JPH07503714A

JPH07503714A - １α−ヒドロキシ−２４−ＥＰＩ−ビタミンＤ↓４

Info

Publication number: JPH07503714A
Application number: JP5513440A
Authority: JP
Inventors: クヌートソン　ジョイス　シー; モリアーティー　ロバート　エム; ペンマスタ　ラジュ; チャールズダブリュービショップ
Original assignee: ボーン　ケア　インターナショナル　インコーポレイテッド
Priority date: 1992-01-29
Filing date: 1993-01-29
Publication date: 1995-04-20
Anticipated expiration: 2014-07-28
Also published as: WO1993014763A1; AU3656193A; JP2927368B2; EP0631500A1; EP0631500B1; CA2129120A1; DE69318142T2; DE69318142D1; EP0631500A4; AU682817B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ｌα−ヒドロキシ〜２４−８円−ビタミンＤ。

技術分野本発明は、生物学的活性ビタミンＤ、化合物に関し、特に、新規なｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、及びその製造法並びにその合成段階で形成される中間体の製造法に関する。

発明の背景ビタミンＤは、ステロイド誘導体化合物の一種であり、動物及び人間のカルシウム代謝の調節にとって重要な化合物として知られている（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ：　Ｐａｒｔ　Ｅｌｅｖｅｎ、Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ　ｏｆ　Ｂｏｎｅ　ａｎｄ　Ｍｉｎｅ窒≠戟@Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、　Ｃｈａｐｔｅｒ　３３５．”　Ｅ、　Ｂｒａｕｎｍｌｄ　ｅｔ　ａｌ、、　（ａｄｓ、）、　ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、@Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９８７．　ｐｐ、　１８６０−１８６５）　。

動物及び人間の体内に自然に存在するビタミンの形態はビタミンＤＩである。

ビタミンＤ、は、動物及び人間の皮膚で体内的に合成される。動物では、人間も含めて、ビタミンＤ、は、肝臓でＣｔｓの位置をヒドロキシ基で置き換えられ、次いで腎臓でのｌα−ヒドロキシ基化でホルモンｌα、２５−ジヒドロキシビタミンＤＩを生成する事により活性化される（米国特許第３．８８０．８９４号）。

１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ、は、ビタミンＤ、のホルモン的活性形態である。このホルモンは、特定の細胞質受容体蛋白質により腸で摂取され、腸内腔から循環器系統へのカルシウムとリン酸塩の移動を刺激する。ビタミンＤ、ホルモンは又、副甲状腺、腎臓、遺骨細胞及びその他の目標組織で特定の細胞質受容体蛋白質により摂取され、細胞応答反応を誘発する。細胞応答反応は、共働的に、カルシウムとリン酸塩の血中濃度を安定化し、骨の形成及び除去を調節し、１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ、それ自身の更なる製造を調整する。１α −ヒドロキシ基は、１α、２５−ジヒドロキシビタミンＤ、とその特定の細胞質受容体との結合に重要である事が認められている。最近では、ビタミンＤ、ホルモンは、細胞の増殖及び分化で成る役割を演じる事が報告されている。ビタミンＤ。

は、植物中に見出されるビタミンＤの自然に存在する形態の最大のものである。

ビタミンＤ２は、Ｃ２１の位置にメチル基を有し、ＣｚｒとＣ２３との間に二重結合を有する点で、構造的にビタミンＤ、と相違する。そこで、研究の対象は、ビタミンＤ、とり、のヒドロキシル化及びジヒドロキジル化誘導体の発見並びに合成に絞られた。自然界に見出されており、又は合成もされているビタミンＤ、とＤｔのヒドロキシル化及びジヒドロキジル化代謝物質は、２５−ヒドロキシビタミンＤ７．２４．２５−ジヒドロキシビタミンＤ、、２５．２６−ジヒドロキシビタミンＤ１、ｌα−ヒドロキシビタミンＤ！、２３．２５−ジヒドロキシビタミンＤ、を含み、その全てが、生体内で、ビタミンＤ類似の生物学的活性を示す事が見出されている。

