JPH07502165A - Ｔリンパ球の限定された個体群に対する抗体を生産する方法、抗体および使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＆五立各挽 Ｔリンパ球の限定された個体群に対する抗体を生産する方法、抗体および使用方 法 ｌ匪立立立 本発明はＶβ遺伝子の使用によって限定されたＴリン／イ球（Ｔｌｌ胞、ＴＣＬ ）の個体群に特異性のある抗体を得る方法、ここに得られた抗体およびその使用 方法に関する。

全゛ＣのＴ細胞の９５％以上は、「Ｔ細胞受容体」　（以下本文で１１ｒＴｃＲ Ｊ）と称せられる細胞表面受容器を有する。Ｔ細胞個体発生の概要につ（１て１ １、ロイヤーおよびラインヘルツ著「ＴリンＩ（球：個体発生、機能、および臨 床的疾患との関連Ｊ、Ｎ、Ｅｎｇ１．Ｊ、Ｍｅｄ、、３１７：１１３６−１１４ ２　（１９７８）をＩＮされたい。ＴＣＲは、９０ｋＤの明かな分子量（ＭＷ） と５種の１ｌ単位（γ、δ、ε、およびη）を含む７モルソイ１り（ｎｏ＠ｏｒ ｐｈｉｃ）　７３分子とを有するクロ／ティビック（ｃｌｏｎｏＬｙｐｉｃ）　 Ｔ　Ｉ　ａ−β翼二量体力）らなる。このγ晶り単位は２５ｋＤの明かなＭＷを 有し、δおよびε副単位１まそれぞれ２０ｋＤの明かなＭＷを有し、ζ副単位は ｌ　６ｋＤの明かなＭＷを有し、ε副単位＋１２２ｋＤの明かなＭＷ＠有する。

５種の受容体側単位の全てＩＣ）ラノスメノプランタンパク質である。イムノプ ロブリ／タン／ｆり質の抗原が結合しｔこ１０個のＭｍおよび軽鎖の場合のよう にＴＣＲｃおよびβタンＨり質は、可変部（以下「■」と称する）と定常部（以 下ｒＣＪと称する）領域の双方を含む。イムノグロブ１ノンタンパク質および遺 伝子使用のｍ要については、本明細書中でも弓１用するレビン著、Ｇｅｎｅｓ　 ＩＩＩ、）！−７ウィリー・アンド・す′ンズ社、６４２−６５３頁（＋９８７ ）を参照されたい。

ＴＩ副小単位、それらのＶ領域の相互作用に誹って、抗原１こ対する結合部位お よび大部分の組ｍ適合性復含体く以下［ＭＨｃＪと称する）を升５成１．て（＼ ることは明かである。抗原認識は、細胞障害エフェクターＴ細胞および免疫調節 Ｔｌ胞の双方を活性化するためにＩｆＩｆ！である。細胞障害Ｔ細胞１１腫瘍細 胞およびウィルス感染細胞を含む特定の標的細胞を溶解し、一方、免疫調節Ｔ細 胞＋１、−ノンノ（液循環によって直接にかまたは間接に免疫系の細胞を誘発す る力１ま１．：（よ抑板１する。

種々なβ鎖をエンコードする多くのＣＤＮＡヌクレオチドの配列の分析は、β鎖 をエンコードする遺伝子とイムノグロブリンをエンコードする遺伝子との間に構 造的な類似性があるという認識に導いた。すなわち、β鎖をエンコードすル遺伝 子は、■、定常部（Ｃ）、連結部（Ｊ）、およびその他部（Ｄ）一様の要素を含 む。本発明は、このβ鎖のＶ領域に係わるものであり、以下、この領域をＶβと 称する。ヒトにおいては、約５７Ｖβ遺伝子が、７ｑ３５において染色体７上の ＴＩβ座中に存在することが知られている。ロビンソン著［ヒトＴ細胞受容体β −鎖遺伝子複合体は少なくとも５７種の異なる遺伝子分節を含むＪ、Ｊ、Ｉｍｍ ｕｎｏｌ、、１４６：４３９２−４３９７　（１９９１）参照。

