【発明の詳細な説明】
ヒベルナリス）の毒液中に見出されるポリペプチド、並びにこのポリペプチドと
実質的に同じアミノ酸配列及び実質的に同じ活性を有するポリペプチドに係わる
。これらのポリペプチドとその薬剤学的に許容可能な塩は、無を推動物及びを推
動物を含めた様々な生物のニューロン細胞及び筋細胞などの細胞のカルシウムチ
ャンネルを閉鎖する。本発明は、上記ポリペプチドとその塩の、生物の神経系及
び筋系内の細胞などの細胞のカルシウムチャンネルの閉鎖へのそれ自体の使用、
並びに哺乳類のカルシウムチャンネル媒介疾患及び状態の治療への使用にも係わ
る。本発明は更に、上記ポリペプチドとその塩を含有する組成物に係わる。
カルシウム拮抗薬である化合物には様々な効用が有る。
カルシウム拮抗薬は、特にアンギナ、高血圧症、心筋障害、上室性不整脈、食道
弛緩不能症、早期分娩及びレイノー病などの状態の治療において臨床的に適用さ
れ得る。その教示が本明細書に参考として含まれるＷ、 Ｇ、 Ｎａｙｌｅｒ、
Ｃａｌ−ｃｉｕＬＩＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ、＾ｃａｄｅｉｉｃ Ｐｒｅｓｓ
、 Ｈａｒｃｏｕｒｔ Ｂｒａｃｅ Ｊｏ−ｖａｎｏｖｉｃｈ Ｐｕｂｌｉｓｈ
ｅｒｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 ＮＹ １９３３を参照されたい。
更に、上記のような化合物はニューロン細胞及び筋細胞などの細胞の生理学的研
究にも有用である。
発明の概要
本発明は、クモＦｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓの毒液中に存在する
ことが判明したポリペプチドに係わる。本発明のポリペプチド、及び該ポリペプ
チドに含まれる本発明による部分配列は次のとおりである。
１ 次のＮ末端アミノ酸配列（配列番号１）を有するＦｉｌｉｓｔａ−ｔａペプ
チド１０
ＳＥＱ １０ ＮＯ：１゜
Ｈ２Ｎ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−１１ｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−
Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−１１ｓ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ|Ａｒｇ−Ｃｙｓ−
Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＡｒＱ−ｏｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙ！−
ＧＩｕ−Ｌｙｉ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｏｙｓ−ＡｒＱ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−ＡｒＱ−
８ｏｒ|Ｔｈｒ−ＡｒＱ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−、−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｒ
ｐ−８＠ｒ−８ｏｒ−Ｔｙｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｙ
ｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｍｏｆ|ＨＩｓ−Ａｒｇ−ｊｌｅ−Ａｓｐ−
Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−８ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−
Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｃｏ２Ｈ■９次のＮ末端アミノ酸配列（配列番号２）
を有するＦｉｌｉｓｔａ−ｔａペプチド１２
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２゜
Ｏｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ａｔａ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−
Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−ｇ−Ｖ≠戟|Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ−Ｌｙｓ−
■９次のＮ末端アミノ酸配列（配列番号３）を有するＦｉｌｉｓｔａ−ｔａペプ
チド１３−１
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３゜
Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−工ｒｐ−Ｖａｌ−ＧＩｕ−Ｖａｔ−Ａｓｎ−
Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−９ｅｒ−Ｔｒｐ|３ｅｒ−ＧＩｎ−
＃ｇ−１１ｅ−
Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−＃ｇ−Ａｔａ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−８ｏｒ−Ｏｙｓ−Ｌ
ｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−ＧＩｎ−Ｃｏ□Ｈ■１次のＮ末端アミ
ノ酸配列（配列番号４）を有するＦｉｌｉｓｔａ−ｔａペプチド１３−２
ＳＥＯｌ０ＮＯ：４゜
１−１−１２Ｎ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−トＶａｌ−Ｇ Ｉｙ−Ａｓ
