JPH07506374A - う蝕予防用合成ペプチドワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒトにおけろう蝕の始まりはミュータンス連鎖球菌（ｍｕｔａｎｓ　５ｔｒｅｐ ｔｏｃｏｃｃｉ　）の関わりが指摘されている。これらの生物が歯の表面に蓄積 してコロニーを形成する能力はショ糖からのグルカン合成と関係づけられている 。これらのグルカンは、構成的に分泌されるグルコシルトランスフェラーゼ（６ 分として使える可能性があると考えられている。動物モデルおよびヒトにおける 実験で、この可能性が支持されている。

たとえば、ミュータンス連鎖球菌種Ｓ、　５ｏｂｒｉｎｕｓとＳ、　ｍｕｔａｎ Ｓのグルコシルトランスフェラーゼは、数種のミュータンス連鎖球菌の感染によ って引き起こされる実験う蝕を予防する免疫応答を誘導することが示されている ［タウブマンとスミス（Ｔａｕｂｍａｎ　ａｎｄ　Ｓｍ１ｔｈ　）　、Ｊ、　［ ｍｍｕｎｏｌ、　１１８ニア１０　（１９７８）　；スミスとタウブマン（Ｓｍ ｉｔｈ　ａｎｄ　Ｔａｕｂｍａｎ　）　、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ 、　２１＋８４３　（１９７８）　］　、グルコシルトランスフェラーゼをヒト に経口および／または局所投与すると、内在性ミュータンス連鎖球菌の口腔内再 蓄積能力が有意に低下することも示されている［スミスとタウブマン（Ｓｍｉｔ ｈ　ａｎｄ　Ｔａｕｂｍａｎ　）、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、５５：２ ５６２　（１９８７）；　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１０：２７３　（ ＋９９０）］。ＧＴＦを主成分とするワクチンの試験的使用の成功例では、粘膜 抗体（主にｒｇＡ）だけ、または粘膜抗体と全身抗体（ＩｇＧ）の両者が出現し ているが、無傷のワクチンを主成分とするワクチンは、不適当なエピトープが存 在したり、適当な免疫原性を有しない分子が過剰に存在するなど様々な欠点があ る。

発明の概要 本発明は、う蝕形成に関わる酵素グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）に対 する哺乳類の免疫系応答を惹起するワクチン組成物に関する。無傷のＧＴＦを免 疫剤（ｉｍｍｕｎｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）として使用するのではなく、ＧＴＦの 特定の免疫原性部分から調製したワクチンが望ましい。これらのワクチン組成物 は、投与対象となる哺乳類において免疫応答を引き起こすのに十分な長さを存す る、グルコシルトランスフェラーゼの少なくとも１つのアミノ酸配列から本質的 になるペプチドからなる。本発明の好ましい態様においては、免疫応答を引き起 こすために使用される単数または複数のアミノ酸配列は、グルコシルトランスフ ェラーゼの触媒ドメイン、グルコシルトランスフェラーゼのグルカン結合ドメイ ン、グルコシルトランスフェラーゼのネイティブ表面ドメイン（ｎａｔｉｖｅ　 ５ｕｒｆａｃｅ　ｄｏｍａｉｎ　）　、またはこれらのグルコシルトランスフェ ラーゼドメインを組み合わせたものに由来するアミノ酸配列（ａｍｉｎｏ　ａｎ ｄ　５ｅｑｕｅｎｃｅ）の全体または一部からなる。本発明のとくに好ましい態 様においては、上記アミノ酸配列は、触媒Ｆ’Ｊイ：／（７）ＤＡＮＦＤＳ　Ｉ ＲＶＤＡＶＤＮＶＤＡＤＬＬＱＩ（配列番号：１）またＩ；！ＰＬＤＫＲＳＧＬ ＮＰＬ　ＩＨＮＳＬＶＤＲＥＶＤＤＲＥ　（配列番号・２）、グルカン結合ドメ イ：／（７）ＴＧＡＱＴ　ＩＫＧＱＫＬＹＦＫＡＮＧＱＱＶＫＧ　（配列番号、 ３）またはＤＧＫＬＲＹＹＤＡＮＳＧＤＱＡＦＮＫＳＶ（配列番号、４）、ネイ ティブグルコシルトランスフェラーゼ表面ドメインのＱＷＮＧＥＳＥＫＰＹＤＤ ＨＬ　（配列番号：５）、またはこれらの配列を組み合わせたものである。１つ の態様においては、ワクチン組成物は、グルコシルトランスフェラーゼの触媒ド メインのアミノ酸配列とグルコシルトランスフェラーゼのグルカン結合ドメイン のアミノ酸配列の両者からなり、それぞれのものは投与対象となる哺乳類におい て免疫応答を引き起こすのに十分な長さを有する。特定の態様においては、グル コシルトランスフェラーゼの少なくとも２つのペプチドがあって、そしてペプチ ジルコアマトリックス（ｐｅｐｔｉｄｙｌ　ｃｏｒｅ　ｍａｔｒｉｘ）上に配置 されており、各ペプチドは免疫応答を引き起こすのに十分な長さを有するグルコ シルトランスフェラーゼのアミノ酸配列からなる。別の態様においては、グルコ シルトランスフェラーゼの少なくとも２つのペプチドと、グルコシルトランスフ ェラーゼのアミノ酸配列以外のアミノ酸配列からなる付加的免疫成分とがペプチ ジルコアマトリックス上に存在する。本発明のワクチン組成物に使用されるグル コシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列は、グルコシルトランスフェラーゼの 酵素活性またはグルカン結合活性の阻害をもたらして、Ｓ、　ｍｕｔａｎｓ株の コロニー形成や蓄積を低下させるとともに、組成物の投与対象となる哺乳類にお けろう蝕を防止する免疫を作り出す抗体と免疫原認識Ｔ細胞の両者の産生を惹起 する。したがって、本発明は、ペプチドの投与対象である哺乳類において免疫応 答を惹起するのに十分な長さのグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列か らなるペプチドをその哺乳類に投与することによって、哺乳類におけるグルコシ ルトランスフェラーゼに対する免疫応答を惹起する方法にも関する。特定の態様 においては、この免疫応答惹起方法は、グルコシルトランスフェラーゼの酵素活 性またはグルカン結合活性の阻害に関わっている。したがって、本発明は、ワク チン投与対象となる哺乳類におけろう蝕の予防または進行抑制に有用なワクチン を提供するものである。