Ｔ細胞増殖はＴＩＩ合体の、抗原およびインターロイキン−２（以下ｒｌＬ−２ 」と称する）との交互作用を要求する。休止しているＴ細胞はＩＬ−２に対して 全（受容体を表出しないが、Ｔ細胞受容体が抗原およびＭＨＣによって活性化さ れると、ＩＬ−２受容体の誘発が数時間内に起こる。この活性化はまた、ＩＬ− ２の内因性状発および分泌、ＤＮＡ合成および細胞有糸分裂を導く。

種々な疾病の状態および生理学的障害はＴ細胞の機能障害と結び付いている。

これらの疾病は、この機能障害に対応していると考えられるＴ細胞の特定なサブ セット、または限定された個体群によって特徴づけられる。この限定された個体 群は、ただｌまたは２．３の関連する蟹のＴＣＲの表出によって認識され、表出 された■αおよび／またはＶβ遺伝子の梨によって監視することができる。Ｔ細 胞の限定された七Ｆトとは、その中でＴ細胞がｌまたは２．３の共通Ｖ遺伝子を 表出し、但しそれ以外は同一でないものである。比較として、例えば腫瘍から誘 発されるようなＴ細胞のクローン性個体群は、単一細胞の子孫であるＴ細胞の個 体群であって、従って実際的に区別できる。

Ｔ細胞の機能障害によってもたらされると考えられる疾患は、これに限定される ものではないが、種々な自己免疫疾患、例えば全身系紅斑性狼癒多発性硬化症、 重症性筋無力症、真性糖尿病、およびリウマチ様関節炎など種々の形態の関節炎 を含む。これらの機能障害は、■β系統から１または２．３のＶβ遺伝子を表出 する限定されたＴ細胞個体群の増大（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）によって特徴づけら れる。異なる患者が単一のＶβを表出するが、しかし池の患者の場合は必ずしも 同じＶβ遺伝子を表出するとは限らない。例えば、ＭＳ患者がらの増大されたＴ 細胞個体群は、ＶＪ１２、ＶＪ９＋３、Ｖβ１４、Ｖβ１５およびＶＪ１７の関 連する集団からのＶβ遺伝子の一つを表出する。いくつかの治療方法が、機能障 害に対応するＴ細胞個体群の除去またはプロ・Ｉキングを基にして提案されてい る。この点に関しては、本明細書でも参照することになるが、ジエンウェイ著［ ペプチドによる免疫療法Ｊ、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：　４８２−４８３　（１９ ８９）；およびハンム他部「Ｖβ８受容体ペプチドの抗体が実験的自己免疫性脳 を耐炎を抑制する」、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１４４：４６２１−４６２７　（ １９９０）を参照されたい。

多くの実験的自己免疫性疾患を緩和する９１歯動物Ｔｍ胞の中に選択的なＴＣＲ Ｖβ遺伝子使用に関するかなりの証拠がある。例えば、実験的なアレルギー性菌 を耐炎（ＥＡＥ）において、Ｖβ８．２８Ｔ細胞は、中心的役割を演する。ラッ トの興なる５系統において、ミニリン由来のタンパク質（ＭＢＦ）ペプチド断片 に対して反応性の脳炎発生性Ｔ細胞クローンおよびハイブリドーマは、一様にＶ β２にであることがわかった。バーンズ他部ｒＭＢＰの脳炎発生決定因子に特異 性を有するラットとマウスの双方のＴｃＲは、ＭＨＣと認識された脳炎発生決定 因子とが異なるとはいえ、同様なＶαおよびＶβ鎖遺伝子を用いる」、Ｊ、Ｅｘ ｐ、Ｍａｄ、、！６９：２７　（１９８９）ＩＮ。同様に、■β８．２ゝは、Ｅ ＡＥに感受性のマウス系統において、脳炎発生性ＭＢＰペプチドに反応するＴ細 胞の８５％以上に表出されている。アカ−オーピア他部「自己免疫性脳を耐炎を 緩和するリンパ球からのＴ細胞受容体の限定された翼厚性は特異性免疫仲介をも たらすＪ、Ｃｅ１ｌ、５４　：　５６３　（＋　９８８）：およびアーバン他部 ［鼠の自己免疫性脳を耐炎におけるＴ細胞受容体遺伝子の限定された使用が抗体 療法の可能性をもたらす」、Ｃｅ　Ｉ　１．５４　：　５７７　（１９８８）ｌ ’Ｎ。マウスの■β８遺伝子属生産物はヒトＶβ１２、■β１３、Ｖβ１４、Ｖ β１５および■β１７遺伝子生産物と一致する。

