JPH08240592A - 免疫学的検査における非特異反応防止方法 - Google Patents
免疫学的検査における非特異反応防止方法Info
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- JPH08240592A JPH08240592A JP4170295A JP4170295A JPH08240592A JP H08240592 A JPH08240592 A JP H08240592A JP 4170295 A JP4170295 A JP 4170295A JP 4170295 A JP4170295 A JP 4170295A JP H08240592 A JPH08240592 A JP H08240592A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 レクチンで固相化した細胞を用いる免疫学的
検査において、非特異反応を防止して特異性の高い正確
な免疫学的検査方法を提供すること。 【構成】 小麦胚芽レクチンをバインダ−として赤血球
を固相化したマイクロプレ−トのウエルに、検体希釈液
として卵白または卵白関連物質を含有させたＬＩＳＳ溶
液を添加するとともに、血漿等の検体を添加してインキ
ュベ−トする。インキュベ−トしたウエルは、例えば、
固相凝集法によるパタ−ンを形成するための抗ＩｇＧ抗
体感作微粒子を添加することにより、非特異反応が抑制
された反応結果を得ることができる。
検査において、非特異反応を防止して特異性の高い正確
な免疫学的検査方法を提供すること。 【構成】 小麦胚芽レクチンをバインダ−として赤血球
を固相化したマイクロプレ−トのウエルに、検体希釈液
として卵白または卵白関連物質を含有させたＬＩＳＳ溶
液を添加するとともに、血漿等の検体を添加してインキ
ュベ−トする。インキュベ−トしたウエルは、例えば、
固相凝集法によるパタ−ンを形成するための抗ＩｇＧ抗
体感作微粒子を添加することにより、非特異反応が抑制
された反応結果を得ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、特定の検査対象の存在
や活性等を、反応性の細胞を固相化処理した表面上で検
査する際に生じ得る非特異反応を防止するための方法に
関する。
や活性等を、反応性の細胞を固相化処理した表面上で検
査する際に生じ得る非特異反応を防止するための方法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】抗赤血球抗体は、輸血または妊娠等によ
り体内に侵入した非自己の赤血球に対する抗体であり、
かかる抗赤血球抗体からの輸血は重篤な副作用をもたら
す原因となるので、重要な検査対象といえる。従来、抗
赤血球抗体を検査する方法としては臨床検査法提要等に
記述されているク−ムス試験等の一般的検査が挙げられ
る。一般的検査は遠心操作のような繁雑な工程を必要と
する。
り体内に侵入した非自己の赤血球に対する抗体であり、
かかる抗赤血球抗体からの輸血は重篤な副作用をもたら
す原因となるので、重要な検査対象といえる。従来、抗
赤血球抗体を検査する方法としては臨床検査法提要等に
記述されているク−ムス試験等の一般的検査が挙げられ
る。一般的検査は遠心操作のような繁雑な工程を必要と
する。
【０００３】特開平２−１２４４６４号には、マイクロ
プレ−トに代表される反応容器の底面に検査対象と反応
し得る抗原型を発現している赤血球を固相化し、その赤
血球表面にて、抗赤血球抗体を検査する方法が開示され
ている。この方法では、赤血球を固相化するために、バ
インダ−としての小麦胚芽レクチン（ＷＧＡ）をマイク
ロプレ−トのウエルに予め吸着させた上で、このＷＧＡ
の結合力を利用することにより赤血球を均一な単層状態
で固相化している。単層状態で固相化された赤血球は抗
赤血球抗体を効率良く反応する。
プレ−トに代表される反応容器の底面に検査対象と反応
し得る抗原型を発現している赤血球を固相化し、その赤
血球表面にて、抗赤血球抗体を検査する方法が開示され
ている。この方法では、赤血球を固相化するために、バ
インダ−としての小麦胚芽レクチン（ＷＧＡ）をマイク
ロプレ−トのウエルに予め吸着させた上で、このＷＧＡ