ｐ−Ｔｈｒ−５＠ｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ｋｇ−Ｌ■普|Ｇ７−Ａｒｇ
−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−
Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−
Ｇｌｎ−Ｇｌｎ七ｅｕ−８ｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−uａｌ−Ｇｌｙ−Ａ
ｒｇ七ｙｓ−
Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｏｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−ＧＩｕ−Ｖａｔ−Ａｓｎ−
Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−５ｏｒ−ＴｒｐSｅｒ−ＧＩｎ＃ｇ
−ＩＩｅ−
Ａｓ ｐ−Ａｓ ｐ−Ｔｒｐ−ｋｇ −Ａｔ ａ −Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ
−Ｃｙ ｓ −Ｌｙｓ −Ｃｙｓ −Ｐｒｏ−Ｇｌｕ −Ａ唐吹@−Ｇ Ｉｎ
−Ｃｏ 、Ｈ
■１次のＮ末端アミノ酸配列（配列番号５）を有するＦｉｌｉｓｔａ−ｔａペプ
チド■３−３
ＳＥＯ１０ＮＯ：５゜
＃ｇ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−ＧＩｙ−Ｔｒｐ−Ｖａｔ−Ｇｌｕ−Ｖａｔ−Ａｓｎ−Ｃ
ｙｓ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Tｅｒ−Ｇｌｎ−Ａ
ｒｇ−１１ｅ−
〜ｓｐ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ −Ａｌ ａ−Ａｓ ｐ−Ｔｙｒ−８ｏｒ−Ｃ
ｙｓ七ｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕφａｐ−Ｇｌｎ−ＣｏAｌ−４
■９次のＮ末端アミノ酸配列（配列番号６）を有するＦｉｌｉｓｔａ−ｔａペプ
チド１３−４
５ＥＱＩＱＮＯ＋６゜
ト１．Ｎ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−フｙｓ−Ｖａド＾５ｎ４１ｅ−Ｔｙｒ−Ｇｉｎ−Ｐ
ｒｏＣｙｓ−８ｅｒ−＾５ｎ−ｎｅ−Ｇｔｙ−Ｌｅｕ−ＡｒX−フ４−１つｐ−
Ｔｐ−
Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ七−−Ｇｌｕ（ｙｓ−Ｌｍｕ
−８ｓｒ−Ｃｙｓ−Ａｔｇ−Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｖａ戟|Ｔｒｙ−Ａｒ９
や−・
ｋＱ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−８ｏｒ−８ｓｒ−Ｔｙｒ−Ａｓト准−
Ｌｙｓ４−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｍｍ−ＨＩｓ|Ａｒ９−ＩＩｅ−
Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−８ｅｒ−Ｏｙｓ−
Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−ＧｌｕＣＯ，ｌ−４部１次のＮ末端アミノ酸配列（配
列番号７）を有するＦｉｌｉｓｔａ−ｔａペプチド１４−１
ＳＥＱ ＩＣ） ＮＯニア。
本発明のポリペプチドは細胞のカルシウムチャンネルを閉鎮する。従って、本発
明のポリペプチドはそれ自体で細胞のカルシウムチヤンネルの閉鎖に有用である
。本発明のポリペプチドはまた、有害熱を推動物の防除、並びに細胞のカルシウ
ムチャンネル機能によって媒介される哺乳類の疾患及び状態の治療に有用である
。
上述のポリペプチドと実質的に同じアミノ酸配列及び実質的に同じカルシウムチ
ャンネル閉鎖活性を有するポリペプチドも本発明の範囲内である。
本発明は、これらのポリペプチドを含有する医薬組成物、及びこれらのポリペプ
チドの投与方法にも係わる。
発明の詳細な説明
毒液はクモＦｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓから、当業者に良く知ら
れた標準的方法に従い電気的刺激による抽出過程を経て取得する。用いる方法は
、全毒液を腹からの吐出物（ａｂｄｏ−■１ｎａｌ ｒｅｇｕｒｇｉｔａｎｔ）
または血リンパによる汚染から保護するものであることが好ましい。このような
方法は当業者に良く知られている。上記のようにして得た全毒液は、以下に説明
する精製に用いる時まで約−７８℃で凍結状態で貯蔵する。全毒液からの成分精
製は、Ｃ−４及びＣ−１８Ｖｙｄａｃ （登録商標）カラム（Ｒａｉｎｉｎ Ｉ
ｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ、 Ｉｎｃ、、 Ｍａｃｋ Ｒｏａｄ。
Ｗｏｂｕｒｎ、 Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ ０１８０１）などの様々な分取
型及び半分成型カラムでの逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によ
って実施する。ピーク検出は２２０〜２３０ｎ−の単色光によって行なう。例え
ばＷａｔｅｒｓ ９９０ダイオードアレイ検出器（ｉｌｉｌＨｐｏｒｅ Ｃｏｒ
ｐｏｒａｔｉｏｎ、 ｆａｔｅｒｓ ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＤｉｖｉｓ
ｉｏｎ、 ３４ Ｍａｐｌｅ ５ｔｒｅｅｔ、 Ｍｉｌｆｏｒｄ、 １ｌａｓｓ
ａｃｈｕｓｅｔｔｓ０１７５７）で収集した多色ＵＶデータを用いて両分を更に
分析することも可能である。ｌ５ＣＯ／“ＦＯＸＹ”フラクシジンコレクター及
びｌ５ＣＯ２１５９ピーク検出器（ＩＳＣｏ、 ４７００５ｕｐｅｒｉｏｒ。
Ｌｉｎｃｏｌｎ、 Ｎｅｂｒａｓｋａ ６８５０４）を用いるなどの公知方法に