合成ペプチドで製造したう蝕ワクチンの開発は、い（つかの利点がある。それぞ れのペプチドがグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列から本質的になる ２種類以上のペプチドを含むワクチン組成物を使用すれば、抗原認識と保護免疫 応答に必要なＧＴＦエピトープ濃度が最大となる多成分ワクチンを製造すること ができる。ＧＴＦを主成分とする合成ワクチンにおいて存用な配列の例としては 、重要なＧＴＦ酵素機能に対応するエピトープなどが挙げられる。抑制的な免疫 応答を引き起こしたり宿主成分と交差反応を示すような不適当なグルコシルトラ ンスフェラーゼのエピトープは含まれない。最終的には、合成ペプチド技術によ って、公知の有効なＴ細胞エピトープとアジュバント性を強化する配列とを、保 護応答を惹起するエピトープと組み合わせることが可能になる。この技術を拡大 して、数種のワクチン抗原に由来する適当なエピトープを１つの合成巨大分子に 含めることによって、多価ワクチンを製造することができる。

図は、免疫化に使用した４価抗原ペプチド構造物の概略図である。

発明の詳細な説明 う蝕は感染症であり、ミュータンス連鎖球菌が主な病原体である。これらの口内 病原体は幼少期に口腔に感染し、生涯にわたり宿主の歯に定着するのが普通であ る。ミュータンス連鎖球菌がエナメル質を溶かすには、十分な数の菌体が歯の表 面にコロニーを形成し、蓄積しなければならない。ミュータンス連鎖球菌が最初 に歯の表面にコロニーを形成した後、ショ糖からグルカンへの合成を触媒する酵 素、グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）を産生する。また、Ｓ、　ｍｕｔ ａｎｓはグルカン結合部位として作用する細胞表面タンパク質を発現する。グル カンは、歯の表面におけるミュータンス連鎖球菌のその後の蓄積を媒介する。そ の結果、プラーク中のう触性細菌の数が増える。蓄積した細菌塊が様々な糖類を 代謝することで、歯の表面付近に十分な量があると脱ミネラル化を引き起こす乳 酸が代謝物として大量に排泄される。その結果、ついにう蝕病変ができる。

本発明のワクチン組成物は、投与対象となる哺乳類においてグルコシルトランス フェラーゼに対する免疫応答を引き起こしてう蝕過程を遮断するのに十分な長さ を有する、グルコシルトランスフェラーゼの少なくとも一つのアミノ酸配列から 本質的になるペプチドからなる。ミュータンス連鎖球菌のグルコシルトランスフ ェラーゼは、う蝕に対する合成ワクチン技術の適用にとくに適している。ＤＮＡ の研究で、数種のミュータンス連鎖球菌ＧＴＦの一次配列が推定されている［フ エレッティーら（Ｐｅｒｒｅｔｔｉ、　Ｊ、Ｊ、、　ｅｔ　ａｌ、）　、Ｉｎｆ ｅｃｔ、　ｔｏ＋ｍ、、　５６：ｌ５８５−１５８８　（１９８８）　；ラッセ ルら（Ｒｕ５ｓｅｌｌ、　Ｒ，Ｒ，Ｂ、　。

ｅｔ　ａｌ、　）　、Ｊ、　Ｄｅｎｔａｌ　Ｒｅｓ、、　６７：５４３−５４７ 　（１９８８）　；ウオダら（Ｕｏｄａ、　Ｓ、、　ｅｔ　ａｌ、）　、　Ｇｅ ｎｅ、　６９：１１０１−１１０９　（１９８８）　］。

これらのＤＮＡ研究で、Ｂ細胞またはＴ細胞エピトープと関連する特徴を予測す るアルゴリズムの適用が可能となる。ガルニエら（Ｇａｒｎｉｅｒ、　Ｊ、、　 ｅｔ　ａｌ、　）　、Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、、　１２０：９７−１２０　 （１９７８）　；ホップら（Ｈｏｐｐ、　Ｔ、Ｐ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、Ｐｒ ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　７８　（１９８１）　；　ｏス バルドら（Ｒｏｔｈｂａｒｄ、　Ｊ。

Ｂ、、　ｅｔ　ａｌ、）　、　ＥＭＢｏ、　７：９３−１００　（１９８８）　 、　ＧＴＦは大型の分子であるが、触媒部位とグルカン結合部位を含む少数の異 なる部位により機能する。ごく最近、これらの部位を仮定的に含む一次配列が同 定された。モーサーら（Ｍｏｏｓｅｒ、　Ｇ、、　ｅｔ　ａｌ、）　、Ｊ、　Ｄ ｅｎｔａｌ　Ｒｅｓ、、　６９：３２５　（１９９０）　；ラッセルら（Ｒｕ５ ｓｅｌｆ、　Ｒ，Ｒ，Ｂ、、　ｅｔ　ａｌ、　）　、Ｊ、　Ｄｅｎｔａｌ　Ｒｅ ｓ、、　６７：５４３−５４７　（１９８８）。これにより、グルコシルトラン スフェラーゼ機能を阻害するＴ細胞とＢ細胞の産生を惹起するエピトープを含む う蝕ワクチン製造のための合成ペプチドを設計することができる。

