JPH07505380A - ガン治療に使用するためのメラミン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ガン治療に使用するためのメラミン誘導体本発明は新規２．４．６−　）リアミ ノ−１，３，５−１−リアジン類、それらを含有する組成物、それらの製造方法 、ならびにそれらの腫瘍の治療における使用、特に卵巣腫瘍の治療への使用に関 する。

トリメラモール（Ｔｒｉ＋ｎｅｌａｍｏｌ）　［２，４，６−トリス（（ヒドロ キシメチル）（メチル）アミノ］−１，３，５−トリアジン］は臨床的に、特に 卵巣腫瘍に有効な薬剤であるが、配合中に二量体を形成するという不安定性によ る配合の難しさのために臨床的開発が遅れた。ヒトに対するトリメラモール活性 の半減期は短いものと信じられており、そしてそれが臨床的効力を制限するかも しれないと思われていた（１．　Ｒ，Ｊｕｄｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、 　４９゜５４７５−５４７９．１９８９）。このことは部分的にはホルムアルデ ヒドの遊離を生じるＮ−ヒドロキシメチル官能基の化学的不安定性によるものと 思われる。

本発明では、半減期を延長し、かつまた例えば水溶液中での組成物の適応性の向 上を主眼において、Ｎ−ヒドロキシメチル官能基の数を減少させること、および これらの官能基を電子求引有機基（本明細書においてはメチルに関する電子求引 と定義する）で安定化することを検討してきた。

従って本発明は以下の一般式： 式中、同一または異なってもよい各Ｒ１は水素、アルキルまたは電子求引基であ り、モしてＲ１は水素、アルキルまたは電子求引有機基である、 の新規２．４．６−　トリアミノ−１，３，５−トリアジン類を提供する。好ま しくは３つのすべてのＲ−が水素ではない。アルキル基Ｒ１および／またはＲ２ は好ましくはＣｒ　−Ｃ４アルキル基、特にメチルであり、そして３つのすべて のＲ１がアルキルである時はメチルである。

好ましい電子求引有機基は−ＣＨ２ＣＦ、および−ＣＨ２ＣミＣＨである。この ような電子求引性置換基の存在により、このような化合物に大きな安定性が付加 され、これは半減期の延長および組成物の適応性を向上できる。これらはトリス −ヒドロキシメチル化合物類またはそれらのＵｉ駆体を水性有機媒質中で分解し 、生成混合物（第１図）から本発明の適当な化合物を、例えばノリ力ゲルのクロ マトグラフィーで分離することにより製造できる。

これらの新規トリメラモール類似体は、腫瘍、特に卵巣腫瘍に対してトリメラモ ールと同等水車の活性を有し、さらにより安定でかっこ量体および重合体の形成 がＭ＜、従って組成物に対してより適応性があることを見いだした。

本発明の化合物は一般式： 式中、Ｒ１およびＲ２は式Ｉの定義と同義である、の新規中間体化合物を通して も製造される。

この中間体は一般式： 式中、Ｘはフッ素または塩素である、 のハロゲン化シアヌルを、式Ｒ１−ＮＨ，またはＲ’　Ｒ”　Ｎ　Ｈ２（式中Ｒ １およびＲ２は式（Ｄと同義である）のアミンと、随意にフッ化セシウムの存在 下で反応させることにより製造される。