よってカラムから両分を集める。両分は滅菌ポリエチレン実験用具などの、適当
な寸法の容器に集める。集めた両分を溶離液から凍結乾燥し、次いで水から凍結
乾燥することによって濃縮する。得られた成分画分の純度は、両分の最終精製で
用いた系よりもアイソクラチックな勾配系を伴う分析用カラムを用いるクロマト
グラフィー分析によって測定し得る。
本発明のポリペプチドは公知方法に従って配列決定される。−次構造を決定する
通常の方法は、例えば次のような諸段階を含む。１）ジスルフィド架橋したシス
ティン残基を還元及びＳ−ピリジル化して、酵素作用を受けやすくする。
２）ペプチドを単段または多段酵素消化によって制御下に切断する。３）ペプチ
ドフラグメントを逆相高性能液体クロマトグラフィー（［ＩＰＬＣ）によって単
離精製する。４） Ｎ末端配列決定及びイオンスプレー質量分析によってペプチ
ドフラグメントの特徴を明らかにする。
調べるポリペプチドのシスティン残基のＳ−ピリジルエチル化を、例えば溶液の
状態で行ない、その後ポリペプチドのアミノ酸配列決定を行なうことも可能であ
る。上記Ｓ−ピリジルエチル化の一方法は、以下に述べるようなものであり得る
。
約１〜１０μｇのポリペプチドを、４ｄのＥＤＴ＾を含有するｐＨ８，５のＩＭ
Ｉ−リスＨＣＩ １部と、■塩酸グアニジン３部とを混合して製造した５０μ−
までの緩衝液に溶解させるか、または該緩衝液で稀釈する。２．５μｌの１０％
水性２−メルカプトエタノールを添加し、混合物を２時間アルゴン下の暗闇中で
室温に保温（ｉｎｃｕｂａｔｅ）する。保温後、２μｌの４−ビニルピリジン（
−２０℃でアルゴン下に貯蔵しておいた新しい試薬）を添加し、混合物を更に２
時間アルゴン下の暗闇中で室温に保温する。その後、混合物を、好ましくは短い
逆相カラムでのクロマトグラフィーによって脱塩する。回収したアルキル化ポリ
ペプチドを公知方法に従って配列決定する。
本発明を実施し、かつ先に概説した通常の方法を用いるうえで、毒液の最初の分
画に適したカラムは半分電型ボリスルホエチルアスパルタミドカラム（Ｐｏｌｙ
ＬＣ９，４ｘ ２００５ｍ、５μ）であることが判明した。このカラムを、８２
０％、Ｃ８０％及びＤθ％で始まり、８２０％、００％及びＤ ８０％で終わる
、４５分間にわたる三相直線濃度勾配プログラム（ＢはＣＨＩＣＮ、 ＣはｐＨ
４，５の５ｍ１ｌ Ｈ３ＰＪ／８１０、ＤはＣ＋ ＩＩ ＮａＣ１）を用いて流
速３．５ｍ／／分で溶離し、２２０ｎ■で検出する。その後所望の画分を、例え
ば実施例に示したように０．１％トリフルオロ酢酸及びＣＨ３ＣＮでの二相直線
濃度勾配プログラムを用いて流速１５ｍ（／分で３００人、２２Ｘ ２５０ｍ５
のＶｙｄａｃ （登録商標） Ｃ−１８などの逆相ＨＰＬＣカラムに適用するこ
とにより更に精製し得る。
Ｆｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ由来の毒液の、配列番号１〜７の画
分１０．１２．１３−１％１３−２．１３−３．１３−４及び１４−１中にそれ
ぞれ存在するペプチドに関し本明細書の開示が為されたので、今や前記ペプチド
を全毒液からの単離／精製による以外の方法で得ることができるようになった。
本発明のポリペプチドは、該ポリペプチドまたはその一部をコードする配列のク
ローニングによる組み換えＤＮＡ技術を用いて製造し得る。例えば、本発明のポ
リペプチドにより明らかとなったアミノ酸配列情報を利用すれば、／Ｎイブリダ
イゼーシコンブローブを当業者に良く知られた方法に従って用いて、ポリペプチ
ド全体をコードする配列をクローニングすることができる。本発明のポリペプチ
ドの製造に、組み換えＤＮＡ技術とｉｌ ｖｉｔｒｏタンパク合成とを組み合わ
せて用いることも可能である。そのようなｉｎ ｖｉｔｒｏタンパク合成法には
、標準的なＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ法、または当業者に良く知られた他の固相法を
用いる＾ＢＩ ４３０＾固相ペプチド合成装置（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔ
ｅｓｓ、Ｉｎｃ、、８５０ Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｃｅｎｔｅｒ Ｄｒｉｖｅ、Ｆｏ
ｓｔｅｒＣｉｔｙ、 Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ ９４４０４）の使用が非限定的に
含まれる。
ポリペプチドにおいて該ポリペプチドの機能に影響しないか、または実質的に影
響することなく幾つかのアミノ酸置換が起こり得ることは、この分野では良く知
られている。
実際に起こり得る置換はポリペプチド毎に様々である。許容可能な置換は当業者
に良く知られた方法に従って確認される。即ち、実質的に同じアミノ酸配列及び
実質的に同じカルシウムチャンネル閉鎖活性を有するポリペプチドは総て本発明
の範囲内である。
本発明のポリペプチドは、無を椎動物及びを椎動物の神経系及び筋系内の細胞な
どの様々な細胞に存在するカルシウムチャンネルを不可逆的に閉鎖する。
本発明のポリペプチドのカルシウムチャンネル閉鎖能は、以下の操作によって評
価される。８日齢ラットの小脳から小脳顆粒細胞を得る（Ｗｉｌｋｉｎら、 Ｂ
ｒａｉｎ Ｒｅｓ、 １１５． ｐｐ、 １８１−１９９．１９７６）。＾ｃｌ
ａｒ （Ｐｒｏｐｌａｓｔｉｃｓ Ｉｎｃ、、 ５０３３ Ｉｎｄｕｓｔｒｉ−
ａ１＾ｖｅ、、 Ｗａｌｌ、 ＮＪ ０７７１９）の正方形片（１ｃｍ＋’）を
ポリＬ−リジンで被覆し、１ｍｌのイーグルの基礎培地を入れた１２ウ工ル皿の
中に置く。細胞を解離し、６．２５Ｘ １０’細胞を含有するアリコートを、＾
ｃｌａｒの正方形片を収容した各ウェルに加える。ブレーティングの２４時間後
にシトシンβ−Ｄ−アラビノフラノンド（最終濃度１０μＭ）を添加する。６日
、７日及び８日培養した時点で細胞をｆｕｒａ２分析に用いる。（＾ｃｌａｒ正
方形片に付着した）細胞を、２μ關のｆｕｒａ２／ＡＭ （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｐｒｏｂｅｓ Ｉｎｃ、、 Ｅｕｇｅｎｅ、 ＯＲ９７４０２）を含有するＨＥ
