JPH04248990A - ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法 - Google Patents
ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法Info
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は，イソロイシル−ｔＲＮ
Ａ合成酵素を用いるジアデノシン四リン酸又はその誘導
体の製造法に関するものである。
Ａ合成酵素を用いるジアデノシン四リン酸又はその誘導
体の製造法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ジアデノシン四リン酸又はその誘導体は
，Ｇ１ 阻害を起こしたＢＨＫ細胞に対するＤＮＡ合成
の促進作用〔エフ・グルムト（Ｆ． Ｇｒｕｍｍｔ），
プロシーデイング・オブ・ナシヨナル・アカデミツク・
サイエンス（Ｐｒｏ． Ｎ． Ａ． Ｓ．） ７５，３
７１（１９７８）〕，リン酸化の阻害作用〔ピー・エフ
・マネス（Ｐ． Ｆ． Ｍａｎｅｓｓ）ら，ジヤーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏ
ｌ． Ｃｈｅｍ．）２５８，４０５５（１９８３）〕，
血小板凝集阻害作用〔エム・ジエイ・ハリソン（Ｍ．
Ｊ． Ｈａｒｒｉｓｏｎ）ら，フエブス・レターズ（Ｆ
ＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ）５４，５７（１９７５）〕等
の生理作用を有し，医薬品及び医薬品原料としての利用
が期待されている物質である。
，Ｇ１ 阻害を起こしたＢＨＫ細胞に対するＤＮＡ合成
の促進作用〔エフ・グルムト（Ｆ． Ｇｒｕｍｍｔ），
プロシーデイング・オブ・ナシヨナル・アカデミツク・
サイエンス（Ｐｒｏ． Ｎ． Ａ． Ｓ．） ７５，３
７１（１９７８）〕，リン酸化の阻害作用〔ピー・エフ
・マネス（Ｐ． Ｆ． Ｍａｎｅｓｓ）ら，ジヤーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏ
ｌ． Ｃｈｅｍ．）２５８，４０５５（１９８３）〕，
血小板凝集阻害作用〔エム・ジエイ・ハリソン（Ｍ．
Ｊ． Ｈａｒｒｉｓｏｎ）ら，フエブス・レターズ（Ｆ
ＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ）５４，５７（１９７５）〕等
の生理作用を有し，医薬品及び医薬品原料としての利用
が期待されている物質である。
【０００３】このジアデノシン四リン酸又はその誘導体
（以下Ｎｐ４Ｎという。）を得る方法としては，ヨーロ
ピアン・ジヤーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕ
ｒ． Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）１２６，１３５（１９８
２）には，エシエリキア・コリ由来のリジル−ｔＲＮＡ
合成酵素，ヒスチジル−ｔＲＮＡ合成酵素，フエニルア
ラニル−ｔＲＮＡ合成酵素，酵母由来のリジル−ｔＲＮ
Ａ合成酵素，フエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素，フ
ザリウム由来のフエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素，
羊肝細胞由来のフエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素等
の種々のアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素によりアデノ
シン−５’−三リン酸（以下ＡＴＰという。）からジア
デノシン四リン酸が，また，ＡＴＰの誘導体である２’
−デオキシアデノシン−５’−三リン酸からジアデノシ
ン四リン酸の誘導体であるジデオキシアデノシン四リン
酸が合成されることが報告されている。
（以下Ｎｐ４Ｎという。）を得る方法としては，ヨーロ
ピアン・ジヤーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅｕ
ｒ． Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）１２６，１３５（１９８
２）には，エシエリキア・コリ由来のリジル−ｔＲＮＡ
合成酵素，ヒスチジル−ｔＲＮＡ合成酵素，フエニルア
ラニル−ｔＲＮＡ合成酵素，酵母由来のリジル−ｔＲＮ
Ａ合成酵素，フエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素，フ
ザリウム由来のフエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素，
羊肝細胞由来のフエニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素等
の種々のアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素によりアデノ
シン−５’−三リン酸（以下ＡＴＰという。）からジア
デノシン四リン酸が，また，ＡＴＰの誘導体である２’
−デオキシアデノシン−５’−三リン酸からジアデノシ
ン四リン酸の誘導体であるジデオキシアデノシン四リン
酸が合成されることが報告されている。
【０００４】一方，特開昭６２−２７８９９２号公報に
は，アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用により
，ＡＴＰ又はその誘導体（以下ＮＴＰという。）とアミ
ノ酸とを反応させてＮｐ４Ｎを製造するに際し，該反応
をＡＤＰ又はその誘導体（以下ＮＤＰという。）をＮＴ
Ｐに変換する酵素の存在下で行うことが提案されている
。
は，アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用により
，ＡＴＰ又はその誘導体（以下ＮＴＰという。）とアミ
ノ酸とを反応させてＮｐ４Ｎを製造するに際し，該反応
