス：３０シスと同様の方法を用いて、２９トランス（５．０ｇ、２１．３４ミリモル）から３０トランスが得られた：３．７０ｇ、９０．２％；ＭＷ＝１９２．２５８；ＩＲ（フィルム）：３４１５、３０３１、２９７０、２９３４、２８６３、１９５４、１８７７、１８１２；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ（Ｊ：Ｈｚ）：７．３５（ｓ：Ｐｈ）；４．３７（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．１２（ｑｕｉｎｔ：Ｊ：６．５、Ｈ₁）；３．５９（ｄ：Ｊ：７．０、ＣＨ₂ＯＨ）；２．３５（ｍ：Ｈ₃）；２．１１（ｍ：Ｈ₂＋Ｈ₄）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１３８．７８：Ｃ_{r Ph}；１２８．９０：Ｃ_{o P} _h ；１２８．３６：Ｃ_{m Ph}；１２８．１２：Ｃ_{p Ph}；７２．１５：Ｃ₁；７０．３４：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；６７．０５：ＣＨ₂ＯＨ；３１．９９：Ｃ₂＋Ｃ₄；２９．９６：Ｃ₃。元素分析Ｃ₁₂Ｈ₁₆Ｏ₂として計算値：Ｃ７４．９７、Ｈ８．３９、Ｏ１６．６４；実測値：Ｃ７５．００、Ｈ８．４０、Ｏ１６．６９。実施例２７１α−ベンジルオキシ−３α−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３１シス：第三ブチルジフェニルクロロシラン（１６．３９ｍｌ、６３．００ミリモル）をそのまま、アルゴン雰囲気下０℃にて３０シス（１０．０９ｇ、５２．４９ミリモル）およびイミダゾール（７．１５ｇ、１０５．０ミリモル）のジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）溶液に加えた。反応混合物は室温で２０時間撹拌した（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝５／９５）。ＴＬＣ上２つのスポットが観察された：スポット１：３１シスおよびスポット２：第三ブチルジフェニルシリルヒドロキシド。水（２５０ｍｌ）を加え、溶液を３回酢酸エチルで抽出した（３ｘ３００ｍｌ）。合わせた有機相を水（１５０ｍｌ）および食塩水（１５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して蒸発乾固させた。フラッシュクロマトグラフィーにより（溶出液：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝１／９９から５／９５）３１シスが無色油状物として得られた（１８．５０ｇ、８１．２％）；ＭＷ＝４３０．６６５；ＩＲ（フィルム）：３０７０、３０４９、２９３１、２８９２、２８５７、１９５９、１８９０、１８２４、１７２２、１５８９、１５６８；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ（Ｊ：Ｈｚ）：７．６８（ｍ：４Ｈ_ar）；７．３８（ｍ：１１Ｈ_ar）；４．４２（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；３．９５（ｑｕｉｎｔ：Ｊ：６．０、Ｈ₁）；３．６７（ｄ：Ｊ：６．０、ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．３３（ｑ：Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；２．１０（ｍ：Ｈ₃）；１．８７（ｔ：Ｈ_2b＋Ｈ_4b）；１．１０（ｓ：ＣＨ₃、ｔＢｕ）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１３９．０４：Ｃ_{r Ph}；１３６．１８：Ｃ_{o PhSi}；１３４．５４：Ｃ_{r PhSi}；１３０．１０：Ｃ_{p PhSi}；１２８．８９：Ｃ_{o Ph}；１２８．４０：Ｃ_{m Ph}；１２８．１７：Ｃ_{m PhSi}；１２８．０７：Ｃ_{p Ph}；７０．１９：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；６９．８７：Ｃ₁；６７．９４：ＣＨ₂ＯＳｉ；３３．１６：Ｃ₂＋Ｃ₄；２８．５３：Ｃ₃；２７．２１：ＣＨ₃、ｔＢｕ；１９．６４：Ｃ、ｔＢｕ；Ｕ．Ｖ．（メタノール、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２５９（８４０）；２６５（９２０）。元素分析Ｃ₂₈Ｈ₃₄Ｏ₂Ｓｉとして計算値：Ｃ７８．０９、Ｈ７．９６、Ｓｉ６．５２、Ｏ７．４３；実測値：Ｃ７８．０２、Ｈ８．１８、Ｓｉ６．６７。実施例２８１α−ベンジルオキシ−３β−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３１トランス：第三ブチルジフェニルクロロシラン（３．２４ｍｌ、１２．４８ミリモル）をそのまま、アルゴン雰囲気下０℃にて３０トランス（２ｇ、１０．４０ミリモル）およびイミダゾール（１．４２ｇ、２０．８０ミリモル）のジメチルホルムアミド（８０ｍｌ）溶液に加えた。反応混合物は室温で６４時間撹拌した（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝５／９５）。ＴＬＣ上２つのスポットが観察された：スポット１：３１トランスおよびスポット２：第三ブチルジフェニルシリルヒドロキシド。酢酸エチル（２００ｍｌ）および水（５０ｍｌ）を加え、水相を２回酢酸エチルで抽出した（２ｘ２００ｍｌ）。合わせた有機相を食塩水で２度（２ｘ５０ｍｌ）洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して蒸発乾固させた。フラッシュクロマトグラフィーにより（溶出液：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝１／９９から５／９５）３１トランスが無色油状物として得られた（４．４０ｇ、９８．２％）；ＭＷ＝４３０．６６５；ＩＲ（フィルム）：３０７１、３０５０、３０３２、２９３２、２８９２、２８５７、１９５８、１８８９、１８２１、１７２１、１５８９；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ（Ｊ：Ｈｚ）：７．６８（ｍ：４Ｈ_ar）；７．５０→７．３０（ｍ：１１Ｈ_ar）；４．３８（ｓ：ＣＨ₂、Ｂｚｌ）；４．１７（ｑｕｉｎｔ：Ｊ：６．０、Ｈ₁）；３．６７（ｄ：Ｊ：６．０、ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．４２（ｍ：Ｈ₃）；２．１５（ｍ：Ｈ₂＋Ｈ₄）；１．０５（ｓ：ＣＨ₃、ｔＢｕ）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１３８．５０：Ｃ_{r Ph}；１３６．１８：Ｃ_{o PhSi}；１３３．０４：Ｃ_{r PhSi}；１３０．１３：Ｃ_{p PhSi}；１２８．９０：Ｃ_{o Ph}；１２８．３９：Ｃ_{m Ph}；１２８．１７：Ｃ_{m PhSi}；１２８．０７：Ｃ_{p Ph}；７２．０８：Ｃ₁；７０．３０：ＣＨ₂、Ｂｚｌ；６７．４３：ＣＨ₂ＯＳｉ；３２．１１：Ｃ₂＋Ｃ₄；３０．０６：Ｃ₃；２７．１８：ＣＨ₃、ｔＢｕ；１９．５８：Ｃ、ｔＢｕ；Ｕ．Ｖ．（メタノール、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２５３（８００）；２５９（９６０）；２６４（７６０）；２７０（６４０）。元素分析Ｃ₂₈Ｈ₃₄Ｏ₂Ｓｉとして計算値：Ｃ７８．０９、Ｈ７．９６、Ｓｉ６．５２、Ｏ７．４３；実測値：Ｃ７７．８０、Ｈ７．９５、Ｓｉ６．４８。実施例２９１α−ヒドロキシ−３α−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３２シス：デグッサパラジウム（５００ｍｇ）をジメトキシエタン（２５０ｍｌ）に加え水素雰囲気にした。次に３１シス（１０ｇ、２３．２７ミリモル）をそのまま加えた。反応混合物は１当量の水素（２０９ｍｌ）が吸収されるまで１気圧の水素圧下室温で激しく振とうさせた（約８時間）。ハイフロで触媒を濾去した後、溶液を蒸発乾固させると３２シスが無色シロップ状物として得られた（７．８０ｇ、９９．２％）；ＭＷ＝３４０．５４；（第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８）、Ｒｆ＝０．１１；ＩＲ（フィルム）：３３４２、３１３５、３０７１、３０５０、２９２９、２８９３、２８５６、１９５９、１８８８、１８２４、１７７６、１７４１；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ（Ｊ：Ｈｚ）：７．７０（ｄｄ：４Ｈ_ar）；７．４０（ｓ：Ｃ_{p PhSi}）；７．３０（ｄｄ：４Ｈ_ar）；４．２７（ｑｕｉｎｔ：Ｊ：７．０、Ｈ₁）；３．６７（ｄ：Ｊ：７．０、ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．３０（ｍ：ＡＢＸＨ_2a＋Ｈ_4a）；２．２０（ｍ：Ｈ₃）；１．９５（ｍ：ＡＢＸＨ_2b＋Ｈ_4b）；１．１０（ｓ：ＣＨ₃、ｔＢｕ）；Ｕ．Ｖ．（メタノール、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２５９（６００）；２６４（６４０）；２７０（４４０）。元素分析Ｃ₂₁Ｈ₂₈Ｏ₂Ｓｉとして計算値：Ｃ７４．０７、Ｈ８．２９、Ｓｉ８．２５、Ｏ９．３９；実測値：Ｃ７４．２９、Ｈ８．１２、Ｓｉ８．３３。実施例３０１α−ヒドロキシ−３β−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３２トランス：３２シスと同様の方法を用いて３１トランス（１０ｇ、２３．２７ミリモル）から３２トランスが無色シロップ状物として得られた（７．９５ｇ、９９．７％）；ＭＷ＝３４０．５４；（第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８）、Ｒｆ＝０．１１；ＩＲ（フィルム）：３０７０、３０５０、２９６０、２９２０、２８５０、１９６０、１８９０、１８２０、１７７０、１７４０；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ（Ｊ：ＨＺ）：７．７０（ｄｄ：４Ｈ_ar）；７．４５（ｓ：Ｃ_{p PhSi}）；７．４０（ｄｄ：４Ｈ_ar）；４．４７（ｑｕｉｎｔ：Ｊ：７．０、Ｈ₁）；３．６７（ｄ：Ｊ：７．０、ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．４４（ｍ：Ｈ₃）；２．２５（ｍ：ＡＢＸＨ_2a＋Ｈ_4a）；２．０５（ｍ：ＡＢＸＨ_2b＋Ｈ_4b）；１．１０（ｓ：ＣＨ₃、ｔＢｕ）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１３６．１６：Ｃ_{o PhSi}；１３４．３２：Ｃ_{r PhSi}；１３０．１８：Ｃ_{p PhSi}；１２８．１６：Ｃ_{m PhSi}；６７．３１：ＣＨ₂ＯＳｉ；６６．７２：Ｃ₁；３５．２６：Ｃ₂＋Ｃ₄；２９．３６：Ｃ₃；２７．１５：ＣＨ₃ 、ｔＢｕ；１９．５８：Ｃ、ｔＢｕ；Ｕ．Ｖ．（メタノール、０．５ｘ１０^-4 モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２５９（７６０）；２６４（８００）；２７０（５６０）。元素分析Ｃ₂₁Ｈ₂₈Ｏ₂Ｓｉとして計算値：Ｃ７４．０７、Ｈ８．２９、Ｓｉ８．２５、Ｏ９．３９；実測値：Ｃ７４．０６、Ｈ８．２１、Ｓｉ７．９９。実施例３１１α−ｐ−ブロモ−ベンゼンスルホニルオキシ−３α−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３３シス：ｐ−ブロモ−ベンゼンスルホニルクロリド（３．０２ｇ、１１．８２ミリモル）をそのままで、アルゴン雰囲気下室温で３２シス（３．３５ｇ、９．８５ミリモル）およびトリエチルアミン（９．６０ｍｌ、６８．９６ミリモル）のジクロロメタン（５０ｍｌ）溶液に加えた。反応混合物は室温で１５時間撹拌した（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８：Ｒｆ＝０．４０）。ＴＬＣ上ではもはやアルコールは観察されなかった。