Ｖβ８．２に特異性のｍＡｂの生体内投与によって、ＭＯＰでの引き続（攻撃に よって誘発されるＥＡＥの発現からマウスを保護すると共に、既に冒されたマウ スにおｌするＥＡＥの臨床的経過を改善することが示されている。アカ−オーピ ア他部（１９８８）参照。また、ＥＡＥはこれに対してワクチンを接種すること もできることがわかっている。この場合は、抗−Ｔ細胞反応はＴ細胞の他のセ。

トによって緩和される。ロース他部［活性化されたＴ細胞に反応するＴ細胞によ ル実１１＋的自己免疫性脳をＷ１炎の抑制」、５ｃｉｅｎｃｅ、２４４７８２０ −８２４　（１９８９）参照。

他の動物疾病モデル、コラーゲン誘発性関節炎において、無感染同族生殖性マウ スに対して関節炎を移転し得る凹型コラーゲンに対して反応性のＴ細胞は現実に すべてＶβ８．２９である。バナージェー他部［マウスにおけるコラーゲン誘発 関節炎に対する感受性におけるＶβＴ細胞受容体遺伝子の可能な役割」、Ｊ。

Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　、１６７：　８３２　（１９８８）参照。これらの観察結果 は、例えばＣＤ　４−ＣＤ　８−Ｖβ８．２から誘導されるＴ細胞が胸腺細胞の 部分個体群を表出するように、Ｖβ８．２遺伝子生産物の表出が１歯動物におけ る自己免疫性Ｔ細胞セットと係わっているであろうことを示唆している。フォウ ルヶス他部「主として単一のＶβ遺伝子属を表出する胸腺細胞を担持するＴ細胞 受容体αβの新規個体群Ｊ、Ｎａｔｕｒｅ、３２９：２５１　（１９８７）；ン ＠−）ｖン他部［サブセｙトにおけるマウスの系統差異およびＣＤ４−ＣＤ８− 胸腺細胞中のＴ細胞抗原受容体表出」、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏ＋、 、６６：４２３（１９８８）；およびタカハマ他部ｒＣＤ４−ＣＤ８−Ｔ細胞受 容体αβ４胸腺細胞の表出型、個体発生、およびレパートリー二Ｔ細胞受容体Ｖ β使用における自己抗原の種々な影響」、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、＋４６：１ １３４（＋９９１）参照。

