JPH08268912A - 補体活性化の抑制剤 - Google Patents
補体活性化の抑制剤Info
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- JPH08268912A JPH08268912A JP9750395A JP9750395A JPH08268912A JP H08268912 A JPH08268912 A JP H08268912A JP 9750395 A JP9750395 A JP 9750395A JP 9750395 A JP9750395 A JP 9750395A JP H08268912 A JPH08268912 A JP H08268912A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】免疫グロブリンの新規な薬理作用としての補体
活性化の抑制剤を提供すること。 【構成】Ｆｃ部分を有する免疫グロブリンを有効成分と
する補体活性化の抑制剤。
活性化の抑制剤を提供すること。 【構成】Ｆｃ部分を有する免疫グロブリンを有効成分と
する補体活性化の抑制剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、Ｆｃ部分を有する免疫
グロブリンを有効成分とする補体活性化の抑制剤に関す
る。
グロブリンを有効成分とする補体活性化の抑制剤に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】免疫グロブリンの大量療法による新しい
適応症として、川崎病、潰瘍性大腸炎、習慣性流産、多
発性筋炎等が考えられる。これらの疾患はその発症のメ
カニズムとして自己免疫疾患が考えられており、免疫グ
ロブリンの大量療法は血中での高濃度のグロブリンの存
在による免疫抑制的な作用機序が予想されているが、な
お詳細は不明である。
適応症として、川崎病、潰瘍性大腸炎、習慣性流産、多
発性筋炎等が考えられる。これらの疾患はその発症のメ
カニズムとして自己免疫疾患が考えられており、免疫グ
ロブリンの大量療法は血中での高濃度のグロブリンの存
在による免疫抑制的な作用機序が予想されているが、な
お詳細は不明である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは上記の事
情を考慮して研究を行った結果、免疫グロブリンの新規
な薬理作用として補体活性化の抑制作用を見出し、本発
明を完成した。
情を考慮して研究を行った結果、免疫グロブリンの新規
な薬理作用として補体活性化の抑制作用を見出し、本発
明を完成した。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、Ｆｃ部分を有
する免疫グロブリンを有効成分とする補体活性化の抑制
剤に関するものである。本発明の有効成分として用いら
れるＦｃ部分を有する免疫グロブリンとは、Ｆｃフラグ
メント自体、および、非修飾免疫グロブリン、或いはそ
れを、そのＦｃ部分を破壊しない方法において、化学処
理または酵素処理等の処理を施した免疫グロブリンを意
味する。例えば、生物学的製剤基準に収載されているア
ルキル化ヒト免疫グロブリン、スルホ化ヒト免疫グロブ
リン、プラスミン処理ヒト免疫グロブリン、ポリエチレ
ングリコール処理ヒト免疫グロブリン、ｐＨ４処理ヒト
免疫グロブリンなどが例示されるが、これに限定される
ものではなく、Ｆｃ部分を実質的に保持している免疫グ
ロブリンを含有するものも包含する。
する免疫グロブリンを有効成分とする補体活性化の抑制
剤に関するものである。本発明の有効成分として用いら
れるＦｃ部分を有する免疫グロブリンとは、Ｆｃフラグ
メント自体、および、非修飾免疫グロブリン、或いはそ
れを、そのＦｃ部分を破壊しない方法において、化学処