をＡＤＰ又はその誘導体（以下ＮＤＰという。）をＮＴ
Ｐに変換する酵素の存在下で行うことが提案されている
。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従来の方法，すなわち
上記した各アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用
によりＮＴＰとアミノ酸とを反応させてＮｐ４Ｎを合成
する方法では，触媒として用いるアミノアシル−ｔＲＮ
Ａを得るために，培養後の菌体あるいは肝細胞をを破砕
後，酵素を精製する操作を経ているが，天然に存在する
菌体あるいは細胞中のアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素
の含有量は極わずかであるために，目的とするＮｐ４Ｎ
を製造する際，大量の菌体を培養しあるいは大量の細胞
を用意し，処理しなければならないという欠点があった
。また，酵素の単離に多くの操作を経なければならず，
このためＮＴＰからＮｐ４Ｎを合成するのにコスト的に
問題があった。
上記した各アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用
によりＮＴＰとアミノ酸とを反応させてＮｐ４Ｎを合成
する方法では，触媒として用いるアミノアシル−ｔＲＮ
Ａを得るために，培養後の菌体あるいは肝細胞をを破砕
後，酵素を精製する操作を経ているが，天然に存在する
菌体あるいは細胞中のアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素
の含有量は極わずかであるために，目的とするＮｐ４Ｎ
を製造する際，大量の菌体を培養しあるいは大量の細胞
を用意し，処理しなければならないという欠点があった
。また，酵素の単離に多くの操作を経なければならず，
このためＮＴＰからＮｐ４Ｎを合成するのにコスト的に
問題があった。
【０００６】さらに，従来の方法で得られたＮｐ４Ｎを
含む反応液には，ヌクレオシド一リン酸（ＮＭＰ），ヌ
クレオシド二リン酸（ＮＤＰ），ヌクレオシド（Ｎ）及
びジヌクレオシド三リン酸（Ｎｐ３Ｎ）等が副生して混
入することがたびたび認められ，これら不純物の生理作
用によってＮｐ４Ｎ本来の作用に悪影響がみられること
があった。Ｎｐ４Ｎを薬剤等に用いようとする場合，こ
れら不純物の悪影響は避けなければならず，そのため，
これら副生した不純物を除去するための後処理（精製工
程）が極めて繁雑であった。また，このような後処理工
程はコスト的にも工業的に実施するのに障害となってい
た。
含む反応液には，ヌクレオシド一リン酸（ＮＭＰ），ヌ
クレオシド二リン酸（ＮＤＰ），ヌクレオシド（Ｎ）及
びジヌクレオシド三リン酸（Ｎｐ３Ｎ）等が副生して混
入することがたびたび認められ，これら不純物の生理作
用によってＮｐ４Ｎ本来の作用に悪影響がみられること
があった。Ｎｐ４Ｎを薬剤等に用いようとする場合，こ
れら不純物の悪影響は避けなければならず，そのため，
これら副生した不純物を除去するための後処理（精製工
程）が極めて繁雑であった。また，このような後処理工
程はコスト的にも工業的に実施するのに障害となってい
た。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは，このよう
な課題を解決するために鋭意検討の結果，イソロイシル
−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子をクローニングしたエシエリ
キア・コリを培養し，効率的に生産したイソロイシル−
ｔＲＮＡ合成酵素を用いることによって，菌体中の酵素
含量が増すことは勿論，驚いたことに高純度のＮｐ４Ｎ
が製造できることを見出し，本発明を完成するに至った
。すなわち，本発明は，Ｎｐ４Ｎを製造するに際し，イ
ソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子をクローニングし
たエシエリキア・コリの培養物から得られる抽出物を共
存させることを特徴とするＮｐ４Ｎの製造方法を要旨と
するものである。
な課題を解決するために鋭意検討の結果，イソロイシル
−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子をクローニングしたエシエリ
キア・コリを培養し，効率的に生産したイソロイシル−
ｔＲＮＡ合成酵素を用いることによって，菌体中の酵素
含量が増すことは勿論，驚いたことに高純度のＮｐ４Ｎ
が製造できることを見出し，本発明を完成するに至った
。すなわち，本発明は，Ｎｐ４Ｎを製造するに際し，イ
ソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子をクローニングし
たエシエリキア・コリの培養物から得られる抽出物を共
存させることを特徴とするＮｐ４Ｎの製造方法を要旨と
するものである。
【０００８】本発明の最大の特徴は，Ｎｐ４Ｎを製造す
る際不可欠なアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の１つで
あるイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を生産するに際し
，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素をクローニングした
エシエリキア・コリを培養することであり，こうして得
られたイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いて効率的
に高純度なＮｐ４Ｎを生産することにある。
る際不可欠なアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の１つで
あるイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を生産するに際し
，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素をクローニングした
エシエリキア・コリを培養することであり，こうして得
られたイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いて効率的
に高純度なＮｐ４Ｎを生産することにある。
【０００９】本発明でいうジアデノシン四リン酸の誘導
体とは，ジアデノシン四リン酸の構造を基本骨格として
有する化合物であって，その構成成分であるアデノシン
三リン酸誘導体からアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の
作用により変換される化合物をいう。このようなジアデ
ノシン四リン酸の誘導体としては，アデニン環のＮ６位
アルキル化，カルボキシアルキル化，ベンゾイル化，カ
ルボキシベンゾイル化誘導体，アデニン環のハロゲン化
誘導体，ヒドロキシ誘導体，デアミノ誘導体，リボース
の２’−デオキシ誘導体，３’−デオキシ誘導体，２’
，３’−ジデオキシ誘導体，デオキシアミノ誘導体，デ
オキシハロ誘導体等があげられ，Ｎ６，Ｎ６−ジカルボ
キシメチルアデノシン四リン酸，Ｎ６，Ｎ６−ジカルボ
キシエチルアデノシン四リン酸，Ｎ６，Ｎ６−（Ｐ−ジ
カルボキシベンゾイル）アデノシン四リン酸，ジ８−ブ
ロムアデノシン四リン酸及びこれらの化合物の２’−デ
オキシ誘導体，３’−デオキシ誘導体，２’，３’−ジ
デオキシ誘導体等が具体例としてあげられる。
体とは，ジアデノシン四リン酸の構造を基本骨格として
有する化合物であって，その構成成分であるアデノシン
三リン酸誘導体からアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の
作用により変換される化合物をいう。このようなジアデ
ノシン四リン酸の誘導体としては，アデニン環のＮ６位
アルキル化，カルボキシアルキル化，ベンゾイル化，カ
ルボキシベンゾイル化誘導体，アデニン環のハロゲン化
誘導体，ヒドロキシ誘導体，デアミノ誘導体，リボース
の２’−デオキシ誘導体，３’−デオキシ誘導体，２’
，３’−ジデオキシ誘導体，デオキシアミノ誘導体，デ
オキシハロ誘導体等があげられ，Ｎ６，Ｎ６−ジカルボ
キシメチルアデノシン四リン酸，Ｎ６，Ｎ６−ジカルボ
キシエチルアデノシン四リン酸，Ｎ６，Ｎ６−（Ｐ−ジ
カルボキシベンゾイル）アデノシン四リン酸，ジ８−ブ
ロムアデノシン四リン酸及びこれらの化合物の２’−デ
オキシ誘導体，３’−デオキシ誘導体，２’，３’−ジ
デオキシ誘導体等が具体例としてあげられる。
【００１０】本発明でいうクローニングしたエシエリキ
ア・コリとしては，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺
伝子をベクターを用いてセルフクローニングしたものが
用いられる。エシエリキア・コリにイソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素遺伝子をセルフクローニングするには，通
常の方法，すなわちＤＮＡ供与体たるエシエリキア・コ
リから得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子を含
むＤＮＡ断片とベクターとを結合させたハイブリツドプ
ラスミドを，宿主たるエシエリキア・コリへ移入する方
法で行うことができる。
ア・コリとしては，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺
伝子をベクターを用いてセルフクローニングしたものが
用いられる。エシエリキア・コリにイソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素遺伝子をセルフクローニングするには，通
常の方法，すなわちＤＮＡ供与体たるエシエリキア・コ
リから得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子を含
むＤＮＡ断片とベクターとを結合させたハイブリツドプ
ラスミドを，宿主たるエシエリキア・コリへ移入する方
法で行うことができる。
【００１１】上述のＤＮＡ供与体たるエシエリキア・コ
リ及び宿主たるエシエリキア・コリはともにいかなるも
のでもよいが，例えばＹ８株，Ｙ１８株，ＪＥ５５０６
株，ＨＢ１０１株，ＪＭ１０９株等が挙げられる。イソ
ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片を
エシエリキア・コリから得るためには，例えばプラスミ
ドｐＨＹ００１，ｐＨＹ１１又はそれらを有するエシエ
リキア・コリより，通常の方法で染色体ＤＮＡを抽出し
，適当な制限酵素，例えば制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩあ
るいはＢａｍＨ１を用いて目的のＤＮＡ断片を切断する
ことにより行うことができる。例えばフエノール法（バ
イオケミカ・エト・バイオフイジカ・アクタ，７２巻，
６１９−６２９頁，１９６３年）の改良法を用いるか，
あるいはメツセンジヤーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を抽出した
後，逆転写酵素によって一本鎖ｃＤＮＡを作成し，さら
に二重鎖ＤＮＡを得た後抽出する方法（モレキユラー・
クローニング，１８７−２４７頁，１９８２年，コール
ド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー発行）などを
用いることができる。
リ及び宿主たるエシエリキア・コリはともにいかなるも
のでもよいが，例えばＹ８株，Ｙ１８株，ＪＥ５５０６
株，ＨＢ１０１株，ＪＭ１０９株等が挙げられる。イソ
ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片を
エシエリキア・コリから得るためには，例えばプラスミ
ドｐＨＹ００１，ｐＨＹ１１又はそれらを有するエシエ
リキア・コリより，通常の方法で染色体ＤＮＡを抽出し
，適当な制限酵素，例えば制限酵素Ｈｉｎｄ ＩＩＩあ
るいはＢａｍＨ１を用いて目的のＤＮＡ断片を切断する
ことにより行うことができる。例えばフエノール法（バ
イオケミカ・エト・バイオフイジカ・アクタ，７２巻，