フッ化セシウムの非存在下では、１．３．５−トリアジン環上の２個以下の置換 基が置換され、纂れにより非対称化合物が製造される。

随意に炭酸カリゲムの存在下で中間体■をホルムアミド水溶液で処理すると、式 （Ｉ）の化合物が得られる。Ｒ１がメチルそしてＲ２が水素である式（Ｉ）の化 合物を提供するために、Ｒ１およびＲ２もそれぞれメチルおよび水素である式（ ＩＩ）の化合物から出発し、約２％−５（重量／容量）％（ｗ／ｖ）　、例えば 約３（重量／容量）％のホルムアミド濃厚物を使用することが好ましい。これは 主要生成物として式Ｉの化合物を含有する最終生成物を提供する。少量の対応す るトリメラモール（すなわち、Ｒ＋　＝メチル、Ｒ２＝ＣＨｌ０Ｈ）　、および “モノメラモール”　（すなわち、３つともメチルであるが、唯一のヒドロキシ メチル基がある）化合物が生成するだろう。このような化合物の存在は生物的ア ッセイにおいて、本発明の化合物の調製物の活性に有意な影響を及ぼさない。し かし、所望により調製物の純度を再結晶化により増すことができる。例えば材料 をメタノール−水（例えば９：１の比）に溶解し、そして再結晶化できる。

本発明の化合物は、生物的に活性で、卵巣腫瘍、特にシスプラチン−耐性卵巣腫 瘍に対して使用できる。

また、本発明の範囲中には、有効成分として、少なくとも一般式Ｉの化合物を、 医薬的に受容しつるキャリアーまたは希釈物と混合して含んで成る医薬組成物が ある。

本発明の化合物は通常、経口または注射により投与されるであろう。

非経口的投与は通常、生理食塩中の水溶液であり、これはヒトへの使用のために 発熱物質を含まない。そのような組成物は静脈または腹膣内に投与することがで きる。

経口的投与の組成物（闘１ユとんど固体または液体の剤形であり、はとんどが錠 剤、カプセル」子錠剤等である。液体組成物は、水溶性または非−水溶性媒質の 溶剤または分散剤である。理想的な溶液は中性またはアルカリｐＨ１および低イ オン強度、例えば５％デキストロースである。

本発明の化合物をヒト、または動物体を治療するために適当な１日の用量は、約 １００ｍｇ　３ｇ／ｍ”体表面積である。

以下の実施例で本発明の化合物の製造法を説明する。

３（重Ｉｔ／容量）％のホルムアルデヒド水溶液（１５ｍｌ）に炭酸カリウム（ ６９１ｍｇ、　５ｍｍｏｌ）を加え、次にトリメチルメラミン（８４１ｍｇ、　 ５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で初めの清澄溶液（ｐＨ１１，５）が 、曇るまで（２−３時間）撹拌し、−晩装置した（１６時間）。白色粒状固体を 濾過により分取し、水洗浄（４Ｘ５１１１１）　Ｌ、そして生成物を真空中で無 水ＣａＣ１１上で乾燥させた。収量５９３ｍｇ　（５２％）；ＩＨＮＭＲスペク トルδｕ（ＭｅｚＳＯ−ｄａ）２．７５（ａｌ）ｐｄ、３．ｔｌＮｃＨｚ）、　 ４．９９（ｂｒ　ｓ、　４゜ＨＯＣｊｑｚ）、　５．３６（ｂｒ　ｓ、　２．　 ＯＨ）　６．６１（ｂｒ　ｓ、　１．ＮＨ）　；質量スペクトル（ＦＡＢ　。

グリセロール／チオグリセロールマトリックス）　ｍ／ｚ２２９（［Ｍ＋Ｈ］” 、　７０％）。

２１１（２２９−１４２０，１００％）、　１９９（２２９−Ｃ）１２０．３５ ％）、　１８１（１９９−Ｉ２０．５０％）、１６９（１９９−ＣＩ２０．３０ ％）。分析ＣｇＨ＋　ａＮａ０２　理論値Ｃ，４２，１０；　）Ｉ、　７．０７ 　；　Ｎ、　３６゜８２＝実測値Ｃ，４１，８７；■、　？、　０１　、　Ｎ、 　３６．５５％。

以下の実施例では、この化合物をＣＢ７６４６と言う。

上記実施例１に記載された方法を使用して、しがし１０倍量の出発物質を使用し て、６．３２５ｇの生成物を得た。ＨＰＬＣ分析では、以下の組成の調製物が確 認された： 標題化合物＝６５％、トリメラモール２２％、モノヒドロキシメチル誘導体１２ ％。

