JPH08105898A - クラミジア・トラコマティス抗原およびネイセリア・ゴノリアエ抗原の検出方法 - Google Patents
クラミジア・トラコマティス抗原およびネイセリア・ゴノリアエ抗原の検出方法Info
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- JPH08105898A JPH08105898A JP7096678A JP9667895A JPH08105898A JP H08105898 A JPH08105898 A JP H08105898A JP 7096678 A JP7096678 A JP 7096678A JP 9667895 A JP9667895 A JP 9667895A JP H08105898 A JPH08105898 A JP H08105898A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 最小限の量のサンプルを正確に試験すること
が可能であり、最小限の量の抗原を検出しうる、流体中
のクラミジア・トラコマティス抗原またはネイセリア・
ゴノリアエ抗原の検出方法を提供する。 【構成】 平均直径０.１〜１０ミクロンのポリテトラ
フルオロエチレンからなる多数の実質的に球状の固体粒
子を流体サンプルと共にインキュベートし、該粒子を多
孔性繊維マトリックスと接触させてマトリックス内の繊
維上に保持、固定させ、ついで粒子に結合した抗原の存
在を検出することを特徴とする、流体中のクラミジア・
トラコマティス抗原またはネイセリア・ゴノリアエ抗原
の検出方法。
が可能であり、最小限の量の抗原を検出しうる、流体中
のクラミジア・トラコマティス抗原またはネイセリア・
ゴノリアエ抗原の検出方法を提供する。 【構成】 平均直径０.１〜１０ミクロンのポリテトラ
フルオロエチレンからなる多数の実質的に球状の固体粒
子を流体サンプルと共にインキュベートし、該粒子を多
孔性繊維マトリックスと接触させてマトリックス内の繊
維上に保持、固定させ、ついで粒子に結合した抗原の存
在を検出することを特徴とする、流体中のクラミジア・
トラコマティス抗原またはネイセリア・ゴノリアエ抗原
の検出方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、クラミジア・トラコマ
ティス（Ｃhlamydia trachomatis）抗原およびネイセ
リア・ゴノリアエ（Ｎeisseria gonorrhoeae）抗原を
正確に検出する方法に関する。
ティス（Ｃhlamydia trachomatis）抗原およびネイセ
リア・ゴノリアエ（Ｎeisseria gonorrhoeae）抗原を
正確に検出する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】試験
用サンプルを充分量得ることが難しく、サンプル中に存
在する抗原が低濃度であるため、上記２つの抗原の検出
は困難である。従って、最小限の量のサンプルを正確に
試験することが可能であり、最小限の量の抗原を検出し
うる方法の設計が望まれている。結合検査を行うことに
よって、抗原を識別するために用いる装置のひとつにテ
ストパックTMがある。これはアボット社（イリノイ州、
アボット・パーク）で製造され、米国特許出願第７８
４,４１６号（１９８５年１０月４日出願）および第８
３１,０１３号（１９８６年２月１８日出願）に開示さ
れている。一般に当該装置は酵素的免疫学的検査法を使
用し、多孔性の繊維マトリックス内に固定した多数の実
質的に球状の固体粒子からなる。サンプル中に存在する
分析物と反応可能な物質でこの粒体の表面を被ってもよ
い。サンプルを多孔性マトリックスと接触させ、サンプ
ル中に存在している分析物が微小粒子の表面に結合し、
検出しうるようにする。
用サンプルを充分量得ることが難しく、サンプル中に存
在する抗原が低濃度であるため、上記２つの抗原の検出
は困難である。従って、最小限の量のサンプルを正確に
試験することが可能であり、最小限の量の抗原を検出し
うる方法の設計が望まれている。結合検査を行うことに
よって、抗原を識別するために用いる装置のひとつにテ
ストパックTMがある。これはアボット社（イリノイ州、
アボット・パーク）で製造され、米国特許出願第７８
４,４１６号（１９８５年１０月４日出願）および第８
３１,０１３号（１９８６年２月１８日出願）に開示さ
れている。一般に当該装置は酵素的免疫学的検査法を使
用し、多孔性の繊維マトリックス内に固定した多数の実
質的に球状の固体粒子からなる。サンプル中に存在する