理または酵素処理等の処理を施した免疫グロブリンを意
味する。例えば、生物学的製剤基準に収載されているア
ルキル化ヒト免疫グロブリン、スルホ化ヒト免疫グロブ
リン、プラスミン処理ヒト免疫グロブリン、ポリエチレ
ングリコール処理ヒト免疫グロブリン、ｐＨ４処理ヒト
免疫グロブリンなどが例示されるが、これに限定される
ものではなく、Ｆｃ部分を実質的に保持している免疫グ
ロブリンを含有するものも包含する。
【０００５】具体的には非化学修飾免疫グロブリンが挙
げられる。本発明の非化学修飾免疫グロブリンとは、 自然のままで何らの修飾や変化もうけておらず、従
って免疫グロブリンのフラグメントであるＦａｂ、Ｆ
（ａｂ′）2 、Ｆｃ等を含まず、 抗体価の低下がなく、同時に抗体スペクトルの低下
もなく、 抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基
準で安全とみなされる２０単位（ＣＨ５０値）よりも十
分に低い。 という諸性状を備えたものをいう。
げられる。本発明の非化学修飾免疫グロブリンとは、 自然のままで何らの修飾や変化もうけておらず、従
って免疫グロブリンのフラグメントであるＦａｂ、Ｆ
（ａｂ′）2 、Ｆｃ等を含まず、 抗体価の低下がなく、同時に抗体スペクトルの低下
もなく、 抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基
準で安全とみなされる２０単位（ＣＨ５０値）よりも十
分に低い。 という諸性状を備えたものをいう。
【０００６】本発明において使用する非化学修飾免疫グ
ロブリンは、自然状態のもので、しかも抗補体価の低い
ものであれば、いかなる方法で得たものであってもよい
が、既存の設備で製造できる、既に医薬として使用され
ている筋注用免疫グロブリンを用い、酸性処理でその凝
集体を切り離して得るのが、最も効率的である。しか
し、製造上の複雑さや収量の低下を問題としないなら
ば、非イオン系界面活性剤による方法で抗補体作用の原
因となる免疫グロブリン凝集体を除去し、抗補体価の低
い免疫グロブリンとしたものを使用することが好まし
い。
ロブリンは、自然状態のもので、しかも抗補体価の低い
ものであれば、いかなる方法で得たものであってもよい
が、既存の設備で製造できる、既に医薬として使用され
ている筋注用免疫グロブリンを用い、酸性処理でその凝
集体を切り離して得るのが、最も効率的である。しか
し、製造上の複雑さや収量の低下を問題としないなら
ば、非イオン系界面活性剤による方法で抗補体作用の原
因となる免疫グロブリン凝集体を除去し、抗補体価の低
い免疫グロブリンとしたものを使用することが好まし
い。
【０００７】その調製方法は公知の手法により行えばよ
く、例えば、特開昭５３−４７５１５号、同５７−３２
２２８号、同６３−１８３５３９号、同６３−１９２７
２４号等に記載の方法に準じればよい。また、加熱処理
も行うことが好ましく、例えば、液状加熱としては、特
開昭６１−１９１６２２号、同６３−１４６８３２号、
乾燥加熱としては、特開昭６１−７８７３０号、同６２
−２２８０２４号、同６２−２８３９３３号、同６２−
２８９５２３号等に記載の方法に準じればよい。
く、例えば、特開昭５３−４７５１５号、同５７−３２
２２８号、同６３−１８３５３９号、同６３−１９２７
２４号等に記載の方法に準じればよい。また、加熱処理
も行うことが好ましく、例えば、液状加熱としては、特
開昭６１−１９１６２２号、同６３−１４６８３２号、
乾燥加熱としては、特開昭６１−７８７３０号、同６２
−２２８０２４号、同６２−２８３９３３号、同６２−
２８９５２３号等に記載の方法に準じればよい。
【０００８】血漿由来免疫グロブリンの由来は特に限定
されない。具体的にはヒト、マウス、ラット等が挙げら
れるが、好ましくはヒトである。市販品の具体例として