本発明のワクチン組成物の１つの態様においては、免疫応答惹起に使用するグル コシルトランスフェラーゼの少なくとも１つのアミノ酸配列からなるペプチドは 、グルコシルトランスフェラーゼ分子の機能と関連するグルコシルトランスフェ ラーゼアミノ酸配列の少なくとも１つを含む。したがって、このペプチドは、Ｇ ＴＦの触媒ドメインのアミノ酸配列の全体または一部、またはグルカン結合ドメ インのアミノ酸配列の全体または一部のうちの少なくとも１つのアミノ酸配列か らなる。特定の態様においては、ＧＴＦの触媒ドメインのアミノ酸配列ＤＡＮＦ ＤＳ　ＴＲＶＤＡＶＤＮＶＤＡＤＬＬＱｌ（配列番号・１）またはＰＬＤＫＲ３ ＧＬＮＰＬ　ＩＨＮｓＬＶＤＲＥＶＤＤＲＥ　（配列番号＝２）またはＧＴＦ（ ７）グルカン結合ドメインのアミノ酸配列ＴＧＡＱＴ　Ｉ　ＫＧＱＫＬＹＦＫＡ ＮＧＱＱＶＫＧ　（配列番号　３）またはＤＧＫＬＲＹＹＤＡＮＳＧＤＱＡＦＮ ＫＳＶ　（配列番号、４）を使用することができる。ＧＴＦの触媒ドメインのア ミノ酸配列（ＣＡＴ−ｐｅｐ）とＧＴＦのグルカン結合ドメインのアミノ酸配列 （ＧＬＵａ−ｐ　ｅ　ｐ）からなるペプチドを含有する合成ワクチンの設計につ いて、実施例１で説明する。特定の態様においては、グルコツルトランスフェラ ーゼの触媒ドメインの全体または一部のアミノ酸配列とグルコシルトランスフェ ラーゼのグルカン結合ドメインの全体または一部のアミノ酸配列の両者が存在す る。グルコシルトランスフェラーゼの各アミノ酸配列は、ワクチン組成物投与対 象の哺乳類において免疫応答を引き起こすのに十分な長さのものである。別の態 様においては、グルコシルトランスフェラーゼの少なくとも１つのアミノ酸配列 からなるペプチドは、グルコシルトランスフェラーゼのネイティブ表面ドメイン 上に存在するアミノ酸配列の全体または一部からなる。特定の態様においては、 グミノ酸配列ＱＷＮＧＥＳＥＫＰＹＤＤＨＬ　（配列番号＝５）を使用すること ができる。

当業者であれば、通常の実験方法を用いて、本発明のワクチン組成物中の免疫成 分として使用することができるグルコシルトランスフェラーゼのその他のアミノ 酸配列を決定することができるであろう。

本発明のワクチン組成物は、ＧＴＦの少なくとも１つのアミノ酸配列からなる１ つのペプチドを含存しつるが、本発明のワクチン組成物の好ましい態様は、それ ぞれ免疫応答を引き起こすのに十分な長さを有するＧＴＦのアミノ酸配列を含有 する少なくとも２つのペプチドからなる。１つの態様におミノ酸配列とグルコシ ルトランスフェラーゼのグルカン結合ドメインのアミノ酸配列の両者が存在し、 各アミノ酸配列は、投与対象となる哺乳類において免疫応答を引き起こすのに十 分な長さのものである。別の態様においては、ＧＴＦの触媒ドメイン、グルカン 結合ドメイン、またはネイティブ表面ドメインの全体または一部のアミノ酸配列 を含有する２つ以上のペプチドがワクチン組成物中に存在する。さらに別の態様 においては、触媒ドメイン、グルカン結合ドメイン、ネイティブ表面ドメイン、 およびその他のＧＴＦの免疫ドメインの全体または一部のアミノ酸配列を組み合 わせたものを含有する２つ以上のペプチドが存在して、多成分ワクチン組成物が できる。さらに別の態様においては、触媒ドメイン、グルカン結合ドメイン、ネ イティブ表面ドメイン、およびその他のＧＴＦの免疫ドメインのアミノ酸配列の 全体または一部、ならびにアジュバント性を強化したりその他の感染体に対する 免疫応答を引き起こす非ＧＴＦ起源の付加的免疫成分とを含有する２つ以上のペ プチドがワクチン組成物中に存在する。本発明のワクチン組成物を用いる特定の 態様においては、付加的免疫成分は、たとえば、これらに限定されないが、ジフ テリア、百日咳、破傷風、麻疹、ポリオワクチンなどの感染病の免疫ドメインか ら選ばれたアミノ酸配列であってもよく、複数の感染症や病原体に対する保護を もたらす多価ワクチンができる。最終的には、関連保護エピトープと幼児感染を 標的とする適当なアジュバント配列を含む多価ワクチンを製造することができる 。

本発明のワクチン組成物中に存在するペプチドは、免疫原性の強化を目的として 様々に設計することができる。ワクチン組成物が１つ以上のペプチドを含有する １つの態様においては、該単数または複数のペプチドを公知タンパク質（破傷風 トキソイドなと）または担体（合成ポリマー担体など）に結合させて、免疫原性 の強化につながる巨大分子構造をワクチンに付与する。ワクチン組成物が少なく とも２つのペプチドを含有する好ましい態様においては、該ペプチドを合成して ペプチジルコアマトリックスに共有結合させて、単一構造で高密度のペプチドを 存する巨大分子を得る。このような構造中の各ペプチドは、投与対象となる哺乳 類において免疫応答を引き起こすのに十分な長さのＧＴＦのアミノ酸配列から本 質的になる。ペプチジルコアマトリックスは、リジン、アルギニン、ヒスチジン などのアミノ酸からなるものとすることができる。とくに、少なくとも２つのペ プチドを少なくともｌっのリジンからなるコアマトリックス上で合成して、巨大 分子ワクチン組成物を得る。とりわけ、３つのリジンのコアマトリックス上で少 なくとも２つのペプチドが合成される。好ましい態様においては、ワクチン組成 物は、本発明の４つのペプチドを合成して３つのリジンからなるコアマトリック スに共有結合させて４本の樹状アームを持つ放射状分岐ペプチドができるように 設計される。この態様においては、該４つのペプチドは互いに同一であってもよ いし異なっていてもよい。この巨大分子ワクチン構造について、ＧＴＦの触媒ド メインの４つのペプチドを用いて実施例１で説明する。また、ＧＴＦのグルカン 結合ドメインの４つのペプチドを用いて図で説明する。

当業者であれば、通常の実験方法を用いて、本発明のワクチン組成物を合成しペ プチジルコアマトリックスに共有結合させる別の方法を決定することができるで あろう。

本発明のワクチン組成物の合成ペプチドによって惹起される免疫応答は、Ｂ細胞 応答および／またはＴ細胞応答からなる。Ｂ細胞応答は、ＩｇＡが中心の粘膜抗 体ならびにＩｇＧが中心の全身抗体の出現と関係がある。実施例２で説明するよ うに、実施例１で合成したＣＡＴ−１）ｅｐペプチドとＧＬＵａ−ｐｅｐペプチ ドはいずれもイン・ビボでＧＴＦに対するＢ細胞応答を惹起する。さらに、ＧＬ Ｕａペプチドはイン・ビボでＧＴＦに対するＴ細胞応答も惹起する。