食塩水（５０ｍｌ）を加え反応混合物を酢酸エチルで３回抽出した（３ｘ２００ｍｌ）。合わせた有機分画を食塩水（５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固させた。フラッシュクロマトグラフィーにより（溶出液：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝５／９５から１／９）３３シスが得られた：４．２０ｇ、７６．２％；ＭＷ＝５５９．５９８；（第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８）、Ｒｆ＝０．４０；ジエチルエーテルから結晶化後ＭＰ＝８３．５−８４．５℃ ；ＩＲ（フィルム）：３０７１、２９３１、２８９３、２８５７、１５７６、１４７１；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ（Ｊ：Ｈｚ）：７．８０ →７．６０（ｍ：８Ｈ_ar）；７．４５→７．３２（ｍ：６Ｈ_ar）；４．７０（ｑｕｉｎｔ：Ｊ：７．０、Ｈ₁）；３．５２（ｄ：Ｊ：７．０、ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．３０→１．９５（ｍ：Ｈ₂＋Ｈ₃＋Ｈ₄）；１．０５（ｓ：ＣＨ₃、ｔＢｕ）；¹³ Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１３６．５０：Ｃ_{r Brs}；１３６．１０：Ｃ_{o PhSi}；１３４．０６：Ｃ_{r PhSi}；１３３．０８：Ｃ_{m Brs}；１３０．２４：Ｃ_{p PhSi}；１２９．８１：Ｃ_{o Brs}；１２９．２０：Ｃ_{p Brs}；１２８．２２：Ｃ_{m PhSi}；７２．３９：Ｃ₁；６５．８５：ＣＨ₂ＯＳｉ；３２．８５：Ｃ₂ ＋Ｃ₄；２８．８１：Ｃ₃；２７．１３：ＣＨ₃、ｔＢｕ；１９．５９：Ｃ、ｔＢｕ；Ｕ．Ｖ．（メタノール、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２２１（２３４００）；２５６（１２００）；２６３（１３００）。元素分析Ｃ₂₇Ｈ₃₁ＢｒＯ₄ＳＳｉとして計算値：Ｃ５７．９５、Ｈ５．５８、Ｂｒ１４．２８、Ｓ５．７３、Ｓｉ５．０２；実測値：Ｃ５７．７３、Ｈ５．６３、Ｂｒ１４．１１、Ｓ５．６７、Ｓｉ４．８５。実施例３２１α−ｐ−ブロモ−ベンゼンスルホニルオキシ−３β−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３３トランス：ｐ−ブロモ−ベンゼンスルホニルクロリド（２．０８ｇ、８．１４ミリモル）をそのままで、アルゴン雰囲気下室温で３２トランス（２．３１ｇ、６．７８ミリモル）およびトリエチルアミン（６．６１ｍｌ、４７．４８ミリモル）のジクロロメタン（５０ｍｌ）溶液に加えた。反応混合物は室温で３６時間撹拌した（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８：Ｒｆ＝０．４０）。さらにｐ−ブロモ−ベンゼンスルホニルクロリドを２回加えた（２ｘ２００ｍｇ、２ｘ０．８１ミリモル）。ＴＬＣ上ではもはやアルコールは観察されなかった。食塩水（３０ｍｌ）を加え反応混合物を酢酸エチルで３回抽出した（３ｘ２００ｍｌ）。合わせた有機分画を食塩水（５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固させると３３トランスが得られた：３．０４ｇ、８０．１％；；ＭＷ＝５５９．５９８；（第三ブチルメチルエーテル／ヘキサン＝２／８）、Ｒｆ＝０．４０；ジエチルエーテルから結晶化後ＭＰ＝８０−８１℃ ；ＩＲ（フィルム）：３０７０、２９４０、２８８０、２８６０、１５８０、１４７０；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ（Ｊ：Ｈｚ）：７．８０ →７．６０（ｍ：８Ｈ_ar）；７．４５→７．３２（ｍ：６Ｈ_ar）；４．９８（ｑｕｉｎｔ：Ｊ：７．０、Ｈ₁）；３．５８（ｄ：Ｊ：７．０、ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．３０（ｍ：Ｈ₂＋Ｈ₃＋Ｈ₄）；１．０５（ｓ：ＣＨ₃、ｔＢｕ）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１３６．５１：Ｃ_{r Brs}；１３６．１３：Ｃ_o _PhSi ；１３４．０２：Ｃ_{r PhSi}；１３３．０８：Ｃ_{m Brs}；１３１．１２：Ｃ_{o B} _rs ；１３０．５１：Ｃ_{p PhSi}；１２９．２０：Ｃ_{p Brs}；１２８．２０：Ｃ_{m PhS} _i ；７５．４６：Ｃ₁；６５．９２：ＣＨ₂ＯＳｉ；３２．９０：Ｃ₂＋Ｃ₄；３０．１５：Ｃ₃；２７．１６：ＣＨ₃、ｔＢｕ；１９．５６：Ｃ、ｔＢｕ；Ｕ．Ｖ．（メタノール、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２２０（２３０６０）；２３３（１６５００）；２５９（１３００）；２５９（１３００）；２６５（１４００）。元素分析Ｃ₂₇Ｈ₃₁ＢｒＯ₄ＳＳｉとして計算値：Ｃ５７．９５、Ｈ５．５８、Ｂｒ１４．２８、Ｓ５．７３、Ｓｉ５．０２；実測値：Ｃ５７．９６、Ｈ５．６９、Ｂｒ１４．００、Ｓ５．６１、Ｓｉ４．８５。実施例３３１α−アデニル（９）−３α−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３４シスおよび１α−アデニル（７）−３α−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３５シス：３３トランス（２．７８ｇ、４．９６ミリモル）、アデニン（１９．８４ｇ、２６．８２ミリモル）およびジアザビシクロウンデセン（３．０２ｍｌ、２．９６ミリモル）の混合物のジメチルスルホキシド（２８ｍｌ）溶液をアルゴン雰囲気下８０℃で１５時間撹拌した（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／メタノール＝８／２；検出：１）塩素２）ヨウ化カリウム）。ＴＬＣ上に３つのスポットが観察された：スポット１：Ｒｆ＝０．９５、未反応３３トランス；スポット２：Ｒｆ＝０．８８、化合物３４シス；スポット３：Ｒｆ＝０．５７、化合物３５シス。食塩水（２００ｍｌ）および水（８００ｍｌ）を加え、溶液を７回酢酸エチルで抽出した（４ｘ７５ｍｌ）。合わせた有機分画を食塩水（５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製すると（溶出液：第三ブチルメチルエーテル／メタノール＝９８／２から１／１）分画１：化合物３３トランス、７３５ｍｇ，２６．０％；分画２：化合物３４シス、１．０６ｇ，４６．８％；分画３：化合物３５シス、１９０ｍｇ，８．４％が得られた。１α−アデニル（９）−３α−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３４シス：分画２；ＭＷ＝４５７．６５；ＭＰ＝１８１−１８２℃；ＩＲ（ＫＢｒ）：３３２４、３１６０、２９２９、２８５５、１６６２、１６０１、１５７１；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨＺ）：ｄ，ＰＰＭ：８．３５（ｓ：Ｈ_2ad）；７．８８（ｓ：Ｈ_8ad）；７．６７（ｍ：４Ｈ_ar）；７．３７（ｍ：６Ｈ_ar）；５．９８（ｓ：ＮＨ₂）；４．９２（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．２２（ｓ：ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．６５→２．３５（ｍ：Ｈ₂＋Ｈ₃＋Ｈ₄）；１．１０（ｓ：ＣＨ₃、ｔＢｕ）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１５６．１１：Ｃ_6ad；１５３．４６：Ｃ_2ad；１５２．０５：Ｃ_4ad；１３９．１６：Ｃ_8ad；１３６．１６：Ｃ_o _PhSi ；１３４．０７：Ｃ_{r PhSi}；１３０．２１：Ｃ_{p PhSi}；１２８．２７：Ｃ_m _PhSi ；１１８．４３：Ｃ_5ad；６５．８５：ＣＨ₂ＯＳ１；４５．１３：Ｃ₁；３２．６１：Ｃ₂＋Ｃ₄；３０．８２：Ｃ₃；２７．２１：ＣＨ₃、ｔＢｕ；１９．６２：Ｃ、ｔＢｕ；Ｕ．Ｖ．（水、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２０４（３４７８０）；２５８（１２９２０）。元素分析Ｃ₂₆Ｈ₃₁Ｎ₅ＯＳｉとして計算値：Ｃ６８．２４、Ｈ６．８３、Ｎ１５．３Ｏ、Ｓｉ６．１４：実測値：Ｃ６８．０９、Ｈ６．８４、Ｎ１５．４３、Ｓｉ６．１８。１α−アデニル（７）−３α−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３５シス：分画３；Ｃ₂₆Ｈ₃₁Ｎ₅ＯＳｉ、ＭＷ＝４５７．６５；ＩＲ（ＫＢｒ）：３０７１、２９３１、２８５７、１９２２、１８９５、１８７０、１８４４、１８００、１７７３、１７５１、１６５４、１６１９、１５７８；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：８．１０（ｓ：Ｈ_2ad）；８．０２（ｓ：Ｈ_8ad）；７．６５（ｍ：４Ｈ_ar）；７．３７（ｍ：６Ｈ_ar）；５．１２（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁ ）；３．７１（ｓ：ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．７０（ｍ：Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；２．４５（ｍ：Ｈ_2b＋Ｈ₃＋Ｈ_4b）；１．０５（ｓ：ＣＨ₃、ｔＢｕ）；Ｕ．Ｖ．（水、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）：２１４（２９８００）；２７７（１６２８０）。実施例３４１α−アデニル（９）−３β−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３４トランスおよび１α−アデニル（７）−３β−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３５トランス：３３シス（３．８１ｇ、６．８１ミリモル）、アデニン（３．６８ｇ、２７．２２ミリモル）およびジアザビシクロウンデセン（４．０５ｍｌ、４．１４ミリモル）の混合物のジメチルスルホキシド（３８ｍｌ）溶液をアルゴン雰囲気下８０℃で３５時間撹拌した（ＴＬＣで判定：第三ブチルメチルエーテル／メタノール＝８／２；検出：１）塩素２）ヨウ化カリウム）。ＴＬＣ上に３つのスポットが観察された：スポット１：Ｒｆ＝０．９５、未反応３３シス；スポット２：Ｒｆ＝０．８８、化合物３４トランス；スポット３：Ｒｆ＝０．５７、化合物３５トランス。食塩水（２００ｍｌ）および水（８００ｍｌ）を加え、溶液を７回酢酸エチルで抽出した（４ｘ７５ｍｌ）。合わせた有機分画を食塩水（５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製すると（溶出液：第三ブチルメチルエーテル／メタノール＝９８／２から１／１）分画１：化合物３３シス、１．２９ｇ，３３．９％；分画２：化合物３４トランス、１．４６ｇ，４６．９％；分画３：化合物３５トランス、４０１ｍｇ、１２．９％が得られた。１α−アデニル（９）−３β−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３４トランス：分画２；ＭＷ＝４５７．６５；ＭＰ＝１２９．５−１３０．５℃；ＩＲ（ＫＢｒ）：３１３８、２９２９、２８５７、１６６０、１６５１、１６４５、１６５０、１６００、１５７４；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：８．３５（ｓ：Ｈ_2ad）；７．９０（ｓ：Ｈ_8ad）；７．６７（ｍ：４Ｈ_ar）；７．３７（ｍ：６Ｈ_ar）；６．７８（ｓ：ＮＨ₂）；５．１０（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．７７（ｓ：ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．６０→２．４５（ｍ：Ｈ₂＋Ｈ₃＋Ｈ₄）；１．