の結合力を利用することにより赤血球を均一な単層状態
で固相化している。単層状態で固相化された赤血球は抗
赤血球抗体を効率良く反応する。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ＷＧＡ
をバインダ−として用いると、固相化した赤血球表面に
ＷＧＡが露出するような固相状態となった場合に、固相
化細胞による反応とは別に、ＷＧＡが特異的に反応する
物質（レクチン特異反応物質と称する）とも非特異的に
反応して検査結果を誤らす傾向が有ることが判明した。
かかるレクチン特異反応物質の存在率を検討したとこ
ろ、健常人の０．５〜１．０％程度も確認され、慎重に
ＷＧＡを取り扱わない限り、抗赤血球抗体を保有しない
人が保有者と混同される恐れが有ると判明した。
をバインダ−として用いると、固相化した赤血球表面に
ＷＧＡが露出するような固相状態となった場合に、固相
化細胞による反応とは別に、ＷＧＡが特異的に反応する
物質（レクチン特異反応物質と称する）とも非特異的に
反応して検査結果を誤らす傾向が有ることが判明した。
かかるレクチン特異反応物質の存在率を検討したとこ
ろ、健常人の０．５〜１．０％程度も確認され、慎重に
ＷＧＡを取り扱わない限り、抗赤血球抗体を保有しない
人が保有者と混同される恐れが有ると判明した。
【０００５】本発明の目的は、かかる現状を鑑み、レク
チンに由来する非特異結合を防止することで、正確に抗
赤血球抗体を検査することのできる非特異反応の防止方
法を提供することにある。
チンに由来する非特異結合を防止することで、正確に抗
赤血球抗体を検査することのできる非特異反応の防止方
法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段および作用】本発明者は、
鋭意検討の末、固相化表面に露出するレクチン、特にＷ
ＧＡを、２分子以上からなるＮ−アセチルグルコサミン
（ＧｌｃＮＡｃ）、特にＢｉｓｅｃｔｉｎｇ ＧｌｃＮ
Ａｃを含む溶液と接触させることにより、ＷＧＡを良好
にブロッキングして非特異反応を有効に防止できること
が判明し、本発明を完成するに至った。
鋭意検討の末、固相化表面に露出するレクチン、特にＷ
ＧＡを、２分子以上からなるＮ−アセチルグルコサミン
（ＧｌｃＮＡｃ）、特にＢｉｓｅｃｔｉｎｇ ＧｌｃＮ
Ａｃを含む溶液と接触させることにより、ＷＧＡを良好
にブロッキングして非特異反応を有効に防止できること
が判明し、本発明を完成するに至った。
【０００７】即ち、本発明の免疫学的検査における非特
異反応防止方法は、細胞をレクチンによって担体表面に
固相化して該固相化細胞表面における免疫学的反応結果
に基づく検査を行うに当たり、免疫学的反応の少なくと
も一部において少なくとも２分子のＮ−アセチルグルコ
サミン（ＧｌｃＮＡｃ）を含む溶液を前記固相化細胞表
面に接触させることを特徴とするものである。
異反応防止方法は、細胞をレクチンによって担体表面に
固相化して該固相化細胞表面における免疫学的反応結果
に基づく検査を行うに当たり、免疫学的反応の少なくと
も一部において少なくとも２分子のＮ−アセチルグルコ
サミン（ＧｌｃＮＡｃ）を含む溶液を前記固相化細胞表
面に接触させることを特徴とするものである。
【０００８】ここで、ＧｌｃＮＡｃ含有溶液が、卵白ア
ルブミン、卵白ムコイド、卵白の群から選ばれる卵白関
連物質を０．０５〜５．０％含んでいることが好まし
い。
ルブミン、卵白ムコイド、卵白の群から選ばれる卵白関
連物質を０．０５〜５．０％含んでいることが好まし
い。
【０００９】また、ＧｌｃＮＡｃ含有溶液が、水溶性Ｇ
ｌｃＮＡｃの重合物であることが好ましい。ここで、重
合物はダイマ−、トリマ−を含む種々のポリマ−を適量
含有させていればよい。
ｌｃＮＡｃの重合物であることが好ましい。ここで、重
合物はダイマ−、トリマ−を含む種々のポリマ−を適量
含有させていればよい。
【００１０】本発明で対象となるレクチンは、ＷＧＡ以
外の種々公知のものでもよい。また、本発明で検査可能
な検査対象は、抗赤血球抗体等のように細胞表面上の抗
原と結合反応し得るに対する任意の抗体または抗原であ
る。また、本発明が適用し得る検査方法は、特に限定さ
れない。また、細胞が固相化される支持体としては、マ