本発明はさらに、哺乳類において免疫応答を引き起こすのに十分な長さを有する グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列から本質的になるペプチドを投与 することによって哺乳類においてグルコシルトランスフェラーゼに対する免疫応 答を惹起する方法に関する。上記免疫応答は、ワクチン組成物投与後の哺乳類に おいてグルコシルトランスフェラーゼの酵素活性またはグルカン結合活性の阻害 を引き起こすのが好ましい。本発明の方法によって惹起された免疫応答は、ワク チン投与対象の哺乳類においてミュータンス連鎖球菌のコロニー形成や蓄積を低 下させる。

本発明のワクチン組成物は、う蝕を予防しようとするあらゆる哺乳類に投与する ことができる。本発明は、ワクチン投与対象の哺乳類におけるう蝕の予防または 進行の抑制に有用なワクチンを提供する。

グルコシルトランスフェラーゼに対する免疫応答を惹起する本発明の方法におい ては、グルコシルトランスフェラーゼに対する免疫応答を惹起しようとする哺乳 類に本明細書で説明したワクチン組成物を投与する。このワクチン組成物は、治 療対象の個体に対して投与される処方に含めることができるが、このような処方 には、生理的に適合性のある担体（たとえば生理緩衝液）、安定剤、香料、アジ ュバント、その他の成分を含めることもできる。ワクチンは、様々な経路（たと えば非経口投与、静脈内投与）で投与することができ、経路に応して処方成分を 選択する。投与量および投与頻度は経験に基づいて決定することができ、治療対 象の哺乳類の齢と大きさ、およびう蝕疾患の病期（たとえばミュータンス連鎖球 菌のコロニー形成前、ミュータンス連鎖球菌のコロニー形成直後、またはコロニ ー形成のその後の段階）が考慮される以下の実施例により本発明を説明するが、 本発明はこれら実施例に限定されない。

実施例１ ＣＡＴ−ｐ　ｅ　ｐ　：　ＧＴＦの触媒活性が抗体を介して阻害されると、ミュ ータンス連鎖球菌のコロニー形成能力および／または蓄積能力が大幅に低下する と考えられた。ＧＴＦの触媒領域のＤＳ　ＩＲＶＤＡＶＤ領域を含む合成ペプチ ドは、これらの特徴を有する抗体を惹起すると考えられた。そこで、Ｓ、　５ｏ ｂｒｉｎｕｓの公知配列［フエレッティーら（Ｆｅｒｒｅｔｔｉ　ｅｔａｌ、　 ）　、Ｊ、　Ｄｅｎｔ、　Ｒｅｓ、　６７：５４１　（＋９８８）　］における ノナペプチドの位置が決定された。ペプチドの免疫原性は、その構造内にある少 なくとも５〜７個のアミノ酸からなる少な（とも２個のエピトープを宿主が認識 する必要があるのが普通であるため、標的アスパラギン酸を含む２２個のアミノ 酸からなるより大型の配列を合成した。この配列を表１に示したが、これをＣＡ Ｔ−ｐｅｐと呼ぶ。

表１ Ｓ、５ｏｂｒｉｎｕｓ　ＧＴＦＩ　ＤＡＮＦＤＳＩＲＶＤＡＶＤＮＶＤＡＤＬＬ Ｑ［（配列番号＝１） Ｓ、　ｍｕｔａｎｓ　ＧＴＦＢ　ＤＡＮＦＤＳ［ＲＶＤＡＶＤＮＶＤＡＤＬＬＱ Ｉ（配列番号：ｌ） この配列は、ｓ、　ｍｕｔａｎｓのＧＴＦと同一であるので、ＣＡＴ−ｐｅｐに 対して形成された抗体はｓ、　ｍｕｔａｎｓのＧＴＦと交差反応を非常に起こし ゃすい。さらに、触媒活性部位であるＤＳ　ＩＲＶＤＡＶＤペプチド内のすべて のアミノ酸残基は、不溶性または可溶性グルカンを形成するＳ、　５ｏｂｒｉｎ ｕｓのＧＴＦの各推定配列と同一または保存されている。Ｓ、　ｍｕｔａｎｓ株 はヒトにおいて最も頻繁にコロニー形成するミュータンス連鎖球菌株であるから 、これらの相同性はワクチン設計において重要である。

潜在的な免疫原性をさらに強化するために、ＣＡＴ合成ペプチドの設計にさらに 別の特徴を持たせた。すなわち、リジンからなるコアマトリックス上でペプチド を合成して、単一構造で高密度のＣＡＴ−ｐｅｐエピトープを有する巨大分子を 得た。具体的には、図１でＧＬＩＪａ−ｐｅｐについて示したように、２２個の アミノ酸ＣＡＴペプチドのうちの４つを３つのリジンからなるコアマトリックス 上で合成して、放射状分岐ＣＡＴ−ｐｅｐを４本の樹状アームとして得た。