１０（ｓ：ＣＨ₃、ｔＢｕ）；¹³Ｃ（ＣＤＣｌ₃、５０ＭＨｚ）：ｄ，ＰＰＭ：１５６．９８：Ｃ_6ad；１５３．３４：Ｃ_2ad；１５０．５３：Ｃ_4ad；１３９．２８：Ｃ_8ad；１３６．１６：Ｃ_{o PhSi}；１３４．１４：Ｃ_{r PhSi}；１３０．３０：Ｃ_{p PhSi}；１２８．２９：Ｃ_{m PhSi}；１２０．４３：Ｃ_5ad；６６．５４：ＣＨ₂ＯＳｉ；４７．９８：Ｃ₁；３１．８２：Ｃ₂＋Ｃ₄；３１．４８：Ｃ₃；２７．２３：ＣＨ₃、ｔＢｕ；１９．６０：Ｃ、ｔＢｕ；Ｕ．Ｖ．（水、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２０５（４００００）：２５８（１３９４０）。元素分析Ｃ₂₆Ｈ₃₁Ｎ₅ＯＳｉとして計算値：Ｃ６８．２４、Ｈ６．８２、Ｎ１５．３０、Ｓｉ６．１４；実測値：Ｃ６８．４５、Ｈ７．０７、Ｎ１４．９５、Ｓｉ５．９３。１α−アデニル（７）−３β−第三ブチルジフェニルシリルオキシメチル−シクロブタン３５トランス：分画３；Ｃ₂₆Ｈ₃₁Ｎ₅ＯＳｉ、ＭＷ＝４５７．６５；ＩＲ（ＫＢｒ）：３３２２、２９３３、２８９４、２８５７、２２４４、２２１８、１６５８、１６１８、１５４９；¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃、２００ＭＨＺ）：ｄ，ＰＰＭ：８．１０（ｓ：Ｈ_2ad ）；８．０２（ｓ：Ｈ_8ad）；７．６５（ｍ：４Ｈ_ar）；７．３７（ｍ：６Ｈ_ar ）；５．２２（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．８１（ｓ：ＣＨ₂ＯＳｉ）；２．８７（ｍ：Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；２．６０（ｍ：Ｈ_2b＋Ｈ₃＋Ｈ_4b）；１．０５（ｓ：ＣＨ₃ 、ｔＢｕ）；Ｕ．Ｖ．（水、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）：２１４（２９８００）；２６５（９５００）。実施例３５１α−アデニル（９）−３α−ヒドロキシメチル−シクロブタン３６シス：３４シス（５００ｍｇ、１．０９ミリモル）および水性フッ化水素酸−尿素（３ｍｌ、９ミリモル）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液を室温で１５時間撹拌した（ＴＬＣ判定：酢酸エチル／メタノール＝２／８；Ｒｆ＝０．１２）。反応混合物を炭酸水素ナトリウムで中和し、蒸発乾固させた。フラッシュクロマトグラフィーにより精製すると（溶出液：酢酸エチル／メタノール＝９／１）３６シスおよびフッ化ナトリウムの混合物をが得られた。疎水性シリカゲルを用い、最初に水でのフラッシュクロマトグラフィーを行うとフッ化ナトリウムが得られ、次にメタノールにて３６シスが得られた：６０ｍｇ、ガラス状固形物として；¹Ｈ（ＣＤ₃ＯＤ、２００ＭＨｚ）：δ（ＰＰＭ）：８．２２（Ｓ：Ｈ_2ad）；８．１８（ｓ：Ｈ_8ad）；４．９５（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．６２（ｓ：ＣＨ₂ ＯＨ）；２．５５（ｍ：Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；２．４０（ｍ：Ｈ_2b＋Ｈ₃＋Ｈ_4b）；¹³ Ｃ（ＣＤ₃ＯＤ、５０ＭＨｚ）：δ（ＰＰＭ）：１５７．２０：Ｃ_6ad；１５３．９２：Ｃ_2ad；１４９．１０：Ｃ_4ad；１４１．２２：Ｃ_8ad；１１１．６０：Ｃ₅ _ad ；６６．０５：ＣＨ₂ＯＨ；４６．７３：Ｃ₁；３５．５７：Ｃ₂＋Ｃ₄；３１．８４：Ｃ₃；Ｕ．Ｖ．（エタノール、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２０６（１６５８０）；２６２（１１１６０）；Ｃ₁₀Ｈ₁₃Ｎ₂ Ｏ₃；ＭＷ＝２１９．２４６；ＦＡＢ−ＭＳ：Ｍ＋Ｎａ＝２４２；Ｍ＋Ｈ⁺＝２２０；Ｍ−ＣＨ₃ＯＨ＝１８８；Ａｄ＋Ｈ⁺＝１３６。実施例３６１α−アデニル（９）−３β−ヒドロキシメチル−シクロブタン３６トランス：３６シスと同様の方法を用いて３４トランス（５００ｍｇ、１．０９ミリモル）から３６トランスが得られた、６０ｍｇ、ガラス状固形物として；¹Ｈ（ＣＤ₃ＯＤ、２００ＭＨｚ）：δ（ＰＰＭ）：８．２５（ｓ：Ｈ_2ad）；８．１６（ｓ：Ｈ_8ad）；５．１５（ｑｕｉｎｔ：Ｈ₁）；３．６２（ｓ：ＣＨ₂ＯＨ）；２．６０（ｍ：Ｈ_2a＋Ｈ_4a）；２．４５（ｍ：Ｈ_2b＋Ｈ₃＋Ｈ_4b）；¹³Ｃ（ＣＤ₃ ＯＤ、５０ＭＨｚ）：δ（ＰＰＭ）：１５７．３：Ｃ_6ad；１５３．９０：Ｃ_2ad ；１４９．２０：Ｃ_4ad：１４１．４４：Ｃ_8ad；１１２．４０：Ｃ_5ad：６６．２１：ＣＨ₂ＯＨ；４８．５：Ｃ₁；３５．７５：Ｃ₂＋Ｃ₄；３１．８０：Ｃ₃；Ｕ．Ｖ．（エタノール、０．５ｘ１０^-4モル／ｌ）：１ｍａｘ，ｎｍ（ｅｍａｘ）２０６（１６２５０）；２６２（１１０５０）：Ｃ₁₀Ｈ₁₃Ｎ₂Ｏ₃；ＭＷ＝２１９．２４６；ＦＡＢ−ＭＳ：Ｍ＋Ｎａ＝２４２；Ｍ＋Ｈ⁺＝２２０；Ｍ−ＣＨ₃ＯＨ＝１８８；Ａｄ＋Ｈ⁺＝１３６。実施例３７オリゴヌクレオチド代用物の合成−ホスホトリエステル法１．リン酸化：典型的な活性化ホスホリル化合物は以下のように合成された：１α−（Ｎ−ベンゾイル−アデニル）−３α−ヒドロキシメチル−３β−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン２２（０．２５ミリモル、１５６．４ｍｇ）をピリジンと共沸させて痕跡の水を除去し、ＴＨＦ中、室温で３０分間、２−クロロフェニル−ジ−（１−ベンゾトリアゾリル）−ホスフェート（１．００ｍｌ、０．２５Ｍ）でリン酸化した（活性化ヌクレオチド）：ＶａｎＢｏｏｍ，Ｊ．Ｈ．，ＶａｎｄｅｒＭａｒｅｌ，Ｇ．Ａ．ＶａｎＢｏｅｃｋｅｌ，Ｃ．Ａ．Ａ．，Ｗｉｌｌｅ，Ｇ．およびＨｏｙｎｇ，Ｃ．ＣｈｅｍｉｃａｌａｎｄＥｎｚｙｍａｔｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓｉｏｆＧｅｎｅＦｒａｇｍｅｎｔｓ，ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，Ｈ．Ｇ．ＧａｓｓｅｎおよびＡｎｎｅＬａｎｇ編，ＶｅｒｌａｇＣｈｅｍｉｅＷｅｉｎｈｉｅｍ／ＤｅｅｒｆｉｅｌｄＢｅａａｃｈ，Ｆｌｏｒｉｄａ／Ｂａｓｅｌ１９８２。この中間体は溶液中で数時間保存することができ、これをそのままさらに処理した。同様の方法で対応するグアニン、シトシン、ウリジンおよびチミン化合物が製造される。２．固相でのヌクレオチドの組立：１１．５ｍｇの３’（ＭｅＯＴｒ−アデノシン（Ｂｚ））−スクシニルアミドメチル−ポリスチレン（１％ＤＶＢ架橋）（官能化度＝２．２４ミリモル）、（Ｉｔｏ，Ｈ．，Ｉｋｅ，Ｙ．，Ｉｋｕｔａ，Ｓ．ａｎｄＩｔａｋｕｒａ，Ｋ．（１９８２）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，１０：１７５５参照）を下記の洗浄（３ｍｌ／分）および反応過程に用いた：（ジクロロメタン −イソプロパノール＝８５：１５）（３分）、ＭｅＯＴｒ切断：１ＭＺｎＢｒ₂ 、０．０２Ｍ１，２，４−トリアゾールのジクロロメタン−イソプロパノール（８５：１５）溶液（１．５−２分）、Ｒｉｎｋ，Ｈ．，Ｌｉｅｒｓｃｈ，Ｍ．，Ｓｉｅｂｅｒ，Ｐ．ａｎｄＭｅｙｅｒ，Ｆ．（１９８４）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，１２：６３６９参照、ジクロロメタン−イソプロパノール（８５：１５）（３分）、０．５Ｍトリエチルアンモニウムー酢酸のＤＭＦ溶液（３分）、アセトニトリル（＜０．００５％水）（３分）、窒素フロー５０℃（１０分）。連結：６４ｍｌの活性化カルバヌクレオチド（１６ミリモル）および６．４ｍｌのＮ−メチルイミダゾール（８０ミリモル）、１２−１５分、５０℃、窒素フローなし、アセトニトリル（４分）。この固相過程を７回繰り返す。連結工程当たりの収率：８０−８７％、すなわち０．６μモルまたは４６ＯＤ単位の計算収率。樹脂を１Ｍテトラメチルグアニジニウム２−ニトロベンズアルドキシメートを含む２００ｍｌの９５％ピリジンと６０℃で７時間反応させ、続いて０．８ｍｌの３３％アンモニア水と６０℃で２４時間反応させてオリゴマーを担体から切断し、保護基を除去した。反応混合物はジエチルエーテルで３回抽出し（各々２ｍｌ）、水相をＢｉｏｇｅｌＰ４（５０−１００メッシュ）カラム（３ｘ２６ｃｍ）にのせ、生成物を水で溶出させた。各分画のオリゴマーの正確なサイズおよび均一性をポリアクリルアミド−またはキャピラリー−電気泳動で検査した。さらに精製することは通常は必要ないが、２２の連結収率に関して、ＭｏｎｏＱＨＲ５／５アニオン交換でさらなる分画化を実施した。適用された濃度勾配は：Ａ＝１０ｍＭＮａＯＨ、０．０５ＭＮａＣｌ；Ｂ＝１０ｍＭＮａＯＨ、２ＭＮａＣｌ；０％Ｂ→４０％Ｂ（直線的、４５分で）であった。電気泳動で均一の分画を、電子噴射イオン化質量分析法により期待されるオリゴマーの存在について試験し、適切にプールし、ＢｉｏｇｅｌＰ４カラムで脱塩した。１０ＯＤ（光学単位２５９ｎｍ）のオクタマー２４および７ＯＤのヘプタマーが単離された。実施例３８オリゴヌクレオチド代用物の合成−ホスホルアミデート法１．ホスホルアミド化典型的な活性化ホスホルアミデートは以下のように合成された：１α−（Ｎ− ベンゾイル−アデニル）−３β−ヒドロキシメチル−３α−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタン２３（１．８９ミリモル）をアルゴン雰囲気下無水ジクロロメタン（１３ｍｌ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（０．８２ｍｌ，４．６６ミリモル）を加えて反応混合物を氷温に冷却した。反応混合物にクロロ（ジイソプロピルアミノ）−β−シアノエトキシホスフィン（０．８８ｍｌ、４．０３ミリモル）を加え、放置して２０℃まで暖め、３時間撹拌した。溶液に酢酸エチル（８０ｍｌ）およびトリエチルアミン（１ｍｌ）を加え、食塩水で３回洗浄した（３ｘ２５ｍｌ）。有機層を分離して硫酸マグネシウムで乾燥させた。固形物を濾過した後、真空下２０℃で溶媒を蒸発させ、残った油状物を溶出液としてヘキサン−酢酸エチル−トリエチルアミン（５０：４９：１）のような溶媒を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製した。分画を真空下蒸発させた後、残渣を水酸化ナトリウム存在下に２６℃で真空下（１トール）、無水ピリジン（２０ｍｌ）とさらに２４時間蒸発させた。これにより１α −（Ｎ−ベンゾイルアデニル）−３β−（β−シアノエチルジイシプロピルホスホルチチル）オキシメチル−３α−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタンが得られた。同様の方法で対応するグアニン、シトシン、ウリジンおよびチミン化合物が製造される。２．標準ホスホルアミデートオリゴヌクレオチド代用物合成を用いたオリゴヌクレオチド代用物の組立ホスホルアミデートオリゴヌクレオチド代用物合成はＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ３８０Ｂまたは３９４ＤＮＡシンセサイザーを用い、標準ホスホルアミデートプロトコールおよびサイクルに従って実施される。オリゴヌクレオチドサブユニットは上記のように、およびその他のすべての試薬は機械製造元から供給されたものである。本発明のオリゴヌクレオチド代用物のホスホルアミデートサブユニットが使用される工程においては、より長い連結時間（１０−１５分）が用いられる。オリゴヌクレオチド代用物は通常１０μモルスケールかまたは３ｘ１μモルスケールで、”トリチルーオン”様式で合成される。標準脱保護条件（３０％ＮＨ₄ＯＨ、５５℃、１６時間）が用いられる。ＨＰＬＣは９９１型検出器を備えたＷａｔｅｒｓ６００Ｅ装置で実施される。分析用クロマトグラフィーには以下の逆相ＨＰＬＣ条件が使用される：ＨａｍｉｌｔｏｎＰＲＰ −１カラム（１５ｘ２．５ｃｍ）；溶媒Ａ：５０ミリモルＴＥＡＡ、ｐＨ７．０；溶媒Ｂ：８０％のＣＨ₃ＣＮを含む４５ミリモルＴＥＡＡ；流速：１．５ｍｌ／分；濃度勾配：最初の５分間は５％Ｂ、その後１分毎にＢを直線的に（１％）増加させる。分取の目的には以下の逆相ＨＰＬＣ条件が用いられる：ＷａｔｅｒｓＤｅｌｔａＰａｋＣ₄ １５μｍ、３００Ａ、２５ｘ１００ｍｍカラム（同一の物質のガードカラムを付けて）；カラム流速：５ｍｌ／分；濃度勾配：最初の１０分間は５％Ｂ、その後１分毎にＢを直線的に（１％）増加させる。