分析物と反応可能な物質でこの粒体の表面を被ってもよ
い。サンプルを多孔性マトリックスと接触させ、サンプ
ル中に存在している分析物が微小粒子の表面に結合し、
検出しうるようにする。
【０００３】クラミジア・トラコマティスおよびネイセ
リア・ゴノリアエを識別するために開発された別の方法
は、米国特許第４,４９７,８９９号および第４,４９７,
９００号に開示されている。詳細には各々の抗原を固体
相に吸着させ、次に固体相において抗体で処理し、洗浄
し、抗グロブリンで処理し、洗浄し、最後に抗原抗体複
合体と結合した抗グロブリン総量を決定する方法が開示
されている。これらの方法にもかかわらず、クラミジア
・トラコマティスまたはネイセリア・ゴノリアエに関し
ては、低濃度の抗原を識別し、または少量のサンプルを
分析するためには、さらに改善が必要である。この問題
点を確認し、解決したのが本発明の主題である。
リア・ゴノリアエを識別するために開発された別の方法
は、米国特許第４,４９７,８９９号および第４,４９７,
９００号に開示されている。詳細には各々の抗原を固体
相に吸着させ、次に固体相において抗体で処理し、洗浄
し、抗グロブリンで処理し、洗浄し、最後に抗原抗体複
合体と結合した抗グロブリン総量を決定する方法が開示
されている。これらの方法にもかかわらず、クラミジア
・トラコマティスまたはネイセリア・ゴノリアエに関し
ては、低濃度の抗原を識別し、または少量のサンプルを
分析するためには、さらに改善が必要である。この問題
点を確認し、解決したのが本発明の主題である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、サンプル中の
クラミジア・トラコマティス抗原またはネイセリア・ゴ
ノリアエの抗原の検出方法に関するものであり、平均直
径０.１ミクロン〜１０ミクロンのポリテトラフルオロ
エチレンからなる多数の実質的に球状の固体粒子を用い
ることを特徴とする。本発明は、流体サンプル中のクラ
ミジア・トラコマティス抗原またはネイセリア・ゴノリ
アエ抗原の検出方法に関する。この方法は以下の各工
程、 ａ）平均直径０.１ミクロン〜１０ミクロンのポリテト
ラフルオロエチレンからなる多数の実質的に球状の固体
粒子を流体サンプルと共にインキュベートし、それによ
り抗原を粒子と結合させて粒子上に抗原複合体を形成さ
せる工程、 ｂ）インキュベートした粒子を多孔性繊維マトリックス
と接触させ、それにより、少なくとも粒子の一部をマト
リックス内の少なくとも一部の繊維上に保持、固定させ
る工程、および ｃ）粒子に結合した抗原の存在を検出する工程からな
る。
クラミジア・トラコマティス抗原またはネイセリア・ゴ
ノリアエの抗原の検出方法に関するものであり、平均直
径０.１ミクロン〜１０ミクロンのポリテトラフルオロ
エチレンからなる多数の実質的に球状の固体粒子を用い
ることを特徴とする。本発明は、流体サンプル中のクラ
ミジア・トラコマティス抗原またはネイセリア・ゴノリ
アエ抗原の検出方法に関する。この方法は以下の各工
程、 ａ）平均直径０.１ミクロン〜１０ミクロンのポリテト
ラフルオロエチレンからなる多数の実質的に球状の固体
粒子を流体サンプルと共にインキュベートし、それによ
り抗原を粒子と結合させて粒子上に抗原複合体を形成さ
せる工程、 ｂ）インキュベートした粒子を多孔性繊維マトリックス
と接触させ、それにより、少なくとも粒子の一部をマト
リックス内の少なくとも一部の繊維上に保持、固定させ
る工程、および ｃ）粒子に結合した抗原の存在を検出する工程からな
る。
【０００５】結合した粒子複合体を、酵素結合抗体と処
理し、これを指示薬で処理することにより、その複合体
を肉眼または機器を用いて観察することができる。本発
明は、クラミジア・トラコマティス抗原またはネイセリ
ア・ゴノリアエ抗原と効率良く結合するためにポリテト
ラフルオロエチレンの微小粒子を使用した点に特徴があ
る。ポリテトラフルオロエチレンは他の微小粒子よりも
優れていることが発見された。当該サンプルは一般に抗
原量が少なく、あるいは抗原濃度が低いため、このこと
は特に価値がある。本発明はサンプル中に存在するクラ
ミジア・トラコマティス（以下、「クラミジア」とい
う）抗原およびネイセリア・ゴノリアエ（以下、「ゴノ
リアエ」という）抗原を同定するための改良方法に関す
るものである。詳細には、本発明に係る方法は、生物学
的流体中に存在する少量のクラミジア抗原およびゴノリ
アエ抗原を検出するのに適している。
理し、これを指示薬で処理することにより、その複合体
を肉眼または機器を用いて観察することができる。本発
明は、クラミジア・トラコマティス抗原またはネイセリ
