JPH0782172A - 創傷治療剤 - Google Patents
創傷治療剤Info
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- JPH0782172A JPH0782172A JP5230616A JP23061693A JPH0782172A JP H0782172 A JPH0782172 A JP H0782172A JP 5230616 A JP5230616 A JP 5230616A JP 23061693 A JP23061693 A JP 23061693A JP H0782172 A JPH0782172 A JP H0782172A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 キニノーゲンのフラグメント１、フラグメン
ト２、フラグメント１・２より成る創傷治療剤。 【効果】 上記キニノーゲンのフラグメント１、フラグ
メント２及びフラグメント１・２は線維芽細胞の増殖促
進活性を有するので創傷治療剤として有用である。
ト２、フラグメント１・２より成る創傷治療剤。 【効果】 上記キニノーゲンのフラグメント１、フラグ
メント２及びフラグメント１・２は線維芽細胞の増殖促
進活性を有するので創傷治療剤として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、キニノーゲンのフラグ
メント１・２及びその等価物を有効成分とする創傷治療
剤に関する。
メント１・２及びその等価物を有効成分とする創傷治療
剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】キニノーゲンは血管拡張、血圧低下及び
子宮平滑筋の収縮などの作用を有する生理活性ペプチド
であるキニンの前駆体蛋白として早くから知られてき
た。またキニノーゲン自体の働きとして、キニノーゲン
が血液凝固因子の前駆体と複合体を形成し、血管内皮の
傷害部位に沈着することで内因性の血液凝固を開始させ
る作用を有することが知られてきた。また最近になっ
て、システィンプロデアーゼインヒビター活性がキニノ
ーゲンのＨ−鎖領域に存在することが明らかにされてい
る（Ohkubo et al., Biochemistry vol.23, p.5691〜56
97, 1984)。更にキニノーゲンは、炎症時に血中内で急
激にその濃度が増加する急性期反応物質（acute phase
reactant）のひとつであることも明らかにされ（Furuto
-Kato et al.,J. Biol.Chem. vol.260, p.12054〜1205
9，1985)、炎症に対する生体側の防御反応に関与してい
ることが示唆されている。このようにキニノーゲンは、
非常に多機能を有する蛋白質である。
子宮平滑筋の収縮などの作用を有する生理活性ペプチド
であるキニンの前駆体蛋白として早くから知られてき
た。またキニノーゲン自体の働きとして、キニノーゲン
が血液凝固因子の前駆体と複合体を形成し、血管内皮の
傷害部位に沈着することで内因性の血液凝固を開始させ
る作用を有することが知られてきた。また最近になっ
て、システィンプロデアーゼインヒビター活性がキニノ
ーゲンのＨ−鎖領域に存在することが明らかにされてい
る（Ohkubo et al., Biochemistry vol.23, p.5691〜56
97, 1984)。更にキニノーゲンは、炎症時に血中内で急
激にその濃度が増加する急性期反応物質（acute phase
reactant）のひとつであることも明らかにされ（Furuto
-Kato et al.,J. Biol.Chem. vol.260, p.12054〜1205
9，1985)、炎症に対する生体側の防御反応に関与してい
ることが示唆されている。このようにキニノーゲンは、
非常に多機能を有する蛋白質である。
【０００３】キニノーゲンはラット、ウシ、ウマ及びヒ
トにおいて精製されており、その他の哺乳類の血液中に
も広くみられる。主として、分子量が８８〜１１４Ｋｄ
の高分子量キニノーゲン（high molecular weight-kini
nogen、又は、ＨＭＷキニノーゲン）と分子量が５８〜
６８Ｋｄの低分子量キニノーゲン（low molecular weig
ht-kininogen、又は、ＬＭＷキニノーゲン）に分けられ
る。それぞれのキニノーゲンの分子量は動物種によって
少しづつ異なっている。これらのキニノーゲンは，主に
肝臓で合成される。肝臓から血液中に分泌され、血流に
のって全身の血管系に分布する。いずれのキニノーゲン
もカリクレイン様プロテアーゼにより２ヶ所又は３ヶ所
切断され、種々のキニンを遊離する。
トにおいて精製されており、その他の哺乳類の血液中に
も広くみられる。主として、分子量が８８〜１１４Ｋｄ
の高分子量キニノーゲン（high molecular weight-kini
nogen、又は、ＨＭＷキニノーゲン）と分子量が５８〜
６８Ｋｄの低分子量キニノーゲン（low molecular weig
ht-kininogen、又は、ＬＭＷキニノーゲン）に分けられ
る。それぞれのキニノーゲンの分子量は動物種によって
少しづつ異なっている。これらのキニノーゲンは，主に
肝臓で合成される。肝臓から血液中に分泌され、血流に
のって全身の血管系に分布する。いずれのキニノーゲン
もカリクレイン様プロテアーゼにより２ヶ所又は３ヶ所
切断され、種々のキニンを遊離する。
【０００４】ウシのＨＭＷ−キニノーゲンは最初に精製
され、その性質及びアミノ酸配列が調べられている。ウ
シＨＭＷ−キニノーゲンは、カリクレイン様プロテアー
ゼにより分解をうけ、キニン及びフラグメント１・２と
呼ばれる２種のペプチドフラグメントを遊離し、残りは
Ｎ末端側の重鎖フラグメント（Ｈ−鎖）とＣ末端側の軽
鎖フラグメント（Ｌ−鎖）がジスルフィド結合で共有結
合したキニンフリーキニノーゲンとなる。ウマＨＭＷ-
キニノーゲンもウシと同様の分解をうけ、キニン及びフ