ＨＰＬＣ精製後、オリゴヌクレオチド代用物は脱トリチル化され、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５カラムを用いたサイズ排除クロマトグラフィーによりさらに精製される。３．標準ホスホルアミデートオリゴヌクレオチド代用物合成を用いたホスホロチオエートオリゴヌクレオチド代用物の組立実施例３８−２に用いた方法で、オリゴヌクレオチド代用物はＢｅａｕｃａｇｅ試薬（すなわち、３Ｈ−１，２−ベンゾジチオエート−３−オン１，１−ジオキシド）で処理される、ホスホジエステル結合のホスホロチオエート結合への変換はＲａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｐ．Ｉ．，Ｅｇａｎ，Ｗ．，Ｒｅｇａｎ，Ｊ．Ｂ．ａｎｄＢｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．，（１９９０）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１２：１２５３を参照されたい。評価方法１ハイブリダイゼーション分析本発明のオリゴヌクレオチド代用物の、相補的核酸に結合する相対的能力は、オリゴヌクレオチドについて行うように、特定のハイブリダイゼーション複合体の融点を決定することにより比較することができる。融点（Ｔｍ）は、２本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡの物理的性質であり、５０％のヘリックス形対コイル（ハイブリダイゼーションしていない）形が存在する温度を℃で表わしたものである。Ｔｍは、ＵＶスペクトルを用いて、ハイブリダイゼーションの形成と分解（溶融）を決定することにより測定する。ハイブリダイゼーションの間に生ずるベーススタッキングは、ＵＶ吸収の減少を伴う（淡色性（ｈｙｐｏｃｈｒｏｍｉｃｉｔｙ））。したがって、ＵＶ吸収の減少は、より高いＴｍを示す。Ｔｍが高いほど、鎖の結合強度が大きくなる。非ワトソン・クリック塩基対は、Ｔｍに対して強い不安定化効果を有している。したがって、標的ＲＮＡまたはＤＮＡに対するアンチセンス・オリゴヌクレオチドの最適な結合を得るためには、塩基対の絶対的正確性が必要である。Ａ．オリゴヌクレオチド代用物のハイブリダイゼーションの熱力学の評価本発明のオリゴヌクレオチド代用物が、これらに相補的なＲＮＡまたはＤＮＡ配列にハイブリダイズする能力を、熱溶融分析により決定した。用いたＲＮＡ相補鎖は、ｐｏｌｙ−ｒＡおよびｐｏｌｙ−ｒＵであった。用いたＤＮＡ相補鎖は、ｐｏｌｙ−ｄＡおよび（ｄＴ）₈であった。さらに、本発明のオリゴヌクレオチド代用物を互いにハイブリダイズさせて、Ｔ_mを決定した。オリゴヌクレオチド代用物を化学量論的濃度でＲＮＡまたはＤＮＡ相補鎖に加え、２本鎖からランダムコイルへの転移における吸収（２６０ｎｍ）深色性（ｈｙｐｅｒｃｈｒｏｍｉｃｉｔｙ）を、分光光度計（ＧｉｌｆｏｒｄＲｅｓｐｏｎｓｅ II）を用いてモニターした。これらの測定は、１０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）、０．１ｍＭＥＤＴＡ、および１ＭＮａＣｌの緩衝液中で実施する。データは、１／Ｔｍ対ｌｎ［Ｃｔ］（ここでＣｔは全オリゴヌクレオチド濃度）を表わすグラフにより分析した。熱力学的分析の結果を表１および２に示す。これらの表においては、測定されたＴ_mおよび深色性のパーセントが示されている。表１は、他の「正常」核酸鎖（リボフラノシルまたはデオキシリボフラノシル系核酸鎖）に対する結果を、表２は相補的シクロブタン鎖の互いにに対する結果を示す。これらの表においては、プソイドβＡは、アデニン塩基がメトキシトリチルオキシメチル部分に対してシスである８つのシクロブタン単位から形成される、本発明の８ｍｅｒオリゴヌクレオチド代用物、すなわち化合物２２、１−α（Ｎ− ベンゾイル−アデニル）−３α−ヒドロキシメチル−３β−メトキシトリチルオキシメチル−シクロブタンを表す。プソイドαＡは、シクロブタン環のそれぞれの置換基が互いにトランスである、対応する８ｍｅｒを表す。同様に、プソイド βＴおよびプソイドαＴは、対応する８ｍｅｒのシスおよびトランスのチミン塩基オリゴヌクレオチド代用物を表す。標識したオリゴヌクレオチド代用物を種々の時間インキュベートし、プロテアーゼＫで処理し、次に２０％ポリアクリルアミド尿素変性ゲルにおける電気泳動、およびそれに続くオートラジオグラフィーによって分析する。オートラジオグラムをレーザー密度計で定量化する。修飾結合の位置およびオリゴヌクレオチド代用物の既知の長さに基づいて、特定の修飾がヌクレアーゼ分解に及ぼす影響を決定することができる。細胞質ヌクレアーゼについては、ＨＬ６０細胞株を用いることができる。ポスト・ミトコンドリア上清を密度差遠心分離により調製し、標識したオリゴヌクレオチド代用物をこの上清中で種々の時間インキュベートする。インキュベートの後、血清核酸溶解分解について上述したように、分解についてオリゴヌクレオチド代用物を評価する。オートラジオグラフィーの結果を、未修飾と本発明のオリゴヌクレオチド代用物との比較のために定量化する。オリゴヌクレオチド代用物は血清および細胞質ヌクレアーゼに対して完全に耐性であることが予測される。Ｂ．特定のエンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼに対するオリゴヌクレオチド代用物の耐性の評価天然のオリゴヌクレオチドおよび本発明のオリゴヌクレオチド代用物の、特定のヌクレアーゼ（エンドヌクレアーゼ、３’，５’−エキソヌクレアーゼおよび５’，３’−エキソヌクレアーゼ）に対する耐性の評価を行い、修飾結合の分解に対する実際の効果を決定することができる。オリゴヌクレオチド代用物を、種々の選択されたヌクレアーゼに特異的な規定された反応緩衝液中でインキュベートする。生成物をプロテアーゼＫで処理した後、尿素を加え、尿素を含む２０％ポリアクリルアミドゲルによる分析を実施する。ゲル生成物をステインズオール試薬（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．）で染色して可視化する。レーザー密度計を用いて分解の程度を定量化する。特定のヌクレアーゼについて、修飾結合の効果を決定し、血清および細胞質系から得られた結果と比較する。血清および細胞質ヌクレアーゼの場合と同様に、本発明のオリゴヌクレオチド代用物はエンドおよびエキソヌクレアーゼに対して完全に耐性であることが予測される。方法３５−リポキシゲナーゼ分析、治療およびアッセイＡ．治療治療に用いるためには、５−リポキシゲナーゼの過剰なまたは異常な供給により特徴つけられる疾患を有すると疑われる動物を、本発明のオリゴヌクレオチド代用物を投与することにより処置する。当業者は、最適な投与量、投与方法および反復速度を容易に決定することができる。このような処置は一般に、治癒がなされるかまたは疾患状態の減縮が達成されるまで続けられる。いくつかの疾患については、同様に長期処置が行われる。Ｂ．研究試薬本発明のオリゴヌクレオチド代用物はまた、粗細胞ライセート中、または部分的にまたは完全に精製されたＲＮＡ調製物中の、５−リポキシゲナーゼｍＲＮＡを切断あるいは調節するために用いられる場合、研究試薬用としても有用である。この本発明の応用は、例えば細胞を標準的方法により溶解し、最適にＲＮＡを抽出し、次にこれを緩衝液（例えば５０ｍＭリン酸塩、ｐＨ約４〜約１０）中の、例えば約１００〜約５００ｎｇ／１０ｍｇ全ＲＮＡの濃度の組成物を用いて、約３０℃〜約５０℃の温度において処理することにより行うことができる。切断された５−リポキシゲナーゼＲＮＡは、アガロースゲル電気泳動および放射性標識されたＤＮＡプローブを用いるハイブリダイゼーション、あるいはその他の標準的な方法により分析することができる。Ｃ．診断本発明のオリゴヌクレオチド代用物はまた、診断への応用において、特に種々の組織における特定のｍＲＮＡ種の発現、あるいは異常または変異ＲＮＡ種の発現の決定にも有用である。この例においては、オリゴヌクレオチド代用物は、異常な配列に相補的なように設計することによって、仮想の異常ｍＲＮＡを標的とするが、正常ｍＲＮＡにはハイブリダイズしない。組織標本をホモジナイズし、標準的な方法に従ってＲＮＡを抽出することができる。粗ホモジネートまたは抽出物を処理して、例えば標的ＲＮＡを切断することができる。次に、この生成物を、切断部位の５’側の領域に相補的なオリゴヌクレオチドが結合されている固体支持体にハイブリダイズさせることができる。正常および異常のｍＲＮＡの５’領域はいずれも固体支持体に結合する。異常ＲＮＡの３’領域は、切断されて支持体に結合しないため、正常ＲＮＡから分離される。調節のための標的ｍＲＮＡ種は、５−リポキシゲナーゼに関係するものである。しかし、当業者は、本発明がそのように制限されるものではなく、一般的に適用しうることを理解するであろう。５−リポキシゲナーゼ酵素の生成の阻害または調節は、疾患の治療において顕著な治療の利益を有すると予想される。この組成物の有効性を評価するために、１つまたは一連のアッセイが必要である。Ｄ．インビトロアッセイ５−リポキシゲナーゼの細胞性アッセイは、好ましくはヒト前骨髄性白血病細胞株ＨＬ−６０を用いて行う。これらの細胞は、種々の既知の試薬により誘導して単球様細胞または好中球様細胞に分化させることができる。細胞を１．３％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で処理することは、細胞の好中球への分化を促進することが知られている。現在、基底Ｈ−６０細胞が検出可能なレベルの５− リポキシゲナーゼ蛋白質を合成しないか、またはロイコトリエン（５−リポキシゲナーゼの下流生成物）を分泌しないことが知られている。ＤＭＳＯによる細胞の分化は、ＤＭＳＯの添加から４８時間後に５−リポキシゲナーゼ蛋白質の出現とロイコトリエン生合成を引き起こす。したがって、５−リポキシゲナーゼ蛋白質合成の誘導は、これらの細胞において５−リポキシゲナーゼ合成を阻害するアンチセンス・オリゴヌクレオチド代用物の分析のための試験システムとして利用することができる。アンチセンス・オリゴヌクレオチド代用物の第２の試験システムは、５−リポキシゲナーゼが「自殺」酵素である、すなわち、酵素が基質と反応することによってそれ自身を不活性化するという事実を利用するものである。分化したＨＬ− ６０または５−リポキシゲナーゼを発現するその他の細胞を、１０μＭのＡ２３１８７（カルシウム・イオノフォア）によって処理することは、５−リポキシゲナーゼのサイトゾルから膜への移動およびそれに続く酵素の活性化を促進する。活性化および何回かの触媒作用の後、酵素は触媒的に不活性化する。したがって、カルシウム・イオノフォアによる細胞の処理は、内因性５−リポキシゲナーゼを不活性化する。ロイコトリエンＢ₄の合成能力により測定したところ、細胞がＡ２３１８７処理から回復するためには約２４時間を要する。５−リポキシゲナーゼに対するオリゴヌクレオチド代用物は、以下の定量的なアッセイを用いて、２つのＨＬ−６０モデル系において活性を測定することができる。これらのアッセイは、生きた細胞における５−リポキシゲナーゼ蛋白質合成の阻害の最も直接的な測定から、生きた細胞における５−リポキシゲナーゼ活性の測定等のより下流の事象まで記載されている。生きた細胞においてオリゴヌクレオチド代用物が及ぼすことができ、容易に定量化しうる最も直接的な効果は、５−リポキシゲナーゼ蛋白質合成の特異的な阻害である。この方法を実施するためには、細胞を³⁵Ｓ−メチオニン（５０μＣｉ／ｍＬ）で３７℃において２時間標識し、新たに合成された蛋白質を標識する。細胞を抽出して全細胞蛋白質を可溶化し、５−リポキシゲナーゼ抗体で５−リポキシゲナーゼを免疫沈降させ、次にプロテインＡセファロースビーズから溶出する。免疫沈降した蛋白質をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離し、オートラジオグラフィーのために感光を行う。免疫沈降した５−リポキシゲナーゼの量を走査密度計で定量化する。これらの実験の予測される結果は次のとおりである。対照細胞から免疫沈降された５−リポキシゲナーゼ蛋白質の量を１００％として標準とする。細胞を１μ Ｍ、１０μＭおよび３０μＭの有効なオリゴヌクレオチド代用物によって４８時間処理すると、免疫沈降された５−リポキシゲナーゼはそれぞれ標準の５％、２５％および７５％減少する。