これら多くの活性ビタミンＤは、治療薬として大いに期待されたが、この期待は完全には実現化されていない。それは、これらの薬が極端な毒性を持つからである。例えば、毒性は、ビタミンＤ、の効能、その活性形態及び類似体の効力、即ち骨の損失を防ぎ又は失われた骨を再生するといった効力を制限する。骨の損失又は再生を効果あらしめる為のこの薬の必要投与では、高カルシウム血症及び高カルシウム血症が深刻な問題である事が多くの研究で示されている。ｌα−ヒドロキシビタミンＤ、を毎日２μｇ／日（この投与量は、骨の損失防止に効果的であることが幾つかの研究で示されている）投与すると、患者の凡そ６７％が中毒にかかる事が報告されている。

ビタミンＤ、は、ビタミンＤの内ではその量が僅かである事が知られている形態である。ビタミンＤＩは１９３６年に最初に報告された（Ｇｒａｂ、　Ｗ、、　Ｚ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　ＣｈｅＩＬＬ、　２４３：６３　（＋９３６）；　ＭｃＤｏｎａｌｄ、　Ｆ、　Ｇ、、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　１１４：ＩＶＸ　i１９３６）；　Ｗｉｎｄａｕｓ、Ａ、ａｎｄ　ＴｒａｕＬｍａｎｎ、Ｇ、、Ｚ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｃｈｅａｈ、２４７：１８５−１８８　（１９３７））　ｏ　r タミンＤＩは、照射された２２．２３−　）ヒドロエルゴステロール又は２２．２３−ジヒドロビタミンＤ２又は２２．２３−ジヒドロエルゴカルシフェロールとして知られており、Ｃ２１のメチル基を含むビタミンＤ、とは、相違する。上記引用文献では、このビタミンＤの生物学的活性のレベルが一致しない。鼠を使っての実験では、ビタミンＤ、は、ビタミンＤ、の活性の１／３か３７４であり、雛では、ｌ／１０か又は１１５である。

１９６８年に、デル力等（ＤｅＬｕｃａ　ｅｔ　ａｌ、）（Ａｒｃｈ、　ＢｉｏｃｈｅｆｆＬＢｉｏｐｈｙｓ、、　１２４：１２２−１２８（１９６８）は、ビタミンＤ４はビタミンＤ、より活性が小さい事を確認した。デル力等は、ビタミンＤ、は、鼠ではビタミンＤ、又はビタミンＤ、の活性の２７３であり、雛ではビタミンＤ、の活性の１７５である事を報告している。

デル力等は、ビタミンＤ４の合成は、それがＷｉｎｄａｕｓとＴｒａｕｔｍａｎｎにより記述されたのが最初であることから殆ど使用されなかった事実を引用し、モして［これは多分、ビタミンＤ、が学問的研究対象に過ぎないという事実によるものである」と注釈している。ビタミンＤ、が学問的研究対象に過ぎなかったという事がデル力等によって報告されて以来、出願人としては、このビタミンＤ１こついてのそれ以上の研究を知らない。事実、メルクインデックス（Ｍｅｒｃｋ　Ｉｎｄｅｘ）は、このビタミンＤ、について、　「その生物学的活性は疑わしく思われる」と述べている（Ｍｅｅｋ　Ｉｎｄｅｘ、　Ｓ、　Ｂｕｄａｖａｒｉ　（ｅｄ、）、　１ｌＬｈ　ｅｄ、、　Ｍｅｒｃｈ　＆　Ｃｏ、、　Ｒａｈｗａｙ、@Ｎ、　Ｊ、。