は、ポリエチレングリコール処理ヒト免疫グロブリンで
あるヴェノグロブリン−Ｉ（商品名、ミドリ十字）、ヴ
ェノグロブリン−ＩＨ（商品名、ミドリ十字）等が例示
される。
されない。具体的にはヒト、マウス、ラット等が挙げら
れるが、好ましくはヒトである。市販品の具体例として
は、ポリエチレングリコール処理ヒト免疫グロブリンで
あるヴェノグロブリン−Ｉ（商品名、ミドリ十字）、ヴ
ェノグロブリン−ＩＨ（商品名、ミドリ十字）等が例示
される。
【０００９】本発明の補体活性化の抑制剤（以下、本発
明製剤ともいう）の投与経路は、通常、注射であり、特
に静脈内投与が好ましい。本発明製剤の投与量は体重１
ｋｇ当たり免疫グロブリンとして１００〜１０００ｍｇ
／日を、１〜数日間連日静脈内投与が標準的であるが、
症状、性別、体重等に応じて投与量の増減をすればよ
い。
明製剤ともいう）の投与経路は、通常、注射であり、特
に静脈内投与が好ましい。本発明製剤の投与量は体重１
ｋｇ当たり免疫グロブリンとして１００〜１０００ｍｇ
／日を、１〜数日間連日静脈内投与が標準的であるが、
症状、性別、体重等に応じて投与量の増減をすればよ
い。
【００１０】本発明製剤は、用時、液状製剤の場合はそ
のまま、あるいは適当な溶媒（例えば、注射蒸留水、生
理食塩液、ブドウ糖液など）で希釈して、また、乾燥製
剤の場合は適当な溶媒（例えば、注射用蒸留水）に溶解
して、静脈内投与、点滴などにより、予防または治療に
用いられる。
のまま、あるいは適当な溶媒（例えば、注射蒸留水、生
理食塩液、ブドウ糖液など）で希釈して、また、乾燥製
剤の場合は適当な溶媒（例えば、注射用蒸留水）に溶解
して、静脈内投与、点滴などにより、予防または治療に
用いられる。
【００１１】
【実施例】本発明をより詳細に説明するために製剤例お
よび実験例を挙げるが、本発明がこれらによりなんら限
定されるものではない。 実験例 １．血液型反応によるヒト赤血球溶血に対する免疫グロ
ブリン（以下、ＩｇＧ）添加の作用 １−１．ＩｇＧの作用の確認 製剤例で調製した精製免疫グロブリンの５％溶液を用い
た。
よび実験例を挙げるが、本発明がこれらによりなんら限
定されるものではない。 実験例 １．血液型反応によるヒト赤血球溶血に対する免疫グロ
ブリン（以下、ＩｇＧ）添加の作用 １−１．ＩｇＧの作用の確認 製剤例で調製した精製免疫グロブリンの５％溶液を用い
た。
【００１２】ＩｇＧを希釈倍率を変化させてヒトＡ型血
清とヒトＢ型赤血球を組み合わせる系に添加したときの
溶血率の変化を検討した。補体価測定用ゼラチンベロナ
ール緩衝末（ＧＶＢ；日本凍結乾燥研究所）で予め希釈
したＩｇＧ各３５０μｌを同量のヒトＡ型血清と混合し
て３７℃で２０分間振盪した後、このうちの３００μｌ
に、ヒトＢ型赤血球（ＲＢＣ）７５μｌを添加して３７
℃で１時間振盪した。振盪終了後、遠心分離にて上清を
採取し、５４１ｎｍの吸光度を測定することにより溶血
率を算出した（図１）。ＩｇＧを添加した系においては
コントロール（ＩｇＧ無添加；溶血率１２．９１％）に
比較して溶血率が低下した。
清とヒトＢ型赤血球を組み合わせる系に添加したときの
溶血率の変化を検討した。補体価測定用ゼラチンベロナ
ール緩衝末（ＧＶＢ；日本凍結乾燥研究所）で予め希釈
したＩｇＧ各３５０μｌを同量のヒトＡ型血清と混合し
て３７℃で２０分間振盪した後、このうちの３００μｌ
に、ヒトＢ型赤血球（ＲＢＣ）７５μｌを添加して３７
℃で１時間振盪した。振盪終了後、遠心分離にて上清を
採取し、５４１ｎｍの吸光度を測定することにより溶血
率を算出した（図１）。ＩｇＧを添加した系においては
コントロール（ＩｇＧ無添加；溶血率１２．９１％）に
比較して溶血率が低下した。
【００１３】１−２．補体関与の証明 （１） 上記の血液型反応による溶血反応が補体活性化
を介して起こっていることを確かめるため、血清を５６