ラグメント１・２の２種のペプチドフラグメントを遊離
する。
され、その性質及びアミノ酸配列が調べられている。ウ
シＨＭＷ−キニノーゲンは、カリクレイン様プロテアー
ゼにより分解をうけ、キニン及びフラグメント１・２と
呼ばれる２種のペプチドフラグメントを遊離し、残りは
Ｎ末端側の重鎖フラグメント（Ｈ−鎖）とＣ末端側の軽
鎖フラグメント（Ｌ−鎖）がジスルフィド結合で共有結
合したキニンフリーキニノーゲンとなる。ウマＨＭＷ-
キニノーゲンもウシと同様の分解をうけ、キニン及びフ
ラグメント１・２の２種のペプチドフラグメントを遊離
する。
【０００５】他方、ヒト由来のＨＭＷ−キニノーゲンも
カリクレイン様プロテアーゼ処理によりキニンを遊離す
る。しかし、ウシＨＭＷ−キニノーゲンのフラグメント
１・２に対応する部分は遊離されず、キニンフリーキニ
ノーゲンのＬ−鎖のＮ末端に結合したままである。
カリクレイン様プロテアーゼ処理によりキニンを遊離す
る。しかし、ウシＨＭＷ−キニノーゲンのフラグメント
１・２に対応する部分は遊離されず、キニンフリーキニ
ノーゲンのＬ−鎖のＮ末端に結合したままである。
【０００６】ウシＨＭＷ−キニノーゲンのフラグメント
１・２は、最初のメチオニン残基を１番目としたとき、
３８７番目のセリン残基から４９６番目のアルギニン残
基までのアミノ酸残基にして１１０個の長さをもつペプ
チドフラグメントである。更に、長時間カリクレイン様
プロテアーゼで処理することにより、アミノ酸残基にし
て６９個のフラグメント１と４１個のフラグメント２に
分解される。
１・２は、最初のメチオニン残基を１番目としたとき、
３８７番目のセリン残基から４９６番目のアルギニン残
基までのアミノ酸残基にして１１０個の長さをもつペプ
チドフラグメントである。更に、長時間カリクレイン様
プロテアーゼで処理することにより、アミノ酸残基にし
て６９個のフラグメント１と４１個のフラグメント２に
分解される。
【０００７】フラグメント１・２は、非常にヒスチジン
残基に富む塩基性のペプチドフラグメントである。特に
フラグメント２においてはヒスチジン残基の含量は４１
残基中１１個と多く、その他のリジン、アルギニン残基
の如く塩基性アミノ酸残基の含量は合せて４１残基中１
９個となり、一方、酸性アミノ酸残基はアスパラギン残
基１個であることから、全体として著しくプラスに荷電
した塩基性のフラグメントである。またフラグメント１
でも、６９個のアミノ酸残基中、ヒスチジンは１１個を
含む１９個の塩基性アミノ酸残基を有する塩基性フラグ
メントである。
残基に富む塩基性のペプチドフラグメントである。特に
フラグメント２においてはヒスチジン残基の含量は４１
残基中１１個と多く、その他のリジン、アルギニン残基
の如く塩基性アミノ酸残基の含量は合せて４１残基中１
９個となり、一方、酸性アミノ酸残基はアスパラギン残
基１個であることから、全体として著しくプラスに荷電
した塩基性のフラグメントである。またフラグメント１
でも、６９個のアミノ酸残基中、ヒスチジンは１１個を
含む１９個の塩基性アミノ酸残基を有する塩基性フラグ
メントである。
【０００８】ＨＭＷ−キニノーゲンのフラグメント１・
２の生理活性については、キニノーゲンが内因性の血液
凝固を開始させる際、キニノーゲンと血液凝固因子前駆
体の複合体を血管内皮下表面（subendothelial surfac
e）の傷害部位に結合させる働きが予想されているのみ
で、その他のフラグメント１・２に関する機能は知られ
ていなかった（Allen et al., Blood vol.70, p.1〜15,
1987）。
２の生理活性については、キニノーゲンが内因性の血液
凝固を開始させる際、キニノーゲンと血液凝固因子前駆
体の複合体を血管内皮下表面（subendothelial surfac
e）の傷害部位に結合させる働きが予想されているのみ
で、その他のフラグメント１・２に関する機能は知られ
ていなかった（Allen et al., Blood vol.70, p.1〜15,
1987）。
【０００９】一方、創傷治療の過程において種々の成長
因子が関与していることが知られている（Dijke et a
l., Biotechnology vol.7, p.793〜798, 1989)。特に、
ＴＧＦ−β (transforming growth factor−β）やＰＤ
ＧＦ (platelet-derived growth factor）は、線維芽細
胞を増殖させ、障害部位へ細胞を誘引し、創傷の修復を
促進することが知られている。しかし、キニノーゲンの
フラグメント１・２が線維芽細胞を増殖させたり、創傷
治療に効果があるという報告はこれまでなされていなか
った。
因子が関与していることが知られている（Dijke et a
l., Biotechnology vol.7, p.793〜798, 1989)。特に、
ＴＧＦ−β (transforming growth factor−β）やＰＤ
ＧＦ (platelet-derived growth factor）は、線維芽細
胞を増殖させ、障害部位へ細胞を誘引し、創傷の修復を
促進することが知られている。しかし、キニノーゲンの
フラグメント１・２が線維芽細胞を増殖させたり、創傷
治療に効果があるという報告はこれまでなされていなか
った。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
課題は創傷治療に対して効果のある新たな治療薬として
用いることのできるペプチドを提供することである。よ
り詳しくは、従来知られていた創傷治療効果が示唆され
ていたＴＧＦ−β、ＰＤＧＦの如くそれ自体多機能を有
する生理活性物質は創傷治療以外の望ましくない作用を
有することも考えられるので、そのような副次的な活性
を有せず、より創傷治療に特異的に作用するペプチドを
この目的に使用することが望まれていた。
課題は創傷治療に対して効果のある新たな治療薬として
用いることのできるペプチドを提供することである。よ
り詳しくは、従来知られていた創傷治療効果が示唆され