ＧＬＵａ−ｐｅｐ　：ＧＴＦ分子上に第２の機能ドメインが存在することを示す 証拠がある。構造研究［フェレッティーら（Ｆｅｒｒｅｔｔｉ　ｅｔ　ａｌ、　 ）　、Ｊ、　Ｂａｃｔ、　１６９：４２７１　（１９８７）］および生化学的研 究［モーサーとウォング（Ｍｏｏｓｅｒ　＆　Ｗｏｎｇ　）、Ｉｎｆｅｃｔ、　 Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、　５６：８８０　（１９８８）　；ウォングら（Ｗｏｎｇ　 ｅｔａｌ、　）　、Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、　５８：２１６５　（１ ９９０）］から、ＧＴＦ分子のＣ末端から３番目に（ｉｎ　ｔｈｅ　Ｃ−ｔｅｒ ｍｉｎａｌ　ｔｈｉｒｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＧＴＦ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ　）　、別 の単数または複数のグルカン結合領域が存在することが示唆されている。ｓ、　 ｍｕｔａｎｓとＳ、　５ｏｂｒｉｎｕｓの両者に由来するＧＴＦの推定配列の一 次構造を分析から、理論上ＧＴＦのグルカン結合性と関連があるとされてきた多 重反復アミノ酸領域の存在が明らかになる。この仮説は、この分子領域のトリプ シン断片がグルカンと高い結合親和性を示すこと［つオンゾら（Ｗｏｎｇ　ｅｔ 　ａｌ、　）　、Ｉｎｆｅｃｔ、　ｌｎｍｕｎｉｔｙ、　５８：２１６５　（＋ ９９０）］　、およびこれらの領域のアミノ酸がグルカン結合性を存する独立の 連鎖球菌タンパク質中の反復配列と相同性があること［バナスら（Ｂａｎａｓ　 ｅｔ　ａｌ、）　、ＩｎｆｅＣｔ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、　５８：６６７　（１９ ９０）　］によって支持される。Ｓ、　５ｏｂｒｉｎｕｓのＧＴＦのその他の反 復領域との相同性、Ｓ、　ｌｌ１ｕｔａｎＳのＧＴＦにおける対応配列との相同 性、親水性、および２次構造に基づき、合成ペプチドの調製に使用する反復領域 の１つ（残基１２９３−１３２８）から配列を選んだ。この配列をＧＬＵａ−ｐ ｅｐと呼ぶ。ＣＡＴ−ｐｅｐに使用したコアマトリックス合成法は、リジン骨格 を有する４つの鎖状ＧＬＵａ−ｐｅｐペプチド構造体の合成にも使用した（図１ ）合成ペプチドの免疫原性 スブラーグ・ドーレー系（Ｓｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットに５０μｇの ＧＬＵａおよびＣＡＴ合成ペプチド（ラット３匹／ペプチド）を注射して、それ ぞれのペプチドの免疫原性を測定した。注射は筋肉内と皮下で行なった。最初の 注射時に（０日）、各ペプチドを完全フロインドアジュバントに混合した。その 後の３回の注射時には、ペプチドを不完全フロインドアジュバントに混合した。

その他のラットには１５μｇのＳ。

５ｏｂｒｉｎｕｓまたはＳ、　ｍｕｔａｎｓのＧＴＦを注射した。対照ラットは 、上記と同じスケジュールで緩衝液とアジュバントだけを疑似注射した。８０日 目間すべてのラットから血液と唾液を採取し、抗体量を測定した。同時に、牌臓 を摘出し、各ペプチドを用いてリンパ球幼若化の程度を測定した。

ＥＬＩＳＡ：両方のペプチドは異常に高い免疫原性を示した。各ペプチドは、注 射抗原に対する強力な血清１ｇＧ応答を惹起した。ＧＬＵａ−ｐｅｐを注射した ラットの血清は、＞５０，０００の相互抗体価（ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ　ｔｉｔ ｅｒ）で結合ＧＬＵａ−ｐｅｐと反応することが示された。ＣＡＴ−ｐｅｐまた はＳ、　５ｏｂｒｉｎｕｓのＧＴＦを注射したラットの血清は、この方法でＧＬ Ｕａ−ｐｅｐと存意な反応を示さなかった。Ｓ。

ｍｕｔａｎｓのＧＴＦを注射したラットの抗血清は、低希釈率でＧＬＵａ合成ペ プチドとわずかではあるが反応した。

ＣＡＴ合成ペプチドは各注射を受けたラットにおいて強い応答を惹起した。１０ ，０００倍以上の相互血清希釈率（ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ　ｓｅｒｕｍ　ｄｉｌ ｕｔｉｏｎｓ）で相同合成ペプチドとの反応が起きるのが見られた。Ｓ、　ｍｕ ｔａｎｓのＧＴＦを注射したラットの抗血清も１，０００倍以上の相互希釈率で ＣＡＴ−ｐｅｐと反応したが、このことは、無傷のＧＴＦとＣＡＴ合成ペプチド の上に共通のエピトープが存在することを示唆している。この方法では、Ｓ、　 ５ｏｂｒｉｎｕｓのＧＴＦまたはＧＬＵａ−ｐｅｐて免疫したラットの抗血清と の反応は実質的にまったく見られなかった。

Ｓ、　５ｏｂｒｉｎｕｓのＧＴＦは、１０’倍以上の相互希釈率で相同抗原と反 応するとともに異種ＧＴＦとは１０’倍以上の希釈率で反応する血清１ｇＧ抗体 応答を惹起することがわかった。Ｓ、ｍｕｔａｎｓのＧＴＦは、両方の無傷ＧＴ Ｆ酵素に対する強力な反応応答と交差反応応答を惹起した。重要なのは、より低 い希釈率（１：８００〜１：１６００）ではあったが、ＣＡＴまたはＧＬＵａ合 成ペプチド投与ラットの抗血清が両方の無傷ＧＴＦ抗原と反応したことである。

これらの交差反応は、両方の合成ペプチドと無傷のＧＴＦの間に共通のエピトー プが存在することを示す証拠を補強するものである。ラットの抗ペプチド抗血清 がＳ、　５ｏｂｒｉｎｕｓおよびＳ、　ｍｕｔａｎｓの両者のＧＴＦと反応した という事実は、これらのミュータンス連鎖球菌ＧＴＦの間に共通する合成ペプチ ドエピトーブが存在すること、および著名なヒト株に対して有効な哺乳類用う蝕 ワクチンの基礎となる可能性があることを示している。

ウェスタンプロット：いずれかの合成ペプチドを注射することで、無傷のＧＴＦ 上のエピトープに対する抗体を惹起することができることを示す証拠は、ウェス タンプロット法でも得られた。ＣＡＴ−Ｔ）ｅｌ）およびＧＬＵａ−ｐｅｐを注 射したラットの抗血清は以下のようにＧＴＦと反応した。Ｓ、　５ｏｂｒｉｎｕ ｓ　６７１５株のグルコツルトランスフェラーゼを、あらかじめ染色しておいた 標準物質とともに７％ＳＤＳ含有ポリ含有ポリアクリルアミドゲル床動した。電 気泳動後、ゲルからタンパク質をニトロセルロースに移した。各抗血清を電気泳 動されたＧＴＦに添加し、ラットＩｇＧ抗体を出現させることによって、合成ペ プチドおよび無傷のＧＴＦ抗原に対するラット抗血清の反応性を測定した。１５ ０−１６５ｋＤの範囲のＳ、　５ｏｂｒｉｎｕｓのＧＴＦバンドに対して、無傷 のＧＴＦ　（Ｓ、　５ｏｂｒｉｎｕｓ　）に対するラット抗血清は強力に反応し 、無傷のＳ、　ｍｕｔａｎｓ　ＧＴＦに対する抗血清は中程度に反応した。ＣＡ Ｔ合成ペプチドとＧＬＵａ合成ペプチドの両者に対する抗血清も、この範囲で可 視バンドを形成した。これらのバンドは、ＧＴＦに対するラット抗血清で形成さ れたものよりはるかに弱かったが、ＧＴＦと合成ペプチド上に類似のエピトープ が存在することが反応から示された。