℃で３０分間加熱することによりＣ１ｑを非動化してか
ら系に添加した。また、非動化血清を添加した系にウサ
ギ補体を濃度を変えて添加したときの溶血率を測定し
た。
を介して起こっていることを確かめるため、血清を５６
℃で３０分間加熱することによりＣ１ｑを非動化してか
ら系に添加した。また、非動化血清を添加した系にウサ
ギ補体を濃度を変えて添加したときの溶血率を測定し
た。
【００１４】ヒトＡ型血清を５６℃で３０分間加熱した
後、ＧＶＢと等量混合したもの３００μｌに、ヒトＢ型
赤血球を７５μｌ添加し、３７℃で１時間振盪した時の
溶血をＡ５４１ｎｍを測定することにより求めた。ま
た、ＧＶＢ３００μｌにヒトＢ型赤血球７５μｌを添加
したもの、蒸留水にヒトＢ型赤血球７５μｌを添加した
もののＡ５４１ｎｍをそれぞれ溶血率０％、１００％と
設定し、上記のサンプルの溶血率を算出した。
後、ＧＶＢと等量混合したもの３００μｌに、ヒトＢ型
赤血球を７５μｌ添加し、３７℃で１時間振盪した時の
溶血をＡ５４１ｎｍを測定することにより求めた。ま
た、ＧＶＢ３００μｌにヒトＢ型赤血球７５μｌを添加
したもの、蒸留水にヒトＢ型赤血球７５μｌを添加した
もののＡ５４１ｎｍをそれぞれ溶血率０％、１００％と
設定し、上記のサンプルの溶血率を算出した。
【００１５】また、更に、上記の非動化した血清に予め
ＧＶＢで２〜５１２倍に希釈したウサギ補体を等量混合
し、上記と同様の方法で溶血率を算出した。非動化した
血清のみを添加した場合（コントロール）では赤血球の
溶血はほとんど認められず、この系にウサギ補体を添加
すると溶血が認められた。この結果より、血液型反応に
よる溶血は補体活性化を介することが示唆された。
ＧＶＢで２〜５１２倍に希釈したウサギ補体を等量混合
し、上記と同様の方法で溶血率を算出した。非動化した
血清のみを添加した場合（コントロール）では赤血球の
溶血はほとんど認められず、この系にウサギ補体を添加
すると溶血が認められた。この結果より、血液型反応に
よる溶血は補体活性化を介することが示唆された。
【００１６】（２）ＩｇＧ添加による溶血抑制が補体の
作用の抑制を介することを確かめる目的で、ＩｇＧの添
加で溶血が抑制された系に外来的にウサギ補体を添加す
る実験を行った。ＧＶＢで２〜３２倍希釈したＩｇＧ
と、２あるいは４倍希釈したウサギ補体を等量混合し、
この混合物とヒトＡ型血清を等量混合したものについて
上記の方法で溶血率を測定した（図２）。
作用の抑制を介することを確かめる目的で、ＩｇＧの添
加で溶血が抑制された系に外来的にウサギ補体を添加す
る実験を行った。ＧＶＢで２〜３２倍希釈したＩｇＧ
と、２あるいは４倍希釈したウサギ補体を等量混合し、
この混合物とヒトＡ型血清を等量混合したものについて
上記の方法で溶血率を測定した（図２）。
【００１７】その結果、外来的に加えるウサギ補体の濃
度を上げるに従って、ＩｇＧ添加による溶血抑制は弱く
なり、ＩｇＧ添加による溶血抑制作用も補体が関与する
ことが示唆された。 ２．ヒト血清による感作ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）の溶
血に対するＩｇＧ添加の作用 ２−１．溶血に及ぼすＩｇＧ添加の作用と確認 感作ＳＲＢＣの調製 ＳＲＢＣ１１ｍｌをＧＶＢで３回洗浄して２５ｍｌの用
量に調製したものに抗ＳＲＢＣ抗体（ＩｇＧ画分、溶血
素、オルガノンテクニカ社製）１２．５μｌをＧＶＢ２
５ｍｌに溶解した液を混合し、３７℃で２０分間振盪し
た後、１５分間氷冷下に静置することにより感作した。
度を上げるに従って、ＩｇＧ添加による溶血抑制は弱く
なり、ＩｇＧ添加による溶血抑制作用も補体が関与する
ことが示唆された。 ２．ヒト血清による感作ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）の溶