細胞ホモジネートにおける５−リポキシゲナーゼ酵素活性の測定もまた、ロイコトリエンを合成しうる酵素の存在量を定量化するために用いることができる。現在、逆相ＨＰＬＣを用いて細胞ホモジネート中の５−リポキシゲナーゼ酵素を定量化するための放射測定法が開発されている。細胞をプロテアーゼ阻害剤およびＥＤＴＡを含む緩衝液中で超音波処理により破壊する。細胞ホモジネートを１０，０００×ｇで３０分間遠心分離し、上清を５−リポキシゲナーゼ活性についてアッセイする。サイトゾル蛋白質を１０μＭの¹⁴Ｃ−アラキドン酸、２ｍＭＡＴＰ、５０μＭ遊離カルシウム、１００μｇ／ｍｌホスファチジルコリン、および５０ｍＭｂｉｓ−Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）とともに３７℃において５分間インキュベートする。等量のアセトンを加えることにより反応を停止させ、酢酸エチルで脂肪酸を抽出する。基質と反応生成物をノバパックＣ１８カラム（ＷａｔｅｒｓＩｎｃ．，Ｍｉｌｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を用いて逆相ＨＰＬＣにより分離する。ラジオクロマトグラフィー検出機（Ｂｅｃｋｍａｎｍｏｄｅｌ１７１）により、放射活性を有するピークを検出する。ジ−ＨＥＴＥおよびモノ−ＨＥＴＥに転換されたアラキドン酸の量を５−リポキシゲナーゼ活性の測定値として用いる。ＤＭＳＯ分化ＨＬ−６０細胞を、有効なオリゴヌクレオチド代用物で１μＭ、１０μＭおよび３０μＭの濃度において７２時間処理したときの予測される結果は以下のとおりである。対照細胞は２００ｐｍｏｌ／５分／細胞１０⁶個のアラキドン酸を酸化する。１μＭ、１０μＭおよび３０μＭの有効なオリゴヌクレオチド代用物で処理した細胞は、それぞれ１９５ｐｍｏ１、１４０ｐｍｏｌおよび６０ｐｍｏ１／５分／細胞１０⁶個のアラキドン酸を酸化する。細胞中の全５−リポキシゲナーゼ蛋白質の測定のための定量的競合酵素免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）が開発されている。大腸菌で発現させ、抽出、Ｑ−セファロース、ヒドロキシアパタイトおよび逆相ＨＰＬＣにより精製したヒト５−リポキシゲナーゼを標準として、およびマイクロタイタープレートの被覆のための第１抗体として用いる。２５ｎｇの精製５−リポキシゲナーゼを４℃で一晩マイクロタイタープレートに結合させる。ウエルを２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）および１５０ｍＭＮａＣｌ（ＴＢＳ）で希釈した５％ヤギ血清で９０分間被覆する。細胞抽出物（０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１２，０００×ｇ、３０分間）または精製５−リポキシゲナーゼを、全量１００μＬの１：４０００希釈抗５−リポキシゲナーゼポリクローナル抗体とともに、マイクロタイターのウエル中で９０分間インキュベートする。抗体は、精製ヒト組み換え５ −リポキシゲナーゼでウサギを免疫して調製する。ウエルを０．０５％ｔｗｅｅｎ２０を含むＴＢＳ（ＴＢＳＴ）で洗浄し、次に１００μＬの１：１０００希釈ペルオキシダーゼ結合抗ウサギＩｇＧヤギ抗体（ＣａｐｐｅｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）とともに２５℃において６０分間インキュベートする。ウエルをＴＢＳＴで洗浄し、テトラメチルベンジジンで発色させてペルオキシダーゼ標識第２抗体の量を決定する。１μＭ、１０μＭおよび３０μＭの３０塩基のオリゴヌクレオチド類似体を用いたそのようなアッセイの予測される結果は、それそれ細胞１０⁶個につき５− リポキシゲナーゼが３０ｎｇ、１８ｎｇおよび５ｎｇであり、処理していない細胞は約３４ｎｇの５−リポキシゲナーゼを含む。５−リポキシゲナーゼ生合成の阻害の正味の効果は、刺激された細胞から放出されたロイコトリエンの量の減少である。ＤＭＳＯ分化ＨＬ−６０細胞は、カルシウム・イオノフォアＡ２３１８７による剌激によりロイコトリエンＢ４を放出する。細胞培養液に放出されたロイコトリエンＢ４は、商業的に入手可能な診断キット（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を用いて、ラジオイムノアッセイにより定量することができる。ＨＬ−６０細胞におけるロイコトリエンＢ４の産生は、ＤＭＳＯを添加して細胞を好中球様細胞に分化させてから４８時間後に検出することができる。細胞（２×１０５個／ｍＬ）を１．３％のＤＭＳＯの存在下で、増加する濃度のオリゴヌクレオチド代用物で４８−７２時間処理する。細胞を洗浄し、１％脱脂ウシ血清アルブミンを含むダルベコリン酸緩衝液生理食塩水中に、２×１０⁶個／ｍＬの濃度で再懸濁する。細胞を１０μＭカルシウム・イオノフォアＡ２３１８７で１５分間刺激し、５× １０⁵個の細胞から産生されたＬＴＢ４の量を、製造者の記述にしたがってラジオイムノアッセイにより決定する。このアッセイを用いて、５−ＬＯｍＲＮＡに向けられた配列（ＧＣＡＡＧＧＴＣＡＣＴＧＡＡＧ）の１５ｍｅｒのオリゴヌクレオチド代用物について得られる結果は以下のとおりである。細胞を１μＭ、１０μＭまたは３０μＭのオリゴヌクレオチド代用物とともに、１．３％ＤＭＳＯの存在下で７２時間処理する。５ ×１０⁵個の細胞から産生されるＬＴＢ₄の量は、それぞれ約７５ｐｇ、５０ｐｇおよび３５ｐｇであると予測され、未処理の分化細胞は７５ｐｇのＬＴＢ₄を産生する。Ｅ．インビボアッセイマウスにおける５−リポキシゲナーゼ産生の阻害は、以下の方法にしたがって示すことができる。アラキドン酸を局所投与することにより、ロイコトリエンＢ₄ 、ロイコトリエンＣ₄およびプロスタグランジンＥ₂が皮膚において速やかに生成し、続いて浮腫および細胞性浸潤が生じる。５−リポキシゲナーゼのある種の阻害剤がこのアッセイにおいて活性を示すことが知られている。このアッセイのために、２ｍｇのアラキドン酸をマウスの耳に適用し、反対側の耳を対照とする。アラキドン酸投与から１時間後の生検試料から得たホモジネート中のミエロペルオキシダーゼ活性により多形核細胞浸潤をアッセイする。浮腫性の反応は、耳の厚さおよびパンチした生検試料の重量を測定することにより定量化する。組織中の５−リポキシゲナーゼ活性の直接的測定として、生検試料において産生されたロイコトリエンＢ₄の測定を実施する。化合物の最適な活性を得るために、オリゴヌクレオチド代用物をアラキドン酸の投与の１２〜２４時間前に両方の耳に局所的に適用する。アラキドン酸の投与の前に両方の耳を、０．１μｍｏｌ、０．３μｍｏｌまたは１．０μｍｏｌのオリゴヌクレオチド類似体で２４時間前処理する。値は、１つの濃度につき３匹の動物の平均で表わす。０．１μｍｏｌ、０．３μｍｏｌおよび１．０ｍｏ１についての多形核細胞浸潤の阻害は、それぞれ対照の活性の約１０％、７５％および９２％であると予測される。浮腫の阻害は、それそれ約３％、５８％および９０％であると予測され、これに対しロイコトリエンＢ₄の生成の阻害はそれぞれ約１５％、７９％および９９％であると予測される。方法４抗ウイルス活性本発明の複素環式塩基置換シクロブタン化合物を、ウイルス活性について試験した。１−アデニル−３，３−ビス−ヒドロキシメチルシクロブタンおよび１− チミジル−３，３−ビス−ヒドロキシメチルシクロブタンの両方を、ヒトマクロファージにおいてＨＳＶ−１に対して試験した。これらの化合物はいずれも６００μｇ／ｍｌまで毒性なく試験された。これらの試験において、１−チミジル− ３，３−ビス−ヒドロキシメチルシクロブタンは４０−６５μｇ／ｍｌのＭＥＤ₅₀ を示し、１−アデニル−３，３−ビス−ヒドロキシメチルシクロブタンは２００μｇ／ｍｌのＭＥＤ₅₀を示した。これらの化合物はいずれも、細胞性ＨＩＶアッセイにおいては活性を示さなかった。

【手続補正書】【提出日】１９９５年８月２９日【補正内容】１．特許請求の範囲を次のとおり訂正します。『１．連結用部分により共有結合的に連結した複数のシクロブチル部分を含むオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含む、オリゴヌクレオチド代用物。２．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、天然に産するまたは合成のプリン−９−イル、ピリミジン−１−イルまたはピリミジン−３−イル複素環式塩基である、請求項１記載のオリゴヌクレオチド代用物。３．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、５−メチルシトシン、ヒポキサンチンまたは２−アミノアデニンである、請求項２記載のオリゴヌクレオチド代用物。４．前記複素環式塩基が前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合している、請求項１記載のオリゴヌクレオチド代用物。５．前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している、請求項４記載のオリゴヌクレオチド代用物。６．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する４原子または５原子鎖を含む、請求項１記載のオリゴヌクレオチド代用物。７．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する５原子鎖を含む、請求項６記載のオリゴヌクレオチド代用物。８．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃ ［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり；そしてＬ₂は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホルホルアミデート、ホスホトリエステル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、カルバメート、スルホネート、Ｃ₁−Ｃ₆ジアルキルシリルまたはホルムアセタールである］のものである、請求項７記載のオリゴヌクレオチド代用物。９．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃ ［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり；そしてＬ₂は、ホスホジエステルまたはホスホロチオエートである］のものである、請求項７記載のオリゴヌクレオチド代用物。１０．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する４原子鎖を含む、請求項６記載のオリゴヌクレオチド代用物。１１．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇ ［式中、（ａ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、独立して、ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＮＲ₃、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＲ₃またはＳｉＲ₄Ｒ₅である；または（ｂ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、一緒になって、ＣＲ₁＝ＣＲ₂、Ｃ≡Ｃ、Ｃ₆芳香環の一部、Ｃ₃−Ｃ₆炭素環式環の一部または３、４、５または６員の複素環式環の一部である；または（ｃ）Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇は、一緒になってＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂ −Ｏ−Ｎ＝ＣＨである；（ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁ −Ｃ₁₀置換アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆チオアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノ、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキルアミノ、Ｃ₁−Ｃ₁₀置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ハロ、ホルミル、ケト、ベンズオキシ、カルボキシアミド、チオカルボキシアミド、エステル、チオエステル、カルボキシアミジノ、カルバミル、ウレイド、グアニジノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；Ｒ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、置換低級アルキル、アルコキシ、低級アルケニル、アラルキル、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；そしてＲ₄およびＲ₅は、独立して、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはアルコキシである）］のものである、請求項１０記載のオリゴヌクレオチド代用物。