（１９８９）　ｐｐ、　１５７９．　＃９９３０）。

ビタミンＤ４の類似体についてもあまり関心はもたれていなかった。然しなから、最近、ビタミンＤ４の類似体、ｌα−ヒドロキシビタミンＤ４が、出願人により合成され、予期せぬ高い生物作用能と低い毒性を有する事が示された（米国特許出願第５８６．８５４号、　１９９０年９月２１日出願）。このビタミンＤ、類似体が、ビタミンＤ、及びビタミンＤ２相応の活性を持つという事は、驚くべき事であった。

出願人は、本発明において、同じく驚くべき生物学的活性を持つｌα−ヒドロキシビタミンＤ、の関連異性体を合成した。

発明の要旨本発明の目的は、ビタミンＤ４の立体異性体、１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ −ビタミンＤいこの化合物のトンル化及び環状誘導体及びこれら化合物の製造法を提供することである。

本発明の１つの目的は、以下に定義する式（１）の化合物を提供することである。１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ１、式（１）の化合物（式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれヒドロキシ基である）は、生物活性のある事が見出された。式（Ｉ）に包含される他の化合物は、１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４の合成において、新規な中間体である事が見出された。

本発明の他の目的は、■α−ヒドロキシー２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、の合成において、新規な中間体である事が見出された式（１１）の化合物を提供することである。

本発明の更なる目的は、ｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、の合成工程を提供することである。この方法は、出発物質としてカンペステロールを含み、この物は、２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、に転化し、これは更に２４−ｅｐｉ −ビタミンＤ、のトシル化及び環状誘導体を経てｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４にヒドロキシル化される。カンペステロールの誘導体は又新規な中間体である事が見出された。

以下の実施例並びに添付図面によって、本発明のその他の利点及び特定の適応、組成的変更及び物理的、化学的挙動についての完全な理解が得られるであろう。

図面の簡単な説明本発明は、以後添付図面によって、その図面を参照しながら説明される。

図１は、カンペステロールを出発物質とした２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、の合成工程を示し、図２は、２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、を出発物質とした１α−ヒドロキシ−２４ −ｅｐｉ　−ビタミンＤ、の合成工程を示す。

詳細な説明本発明は、ｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４の合成並びのその化合物のトシル化及び環状誘導体の合成を提供するものである。

本発明においては、「生物学的活性」又は「生物学的に活性なＪとは、新陳代謝に及ぼす影響、例えば血清カルシウム濃度への影響或いは適当な受容体蛋白質への結合、例えばビタミンＤ受容体蛋白質への結合といった化合物の生化学的性質を示す事を意味する。本発明において又当該技術分野において使用されるｒｅｐｉ」なる言葉は、炭素原子についての異なる絶対配列、本発明においては、母体のビタミンＤ４構造におけるよりもＣ１１についての異なる絶対配置を示す事を意味する。

本発明はその一実施態様において、一般式（Ｉ）の化合物、及びそれらの塩、水和物及び溶媒和物を包含するものである。

（式中、Ｒ１は水素又はトシル基であり、Ｒ２は水素又はヒドロキシ基である）。式（１）の化合物のなかで好ましい化合物は、Ｒ３が水素で、Ｒ１がＯＨ１即ちｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４であり、この物は、血清カルシウムを増加させる事がわかった。

又、本発明は、式（１１）の化合物及びそれらの塩、水和物及び溶媒和物を提供するものである。

（式中、Ｒ３は水素又はヒドロキシ基の何れかであり、Ｒ４はメトキシ基である）。これらの化合物は、１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４の形成にあたって有用且つ新規な中間体である事がわかった。