この物質（３ｇ）をメタノール−水（９：１．１００ｍ１）に３７℃で溶解し、 ２４時間で２０℃に冷却した。白色結晶固体が迅速な濾過により回収され、そし て真空下で無水ＣａＣｌ２上で乾燥して、１．３７ｇの以下の組成の物質を得た 二標題化合物８７％　トリメラモール４％、モノ、ヒドロキシメチル誘導体９％ 。’Ｈ−ＮＭＲスペクトルのシグナル（ＤｔＯ１３７℃で測定）は：標題化合物 ６３．０８（）ＩＮＣ！！３）、　３．３０（ＨＯＣＨ，ＮＣ！！り、　５．２ ９（ＨＯＯｊ、）　；　トリメ５モール３．３３および５．３２　；モノヒドロ キシメチル誘導体３．０５．３．２７および５．２６゜ 実施例３ ２．４−ビス［（ヒドロキシメチル）　（２，２，２−１−リフルオロエチル） アミノ］−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ−１，３，５−トリ アジン２−［（［ヒドロキシメトキシコメチルＸ２．２．２−　トリフルオロエ チル）アミノ］−４，６−ビス（ヒドロキシメチル）（２，２，２−トリフルオ ロエチル）アミノ−１，３，５−１−リアジン（５００ｍｇ、　１．０２ｍｍｏ ｌ）の混合液（アセトン（３ａ＋１）および水（２ｍｌ）中）を室温に１８時間 静置した。アセトンを真空下で除去し、そして有機物質をジエチルエーテルで抽 出した。

有機相を濃縮し、そしてシリカゲルのカラム（５０ｇ、直径３ｃｍ）　（メルク ：　ＭｅｒｃｋＳｔ１１個番号９３８５）に添加して、ジエチルエーテルで溶出 した。

連続的にｚ−ｃ（ＭＬｒロキシメチルＸ２．２．２−１−リフルオロエチル）ア ミノ］−４，６−ビス［２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］　−１，３ ，５−）リアジン（２３＋ａｇ）　、標題化合物（１４４＋＋ｇ、３３％収量） 、および２．４．６−　トリス［（ヒドロキシメチルＸ２．２．２−　）リフル オロエチル）アミノ］　−１，３，５−１−リアジン（’ｌｌｌｏｇ）が溶出し た。標題化合物は適当な画分を氷冷水でトリチュレートし、濾過で回収、そして 真空中で塩化カルシウム上で乾燥することにより白色固体として得た。

（ｂｒｇ、　１．　Ｎｕ）。６Ｆ７０．２３．−７０．０３（２Ｓ、　３．　Ｆ ３ＣＣＵ、ＮＨ）−６８，３（Ｓ、　６．　Ｆ３ＣＣＨ，ＮＣＨ，ＯＢ）。

以下の実施例ではこの化合物をＣＢ７６８３と言う。

化合物をＤＭＳＯに溶解して５９ｍＭ濃度にした。アリコートを適当な媒質に分 散して最終濃度を１００μＭ（約１ｈｌの容量中）とした。■ＰＬＣ分析用に、 トリメラモールおよびＣＢ７６４６　（実施例１参照）の希釈調製物を水浴で２ １°−２４℃（室温を想定）、または３７℃の水、０．９％ＮａＣ１または５％ デキストロース中で保存した。アリコートを各調製物から間隔をあけて取り出し 、ＨＰＬＣで測定することによりその安定性（すなわち半減期、Ｔ”りを評価し た。これは１０％アセトニトリル、９０％０．０５Ｍ重炭酸アンモニウムを含む 移動相を使用する単一溶媒溶出で行った。１５ＣＩａカラムにはＣ８オクチル５ ｈｅｒｉｓｏｒｂｔ１１＋を充填した。カラムは１４−１７℃を維持する冷却室 に置いた。新に調製された標準溶液を、対照として分析期間中に流した。