６１９−６２９頁，１９６３年）の改良法を用いるか，
あるいはメツセンジヤーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を抽出した
後，逆転写酵素によって一本鎖ｃＤＮＡを作成し，さら
に二重鎖ＤＮＡを得た後抽出する方法（モレキユラー・
クローニング，１８７−２４７頁，１９８２年，コール
ド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー発行）などを
用いることができる。
【００１２】ベクターとしては，イソロイシル−ｔＲＮ
Ａ合成酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片を移入される宿主た
るエシエリキア・コリに対応し，宿主中でイソロイシル
−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子を発現せしめるものを適宜選
択すればよい。例えばｐＢＲ型プラスミド，ｐＵＣ型プ
ラスミド，ｐＨＹ型プラスミド，ｐＳＹ型プラスミド，
ｐＫＤ型プラスミド等いづれでもよい。
Ａ合成酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片を移入される宿主た
るエシエリキア・コリに対応し，宿主中でイソロイシル
−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子を発現せしめるものを適宜選
択すればよい。例えばｐＢＲ型プラスミド，ｐＵＣ型プ
ラスミド，ｐＨＹ型プラスミド，ｐＳＹ型プラスミド，
ｐＫＤ型プラスミド等いづれでもよい。
【００１３】ベクターとイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵
素遺伝子を含むＤＮＡ断片との結合は，通常の方法，例
えばＴ４フアージ由来のＤＮＡ連結酵素を用いて結合す
る方法，例えばゲレツトらの方法（プロシーデイング・
オブ・ニユークリエテイツク・アシツド・リサーチ，２
巻，８７５−８８８頁，１９７１年）に従って行うこと
ができる（以下，得られたベクターとイソロイシル−ｔ
ＲＮＡ合成酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片を結合したもの
をハイブリツドプラスミドと呼ぶ。）。ハイブリツドプ
ラスミドの宿主への移入（以下，移入されたものを形質
転換体と呼ぶ）は，公知の方法でよく，例えばカルシウ
ムイオンの存在下で所望の宿主に取り込ませる方法（ジ
ャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，５３巻
，１５９−１６２頁，１９７９年）などにより行える。
素遺伝子を含むＤＮＡ断片との結合は，通常の方法，例
えばＴ４フアージ由来のＤＮＡ連結酵素を用いて結合す
る方法，例えばゲレツトらの方法（プロシーデイング・
オブ・ニユークリエテイツク・アシツド・リサーチ，２
巻，８７５−８８８頁，１９７１年）に従って行うこと
ができる（以下，得られたベクターとイソロイシル−ｔ
ＲＮＡ合成酵素遺伝子を含むＤＮＡ断片を結合したもの
をハイブリツドプラスミドと呼ぶ。）。ハイブリツドプ
ラスミドの宿主への移入（以下，移入されたものを形質
転換体と呼ぶ）は，公知の方法でよく，例えばカルシウ
ムイオンの存在下で所望の宿主に取り込ませる方法（ジ
ャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，５３巻
，１５９−１６２頁，１９７９年）などにより行える。
【００１４】上記のようにして作製された形質転換体，
すなわちイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子をクロ
ーニングしたエシエリキア・コリを培養するには，静置
培養法，通気攪拌培養法，振とう培養法等の通常のエシ
エリキア・コリを培養する方法であればいずれの方法で
もよい。この際用いる培地としては何ら限定されるもの
ではなく，例えば炭素源としてはグルコース，しょ糖，
廃糖蜜等が，窒素源としてはペプトン，カゼイン，コー
ンスティープリカー，肉エキス，酵母エキス等の有機窒
素源や，硫安，塩安，尿素等の無機窒素源を用いること
ができる。また，培地中に無機塩類やビタミン類，抗生
物質等を必要に応じて添加しても良い。培養した菌体を
回収するには遠心分離，ろ過等の通常用いられている方
法によって行うことができる。
すなわちイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子をクロ
ーニングしたエシエリキア・コリを培養するには，静置
培養法，通気攪拌培養法，振とう培養法等の通常のエシ
エリキア・コリを培養する方法であればいずれの方法で
もよい。この際用いる培地としては何ら限定されるもの
ではなく，例えば炭素源としてはグルコース，しょ糖，
廃糖蜜等が，窒素源としてはペプトン，カゼイン，コー
ンスティープリカー，肉エキス，酵母エキス等の有機窒
素源や，硫安，塩安，尿素等の無機窒素源を用いること
ができる。また，培地中に無機塩類やビタミン類，抗生
物質等を必要に応じて添加しても良い。培養した菌体を
回収するには遠心分離，ろ過等の通常用いられている方
法によって行うことができる。
【００１５】本発明で用いられる抽出物は， イソロイ
シル−ｔＲＮＡ合成酵素を含んでいることが必要である
。 上記のようにして得られた培養物から抽出物を得るには
，通常の方法に従い細胞膜破砕を行った後，ろ過や遠心
分離等を行えばよい。細胞膜破砕の方法としては，圧破
砕機や超音波破砕機，ダイノミル（商標名）等を用いる
方法や，リゾチーム，トリトン等を添加する方法等が挙
げられる。こうして得られる抽出物そのままでも本発明
に用いられることができるが， さらに塩析，カラムク
ロマトグラフィー等の通常行われている方法によって精
製されたイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いること
が望ましい。
シル−ｔＲＮＡ合成酵素を含んでいることが必要である
。 上記のようにして得られた培養物から抽出物を得るには