ていたＴＧＦ−β、ＰＤＧＦの如くそれ自体多機能を有
する生理活性物質は創傷治療以外の望ましくない作用を
有することも考えられるので、そのような副次的な活性
を有せず、より創傷治療に特異的に作用するペプチドを
この目的に使用することが望まれていた。
【００１１】
【課題を解決するための手段】ヒトを含む哺乳類動物の
胎児及び新生児の血液中には、成長の激しい胎児及び新
生児の各細胞組織の成長を刺激する種々の成長因子が含
有されることが考えられる。量的に入手しやすいウシ新
生児血清を出発原料として、新たな線維芽細胞増殖活性
を有する蛋白因子の精製分離を試みた。線維芽細胞増殖
活性測定のためには、例えば、Ｂａｌｂ／３Ｔ３細胞株
が使用できる。
胎児及び新生児の血液中には、成長の激しい胎児及び新
生児の各細胞組織の成長を刺激する種々の成長因子が含
有されることが考えられる。量的に入手しやすいウシ新
生児血清を出発原料として、新たな線維芽細胞増殖活性
を有する蛋白因子の精製分離を試みた。線維芽細胞増殖
活性測定のためには、例えば、Ｂａｌｂ／３Ｔ３細胞株
が使用できる。
【００１２】種々の成長因子は、ヘパリンに結合しやす
いことが知られていたので、まず、ヘパリンアフィニテ
イカラムクロマトグラフイでカラムに結合する画分を分
離し、ついで逆相液体クロマトグラフにより、さらに細
かい画分に分けることができる。これらの各画分につい
て線維芽細胞増殖活性を測定した。こうして得られた活
性画分のひとつについて、Ｎ末端のアミノ酸配列及びア
ミノ酸組成を決定し、蛋白質及び遺伝子配列データーベ
ースと参照して公知の蛋白質であるかどうか調べた。
いことが知られていたので、まず、ヘパリンアフィニテ
イカラムクロマトグラフイでカラムに結合する画分を分
離し、ついで逆相液体クロマトグラフにより、さらに細
かい画分に分けることができる。これらの各画分につい
て線維芽細胞増殖活性を測定した。こうして得られた活
性画分のひとつについて、Ｎ末端のアミノ酸配列及びア
ミノ酸組成を決定し、蛋白質及び遺伝子配列データーベ
ースと参照して公知の蛋白質であるかどうか調べた。
【００１３】その結果、公知のウシＨＭＷ−キニノーゲ
ンのアミノ酸配列の一部、すなわちフラグメント１・２
のＮ末端からのアミノ酸配列に一致した。更に、アミノ
酸組成分析により、この活性画分は塩基性のウシＨＭＷ
−キニノーゲンのフラグメント１・２であることが同定
された。
ンのアミノ酸配列の一部、すなわちフラグメント１・２
のＮ末端からのアミノ酸配列に一致した。更に、アミノ
酸組成分析により、この活性画分は塩基性のウシＨＭＷ
−キニノーゲンのフラグメント１・２であることが同定
された。
【００１４】このフラグメント１・２は更にウシのカリ
クレイン様プロテアーゼにより、フラグメント１とフラ
グメント２に分解することが知られている。これらの分
解フラグメントについても、いずれも極めて塩基性の高
いアミノ酸残基、中でもヒスチジンに富んだ特徴的な一
次構造を有していることから、元のフラグメント１・２
と同様に線維芽細胞増殖活性を有することが強く示唆さ
れる。より短い活性フラグメントは安定性及び吸収性が
高いことが期待され、また、合成もしやすいことから薬
剤としてより優れていると考えられる。
クレイン様プロテアーゼにより、フラグメント１とフラ
グメント２に分解することが知られている。これらの分
解フラグメントについても、いずれも極めて塩基性の高
いアミノ酸残基、中でもヒスチジンに富んだ特徴的な一
次構造を有していることから、元のフラグメント１・２
と同様に線維芽細胞増殖活性を有することが強く示唆さ
れる。より短い活性フラグメントは安定性及び吸収性が
高いことが期待され、また、合成もしやすいことから薬
剤としてより優れていると考えられる。
【００１５】ヒトＨＭＷ−キニノーゲンについては、カ
リクレイン様プロテアーゼにより、ウシＨＭＷ−キニノ
ーゲンのようなフラグメント１・２が生ずることはな
い。しかし、ヒトＨＭＷ−キニノーゲンの最初のメチオ
ニン残基を１番目としたときの３９０番目のセリン残基
から５１０番目のリジン残基に至るペプチドフラグメン
トはウシＨＭＷ−キニノーゲンのフラグメント１・２に
対応する。さらに、ヒトＨＭＷ−キニノーゲンの３９０
番目のセリン残基から４５７番目のアルギニン残基及び
４５８番目のグリシン残基から５２０番目のリジン残基
に至るペプチドフラグメントはフラグメント１・２の分
解フラグメントである、ウシのフラグメント１及びフラ
グメント２に対応する。各々のヒトＨＭＷ−キニノーゲ
ンフラグメントともヒスチジン残基に富み且つその他の
リジン、アルギニンといった塩基性アミノ酸残基にも富
んでいるという、ウシフラグメント１・２及びその分解
フラグメントによく似た特性を有している。
リクレイン様プロテアーゼにより、ウシＨＭＷ−キニノ
ーゲンのようなフラグメント１・２が生ずることはな
い。しかし、ヒトＨＭＷ−キニノーゲンの最初のメチオ
ニン残基を１番目としたときの３９０番目のセリン残基
から５１０番目のリジン残基に至るペプチドフラグメン
トはウシＨＭＷ−キニノーゲンのフラグメント１・２に
対応する。さらに、ヒトＨＭＷ−キニノーゲンの３９０
番目のセリン残基から４５７番目のアルギニン残基及び
４５８番目のグリシン残基から５２０番目のリジン残基
に至るペプチドフラグメントはフラグメント１・２の分
解フラグメントである、ウシのフラグメント１及びフラ
グメント２に対応する。各々のヒトＨＭＷ−キニノーゲ
ンフラグメントともヒスチジン残基に富み且つその他の
リジン、アルギニンといった塩基性アミノ酸残基にも富
んでいるという、ウシフラグメント１・２及びその分解
フラグメントによく似た特性を有している。
【００１６】このために、これらのヒトＨＭＷ−キニノ
ーゲンのウシフラグメント１・２様ペプチドフラグメン
トも創傷治療に効果がある。ただし、これらヒトのウシ
フラグメント１・２様ペプチドは天然型では血中に分泌
されないので、これらのペプチドを化学的に合成する
か、これらのペプチドをコードする遺伝子を合成して遺
伝子工学的方法により生産する。