血に対するＩｇＧ添加の作用 ２−１．溶血に及ぼすＩｇＧ添加の作用と確認 感作ＳＲＢＣの調製 ＳＲＢＣ１１ｍｌをＧＶＢで３回洗浄して２５ｍｌの用
量に調製したものに抗ＳＲＢＣ抗体（ＩｇＧ画分、溶血
素、オルガノンテクニカ社製）１２．５μｌをＧＶＢ２
５ｍｌに溶解した液を混合し、３７℃で２０分間振盪し
た後、１５分間氷冷下に静置することにより感作した。
【００１８】ＧＶＢで２〜５１２倍に２段階希釈したＩ
ｇＧと、ＧＶＢで２０倍希釈したヒト血清を等量混合し
４ｍｌとし、非感作ＳＲＢＣ（５×１０8 ／ｍｌ）を
０．４ｍｌ添加して氷冷下に１５分間静置することによ
り抗ＳＲＢＣ抗体を吸収した。遠心によりＳＲＢＣを除
去後に、この液１．２ｍｌにＧＶＢ１．４ｍｌ、感作Ｓ
ＲＢＣを０．４ｍｌを添加し、３７℃で６０分間振盪さ
せることにより溶血反応を行った。反応終了後、遠心分
離によりＳＲＢＣを除去し、５４１ｎｍの吸光度を測定
することにより溶血の程度（溶血率）を測定した。溶血
反応を行う際に、上記のサンプルの代わりにＧＶＢある
いは蒸留水を使用したものをおき、それぞれの測定値を
溶血率０％、１００％と設定して、上記の溶血率を算出
した。
ｇＧと、ＧＶＢで２０倍希釈したヒト血清を等量混合し
４ｍｌとし、非感作ＳＲＢＣ（５×１０8 ／ｍｌ）を
０．４ｍｌ添加して氷冷下に１５分間静置することによ
り抗ＳＲＢＣ抗体を吸収した。遠心によりＳＲＢＣを除
去後に、この液１．２ｍｌにＧＶＢ１．４ｍｌ、感作Ｓ
ＲＢＣを０．４ｍｌを添加し、３７℃で６０分間振盪さ
せることにより溶血反応を行った。反応終了後、遠心分
離によりＳＲＢＣを除去し、５４１ｎｍの吸光度を測定
することにより溶血の程度（溶血率）を測定した。溶血
反応を行う際に、上記のサンプルの代わりにＧＶＢある
いは蒸留水を使用したものをおき、それぞれの測定値を
溶血率０％、１００％と設定して、上記の溶血率を算出
した。
【００１９】その結果、図３に示すようにＩｇＧによる
溶血抑制が認められた。 ２−２．ＩｇＧによる溶血抑制への補体関与の有無 ＩｇＧによる感作ＳＲＢＣ溶血率低下が補体の作用阻害
もしくは補体の消費を介するか否かを検討する目的で、
ＩｇＧと混合するとヒト血清の希釈倍率を下げた時（補
体量を増加させたとき）のＩｇＧによる溶血率低下の程
度を調べた。上記実験と同様の方法で、ヒト血清の希釈
倍率を２０、１０あるいは５倍とした時の溶血率を測定
した（図４）。
溶血抑制が認められた。 ２−２．ＩｇＧによる溶血抑制への補体関与の有無 ＩｇＧによる感作ＳＲＢＣ溶血率低下が補体の作用阻害
もしくは補体の消費を介するか否かを検討する目的で、
ＩｇＧと混合するとヒト血清の希釈倍率を下げた時（補
体量を増加させたとき）のＩｇＧによる溶血率低下の程
度を調べた。上記実験と同様の方法で、ヒト血清の希釈
倍率を２０、１０あるいは５倍とした時の溶血率を測定
した（図４）。
【００２０】ＩｇＧと混合するヒト血清の希釈倍率を低
下させると溶血率抑制の程度は弱くなり、ＩｇＧによる
溶血抑制は血清中の何らかの因子の枯渇あるいは競合阻
害に因ると推察された。血液型反応による溶血抑制の検
討の結果から、この血清の因子は補体と予想される。 ３．ＩｇＧ添加による溶血抑制のメカニズムの検討 ＩｇＧの作用部位の検討 酵素処理により分解・精製したＦｃもしくはＦ（ａ
ｂ′）2 を感作ＳＲＢＣを使用した溶血測定の実験系の
ＩｇＧと同様に添加し、溶血抑制の有無を検討した。
下させると溶血率抑制の程度は弱くなり、ＩｇＧによる
溶血抑制は血清中の何らかの因子の枯渇あるいは競合阻
害に因ると推察された。血液型反応による溶血抑制の検
討の結果から、この血清の因子は補体と予想される。 ３．ＩｇＧ添加による溶血抑制のメカニズムの検討 ＩｇＧの作用部位の検討 酵素処理により分解・精製したＦｃもしくはＦ（ａ
ｂ′）2 を感作ＳＲＢＣを使用した溶血測定の実験系の