，通常の方法に従い細胞膜破砕を行った後，ろ過や遠心
分離等を行えばよい。細胞膜破砕の方法としては，圧破
砕機や超音波破砕機，ダイノミル（商標名）等を用いる
方法や，リゾチーム，トリトン等を添加する方法等が挙
げられる。こうして得られる抽出物そのままでも本発明
に用いられることができるが， さらに塩析，カラムク
ロマトグラフィー等の通常行われている方法によって精
製されたイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いること
が望ましい。
【００１６】本発明でＮｐ４Ｎを製造するには，例えば
，同一の反応器の中にＮＴＰ，アミノ酸，イソロイシル
−ｔＲＮＡ合成酵素を共存させて反応させればよい。 このときに用いられる反応器としては，反応をスムーズ
に進行させうるものであればいかなるものでもよく，各
々の酵素量，基質液の濃度，ｐＨおよび供給速度，反応
温度等によって反応器の大きさおよび形状を選定すれば
よい。その反応器の形状としては，例えば，膜型の反応
器，カラム型反応器を使用することができる。この中で
も膜型反応器は，反応生成物が低分子であるので，特に
有効に使用できる。この際，酵素は高分子物質であるの
で，各酵素はそのまま反応器の中にとどまった状態で使
用することができる。
，同一の反応器の中にＮＴＰ，アミノ酸，イソロイシル
−ｔＲＮＡ合成酵素を共存させて反応させればよい。 このときに用いられる反応器としては，反応をスムーズ
に進行させうるものであればいかなるものでもよく，各
々の酵素量，基質液の濃度，ｐＨおよび供給速度，反応
温度等によって反応器の大きさおよび形状を選定すれば
よい。その反応器の形状としては，例えば，膜型の反応
器，カラム型反応器を使用することができる。この中で
も膜型反応器は，反応生成物が低分子であるので，特に
有効に使用できる。この際，酵素は高分子物質であるの
で，各酵素はそのまま反応器の中にとどまった状態で使
用することができる。
【００１７】また，カラム型反応器の場合には，使用す
る酵素を適当な担体，例えば，セルロース，デキストラ
ン，アガロース等のような多糖類の誘導体，ポリスチレ
ン，エチレン−マレイン酸共重合体，架橋ポリアクリル
アミド等のようなビニルポリマーの誘導体，Ｌ−アラニ
ン，Ｌ−グルタミン酸共重合体，ポリアスパラギン酸等
のようなポリアミノ酸またはアミドの誘導体，ガラス，
アルミナ，ヒドロキシアパタイト等のような無機物の誘
導体等に結合，包括あるいは吸着させて，いわゆる固定
化酵素としてカラムに充填して使用すればよい。
る酵素を適当な担体，例えば，セルロース，デキストラ
ン，アガロース等のような多糖類の誘導体，ポリスチレ
ン，エチレン−マレイン酸共重合体，架橋ポリアクリル
アミド等のようなビニルポリマーの誘導体，Ｌ−アラニ
ン，Ｌ−グルタミン酸共重合体，ポリアスパラギン酸等
のようなポリアミノ酸またはアミドの誘導体，ガラス，
アルミナ，ヒドロキシアパタイト等のような無機物の誘
導体等に結合，包括あるいは吸着させて，いわゆる固定
化酵素としてカラムに充填して使用すればよい。
【００１８】上述の反応器は，連続的に操作することを
前提として説明したものであるが，このような思想に基
づいて他の反応器を用いることもできるし，場合によっ
ては，バツチ式の反応器を使用して，バツチ式に操作し
て反応させることもできる。
前提として説明したものであるが，このような思想に基
づいて他の反応器を用いることもできるし，場合によっ
ては，バツチ式の反応器を使用して，バツチ式に操作し
て反応させることもできる。
【００１９】次に，バツチ式の反応器でＮｐ４Ｎを製造
する場合を例にとり，反応条件について説明すると，Ｎ
ＴＰは１０μＭ以上，特に１ｍＭ以上，さらに１０ｍＭ
以上，アミノ酸は１μＭ以上，特に１０μＭ以上，さら
に０．１ｍＭ以上，アセチルリン酸はＮＴＰの濃度に対
して１０ないし１／１０２当量，特に２ないし１／１０
当量，さらに１ないし１／２当量の濃度で添加するのが
望ましく，その添加方法は特に限定されるものではなく
，反応スタート時に一括して添加してもよいし，分割し
て添加してもよい。また，反応をスムーズに進めるため
に，ピロホスフアターゼを添加したり，マグネシウムイ
オン，マンガンイオン，カルシウムイオン，コバルトイ
オン，カドミウムイオン等の金属イオンを添加すること
もできる。反応のｐＨとしては，概ね中性付近，すなわ
ちｐＨ５〜１１，好ましくはｐＨ６〜８の範囲が使用さ
れ，緩衝液で調整することができる。この緩衝液として
は，これらのｐＨに適した通常のものを使用することが
できる。また，反応の温度としては，酵素の失活が起こ
らず，反応がスムーズに進行する範囲であれば特に限定
されるものではないが，２０℃から５０℃の範囲が好ま
しい。
する場合を例にとり，反応条件について説明すると，Ｎ
ＴＰは１０μＭ以上，特に１ｍＭ以上，さらに１０ｍＭ
以上，アミノ酸は１μＭ以上，特に１０μＭ以上，さら
に０．１ｍＭ以上，アセチルリン酸はＮＴＰの濃度に対
して１０ないし１／１０２当量，特に２ないし１／１０
当量，さらに１ないし１／２当量の濃度で添加するのが
望ましく，その添加方法は特に限定されるものではなく
，反応スタート時に一括して添加してもよいし，分割し
て添加してもよい。また，反応をスムーズに進めるため
に，ピロホスフアターゼを添加したり，マグネシウムイ
オン，マンガンイオン，カルシウムイオン，コバルトイ
オン，カドミウムイオン等の金属イオンを添加すること
もできる。反応のｐＨとしては，概ね中性付近，すなわ
ちｐＨ５〜１１，好ましくはｐＨ６〜８の範囲が使用さ
れ，緩衝液で調整することができる。この緩衝液として
は，これらのｐＨに適した通常のものを使用することが
できる。また，反応の温度としては，酵素の失活が起こ
らず，反応がスムーズに進行する範囲であれば特に限定
されるものではないが，２０℃から５０℃の範囲が好ま
しい。
【００２０】このようにした反応生成物をイオン交換ク
ロマトグラフイー等一般に広く用いられている方法で精
製して，Ｎｐ４Ｎを単離すればよい。
ロマトグラフイー等一般に広く用いられている方法で精
製して，Ｎｐ４Ｎを単離すればよい。