ーゲンのウシフラグメント１・２様ペプチドフラグメン
トも創傷治療に効果がある。ただし、これらヒトのウシ
フラグメント１・２様ペプチドは天然型では血中に分泌
されないので、これらのペプチドを化学的に合成する
か、これらのペプチドをコードする遺伝子を合成して遺
伝子工学的方法により生産する。
【００１７】他の哺乳類に関しても、ウシ型ＨＭＷ−キ
ニノーゲンのようにフラグメント１・２を生ずる場合
は、天然原料からの精製により、ヒト型の場合は合成等
により、目的のペプチドフラグメントを得ることができ
る。
ニノーゲンのようにフラグメント１・２を生ずる場合
は、天然原料からの精製により、ヒト型の場合は合成等
により、目的のペプチドフラグメントを得ることができ
る。
【００１８】これらのペプチドフラグメントは、線維芽
細胞増殖作用を失わせずに、若干のアミノ酸残基の変更
や化学修飾を加えることにより、更に製剤に適したペプ
チドとなることが期待できる。
細胞増殖作用を失わせずに、若干のアミノ酸残基の変更
や化学修飾を加えることにより、更に製剤に適したペプ
チドとなることが期待できる。
【００１９】これらのペプチドは、水溶性が高く、創傷
治療には適当な水溶性基剤と混合して局所的に直接幹部
に塗布する投与法が最もふさわしいが、その他にも全身
性投与として、静脈内注射剤又は皮下投与剤として投与
することができ、また、微粒子のエアロゾル製剤とし
て、経鼻又は経肺的に投与することができる。
治療には適当な水溶性基剤と混合して局所的に直接幹部
に塗布する投与法が最もふさわしいが、その他にも全身
性投与として、静脈内注射剤又は皮下投与剤として投与
することができ、また、微粒子のエアロゾル製剤とし
て、経鼻又は経肺的に投与することができる。
【００２０】投与量は、局所投与では１〜１００μｇ／
投与部位／人／日、また全身性投与では０.１〜１０ｍ
ｇ／ｋｇ／日を投与する。
投与部位／人／日、また全身性投与では０.１〜１０ｍ
ｇ／ｋｇ／日を投与する。
【００２１】以下に実施例により、本発明を更に詳しく
説明する。
説明する。
【実施例】 実施例１ ウシの新生児血清よりの線維芽細胞（Ｂａｌ
ｂ／３Ｔ３細胞）増殖促進因子の精製 １） ヘパリンアフィニテイクロマトグラフィー法によ
る粗精製 ウシ新生児血清（GIBCO Laboratories社より購入）１リ
ットルに塩化ナトリウムを２０.５ｇ加える。この新生
児血清を、あらかじめトリス緩衝液Ａ（２０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７.５，０.５Ｍ ＮａＣｌ）で平衡化
しておいたヘパリン−トヨパールカラム（５ｃｍ×５.
５ｃｍ，東ソー社）に流速３ｍｌ／分で展開する。その
後、トリス緩衝液Ａで同カラムを充分に洗浄する。洗浄
後、ヘパリン−トヨパールカラムに吸着したペプチド又
は蛋白質をトリス緩衝液Ｂ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
Ｌ ｐＨ７.５, １.０Ｍ ＮａＣｌ）で溶出する。溶出液
は吸光度光度計を用い、２８０ｎｍの吸光度によりモニ
ターし、吸収度の高い画分、約３００ｍｌを採取した。
ｂ／３Ｔ３細胞）増殖促進因子の精製 １） ヘパリンアフィニテイクロマトグラフィー法によ
る粗精製 ウシ新生児血清（GIBCO Laboratories社より購入）１リ
ットルに塩化ナトリウムを２０.５ｇ加える。この新生
児血清を、あらかじめトリス緩衝液Ａ（２０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７.５，０.５Ｍ ＮａＣｌ）で平衡化
しておいたヘパリン−トヨパールカラム（５ｃｍ×５.
５ｃｍ，東ソー社）に流速３ｍｌ／分で展開する。その
後、トリス緩衝液Ａで同カラムを充分に洗浄する。洗浄
後、ヘパリン−トヨパールカラムに吸着したペプチド又
は蛋白質をトリス緩衝液Ｂ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
Ｌ ｐＨ７.５, １.０Ｍ ＮａＣｌ）で溶出する。溶出液
は吸光度光度計を用い、２８０ｎｍの吸光度によりモニ
ターし、吸収度の高い画分、約３００ｍｌを採取した。
【００２２】２） 逆相液体クロマトグラフィー法によ
る精製 操作１）で得た溶出液を、あらかじめ０.１％のトリフ
ルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含有する水で平衡化しておいた
コスモシール５Ｃ１８−３００カラム（４.６×２５０
ｍｍ、ナカライテスク社）に展開し、０.１％ＴＦＡを
含む水で十分に洗浄した。その後、吸着したペプチド又
は蛋白質をアセトニトリル濃度にして０〜８０％のリニ
アグラジェントにより溶出した。溶出液は、２１４ｎｍ
の吸光度によりモニターし、ピークごとに採取した。溶
出パターンを図１に示す。
る精製 操作１）で得た溶出液を、あらかじめ０.１％のトリフ
ルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含有する水で平衡化しておいた
コスモシール５Ｃ１８−３００カラム（４.６×２５０
ｍｍ、ナカライテスク社）に展開し、０.１％ＴＦＡを
含む水で十分に洗浄した。その後、吸着したペプチド又
は蛋白質をアセトニトリル濃度にして０〜８０％のリニ
アグラジェントにより溶出した。溶出液は、２１４ｎｍ
の吸光度によりモニターし、ピークごとに採取した。溶
出パターンを図１に示す。
【００２３】実施例２ 線維芽細胞増殖促進活性の測定 線維芽細胞株のＢａｌｂ／３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣより購
入）を９６ウエル培養プレートに１ウエル当たり５×１
０3個播種し、１０％仔牛血清添加ダルベーコ改変イー
グルMEM培地（以下ＤＭＥ）１００μｌを加え、培養器
中で２４時間、３７℃で培養した。その後培養液を除
き、細胞を洗浄後、低血清培地（０.２％仔牛血清添加
ＤＭＥ）１００μｌを加え、更に３日間培養した。そこ
