JPH08289A - トランスアミナーゼ測定試薬 - Google Patents
トランスアミナーゼ測定試薬Info
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- JPH08289A JPH08289A JP15546394A JP15546394A JPH08289A JP H08289 A JPH08289 A JP H08289A JP 15546394 A JP15546394 A JP 15546394A JP 15546394 A JP15546394 A JP 15546394A JP H08289 A JPH08289 A JP H08289A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】溶液状態で長期間保存可能な、トランスグルタ
ミナーゼ測定用試薬組成物を提供する。 【構成】試薬組成物中のＬＤとして、鳥類由来ＬＤを使
用する。
ミナーゼ測定用試薬組成物を提供する。 【構成】試薬組成物中のＬＤとして、鳥類由来ＬＤを使
用する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、臨床診断の指標となっ
ている、トランスアミナーゼ活性測定法およびトランス
アミナーゼ活性測定試薬に関するものである。
ている、トランスアミナーゼ活性測定法およびトランス
アミナーゼ活性測定試薬に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】血清中のトランスアミナーゼ活性値は、
肝臓や心臓の疾患の場合にその障害に応じて鋭敏に反応
することから、これらの病気の診断にはトランスアミナ
ーゼの活性測定を行うことが広く行われている。
肝臓や心臓の疾患の場合にその障害に応じて鋭敏に反応
することから、これらの病気の診断にはトランスアミナ
ーゼの活性測定を行うことが広く行われている。
【０００３】
【発明が解決しようとする問題点】近年多くの臨床検査
用紙薬組成物が、凍結乾燥された粉末から溶液状態のも
のに置き換えられる傾向にあるが、これは多忙な臨床検
査業務の現場において、粉末状の試薬組成物を、使用の
都度、溶液に溶かす作業過程がカットされ、現場の負担
が軽減されることを意味するものである。
用紙薬組成物が、凍結乾燥された粉末から溶液状態のも
のに置き換えられる傾向にあるが、これは多忙な臨床検
査業務の現場において、粉末状の試薬組成物を、使用の
都度、溶液に溶かす作業過程がカットされ、現場の負担
が軽減されることを意味するものである。
【０００４】ところが臨床検査項目の一つであるトラン
スアミナーゼの測定に、一般に使用されているブタ由来
のＬＤでは、凍結乾燥する以外に長期間に渡って安定し
た状態で保存することが困難であったことから、血清の
他の検査項目の測定用試薬組成物と同様な、溶液状態の
試薬を組むことが困難であり、使用の都度、粉末状の試
薬組成物を緩衝液に溶解するという作業が必要であっ
た。
スアミナーゼの測定に、一般に使用されているブタ由来
のＬＤでは、凍結乾燥する以外に長期間に渡って安定し
た状態で保存することが困難であったことから、血清の
他の検査項目の測定用試薬組成物と同様な、溶液状態の
試薬を組むことが困難であり、使用の都度、粉末状の試
薬組成物を緩衝液に溶解するという作業が必要であっ
た。
【０００５】
【問題点を解決するための手段】本発明者らは上記従来
の問題点に鑑み鋭意研究の結果、鳥類由来のＬＤ（乳酸
脱水素酵素：ＥＣ １．１．１．２７）が、アルカリ条
件下において高い安定性を有しており、トランスアミナ
ーゼの測定系に、該ＬＤを採用することにより、試薬組
成物を長期間に渡って安定した酵素活性を維持させなが
ら、液状にて保存することが可能であることを見い出
し、本発明を完成した。
の問題点に鑑み鋭意研究の結果、鳥類由来のＬＤ（乳酸
脱水素酵素：ＥＣ １．１．１．２７）が、アルカリ条
件下において高い安定性を有しており、トランスアミナ