ＰＥＳ緩衝液（ウシ血清アルブミン０．０１％、デキストロース０．０１％含有
；ｐＨ７，４；マグネシウム非含有）をｉｍｌ入れた１２ウ工ル皿に移す。細胞
を４０分間３７℃に保温し、ｆｕｒａ２／＾鼠含有緩衝液を除去して、替わりに
ｆｕｒａ２／＾菫を含有しない同じ緩衝液１■ｌを加える。石英キュベツトに、
２．０１１の予め加温した（３７℃）緩衝液を入れる。このキュベツト内にＡｃ
１ａｒ上の細胞を配置し、磁気攪拌機を具備した定温（３７℃）ホルダーにキュ
ベツトを挿入し、蛍光分光光度計（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎ
ｔＧｒｏｕｐ、 Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｎｎ５ｙｌｖａｎｉａ）で
蛍光を測定する。
蛍光信号は約２分掛けて安定させる。次に、試験化合物をリン酸緩衝溶液（ＰＢ
Ｓ： ｐＨ７，４）に適当濃度で溶解させたストック溶液５〜２０μｌをキュベ
ツトに添加する。各試験完了時に、Ｎｅｍｅｔｈら、Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅ
ｗ、２６２． ｐ、 ５１８８ （１９８７）の確立された操作を用いて蛍光信
号の補正とｆｕｒａ２／＾菖漏れの修正とを行なう。キレートカルシウムにイオ
ノマイシン（ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ）（３５μＭ）を添加することによって蛍光最
大値（Ｆｍａｘ）を、またその後ＥＧＴ＾（１２ｓＭ）を添加することによって
蛍光最小値（Ｆｍｉｎ）を測定する。このような操作を用いて、本発明のポリペ
プチドを添加した際に蛍光が減少することに基づき、本発明のポリペプチドによ
るカルシウムチャンネル閉鎖が起こったことが示される。本発明のポリペプチド
は、このアッセイを用いてのカルシウムチャンネル閉鎖に関して０．３ｎＭ未滴
の値を含めた低いＩＣ，。値を示す。それに比べて、市販されている２種の公知
カルシウム拮抗薬Ｎ１ｆｅｄｉｐｉｎｅ及びＶｅｒａｐａｍｉｌは３３％Ｍ及び
４．８００ｎＭのＩＣ，、値をそれぞれ有する。
本発明のポリペプチドはそれ自体でカルシウムチャンネル閉鎖物質として有用で
ある。従ってこの化合物は、有害無を椎動物の防除、及びアンギナ、高血圧症、
心筋障害、上室性不整脈、食道弛緩不蛯症、早期分娩及びレイノー病などの、哺
乳類において細胞のカルシウムチャンネル機能によって媒介される疾患及び状態
の治療にも有用である。
上記化合物は更に、神経系及び筋系の細胞を非限定的に含めた細胞の生理学的研
究において有用である。
本発明のポリペプチドの薬剤学的に許容可能な塩も、本発明の範囲内である。そ
のような塩は当業者に良く知られた方法で形成する。例えば、ポリペプチドの塩
基性塩（ｂａ−ｓｅ ５ａｌｔｓ）を通常方法に従って製造し得る。
本発明のポリペプチドを哺乳類に投与するべき場合、該ポリペプチドを単独で投
与しても、あるいはまた標準的な薬剤学的手法に則り医薬組成物中に、薬剤学的
に許容可能なキャリヤまたは稀釈剤と組み合わせて存在させて投与してもよい。
ポリペプチドは経口投与も非経口投与も可能であるが、非経口投与経路の方がポ
リペプチドには好ましい。
非経口投与には、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、皮下投与及び局所投与
が含まれる。
本発明のポリペプチドを経口で用いる場合は、この化合物を例えば錠剤もしくは
カプセル剤の形態で、または水性の溶液もしくは懸濁液として投与し得る。経口
使用のための錠剤の場合、通常用いられるキャリヤにはラクトース及びコーンス
ターチが含まれ、またステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤が通常添加される
。カプセル剤形態での経口投与ではラクトース及び乾燥コーンスターチが有用な
稀釈剤である。経口使用のために水性懸濁液が必要である場合は、活性成分を乳
化及び懸濁化剤と組み合わせる。所望であれば、何等かの甘味剤及び／または着
香料を添加することが可能である。
筋肉内、腹腔内、皮下及び静脈内使用の場合は普通、活性成分の滅菌溶液を調製
するが、この溶液のｐｉは適宜調節及び緩衝するべきである。静脈内使用では溶
質の総濃度を調節して、調製物を等強性とするべきである。
本発明のポリペプチドまたはその塩をヒトに用いる場合、毎日の投与量は通常処
方する医師が決定する。そのうえ、投与量は個々の患者の年齢、体重及び感受性
、並びに患者の症状の重篤度、及び投与する特定化合物の効力に従って様々とな
る。
本発明のポリペプチドまたはその塩を有害無を推動物の防除に用いる場合は、前
記ポリペプチドを有害無を推動物に直接投与するか、または有害無を推動物を取
り巻く環境に適用する。例えば、本発明の化合物を溶液として有害無を推動物に
吹き付けることが可能である。有害無を推動物の防除に必要な化合物量は無を推
動物の種類及び環境条件に従って様々となり、化合物を適用する者によって決定
される。
本発明のポリペプチドまたはその塩を細胞の生理学的研究に用いる場合は前記ポ
リペプチドを細胞に、当業者に良（知られた方法に従って投与する。例えば、本
発明のポリペプチドを適当な生理学的緩衝液中の細胞に投与し得る。
本発明の化合物の、上記のような研究で用いるのに適した濃度は１００μ關であ
る。しかし、上記のような研究における本発明のポリペプチドの濃度は１００μ
菫より高くても、またはるかに低くてもよい。化合物の投与量は当業者が良く知
られた方法に従って決定する。
以下の実施例は解説のためのものであり、本発明の範囲を限定すると解釈される
べきでない。
分取型ポリスルホニデル（ＰｏｌｙＬＣ９，４ｘ ２００ｍｍ、５μ）アスパル
タミドカラムに適用し、このカラムを、４５分掛けて８２０％、Ｃ８０％及びＤ
Ｏ％から８２０％、Ｃ０％及びＤ ８０％にする三相直線濃度勾配プログラム（
ＢはＣＨ３ＣＮ、 ＣはｐＨ４，５の５ｍＭＪＰＯ４／ＨｔＯ１ＤはＣ＋１Ｍ
ＮａＣ１）を用いて操作し、２２０ｒｖで検出し、流速を３．５ｍｌ／分とした