へ実施例１により得た各画分を１０μｌ加え、１５時間
培養した。ついで、3Ｈ−チミジンを７４ＫＢｑ／ｍｌ
になるよう加え、６時間培養した。培養後培地を除き、
細胞を集め細胞中に取込まれた3Ｈ−チミジンの量を測
定した。その結果、図１中のピーク１（矢印）の画分に
細胞増殖促進活性が認められた。
入）を９６ウエル培養プレートに１ウエル当たり５×１
０3個播種し、１０％仔牛血清添加ダルベーコ改変イー
グルMEM培地（以下ＤＭＥ）１００μｌを加え、培養器
中で２４時間、３７℃で培養した。その後培養液を除
き、細胞を洗浄後、低血清培地（０.２％仔牛血清添加
ＤＭＥ）１００μｌを加え、更に３日間培養した。そこ
へ実施例１により得た各画分を１０μｌ加え、１５時間
培養した。ついで、3Ｈ−チミジンを７４ＫＢｑ／ｍｌ
になるよう加え、６時間培養した。培養後培地を除き、
細胞を集め細胞中に取込まれた3Ｈ−チミジンの量を測
定した。その結果、図１中のピーク１（矢印）の画分に
細胞増殖促進活性が認められた。
【００２４】実施例３ ピーク１のペプチドの物理化学
的性質の測定 １） Ｎ末端アミノ酸配列分析 実施例２で活性が確認された画分のペプチドにつき、Ｎ
末端配列をアミノ酸シークエンサー、モデル４７７Ａ
（アプライトバイオシステムズ社）により分析したとこ
ろ、下に示すアミノ酸配列が確認された。この配列を蛋
白データベースにより、一致するものがあるか否かを調
べたところ、ウシのＨＭＷ−キニノーゲンの３８７番目
から４０６番目の配列と、アミノ酸が同定できなかった
３９７番目、３９８番目及び４０４番目を除いて一致し
ていることが確認された。表１にウシＨＭＷ−キニノー
ゲンの３８７番目から４０４番目のアミノ酸部分配列と
確認されたアミノ末端配列を示す。
的性質の測定 １） Ｎ末端アミノ酸配列分析 実施例２で活性が確認された画分のペプチドにつき、Ｎ
末端配列をアミノ酸シークエンサー、モデル４７７Ａ
（アプライトバイオシステムズ社）により分析したとこ
ろ、下に示すアミノ酸配列が確認された。この配列を蛋
白データベースにより、一致するものがあるか否かを調
べたところ、ウシのＨＭＷ−キニノーゲンの３８７番目
から４０６番目の配列と、アミノ酸が同定できなかった
３９７番目、３９８番目及び４０４番目を除いて一致し
ていることが確認された。表１にウシＨＭＷ−キニノー
ゲンの３８７番目から４０４番目のアミノ酸部分配列と
確認されたアミノ末端配列を示す。
【００２５】
【表１】
【００２６】この表１の本活性画分においてｘで示され
た、３９７、３９８及び４０４番目のアミノ酸残基は、
糖の側鎖を有することが報告されているアミノ酸であ
り、そのことにより、アミノ酸シークエンサーによるア
ミノ酸残基の同定ができなかったと考えられる。また、
本実験においては４０１番目はロイシン及びバリンの両
方の可能性があるという結果を得たが、この４０１番目
及び他の３９８番目と４５５番目のアミノ酸残基に関し
ては、ウシＨＭＷ−キニノーゲンについて、それぞれ、
文献的に２種のアミノ酸が報告されている残基である
（Kato H. et al.,Methods Enzymol. vol. 80, p.172
〜198, 1981)。
た、３９７、３９８及び４０４番目のアミノ酸残基は、
糖の側鎖を有することが報告されているアミノ酸であ
り、そのことにより、アミノ酸シークエンサーによるア
ミノ酸残基の同定ができなかったと考えられる。また、
本実験においては４０１番目はロイシン及びバリンの両
方の可能性があるという結果を得たが、この４０１番目
及び他の３９８番目と４５５番目のアミノ酸残基に関し
ては、ウシＨＭＷ−キニノーゲンについて、それぞれ、
文献的に２種のアミノ酸が報告されている残基である
（Kato H. et al.,Methods Enzymol. vol. 80, p.172
〜198, 1981)。
【００２７】２） アミノ酸組成分析 また、ピーク１の画分のペプチドをアミノ酸分析機によ
り、アミノ酸組成を調べたところ、ウシのＨＭＷ−キニ
ノーゲンの３８７番目から４９６番目のフラグメント、
すなわちフラグメント１・２のアミノ酸組成に一致し
た。表２にアミノ酸組成分析の結果を示す。
り、アミノ酸組成を調べたところ、ウシのＨＭＷ−キニ
ノーゲンの３８７番目から４９６番目のフラグメント、
すなわちフラグメント１・２のアミノ酸組成に一致し
た。表２にアミノ酸組成分析の結果を示す。
【００２８】
【表２】 ＊１ Han.Y.N. et.al. J.Biochem. vol.83, p.213〜2
21(1978)より ＊２ 未決定
21(1978)より ＊２ 未決定
【００２９】３） 電気泳動による分析 ピーク１のペプチドの分子量を還元条件下のＳＤＳ電気
泳動により確認したところ、約２１Ｋｄの分子量を示し
た。この分子量は報告されているウシＨＭＷ−キニノー
ゲンのフラグメント１・２の分子量と一致する（Han.Y.
N. et.al. J.Biochem. vol.79, p.1201〜1222, 197
6）。
泳動により確認したところ、約２１Ｋｄの分子量を示し
た。この分子量は報告されているウシＨＭＷ−キニノー
ゲンのフラグメント１・２の分子量と一致する（Han.Y.
N. et.al. J.Biochem. vol.79, p.1201〜1222, 197
6）。
【００３０】以上、表１、２及び３）に示された結果よ
り、線維芽細胞の増殖活性を有するピーク１のペプチド
はウシＨＭＷ−キニノーゲンのフラグメント１・２であ
ると確認された。
り、線維芽細胞の増殖活性を有するピーク１のペプチド
はウシＨＭＷ−キニノーゲンのフラグメント１・２であ
ると確認された。
【００３１】実施例４ ウシＨＭＷ−キニノーゲンから
のフラグメント１・２、１及び２の調製 １） ウシＨＭＷ−キニノーゲンからのフラグメント１
・２の調製 フラグメント１・２の調整はHanらの方法（J. Biochem v
ol.83, p.213〜221，1978）に従って行った。ウシＨＭ
Ｗ−キニノーゲン（生化学工業より購入）５ｍｇを０.