ーゼの測定系に、該ＬＤを採用することにより、試薬組
成物を長期間に渡って安定した酵素活性を維持させなが
ら、液状にて保存することが可能であることを見い出
し、本発明を完成した。
【０００６】即ち本発明は、試薬組成中のＬＤとして、
鳥類由来の耐熱性ＬＤを使用することを特徴とする、ト
ランスアミナーゼ測定方法およびトランスアミナーゼ測
定用試薬に関する。
鳥類由来の耐熱性ＬＤを使用することを特徴とする、ト
ランスアミナーゼ測定方法およびトランスアミナーゼ測
定用試薬に関する。
【０００７】本発明に係る鳥類由来ＬＤとしては、アヒ
ル、ニワトリ、ハト等の鳥類の、主として心臓や水晶体
に存在するＬＤ−Ｂ型を使用することが好ましい。尚、
該ＬＤは、鳥類の体組織から抽出・精製することによっ
て得られるが、ＬＤ遺伝子組換えによる微生物の形質転
換体を用いて生産してもよい。この際に使用される微生
物としては、大腸菌、酵母、枯草菌、放線菌等が挙げら
れる。因みにアヒルＬＤ（Ｂ４）のアミノ酸の１次配列
は、Ｗ．Ｈｅｎｄｉｒｋｓら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８８ ８５：ｐｐ７１１
４−７１１８）によって、ニワトリＬＤ（Ｂ４）のアミ
ノ酸の１次配列はＨ．Ｊ．Ｔｒｏｆｆら（Ｐｙｒｉｄｉ
ｎｅ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄ
ｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ （Ｓｕｎｄ，Ｈ．ｅｄ．）
ｐｐ３１−４２ Ｗａｌｔｈｅｒ ｄｅ Ｇｒｕｙｅ
ｒ，Ｂｅｒｌｉｎ）によって既に明らかにされている。
ル、ニワトリ、ハト等の鳥類の、主として心臓や水晶体
に存在するＬＤ−Ｂ型を使用することが好ましい。尚、
該ＬＤは、鳥類の体組織から抽出・精製することによっ
て得られるが、ＬＤ遺伝子組換えによる微生物の形質転
換体を用いて生産してもよい。この際に使用される微生
物としては、大腸菌、酵母、枯草菌、放線菌等が挙げら
れる。因みにアヒルＬＤ（Ｂ４）のアミノ酸の１次配列
は、Ｗ．Ｈｅｎｄｉｒｋｓら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８８ ８５：ｐｐ７１１
４−７１１８）によって、ニワトリＬＤ（Ｂ４）のアミ
ノ酸の１次配列はＨ．Ｊ．Ｔｒｏｆｆら（Ｐｙｒｉｄｉ
ｎｅ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄ
ｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ （Ｓｕｎｄ，Ｈ．ｅｄ．）
ｐｐ３１−４２ Ｗａｌｔｈｅｒ ｄｅ Ｇｒｕｙｅ
ｒ，Ｂｅｒｌｉｎ）によって既に明らかにされている。
【０００８】本発明に係るＬＤの抽出・精製は、鳥類の
体組織に、５ｍＭのＥＤＴＡを含む２０ｍＬの５０ｍＭ
重炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ ７．８）を加え、ガ
ラスブレンダーにて組織懸濁液を調整し、これを遠心分
離（１２０００ｇ×２０分間）することによって、ＬＤ
粗酵素液を得、さらに陰イオン交換体（例：ＤＥＡＥ−
トヨパール６５０Ｍゲル、ＤＥＡＥ−セファロース、Ｄ
ＥＡＥ−セルロファイン等）を充填したカラムに、該Ｌ
Ｄ粗酵素液を素通りさせ、色素結合担体（例：ブルーセ
ファロースＣＬ６Ｂ、ブルーセファロース、ブルーセル
ロファイン等）カラムに吸着させ、該カラムを、１ｍＭ
ＥＤＴＡを含む過剰量の１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ ７．５）にてよく洗浄した後、０−０．５ｍＭ
ＮＡＤＨ溶液にて、グラジエント溶出を行い、溶出液
を８０％飽和硫安塩析の後、０．２Ｍ ＮａＣｌおよび
１ｍＭ ＥＤＴＡを含む少量の１０ｍＭトリエタノール
アミン−塩酸緩衝液（ｐＨ ７．５）にて溶離すること
によって行う。
体組織に、５ｍＭのＥＤＴＡを含む２０ｍＬの５０ｍＭ
重炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ ７．８）を加え、ガ
ラスブレンダーにて組織懸濁液を調整し、これを遠心分
離（１２０００ｇ×２０分間）することによって、ＬＤ
粗酵素液を得、さらに陰イオン交換体（例：ＤＥＡＥ−
トヨパール６５０Ｍゲル、ＤＥＡＥ−セファロース、Ｄ
ＥＡＥ−セルロファイン等）を充填したカラムに、該Ｌ
Ｄ粗酵素液を素通りさせ、色素結合担体（例：ブルーセ
ファロースＣＬ６Ｂ、ブルーセファロース、ブルーセル
ロファイン等）カラムに吸着させ、該カラムを、１ｍＭ
ＥＤＴＡを含む過剰量の１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ ７．５）にてよく洗浄した後、０−０．５ｍＭ
ＮＡＤＨ溶液にて、グラジエント溶出を行い、溶出液
を８０％飽和硫安塩析の後、０．２Ｍ ＮａＣｌおよび
１ｍＭ ＥＤＴＡを含む少量の１０ｍＭトリエタノール
アミン−塩酸緩衝液（ｐＨ ７．５）にて溶離すること
によって行う。
【０００９】本発明に係るトランスアミナーゼとは、Ｇ
ＯＴ（グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ：
ＥＣ ２．６．１．１．）またはＧＰＴ（グルタミン酸
ピルビン酸トランスアミナーゼ：ＥＣ ２．６．１．
２）等を示す。これらは心筋、肝臓、腎臓、骨格筋など
に存在し、グルタミン酸とオキザロ酢酸またはグルタミ
ン酸とピルビン酸との間の転移反応に関する酵素として
知られている。
ＯＴ（グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ：
ＥＣ ２．６．１．１．）またはＧＰＴ（グルタミン酸
ピルビン酸トランスアミナーゼ：ＥＣ ２．６．１．
２）等を示す。これらは心筋、肝臓、腎臓、骨格筋など
に存在し、グルタミン酸とオキザロ酢酸またはグルタミ
ン酸とピルビン酸との間の転移反応に関する酵素として
知られている。
【００１０】以下に本発明の実施例を示す。尚、実施例
における酵素活性の測定は、特に記載がない場合には、
以下の要領で行った。 測定温度：３７℃ 反応組成液： ０．１Ｍ トリエタノールアミン−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５） ０．５ｍＭ ピルビン酸ナトリウム ０．２ｍＭ ＮＡＤＨ 酵素活性の算出：３４０ｎｍにおける１分間当りの吸光
度変化量により、酵素活性を分光光学的に測定し、１単
位を１μｍｏｌ ＮＡＤ+生成／１分間と定めた。
における酵素活性の測定は、特に記載がない場合には、
以下の要領で行った。 測定温度：３７℃ 反応組成液： ０．１Ｍ トリエタノールアミン−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５） ０．５ｍＭ ピルビン酸ナトリウム ０．２ｍＭ ＮＡＤＨ 酵素活性の算出：３４０ｎｍにおける１分間当りの吸光
度変化量により、酵素活性を分光光学的に測定し、１単
位を１μｍｏｌ ＮＡＤ+生成／１分間と定めた。
【００１１】
【実施例１】アヒル（１０頭分）の水晶体（レンズ）お
よび心臓組織より、ＬＤの精製を行った。
よび心臓組織より、ＬＤの精製を行った。
【００１２】アヒル（レンズ酵素）：２．５ｇの水晶体
組織に、２０ｍＬの５０ｍＭ重炭酸アンモニウム緩衝液
（ｐＨ ７．８），５ｍＭ ＥＤＴＡを含む を加え、
ガラスブレンダーにて組織懸濁液を調整した。これを遠
心分離（１２０００ｇ×２０分間）することによって、
ＬＤ粗酵素液を得た。ＤＥＡＥ−トヨパール６５０Ｍゲ
ルを充填したカラムに、該ＬＤ粗酵素液を素通りさせ、
ブルーセファロースＣＬ６Ｂカラムに吸着させた。該カ
ラムを、過剰量の１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５），１ｍＭ ＥＤＴＡを含むにてよく洗浄した
後、０−０．５ｍＭ ＮＡＤＨ溶液にて、グラジエント