。３８．５分から４０分までにある所望の画分を集めた。貯溜画分を濃縮せずに
脱塩した。
Ｂ、 ３．３６０μＣの粗製毒液に由来する、上記ステップ＾の分画から得た物
質を逆相ＨＰＬＣカラム［Ｖｙｄａｃ （登録商標＞ Ｃ−１８，３００人、２
２Ｘ ２５０ｍｍ］に適用し、このカラムを、４２分掛けて＾８０％及び８２０
％から＾５６％及び８４４％にする二相直線濃度勾配プログラム（Ａは０．１％
トリフルオロ酢酸、ＢはＣＨ，ＣＮ）を用いて操作し、２２０ｒｖで検出し、流
速を１５ｍ１／分とした。１３分から１４分までにある所望の両分を集めた。各
回の相当分から得て貯溜した類似画分を凍結乾燥によって濃縮した。
ペプチド１０の構造を次の方法で決定及び証明した。Ｗａ−ｔｅｒｓ Ｐｉｃｏ
−Ｔａｇシステムを用いて、１〜１００ＩＯ１に対するＰＴＣ−アミノ酸分析を
反復して３回行なった。パルス−液相型シーケンサ−（ＡＢＩ社）において、生
のペプチドと還元／ピリジルエチル化ペプチドとの両方のＮ末端配列を決定した
。
５ＣＩ−ＥＸ ＡＰＩ ｍイオンスプレー質量分析計から質量スペクトル分析デ
ータを得た。
両方で得られたデータから、ペプチドｌＯの構造が下記のように確認される。
配列番号１ニア２残基、１２システイン、６ジスルフイド結計算質量＝ ８．６
９９．１８
実測質量＝８．６９８．３６ （イオンスプレー質量分析）推定ｐＩ＝８．０５
実施例２： ペプチド１２
Ａ、粗製Ｆｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ （Ｄｆ）毒液（〜８０μ
ｌ）を半分成型ポリスルホエチル（ＰｏｌｙＬＣ９，４Ｘ２００ｍｍ、 ５μ）
アスパルタミドカラムに適用し、このカラムを、４５分掛けて８２０％、Ｃ８０
％及びＤＯ％から８２０％、００％及びＤ ８０％にする三相直線濃度勾配プロ
グラム（ＢはＣ１３ＣＮＳＣはｐＨ４，５の５１ＩＩＭ■５Ｐｏ４／＋１２０、
ＤはＣ＋１Ｍ ＮａＣ１）を用いて操作し、２２０ｒｖで検出し、流速を３．５
ｍ／／分とした。３２分から３３分までにある所望の画分を集めた。貯溜画分を
濃縮せずに脱塩した。
Ｂ、 ３，３６０μｌの粗製毒液に由来する、上記ステップへの分画から得た物
質を逆相１１ＰＬｃカラム［Ｖｙｄａｃ （登録商標）Ｃ−１８，３００人、２
２Ｘ ２５０ｍｍ］に適用し、このカラムを、４２分掛けて＾８０％及び８２０
％からＡ ５６％及び８４４％にする二相直線濃度勾配プログラム（＾は０．１
％トリフルオロ酢酸、ＢはＣＢ、ＣＮ）を用いて操作し、２２０ｎｍで検出し、
流速を１５麿ｌ／分とした。１６分から１７分までにある所望の両分を集めた。
各回の相当分から得て貯溜した類似画分を凍結乾燥によって濃縮した。
ペプチド１２の構造を次の方法で決定及び証明した。Ｗａ−ｔｅｒｓ Ｐｉｃｏ
−Ｔａｇシステムを用いて、１〜１０ｎｌｌｏｌに対するＰＴＣ−アミノ酸分析
を反復して３回行なった。パルス−液相型シーケンサ−（ＡＢＩ社）において、
生のペプチドと還元／ピリジルエチル化ペプチドとの両方のＮ末端配列を決定し
た。
５ＣＩ−ＥＸ ＡＰＩ ｍイオンスプレー質量分析計から質量スペクトル分析デ
ータを得た。
ペプチド１２のＮ末端配列決定に適したピリジルエチル化誘導体は次のように製
造した。ペプチド１２（１００μｇ）をｌＯμｔの緩衝液（比１：３（７）ｆｉ
ｌｌ−！Ｊ、１．、ｐＨ８，４，４μＭ ＥＤＴＡ二塩１Ｍ酸及び８Ｍ塩酸グア
ニジン）に溶解させ、１．４１Ｍ （１０％ｖ／ｖ）の２−メルカプトエタノー
ルを緩衝液に加えた溶液２．４μ！で処理し、室温で３時間暗闇中に保持した。
次に反応混合物を、０．９３Ｍの４−ビニルピリジンを緩衝液に加えた溶液３．
７μばて処理し、暗闇中で１８時間室温に維持した。反応混合物を１８４ｕｌの
１０％ＣＨ，ＣＭ７Ｆ１．０で稀釈して）ＩＰＬＣカラム（Ｂａ−ｋｅｒ ｆＰ
ｃ−１８，４，６Ｘ ２５０ｍｍ）に適用し、このカラムを、３０分掛けて＾を
１００％から６５％、Ｂを０％から３５％にし、その後１５分掛けて＾を６５％
から４０％、Ｂを３５％から６０％にする二相直線濃度勾配プログラム（＾は０
．１％トリフルオロ酢酸、ＢはＣＨ，ＣＮ）を用いて操作し、２２０ｎｍで検出
し、流速を１．０ｍｌ／分とした。３２．５分から３３．５分までにある所望の
画分を集め、凍結乾燥によって濃縮した。（アミノ酸分析に基づく）およその収
量は８２．３６μｇであった。
両者で得られたデータから、ペプチド１２の構造が下記のように確認される。
配列番号２ニア４残基、１２システイン、６ジスルフイド結合。
計算質量＝８，７３９．３８ （酸）
実測質量＝ ８．７３８．４７±０．９８（イオンスプレー質量分析）推定ｐＩ
＝８．２０
分取型ポリスルホエチル（ＰｏｌｙＬＣ９，４Ｘ ２００ｍｍ、５μ）アスパル
タミドカラムに適用し、このカラムを、４５分掛けて８２０％、０８０％及びＤ
Ｏ％から８２０％、００％及びＤ １１１０％にする三相直線濃度勾配プログラ
ム（ＢはＣＩ（、ＣＮ、 Ｃはｐｌ＋４．５の５ｉ＋ＭＨｓＰ０４／ｆｆｚｏ、
ＤはＣ十ｌｉｔ ＮａＣＬ）を用いて操作し、２２０ｎ１１で検出し、流速を３
．５ｍ（／分とした。３４分から３５．５分までにある所望の画分を集めた。貯
溜画分を濃縮せずに脱塩した。
Ｂ、 ３，３６０μＣの粗製毒液に由来する、上記ステップ＾の分画から得た物
質を逆相ＨＰＬＣカラム［Ｖｙｄａｃ （登録商標）Ｃ−１８，３００人、２２
ｘ ２５０ｍｍ］に適用し、このカラムを、６０分掛けて＾７５％及び８２５％
から＾７０％及び８３０％にする二相直線濃度勾配プログラム（＾は０．１％ト
リフルオロ酢酸、ＢはＣ１１，ＣＮ）を用いて操作し、２２０ｒｖで検出し、流
速を１５１１１分とした。２５．５分から２８．５分までにある所望の両分を集
めた。
各回の相当分から得て貯溜した類似画分を凍結乾燥によって濃縮し、ペプチド１
３−１と１３−２との混合物を得た。
ペプチド１３−１の構造を次の方法で決定及び証明した。
Ｗａｔｅｒｓ Ｐｉｃｏ−Ｔａｇシステムを用いて、１〜１０ｎｍｏｌに対する
ＰＴＣ−アミノ酸分析を反復して３回行なった。パルス−液相型シーケンサ−（
ＡＢＩ社）において、生のペプチドと還元／ピリジルエチル化ペプチドとの両方
のＮ末端配列を決定した。５ＣＩ−ＥＸ ＡＰＩ ＩＩＩイオンスプレー質量分