最近になって、Ｔ細胞の個体群のＴＣＲ遺伝子使用を測定することが可能になっ た。ハードネス他部「ヒトＴ細胞リンパ腫の臨床的マーカーとしてのＴ細胞受容 体遺伝子転移Ｊ、Ｎ、Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、　、３夏３：５３４−５３１９８ ５）参照。これらの測定は、ＴＣＲｃ）Ｖ領域上に見られるエピトープに差し向 けられる抗クロノタイプ性抗体およびクローン特異性ＤＮＡ転移を検出するｃＤ ＮＡブローベに負っていた。しかし、抗クロノタイプ性抗体およびｃＤＮＡプロ ーベの入手可能性は、例えば腫瘍からのように、Ｔ細胞の自然発生的クローノ個 体群の入手可能性によって限定されていた。この難点がこれらの方法を臨床的に 適用し難くさせ、Ｔｍ胞機能＋１Ｗと係わる全ての範囲のＴＣＲＶ遺伝千生ず物 に対して入手できる広範な種類の抗体がめられていた。このことは特に、Ｔ゛細 胞クローン性よりむしろ限定された個体群によって特徴づけられたＴ細胞機能障 害においてＩｌｌである。Ｔ細胞機能障害に係わる種々な疾病の診断と治療の目 的にとっては、ＴＣＲＶ遺伝子属のタンパク質生産物に′ｉ４ｔ、て特異性のあ る抗体を得る方法を持つことは有用であるに違いない。

木良更囚監！ ここに、共通ＴＣＲＶβ遺伝子使用を有するＴ細胞の限定されたセットに特異性 の抗体が、有効量の超抗原（ＳＡ）と共にＴ細胞を、このＳＡと反応性のＴ細胞 の分裂と生長とが進むに十分な条件および時間の下で培養し、培養したＴ細胞を 哺乳動物に注射し、次いでこの哺乳動物から抗−Ｖβ抗体を得ることによって得 られることがわかった。

追加的な抗体は、本発明の方法により生産された抗体によって認識されるＴ細胞 を選択的に除去、または消耗することによって、この限定されたセクト中の他の ＴＣＲＶβ遺伝子を表出するＴ細胞に対してつくることができる。残余のＴ細胞 は、抗体を生産するために哺乳動物に注射される。この消耗過程は、ＳＡ増大の 他のサイクルに引き継ぐことができる。消耗、増大および注射は、Ｔ細胞の単一 の試料について多数回繰り返すことができ、それぞれがＴ細胞の単一の限定セッ トを認識する多種類の■β遺伝子生産物に特異性の抗体のパネルを提供する。

上記の抗体群およびそれらの使用方法を提供する。

ＵΔ！見矢に更 図１は、種々なＳＡ、または媒体単独に曝されたＴ細胞に反応するＢ細胞分化を 描く棒グラフである。分化は１ｇＭ生産物により測定した。

図２Ａおよび２Ｂは、種々なＳＡに曝されたＴ細胞に反応するＢ細胞ＣＤ２３表 出を描く棒グラフのセットである。

図３Ａ、３Ｂ、３Ｃおよび３Ｄは、ｍＡｂ　Ｃ１で、次いで蛍光染色したヤギ抗 −マウスＩｇＧ抗体で染色した後のＴ細胞イムノフルオレ１センスを描く線グラ フのセットである。

図４Ａ、４Ｂ、および４Ｃは、活性化されたＴ細胞によって溶解されたＢ細胞に よる［＆ｌＣ，］放出を描く線グラフのセットである。

図５八、５Ｂ、および５Ｃは、活性化されたＴ細胞によって溶解されたＢ１１１ 胞によるじ’Ｃｒｌ放出を描く線グラフのセットである。

及匪Ω詳皇旦に皿 ＳＡは、ＭＨＣクラス■１抗原に対する二重の和合力に基づくＴ細胞し・パート リ−の大割合および１ｆＩまたはいくつかのＴＣＲβ鎖Ｖ遺伝子属の生産物に普 通のＴＣＲエピトープを活性化する一群のタンパク質である。いくつかのＳＡは 大量のＴ細胞増殖と／トカインＩＡ泌を誘発し、かつしばしばン１．りおよび全 身的な免疫抑制によって特徴づけられる臨床的な症候群と係わっている。より限 定されたＴ細胞反応のＳＡ活性化はまた、自己免疫疾叡に係わる免疫系に効果を 有すると思われる。フリートマン他部「全身系自己免疫病の発病学における微生 物系毒素の潜在的役割Ｊ＋Ａｒｔｈ　＆　Ｒｈｅｕｍ、、３４：４６８−４８０ 　（＋９９１）参照。