１２．前記連結用部分のそれぞれが、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｏ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂−Ｏ−Ｎ＝ＣＨである、請求項１０記載のオリゴヌクレオチド代用化合物。１３．シクロブチル部分のＣ−２位またはＣ−４位において少なくとも１つのシクロブチル部分に結合する置換基をさらに含む、請求項５記載のオリゴヌクレオチド代用物。１４．前記置換基が、ハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルコキシ、アリルオキシ、Ｃ₁−Ｃ₁₀ アルキルまたはＣ₁−Ｃ₁₀アルキルアミンである、請求項１３記載のオリゴヌクレオチド代用物。１５．前記置換基が、前記複素環式塩基に対してトランスの位置である、請求項１４記載のオリゴヌクレオチド代用物。１６．独立してそれぞれのシクロブチル部分のＣ−１位に結合するプリンまたはピリミジン複素環式塩基を含む複数のシクロブチル部分；および４原子または５原子の鎖を含み、シクロブチル部分のＣ−３位において２つの隣接するシクロブチル部分を連結する複数の連結用部分；を含むオリゴヌクレオチド代用物。１７．生物において蛋白質の産生または活性を変調する方法であって、生物を、連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成されるオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含むオリゴヌクレオチド代用物と接触させることを含む方法。１８．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、天然に産するまたは合成のプリン−９−イル、ピリミジン−１−イルまたはピリミジン−３−イル複素環式塩基である、請求項１７記載の方法。１９．前記複素環式塩基が前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合しており；かつ前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している、請求項１７記載の方法。２０．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する４原子または５原子鎖を含む、請求項１７記載の方法。２１．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃ ［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり；そしてＬ₂は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホルホルアミデート、ホスホトリエステル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、カルバメート、スルホネート、Ｃ₁−Ｃ₆ジアルキルシリルまたはホルムアセタールである］のものである、請求項２０記載の方法。２２．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇ ［式中、（ａ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、独立して、ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＮＲ₃、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＲ₃またはＳｉＲ₄Ｒ₅である；または（ｂ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、一緒になって、ＣＲ₁＝ＣＲ₂、Ｃ≡Ｃ、Ｃ₆芳香環の一部、Ｃ₃−Ｃ₆炭素環式環の一部または３、４、５または６員の複素環式環の一部である；または（ｃ）Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇は、一緒になってＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂ −Ｏ−Ｎ＝ＣＨである；（ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁ −Ｃ₁₀置換アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆チオアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノ、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキルアミノ、Ｃ₁−Ｃ₁₀置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ハロ、ホルミル、ケト、ベンズオキシ、カルボキシアミド、チオカルボキシアミド、エステル、チオエステル、カルボキシアミジノ、カルバミル、ウレイド、グアニジ，ノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；Ｒ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、置換低級アルキル、アルコキシ、低級アルケニル、アラルキル、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；そしてＲ₄およびＲ₅は、独立して、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはアルコキシである）］のものである、請求項２０記載の方法。２３．前記連結用部分のそれぞれが、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｏ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂−Ｏ−Ｎ＝ＣＨである、請求項２０記載の方法。２４．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、５−メチルシトシン、ヒポキサンチンまたは２−アミノアデニンであり；前記複素環式塩基が、前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合しており；かつ前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している；請求項２０記載の方法。２５．蛋白質の望ましくない産生により特徴づけられる疾患を有するヒトを除く生物を治療する方法であって、生物を、連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成されるオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含むオリゴヌクレオチド代用物と接触させることを含む方法。２６．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、天然に産するまたは合成のプリン−９−イル、ピリミジン−１−イルまたはピリミジン−３−イル複素環式塩基である、請求項２５記載の方法。２７．前記複素環式塩基が、前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合しており；かつ前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している；請求項２５記載の方法。２８．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する４原子または５原子鎖を含む、請求項２５記載の方法。２９．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃ ［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり；そしてＬ₂は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホルホルアミデート、ホスホトリエステル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、カルバメート、スルホネート、Ｃ₁−Ｃ₆ジアルキルシリルまたはホルムアセタールである］のものである、請求項２８記載の方法。３０．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇ ［式中、（ａ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、独立して、ＣＲ₁Ｒ２、Ｃ＝ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＮＲ₃、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＲ₃またはＳｉＲ₄Ｒ₅である；または（ｂ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、一緒になって、ＣＲ₁＝ＣＲ₂、Ｃ≡Ｃ、Ｃ₆芳香環の一部、Ｃ₃−Ｃ₆炭素環式環の一部または３、４、５または６員の複素環式環の一部である；または（ｃ）Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇は、一緒になってＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂ −Ｏ−Ｎ＝ＣＨである；（ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁ −Ｃ₁₀置換アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆チオアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノ、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキルアミノ、Ｃ₁−Ｃ₁₀置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ハロ、ホルミル、ケト、ベンゾキシ、カルボキシアミド、チオカルボキシアミド、エステル、チオエステル、カルボキシアミジノ、カルバミル、ウレイド、グアニジノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；Ｒ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、置換低級アルキル、アルコキシ、低級アルケニル、アラルキル、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；そしてＲ₄およびＲ₅は、独立して、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはアルコキシである）］のものである、請求項２８記載の方法。３１．前記連結用部分のそれぞれが、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｏ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂−Ｏ−Ｎ＝ＣＨである、請求項２８記載の方法。