リンパ球幼若化反応：ラットの免疫化に使用した各ペプチドのＴ細胞エピトープ を評価するために、各動物から牌臓を摘出し、単細胞懸濁液を調製し、勾配遠心 分離法によってリンパ球を単離した。細胞（５ｘｌＯ’）を、無添加（対照）、 ＣＡＴペプチド、ポリリジンペプチド、Ｓ、　５ｏｂｒｉｎｕｓのＧＴＦ、また はｓ、　ｍｕｔａｎｓのＧＴＦのいずれかと５日間培養状態で反応させた。トリ チウム標識チミジンを培養終了１６時間前に添加した。陽性所見を表２にまとめ た。

答を惹起することが示されたので、リジンからなるコアマトリックス上に合成し たこれらのペプチドを組み合わせたものも、同様の免疫応答を惹起するであろう 。最終的には、合成ペプチド技術によって、投与対象となる哺乳類においてアジ ュバント性を強化させるエピトープを有するう蝕予防応答惹起グルコシルトラン スフェラーゼのエピトープを、３個以上のリジンからなるコアマトリックス上で 組み合わせることが可能になるはずである。したがって、ＧＴＦの合成ペプチド エピトープを含有するワクチンを続けて全身投与すれば、う蝕の長期的継続予防 が可能になるはずである。

実施例３ ヒトにおけるグルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）に対するＴ　ＩＪリンパ 球Ｂ　ＩＪンパ球の反応性ヒトにおけるＴリンパ球（増殖）とＢ（抗体）リンパ 球の対象ペプチド構築物に対する応答を調べた。う蝕、欠損、および充填歯表面 （ＤＭＦＳ）を有する年齢２〜３７歳の被験者１４名から採血し、血清（血漿） 抗体とリンパ球増殖を調べた。

血清抗体：　ＧＴＦ　ｓ　ｓ　（Ｓ、　５ｏｂｒｉｎｕｓ　）　、ＧＴＦ　ｓｍ 　（Ｓ。

ｍｕｔａｎｓ　）　、ＣＡＴ、およびＧＬＵａに対する、これらの被験者の血漿 中のＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡ法で測定した。これらの抗原のそれぞれに対する抗 体濃度をランク付けした。ｌが最高である。抗体濃度をランク付けしたが、すべ ての被験者は投与ペプチドに対しである程度の抗体濃度を示したようであり、こ のことは、ヒトよって認識されうるＢ細胞エピトープがおそら＜　ＣＡＴペプチ ドとＧＬＵａペプチド上に存在することを示唆するものである（表３）。

リンパ球幼若化応答：これらのヒト末梢血Ｔリンパ球の対象ペプチド認識能力に ついても調べた（表３）。末梢血リンパ球は、フィコール・ヒストバック（Ｆｉ ｃｏｌｌ　Ｈ４５ｔｏｐａｑｕｅ　）に遠心分離することで調製した。２２〜５ ８歳の被験者１４名（女性７名、男性７名）の単核細胞について、コンカナバリ ンＡ、ＣＡＴ、ＧＬＵａ、ポリリジン、ＧＴＦ　ｓ　ｓ、およびＧＴＦｓｍに対 する増殖応答を調べた。ＧＬＵａＳＣＡＴ、およびＳ、　ｍｕｔａｎｓのＧＴＦ に対する応答は用量依存性であり、対照ペプチドであるポリーＬ−リジンに対す る応答は検出されなかった。１４名の被験者のうち７名ではＧＴＦｓｓに対する 増殖を示し、その７名のうちの５名ではＧＬＵａに対して有意な増殖応答を示し た。ＣＡＴに対して増殖応答を示したのは１名だけであった。面白いことに、最 高の抗体応答を示した被験者は、ＣＡＴ、ＧＬＵａ、ＧＴＦに対してリンパ球増 殖を示さなかった。

Ｔ細胞サブセットの分離コニの手順は、先に試験した１４名のうちの５名の末梢 血単核細胞（ＰＢＭＣ）について、ナイロンウール上で単核細胞／マクロファー ジとＢ細胞を除去し、抗ＣＤ８モノクローナル抗体被覆フラスコ上で陰性パンニ ング（ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｐａｎｎｉｎｇ）を行なうことによって実施した。非 接着性細胞をＣＤ４＋細胞として採取した。分離した細胞の応答を表４に示す。

分離されたＴ細胞集団（ＣＤ４＋細胞）の応答０　分離していない末梢血単核細 胞のＧＴＰｓｓに対する増殖応答。

”　’　”　ＣＤＢ＋細胞の応答。

５名の被験者のうち、３名はＧＴＦおよび／またはＧＬＵａに対して応答を示し たが、１名はＧＴＦとＧＬＵａに応答し、１名はＧＴＦまたはＧＬＵａの一方に 応答した。ＣＡＴに対するＴ細胞応答は見られなかった。

被験者のうちの５０％はＧＴＦｓｓに対する増殖応答の増大を示した。ＧＴＦｓ ｓに対して応答した被験者だけが、ＣＡＴまたはＧＬＵａペプチドに対して応答 を示した。１４名のうち１名だけがＣＡＴに対して有意な応答を示したが、１４ 名のうちの５名はＧＬＵａに対して有意な増殖を示した。