ア・ゴノリアエ抗原と効率良く結合するためにポリテト
ラフルオロエチレンの微小粒子を使用した点に特徴があ
る。ポリテトラフルオロエチレンは他の微小粒子よりも
優れていることが発見された。当該サンプルは一般に抗
原量が少なく、あるいは抗原濃度が低いため、このこと
は特に価値がある。本発明はサンプル中に存在するクラ
ミジア・トラコマティス（以下、「クラミジア」とい
う）抗原およびネイセリア・ゴノリアエ（以下、「ゴノ
リアエ」という）抗原を同定するための改良方法に関す
るものである。詳細には、本発明に係る方法は、生物学
的流体中に存在する少量のクラミジア抗原およびゴノリ
アエ抗原を検出するのに適している。
【０００６】本発明はサンプルをポリテトラフルオロエ
チレンからなる多数の球状固体粒子とインキュベートす
ることによって行なわれる。分析物が該粒子と結合後、
該粒子は多孔性繊維マトリックスと接触することによっ
て、マトリックス内部に粒子の少なくとも一部が保持さ
れ、固定される。次にこの結合した粒子を酵素結合抗体
で処理する。この粒子を洗浄して過剰の酵素結合物を除
去し、指示薬を加えて検出可能な色または他の応答を生
じさせる。また別の態様では、本発明に係るポリテトラ
フルオロエチレンからなる球状固体粒子を米国特許第
４,４９７,８９９号および第４,４９７,９００号に記載
の方法において固相成分として使用しうる。
チレンからなる多数の球状固体粒子とインキュベートす
ることによって行なわれる。分析物が該粒子と結合後、
該粒子は多孔性繊維マトリックスと接触することによっ
て、マトリックス内部に粒子の少なくとも一部が保持さ
れ、固定される。次にこの結合した粒子を酵素結合抗体
で処理する。この粒子を洗浄して過剰の酵素結合物を除
去し、指示薬を加えて検出可能な色または他の応答を生
じさせる。また別の態様では、本発明に係るポリテトラ
フルオロエチレンからなる球状固体粒子を米国特許第
４,４９７,８９９号および第４,４９７,９００号に記載
の方法において固相成分として使用しうる。
【０００７】本発明においては、分析物を結合するため
にポリテトラフルオロエチレンからなる多数の実質的に
球状の固体粒子を使用することが本発明の方法の特徴で
ある。ポリテトラフルオロエチレン粒子の例としてはデ
ュポンＥ．Ｉ．、 デ・ネモース・アンド・カンパニー
（デラウェア州、ウイルミングトン）の登録商標である
テフロンTMがある。該粒子はポリテトラフルオロエチレ
ンのホモポリマーであるのが好ましいが、ポリテトラフ
ルオロエチレンの誘導体を用いてもよい。該ポリテトラ
フルオロエチレン粒子は、抗原と結合させた後、繊維マ
トリックスに保持され、固定される。ここで「保持さ
れ、固定される」とは、マトリックスの繊維上に一度つ
いた粒子はマトリックス内部の他の位置へ（例えば、他
の繊維へ）実質上移動できないこと、または分解しなけ
れば物質から完全に除去できないことを意味する。粒子
を繊維にさらすと容易に繊維に吸着することが発見され
ているので、粒子を繊維マトリックス上に保持し、固定
するために特別な処理は必要ではない。
にポリテトラフルオロエチレンからなる多数の実質的に
球状の固体粒子を使用することが本発明の方法の特徴で
ある。ポリテトラフルオロエチレン粒子の例としてはデ
ュポンＥ．Ｉ．、 デ・ネモース・アンド・カンパニー
（デラウェア州、ウイルミングトン）の登録商標である
テフロンTMがある。該粒子はポリテトラフルオロエチレ
ンのホモポリマーであるのが好ましいが、ポリテトラフ
ルオロエチレンの誘導体を用いてもよい。該ポリテトラ
フルオロエチレン粒子は、抗原と結合させた後、繊維マ
トリックスに保持され、固定される。ここで「保持さ
れ、固定される」とは、マトリックスの繊維上に一度つ
いた粒子はマトリックス内部の他の位置へ（例えば、他
の繊維へ）実質上移動できないこと、または分解しなけ
れば物質から完全に除去できないことを意味する。粒子
を繊維にさらすと容易に繊維に吸着することが発見され
ているので、粒子を繊維マトリックス上に保持し、固定
するために特別な処理は必要ではない。
【０００８】該粒子は個々の平均直径が０.１ミクロン
〜１０ミクロン、より好ましくは２ミクロン〜５ミクロ
ンで、平均密度は２.１４ｇ／ｃｍ3である。この粒子は
直径２００ミクロン以上の集合体として存在しうること
が認められている。この粒子は実質上、被覆されておら
ず、実際このことがクラミジア抗原およびゴノリアエ抗
原の分析を行うための好ましい方法であることがわかっ
た。しかし、さらに具体的な例としては、抗原の結合を
助けるために微小粒子を抗体または他の物質で被覆する
こともある。ポリテトラフルオロエチレン微小粒子は種