【００２１】
【実施例】次に，本発明を実施例により具体的に説明す
る。尚，各実施例で得られたＡｐ４ＡのＡＤＰ誘発血小
板凝集に対する作用は以下の方法で調べた。無麻酔ウサ
ギ頸動脈から３．８％クエン酸ナトリウム含有容器に９
：１の割合になるように採血した血液を，１１００ｒｐ
ｍで１５分間遠心し，上層を多血小板血漿（ＰＲＰ）と
した。血小板凝集測定装置を用い，ＰＲＰ２００μｌ
にＡｐ４Ａ溶液１０μｌ を加えて３７℃で１０分間イ
ンキユベーシヨンした後，０．１ｍＭＡＤＰ溶液１０μ
ｌ を添加して，惹起した血小板凝集を測定した。
る。尚，各実施例で得られたＡｐ４ＡのＡＤＰ誘発血小
板凝集に対する作用は以下の方法で調べた。無麻酔ウサ
ギ頸動脈から３．８％クエン酸ナトリウム含有容器に９
：１の割合になるように採血した血液を，１１００ｒｐ
ｍで１５分間遠心し，上層を多血小板血漿（ＰＲＰ）と
した。血小板凝集測定装置を用い，ＰＲＰ２００μｌ
にＡｐ４Ａ溶液１０μｌ を加えて３７℃で１０分間イ
ンキユベーシヨンした後，０．１ｍＭＡＤＰ溶液１０μ
ｌ を添加して，惹起した血小板凝集を測定した。
【００２２】実施例１
エシエリシア・コリＪＥ５５０６−ｐｋＤ１５（Ｆ’，
ｐｐｓ， ｈｉｓ，ｐｒｏＡ， ｔｈｉ，ｇａｌ，
ｌａｃ， ｘｙｌ， ｍｔｌ， ａｒｇＥ， ｔｓｘ）
（微工研菌寄第１１９５０号）の菌体５ｇを，５倍量の
２ｍＭメルカプトエタノールおよび２ｍＭエチレンジア
ミン四酢酸ナトリウムを含む２５ｍＭリン酸−カリウム
緩衝液に懸濁し，ソニケータを用いて細胞を破砕した後
，遠心分離により不溶物を除去し，イソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得た。ＤＥＡＥ−セフア
ロース（フアルマシア社製）を充填したカラムに上記の
粗抽出液を通し，塩化カリウムを上記緩衝液で溶出せし
めると，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素が溶出した。 この区分を集め，濃縮，脱塩を行った結果，１９キロユ
ニツト／ｍｌ のイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含
む粗酵素液１．８５ｍｌ を得た。上記操作をすべて４
℃で行った。
ｐｐｓ， ｈｉｓ，ｐｒｏＡ， ｔｈｉ，ｇａｌ，
ｌａｃ， ｘｙｌ， ｍｔｌ， ａｒｇＥ， ｔｓｘ）
（微工研菌寄第１１９５０号）の菌体５ｇを，５倍量の
２ｍＭメルカプトエタノールおよび２ｍＭエチレンジア
ミン四酢酸ナトリウムを含む２５ｍＭリン酸−カリウム
緩衝液に懸濁し，ソニケータを用いて細胞を破砕した後
，遠心分離により不溶物を除去し，イソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得た。ＤＥＡＥ−セフア
ロース（フアルマシア社製）を充填したカラムに上記の
粗抽出液を通し，塩化カリウムを上記緩衝液で溶出せし
めると，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素が溶出した。 この区分を集め，濃縮，脱塩を行った結果，１９キロユ
ニツト／ｍｌ のイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含
む粗酵素液１．８５ｍｌ を得た。上記操作をすべて４
℃で行った。
【００２３】こうして得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成
酵素を用いて，バツチ法でＡｐ４Ａの合成を行った。こ
のとき，ＡＴＰ１５ｍＭ，イソロイシン５ｍＭ，塩化マ
グネシウム３０ｍＭ，塩化亜鉛０．５ｍＭ，ピロフオス
フアターゼ（ベーリンガーマンハイム社製）０．７１ユ
ニツト／ｍｌ ，酢酸キナーゼ（ユニチカ社製）０．０
０４ユニツト／ｍｌ ，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵
素７８３ユニツト／ｍｌ ，イミダゾール緩衝液（ｐＨ
７．５）１００ｍＭからなる反応溶液に，アセチルリン
酸を反応開始時に１ｌ 当たり３．１ｍｍｏｌ 添加し
，１時間毎に１ｌ 当たり３．１ｍｍｏｌ 追加しなが
ら，４０℃で６時間反応させた。反応開始時の反応液の
量は１ｍｌ であった。得られた反応生成物を，ノバパ
ツクＣ１８（ウオーターズ社製）カラムを用いて高速液
体クロマトグラフイーで分析したところ，３．０ｍＭの
Ａｐ４Ａが生成していた。反応生成物がＡｐ４Ａである
ことをリン核磁気共鳴スペクトルにより同定した。故に
，もとのエシエリシア・コリの菌体１ｇよりＡｐ４Ａが
２５ｇ合成された。
酵素を用いて，バツチ法でＡｐ４Ａの合成を行った。こ
のとき，ＡＴＰ１５ｍＭ，イソロイシン５ｍＭ，塩化マ
グネシウム３０ｍＭ，塩化亜鉛０．５ｍＭ，ピロフオス
フアターゼ（ベーリンガーマンハイム社製）０．７１ユ
ニツト／ｍｌ ，酢酸キナーゼ（ユニチカ社製）０．０
０４ユニツト／ｍｌ ，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵
素７８３ユニツト／ｍｌ ，イミダゾール緩衝液（ｐＨ
７．５）１００ｍＭからなる反応溶液に，アセチルリン
酸を反応開始時に１ｌ 当たり３．１ｍｍｏｌ 添加し
，１時間毎に１ｌ 当たり３．１ｍｍｏｌ 追加しなが
ら，４０℃で６時間反応させた。反応開始時の反応液の
量は１ｍｌ であった。得られた反応生成物を，ノバパ
ツクＣ１８（ウオーターズ社製）カラムを用いて高速液
体クロマトグラフイーで分析したところ，３．０ｍＭの
Ａｐ４Ａが生成していた。反応生成物がＡｐ４Ａである
ことをリン核磁気共鳴スペクトルにより同定した。故に
，もとのエシエリシア・コリの菌体１ｇよりＡｐ４Ａが
２５ｇ合成された。
【００２４】ここで得られたＡｐ４Ａの抗血小板凝集作
用を前記の方法で調べたところ，Ａｐ４Ａは濃度依存的
に抗血小板凝集作用を示し，対照と比べて３×１０−４
Ｍのとき７６％ＡＤＰ誘発血小板凝集を抑制した。
用を前記の方法で調べたところ，Ａｐ４Ａは濃度依存的
に抗血小板凝集作用を示し，対照と比べて３×１０−４
Ｍのとき７６％ＡＤＰ誘発血小板凝集を抑制した。