更に、本発明は、式（１）及び（１１）の化合物並びに他の新規な中間体の製造法を含む。特に、ｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４の合成、即ちＲ，が水素で、Ｒ２がＯＨである式（１）の化合物の合成は、図１及び図２で示される模式図によって遂行される。図１でわかる通り、この合成は、出発物質としてステロイドカンペステロールを使用する。カンペステロールは、Ｔａｒｚｉａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｇａｚｚ、　Ｃｈｅｕ　Ｉｔａｌ、、　ｖｏｌ、　９７．　ｐｐ、　１０２−１０６　（１９６７）の方法で利用できる。カンペステロールは、４段階の工程でＣ１の臭素化、Ｃ，−Ｃ，のデヒドロ臭素化を受け、７− ジヒドロカンペステロールを生成する。７−ジヒドロカンペステロールは、次いで照射され、そして公知の方法で２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ　、　（２２，２３ −ジヒドｏ−２４−ｅｐｉ−エルゴカルシフェロール）に熱転化される。図Ｉでわかる通り、２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、は、次いで５段階の工程でｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、を生成する。

特に、カンペステロールはアセチル化されて、３β−アセテートを形成する。

このカンペステロールアセテートは、Ｃ１の臭素化、Ｃ，−Ｃ，のデヒドロ臭素化を受けてＣ，−Ｃ，で二重結合を形成する。得られた７−ジヒドロカンペステロールアセテートは、次いで新規な７−ジヒドロカンペステロールに還元される。この７−ジヒドロカンペステロールは、次いでトシル化されて、２４−ｅｐｉ −ビタミンＤ４の３β−トシレートを生成する。このトシレートは、加溶媒分解によって２４−　ｅｐ　ｉ−３，５−シクロビタミンＤ４に置き換えられる。この２４−ｅｐｉ　−シクロビタミンＤ、は、アリル酸化にかけられてｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−シクロビタミン誘導体を生成する。この１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−シクロビタミン誘導体は、順次加水分解され、ディールスアルダー型反応にかけてＧ−メトキシ基を除去し、５．６−トランス−１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、から１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、（５，６シス）を分離する。トランス異性体は、若し所望ならば、例えばＤｅＬｕｃａ　ｅｔ　ａｌ、の米国特許第４．７１９．２０４号記載の方法で高圧液体クロマトグラフィーでンス異性体から分離しても良い。

１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４は、生理学的活性、即ち血清カルシウム濃度増加剤の如き活性を有する事がわかった。特に、この化合物は、ビタミンＤ不足の鼠の血清カルシウム濃度を増加する。この様に、本発明の化合物は、様々な臨床及び獣医学分野への応用が可能であり、特に、カルシウム及びリンの異常な代謝治療に有用である。

以下に本発明を、実施例を以て例示するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。実施例において、全ての温度は、特に指示しないがぎり摂氏度を示し、全ての生成物の収量は重量％である。プロトン核磁気共鳴（’Ｉ（ＮＭＲ）スペクトルは、内部標準としてＣＩ（ＣＩ　、を使ったＣＤＣｌ＋溶液中で、アスペクト３０００コンピューター付きＢｒｕｋｅｒ　ＡＭ−４００（４００１Ｊ）ｌｚ）で記録した、化学シフトはｐｐ釦で示される。紫外線スペクトルは日立ｌｌ−２０００スペクトロホトメーターで記録されたもので、エタノール溶液に対してのものである。

実施例１１α〜ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、の合成カンペステロールアセテート（２）無水ピリジン１８０ｍ１中のカンペステロール（１）の２４．０ｇ（０，０６モル）溶液に、１８゜５ｍｌ　（０，１９６モル）の無水酢酸を添加した。この混合物を、室温で一昼夜攪拌し、次いで、水６００ｍ１を添加した。沈殿物を濾過し、アセトニトリル２００＋ｎｌで３回洗浄し、次いで空気で乾燥して２０．０ｇの（２）を得た。