々の条件下で非常に安定であるため、クラミジアエ抗原
またはゴノリアエ抗原を含む広範囲のサンプルに対して
使用しうる。例えば、この微小粒子は大部分の有機溶媒
と同様に強酸および強アルカリに対しても抵抗性であ
る。微小粒子は疎水性であり、水を最小量しか吸着しな
いので、−２４０℃〜２６０℃においてもまた安定であ
る。クラミジアおよびゴノリアエの免疫学的分析を行な
う際に、ポリテトラフルオロエチレン微小粒子は他の可
能な重合粒子と比較してすぐれた結果を与えることが発
見された。このことは以下の実施例において証明され
る。
〜１０ミクロン、より好ましくは２ミクロン〜５ミクロ
ンで、平均密度は２.１４ｇ／ｃｍ3である。この粒子は
直径２００ミクロン以上の集合体として存在しうること
が認められている。この粒子は実質上、被覆されておら
ず、実際このことがクラミジア抗原およびゴノリアエ抗
原の分析を行うための好ましい方法であることがわかっ
た。しかし、さらに具体的な例としては、抗原の結合を
助けるために微小粒子を抗体または他の物質で被覆する
こともある。ポリテトラフルオロエチレン微小粒子は種
々の条件下で非常に安定であるため、クラミジアエ抗原
またはゴノリアエ抗原を含む広範囲のサンプルに対して
使用しうる。例えば、この微小粒子は大部分の有機溶媒
と同様に強酸および強アルカリに対しても抵抗性であ
る。微小粒子は疎水性であり、水を最小量しか吸着しな
いので、−２４０℃〜２６０℃においてもまた安定であ
る。クラミジアおよびゴノリアエの免疫学的分析を行な
う際に、ポリテトラフルオロエチレン微小粒子は他の可
能な重合粒子と比較してすぐれた結果を与えることが発
見された。このことは以下の実施例において証明され
る。
【０００９】
【実施例】実施例１ クラミジアに対して特異的な酵素免疫学的分析における
抗原結合能力を種々の微小粒子について比較した。本方
法においては、クラミジア抗原を微小粒子懸濁液で吸着
させた。結合した分析物を遠心分離によって非結合分析
物から分離し、免疫複合体を検出するためのウサギ抗−
クラミジアおよびヤギ抗−ウサギグロブリンとホースラ
デッシュペルオキシダーゼとの結合体を用いてその吸着
した分析物を検出した。用いた指示薬はオルトフェニレ
ンジアミンであった。顕色後、遠心分離によってその微
小粒子を除去し、上澄みをセルに移し、分光光度計を用
いて４９２nmにおける相対吸光度を測定した。この実験
において、クラミジアを含む懸濁液中における分析物の
吸着能力を各々の型の微小粒子について測定した。分析
物を含まない希釈液(ブランク)中においてもまた平行し
て各々の型の微小粒子を試験すると特異的な結合は評価
されなかった。７種の微小粒子に対して得られた結果を
以下に示す。
抗原結合能力を種々の微小粒子について比較した。本方
法においては、クラミジア抗原を微小粒子懸濁液で吸着
させた。結合した分析物を遠心分離によって非結合分析
物から分離し、免疫複合体を検出するためのウサギ抗−
クラミジアおよびヤギ抗−ウサギグロブリンとホースラ
デッシュペルオキシダーゼとの結合体を用いてその吸着
した分析物を検出した。用いた指示薬はオルトフェニレ
ンジアミンであった。顕色後、遠心分離によってその微
小粒子を除去し、上澄みをセルに移し、分光光度計を用
いて４９２nmにおける相対吸光度を測定した。この実験
において、クラミジアを含む懸濁液中における分析物の
吸着能力を各々の型の微小粒子について測定した。分析
物を含まない希釈液(ブランク)中においてもまた平行し
て各々の型の微小粒子を試験すると特異的な結合は評価
されなかった。７種の微小粒子に対して得られた結果を
以下に示す。
【００１０】 ４９２ｎｍにおける微小粒子 直径 固体 吸光度 (ミクロン) (％) クラミジアエ 5×106/ｍｌ ブランク ポリスチレン（ＰＳ） .55 0.2 .144 .064 カルボキシル化ＰＳ .47 0.2 .087 .097 ポリミキシンＢ−ＰＳ .47 0.2 .127 .022 小麦胚芽ａｇｇ・ＰＳ .47 0.2 .066 .027 グリシンＰＳ .47 0.2 .055 .032 カチオン性ＰＳ .22 0.2 .021 .012 ポリテトラフルオロエチレン 2-5 0.1 1.555 ．０２１ 上記の結果から、微小粒子にさらした場合、ポリテトラ
フルオロエチレン微小粒子は分析物の吸着能力がすぐれ
ていることがわかる。また、ポリテトラフルオロエチレ
ンは非特異的結合が少ない。
フルオロエチレン微小粒子は分析物の吸着能力がすぐれ
ていることがわかる。また、ポリテトラフルオロエチレ
ンは非特異的結合が少ない。
【００１１】実施例２ 減量した微小粒子にさらした場合の４９２ｎｍにおける