３２．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、５−メチルシトシン、ヒポキサンチンまたは２−アミノアデニンであり；前記複素環式塩基が、前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合しており；かつ前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している；請求項２８記載の方法。３３．薬学的有効量の、連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成されるオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含むオリゴヌクレオチド代用物；および薬学的に許容しうる希釈剤または担体を含む、蛋白質の望ましくない産生により特徴づけられる疾患を治療するための組成物。３４．配列特異的核酸をインビトロでアッセイする方法であって、該核酸を含む試験溶液を、連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成されるオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含むオリゴヌクレオチド代用物と接触させることを含む方法。３５．連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成される化合物を製造する方法であって、ここで前記シクロブチル部分のそれぞれは結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含み、該方法は、シクロブチル部分を脱離基で官能化し；前記シクロブチル部分上のそれぞれの前記脱離基を、独立して選択されるプリンまたはピリミジン複素環式塩基で置き換え；前記複素環式塩基含有シクロブチル部分を保護基により官能化し；前記保護された部分を活性化連結基により官能化し；そして前記保護され活性化された部分を段階的に脱保護し連結する；の各工程を含むことを特徴とする方法。３６．前記保護され活性化された部分が、高分子支持体上で脱保護され連結される、請求項３５記載の方法。３７．前記保護され活性化された部分が、（ａ）前記保護され活性化された部分の第１を脱保護し；（ｂ）前記脱保護された部分を、前記保護され活性化された部分のさらなるものと連結して、連結された構造を形成し；そして（ｃ）前記連結された構造を脱保護する、ことを含む方法により脱保護され連結される、請求項３５記載の方法。３８．さらに、複数回繰り返される段階（ｂ）および（ｃ）を含む、請求項３７記載の方法。３９．次の構造：［式中、Ｂ_xはプリン−９−イル、ピリミジン−１−イルまたはピリミジン−３ −イルである］の化合物の抗ウイルス有効量；および薬学的に許容しうる希釈剤または担体、を含む、抗ウイルス組成物。４０．ヒトを除く哺乳類においてウイルス性疾患を治療する方法であって、前記哺乳類に治療的有効量の次の構造：［式中、Ｂ_xはプリン−９−イル、ピリミジン−１−イルまたはピリミジン−３ −イルである］の化合物を投与することを含む方法。４１．前記ウイルス性疾患がヘルペスウイルス性疾患である、請求項４０記載の方法。』２．明細書第７１頁最下行の「標識した」の前に次の記載を挿入します。『Ｂ．オリゴヌクレオチド代用物のハイブリダイゼーションの正確性本発明のアンチセンス・オリゴヌクレオチド代用物の、絶対的特異性をもって標的ｍＲＮＡとハイブリダイズする能力は、全細胞ＲＮＡの存在下における精製標的ｍＲＮＡのノーザンブロット分析により示すことができる。標的ｍＲＮＡは、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼプロモーターの下流に配置された標的ｍＲＮＡのｃＤＮＡを含むベクターから合成する。合成したｍＲＮＡをアガロースゲル中で電気泳動し、適当な支持膜（ニトロセルロース）に転移させる。この支持膜をブロッキングして、³²Ｐ−標識したオリゴヌクレオチド代用物をプローブとして用いる。ストリンジェンシーは、ブロットをレプリカし、より高い温度において、またはより低いイオン強度の洗浄緩衝液により洗浄することにより決定する。ヘテロデュープレックスの形成の存在を評価するためにオートラジオグラフィーを行い、オートラジオグラムをレーザー密度計（ＬＫＢＰｈａｒｍａｃｉａ，Ｉｎｃ．）により定量化する。全細胞ＲＮＡを標準的方法により単離し、アガロース電気泳動、膜転移、および標識したオリゴヌクレオチド代用物をプローブとして用いて分析することにより、ハイブリッド形成の特異性を決定する。ストリンジェンシーは修飾していないアンチセンス・オリゴヌクレオチドについてあらかじめ決定し、特異的に標的化されるｍＲＮＡのみがオリゴヌクレオチド代用物とヘテロデュープレックスを形成しうる条件を用いる。方法２ヌクレアーゼ耐性Ａ．血清および細胞質ヌクレアーゼに対するオリゴヌクレオチド代用物の耐性の評価血清ヌクレアーゼに対する本発明のオリゴヌクレオチド代用物の耐性は、このオリゴヌクレオチド代用物を種々の濃度のウシ胎児血清またはヒト成人血清を含む培養液中でインキュベートすることにより評価することができる。』

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者クック，フィリップ・ダンアメリカ合衆国カリフォルニア州92069, サン・マルコス，アヴィラー・コート 641 (72)発明者バスチャン，ゲルハルドスイス国ツェーハー―4126，ベッティンゲン，バッケンヴェーク７

Claims

【特許請求の範囲】１．連結用部分により共有結合的に連結した複数のシクロブチル部分を含むオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含む、オリゴヌクレオチド代用物。２．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、天然に産するまたは合成のプリン−９−イル、ピリミジン−１−イルまたはピリミジン−３−イル複素環式塩基である、請求項１記載のオリゴヌクレオチド代用物。３．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、５−メチルシトシン、ヒポキサンチンまたは２−アミノアデニンである、請求項２記載のオリゴヌクレオチド代用物。４．前記複素環式塩基が前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合している、請求項１記載のオリゴヌクレオチド代用物。５．前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している、請求項４記載のオリゴヌクレオチド代用物。６．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する４原子または５原子鎖を含む、請求項１記載のオリゴヌクレオチド代用物。７．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する５原子鎖を含む、請求項６記載のオリゴヌクレオチド代用物。８．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃ ［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり；そしてＬ₂は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホルホルアミデート、ホスホトリエステル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、カルバメート、スルホネート、Ｃ₁−Ｃ₆ジアルキルシリルまたはホルムアセタールである］のものである、請求項７記載のオリゴヌクレオチド代用物。９．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃ ［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり；そしてＬ₂は、ホスホジエステルまたはホスホロチオエートである］のものである、請求項７記載のオリゴヌクレオチド代用物。１０．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する４原子鎖を含む、請求項６記載のオリゴヌクレオチド代用物。１１．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇ ［式中、（ａ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、独立して、ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＮＲ₃、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＲ₃またはＳｉＲ₄Ｒ₅である；または（ｂ）Ｌ⁴およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、一緒になって、ＣＲ₁＝ＣＲ₂、Ｃ≡Ｃ、Ｃ₆芳香環の一部、Ｃ₃−Ｃ₆炭素環式環の一部または３、４、５または６員の複素環式環の一部である；または（ｃ）Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇は、一緒になってＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂ −Ｏ−Ｎ＝ＣＨである；（ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁ −Ｃ₁₀置換アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆チオアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノ、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキルアミノ、Ｃ₁−Ｃ₁₀置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ハロ、ホルミル、ケト、ベンズオキシ、カルボキシアミド、チオカルボキシアミド、エステル、チオエステル、カルボキシアミジノ、カルバミル、ウレイド、グアニジノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；Ｒ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、置換低級アルキル、アルコキシ、低級アルケニル、アラルキル、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；そしてＲ₄およびＲ₅は、独立して、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはアルコキシである）］のものである、請求項１０記載のオリゴヌクレオチド代用物。１２．前記連結用部分のそれぞれが、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｏ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂−Ｏ−Ｎ＝ＣＨである、請求項１０記載のオリゴヌクレオチド代用化合物。１３．シクロブチル部分のＣ−２位またはＣ−４位において少なくとも１つのシクロブチル部分に結合する置換基をさらに含む、請求項５記載のオリゴヌクレオチド代用物。１４．前記置換基が、ハロゲン、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルコキシ、アリルオキシ、Ｃ₁−Ｃ₁₀ アルキルまたはＣ₁−Ｃ₁₀アルキルアミンである、請求項１３記載のオリゴヌクレオチド代用物。１５．前記置換基が、前記複素環式塩基に対してトランスの位置である、請求項１４記載のオリゴヌクレオチド代用物。１６．独立してそれぞれのシクロブチル部分のＣ−１位に結合するプリンまたはピリミジン複素環式塩基を含む複数のシクロブチル部分；および４原子または５原子の鎖を含み、シクロブチル部分のＣ−３位において２つの隣接するシクロブチル部分を連結する複数の連結用部分；を含むオリゴヌクレオチド代用物。１７．