’ＨＮＭＲ：　（４００ＭＨｚ、　ＣＤＣｌ５）　、δｐｐｍ　０．７　（３Ｈ，ｓ、１Ｂ−ＣＨＩ）　、０．８　（６Ｈ、ｄｄ、２６及び２７−ＣＨｓ）　、０．８６　（３Ｈ，ｄ、２ｌ−ＣＨｉ）　、０．９２　（３ＨＳｄ、　２８−Ｃ）１ｍ）　、１．０２　（３ＨP ｓ、　１９−ＣＬ）　、２．０４　（３Ｈ，ｓ、０ＣＯＣＨ，）、４．６　（ＩＨ，ｍ、　３−ｔ（）、５．３８　（ＩＨ、ｍ、６−１０゜７−ジヒドロカンペステロールアセテート（３）乾燥へキサン中の、ｌｏｇ（０，０２３モル）の（２）　、４．５６ｇ（０，０１６モル）のジブロマンナン及び１０．２　ｇ　（０，１２１モル）の無水重炭酸ナトリウムの混合物を、還流下に、窒素雰囲気中で２時間加熱した。沈殿物を濾過し、溶液を減圧下に濃縮し、５０ｍ１の無水テトラヒドロフラン中のその残渣の溶液に、０．６５ｇ（２，０２ミリモル）のテトラブチルアンモニウムブロマイドを添加し、この混合物を窒素雰囲気下で、３０分間、室温で攪拌した。次いで、テトラブチルアンモニウムフルオライド（１］、ＺｍＬＴＨＦ中でＩＭ）を添加し、５．０ｍｌのＳ−コリジンを添加後、この混合物を窒素雰囲気下で、室温で一昼夜攪拌した。この反応混合物にエーテル７００ｍ１を添加し、有機相を水２００ｍ１で二重、冷１Ｍ塩酸２００ｍ１で二重、更に１０％重炭酸ナトリウム２００ｍ１で二重洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ヘキサン中の１０％酢酸エチルのシリカゲルクロマトグラフで、５．５ｇ（５５Ｘ）の（３）が得られた。

’ＨＮＭＲ：　（４００１＋［Ｈｚ、　ＣＤＣｌ＋）　、δｐｐｍ　０．６２　（３Ｈ、ｓ、１ｇ−ＣＨｊ）　、０．８　（６Ｈ、ｄｄ、２６及び２７−ＣＩｌ、＋）　、　０．８６　（３１１、ｄ、２ｌ−Ｃ１ｈ）　、０．９４　（３１（、ｄ、　２Ｂ−Ｃ１１３）　、０．９U　（３Ｈ。

７−ジヒドロカンペステロール　（４）乾燥エーテル５００ｍ１中の（３）の化合物５．５ｇ（０，０１２モル）の溶液に３．３８ｇ（０，０８９モル）のリチウムアルミニウムハイドライドを添加し、この混合物を、室温で、２時間攪拌し、氷水浴中で冷却し、氷水５ｍｌを慎重に滴加して、この反応混合物を分解した。混合物を濾過し、濾過物を真空で濃縮して大部分のテトラヒドロフランを除去した。残渣を１０１００Ｏのエーテルに溶解し、飽和食塩水５００ｍ１で二重洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で濃縮した。残渣をヘキサン中の２０％酢酸エチルを使ってシリカゲルカラムで精製し、４、Ｏｇ（８０％）の（４）を得た。

’ＩＩ　ＮＩＪＲ：　（４００１ｉ［（ｚ、　ＣＤＣｌ＋）　、δｐｐｍ　０．６２　（３Ｎ、ｓ、　１８−ＣＨｚ）　、０．８　（６８、рпA ２６及び２７−ＣＩｌｌ）　、０．８６　（３Ｈ１ｄ、２ｌ−ＣＨ，）　、０．９４　（３Ｈ，ｄ、２８　ＣＨｓ）　、０．９６　（３Ｈ１互、ｌ９−ＣＨＩ、）　、３．６２　（Ｉｌｌ、聾３−Ｈ）、５．３９　（ｌ）ｌ　、■、７−Ｈ）、５．５８　（ＩＨ、恵、６−Ｈ）。