２Ｍ炭酸水素アンモニウム緩衝液（ｐＨ８.０）５０μ
ｌに溶解し、ウシ血漿カリクレイン４.５μｇを加え、
３７℃にて１時間加温した。その後、ＤＦＰ（Diisopro
pyl phosphothioride）を最終濃度１.７×１０-2Ｍにな
るように加え、反応を停止した。これを、０.２Ｍ炭酸
水素アンモニウム緩衝液（ｐＨ８.０）で平衡化したセ
ファデックスＧ−７５カラム（１.６×６０ｃｍ）にて
ゲルろ過を行い、フラグメント１・２を得た。
のフラグメント１・２、１及び２の調製 １） ウシＨＭＷ−キニノーゲンからのフラグメント１
・２の調製 フラグメント１・２の調整はHanらの方法（J. Biochem v
ol.83, p.213〜221，1978）に従って行った。ウシＨＭ
Ｗ−キニノーゲン（生化学工業より購入）５ｍｇを０.
２Ｍ炭酸水素アンモニウム緩衝液（ｐＨ８.０）５０μ
ｌに溶解し、ウシ血漿カリクレイン４.５μｇを加え、
３７℃にて１時間加温した。その後、ＤＦＰ（Diisopro
pyl phosphothioride）を最終濃度１.７×１０-2Ｍにな
るように加え、反応を停止した。これを、０.２Ｍ炭酸
水素アンモニウム緩衝液（ｐＨ８.０）で平衡化したセ
ファデックスＧ−７５カラム（１.６×６０ｃｍ）にて
ゲルろ過を行い、フラグメント１・２を得た。
【００３２】２） フラグメント１、フラグメント２の
調製 フラグメント１及びフラグメント２の調整はHanらの方
法（文献上述）に従って行った。即ち、１）で得られた
フラグメント１・２にウシ血漿カリクレインを重量比１
／１１００になるように反応させ、フラグメント１とフ
ラグメント２に断片化した。ＤＦＰにより反応を停止し
た後、反応液から、０.２Ｍ炭酸水素アンモニウム緩衝
液（ｐＨ８.０）で平衡化したセファデックスＧ−７５
カラム（１.６×６０ｃｍ）にてゲルろ過を行うことに
より、それぞれフラグメント１、フラグメント２を得
た。
調製 フラグメント１及びフラグメント２の調整はHanらの方
法（文献上述）に従って行った。即ち、１）で得られた
フラグメント１・２にウシ血漿カリクレインを重量比１
／１１００になるように反応させ、フラグメント１とフ
ラグメント２に断片化した。ＤＦＰにより反応を停止し
た後、反応液から、０.２Ｍ炭酸水素アンモニウム緩衝
液（ｐＨ８.０）で平衡化したセファデックスＧ−７５
カラム（１.６×６０ｃｍ）にてゲルろ過を行うことに
より、それぞれフラグメント１、フラグメント２を得
た。
【００３３】実施例５ ウシＨＭＷ−キニノーゲンのフ
ラグメント１・２の線維芽細胞増殖活性の測定 実施例４により得たフラグメント１・２を、実施例２の
方法に従い、各ウエル当たり０.０３〜１０μｇ／ｍｌ
になるように加え、3Ｈ−チミジンの取込みを測定し
た。フラグメント１・２の線維芽細胞増殖活性の測定の
結果を表３に示す。各カラムは各群の平均と標準偏差を
示す。ｔ検定により、対照群に対して、＊はｐ＜０.０
５で、また＊＊はｐ＜０.００１で有意差がみられたこ
とを示す。
ラグメント１・２の線維芽細胞増殖活性の測定 実施例４により得たフラグメント１・２を、実施例２の
方法に従い、各ウエル当たり０.０３〜１０μｇ／ｍｌ
になるように加え、3Ｈ−チミジンの取込みを測定し
た。フラグメント１・２の線維芽細胞増殖活性の測定の
結果を表３に示す。各カラムは各群の平均と標準偏差を
示す。ｔ検定により、対照群に対して、＊はｐ＜０.０
５で、また＊＊はｐ＜０.００１で有意差がみられたこ
とを示す。
【００３４】
【表３】 この結果から、ウシＨＭＷ−キニノーゲンフラグメント
１・２は用量依存的に細胞増殖促進活性を有することが
確認された。
１・２は用量依存的に細胞増殖促進活性を有することが
確認された。
【００３５】
【効果】本発明により提供されるＨＭＷ−キニノーゲン
のフラグメント１、フラグメント２及びフラグメント１
・２は線維芽細胞の増殖促進活性を有するので創傷治療
剤として有用である。
のフラグメント１、フラグメント２及びフラグメント１
・２は線維芽細胞の増殖促進活性を有するので創傷治療
剤として有用である。
【００３６】
配列番号：１ 配列の長さ：１１０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 起源： 生物名：ウシ（Bos taulus） 組織の種類：血清 配列の特徴： 存在位置：ウシＨＭＷ−キニノーゲンの３８７〜４９６
番目のペプチドプラグメント 他の情報：１２番目のXaaは、Pro又はThr、１５番目のX
aaは、Val又はLeu、６９番目のXaaは、Lys又はArgを示
す。 配列： Ser Val Gln Val Met Lys Thr Glu Gly Ser Thr Xaa Val Ser Xaa Pro 1 5 10 15 His Ser Ala Met Ser Pro Val Gln Asp Glu Glu Arg Asp Ser Gly Lys 20 25 30 Glu Gln Gly Pro Thr His Gly His Gly Trp Asp His Gly Lys Gln Ile 35 40 45 Lys Leu His Gly Leu Gly Leu Gly His Lys His Lys His Asp Gln Gly 50 55 60 His Gly His His Xaa Ser His Gly Leu Gly His Gly His Gln Lys Gln 65 70 75 80 His Gly Leu Gly His Gly His Lys His Gly His Gly His Gly Lys His 85 90 95 Lys Asn Lys Gly Lys Asn Asn Gly Lys His Tyr Asp Trp Arg 100 105 110
番目のペプチドプラグメント 他の情報：１２番目のXaaは、Pro又はThr、１５番目のX
aaは、Val又はLeu、６９番目のXaaは、Lys又はArgを示
す。 配列： Ser Val Gln Val Met Lys Thr Glu Gly Ser Thr Xaa Val Ser Xaa Pro 1 5 10 15 His Ser Ala Met Ser Pro Val Gln Asp Glu Glu Arg Asp Ser Gly Lys 20 25 30 Glu Gln Gly Pro Thr His Gly His Gly Trp Asp His Gly Lys Gln Ile 35 40 45 Lys Leu His Gly Leu Gly Leu Gly His Lys His Lys His Asp Gln Gly 50 55 60 His Gly His His Xaa Ser His Gly Leu Gly His Gly His Gln Lys Gln 65 70 75 80 His Gly Leu Gly His Gly His Lys His Gly His Gly His Gly Lys His 85 90 95 Lys Asn Lys Gly Lys Asn Asn Gly Lys His Tyr Asp Trp Arg 100 105 110
【００３７】配列番号：２ 配列の長さ：６９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 起源： 生物名：ウシ（Bos taulus） 組織の種類：血清 配列の特徴： 存在位置：ウシＨＭＷ−キニノーゲンの３８７〜４５５
番目のペプチドプラグメント 他の情報：１２番目のXaaは、Pro又はThr、１５番目のX
aaは、Val又はLeu、６９番目のXaaは、Lys又はArgを示
す。 配列： Ser Val Gln Val Met Lys Thr Glu Gly Ser Thr Xaa Val Ser Xaa Pro 1 5 10 15 His Ser Ala Met Ser Pro Val Gln Asp Glu Glu Arg Asp Ser Gly Lys 20 25 30 Glu Gln Gly Pro Thr His Gly His Gly Trp Asp His Gly Lys Gln Ile 35 40 45 Lys Leu His Gly Leu Gly Leu Gly His Lys His Lys His Asp Gln Gly 50 55 60 His Gly His His Xaa 65
番目のペプチドプラグメント 他の情報：１２番目のXaaは、Pro又はThr、１５番目のX
aaは、Val又はLeu、６９番目のXaaは、Lys又はArgを示
す。 配列： Ser Val Gln Val Met Lys Thr Glu Gly Ser Thr Xaa Val Ser Xaa Pro 1 5 10 15 His Ser Ala Met Ser Pro Val Gln Asp Glu Glu Arg Asp Ser Gly Lys 20 25 30 Glu Gln Gly Pro Thr His Gly His Gly Trp Asp His Gly Lys Gln Ile 35 40 45 Lys Leu His Gly Leu Gly Leu Gly His Lys His Lys His Asp Gln Gly 50 55 60 His Gly His His Xaa 65