析計から質量スペクトル分析データを得た。
ペプチド１３−１のＮ末端配列決定に適したピリジルエチル化誘導体は次のよう
に製造した。ペプチド１３−１（１５０μｇ）を１０μｌの緩衝液（比１：３の
１Ｍトリス、ｐＨ３，４，４μＭ ＥＤＴＡ二塩基酸及び８Ｍ塩酸グアニジン）
に溶解させ、１．４１ｍ１ （１０％Ｖ／りの２−メルカプトエタノールを緩衝
液に加えた溶液３．６５μｌで処理し、室温で３時間暗闇中に保持した。次に反
応混合物を、０．９３１１１の４−ビニルピリジンを緩衝液に加えた溶液５．９
１μｌで処理し、暗闇中で１８時間室温に維持した。反応混合物を２８０μＣの
１０％ＣＩ’ｌ、ＣＮ／Ｈ，Ｏで稀釈してＨＰＬＣカラム（Ｂａｋｅｒ ＷＰＣ
−１８，４，６Ｘ２５０ｍｍ）に適用し、このカラムを、３０分掛けて＾を１０
０％から６５％、Ｂを０％から３５％にし、その後１５分掛けてＡを６５％から
４０％、Ｂを３５％から６０％にする二相直線濃度勾配プログラム（＾は０．１
％トリフルオロ酢酸、ＢはＣＨ３ＣＮ）を用いて操作し、２２０ｎ−で検出し、
流速を１．０厘ｌ／分とした。３３分から３４．５分までにある所望の両分を集
め、凍結乾燥によって濃縮した。（アミノ酸分析に基づく）およその収量は７９
．４μｇであった。
ペプチド】３−１と１３−２とはその相同性ゆえに、イオン交換クロマトグラフ
ィーまたは逆相クロマトグラフィーでは分離しなかった。混合物の最初の配列決
定は初めの５０のアミノ酸が同じであることを明らかにして、完全な構造解明に
ペプチドの分解を利用することを示唆した。混合物をＧｌｕ−Ｃで消化して得ら
れたフラクションを配列決定し、更にｐＨ８，５のｌｌＩ塩酸グアニジン、０．
１１１トリス−ＨＣｌ中のトリプシンで消化した後質量スペクトル測定分析及び
配列決定を行なって、ペプチド１３−１の構造を下記のように確認した。
配列番号３ニア４残基、１２システイン、６ジスルフイド結合。
計算質量＝ ８．６５３．２６
実測質量＝ ８．６５２．５７±０．８７（イオンスプレー質量分析）推定ｐ［
＝ ７．６５
実施例４： ペプチドｌ３−２
上記実施例３に述べたようにして、フラクション１３−２の構造を確認した。
配列番号４ニア４残基、１２システイン、６ジスルフイド結合。
計算質量＝ ８．６８０．２９
実測質量＝ ８．６７８．６４±１．６４（イオンスプレー質量分析）推定ｐＩ
＝ ７．６５
分取型ポリスルホエチル（ＰｏｌｙＬＣ９，４ｘ ２００ｍｍ、 ５μ）アスバ
ルタミドカラムに適用し、このカラムを、４５分掛けて８２０％、Ｃ８０％及び
Ｄθ％から８２０％、Ｃ０％及び０８０％にする三相直線濃度勾配プログラム（
ＢはＣＩ、ＣＮ、 ＣはｐＨ４，５の５ｍＭＨ＊ＰＯｄＨ＊Ｏ１ＤはＣ＋ ＩＭ
ＮａＣ１）を用いて操作し、２２Ｑｎ＊で検出し、流速を３．５ｍｌ／分とし
た。３４分から３５．５分までにある所望の両分を集めた。貯Ｉｆ画分を濃縮せ
ずに脱塩した。
Ｂ、 ３．３６０μｌの粗製毒液に由来する、上記ステップ＾の分画から得た物
質を逆相ＨＰＬＣカラム［Ｖｙｄａｃ （登録商ｍ＞ｃ−１８，３００人、２２
Ｘ ２５０ｎ１ｍ］に適用し、このカラムを、６０分掛けて＾７５％及び８２
５％から＾７０％及び８３０％にする二相直線濃度勾配プログラム（Ａは０．１
％トリフルオロ酢酸、ＢはＣＯ，ＣＮ）を用いて操作し、２２０ｒｖで検出し、
流速を１５ｍ１／分とした。２９分から３１分までにある所望の両分を集めた。
各回の相当分から得て貯溜した類似画分を凍結乾燥によって濃縮した。
ペプチド１３−３の構造を次の方法で決定及び証明した。
ｆａｔｅｒｓ Ｐｉｃｏ−Ｔａｇシステムを用いて、１〜ｌｏｎｍｏｌに対する
ＰＴＣ−アミノ酸分析を反復して３回行なった。パルス−液相型シーケンサ−（
ＡＢＩ社）において、生のペプチドと還元／ピリジルエチル化ペプチドとの両方
のＮ末端配列を決定した。５ＣＩ−ＥＸ ＡＰＩ Ｉｆｔイオンスプレー質量分
析計から質量スペクトル分析データを得た。
ペプチド１３−３のＮ末端配列決定に適したピリジルエチル化誘導体は次のよう
に製造した。ペプチド１３−３（３００μｇ）を２０μｌの緩衝液（比１：３の
１Ｍトリス、Ｉ）Ｈ８，４，４μＭ ＥＤＴ＾二塩基酸及び８Ｍ塩酸グアニジン
）に溶解させ、１．４１Ｍ （１０％ｙ／ｖ）の２−メルカプトエタノールを緩
衝液に加えた溶液７．２８μｔで処理し、室温で３時間暗闇中に保持した。次に
反応混合物を、１０％Ｖ／Ｖの４−ビニルピリジンを緩衝液に加えた溶液１１．
１９μｌで処理し、暗闇中で１８時間室温に維持した。
反応混合物を１％ＴＦ＾／Ｈ３０で稀釈して６００μｌとしたものを１１ＰＬＣ
カラム（Ｂａｋｅｒ ｆＰｃ−１８，４，６Ｘ ２５０ＩＩｍ）に適用し、この
カラムを、３０分掛けて＾を１００％から６５％、Ｂを０％から３５％にし、そ
の後１５分掛けて＾を６５％から４０％、Ｂを３５％から６０％にする二相直線
濃度勾配プログラム（＾は０．１％トリフルオロ酢酸、ＢはＣＨ８ＣＮ）を用い
て操作し、２２０ｎｍで検出し、流速を１．０ｗ１Ｉ分とした。３４分から３５
分までにある所望の両分を集め、凍結乾燥によって濃縮した。（アミノ酸分析に
基づく）およその収量は１９４μｇであった。
両方で得られたデータから、ペプチド１３−３の構造が下記のように確認される
。
配列番号５ニア４残基、１２システイン、６ジスルフイド結合。
計算質量＝ ８．６６８．２９
実測質量＝８，６６８ （イオンスプレー質量分析）推定ｐｉ＝ ７．６５
分取型ポリスルホエチル（ＰｏｌｙＬＣ９，４Ｘ ２００■−１５μ）アスパル
タミドカラムに適用し、このカラムを、４５分掛けて８２０％、０８０％及びＤ
Ｏ％から８２０％、００％及び０８０％にする三相直線濃度勾配プログラム（Ｂ
はＣＩ、ＣＮ、 ＣはｐＨ４，５の５ｍＭｆｌｓＰＯｉ／ＬＯ１ＤはＣ＋１Ｍ
ＮａＣ１）を用いて操作し、２２０％ｍで検出し、流速を３．５ｍＮ／分とした
。３４分から３５．５分までにある所望の画分を集めた。貯溜画分を濃縮せずに
脱塩した。
Ｂ、 ３，３６０μｌの粗製毒液に由来する、上記ステップ＾の分画から得た物
質を逆相ＨＰＬＣカラム［Ｖｙｄａｃ （登録商標）Ｃ−１８，３００人、２２
ｘ ２５０ｍ＋ｅ］に適用し、このカラムを、６０分掛けて＾７５％及び８２５