２４−ｅｐｉ−ビタミンＤＩ　（５）７−ジヒドロカンペステロール（４）　（３，０ｇ、７．５　ミリモル）をエーテルとベンゼン（４：ｌ）５００ｍｌに溶解し、窒素雰囲気下で攪拌しながら、水冷石英浸漬容器中で、ハノビア中圧紫外線ランプ（Ｈａｎｏｖｉａ　ｍｅｄｉｕｍ−ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ＵＶ　ｌａｍｐ）で、１．５時間照射した。この溶液を真空で濃縮し、エタノール２００ａ＋Ｉに再溶解し、還流下で一昼夜加熱した。溶液を真空で濃縮し、残渣をヘキサン中の２０％酢酸エチルを使ってシリカゲルカラムで精製し、０．９ｇ（３０％）の（５）を得た。

ＩＨＮＭＲ：　（４００ＭＨｚ、　ＣＤＣ１１）　、δｐｐｍ　０．５４　（３ｔｌ　、　ｓ、１８−Ｃ１，）　、０．７６　（６Ｎ、　ｄпA ２４−ｅｐｉ−ビタミ７Ｄ、トシレート（６）０、９ｇ（２，２６ミリモル）の（５）を無水ピリジン１０ｍ１に溶解した溶液に、１．２ｇ（６，３０ミリモル）のトシルクロライドを添加し、この混合物を窒素雰囲気下で、５℃で２４時間攪拌した。反応混合物を、１００ｍ１の冷飽和重炭酸ナトリウム溶液に注ぎ、次いで２００ｍ１のエーテルで三回抽出した。エーテル抽出物を一緒にして、これを３００ｍ１の５％塩酸溶液で三重、３００ｍ１の飽和重炭酸ナトリウム溶液で三重、更に３００ｍ１の飽和食塩水で二重洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で濃縮し、１．１ｇ（８８％）の（６）を得た。

２４−ｅｐｉ−シクロビタミンＤ、（７）１、０ｇ（１，８１ミリモル）の（６）を無水メタノール１００ｍ１に溶解した溶液に、１０．０ｇ（０，１２モル）の重炭酸ナトリウムを添加し、この混合物を還流下で、８時間加熱した。反応混合物を真空で濃縮し、エーテル３００ｍ１で二回抽出後、２００＋ｏｌの水を添加した。エーテル抽出物を一緒にして、これを無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で濃縮し、油状の６００ｍｇ（８０％）の（７）を得た。

１１目稠Ｒ：　（４００Ｍｔｌｚ、　ＣＤＣｌ＋）　、δｐｐｍ　Ｏ，５４（３）１　、　ｓ、１Ｂ−ＣＨＩ）　、０．７８　（６Ｈ，ｄｄB ２６及び２７−ＣＩｌｌ）　、０．８６　（３ｔｌ、ｄ、２ｌ−ＣＨＩ）　、０．９２　（３Ｈ，ｄ、２Ｂ−ＣＩ（ｌ）　、３．２５　（３g１ｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ、（８）ｔ−ブチルヒドロパーオキサイド（１，１３ｍ１．３．３９ミリモル、トルエン中で３Ｍ）を、窒素雰囲気下で、無水ジクロロメタン６５ｍ１中の二酸化セレニウム９５ｍｇ　（０，８６ミリモル）の懸濁液に添加し、この混合物を、室温で、窒素雰囲気下で３時間攪拌した。次いで、０．１３ｍ１の無水ピリジンを添加し、（７）の６００ｍｇ（１，４５ミリモル）を無水ジクロロメタン２０ｍ１に溶解した溶液を添加後、この混合物を、窒素雰囲気下、室温で１５分間攪拌し、次いで２５ｍ１のＩＯＸ苛性ソーダ溶液を添加し、この混合物を、エーテル１００ｍ１で三回抽出した。エーテル抽出物を一緒にして、１００ｗ＋ｌの１０％苛性ソーダ溶液で三重、水１００ｍ１で三重、１００ｍ１の飽和食塩水で二重洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で濃縮した。残渣をヘキサン中の２０％酢酸エチルを使ってシリカゲルカラムで精製し、油状の１４０ｍｇ（２３％）の（８）を得た。