今日同定されているＳＡは微生物系およびウィルス系タンパク質を含む。微生物 系ＳＡは、いくつかのブドー球ｌ１ＩＩ系腸毒素、ストレプトコックスＭタンパ ク質の群の断片、およびＭＡＭ、すなわちミコプラズマ　アルトリチヂス（Ｍｙ ｃ。

ｐｌａｓｍａ　ａｒｔｈｒｌｔｉｄｉｓ）により生産される可溶性ミトーゲンを 含む。ホワイト他部［■β特異性超抗原ブドー球菌系腸毒素Ｂ：新生マウスにお ける成熟Ｔ細胞の刺激およびクローン性消耗Ｊ、（ｅｌｌ、５６：２７−３５（ ＋９８９）、）マイ他部「連鎖球菌性Ｍタンパク質の超抗原性」、Ｊ、Ｅｘｐ− Ｍｅｃｌ、、１７２：　３５９−３６２　（１９９０）；および、本文に引用す るアトキン他著「ミコプラズマ　アルトリチヂスから誘導されるミトーゲンによ るマウスリンパ球の刺激。■。培養上澄液からの小型基本的タンパク質はボテン トＴ細胞ミトーゲンである」、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、＋３７：１５８＋−１５ ８９（１９８６）ｌ照。Ｍ、アルトリチヂスは嘔歯動物における炎症性関節炎の 原因物質であることに注意されたい。コールおよびワード著「関節炎原因剤とし てのミコプラズマ」、Ｔｈｅ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓ、第１ｖ＠、ニューヨー ク、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　（１９７９）参照。ＳＡとして作用する微 生物系毒素は、知られている最も有力なミトーゲノに含まれる。例えば、ＭＡＭ はｌＸｌ０−Ｉ＋以下の濃度で、最大半値のＴ細胞増殖を誘発する。ウィルス的 にエンコードされたＳＡは、マウス哺乳動物系腫瘍ウィルスによってエンコード されたものなどが典型的である。チ１イ他部「マウス哺乳動物系腫瘍ウィルスの ３°長区間反復の開放読みだしフレームにおける超抗原のエンコードＪ、Ｎａｔ ｕｒｅ、３５０：２０３−２０７　（＋９９１）参照。

マウスにおいて、ＭＡＭはＶβ１およびｖｒβ６″鼠Ｔ細胞の増殖を選択的に誘 発する典型的な微生物系ＳＡとしての挙動を示している。コール他部［Ｍ、アル トリチヂスから誘導されるミトーゲンによるマウスリンパ球の刺激。Ｖｌ＋。反 応性は抗原に対するＴ細胞受容体α／β上に存在するＶβ＄遺伝遺伝子牛産物（ 群）の表出と連携している。」、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１４２：４１３１　（ ＋９８９）。ＭＡＭはヒトＴ細胞に対してミトーゲン的であるから、増殖の水準 はＳ、アウレウス誘導のＳＡによってトリガーされるものに比べて全く穏やかで あり、ＭＡＭ’ｕ２ＥｉのＴＣＲＶ遺伝子依存性に関しては全くデータが存在し ない。

ここに、ＭＡＭ反応性ヒトヒトＥ胞は、ＴＣＲＶβ遺伝子生産物の限定された群 を使用することが見いだされた。単りローノ性抗体（ｍＡｂ）ＣＩ、非−クロー ン性ＭＡＭ反応性ヒ）Ｔ細胞系統によるマウスの免疫化により発生される本文記 載のｍ八すは、末ｆｆ！ＩＴ細胞の約３−６％、かつＭＡＭ反応性Ｔ細胞の４０ −６０％について、α／βＴＣＲを構成するダイサルファイド架橋異二量体を認 識する。