ＩｇＧと同様に添加し、溶血抑制の有無を検討した。
【００２１】４倍より１２８倍までＧＶＢで２段階希釈
したＦｃ、Ｆ（ａｂ′）2 もしくはＩｇＧとＧＶＢで２
０倍希釈したヒト血清を等量混合し、この液４ｍｌに対
して非感作ＳＲＢＣ０．４ｍｌを添加して１５分間氷冷
下でインキュベーションすることにより吸収した。遠心
によりＳＲＢＣを除去し、この溶液１．２ｍｌにＧＶＢ
１．４ｍｌ、感作ＳＲＢＣ０．４ｍｌを添加して３７℃
で６０分間インキュベーションした。インキュベーショ
ン終了後、遠心によりＳＲＢＣを除去し、上清について
５４１ｎｍの吸光度を測定し、溶血率を算出した。
したＦｃ、Ｆ（ａｂ′）2 もしくはＩｇＧとＧＶＢで２
０倍希釈したヒト血清を等量混合し、この液４ｍｌに対
して非感作ＳＲＢＣ０．４ｍｌを添加して１５分間氷冷
下でインキュベーションすることにより吸収した。遠心
によりＳＲＢＣを除去し、この溶液１．２ｍｌにＧＶＢ
１．４ｍｌ、感作ＳＲＢＣ０．４ｍｌを添加して３７℃
で６０分間インキュベーションした。インキュベーショ
ン終了後、遠心によりＳＲＢＣを除去し、上清について
５４１ｎｍの吸光度を測定し、溶血率を算出した。
【００２２】ＦｃもしくはＩｇＧの感作ＳＲＢＣ溶血に
及ぼす影響を図５に、Ｆ（ａｂ′）2 もしくはＩｇＧの
感作ＳＲＢＣ溶血に及ぼす影響を図６に各々示した。な
お、ＩｇＧ無添加（ＧＶＢのみ）の場合をコントロール
とした。その結果、Ｆｃを添加した系ではＩｇＧと同様
に溶血抑制が認められたが、Ｆ（ａｂ′）2 の添加では
溶血抑制が認められなかった。このことより、溶血抑制
にはグロブリン分子のＦｃ部分が重要であることが明ら
かとなった。
及ぼす影響を図５に、Ｆ（ａｂ′）2 もしくはＩｇＧの
感作ＳＲＢＣ溶血に及ぼす影響を図６に各々示した。な
お、ＩｇＧ無添加（ＧＶＢのみ）の場合をコントロール
とした。その結果、Ｆｃを添加した系ではＩｇＧと同様
に溶血抑制が認められたが、Ｆ（ａｂ′）2 の添加では
溶血抑制が認められなかった。このことより、溶血抑制
にはグロブリン分子のＦｃ部分が重要であることが明ら
かとなった。
【００２３】製剤例１ コーン氏の冷アルコール分画法で得られた分画II＋III
のペースト１ｋｇを０．６％塩化ナトリウム１０リット
ルに溶解させ、１Ｎ−塩酸でｐＨ３．８に調整し、４℃
で６０分間攪拌して酸処理を行った。この溶液に平均分
子量４，０００のポリエチレングリコールを５００ｇ添
加し、溶解させつつ１Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨをｐ
Ｈ５．０に調整し、遠心分離により沈澱を除いて澄明な
上清を得た。この上清に平均分子量４，０００のポリエ
チレングリコール７００ｇを追加し、ゆるやかに攪拌し
ながら１Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨを８．０に修正
し、沈澱してくる免疫グロブリンを遠心分離により回収
した。
のペースト１ｋｇを０．６％塩化ナトリウム１０リット
ルに溶解させ、１Ｎ−塩酸でｐＨ３．８に調整し、４℃
で６０分間攪拌して酸処理を行った。この溶液に平均分
子量４，０００のポリエチレングリコールを５００ｇ添
加し、溶解させつつ１Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨをｐ
Ｈ５．０に調整し、遠心分離により沈澱を除いて澄明な
上清を得た。この上清に平均分子量４，０００のポリエ
チレングリコール７００ｇを追加し、ゆるやかに攪拌し
ながら１Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨを８．０に修正
し、沈澱してくる免疫グロブリンを遠心分離により回収
した。
【００２４】高度精製された免疫グロブリンは、例えば