Ｔｌ７２測定は、時間に伴い減少するピーク面積による化合物の消失を、データ システム４５０ＭＴ２データ獲得システム（コントロン機器；　Ｋｏｎｔｒｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ワットフォード、英国）をＨＰＬＣシステム検出器に 直接的に連結して（２２５ｎＭ）使用し測定し、作成した。ＴＩ／１測定は時間 （Ｘ）に対するピーク面積（ｙ）の片対数座標プロットから読んだ。

結果は表１に示し、そしてＣＢ７６４６は卓越した安定性を有する。

（ｉｉ）溶液中の二量体７１合体形成 ＣＢ７６４６およびトリメ５モール水溶液の４社アリコートを４−５ｍｇ／ｍｌ 濃度で一晩（１４−１６時間）、室温で放置した。この時間の最後にトリメラモ ールは重い沈殿を形成し、これは二量体および重合体の形成を示している。同様 なこの時間のトリメラモールのこのような重合化は、フェーズＩおよび■の臨床 試験で問題であった（Ｊｕｄｓｏｎら、１９８９．　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　 ４９；　５４７５−５４７９　ＨＪｕｄｓｏｎら、１９９１．　Ｂｒ、　Ｊ、Ｃ ａｎｃｅｒ　６３；３１１−３１３）　、対照的に実施例１および２のＣＢ７６ ４６の調製物は、沈殿を形成せず、単量形（ｍｏｎｏ＋＊ｅｒｉＣｆｏｒｍ）は トリメラモールよりもより安定であることを示した。

実施例５ 本発明の化合物の細胞毒性 ＣＢ７６４６およびＣＢ７６８３の細胞毒性を、ＭＴＴアッセイを使用して哺乳 類細胞系に対してトリメラモールと比較した。このアッセイは、死んでいない生 きている細胞が、ＭＴＴテトラゾリウム塩（３−［４，５−ジメチルチアゾール −２−イル］−２５−ジフェニル　テトラゾリウム　プロミド）を紫色のホルマ ザンに還元できる選択的能力に基づ（（Ｍｏｓａ＋ａｎｎら、１９８３．　Ｊ、 　Ｉｍｍｕｎ。

Ｍｅｔｈｏｄｓ　６５：５５−６３　：　Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌら、（１９８７ ）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　４７　：　９３６−９４２）B 細胞系はカルチャー中で薬剤に連続的に接しながら生育した。化合物のＩＣ，ｏ 値（ａｍで）（すなわち、未処理対照と比較して５０％の細胞生育抑制を与える 濃度）を測定し、表２に表す。カッコ中の数字は、２つ以上の測定に関する標準 偏差または＋／−値を表す。

表２ （ＮＤ−一実施せず） 使用した細胞系： ＰＣ６−マウスブラスマ細胞腫 Ｗａｌｋｅｒ　２５６−ラット乳房ガンＨ６９−ヒト小細胞肺ガン ＣＨＩ、４１Ｍ−ヒト上皮卵巣ガン ｆａｌｋｅｒ　２５６および８６９細胞に関する試験は、実施例２の再結晶によ り製造されたＣＢ７６４６調製物を使用して繰り返された。結果は：ｔａｌｋｅ ｒ　２５６　−　１０．５ ８６９　−１６．５ 実施例１により製造したＣＢ７６４６の、マウス＾ＤＪ／ＰＣ６腫瘍に対する抗 腫瘍活性をトリメラモールの抗腫瘍活性と比較した。１ｍｍ”の腫瘍切片移植を １日月に行った。２０日日目、比較し得る大きさの腫瘍を有する動物を４つの群 に分け、引き続き５日間薬剤治療し、そして３０日までおいた。