吸光度を測定することによって、ポリテトラフルオロエ
チレンの感受性をさらに証明した。実施例１と同様の遠
心分離酵素免疫学的分析を用いた。種々のクラミジア濃
度に対して測定した吸光度を以下に示す。 クラミジア ４９２ｎｍにおける吸光度 (微生物／ｍｌ) ５×１０6 １.５５５ ５×１０5 ０.６０９ ５×１０4 ０.０７３ なし ０.０２１ 上記結果から、１ミリリットル当たり５０,０００微生
物の低濃度においてもブランクとサンプルの間に３倍以
上の差があり、すぐれた感受性があることがわかる。上
記の実施例はすべてクラミジアを用いたが、本発明の方
法はゴノリアエ抗原の同定に対しても同様に適用され
る。
吸光度を測定することによって、ポリテトラフルオロエ
チレンの感受性をさらに証明した。実施例１と同様の遠
心分離酵素免疫学的分析を用いた。種々のクラミジア濃
度に対して測定した吸光度を以下に示す。 クラミジア ４９２ｎｍにおける吸光度 (微生物／ｍｌ) ５×１０6 １.５５５ ５×１０5 ０.６０９ ５×１０4 ０.０７３ なし ０.０２１ 上記結果から、１ミリリットル当たり５０,０００微生
物の低濃度においてもブランクとサンプルの間に３倍以
上の差があり、すぐれた感受性があることがわかる。上
記の実施例はすべてクラミジアを用いたが、本発明の方
法はゴノリアエ抗原の同定に対しても同様に適用され
る。
Claims (1)
- 【請求項１】 ａ）平均直径０.１〜１０ミクロンのポ
リテトラフルオロエチレンからなる多数の実質的に球状
の固体粒子を流体サンプルと共にインキュベートし、そ
れにより、抗原を粒子と結合させて粒子上に抗原複合体
を形成させる工程、 ｂ）インキュベートした粒子を多孔性繊維マトリックス
と接触させ、それにより、少なくとも粒子の一部をマト
リックス内の少なくとも一部の繊維上に保持、固定させ
る工程、および ｃ）粒子に結合した抗原の存在を検出する工程 からなることを特徴とする、流体中のクラミジア・トラ
コマティス抗原またはネイセリア・ゴノリアエ抗原の検
出方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US91939686A | 1986-10-16 | 1986-10-16 | |
| US919396 | 1986-10-16 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62262566A Division JPH07104354B2 (ja) | 1986-10-16 | 1987-10-15 | クラミジア・トラコマティスおよびネイセリア・ゴノリアエを検出するための分析装置および分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08105898A true JPH08105898A (ja) | 1996-04-23 |
| JP2541793B2 JP2541793B2 (ja) | 1996-10-09 |
Family
ID=25442004
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62262566A Expired - Lifetime JPH07104354B2 (ja) | 1986-10-16 | 1987-10-15 | クラミジア・トラコマティスおよびネイセリア・ゴノリアエを検出するための分析装置および分析方法 |
| JP7096678A Expired - Fee Related JP2541793B2 (ja) | 1986-10-16 | 1995-04-21 | クラミジア・トラコマティス抗原およびネイセリア・ゴノリアエ抗原の検出方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62262566A Expired - Lifetime JPH07104354B2 (ja) | 1986-10-16 | 1987-10-15 | クラミジア・トラコマティスおよびネイセリア・ゴノリアエを検出するための分析装置および分析方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0264036B1 (ja) |
| JP (2) | JPH07104354B2 (ja) |
| AT (1) | ATE91178T1 (ja) |
| AU (1) | AU605185B2 (ja) |
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