グループ内の抗体応答ランキングと宿主末梢血リンパ球のＧＴＦｓｓあるいはＧ ＬＵａのいずれかに応答して増殖する能力との間には関係がないようであった。

実際、最高の抗体濃度を示した２名は有意な増殖を示さなかった。リンパ球サブ セットの分離で、Ｔ細胞反応性は主にＣＤＪ＋集団中に存在することがわかった が、１名はＣＤＢ＋リンパ球集団中で増殖応答を示した。

これらの観察結果を総合すると、Ｔ細胞エピトープの存在、及びＣＡＴ、ＧＬＵ ａと無傷のミュータンス連鎖球菌ＧＴＦとの間の共通するエピトープの存在可能 性が考えられる。

Ｔ細胞エピトープはＣＡＴペプチド上には存在せず、ＧＬＵａペプチド上に存在 するようである。これらの知見から、最高の抗体濃度を示す者が必ずしも同一抗 原に対して高いリンパ球増殖応答を示さないこと、およびＢ細胞エピトープはお そら＜　ＣＡＴペプチドとＧＬＵａペプチドの両者の上に存在することが明らか である。

均等物 当業者であれば、単に常識的実験手法を用いて、ここに述べた発明の具体的態様 に対する多くの均等物を認識し、また確認し得るであろう。そのような均等物は 下記クレームの範嗜に含まれるものである。

配列表 （１）一般情報： （ｉ）出願人：フォーシス　デンタル　インファーマリ−フォー　チルドレン （ｉ　ｉ）発明の名称・う蝕予防用合成ペプチドワクチン（ｉｉｉ）配列の数： ５ （ｉｖ）　連絡先住所 （Ａ）宛名：ハミルトン、プルツク、スミス　アンドレイノルズ、ピー、シー。

（Ｂ）ストリート：ツー　ミリティア　ドライブ（Ｃ）市ニレキシントン （Ｄ）州：マサチューセッツ （Ｅ）国、アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号：　０２１７３ （ｖ）コンピュータ可読フオーム： （Ａ）媒体タイプ：フロッピーディスク（Ｂ）コンピュータ：ＩＢＭＰＣ互換機 （Ｃ）オペレーティングシステム：　ＰＣ−ＤＯＳ／５−ＤＯ３ （Ｄ）ソフトウェア　パテントイン　リリース＃１．　Ｏ，バージョン　＃１． 　２５（ｖｉ）現出願データ： （Ａ）出願番号・ （Ｂ）出願日：　１９９３年４月３０日（Ｃ）分類： （ｖｉｉｉ）代理人情輯 （Ａ）氏名：グラナハン、パトリソア ＣＢ）登録番号：　３２．２２７ （Ｃ）参照／ファイル番号：　ＦＤＣ９２−０１Ａ（ｉｘ）テレコミュニケーシ ョン情報二（Ａ）　を話番号：６１７−８６１−６２４０（Ｂ）ファクシミリ・ ６１７−８６１−９５４０（２）配列番号ｌの情報： （１）配列の特徴。

（Ａ）配列の長さ２２２個のアミノ酸 （Ｂ）配列の型：　アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：　１本鎖 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （１１）分子の壓：ペプチド （ｘｉ）配列：配列番号・１ Ａｓｐ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　ｌｌｅ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　 Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ａｓｐｌ　５　１０　１５ Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　ｔｉｅ（２）配列番号２の情報： （ｉ）　配列の特徴： （Ａ）配列の長さ・２５個のアミノ酸 （Ｂ）配列の型：　アミノ酸 （Ｃ）鎖の数＝　１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子の盟：ペプチド （ｘｌ）配列：配列番号：２ Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　 Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　ｌｉｅ　Ｈｉｓ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕｌ　５　１０　＋５ Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ（ ２）配列番号３の情報： （ｉ）　配列の特徴： （Ａ）配列の長さ２２２個のアミノ酸 ＣＢ）配列の型：　アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：　１本鎖 （Ｄ）トポロジー二直鎖状 （１１）分子の型：ペプチド （ｘｉ）配列、配列番号：３ Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｎ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　 Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　ＡｓｎＧｌｙ　Ｇｌｎ　Ｇ ｉｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ（２）配列番号４の情報： （ｉ）　配列の特徴： 補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成６年１０月３１日 当

Claims (27)