’ＨＮ）ＪＲ：　（４００Ｍ）ｌｚ、　ＣＤＣｌ＋）　、δｐｐｍ　０．５４　（３Ｈ、ｓ、１Ｂ−ＣＨＩ）　、０．７９　（６Ｈ，ｄｄ、２６及び２７−ＣＨＩ）　、０．８８　（３Ｈ，ｄ、２ｌ−ＣＨ，）　、０．９２　（３）１．　ｄ、２８−ＣＨＩ）　、３．２４　（３ＨP ５、１５　（ＩＨ、ｍＳ＋９−）１）　、５．２１　（ＩＩ−１、ｍ５１９−１（）。

ｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−３，５シクロビタミンＤ４　（８０１１０ｍｇ　、　０．２６ミリモル）を１．１ｍｌのジメチルスルホキシド及び０．９ｍｌの酢酸に溶解し、５０℃で、窒素雰囲気下で１時間加熱した。この溶液を、氷と５０ｍ１の飽和重炭酸ナトリウム溶液に注ぎ、この混合物を１００ｍ１のエーテルで三重抽出した。エーテル抽出物を一緒にして、１０（ｍ＋の飽和重炭酸ナトリウム溶液三重、水１００ｍ１で二重、２００＋ａｌの飽和食塩水で二重洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で濃縮し、（９）及び（ｌＯ）の粗生成物１０５ｍｇ（９５％）を得た。

５．６−シス−１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、（９）酢酸エチル５ｍｌ中の（９）及び（１０）の１０５＋ｎｇ（０，２５ミリモル）の溶液に、２０＋ｎｇ（０，２ミリモル）の無水マレイン酸を添加し、この混合物を、３５℃で、２４時間、窒素雰囲気下で攪拌した。この溶液を真空で乾燥濃縮し、残渣をヘキサン中の４０％酢酸エチルを使ってシリカゲルカラムで精製し、３０■ （２８％）の（９）を得た。

：　２６５１ｍ。

実施例２１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、の生物学的試験雄の離乳したてのラットの子（Ｈｏｌｔｚｍａｎ　５ｔｒａｉｎ　、　Ｈｏｌ　ｔｚｍａｎ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｍａｄｉｓ。

ｎ　、　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）に、カルシウム（０，４７！％）とリン（０，３％）を含むビタミンＤ欠乏飼料を与えた。３〜４週間以内に、この飼料は、低血清カルシウムと成長の乏しさで特徴的な極端なビタミンＤ欠乏症を引き起こした。この飼料を与えて４週間後、鼠の血清カルシウムは６ｍｇ／ｄｌより低い値であった。この鼠を、次に４つのグループに分け、ココナツツ油の様なビヒクル中のｌα−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４或いはビヒクル（比較）の何れかを、１４日間経口投与した。最後の投与後、２４時間して鼠を殺し、血中カルシウムを標準の実験室方法で測定した。その結果を表１に示す。

表１血清カルシウム濃度の増加血清カルシウム濃度投与量　（■へ００１１１）化合物　（ｍｃｇ／ｋｇ／日）　鼠の数　士樟準偏差値ビヒクル　１０　５．１　＋　０．４２２１ｅｐｉ−１ａ　−０Ｈ−Ｄｔ　０．０４２　１１　５．８± ０．４０２４−ｅｐｉ−１ａ−ＯＨ−Ｄ、　０．２５０　１２　８．１　＋　１．２５２４−ｅｐｉ−１ａ−ＯＨ−Ｄｔ　１．５００　１２　１０．５±０．７１表１のデータは、１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ、が、ビタミンＤ欠乏症の鼠の血清カルシウムを増加するのに効果的であること、そしてその応答は、投与量に依存することが明らかである事を示す。