【００２５】比較例１
バチルス・ステアロサーモフイルスＵＫ７８８（微工研
菌寄第５１４１号）の菌体９０ｋｇを２倍量の１００ｍ
Ｍトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）に懸濁し，ダイノ
ミルを用いて細胞を破砕した後，遠心分離により不溶物
を除去し，ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液
を得た。予め５ｍＭメルカプトエタノール，２ｍＭエチ
レンジアミン四酢酸ナトリウムおよび０．１ｍＭホスホ
フエニルスルホニルフルオリドを含む５０ｍＭトリス緩
衝液（ｐＨ７．５）で平衡化したマトレツクスゲルブル
−Ａ（アミコン社製）を充填したカラムに上記の粗抽出
液を通し，塩化カリウムを上記緩衝液に加えた溶液で溶
出せしめると，ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素が溶出した
。この区分を集め，濃縮，脱塩を行った結果，９３．６
キロユニツト／ｍｌ のロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を
含む粗酵素液１０１ｍｌ を得た。上記操作をすべて４
℃で行った。
菌寄第５１４１号）の菌体９０ｋｇを２倍量の１００ｍ
Ｍトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）に懸濁し，ダイノ
ミルを用いて細胞を破砕した後，遠心分離により不溶物
を除去し，ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液
を得た。予め５ｍＭメルカプトエタノール，２ｍＭエチ
レンジアミン四酢酸ナトリウムおよび０．１ｍＭホスホ
フエニルスルホニルフルオリドを含む５０ｍＭトリス緩
衝液（ｐＨ７．５）で平衡化したマトレツクスゲルブル
−Ａ（アミコン社製）を充填したカラムに上記の粗抽出
液を通し，塩化カリウムを上記緩衝液に加えた溶液で溶
出せしめると，ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素が溶出した
。この区分を集め，濃縮，脱塩を行った結果，９３．６
キロユニツト／ｍｌ のロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を
含む粗酵素液１０１ｍｌ を得た。上記操作をすべて４
℃で行った。
【００２６】こうして得たロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素
を用いて，バツチ法でＡｐ４Ａの合成を行った。イソロ
イシンに代わりロイシンを，イソロイシル−ｔＲＮＡ合
成酵素に代わりロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素８９３ユニ
ツト／ｍｌ を用いた以外は，実施例１と同様にして反
応させ，分析を行った結果，０．９ｍＭのＡｐ４Ａが生
成していた。故に，もとのバチルス・ステアロサーモフ
イルスの菌体１ｇよりＡｐ４Ａが９９ｍｇ合成された。
を用いて，バツチ法でＡｐ４Ａの合成を行った。イソロ
イシンに代わりロイシンを，イソロイシル−ｔＲＮＡ合
成酵素に代わりロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素８９３ユニ
ツト／ｍｌ を用いた以外は，実施例１と同様にして反
応させ，分析を行った結果，０．９ｍＭのＡｐ４Ａが生
成していた。故に，もとのバチルス・ステアロサーモフ
イルスの菌体１ｇよりＡｐ４Ａが９９ｍｇ合成された。
【００２７】ここで得られたＡｐ４Ａの抗血小板凝集作
用を前記の方法で調べたところ，対照と比べて３×１０
−４Ｍのとき１０％ＡＤＰ誘発血小板凝集を抑制した。
用を前記の方法で調べたところ，対照と比べて３×１０
−４Ｍのとき１０％ＡＤＰ誘発血小板凝集を抑制した。
【００２８】実施例２
ｐＵＣ１９プラスミドにイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵
素をクローニングしたベクターを導入したエシエリキア
・コリＣ６００株（Ｆ−， ｔｈｉ−１， ｔｈｒ−１
， ｌｅｕＢ６， ｌａｃＹ１， ｔｏｎＡ２１， ｓ
ｕｐＥ４４， λ−）の菌体３ｇを実施例１同様に処理
して，１２キロユニツト／ｍｌ のイソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗酵素液２．１ｍｌ を得た。こう
して得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いて，バ
ツチ法でＡｐ４Ａの合成を行った。
素をクローニングしたベクターを導入したエシエリキア
・コリＣ６００株（Ｆ−， ｔｈｉ−１， ｔｈｒ−１
， ｌｅｕＢ６， ｌａｃＹ１， ｔｏｎＡ２１， ｓ
ｕｐＥ４４， λ−）の菌体３ｇを実施例１同様に処理
して，１２キロユニツト／ｍｌ のイソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗酵素液２．１ｍｌ を得た。こう
して得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いて，バ
ツチ法でＡｐ４Ａの合成を行った。
【００２９】イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素８６２ユ
ニツト／ｍｌ を用いた以外は，実施例１と同様にして
反応させ，分析を行った結果，２．８ｍＭのＡｐ４Ａが
生成していた。故に，もとのエシエリキア・コリの菌体
１ｇよりＡｐ４Ａが２２．８ｇ合成された。
ニツト／ｍｌ を用いた以外は，実施例１と同様にして
反応させ，分析を行った結果，２．８ｍＭのＡｐ４Ａが
生成していた。故に，もとのエシエリキア・コリの菌体
１ｇよりＡｐ４Ａが２２．８ｇ合成された。
【００３０】ここで得られたＡｐ４Ａの抗血小板凝集作
用を前記の方法で調べたところ，対照と比べて３×１０
−４Ｍのとき７２％ＡＤＰ誘発血小板凝集を抑制した。
用を前記の方法で調べたところ，対照と比べて３×１０