【００３８】配列番号：３ 配列の長さ：４１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 起源： 生物名：ウシ（Bos taulus） 組織の種類：血清 配列の特徴： 存在位置：ウシＨＭＷ−キニノーゲンの４５６〜４９６
番目のペプチドプラグメント 配列： Ser His Gly Leu Gly His Gly His Gln Lys Gln His Gly Leu Gly His 1 5 10 15 Gly His Lys His Gly His Gly His Gly Lys His Lys Asn Lys Gly Lys 20 25 30 Asn Asn Gly Lys His Tyr Asp Trp Arg 35 40
番目のペプチドプラグメント 配列： Ser His Gly Leu Gly His Gly His Gln Lys Gln His Gly Leu Gly His 1 5 10 15 Gly His Lys His Gly His Gly His Gly Lys His Lys Asn Lys Gly Lys 20 25 30 Asn Asn Gly Lys His Tyr Asp Trp Arg 35 40
【００３９】配列番号：４ 配列の長さ：１３１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 起源： 生物名：ヒト（Homo sapiens） 組織の種類：血清 配列の特徴： 存在位置：ヒトＨＭＷ−キニノーゲンの３９０〜５２０
番目のペプチドプラグメント 配列： Ser Ser Arg Ile Gly Glu Ile Lys Glu Glu Thr Thr Val Ser Pro Pro 1 5 10 15 His Thr Ser Met Ala Pro Ala Gln Asp Glu Glu Arg Asp Ser Gly Lys 20 25 30 Glu Gln Gly His Thr Arg Arg His Asp Trp Gly His Glu Lys Gln Arg 35 40 45 Lys His Asn Leu Gly His Gly His Lys His Glu Arg Asp Gln Gly His 50 55 60 Gly His Gln Arg Gly His Gly Leu Gly His Gly His Glu Gln Gln His 65 70 75 80 Gly Leu Gly His Gly His Lys Phe Lys Leu Asp Asp Asp Leu Glu His 85 90 95 Gln Gly Gly His Val Leu Asp His Gly His Lys His Lys His Gly His 100 105 110 Gly His Gly Lys His Lys Asn Lys Gly Lys Lys Asn Gly Lys His Asn 115 120 125 Gly Trp Lys 130
番目のペプチドプラグメント 配列： Ser Ser Arg Ile Gly Glu Ile Lys Glu Glu Thr Thr Val Ser Pro Pro 1 5 10 15 His Thr Ser Met Ala Pro Ala Gln Asp Glu Glu Arg Asp Ser Gly Lys 20 25 30 Glu Gln Gly His Thr Arg Arg His Asp Trp Gly His Glu Lys Gln Arg 35 40 45 Lys His Asn Leu Gly His Gly His Lys His Glu Arg Asp Gln Gly His 50 55 60 Gly His Gln Arg Gly His Gly Leu Gly His Gly His Glu Gln Gln His 65 70 75 80 Gly Leu Gly His Gly His Lys Phe Lys Leu Asp Asp Asp Leu Glu His 85 90 95 Gln Gly Gly His Val Leu Asp His Gly His Lys His Lys His Gly His 100 105 110 Gly His Gly Lys His Lys Asn Lys Gly Lys Lys Asn Gly Lys His Asn 115 120 125 Gly Trp Lys 130
【００４０】配列番号：５ 配列の長さ：６８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 起源： 生物名：ヒト（Homo sapiens） 組織の種類：血清 配列の特徴： 存在位置：ヒトＨＭＷ−キニノーゲンの３９０〜４５７
番目のペプチドプラグメント 配列： Ser Ser Arg Ile Gly Glu Ile Lys Glu Glu Thr Thr Val Ser Pro Pro 1 5 10 15 His Thr Ser Met Ala Pro Ala Gln Asp Glu Glu Arg Asp Ser Gly Lys 20 25 30 Glu Gln Gly His Thr Arg Arg His Asp Trp Gly His Glu Lys Gln Arg 35 40 45 Lys His Asn Leu Gly His Gly His Lys His Glu Arg Asp Gln Gly His 50 55 60 Gly His Gln Arg 65
番目のペプチドプラグメント 配列： Ser Ser Arg Ile Gly Glu Ile Lys Glu Glu Thr Thr Val Ser Pro Pro 1 5 10 15 His Thr Ser Met Ala Pro Ala Gln Asp Glu Glu Arg Asp Ser Gly Lys 20 25 30 Glu Gln Gly His Thr Arg Arg His Asp Trp Gly His Glu Lys Gln Arg 35 40 45 Lys His Asn Leu Gly His Gly His Lys His Glu Arg Asp Gln Gly His 50 55 60 Gly His Gln Arg 65
【００４１】配列番号：６ 配列の長さ：６３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 起源： 生物名：ヒト（Homo sapiens） 組織の種類：血清 配列の特徴： 存在位置：ヒトＨＭＷ−キニノーゲンの４５８〜５２０
番目のペプチドプラグメント 配列： Gly His Gly Leu Gly His Gly His Glu Gln Gln His Gly Leu Gly His 1 5 10 15 Gly His Lys Phe Lys Leu Asp Asp Asp Leu Glu His Gln Gly Gly His 20 25 30 Val Leu Asp His Gly His Lys His Lys His Gly His Gly His Gly Lys 35 40 45 His Lys Asn Lys Gly Lys Lys Asn Gly Lys His Asn Gly Trp Lys 50 55 60
番目のペプチドプラグメント 配列： Gly His Gly Leu Gly His Gly His Glu Gln Gln His Gly Leu Gly His 1 5 10 15 Gly His Lys Phe Lys Leu Asp Asp Asp Leu Glu His Gln Gly Gly His 20 25 30 Val Leu Asp His Gly His Lys His Lys His Gly His Gly His Gly Lys 35 40 45 His Lys Asn Lys Gly Lys Lys Asn Gly Lys His Asn Gly Trp Lys 50 55 60
【図１】ヘパリンアフィニテイカラムクロマトグラフに
結合し、溶出された画分をさらに、逆相液体クロマトグ
ラフィーにより展開したパターンを示す。矢印は本件の
フラグメント１・２を含む活性画分である。
結合し、溶出された画分をさらに、逆相液体クロマトグ
ラフィーにより展開したパターンを示す。矢印は本件の
フラグメント１・２を含む活性画分である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 14/81 8318−4Ｈ
Claims (9)
- 【請求項１】 キニノーゲンフラグメント１・２を有効
成分とする創傷治療剤。 - 【請求項２】 キニノーゲンフラグメント１を有効成分
とする創傷治療剤。 - 【請求項３】 キニノーゲンフラグメント２を有効成分
とする創傷治療剤。 - 【請求項４】 配列番号：１のウシのキニノーゲンフラ
グメント１・２である請求項１の創傷治療剤。 - 【請求項５】 配列番号：２のウシのキニノーゲンフラ
グメント１である請求項２の創傷治療剤。 - 【請求項６】 配列番号：３のウシのキニノーゲンフラ
グメント２である請求項３の創傷治療剤。 - 【請求項７】 配列番号：４のヒトキニノーゲンのウシ
キニノーゲンフラグメント１・２に対応する部分ペプチ
ドを有効成分とする創傷治療剤。 - 【請求項８】 配列番号：５のヒトキニノーゲンのウシ
キニノーゲンフラグメント１に対応する部分ペプチドを
有効成分とする創傷治療剤。 - 【請求項９】 配列番号：６のヒトキニノーゲンのウシ
キニノーゲンフラグメント２に対応する部分ペプチドを
有効成分とする創傷治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5230616A JPH0782172A (ja) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | 創傷治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5230616A JPH0782172A (ja) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | 創傷治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0782172A true JPH0782172A (ja) | 1995-03-28 |
Family
ID=16910562
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5230616A Pending JPH0782172A (ja) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | 創傷治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0782172A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0787499A1 (en) * | 1996-02-08 | 1997-08-06 | Snow Brand Milk Products Co., Ltd. | Kininogen for promoting bone formation and inhibiting bone resorption |
| WO2000027866A1 (en) * | 1998-11-10 | 2000-05-18 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by high molecular weight kininogen and peptide analogs thereof |
| EP1044012A1 (en) * | 1998-11-10 | 2000-10-18 | Temple University of the Commonwealth System of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by peptide analogs of high molecular weight kininogen domain 5 |
| US6767889B1 (en) | 1998-11-10 | 2004-07-27 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by high molecular weight kininogen and peptide analogs thereof |
| US6869931B1 (en) | 1998-12-16 | 2005-03-22 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by high molecular weight kininogen domain 3 peptide analogs |
| US6994852B1 (en) | 1999-11-12 | 2006-02-07 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by antibodies against high molecular weight kininogen domain 5 |
-
1993
- 1993-09-17 JP JP5230616A patent/JPH0782172A/ja active Pending
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0787499A1 (en) * | 1996-02-08 | 1997-08-06 | Snow Brand Milk Products Co., Ltd. | Kininogen for promoting bone formation and inhibiting bone resorption |
| US5885964A (en) * | 1996-02-08 | 1999-03-23 | Snow Brand Milk Products Co., Ltd. | Kininogen agent promoting bone formation and inhibiting bone resorption |
| AU723386B2 (en) * | 1996-02-08 | 2000-08-24 | Megmilk Snow Brand Co., Ltd. | An agent promoting bone formation and inhibiting bone resorption |
| WO2000027866A1 (en) * | 1998-11-10 | 2000-05-18 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by high molecular weight kininogen and peptide analogs thereof |
| EP1044012A1 (en) * | 1998-11-10 | 2000-10-18 | Temple University of the Commonwealth System of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by peptide analogs of high molecular weight kininogen domain 5 |
| US6284726B1 (en) | 1998-11-10 | 2001-09-04 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by peptide analogs of high molecular weight kininogen domain 5 |
| EP1044012A4 (en) * | 1998-11-10 | 2003-07-09 | Univ Temple | INHIBITION OF ANGIOGENESIS USING HIGH MOLECULAR WEIGHT KININOGEN PEPTIDE ANALOGS 5 |
| US6767889B1 (en) | 1998-11-10 | 2004-07-27 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by high molecular weight kininogen and peptide analogs thereof |
| US6869931B1 (en) | 1998-12-16 | 2005-03-22 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by high molecular weight kininogen domain 3 peptide analogs |
| US6994852B1 (en) | 1999-11-12 | 2006-02-07 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Inhibition of angiogenesis by antibodies against high molecular weight kininogen domain 5 |
| US7332161B2 (en) | 1999-11-12 | 2008-02-19 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Treatment of disease with antibodies against high molecular weight kininogen domain 5 |
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