本発明は、幾つかの特殊な例で記述されたが、様々な変形、変更、付加、削除が上述の本発明において成され得る事は、当業者の良く知る所である。依って、それらの変更は、本発明に包含されるものであり、本発明の範囲は、添付の請求範囲に適法に一致出来る最も広い解釈で唯一制限されるものである。

Ｆ工ＧＵＲＥ　１Ｆ工ＧＯＲＥ　２＋フロントページの続き（７２）発明者　ペンマスタ　ラジュアメリカ合衆国　イリノイ州　６０１２６　エルムハースト　ウェスト　セント　チャールズ４９３（７２）発明者　ピショップ　チャールズ　ダブリューアメリカ合衆国　ウィスコンシン州５３５９３　ヴエロナ　才力ノーガン　コート

Claims

【特許請求の範囲】１．式（Ｉ）の化合物及びその塩、水和物及び溶媒和物。 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中、Ｒ１は水素又はトシル基、Ｒ２は水素又はヒドロキシ基である）。２．化合物が、１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４トシレートである請求の範囲１の化合物。３．化合物が、２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４トシレートである請求の範囲１の化合物。４．式（ＩＩ）の化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）（式中、Ｒ２は水素又はヒドロキシ基、Ｒ４はメトキシ基である）。５．化合物が、２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４である請求の範囲４の化合物。６．化合物が、１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４である請求の範囲４の化合物。７．７−デヒドロカンペステロール、８．５，６−トランス−１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４．９．次の工程を含む１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４の製造法。（ａ）乾燥ピリジンの存在下で、２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４をトシル化して２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４トシレートとする工程、（ｂ）２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４トシレートを加溶媒分解して２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４とする工程、（ｃ）２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４を二酸化セレンでアリル酸化して１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４とする工程、及び（ｄ）１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４をジメチルスルホキシドと有機酸の混合物で加水分解して、５，６−シス−１α− ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４と５，６−トランス−１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４との混合物とし、そして５，６−トランス−１ α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４のディールスーアルダー付加物を形成し、精製して１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４を生成する工程。１０．乾燥ピリジンの存在下で、２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４とトルエンスルホニルクロライドを反応させる事を含む２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４トシレートの製造法。１１．２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４トシレートを緩衝化された加溶媒分解にかける事を特徴とする２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４の製造法。１２．２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４を二酸化セレンでアリル酸化する事を特徴とする１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４の製造法。１３．１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４をジメチルスルホキシドと有機酸の混合物で加水分解して、５，６−シス−１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４と５，６−トランス−１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４との混合物とし、この混合物をディールスーアルダー反応にかけて５，６−トランス−１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４の付加物を形成し、精製して１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４を生成する事を含む１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４の製造法。１４．カンペステロールを７−デヒドロカンペステロールに酸化し、７−デヒドロカンペステロールを２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４とする為に照射し、２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４を１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４に加水分解する事を含む１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４の製造法。１５．次の工程を含む１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４の製造法。（ａ）カンペステロールをアセチル化してカンペステロールアセテートとする工程、（ｂ）カンペステロールアセテートを酸化して７−デヒドロカンペステロールアセテートとする工程、（ｃ）７−デヒドロカンペステロールアセテートを還元して７−デヒドロカンペステロールとする工程、（ｄ）７−デヒドロカンペステロールを照射及び熱転化して２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４とする工程、（ｅ）乾燥ピリジンの存在下に、２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４をトシル化して２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４トシレートとする工程、（ｆ）２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４トシレートを加溶媒分解して２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４とする工程、（ｇ）２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４を二酸化セレンでアリル酸化して１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４とする工程、及び（ｈ）１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−３，５−シクロビタミンＤ４をジメチルスルホキシドと有機酸の混合物で加水分解して、５，６−シス−１α− ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４と５，６−トランス−１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４との混合物とし、そして５，６−トランス−１ α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４のディールスーアルダー付加物を形成し、精製して１α−ヒドロキシ−２４−ｅｐｉ−ビタミンＤ４を生成する工程。