イクロプレ−トのウエル、試験管、キュベット等の凹状
容器の内壁や、スライドガラス、シリコンチップ等の平
板上などの種々公知の支持体が挙げられる。
外の種々公知のものでもよい。また、本発明で検査可能
な検査対象は、抗赤血球抗体等のように細胞表面上の抗
原と結合反応し得るに対する任意の抗体または抗原であ
る。また、本発明が適用し得る検査方法は、特に限定さ
れない。また、細胞が固相化される支持体としては、マ
イクロプレ−トのウエル、試験管、キュベット等の凹状
容器の内壁や、スライドガラス、シリコンチップ等の平
板上などの種々公知の支持体が挙げられる。
【００１１】また、ＧｌｃＮＡｃを含む溶液を固相化細
胞表面に接触させる方法も、特に限定されない。即ち、
血清等の液状検体にＧｌｃＮＡｃを適量含有させた状態
で固相化細胞と接触させてもよいし、検体と固相化細胞
との反応開始後に添加してもよい。場合によっては、検
体と固相化細胞との反応終了後に、洗浄液に含有させた
状態で洗浄処理し、然る後に別な反応性試薬（例えばマ
−カ−粒子、酵素標識抗体、基質等）と反応させてもよ
い。
胞表面に接触させる方法も、特に限定されない。即ち、
血清等の液状検体にＧｌｃＮＡｃを適量含有させた状態
で固相化細胞と接触させてもよいし、検体と固相化細胞
との反応開始後に添加してもよい。場合によっては、検
体と固相化細胞との反応終了後に、洗浄液に含有させた
状態で洗浄処理し、然る後に別な反応性試薬（例えばマ
−カ−粒子、酵素標識抗体、基質等）と反応させてもよ
い。
【００１２】なお、本発明における「卵白関連物質」と
は、ＧｌｃＮＡｃを豊富に含んでいる卵白ないし卵白由
来の蛋白であり、例としては、卵白アルブミン、卵白ム
コイドに代表されるＢｉｓｅｃｔｉｎｇ ＧｌｃＮＡｃ
が挙げられる（続生化学実験講座第４巻、複合糖質研究
法１、第１８２頁、第１９４頁参照）。これら「卵白関
連物質」は、ＷＧＡのようなレクチンに特異的に結合し
て、該レクチンと検体中のレクチン特異反応性物質との
結合反応をブロックすることで、レクチンに由来する非
特異反応を防止するものである。
は、ＧｌｃＮＡｃを豊富に含んでいる卵白ないし卵白由
来の蛋白であり、例としては、卵白アルブミン、卵白ム
コイドに代表されるＢｉｓｅｃｔｉｎｇ ＧｌｃＮＡｃ
が挙げられる（続生化学実験講座第４巻、複合糖質研究
法１、第１８２頁、第１９４頁参照）。これら「卵白関
連物質」は、ＷＧＡのようなレクチンに特異的に結合し
て、該レクチンと検体中のレクチン特異反応性物質との
結合反応をブロックすることで、レクチンに由来する非
特異反応を防止するものである。
【００１３】以下に、本発明の実施例を説明するが、本
発明を限定するものではなく、上述した発明の要旨と当
業者に自明の範囲内において種々変更することは容易で
ある。
発明を限定するものではなく、上述した発明の要旨と当
業者に自明の範囲内において種々変更することは容易で
ある。
【００１４】
【実験１】赤血球固相化マイクロプレ−トの作成 特開平２−１２４４６４号ないし特願平３−６０４７０
号に記載に沿って小麦胚芽レクチンをＮｕｎｃ社のＵ底
マイクロプレ−トの各ウエルに固相化処理した。ここ
で、使用した赤血球は、オルソ社のスクリ−ニングＯセ
ル「セレクトジェン（商標）」を、０．０１ＭのＰＢＳ
で１％に希釈して用いた。
号に記載に沿って小麦胚芽レクチンをＮｕｎｃ社のＵ底
マイクロプレ−トの各ウエルに固相化処理した。ここ
で、使用した赤血球は、オルソ社のスクリ−ニングＯセ
ル「セレクトジェン（商標）」を、０．０１ＭのＰＢＳ
で１％に希釈して用いた。
【００１５】各種添加物によるＷＧＡ由来非特異反応の
低減効果の検証 上記赤血球固相化プレ−トの各ウエルに、検体希釈液と
して；添加物無し（対照）、；１．０％卵白アルブ
ミン（太陽化学社）、；１．０％卵白（太陽化学
社）、；１．０％精製卵白アルブミン（生化学工
業）、；０．５％卵白ムコイド由来のトリプシンイン
ヒビタ−（シグマ社）および；１．０％Ｎ−アセチル
グルコサミン（和光純薬）、を含有させた各ＬＩＳＳ溶
液をそれぞれ別個の固相化ウエルに７５μｌずつ分注す
るとともに、検体としてＡ；非特異反応性を示す血漿、
Ｂ；特異反応性の健常人血漿、Ｃ；ウサギ抗ＷＧＡ抗体
溶液（イ−・ワイ・ラボラトリ−ズ製）およびＤ；抗Ｄ