生理食塩液または０．０２Ｍ酢酸緩衝液に０．６％の塩
化ナトリウム、２％マンニットおよび１％アルブミンを
加えた溶液に再溶解せしめ、除菌濾過を行うことによ
り、臨床に使用できる静注用免疫グロブリン製剤とし
た。このものは補体活性化の抑制剤として有用である。 製剤例２ ヒト血漿から冷エタノール法により得られたコーン画分
II＋III １ｋｇに水１０リットルを加え、さらに１００
ｍｌ当たりソルビトールを５０ｇ添加し、ｐＨ５．５に
調整した後、６０℃で１０時間加熱処理を行った。
生理食塩液または０．０２Ｍ酢酸緩衝液に０．６％の塩
化ナトリウム、２％マンニットおよび１％アルブミンを
加えた溶液に再溶解せしめ、除菌濾過を行うことによ
り、臨床に使用できる静注用免疫グロブリン製剤とし
た。このものは補体活性化の抑制剤として有用である。 製剤例２ ヒト血漿から冷エタノール法により得られたコーン画分
II＋III １ｋｇに水１０リットルを加え、さらに１００
ｍｌ当たりソルビトールを５０ｇ添加し、ｐＨ５．５に
調整した後、６０℃で１０時間加熱処理を行った。
【００２５】加熱処理後、ｐＨを５．５に調整した後、
冷注射用水にて３倍希釈し、ポリエチレングリコール
（平均分子量４，０００）を終濃度が６％になるように
添加し、２℃で遠心分離を行った。得られた上清を１Ｎ
−水酸化ナトリウムを用いｐＨ８．８とした後、ポリエ
チレングリコール（平均分子量４０００）を終濃度が１
２％になるように加え、２℃で遠心分離を行い、沈澱画
分にＩｇＧ画分を得た。この沈澱を注射用水に溶解し、
この溶解度に０．４％食塩水で平衡化したＤＥＡＥ−セ
ファデックスを添加（５０ｍｌ溶液当たり２ｍｌ）し、
０〜４℃の条件下、約１時間接触処理し、処理後濾過に
てＤＥＡＥ−セファデックスを除き濾過液（ＩｇＧ溶
液）を回収した。
冷注射用水にて３倍希釈し、ポリエチレングリコール
（平均分子量４，０００）を終濃度が６％になるように
添加し、２℃で遠心分離を行った。得られた上清を１Ｎ
−水酸化ナトリウムを用いｐＨ８．８とした後、ポリエ
チレングリコール（平均分子量４０００）を終濃度が１
２％になるように加え、２℃で遠心分離を行い、沈澱画
分にＩｇＧ画分を得た。この沈澱を注射用水に溶解し、
この溶解度に０．４％食塩水で平衡化したＤＥＡＥ−セ
ファデックスを添加（５０ｍｌ溶液当たり２ｍｌ）し、
０〜４℃の条件下、約１時間接触処理し、処理後濾過に
てＤＥＡＥ−セファデックスを除き濾過液（ＩｇＧ溶
液）を回収した。
【００２６】このＩｇＧ溶液を注射用水で５％ＩｇＧ溶
液に調整し、酢酸ナトリウムで溶液のｐＨを約５．５に
し、さらにソルビトールを終濃度５％まで添加した。こ
の水溶液（伝導度約１ｍｍｈｏ）を除菌濾過し、静注用
免疫グロブリン液状製剤を得た。本発明製剤は、実質的
にＩｇＧ単量体のみを含み、抗補体価も１０〜１５ＣＨ
50程度であり、静注用免疫グロブリンとしての生基準に
も合格した。このものは補体活性化の抑制剤として有用
である。
液に調整し、酢酸ナトリウムで溶液のｐＨを約５．５に
し、さらにソルビトールを終濃度５％まで添加した。こ
の水溶液（伝導度約１ｍｍｈｏ）を除菌濾過し、静注用
免疫グロブリン液状製剤を得た。本発明製剤は、実質的
にＩｇＧ単量体のみを含み、抗補体価も１０〜１５ＣＨ
50程度であり、静注用免疫グロブリンとしての生基準に
も合格した。このものは補体活性化の抑制剤として有用
である。
【００２７】
【発明の効果】本発明製剤は補体活性化の抑制作用を有
することから、川崎病、潰瘍性大腸炎、習慣性流産、多
発性筋炎等の自己免疫疾患、あるいは赤血球溶血等の疾
患において、補体活性化を伴う（「により生じる」、
「を介する」を含む）上記疾患に対する予防ならびに治
療に有用である。
することから、川崎病、潰瘍性大腸炎、習慣性流産、多
発性筋炎等の自己免疫疾患、あるいは赤血球溶血等の疾