％から＾７０％及びＢ ３０％にする二相直線濃度勾配プログラム（＾は０１％
トリフルオロ酢酸、ＢはＣＩ’１３ＣＮ）を用いて操作し、２２０ｎ■で検出し
、流速を１５■ｔ／分とした。２２分から２２．５分までにある所望の画分を集
めた。各回の相当分から得て貯溜した類似画分を凍結乾燥によって濃縮した。
ペプチド１３−４の構造を次の方法で決定及び証明した。
ｆａｔｅｒｓ Ｐｌｃｏ−Ｔａｇシステムを用いて、１〜ｌＯｎｗｏｌに対する
ＰＴＣ−アミノ酸分析を反復して３回行なった。パルス−液相型シーケンサ−（
ＡＢＩ社）において、生のペプチドと還元／ピリジルエチル化ペプチドとの両方
のＮ末端配列を決定した。５（Ｊ−ＥＸ ＡＰＩ ＩＩＩイオンスプレー質量分
析計から質量スペクトル分析データを得た。両方で得られたデータから、ペプチ
ドｌ３−４の構造が下記のように確認される。
配列番号６：７２残基、１２システイン、６ジスルフイド結合。
計算質量＝ ８．６４０．１５
実測質量−Ｊｔ、６４０ （イオンスプレー質量分析）推定ｐｉ＝ ７．８７
実施例７： ペプチド１４−Ｉ
Ａ、粗製Ｆｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ （ＤＷ）毒液（〜８０μ
０を半分歌聖ポリスルホエチル（ＰｏｌｙＬＣ９，４Ｘ２０Ｄｍｍ、 ５μ）ア
スバルタミドカラムに適用し、このカラムを、４５分掛けてＢ ２０％、Ｃ８０
％及びＤθ％から８２０％、００％及び０８０％にする三相直線濃度勾配プログ
ラム（ＢはＣＨ３ＣＮ、 ＣはｐＨ４，５の５■麺Ｈ，ＰＯ４／Ｈ，０、ＤはＣ
＋ ＩＭ ＮａＣ１）を用いて操作し、２２０ｔｖで検出し、流速を３．５ｍｌ
／分とした。２８分から２９分までにある所望の両分を集めた。貯溜画分を濃縮
せずに脱塩した。
Ｂ、 ３，３６０μｌの粗製毒液に由来する、上記ステップ＾の分画から得た物
質を逆相ＨＰＬＣカラム［Ｖｙｄａｃ （登録商標）Ｃ−１８，３００人、２２
ｘ ２５（１ｗｓ］に適用し、このカラムを、４２分掛けて＾８０％及び８２０
％から＾５６％及び８４４％にする二相直線濃度勾配プログラム（＾は０．１％
トリフルオロ酢酸、ＢはＣＩ、ＣＮ）を用いて操作し、２２０％ｍで検出し、流
速を１５ｍ１／分とした。１８分から１９．５分までにある所望の両分を集めた
。各回の相当分から得て貯溜した類似画分を凍結乾燥によって濃縮した。
ペプチドＩ４−１の構造を次の方法で決定及び証明した。
Ｗａｔｅｒｓ Ｐｉｃｏ−Ｔａｇシステムを用いて、１＝１０ｎｍｏｌに対する
ＰＴＣ−アミノ酸分析を反復して３回行なった。パルス−液相型シーケンサ−（
へ８１社）において、生のペプチドと還元／ピリジルエチル化ペプチドとの両方
のＮ末端配列を決定した。５ＣＩ−ＥＸ ＡＰＩ ｍイオンスプレー質量分析計
から質量スペクトル分析データを得た。
ペプチド１４−１のＮ末端配列決定に適したピリジルエチル化誘導体は次のよう
に製造した。ペプチド１４−１（１５０μｇ）を１０μ−の緩衝液（比１：３の
ｌ麗トリス、ｐＨ８，４，４μＭ ＥＤＴＡ二塩基酸及び８Ｍ塩酸グアニジン）
に溶解させ、１．４１１１ （１０％ｖ／ｖ）の２−メルカプトエタノールを緩
衝液に加えた溶液３．６５μｌで処理し、室温で３時間暗闇中に保持した。次に
反応混合物を、０．９３１の４−ビニルピリジンを緩衝液に加えた溶液５．９１
μｌで処理し、暗闇中で１８時間室温に維持した。反応混合物を２８０μ−の１
０％ＣＩ、ＣＮ／Ｈ，０で稀釈してＨＰＬＣカラム（Ｂａｋｅｒ ｆＰｃ−１８
，４，６Ｘ２５０＊＊）に適用し、このカラムを、３０分掛けて＾を１００％か
ら６５％、Ｂを０％から３５％にし、その後１５分掛けてＡを６５％から４０％
、Ｂを３５％から６０％にする二相直線濃度勾配プログラム（＾は０．１％トリ
フルオロ酢酸、ＢはＣｌ、ＣＮ）を用いて操作し、２２０ｎｓで検出し、流速を
１．０ｍｌ／分とした。３３分から３４．５分までにある所望の両分を集め、凍
結乾燥によって濃縮した。
このペプチドの配列は、残基５２までは明確に決定されている。ｐＦ１８．５の
１ｓＭ ＥＤＴ＾、２５１１Ｍ ）リス−ＨＣｌ中で、２０μｇの還元及びピリ
ジルエチル化ペプチドを２μｇのエンドプロテイナーゼＬｙｓ−Ｃで消化した。
配列決定及びイオンスプレー質量分析によって、ペプチド１４−１の一次構造の
全体を下記のように解明した。
配列番号７：７３残基、ｌＯシスティン、５二重結合。
計算質量＝ ８．３０８．０５
実測質量＝ ８．３０７．６７±０．５５（イオンスプレー質量分析）推定ｐＩ
＝８．１７
【配列表】
配列番号、■
配列の長さ＝７２
配列の型： アミノ酸
鎖の数二 −末鎖
トポロジー： 直鎖状
配列の種類： タンパク質
起源
生物名： Ｆｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ組織の種類： 毒液
配列
Ｇｌｙ Ｔｙｒ ５ｅｒ Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｃｙｍ Ｌｙｓ Ｇｌｕ６５ フ０
配列番号 ２
配列の長さ ７４
配列の型 アミノ酸
鎖の数、−末鎖
トポロジー 直鎖状
配列の種類、 タンパク質
起源
生物名 Ｆｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ組織の種類 毒液
配列
入１ａ Ｇｌｕ Ｃｙｍ Ｌ＠ｕ Ｍ＠ｔ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｔｈｘ
５ｅｒ ｅｙｓ Ｖａｌ Ｐｒｏ 入ｒｇ Ｌｓｕ Ｇｌｙｌ ５ １０ １ｓ
入ｒｇ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ｃｙｍ Ｔｙｒ Ｇｌｙ 入１ａ〒ｒｐ ｅｙｌｌ
Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ａｓｐ Ｇｉｎ Ｇｉｎ Ｌｓｕ ５＠ｒＣｙＩＩ 入ｒｑ
人ｒｇ ＶａＩ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｌｙｅ （：ｌｎ Ｇｉｎ Ｃｙｓ Ｇｕｙ
Ｔｒｐ 入ｒｇ Ｑｌｕ ＶａＩ Ａ唐■
３Ｓ ４０ ４５