陽性ヒト血漿をそれぞれ別個の固相化ウエルに２５μｌ
ずつ分注した。３７℃で１０分間インキュベ−トした
後、生理食塩水で各ウエルを６回洗浄した。洗浄後のウ
エルに、抗ＩｇＧ抗体感作磁性粒子（オリンパス光学工
業製）を分注し、磁石により反応パタ−ンを形成させた
（特開平２−１２４４６４号参照）。ここで、磁性粒子
に感作させた抗ＩｇＧ抗体は、検体Ｃに対してヤギ抗ウ
サギＩｇＧ抗体とした以外は全てヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体
とした。結果を表１に示す。なお、表中、未反応を示す
陰性パタ−ンは「−」で表した。また、陽性パタ−ン
は、「＋」がやや弱い反応、「＋＋」がやや強い反応、
「＋＋＋」が最も強い反応を意味する。
低減効果の検証 上記赤血球固相化プレ−トの各ウエルに、検体希釈液と
して；添加物無し（対照）、；１．０％卵白アルブ
ミン（太陽化学社）、；１．０％卵白（太陽化学
社）、；１．０％精製卵白アルブミン（生化学工
業）、；０．５％卵白ムコイド由来のトリプシンイン
ヒビタ−（シグマ社）および；１．０％Ｎ−アセチル
グルコサミン（和光純薬）、を含有させた各ＬＩＳＳ溶
液をそれぞれ別個の固相化ウエルに７５μｌずつ分注す
るとともに、検体としてＡ；非特異反応性を示す血漿、
Ｂ；特異反応性の健常人血漿、Ｃ；ウサギ抗ＷＧＡ抗体
溶液（イ−・ワイ・ラボラトリ−ズ製）およびＤ；抗Ｄ
陽性ヒト血漿をそれぞれ別個の固相化ウエルに２５μｌ
ずつ分注した。３７℃で１０分間インキュベ−トした
後、生理食塩水で各ウエルを６回洗浄した。洗浄後のウ
エルに、抗ＩｇＧ抗体感作磁性粒子（オリンパス光学工
業製）を分注し、磁石により反応パタ−ンを形成させた
（特開平２−１２４４６４号参照）。ここで、磁性粒子
に感作させた抗ＩｇＧ抗体は、検体Ｃに対してヤギ抗ウ
サギＩｇＧ抗体とした以外は全てヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体
とした。結果を表１に示す。なお、表中、未反応を示す
陰性パタ−ンは「−」で表した。また、陽性パタ−ン
は、「＋」がやや弱い反応、「＋＋」がやや強い反応、
「＋＋＋」が最も強い反応を意味する。
【００１６】
【表１】
【００１７】表１の結果から分かるように、ＧｌｃＮＡ
ｃを含まない対照液（）および単量体のＧｌｃＮＡｃ
を含む液（）では、非特異反応性検体、抗ＷＧＡ抗体
に対して陽性となってしまい、非特異反応を抑制できな
かったが、卵白または卵白関連物質を添加した液（、
、および）では、陰性となり、レクチン由来とみ
られる非特異反応を有効に抑制できるとともに抗赤血球
抗体である抗Ｄとの反応は良好に温存された。
ｃを含まない対照液（）および単量体のＧｌｃＮＡｃ
を含む液（）では、非特異反応性検体、抗ＷＧＡ抗体
に対して陽性となってしまい、非特異反応を抑制できな
かったが、卵白または卵白関連物質を添加した液（、
、および）では、陰性となり、レクチン由来とみ
られる非特異反応を有効に抑制できるとともに抗赤血球
抗体である抗Ｄとの反応は良好に温存された。
【００１８】
【実験２】使用濃度の検討 実験１で作成した固相化プレ−トに対して、検体希釈液
（ＬＩＳＳ）に上記卵白アルブミンを０．０５〜５．０
％の濃度に溶解させたものを各７５μｌ別個のウエルに
分注し、上記非特異反応性検体を用いて同様に検査し
た。結果を表２に示す。
（ＬＩＳＳ）に上記卵白アルブミンを０．０５〜５．０
％の濃度に溶解させたものを各７５μｌ別個のウエルに
分注し、上記非特異反応性検体を用いて同様に検査し
た。結果を表２に示す。
【００１９】
【表２】
【００２０】
【発明の効果】本発明によれば、レクチンに由来する非
特異反応を有効に防止して、細胞表面上の抗原に対する
抗体または抗原の検出を正確に行うことができる。
特異反応を有効に防止して、細胞表面上の抗原に対する
抗体または抗原の検出を正確に行うことができる。
Claims (3)
- 【請求項１】細胞をレクチンによって支持体表面に固相
化して該固相化細胞表面における免疫学的反応結果に基
づく検査を行うに当たり、 免疫学的反応の少なくとも一部において少なくとも２分
子のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を含む