【特許請求の範囲】
1. １．投与対象の哺乳類の免疫応答を引き起こすのに十分な長さを有するグルコシ ルトランスフェラーゼの少なくとも一つのアミノ酸配列から本質的になるペプチ ドを含有するワクチン組成物。
2. ２．グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列が、ａ）グルコシルトランス フェラーゼの触媒ドメインのアミノ酸配列の全体又は一部、 ｂ）グルコシルトランスフェラーゼのグルカン結合ドメインのアミノ酸配列の全 体又は一部、及びｃ）ネイティブグルコシルトランスフェラーゼ表面ドメインの アミノ酸配列の全体又は一部 からなる群より選ばれる請求項１記載のワクチン組成物。
3. ３．アミノ酸配列が、 ａ）ＤＡＮＦＤＳＩＲＶＤＡＶＤＮＶＤＡＤＬＬＱＩ（配列番号：１） ｂ）ＴＧＡＱＴＩＫＧＱＫＬＹＦＫＡＮＧＱＱＶＫＧ（配列番号：３） ｃ）ＤＧＫＬＲＹＹＤＡＮＳＧＤＱＡＦＮＫＳＶ（配列番号：４） ｄ）ＱＷＮＧＥＳＥＫＰＹＤＤＨＬ（配列番号：５）、及び ｅ）ＰＬＤＫＲＳＧＬＮＰＬＩＨＮＳＬＶＤＲＥＶＤＤＲＥ（配列番号：２） からなる群より選ばれる請求項２記載のワクチン組成物。
4. ４．グルコシルトランスフェラーゼの触媒ドメインのアミノ酸配列及びグルコシ ルトランスフェラーゼのグルカン結合ドメインのアミノ酸配列のいずれもが存在 し、そして該アミノ酸配列のそれぞれがワクチン組成物の投与対象となる哺乳類 に免疫応答を引き起こすのに十分な長さのものである請求項２記載のワクチン組 成物。
5. ５．２又はそれ以上のペプチドが存在し、そして３又はそれ以上のリジンのコア マトリックス上に配置されている請求項４記載のワクチン組成物。
6. ６．アミノ酸配列が、 ａ）ＤＡＮＦＤＳＩＲＶＤＡＶＤＮＶＤＡＤＬＬＱＩ（配列番号：１） ｂ）ＴＧＡＱＴＩＫＧＡＫＬＹＦＫＡＮＧＱＱＶＫＧ（配列番号：３）、及び ｃ）ＤＧＫＬＲＹＹＤＡＮＳＧＤＱＡＦＮＫＳＶ（配列番号：４） からなる群より選ばれる請求項５記載のワクチン組成物。
7. ７．免疫応答がＢ細胞の応答及びＴ細胞の応答の両者からなる請求項３記載のワ クチン組成物。
8. ８．免疫応答がＩｇＧ又はＩｇＡインタイブの抗体を生産する請求項７記載のワ クチン組成物。
9. ９．それぞれのペプチドが投与対象となる哺乳類の免疫応答を引き起こすのに十 分な長さのグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列から本質的になり、ペ プチジルコアマトリックスに共有結合した少なくとニつのペプチドを含有するワ クチン組成物。
10. １０．該ペプチジルコアマトリックスに共有結合した付加的免疫成分を少なくと も一つ含有し、該付加的免疫成分がグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配 列ではない請求項９記載のワクチン組成物。
11. １１．付加的免疫成分がジフテリア、百日咳、破傷風、はしか、及びポリオワグ チンからなる群より選ばれるものである請求項１０記載のワクチン組成物。
12. １２．ペプチジルコアマトリックスが少なくとも一つのリジンを含む請求項９記 載のワクチン組成物。
13. １３．それぞれのペプチドのアミノ酸配列が、ａ）グルコシルトランスフェラー ゼの触媒ドメインのアミノ酸配列の全体又は一部、 ｂ）グルコシルトランスフェラーゼのグルカン結合ドメインのアミノ酸配列の全 体又は一部、及びｃ）ネイティプグルコシルトランスフェラーゼの表面ドメイン のアミノ酸配列の全体又は一部 からなる群より選ばれる請求項１２記載のワクチン組成物。
14. １４．アミノ酸配列が、 ａ）【配列があります】 （配列番号：１） ｂ）【配列があります】 （配列番号：３） ｃ）【配列があります】 （配列番号：４） ｄ）【配列があります】（配列番号：５）、及び ｅ）【配列があります】 （配列番号：２） からなる群より選ばれる請求項１３記載のワクチン組成物。
15. １５．免疫応答がＢ細胞の応答及びＴ細胞の応答の両者からなる請求項９記載の ワクチン組成物。
16. １６．Ｂ細胞の応答及びＴ細胞の応答のいずれもが同じアミノ酸配列により誘導 される請求項１５記載のワクチン組成物。
17. １７．免疫応答がＩｇＧ又はＩｇＡインタイブの抗体を生産する請求項１６記載 のワクチン組成物。
18. １８． ａ）四つのペプチドが同一であるか又は異なっており、ｂ）それぞれのペプチド が、グルコシルトランスフェラーゼの触媒ドメインのアミノ酸配列の全体又は一 部、グルカン結合ドメインのアミノ酸配列の全体又は一部、及びネイティブグル コシルトランスフェラーゼの表面ドメインのアミノ酸配列の全体又は一部からな る群より選ばれるアミノ酸配列から本質的になり、そしてｃ）四つのペプチドが 三つのリジンのコアマトリックス上にあり、そして 該ワクチンが、投与対象の哺乳類のグルコシルトランスフェラーゼに対する免疫 応答を誘導する能力のあるものである、四つのペプチドを含有する請求項９記載 のワクチン組成物。
19. １９．アミノ酸配列が、 ａ）【配列があります】 （配列番号：１） ｂ）【配列があります】 （配列番号：３） ｃ）【配列があります】 （配列番号：４） ｄ）【配列があります】（配列番号：５）、及び ｅ）【配列があります】 （配列番号：２） からなる群より選ばれる請求項１８記載のワクチン組成物。
20. ２０．グルコシルトランスフェラーゼに対する免疫応答によって、ワクチン組成 物の投与対象となる哺乳類においてミュータンス連鎖球菌のコロニー形成又は蓄 積が抑制される請求項１８記載のワクチン組成物。
21. ２１．投与対象の哺乳類においてグルコシルトランスフェラーゼの酵素活性又は グルカン結合活性のいずれかを抗体を介して妨害するのに十分な長さの、グルコ シルトランスフェラーゼのグルカン結合ドメイン又は触媒ドメインのいずれかの アミノ酸配列から本質的になるペプチドを含有するワクチン組成物。
22. ２２．哺乳類における免疫応答を引き起こすのに十分な長さのグルコシルトラン スフェラーゼのアミノ酸配列から本質的になるペプチドを投与し、それにより哺 乳類におけるグルコシルトランスフェラーゼの酵素活性又はグルカン結合活性を 妨害することからなる、哺乳類におけるグルコシルトランスフェラーゼの酵素活 性又はグルカン結合活性を妨害する方法。
23. ２３．哺乳類における免疫応答を引き起こすのに十分な長さのグルコシルトラン スフェラーゼのアミノ酸配列から本質的になるペプチドを投与し、それによって 該免疫応答を刺激することからなる、哺乳類におけるグルコシルトランスフェラ ーゼに対する免疫応答を刺激する方法。
24. ２４．ペプチドの投与対象となる哺乳類において、該免疫応答によりミュータン ス連鎖球菌（ｍｕｔａｎｓ　ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｏｌ）のコロニー形成又は 蓄積が抑制される請求項２３記載の方法。
25. ２５．例えば哺乳類においてグルコシルトランスフェラーゼの酵素活性又はグル カン結合活性を妨害する際に使用される、哺乳類における免疫応答を引き起こす のに十分な長さのグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列から本質的にな る、治療に使用されるペプチド。
26. ２６．例えば哺乳類においてグルコシルトランスフェラーゼに対する免疫応答を 刺激する際に使用される、哺乳類における免疫応答を引き起こすのに十分な長さ のグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列から本質的になる、治療に使用 されるペプチド。
27. ２７．哺乳類において、応答が刺激されることによりミュータンス連鎖球菌のコ ロニー形成又は蓄積が抑制される請求項２６記載のペプチド。