溶出を試みた。精製ＬＤは、８０％飽和硫安塩析の後、
少量の１０ｍＭ トリエタノールアミン−塩酸緩衝液
（ｐＨ ７．５），（０．２Ｍ ＮａＣｌおよび １ｍ
Ｍ ＥＤＴＡを含む）にて溶解し、冷蔵保存した。
組織に、２０ｍＬの５０ｍＭ重炭酸アンモニウム緩衝液
（ｐＨ ７．８），５ｍＭ ＥＤＴＡを含む を加え、
ガラスブレンダーにて組織懸濁液を調整した。これを遠
心分離（１２０００ｇ×２０分間）することによって、
ＬＤ粗酵素液を得た。ＤＥＡＥ−トヨパール６５０Ｍゲ
ルを充填したカラムに、該ＬＤ粗酵素液を素通りさせ、
ブルーセファロースＣＬ６Ｂカラムに吸着させた。該カ
ラムを、過剰量の１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５），１ｍＭ ＥＤＴＡを含むにてよく洗浄した
後、０−０．５ｍＭ ＮＡＤＨ溶液にて、グラジエント
溶出を試みた。精製ＬＤは、８０％飽和硫安塩析の後、
少量の１０ｍＭ トリエタノールアミン−塩酸緩衝液
（ｐＨ ７．５），（０．２Ｍ ＮａＣｌおよび １ｍ
Ｍ ＥＤＴＡを含む）にて溶解し、冷蔵保存した。
【００１３】アヒル（心臓酵素）：よく細片した２２０
ｇの心臓組織に、１Ｌの５ｍＭ トリエタノールアミン
−塩酸緩衝液（ｐＨ ７．８），１ｍＭ ＥＤＴＡを含
む を加え、ブレンダーにて組織懸濁液を調整した。該
組織懸濁液を遠心分離（１２０００ｇ×２０分間）によ
り、ＬＤ粗酵素液を得た。ＤＥＡＥ−トヨパール６５０
Ｍゲルを充填したカラムに、該ＬＤ粗酵素液を素通りさ
せ、ブルーセファロースＣＬ６Ｂカラムに吸着させた。
該カラムを、過剰量の１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ ７．５），１ｍＭ ＥＤＴＡを含むにてよく洗浄し
た後、０−０．５ｍＭ ＮＡＤＨ溶液にて、グラジエン
ト溶出を試みた。精製ＬＤは、８０％飽和硫安塩析の
後、少量の１０ｍＭ トリエタノールアミン−塩酸緩衝
液（ｐＨ ７．５），（０．２ＭＮａＣｌおよび １ｍ
Ｍ ＥＤＴＡを含む）にて溶解し、冷蔵保存した。
ｇの心臓組織に、１Ｌの５ｍＭ トリエタノールアミン
−塩酸緩衝液（ｐＨ ７．８），１ｍＭ ＥＤＴＡを含
む を加え、ブレンダーにて組織懸濁液を調整した。該
組織懸濁液を遠心分離（１２０００ｇ×２０分間）によ
り、ＬＤ粗酵素液を得た。ＤＥＡＥ−トヨパール６５０
Ｍゲルを充填したカラムに、該ＬＤ粗酵素液を素通りさ
せ、ブルーセファロースＣＬ６Ｂカラムに吸着させた。
該カラムを、過剰量の１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ ７．５），１ｍＭ ＥＤＴＡを含むにてよく洗浄し
た後、０−０．５ｍＭ ＮＡＤＨ溶液にて、グラジエン
ト溶出を試みた。精製ＬＤは、８０％飽和硫安塩析の
後、少量の１０ｍＭ トリエタノールアミン−塩酸緩衝
液（ｐＨ ７．５），（０．２ＭＮａＣｌおよび １ｍ
Ｍ ＥＤＴＡを含む）にて溶解し、冷蔵保存した。
【００１４】尚、いずれの精製ＬＤも、以下の性質を示
した。 アイソザイム型：ＬＤＨ−Ｂ４ 分子量：１５０，０００（４量体） 比活性：３５０−４５０Ｕ／ｍｇ蛋白（３０℃で測定） ＧＯＴ混存率：０．００８５％（３０℃で測定） ＧＰＴ混存率：０．０１１９％（３０℃で測定）
した。 アイソザイム型：ＬＤＨ−Ｂ４ 分子量：１５０，０００（４量体） 比活性：３５０−４５０Ｕ／ｍｇ蛋白（３０℃で測定） ＧＯＴ混存率：０．００８５％（３０℃で測定） ＧＰＴ混存率：０．０１１９％（３０℃で測定）
【００１５】
【実施例２】ニワトリ由来ＬＤ（シグマ社製，心臓由
来）、およびアヒル由来ＬＤ（実施例１記載のレンズ由
来，心臓由来）、ブタ由来ＬＤ（ベーリンガー社製，心
臓由来Ｂ４型）に関し、ｐＨ５〜１１の範囲において、
下記のＬＤ保存溶液組成にて種々のｐＨのＬＤ酵素溶液
を調製し、３７℃で各々１０日間保存した。該ＬＤ酵素
溶液に残存する酵素活性を測定し、初期値に対する残存
率とすることによってｐＨ安定性を比較した。