溶液を前記固相化細胞表面に接触させることを特徴とす
る免疫学的検査における非特異反応防止方法。 - 【請求項２】ＧｌｃＮＡｃ含有溶液が、卵白アルブミ
ン、卵白ムコイド、卵白の群から選ばれる卵白関連物質
を０．０５〜５．０％含んでいることを特徴とする請求
項１に記載の免疫学的検査における非特異反応防止方
法。 - 【請求項３】ＧｌｃＮＡｃ含有溶液が、水溶性ＧｌｃＮ
Ａｃの重合物であることを特徴とする請求項１に記載の
免疫学的検査における非特異反応防止方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4170295A JPH08240592A (ja) | 1995-03-01 | 1995-03-01 | 免疫学的検査における非特異反応防止方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4170295A JPH08240592A (ja) | 1995-03-01 | 1995-03-01 | 免疫学的検査における非特異反応防止方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08240592A true JPH08240592A (ja) | 1996-09-17 |
Family
ID=12615764
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4170295A Withdrawn JPH08240592A (ja) | 1995-03-01 | 1995-03-01 | 免疫学的検査における非特異反応防止方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08240592A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012124344A1 (ja) * | 2011-03-16 | 2012-09-20 | ベックマン コールター， インコーポレイテッド | レクチンと抗レクチン抗体との結合阻害剤 |
| JP2013253866A (ja) * | 2012-06-07 | 2013-12-19 | Konica Minolta Inc | レクチンを用いたアナライトの検出方法 |
| JP2014521971A (ja) * | 2011-08-03 | 2014-08-28 | クイデル コーポレーション | ＳｔｒｅｐＡイムノアッセイの特異度増強のためのＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン |
-
1995
- 1995-03-01 JP JP4170295A patent/JPH08240592A/ja not_active Withdrawn
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012124344A1 (ja) * | 2011-03-16 | 2012-09-20 | ベックマン コールター， インコーポレイテッド | レクチンと抗レクチン抗体との結合阻害剤 |
| JP2014521971A (ja) * | 2011-08-03 | 2014-08-28 | クイデル コーポレーション | ＳｔｒｅｐＡイムノアッセイの特異度増強のためのＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン |
| US10168329B2 (en) | 2011-08-03 | 2019-01-01 | Quidel Corporation | N-acetyl-D-glucosamine for enhanced specificity of Strep A immunoassay |
| JP2013253866A (ja) * | 2012-06-07 | 2013-12-19 | Konica Minolta Inc | レクチンを用いたアナライトの検出方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20020507 |