生物において蛋白質の産生または活性を変調する方法であって、生物を、連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成されるオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含むオリゴヌクレオチド代用物と接触させることを含む方法。１８．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、天然に産するまたは合成のプリン−９−イル、ピリミジン−１−イルまたはピリミジン−３−イル複素環式塩基である、請求項１７記載の方法。１９．前記複素環式塩基が前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合しており；かつ前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している、請求項１７記載の方法。２０．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する４原子または５原子鎖を含む、請求項１７記載の方法。２１．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃ ［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり；そしてＬ₂は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホルホルアミデート、ホスホトリエステル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、カルバメート、スルホネート、Ｃ₁−Ｃ₆ジアルキルシリルまたはホルムアセタールである］のものである、請求項２０記載の方法。２２．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇ ［式中、（ａ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、独立して、ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＮＲ₃、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＲ₃またはＳｉＲ₄Ｒ₅である；または（ｂ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、一緒になって、ＣＲ₁＝ＣＲ₂、Ｃ≡Ｃ、Ｃ₆芳香環の一部、Ｃ₃−Ｃ₆炭素環式環の一部または３、４、５または６員の複素環式環の一部である；または（ｃ）Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇は、一緒になってＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂−Ｏ−Ｎ＝ＣＨである；（ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁ −Ｃ₁₀置換アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆チオアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノ、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキルアミノ、Ｃ₁−Ｃ₁₀置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ハロ、ホルミル、ケト、ベンズオキシ、カルボキシアミド、チオカルボキシアミド、エステル、チオエステル、カルボキシアミジノ、カルバミル、ウレイド、グアニジ，ノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；Ｒ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、置換低級アルキル、アルコキシ、低級アルケニル、アラルキル、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；そしてＲ₄およびＲ₅は、独立して、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはアルコキシである）］のものである、請求項２０記載の方法。２３．前記連結用部分のそれぞれが、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｏ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂−Ｏ−Ｎ＝ＣＨである、請求項２０記載の方法。２４．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、５−メチルシトシン、ヒポキサンチンまたは２−アミノアデニンであり；前記複素環式塩基が、前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合しており；かつ前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している；請求項２０記載の方法。２５．蛋白質の望ましくない産生により特徴づけられる疾患を有する生物を治療する方法であって、生物を、連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成されるオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含むオリゴヌクレオチド代用物と接触させることを含む方法。２６．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、天然に産するまたは合成のプリン−９−イル、ピリミジン−１−イルまたはピリミジン−３−イル複素環式塩基である、請求項２５記載の方法。２７．前記複素環式塩基が、前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合しており；かつ前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している；請求項２５記載の方法。２８．前記連結用部分のそれぞれが、２つのシクロブチル部分を連結する４原子または５原子鎖を含む、請求項２５記載の方法。２９．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₁−Ｌ₂−Ｌ₃ ［式中、Ｌ₁およびＬ₃はＣＨ₂であり；そしてＬ₂は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホルホルアミデート、ホスホトリエステル、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、カルバメート、スルホネート、Ｃ₁−Ｃ₆ジアルキルシリルまたはホルムアセタールである］のものである、請求項２８記載の方法。３０．前記連結用部分のそれぞれが次の構造：Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇ ［式中、（ａ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、独立して、ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＣＲ₁Ｒ₂、Ｃ＝ＮＲ₃、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂、ＮＲ₃またはＳｉＲ₄Ｒ₅である；または（ｂ）Ｌ₄およびＬ₇はＣＨ₂であり；そしてＬ₅およびＬ₆は、一緒になって、ＣＲ₁＝ＣＲ₂、Ｃ≡Ｃ、Ｃ₆芳香環の一部、Ｃ₃−Ｃ₆炭素環式環の一部または３、４、５または６員の複素環式環の一部である；または（ｃ）Ｌ₄−Ｌ₅−Ｌ₆−Ｌ₇は、一緒になってＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂ −Ｏ−Ｎ＝ＣＨである；（ここで、Ｒ₁およびＲ₂は、独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル、Ｃ₁ −Ｃ₁₀置換アルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆チオアルコキシ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルアミノ、Ｃ₇−Ｃ₁₀アラルキルアミノ、Ｃ₁−Ｃ₁₀置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ハロ、ホルミル、ケト、ベンゾキシ、カルボキシアミド、チオカルボキシアミド、エステル、チオエステル、カルボキシアミジノ、カルバミル、ウレイド、グアニジノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；Ｒ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ₂、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、置換低級アルキル、アルコキシ、低級アルケニル、アラルキル、アルキルアミノ、アラルキルアミノ、置換アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、ＲＮＡ開裂基、オリゴヌクレオチドの薬物動態的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基であり；そしてＲ₄およびＲ₅は、独立して、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはアルコキシである）］のものである、請求項２８記載の方法。３１．前記連結用部分のそれぞれが、ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＮＨ−ＮＨ−ＣＨ₂、ＣＨ₂−Ｏ−ＮＨ−ＣＨ₂またはＣＨ₂−Ｏ−Ｎ＝ＣＨである、請求項２８記載の方法。３２．前記プリンまたはピリミジン複素環式塩基が、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、５−メチルシトシン、ヒポキサンチンまたは２−アミノアデニンであり；前記複素環式塩基が、前記シクロブチル部分のＣ−１位においてそれぞれのシクロブチル部分に結合しており；かつ前記連結用部分のそれぞれが、シクロブチル部分のＣ−３位において２つのシクロブチル部分に結合している；請求項２８記載の方法。３３．薬学的有効量の、連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成されるオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含むオリゴヌクレオチド代用物；および薬学的に許容しうる希釈剤または担体を含む組成物。３４．配列特異的核酸をインビトロでアッセイする方法であって、該核酸を含む試験溶液を、連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成されるオリゴヌクレオチド代用物であって、前記シクロブチル部分のそれぞれが結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含むオリゴヌクレオチド代用物と接触させることを含む方法。３５．連結用部分により共有結合的に結合した複数のシクロブチル部分から形成される化合物を製造する方法であって、ここで前記シクロブチル部分のそれぞれは結合したプリンまたは結合したピリミジン複素環式塩基を含み、該方法は、シクロブチル部分を脱離基で官能化し；前記シクロブチル部分上のそれぞれの前記脱離基を、独立して選択されるプリンまたはピリミジン複素環式塩基で置き換え；前記複素環式塩基含有シクロブチル部分を保護基により官能化し；前記保護された部分を活性化連結基により官能化し；そして前記保護され活性化された部分を段階的に脱保護し連結する；の各工程を含むことを特徴とする方法。３６．前記保護され活性化された部分が、高分子支持体上で脱保護され連結される、請求項３５記載の方法。３７．前記保護され活性化された部分が、次の方法により脱保護され連結される、請求項３５記載の方法。