来）、およびアヒル由来ＬＤ（実施例１記載のレンズ由
来，心臓由来）、ブタ由来ＬＤ（ベーリンガー社製，心
臓由来Ｂ４型）に関し、ｐＨ５〜１１の範囲において、
下記のＬＤ保存溶液組成にて種々のｐＨのＬＤ酵素溶液
を調製し、３７℃で各々１０日間保存した。該ＬＤ酵素
溶液に残存する酵素活性を測定し、初期値に対する残存
率とすることによってｐＨ安定性を比較した。
【００１６】ＬＤ保存溶液組成：０．１Ｍ ＧＴＡ緩衝
液（等モル濃度のβ：β-−ジメチルグルタル酸、トリ
ス（ヒドロキシメチルアミノ）メタン、２−アミノ−２
−メチル１、３−プロパンジオールから成る，０．０２
％アジ化ナトリウムを含む） ０．１％ 界面活性剤（Ｂｒｉｊｉ−３５） ０．２％ ＢＳＡ １ｍＭ ＥＤＴＡ ＬＤ濃度：０．２Ｕ／ｍＬ
液（等モル濃度のβ：β-−ジメチルグルタル酸、トリ
ス（ヒドロキシメチルアミノ）メタン、２−アミノ−２
−メチル１、３−プロパンジオールから成る，０．０２
％アジ化ナトリウムを含む） ０．１％ 界面活性剤（Ｂｒｉｊｉ−３５） ０．２％ ＢＳＡ １ｍＭ ＥＤＴＡ ＬＤ濃度：０．２Ｕ／ｍＬ
【００１７】
【図１】
【００１８】図１に示すとおり、鳥類由来ＬＤは、ブタ
由来ＬＤに比べて、特にアルカリｐＨにおける溶液安定
性に優れていることが明らかであった。
由来ＬＤに比べて、特にアルカリｐＨにおける溶液安定
性に優れていることが明らかであった。
【００１９】
【実施例３】日本臨床化学会におけるＧＰＴ活性測定の
ための勧告法（日本臨床：１９８９年１８巻第４号）に
基づいて、ＧＰＴ活性測定用の試薬を、以下の条件で調
製した。
ための勧告法（日本臨床：１９８９年１８巻第４号）に
基づいて、ＧＰＴ活性測定用の試薬を、以下の条件で調
製した。
【００２０】 第１試薬溶液組成：トリス−塩酸緩衝液 ｐＨ９〜１１ ＬＤ ０．２〜２．０Ｕ／ｍＬ ＮＡＤＨ ０．１５〜０．４ｍＭ 第２試薬溶液組成：トリス−塩酸緩衝液 ｐＨ７．５ Ｌ−アラニン ７〜１４ｇ／ｄｌ ２−オキソグルタル酸 ０．４〜０．８ｇ／ｄｌ
【００２１】測定の際には、第１試薬と第２試薬を混合
した後、３０℃でｐＨ７．５になるように調製した。
した後、３０℃でｐＨ７．５になるように調製した。
【００２２】
【実施例４】ニワトリ由来ＬＤ（シグマ社製，心臓由
来）、およびアヒル由来ＬＤ（実施例１記載，心臓由
来）、ブタ由来ＬＤ（ベーリンガー社製，心臓由来Ｂ４
型）を使用した実施例４記載の第１試薬について、４
℃，ｐＨ９．５の条件下での保存安定に関する比較試験
を行った。
来）、およびアヒル由来ＬＤ（実施例１記載，心臓由
来）、ブタ由来ＬＤ（ベーリンガー社製，心臓由来Ｂ４
型）を使用した実施例４記載の第１試薬について、４
℃，ｐＨ９．５の条件下での保存安定に関する比較試験
を行った。
【００２３】
【図２】
【００２４】結果は、図２に示すとおり、鳥類由来ＬＤ
は、ブタ由来ＬＤに比べて、試薬組成物中において、安
定であることが確認された。
は、ブタ由来ＬＤに比べて、試薬組成物中において、安
定であることが確認された。
【００２５】
【実施例５】ニワトリ由来ＬＤ（シグマ社製，心臓由
来）、およびアヒル由来ＬＤ（実施例１記載，心臓由
来）、ブタ由来ＬＤ（ベーリンガー社製，心臓由来Ｂ４
型）に関し、下記の日本臨床化学会におけるＧＰＴ活性
測定のための勧告法（日本臨床：１９８９年１８巻第４
号）に基づくＧＰＴ活性測定用反応液組成を用いて、種
々のピルビン酸濃度に対するＫｍ値を比較した。
来）、およびアヒル由来ＬＤ（実施例１記載，心臓由
来）、ブタ由来ＬＤ（ベーリンガー社製，心臓由来Ｂ４
型）に関し、下記の日本臨床化学会におけるＧＰＴ活性
測定のための勧告法（日本臨床：１９８９年１８巻第４
号）に基づくＧＰＴ活性測定用反応液組成を用いて、種
々のピルビン酸濃度に対するＫｍ値を比較した。
【００２６】 反応液組成：トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５） １００ｍＭ ＬＤ ０．０１Ｕ／ｍＬ ＮＡＤＨ ０．１６ｍＭ Ｌ−アラニン ５００ｍＭ ２−オキソグルタル酸 １５ｍＭ 反応温度：３０℃
【００２７】
【表１】
【００２８】結果は、表１に示すとおり、いずれも日本
臨床化学会におけるＧＰＴ活性測定のための勧告法で規
定されている値（０．４ｍＭ以下）を下回ることが確認
され、測定用試薬として適当であることが確認された。
臨床化学会におけるＧＰＴ活性測定のための勧告法で規
定されている値（０．４ｍＭ以下）を下回ることが確認
され、測定用試薬として適当であることが確認された。
【００２９】
【実施例６】ニワトリ由来ＬＤ（シグマ社製，心臓由
来）、およびアヒル由来ＬＤ（実施例１記載，心臓由
来）、ブタ由来ＬＤ（ベーリンガー社製，心臓由来Ｂ４
型）を使用した実施例４記載の第１試薬について、３７
℃，ｐＨ９．５，１週間の条件下でのＮＡＤＨの保存安
定に関する比較試験を行った。
来）、およびアヒル由来ＬＤ（実施例１記載，心臓由
来）、ブタ由来ＬＤ（ベーリンガー社製，心臓由来Ｂ４
型）を使用した実施例４記載の第１試薬について、３７
℃，ｐＨ９．５，１週間の条件下でのＮＡＤＨの保存安
定に関する比較試験を行った。
【００３０】
【図３】
【００３１】結果は、図３に示すとおり、鳥類由来ＬＤ
を使用した第１試薬中のＮＡＤＨは、ブタ由来ＬＤを使
用した第１試薬中のＮＡＤＨと比較して、安定であるこ
とが確認された。
を使用した第１試薬中のＮＡＤＨは、ブタ由来ＬＤを使
用した第１試薬中のＮＡＤＨと比較して、安定であるこ
とが確認された。
【００３２】
【実施例７】市販のコントロール血清（モニトロールＩ
Ｉ：Ｂａｘｔｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｉｎ
ｃ．）を用いて、生理食塩水で希釈系列を作製し、以下
の条件でＧＰＴ活性を測定した。
Ｉ：Ｂａｘｔｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｉｎ
ｃ．）を用いて、生理食塩水で希釈系列を作製し、以下
の条件でＧＰＴ活性を測定した。
【００３３】第１試薬溶液組成： トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ ９） １０ｍＭ ＮａＣｌ ２００ｍＭ 界面活性剤（Ｂｒｉｊｉ−３５） ０．１％ アジ化ナトリウム ０．０２％ 鳥類由来ＬＤ ２Ｕ／ｍＬ 第２試薬溶液組成： トリス−塩酸緩衝液 Ｌ−アラニン ２−オキソグルタル酸 分析装置：Ｃｏｂａｓ Ｆａｒａ （Ｐ−Ｉ−ＳＲＩ−
Ａ） 測定温度：３７℃ 測定波長：３４０ｎｍ 試薬添加比率： （サンプル）：（純水）：（第１試
薬）：（第２試薬）＝１０：５：１８０：９０μｌ
Ａ） 測定温度：３７℃ 測定波長：３４０ｎｍ 試薬添加比率： （サンプル）：（純水）：（第１試
薬）：（第２試薬）＝１０：５：１８０：９０μｌ
【００３４】第２試薬を添加した後、反応開始より１分
後から４分後までの３分間のレート分析にて１分間当り
の吸光度変化量を求め、ＧＰＴ活性値を算出した。尚、
ＧＰＴ活性測定能から見た第１試薬の保存安定性は、前
述の市販コントロール血清用いたＧＰＴ活性測定と同一
条件の下で、市販コントロール血清の希釈系列に対する
１分間当りの吸光度変化量の差異として求めた。
後から４分後までの３分間のレート分析にて１分間当り
の吸光度変化量を求め、ＧＰＴ活性値を算出した。尚、
ＧＰＴ活性測定能から見た第１試薬の保存安定性は、前
述の市販コントロール血清用いたＧＰＴ活性測定と同一
条件の下で、市販コントロール血清の希釈系列に対する
１分間当りの吸光度変化量の差異として求めた。
【００３５】
【図４】
【００３６】結果は、図４に示すとおり、高い保存安定
性が確認された。
性が確認された。
【００３７】
【発明の効果】本発明は、トランスアミナーゼ活性の測
定用試薬組成物において、鳥類由来のＬＤを使用するこ
とにより、該試薬組成物の保存安定性を飛躍的に高める
ことに成功すると共に、高い精度でのトランスアミナー
ゼ活性の測定を可能とするものである。
定用試薬組成物において、鳥類由来のＬＤを使用するこ