患において、補体活性化を伴う（「により生じる」、
「を介する」を含む）上記疾患に対する予防ならびに治
療に有用である。
【図１】血液型反応によるヒト赤血球溶血に及ぼすＩｇ
Ｇ添加の影響を示す図である。
Ｇ添加の影響を示す図である。
【図２】ＩｇＧによるヒト赤血球溶血抑制に及ぼすウサ
ギ補体添加の影響を示す図である。
ギ補体添加の影響を示す図である。
【図３】感作ＳＲＢＣの溶血に及ぼすＩｇＧ添加の影響
を示す図である。
を示す図である。
【図４】ＩｇＧ添加による感作ＳＲＢＣ溶血抑制への血
清濃度の影響を示す図である。
清濃度の影響を示す図である。
【図５】ＦｃもしくはＩｇＧの感作ＳＲＢＣ溶血に及ぼ
す影響を示す図である。
す影響を示す図である。
【図６】Ｆ（ａｂ′）2 もしくはＩｇＧの感作ＳＲＢＣ
溶血に及ぼす影響を示す図である。
溶血に及ぼす影響を示す図である。
Claims (1)
- 【請求項１】 Ｆｃ部分を有する免疫グロブリンを有効
成分とする補体活性化の抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9750395A JPH08268912A (ja) | 1995-03-31 | 1995-03-31 | 補体活性化の抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9750395A JPH08268912A (ja) | 1995-03-31 | 1995-03-31 | 補体活性化の抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08268912A true JPH08268912A (ja) | 1996-10-15 |
Family
ID=14194073
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9750395A Pending JPH08268912A (ja) | 1995-03-31 | 1995-03-31 | 補体活性化の抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08268912A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005002627A3 (en) * | 2003-07-03 | 2005-07-28 | Ortho Mcneil Pharm Inc | Conjugated complement cascade inhibitors |
-
1995
- 1995-03-31 JP JP9750395A patent/JPH08268912A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005002627A3 (en) * | 2003-07-03 | 2005-07-28 | Ortho Mcneil Pharm Inc | Conjugated complement cascade inhibitors |
| US7482376B2 (en) | 2003-07-03 | 2009-01-27 | 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated complement cascade inhibitors |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20051208 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20060405 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |