JPH0751085A - ジアデノシン四リン酸の製造方法 - Google Patents
ジアデノシン四リン酸の製造方法Info
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- JPH0751085A JPH0751085A JP21910593A JP21910593A JPH0751085A JP H0751085 A JPH0751085 A JP H0751085A JP 21910593 A JP21910593 A JP 21910593A JP 21910593 A JP21910593 A JP 21910593A JP H0751085 A JPH0751085 A JP H0751085A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ジアデノシン四リン酸を含有する溶液を陰イ
オン交換樹脂に接触させてジアデノシン四リン酸を吸着
させ，吸着させたジアデノシン四リン酸をｐＨ及び塩濃
度の異なる溶液を用いて段階的に溶出することにより，
ジアデノシン四リン酸を溶出させる。 【効果】 ジアデノシン四リン酸を容易に，かつ高純度
で，しかも高収率で製造することができる。
オン交換樹脂に接触させてジアデノシン四リン酸を吸着
させ，吸着させたジアデノシン四リン酸をｐＨ及び塩濃
度の異なる溶液を用いて段階的に溶出することにより，
ジアデノシン四リン酸を溶出させる。 【効果】 ジアデノシン四リン酸を容易に，かつ高純度
で，しかも高収率で製造することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は，ジアデノシン四リン酸
（以下，Ａｐ４Ａと略称する。）を高収率で，かつ高純
度に製造することのできるＡｐ４Ａの製造方法に関する
ものである。
（以下，Ａｐ４Ａと略称する。）を高収率で，かつ高純
度に製造することのできるＡｐ４Ａの製造方法に関する
ものである。
【０００２】
【従来の技術】Ａｐ４Ａは，ＤＮＡ合成に対する作用，
血液凝固に関する作用，血管に対する作用〔クリニヒ・
ボッフェンシュリフト(Klinische Wochenschrift) 誌6
7,317-327(1989)〕等，様々な生理作用を有し，医薬品
および医薬品原料としての利用が期待されている物質で
ある。
血液凝固に関する作用，血管に対する作用〔クリニヒ・
ボッフェンシュリフト(Klinische Wochenschrift) 誌6
7,317-327(1989)〕等，様々な生理作用を有し，医薬品
および医薬品原料としての利用が期待されている物質で
ある。
【０００３】このＡｐ４Ａは，主に２分子のアデノシン
ポリリン酸を酵素により縮合させる反応により製造され
るが，Ａｐ４Ａの反応液には未反応のアデノシンポリリ
ン酸〔アデノシン一リン酸(AMP) ，アデノシン二リン酸
(ADP) ，アデノシン三リン酸(ATP) 等〕及び酵素に由来
する蛋白質等の不純物を含有し，医薬品として適格性を
有するＡｐ４Ａを製造するには，この反応液に何らかの
精製手段を構じ，高純度のＡｐ４Ａ溶液を得ることが必
須不可欠である。
ポリリン酸を酵素により縮合させる反応により製造され
るが，Ａｐ４Ａの反応液には未反応のアデノシンポリリ
ン酸〔アデノシン一リン酸(AMP) ，アデノシン二リン酸
(ADP) ，アデノシン三リン酸(ATP) 等〕及び酵素に由来
する蛋白質等の不純物を含有し，医薬品として適格性を
有するＡｐ４Ａを製造するには，この反応液に何らかの
精製手段を構じ，高純度のＡｐ４Ａ溶液を得ることが必
須不可欠である。
【０００４】従来より，Ａｐ４Ａの反応液から高純度Ａ
ｐ４Ａの溶液を製造する方法としては，陰イオン交換樹
脂を用い，陰イオン交換樹脂にＡｐ４Ａを吸着させた
後，溶出液の塩濃度勾配によりＡｐ４Ａを溶出させる方
法などが知られている〔ジャーナル・オブ・オーガニッ
ク・ケミストリー(J.Org.Chem.)30,3381-3387(1965)
〕。
ｐ４Ａの溶液を製造する方法としては，陰イオン交換樹
脂を用い，陰イオン交換樹脂にＡｐ４Ａを吸着させた
後，溶出液の塩濃度勾配によりＡｐ４Ａを溶出させる方
法などが知られている〔ジャーナル・オブ・オーガニッ
ク・ケミストリー(J.Org.Chem.)30,3381-3387(1965)
〕。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】上記のような従来法で
は，Ａｐ４Ａと反応原料のＡＭＰ，ＡＤＰ，ＡＴＰなど
の分離度が低いため，高純度のＡｐ４Ａを高収率で得る
ことは大変困難であった。
は，Ａｐ４Ａと反応原料のＡＭＰ，ＡＤＰ，ＡＴＰなど
の分離度が低いため，高純度のＡｐ４Ａを高収率で得る
ことは大変困難であった。
【０００６】本発明は，このような従来技術の欠点を解
消し，Ａｐ４Ａを高収率，かつ高純度に製造することの
できるＡｐ４Ａの製造方法を提供することを目的とする
ものである。
消し，Ａｐ４Ａを高収率，かつ高純度に製造することの
できるＡｐ４Ａの製造方法を提供することを目的とする
ものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは，このよう
な課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果，ｐＨ及
び塩濃度の異なる溶液を用いて段階的に溶出させれば，
Ａｐ４Ａを高収率，かつ高純度で得ることが可能である
ということを見い出し，本発明に到達した。
な課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果，ｐＨ及
び塩濃度の異なる溶液を用いて段階的に溶出させれば，
Ａｐ４Ａを高収率，かつ高純度で得ることが可能である
ということを見い出し，本発明に到達した。
【０００８】すなわち，本発明は，Ａｐ４Ａを含有する
溶液を陰イオン交換樹脂に接触させてＡｐ４Ａを吸着さ
せ，吸着させたＡｐ４ＡをｐＨ及び塩濃度の異なる溶液
を用いて溶出させることを特徴とするＡｐ４Ａの製造方
法を要旨とするものである。
溶液を陰イオン交換樹脂に接触させてＡｐ４Ａを吸着さ
せ，吸着させたＡｐ４ＡをｐＨ及び塩濃度の異なる溶液
を用いて溶出させることを特徴とするＡｐ４Ａの製造方
法を要旨とするものである。
【０００９】以下，本発明を詳細に説明する。本発明で
使用したＡｐ４Ａを含有する溶液を得る方法としては，
例えば，アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用に
より，ＡＴＰまたはその誘導体とアミノ酸を反応させて
製造する方法〔モレキュラー・アンド・セルラー・バイ
オケミストリー(Mol.Cell.Biochem.) ，52,3-11(1983)
〕等が挙げられる。ここで用いるアミノアシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素としては，Ａｐ４Ａを合成する能力を有し
ているものであればいかなるものでもよいが，例えば，
大腸菌由来のリジル−ｔＲＮＡ合成酵素，ヒスチジル−
ｔＲＮＡ合成酵素，フエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵
素，酵母由来のリジル−ｔＲＮＡ合成酵素，ヒスチジル
−ｔＲＮＡ合成酵素，フザリウム由来のフエニルアラニ
ル−ｔＲＮＡ合成酵素，バチルス ステアロサーモフイ
ルス等の耐熱性細菌由来のロイシル−ｔＲＮＡ合成酵
素，羊肝細胞由来のフエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵
素等が挙げられる。また，アミノ酸としては，例えば，
チロシン，アラニン，ロイシン，イソロイシン，フエニ
ルアラニン，メチオニン，リジン，セリン，バリン，ア
スパラギン，アスパラギン酸，グリシン，グルタミン，
グルタミン酸，システイン，トレオニン，トリプトファ
ン，ヒスチジン，プロリン，アルギニン等のα−アミノ
酸が挙げられ，Ｌ体，Ｄ体のいずれでもよい。この時，
アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素は，アミノ酸に特異性
のあるものが用いられ，例えば，ロイシンに特異性のあ
るものとしては，ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素が用いら
れる。
使用したＡｐ４Ａを含有する溶液を得る方法としては，
例えば，アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用に
より，ＡＴＰまたはその誘導体とアミノ酸を反応させて
製造する方法〔モレキュラー・アンド・セルラー・バイ
オケミストリー(Mol.Cell.Biochem.) ，52,3-11(1983)
〕等が挙げられる。ここで用いるアミノアシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素としては，Ａｐ４Ａを合成する能力を有し
ているものであればいかなるものでもよいが，例えば，
大腸菌由来のリジル−ｔＲＮＡ合成酵素，ヒスチジル−
ｔＲＮＡ合成酵素，フエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵
素，酵母由来のリジル−ｔＲＮＡ合成酵素，ヒスチジル
−ｔＲＮＡ合成酵素，フザリウム由来のフエニルアラニ
ル−ｔＲＮＡ合成酵素，バチルス ステアロサーモフイ
ルス等の耐熱性細菌由来のロイシル−ｔＲＮＡ合成酵
素，羊肝細胞由来のフエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵
素等が挙げられる。また，アミノ酸としては，例えば，
チロシン，アラニン，ロイシン，イソロイシン，フエニ
ルアラニン，メチオニン，リジン，セリン，バリン，ア
スパラギン，アスパラギン酸，グリシン，グルタミン，
グルタミン酸，システイン，トレオニン，トリプトファ
ン，ヒスチジン，プロリン，アルギニン等のα−アミノ
酸が挙げられ，Ｌ体，Ｄ体のいずれでもよい。この時，
アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素は，アミノ酸に特異性
のあるものが用いられ，例えば，ロイシンに特異性のあ
るものとしては，ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素が用いら
れる。
【００１０】上記のような方法で得られたＡｐ４Ａを含
有する溶液中には反応生成物であるＡｐ４Ａと未反応の
ＡＭＰ，ＡＤＰ，ＡＴＰ等が含まれている。また，酵素
及びそれに由来する蛋白質がそのまま含まれている場合
もある。本発明においては，前記のＡｐ４Ａを含有する
溶液をそのまま用いてもよく，また，膜や酸等により除
蛋白を行った溶液を用いてもよい。溶液のｐＨとして
は，Ａｐ４Ａの陰イオン交換樹脂への吸着にほとんど影
響を与えないので，特に限定されるものではないが，中
性付近が好ましい。
有する溶液中には反応生成物であるＡｐ４Ａと未反応の
ＡＭＰ，ＡＤＰ，ＡＴＰ等が含まれている。また，酵素
及びそれに由来する蛋白質がそのまま含まれている場合
もある。本発明においては，前記のＡｐ４Ａを含有する
溶液をそのまま用いてもよく，また，膜や酸等により除
蛋白を行った溶液を用いてもよい。溶液のｐＨとして
は，Ａｐ４Ａの陰イオン交換樹脂への吸着にほとんど影
響を与えないので，特に限定されるものではないが，中
性付近が好ましい。
【００１１】本発明で使用される陰イオン交換樹脂とし
ては，弱塩基性陰イオン交換樹脂を用いることが好まし
い。そのような弱塩基性陰イオン交換樹脂としては，例
えば，ダイアイオンＷＡシリーズ（三菱化成株式会社
製），ダウエックスＷＧＲシリーズ（室町化学工業株式
会社製），セファデックスシリーズ（ファルマシア社
製）等が挙げられるが，中でも，吸着容量が大きく，粒
径が大きいもの（粒径２００μｍ以上）を用いると，短
時間で溶出することができ効果的である。
ては，弱塩基性陰イオン交換樹脂を用いることが好まし
い。そのような弱塩基性陰イオン交換樹脂としては，例
えば，ダイアイオンＷＡシリーズ（三菱化成株式会社
製），ダウエックスＷＧＲシリーズ（室町化学工業株式
会社製），セファデックスシリーズ（ファルマシア社
製）等が挙げられるが，中でも，吸着容量が大きく，粒
径が大きいもの（粒径２００μｍ以上）を用いると，短
時間で溶出することができ効果的である。
【００１２】本発明において，Ａｐ４Ａを含有した溶液
と前記陰イオン交換樹脂とを接触させる方法としては，
溶液と陰イオン交換樹脂とを直接攪拌するバッチ法や陰
イオン交換樹脂をカラムに充填し溶液を通液するカラム
法等が挙げられる。
と前記陰イオン交換樹脂とを接触させる方法としては，
溶液と陰イオン交換樹脂とを直接攪拌するバッチ法や陰
イオン交換樹脂をカラムに充填し溶液を通液するカラム
法等が挙げられる。
【００１３】カラム法により行う場合は，陰イオン交換
樹脂をカラムに充填した後，Ａｐ４Ａを含有する溶液を
通液すればよい。この際用いる溶液の容量としては，樹
脂の体積に対して何倍量でもよく，通常，１〜１００倍
量，好ましくは１〜１０倍量が用いられる。また．この
場合の通液速度としては，特に限定されないが，一時間
当り三カラム体積付近が効率的であり好ましい。しか
し，吸着量は通液速度の影響をあまり受けないので，こ
れより大きな通液速度を用いてもよい。また，バッチ法
により行う場合は，適当な容器の中で陰イオン交換樹脂
とＡｐ４Ａを含有する溶液を十分混合，攪拌すればよ
い。この際，用いるＡｐ４Ａを含有する溶液の容量とし
ては，樹脂の体積に対して何倍量でもよく，通常，１〜
１００倍量，好ましくは１〜１０倍量が用いられる。吸
着後，濾過などにより樹脂と溶液とを分離する。
樹脂をカラムに充填した後，Ａｐ４Ａを含有する溶液を
通液すればよい。この際用いる溶液の容量としては，樹
脂の体積に対して何倍量でもよく，通常，１〜１００倍
量，好ましくは１〜１０倍量が用いられる。また．この
場合の通液速度としては，特に限定されないが，一時間
当り三カラム体積付近が効率的であり好ましい。しか
し，吸着量は通液速度の影響をあまり受けないので，こ
れより大きな通液速度を用いてもよい。また，バッチ法
により行う場合は，適当な容器の中で陰イオン交換樹脂
とＡｐ４Ａを含有する溶液を十分混合，攪拌すればよ
い。この際，用いるＡｐ４Ａを含有する溶液の容量とし
ては，樹脂の体積に対して何倍量でもよく，通常，１〜
１００倍量，好ましくは１〜１０倍量が用いられる。吸
着後，濾過などにより樹脂と溶液とを分離する。
【００１４】溶出液としては，純水，ｐＨ緩衝液，塩酸
希釈液等の有機溶媒特にアルコール類を含まない溶液を
用いることができる。例えば，水，食塩水やリン酸，イ
ミダゾール，ヘペス，トリス，酢酸，グリシン等の緩衝
液が挙げられる。
希釈液等の有機溶媒特にアルコール類を含まない溶液を
用いることができる。例えば，水，食塩水やリン酸，イ
ミダゾール，ヘペス，トリス，酢酸，グリシン等の緩衝
液が挙げられる。
【００１５】カラム法により行う場合，初めの溶出に用
いる溶出液の容量としては，不純物が十分に洗い流され
る量であればよく，通常，用いた樹脂の体積の１０倍以
上，好ましくは５０倍以上である。また，バッチ法によ
り行う場合に用いる溶出液の容量としては，不純物が十
分に溶出される量であればいくらでもよく，通常，樹脂
の体積に対して３倍量以上を用いて６０回以上，好まし
くは１００回以上溶出を繰り返す。この時の溶出液のｐ
Ｈとしては，酸性付近が好ましく，特に３以下が好まし
い。この溶出によって，不純物であるＡＭＰ，ＡＤＰ，
ＡＴＰ，蛋白質等が溶出される。
いる溶出液の容量としては，不純物が十分に洗い流され
る量であればよく，通常，用いた樹脂の体積の１０倍以
上，好ましくは５０倍以上である。また，バッチ法によ
り行う場合に用いる溶出液の容量としては，不純物が十
分に溶出される量であればいくらでもよく，通常，樹脂
の体積に対して３倍量以上を用いて６０回以上，好まし
くは１００回以上溶出を繰り返す。この時の溶出液のｐ
Ｈとしては，酸性付近が好ましく，特に３以下が好まし
い。この溶出によって，不純物であるＡＭＰ，ＡＤＰ，
ＡＴＰ，蛋白質等が溶出される。
【００１６】次に，先程とはｐＨ及び塩濃度の異なる溶
出液を用いて，陰イオン交換樹脂よりＡｐ４Ａを溶出さ
せる。カラム法により行う場合に用いられる溶出液の容
量としては，通常，用いた樹脂の体積と同量以上，好ま
しくは１０〜３０倍量を用いる。また，バッチ法により
行う場合に用いられる溶出液の容量としては，特に制限
されるものではないが，実用的には，樹脂の体積に対し
て１０〜２０倍量を用いるのが好ましい。溶出液のｐＨ
としては，特に調整は必要としないが，中性付近が好ま
しい。
出液を用いて，陰イオン交換樹脂よりＡｐ４Ａを溶出さ
せる。カラム法により行う場合に用いられる溶出液の容
量としては，通常，用いた樹脂の体積と同量以上，好ま
しくは１０〜３０倍量を用いる。また，バッチ法により
行う場合に用いられる溶出液の容量としては，特に制限
されるものではないが，実用的には，樹脂の体積に対し
て１０〜２０倍量を用いるのが好ましい。溶出液のｐＨ
としては，特に調整は必要としないが，中性付近が好ま
しい。
【００１７】
【実施例】次に，本発明を実施例により具体的に説明す
る。
る。
【００１８】参考例１ カラム法にてジアデノシン四リン酸（Ａｐ４Ａ）を高純
度に含む溶液を得るために，プロシーディング・オブ・
ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシス（Pr
oc.Natl.Acad.Sci.USA）誌８６巻８２７５〜８２７９頁
（１９８９）に記載されているように，１５ｍＭのＡＴ
Ｐ，３０ｍＭの塩化マグシウム，３ｍＭの塩化亜鉛及び
３ｍＭのイソロイシンを含む１００ｍＭのトリス塩酸緩
衝液（ｐＨ７．８）にイソロイシル−ｔＲＮＡを加えて
反応を行い，Ａｐ４Ａを含有する溶液を得た。ここで用
いたイソロイシル−ｔＲＮＡはフェブス・レターズ（FE
BSletters）誌１８５巻１６２〜１６４頁（１９８５）
に記載されているように，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成
酵素遺伝子をセルフクローニングした大腸菌JE5506-pkD
15（微工研菌寄第11950 号）の培養液に，除核酸などの
前処理を行い，ＤＥＡＥ−セファロース，ヒドロキシア
パタイトカラムクロマトグラフィーで精製することによ
り，電気泳動的にほぼ単一なイソロイシル−ｔＲＮＡ合
成酵素を得た。
度に含む溶液を得るために，プロシーディング・オブ・
ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシス（Pr
oc.Natl.Acad.Sci.USA）誌８６巻８２７５〜８２７９頁
（１９８９）に記載されているように，１５ｍＭのＡＴ
Ｐ，３０ｍＭの塩化マグシウム，３ｍＭの塩化亜鉛及び
３ｍＭのイソロイシンを含む１００ｍＭのトリス塩酸緩
衝液（ｐＨ７．８）にイソロイシル−ｔＲＮＡを加えて
反応を行い，Ａｐ４Ａを含有する溶液を得た。ここで用
いたイソロイシル−ｔＲＮＡはフェブス・レターズ（FE
BSletters）誌１８５巻１６２〜１６４頁（１９８５）
に記載されているように，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成
酵素遺伝子をセルフクローニングした大腸菌JE5506-pkD
15（微工研菌寄第11950 号）の培養液に，除核酸などの
前処理を行い，ＤＥＡＥ−セファロース，ヒドロキシア
パタイトカラムクロマトグラフィーで精製することによ
り，電気泳動的にほぼ単一なイソロイシル−ｔＲＮＡ合
成酵素を得た。
【００１９】実施例１ 参考例１で得られたＡｐ４Ａを含有する溶液１．８４リ
ットル（不溶物濾過済み）を，ダイアイオンＷＡ１０樹
脂（三菱化成株式会社製）を充填したカラム（サイズ３
２ｍｍΦ×４５ｍｍ）に通液し，０．１３ＭのＮａＣｌ
（ｐＨ２．０），０．１３ＭのＮａＣｌ（ｐＨ４．
０），０．１５ＭのＮａＣｌ（ｐＨ３．０）及び１Ｍの
ＮａＣｌ（ｐＨ中性付近）で溶出を行った。通液速度
は、いずれも毎時８４ｍｌとした。Ａｐ４Ａを含有する
溶液（表中では反応液と示す）及び溶出液のそれぞれに
ついて，アナリティカル・バイオケミストリー（Anal.B
iochem. ）誌１３４巻３８２〜３９２頁（１９８３）に
記載されているようにノバパック（NOVA-Pac） C-18 カ
ラム（ウォーターズ社製）を用い，３０ｍＭのリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）を移動相とした高速液体クロマトグ
ラフ法により成分の分析を行った。得られた結果を表１
に示す。
ットル（不溶物濾過済み）を，ダイアイオンＷＡ１０樹
脂（三菱化成株式会社製）を充填したカラム（サイズ３
２ｍｍΦ×４５ｍｍ）に通液し，０．１３ＭのＮａＣｌ
（ｐＨ２．０），０．１３ＭのＮａＣｌ（ｐＨ４．
０），０．１５ＭのＮａＣｌ（ｐＨ３．０）及び１Ｍの
ＮａＣｌ（ｐＨ中性付近）で溶出を行った。通液速度
は、いずれも毎時８４ｍｌとした。Ａｐ４Ａを含有する
溶液（表中では反応液と示す）及び溶出液のそれぞれに
ついて，アナリティカル・バイオケミストリー（Anal.B
iochem. ）誌１３４巻３８２〜３９２頁（１９８３）に
記載されているようにノバパック（NOVA-Pac） C-18 カ
ラム（ウォーターズ社製）を用い，３０ｍＭのリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）を移動相とした高速液体クロマトグ
ラフ法により成分の分析を行った。得られた結果を表１
に示す。
【００２０】
【表１】
【００２１】実施例２ 参考例１で得られたＡｐ４Ａを含有する溶液１．８７リ
ットル（不溶物濾過済み）を，ダイアイオンＷＡ１０樹
脂（実施例１と同じもの）を充填したカラム（サイズ３
２ｍｍΦ×４５ｍｍ）に通液し，０．１５ＭのＮａＣｌ
（ｐＨ２．５）及び１ＭのＮａＣｌ（ｐＨ中性付近）で
溶出を行った。通液速度は，いずれも毎時８４ｍｌとし
た。Ａｐ４Ａを含有する溶液（表中では反応液と示す）
及びそれぞれの溶出液について，実施例１と同様の方法
で成分の分析を行った。得られた結果を表２に示す。
ットル（不溶物濾過済み）を，ダイアイオンＷＡ１０樹
脂（実施例１と同じもの）を充填したカラム（サイズ３
２ｍｍΦ×４５ｍｍ）に通液し，０．１５ＭのＮａＣｌ
（ｐＨ２．５）及び１ＭのＮａＣｌ（ｐＨ中性付近）で
溶出を行った。通液速度は，いずれも毎時８４ｍｌとし
た。Ａｐ４Ａを含有する溶液（表中では反応液と示す）
及びそれぞれの溶出液について，実施例１と同様の方法
で成分の分析を行った。得られた結果を表２に示す。
【００２２】
【表２】
【００２３】比較例１ 参考例１で得られたＡｐ４Ａを含有する溶液２．１リッ
トル（不溶物濾過済み）を，ダイアイオンＷＡ１０樹脂
（実施例１と同じもの）を充填したカラム（サイズ３２
ｍｍΦ×４５ｍｍ）に通液し，ｐＨを調整していない
０．１５ＭのＮａＣｌ（ｐＨ中性付近）及び１ＭのＮａ
Ｃｌ（ｐＨ中性付近）で溶出を行った。通液速度は，い
ずれも毎時１０５ｍｌとした。Ａｐ４Ａを含有する溶液
（表中では反応液と示す）及びそれぞれの溶出液につい
て，実施例１と同様の方法で成分の分析を行った。得ら
れた結果を表３に示す。
トル（不溶物濾過済み）を，ダイアイオンＷＡ１０樹脂
（実施例１と同じもの）を充填したカラム（サイズ３２
ｍｍΦ×４５ｍｍ）に通液し，ｐＨを調整していない
０．１５ＭのＮａＣｌ（ｐＨ中性付近）及び１ＭのＮａ
Ｃｌ（ｐＨ中性付近）で溶出を行った。通液速度は，い
ずれも毎時１０５ｍｌとした。Ａｐ４Ａを含有する溶液
（表中では反応液と示す）及びそれぞれの溶出液につい
て，実施例１と同様の方法で成分の分析を行った。得ら
れた結果を表３に示す。
【００２４】
【表３】
【００２５】表１及び２に示すように，ｐＨ及び塩濃度
の異なる溶液を用いて段階的に溶出を行うと，高純度の
Ａｐ４Ａを，しかも高収率で得ることができる。一方，
表３に示すように，塩濃度のみの異なる溶液を用いて段
階的に溶出を行うと，得られたＡｐ４Ａの純度は低く，
さらに収率も低いことが明らかである。
の異なる溶液を用いて段階的に溶出を行うと，高純度の
Ａｐ４Ａを，しかも高収率で得ることができる。一方，
表３に示すように，塩濃度のみの異なる溶液を用いて段
階的に溶出を行うと，得られたＡｐ４Ａの純度は低く，
さらに収率も低いことが明らかである。
【００２６】参考例２ 粉体のＡＴＰ３ｋｇ，塩化マグネシウム１ｋｇ，イソロ
イシン０．８ｇ，イソロイシルｔ−ＲＮＡ合成酵素溶液
（２８ＭＵ／リットル）４．０リットル，イミダゾール
０．５ｋｇ，メタノール４２ｋｇを水に溶解し，反応さ
せてＡｐ４Ａを含有する溶液を得た。
イシン０．８ｇ，イソロイシルｔ−ＲＮＡ合成酵素溶液
（２８ＭＵ／リットル）４．０リットル，イミダゾール
０．５ｋｇ，メタノール４２ｋｇを水に溶解し，反応さ
せてＡｐ４Ａを含有する溶液を得た。
【００２７】実施例３ 参考例２で得られたＡｐ４Ａを含有する溶液６００リッ
トルを不溶物を濾過で除去した後，約２倍に希釈し，ダ
イアイオンＷＡ１０樹脂（実施例１と同じもの）を充填
したカラム（サイズ３８ｃｍΦ×５０ｃｍ）に通液し，
０．１３ＭのＮａＣｌ（ｐＨ２．５）８４００リットル
を用いて十分に溶出を行った後，１ＭのＮａＣｌ（ｐＨ
中性付近）で溶出を行った。Ａｐ４Ａを含有する溶液
（表中では反応液と示す）及びそれぞれの溶出液につい
て，実施例１と同様の方法で成分の分析を行った。得ら
れた結果を表４に示す。
トルを不溶物を濾過で除去した後，約２倍に希釈し，ダ
イアイオンＷＡ１０樹脂（実施例１と同じもの）を充填
したカラム（サイズ３８ｃｍΦ×５０ｃｍ）に通液し，
０．１３ＭのＮａＣｌ（ｐＨ２．５）８４００リットル
を用いて十分に溶出を行った後，１ＭのＮａＣｌ（ｐＨ
中性付近）で溶出を行った。Ａｐ４Ａを含有する溶液
（表中では反応液と示す）及びそれぞれの溶出液につい
て，実施例１と同様の方法で成分の分析を行った。得ら
れた結果を表４に示す。
【００２８】
【表４】
【００２９】表４に示すように，大スケールのカラム法
においても，ｐＨ及び塩濃度の異なる溶液を用いて段階
的に溶出を行うと，高純度のＡｐ４Ａを高収率で得るこ
とができる。
においても，ｐＨ及び塩濃度の異なる溶液を用いて段階
的に溶出を行うと，高純度のＡｐ４Ａを高収率で得るこ
とができる。
【００３０】
【発明の効果】本発明によれば，高純度のＡｐ４Ａを容
易に，しかも高収率で得ることができる。
易に，しかも高収率で得ることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中島 宏 京都府宇治市宇治小桜23番地 ユニチカ株 式会社中央研究所内
Claims (1)
- 【請求項１】 ジアデノシン四リン酸を含有する溶液を
陰イオン交換樹脂に接触させてジアデノシン四リン酸を
吸着させ，吸着させたジアデノシン四リン酸をｐＨ及び
塩濃度の異なる溶液を用いて溶出させることを特徴とす
るジアデノシン四リン酸の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21910593A JPH0751085A (ja) | 1993-08-10 | 1993-08-10 | ジアデノシン四リン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21910593A JPH0751085A (ja) | 1993-08-10 | 1993-08-10 | ジアデノシン四リン酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0751085A true JPH0751085A (ja) | 1995-02-28 |
Family
ID=16730339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21910593A Pending JPH0751085A (ja) | 1993-08-10 | 1993-08-10 | ジアデノシン四リン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0751085A (ja) |
-
1993
- 1993-08-10 JP JP21910593A patent/JPH0751085A/ja active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040203 |