とにより、該試薬組成物の保存安定性を飛躍的に高める
ことに成功すると共に、高い精度でのトランスアミナー
ゼ活性の測定を可能とするものである。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成６年９月２２日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】追加
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＬＤ保存溶液でのｐＨ安定性を示す図表であ
る。
る。
【図２】 ＧＰＴ測定のための第１試薬溶液中での酵素
安定性を示す図表である。
安定性を示す図表である。
【図３】 ＧＰＴ測定のための第１試薬溶液中でのＮＡ
ＤＨ分解パターンを示す図表である。
ＤＨ分解パターンを示す図表である。
【図４】 市販コントロール血清を用いたＧＰＴ活性測
定と鳥類ＬＤを含む第１試薬溶液の保存安定性を示す図
表である。
定と鳥類ＬＤを含む第１試薬溶液の保存安定性を示す図
表である。
Claims (3)
- 【請求項１】耐熱性ＬＤを用いることを特徴とするトラ
ンスアミナーゼ測定方法および測定試薬。 - 【請求項２】耐熱性ＬＤが鳥類由来であることを特徴と
する、請求項１記載の測定方法および測定試薬。 - 【請求項３】溶液状で安定であることを特徴とする、請
求項１〜３記載の測定試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15546394A JP3195714B2 (ja) | 1994-06-15 | 1994-06-15 | トランスアミナーゼ測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15546394A JP3195714B2 (ja) | 1994-06-15 | 1994-06-15 | トランスアミナーゼ測定試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08289A true JPH08289A (ja) | 1996-01-09 |
| JP3195714B2 JP3195714B2 (ja) | 2001-08-06 |
Family
ID=15606607
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15546394A Expired - Fee Related JP3195714B2 (ja) | 1994-06-15 | 1994-06-15 | トランスアミナーゼ測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3195714B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6057141A (en) * | 1997-06-05 | 2000-05-02 | Oriental Yeast Co., Ltd. | DNA encoding the subunit of avian lactate dehydrogenase |
-
1994
- 1994-06-15 JP JP15546394A patent/JP3195714B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6057141A (en) * | 1997-06-05 | 2000-05-02 | Oriental Yeast Co., Ltd. | DNA encoding the subunit of avian lactate dehydrogenase |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3195714B2 (ja) | 2001-08-06 |
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