ＴＣＲＶ遺伝子生産物に特異的な他のｍＡｂと同様に、Ｃ１は、護帯血液Ｔ細胞 を含む試験した全てのドナーのＣＤ４”およびＣＤ８’サブセツトの小画分と反 応する。ＳＡ認識に関連して、ＭＡＭ反応性ＴＣＬはＣビ細胞中に著しく増強さ れ、一方、ＭＡＭ−反応性ＴＣＬがあまり交叉反応しないＳＡ、ＳＥＥおよびＴ ＳＳＴ−１，はＣ１″Ｔ細胞を消耗することが観察された。ＣビＴＣＬ細胞から ＴＣＲβ連鎖ＣＤＮＡを増幅するポリメラーゼ連鎖反応を用いる研究は、Ｃ１が ■β１７遺伝子生産物」二に表出されるエピトープを同定することを示している 。

これと共に、これらの結果は、ヒトＴ細胞によるＭＡＭ認識がＴＣＲＶβ遺伝子 使用によって限定されること、またＭＡＭ−反応性ヒトＴ細胞の主要な画分がＶ βＩ７＋であることを示している。

従って本発明は、本文記載の方法によって生産される抗体を念もものである。

特に、ｍＡｂｃｌが本発明に含まれる。ｍＡｂ　ＣＩはアメリカン　タイプカル チャー　コレクン讐ン（ＡＴＣＣ）に貯蔵され受付番号第ＨＢ１０８７４号が与 えられている。

ｒｎＡｂ　（ｌは限定されたＴ細胞個体群で免疫化することによって発生するＴ ＣＲＶ遺伝子特異性ｍＡｌの独特な一例であることがわがうた。上記のように、 ＭＡＭはヒトＴ細胞にとって比較的弱いミトーゲンであり、このことはＭＡＭ− 反応性Ｔ細胞の限定された個体群を示唆している。従って、ＭＡＭは本発明に用 いるのに好ましいＳＡである。とはいえ、他のいずれのＳＡも本発明に含まれる ものである。染色データは、ｍＡｂ　Ｃ１によって認識されるＴＣＲエピトープ が、ＭＡＭで繰り返し再トリガーされた免疫化ＴＣＬの＞６０％に表出されるば かりでなく、第一の短期培養において僅か数日の内にＭＡＭによって活性化され た末梢Ｔ細胞の比較梢大部の画分にも存在する（表ＩＩ＋）ことを示している。

免疫原とし・ての他の微生物性ＳＡと反応性のＴＣＬ、またはＣＩ　”Ｔ細胞を 消耗したＭＡＭ反応性Ｔ細胞を用いるこの方法の有効な利用は、ヒトＴｃＲｖ遺 伝子生産物に対するｍＡｂ群の供給し得るパネルを大幅に拡大する。

何パーセントの細胞が０１によって認識されるかを測定するのにｍＡｂ　Ｃ１を 用いることで、平均として、ＣＩ’Ｔ細胞が末梢Ｔ細胞蓄積の約３−５％を代表 することがわかった。ＭＡＭ活性化ＰＢＬの短期培養においてさえもＣＩ’Ｔ細 胞の著しい増強は、全てのＣ１°Ｔ細胞がＭＡＭ反応性であることの、たとえ間 接的ではあったにせよ、強力な証拠を提供する。