−４Ｍのとき７２％ＡＤＰ誘発血小板凝集を抑制した。
【００３１】実施例３
ｐＢＲ３２２プラスミドにイソロイシル−ｔＲＮＡ合成
酵素をクローニングしたベクターを導入したエシエリキ
ア・コリＣ６００株の菌体１．３ｇを実施例１同様に処
理して，８キロユニツト／ｍｌ のイソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗酵素液１．２５ｍｌ を得た。こ
うして得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いて，
バツチ式でＡｐ４Ａの合成を行った。
酵素をクローニングしたベクターを導入したエシエリキ
ア・コリＣ６００株の菌体１．３ｇを実施例１同様に処
理して，８キロユニツト／ｍｌ のイソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗酵素液１．２５ｍｌ を得た。こ
うして得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いて，
バツチ式でＡｐ４Ａの合成を行った。
【００３２】イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素６３３ユ
ニツト／ｍｌ を用いた以外は，実施例１と同様にして
反応させ，分析を行った結果，１．９ｍＭのＡｐ４Ａが
生成していた。故に，もとのエシエリキア／ コリの菌
体１ｇよりＡｐ４Ａが１９．３ｇ合成された。
ニツト／ｍｌ を用いた以外は，実施例１と同様にして
反応させ，分析を行った結果，１．９ｍＭのＡｐ４Ａが
生成していた。故に，もとのエシエリキア／ コリの菌
体１ｇよりＡｐ４Ａが１９．３ｇ合成された。
【００３３】ここで得られたＡｐ４Ａの抗血小板凝集作
用を前記の方法で調べたところ，対照と比べて３×１０
−４Ｍのとき６９％ＡＤＰ誘発血小板凝集を抑制した。
用を前記の方法で調べたところ，対照と比べて３×１０
−４Ｍのとき６９％ＡＤＰ誘発血小板凝集を抑制した。
【００３４】
【発明の効果】本発明の方法によれば，天然に存在する
菌体から抽出する場合に比べ，同一菌体量からより多く
のＮｐ４Ｎが合成できるので， 大量の菌体を培養した
り処理したりせずにＮｐ４Ｎを合成することができる。 さらに反応終了時の反応液中に存在するＮＴＰ等の不純
物の含有量が少ないので，より容易に高純度のＮｐ４Ｎ
を製造することができる。
菌体から抽出する場合に比べ，同一菌体量からより多く
のＮｐ４Ｎが合成できるので， 大量の菌体を培養した
り処理したりせずにＮｐ４Ｎを合成することができる。 さらに反応終了時の反応液中に存在するＮＴＰ等の不純
物の含有量が少ないので，より容易に高純度のＮｐ４Ｎ
を製造することができる。
Claims (1)
- 【請求項１】 ジアデノシン四リン酸又はその誘導体
を製造するに際し，イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素遺
伝子をクローニングしたエシエリキア・コリの培養物よ
り得られる抽出物を共存させることを特徴とするジアデ
ノシン四リン酸又はその誘導体の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3033649A JPH04248990A (ja) | 1991-02-01 | 1991-02-01 | ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3033649A JPH04248990A (ja) | 1991-02-01 | 1991-02-01 | ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04248990A true JPH04248990A (ja) | 1992-09-04 |
Family
ID=12392298
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3033649A Pending JPH04248990A (ja) | 1991-02-01 | 1991-02-01 | ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04248990A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103096911A (zh) * | 2010-04-27 | 2013-05-08 | Atyr医药公司 | 与异亮氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现 |
-
1991
- 1991-02-01 JP JP3033649A patent/JPH04248990A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103096911A (zh) * | 2010-04-27 | 2013-05-08 | Atyr医药公司 | 与异亮氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现 |
| US8961960B2 (en) | 2010-04-27 | 2015-02-24 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl tRNA synthetases |
| US9528103B2 (en) | 2010-04-27 | 2016-12-27 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl tRNA synthetases |
| US9896515B2 (en) | 2010-04-27 | 2018-02-20 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl tRNA synthetases |
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