処置および対照由来Φ腫瘍を切除し、腫瘍の生育として重量を測定した。

表３ 種々の用量での抑制％ 対照値の％としての腫瘍重量 ＣＢ７６４６　（ジメラモール）についての結果は、ＬＤｓｏ＞１００ｍｇ／ｋ ｇＳＥＤｓｏ７４ｍｇ／ｋｇ 治療指数（ＴＩ）　＞１．４ 実施例７ より正確なＬＤｓ、値を得るために、実施例６を繰り返した。ＬＤＳＯＳＥＤ＠ ’＠およびＴ、Ｉ、値を計算し、そして表４に表す。

ＣＢ７６４６をインビボで、マウスに移植したＰＸＮ６５細胞系の卵巣ガン同種 移植片に対して、実質的にＨａｒｒａｐら、＾ｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｏｎｃｏｌｏ ｇｙ、　１９９０．１：６５−７６に従い試験した。ＰＸＮ６５はシスプラチン −感受性系である。トリメラモールまたはｃＢ７６＄いずれかで処置したマウス は、２８日以内に腫瘍の退行を示したが、工房未処理対照腫瘍の成長は抑制され ず、死んだ。結果を表５に示す。

表５ ＰＸＮ６５　同種移植片に対する活性 ＧＤ＝生育遅延 データはＣＢ７６４６がトリメラモールに匹敵する効力を有することを表す。

ヤ〈 補正書の写しく翻訳文）提出書　（特許法第１８４条の８）７＊６’Ｆ９Ｊｉ２ ６−

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. １．一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ 式中、同一または異なってもよい各Ｒ１は水素、アルキルまたは電子求引基であ り、Ｒ２は水素、アルキルまたは電子求引有機基である、 で示される化合物。
2. ２．各Ｒ１がメチルであり、そしてＲ２がＨである請求の範囲第１項記載の化合 物。
3. ３．電子求引有機基がＣＦ３ＣＨ２−または−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨである請求の範囲 第１項記載の化合物。
4. ４．一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）式中Ｒ１およびＲ２は請求の範囲第 １項と同義である、で示される化合物。
5. ５．人体または動物体を対象とした治療により、ヒトまたは動物体の治療法に使 用するための請求の範囲第１、２または３項記載の化合物。
6. ６．シスプラチン−耐性卵巣ガンの治療に使用するための請求の範囲第１、２ま たは３項記載の化合物。
7. ７．請求の範囲第１、２または３項に定義された化合物である有効成分を、不活 性な希釈剤またはキャリアーと一緒に含んで成る医薬組成物。
8. ８．ガンの治療のための薬品製造における、請求の範囲第１、２または３項のい ずれか１項に定義された化合物の使用。
9. ９．請求の範囲第４項に定義された式ＩＩの化合物を、随意に炭酸カリウムの存 在下でホルムアルデヒドと反応させることを含んで成る、請求の範囲第１ないし ３のいずれか１項記載の式Ｉの化合物の製造法。
10. １０．ホルムアルデヒドが２−５重量／容量％（ｗ／ｖ）の濃度で使用される、 請求の範囲第９項記載の方法。
11. １１．さらに再結晶化工程を含んで成る、請求の範囲第９または１０項記載の方 法。
12. １２．一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ式中Ｘはフッ素または塩素である のハルゲン化シアヌルを、式Ｒ１ＮＨ２またはＲ１Ｒ２ＮＨ２（式中、Ｒ１およ びＲ２は請求の範囲第１項に定義されたものである）のアミンと、随意にフッ化 セシウムの存在下で反応させることを含んで成る、請求の範囲第４項記載の化合 物の製造法。
13. １３．ハルゲン化シアヌルを２種類のアミンで連続的に処理する請求の範囲第１ ２項記載の製造法。
14. １４．治療を必要とする患者に、請求の範囲第１、２、または３の化合物、ある いは請求の範囲第７項の組成物を有効量で投与することを含んでなる、ガンの治 療法。