Ｃｙ自 Ｌｙｓ ｅｙ−＾１ｐ 丁ｒｐ Ｓ＠ｒ Ｔｒｐ Ｓ＠ｔ Ｇｉｎ 入
ｒｇ Ｘ１＠ Ａｓｐ Ｍｐ Ｔｒｐ Ａｒｇ ＡｉａＳｏ ５５ ６０
Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｓｉｒ Ｃｙｓ ＬｙＩＩ Ｃｙｍ Ｐｒｏ （：ｌｕ 入ｓ
ｐ Ｇ１ｎ配列番号 ３
配列の長さニア４
配列の型・ アミノ酸
鎖の数、−末鎖
トポロジー 直鎖状
配列の種類・ タンパク質
起源
生物名： Ｆｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ組織の種類 毒液
配列
Ａｌａ Ｃ１ｕ Ｃｙｍ Ｌ＠ｕ Ｍｅセ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｌｐ丁ｈｒ Ｓ
＠ｒ Ｃｙ・ Ｖａｌ １ｌｒｏ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｇｌｙｌ Ｓ １０ ｉｓ
入ｒｇ ＾ｒ９ Ｃｙｓ Ｃｙｍ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｃｙｓ
Ｔｙｒ Ｃ’ｙ−＾−ｐ Ｇｉｎ Ｇｌｒ＋ Ｌｓｕ ５ｅ■
ｅｙｅ ＾ｒ９ 人ｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｙ ＾ｘｑ Ｌｙ−Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｃ
Ｙｍ Ｇｌｙ テｒｐ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｖａｌ ｋｖｓｎＣｙｓ ＬＹ＠ Ｃ
ｙｍ Ｇｌｙ Ｔｒｐ Ｓｕｒ Ｔｒｐ ｌｓ＠ｒ にｉｎ 入ｒｇ １１ｍ
Ａｓｐ Ａ＠ｐ Ｔｒｐ Ａｒｇ Ａ１■
人會ｐＴｙｒＢ＠ｒＣｙ＠ＬＹ＠ＣｙｓＰｒｏＯ１ｕλ＠ＰＧｉｎ６Ｓ 〕０
配列番号 ４
配列の長さ・ ７４
配列の型・ アミノ酸
鎖の数： 一本舗
トボロジー： 直鎖状
配列の種類： タンノ（り質
起源
生物名： ■Ｕ払畦り鳳曇二料」
組織の種類： 毒液
配列
Ｓｏ ５５ ６０
＾＊ｐ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｃｙｍ ＬＹ＠ ｅｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ａｓｐ
ＧＬｎ配列番号 ５
配列の長さ・ ７４
配列の型： アミノ酸
鎖の数・ 一本舗
トポロジー： 直鎖状
配列の種類： タンパク質
起源
生物名： Ｆｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ組織の種類： 毒液
配列
ＡＳＰ Ｔｙｒ ５ｅｒ Ｃｙｍ Ｌｙｅ Ｃｙｍ Ｐｒｏ ＧＬｕ＾＠Ｐ Ｇ
１ｎ６Ｓ ７０
配列番号＝ ６
配列の長さ＝７２
配列の型： アミノ酸
鎖の数二 一本舗
トポロジー 直鎖状
配列のｌｌｌ類 タンパク質
起源
生物名 Ｆｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ組織のＸ１ｍ類・ 毒７夜
配列
Ａｌａ Ｇｌｕ Ｃｙｓ ＶａＬ Ａｇｎ １１ｍ Ｔｙｒ Ｇｉｎ Ｐｒｏ
Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ａｇｎ Ｘ１ｍ Ｇｌｙ Ｌｅｕ λｘ９１ Ｓ １０ １５
ＣＹ會 （’ｙ−丁ｙｒ Ｇｌｙ Ａｌａ 入ｒｇｃｙ−Ｔｙｒ ｅｙｓ ＬＹ
−Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓａｒ Ｃｙｌ 人ｒ９Ｃγ−ＬＹ＠ ｅＹ−＾−
ｐ？ｙｒ Ｔｈｒ テｒｐ Ｍ・ｔ ）Ｉｋ−＾ｒｇ Ｘｉ・ ＡｊＰ ＡＳＰ
Ｔｒｐ ＸＪｕ ＾１ｐＳｏ ５５ ６０
Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｓｅｒ ｃｙｍ Ｔｙｒ Ｃｙｍ Ｌｙｓ Ｇｌｕ６５ フ０
配列番号 ７
配列の長さ、７３
配列の型： アミノ酸
鎖の数： 一本舗
トボロジー： 直鎖状
配列の種類： タンパク質
起源
生物名 Ｆｉｌｉｓｔａｔａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ組織の種類 毒液
配列
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｙｅ Ｃｙｓ Ｌｙｅ Ｌｅｕ Ｘｉｓ Ａｓｐ
Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｃｙｍ Ｓｓｒ Ａｇｎ Ｌｙｓ ＡｍｐＩ Ｓ １０ １ｓ
Ｐｒｏ Ｉｎ６ ！ｌａ Ｃｙｍ Ｃｙｍ Ｌｙｓ Ｇｌｙ 入１ａ ＾ｒｇ
Ｃｙｍ Ｖａｌ Ｃｙｍ Ａｇｎ Ａｓｐ Ｖａｌ ＾ｒ９Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔ
ｈｒ Ｓｅｒ ＬＹ口 ＡＳＰ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ 入ｒｇ λ自ｎ Ｘ
ｉｓ Ｐｒｏ Ａｌａ ｔｈｅ Ｖａ１人ｒｇ ＶａＬ Ｃｙｓ Ｌｙｅ Ｃｙ
−Ａｓｐ Ｔｒｐ ｆｓｅｔ テｙｒ Ｐｒｏ 入１ａ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｌｙ
ｅ Ａｓｐ ＬｅｕＳｏ ５５ ６０
＾１ａ 丁’ｈｒ Ｐｈｓ Ｐｈｅ Ａｇｎ Ｃｙｓ ｋｗ＋ｎ Ｃｙｓ ｌｒ
ｇ６５ フＯ
フロントページの続き
（７２）発明者 口ノー、ロバート・ティーアメリカ合衆国、コネテイカット・
０６３５５、ゲイルズ・フェリー、メイド・マリオン・ドライブ・６
（７２）発明者 サツコマノ、ニコラスアメリカ合衆国、コネテイカット・０６
３３９、レドヤード、ペイント・ミル・ドライブ・（７２）発明者 ボークマン
、ロバート・エイアメリカ合衆国、コネテイカット・０６３５５、ミスティック
、ドッグウッド・レーン・（７２）発明者 へツク、ステイーブン・ディーアメ
リカ合衆国、コネテイカット・０６３４０、グロトン、ミツチェル・レーン・２
５０、アパートメント・１１０