これに加えて、ＭＡＭ−反応性Ｔ細胞のサブ上１トは、その個体群がｍＡｂＣｌ によって確認される、Ｖβ１７以外のＶβ遺伝子を表出する。これらの他のサブ セクトは、数系統の証拠によって存在が示されている。第一に、ＣＩ’細胞を消 耗した休眠中の末梢血液Ｔ細胞は、広範囲の５Ａｉｌ１度にわたってＭＡＭへの 減衰しない増殖的反応を示す。第二に、ＭＡＭプラス自発性ＡＰＣで繰り返し再 トリガーするごとによって維持される長期間培養において生き残るＴ細胞の僅か ４０−６０％がＣＩ’である。第三に、ＣＩ”Ｔ細胞を消耗したＭＡＭ反応性Ｔ ＣＬは、ＭＡＭを担持する標的細胞の有効な、ＳＡ特異性溶解を現出する。従っ て、本文に記載された方法は、ＭＡＭ−反応性Ｔ細胞によって使用された他のＶ β遺伝子を同定すること、およびそれらの生産物に対してｍａｂ群を発生させる ことに用いることができる。この方法は、ＣＩ”Ｔ細胞のＭＡＭ反応性細胞を消 耗し、残余のＴ細胞をＭＡＭで再増大し、次いで得られた細胞を用いて抗体生産 物を誘発することによって促進される。生産された抗体は次いで、消耗と増大と 抗体生産との繰り返し回に用いることができる。４！異異性体によって確認され た細胞の消耗は、急速かつ効率的である。例えば、ＣＩで処理され、鉄と結合し たヤギの非マウスＩｇＧ抗体に曝されかつ磁石に曝されたＭＡＭ反応反応性７ト 胞ＭＡＭでの増大の繰り返り２回の後でさえもそれらが出現！、ないように全て のＣＩ　”Ｔｉ１ｌ！胞を選択的に消耗される。

ｍＡｂによっって同定されるヒトＭＡＭ−反応性Ｔ細胞がＶβ１７″であるとい う観察結果は、Ｔ細胞機能障害によって特徴づけられる疾病におけるＴ細胞の限 定された性質に照らして特に興味深いものである。丁ミ／酸序列分析は、鼠のＭ へＭ−反応性鼠Ｔ細胞によって表出される１ｉｌｖβ８遺伝子の生産物と、Ｖβ １７、■β１２、Ｖβ１３、Ｖβ１４およびＶβ１５を含むいくつかのヒトＴＣ ＲＶβ遺伝イ属との間の相当な同一性を示している。コール他部「ト４．アルト リ千デスかり誘導されたミトーゲノによるマウスリンパ球の蓄積。ＶＩＩＬ°超 抗原′ＭＡＭによるマウスの種々な種系統からの区別されたＶβＴｉＢ胞受容体 を表出する１゛細胞の選択的活性化Ｊ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏ１．、＋４２：４１３ １　（１９８９）、およびブ］／′Ｔ他部［Ｔ細胞α／β受容体の環１８構造」 、ＥＭＢＯＪ、、７：３７４５（＋９８８）＃照。更に、自己免疫とトＴ細胞に よるＶβ１７および他のいくつかのＴＣＲＶβ遺伝子馬の選択的使用に関する報 告もある。例えば、多発性硬化症（ＭＳ）患者の末梢血液中のＭＢＰ−反応性Ｔ 細胞の増大された個体群が報告されている。この報告においては、それイＩれの Ｍ　Ｓ　、１！者がＭＢＰ−反応性Ｔ細胞中のＴＣＲに対して特定のＴＣＲＶβ 遺伝子属を用いた。ベン−すｌ・他部［多発性硬化症におけるミニリン由宋タン パク質−４′￥異性Ｔ細胞クロー７における限定されたＴ−細胞受容体■β遺伝 子使用：主導的遺伝子はそれぞれ（こ異なる１、Ｐｒｏｃ、ＮＩ′ｌＬ　１．　 八ｃａｄ−Ｓｅｔ、ＵＳＡ、８８：２４６Ｇ−２４７０（＋９９１）＃照。ＭＳ 忠者個体群中に過剰−表出されているＤＲｌおよびｌ）　Ｒ２，２種のクジスＩ Ｉ遺伝子と組み合わされて提供された脳炎発生Ｓ）において選択マーカー・を抗 −マウス抗体に付着させて、除去する。残った細胞を生長させた後、上記の単離 方法のｌＦ＠を用いて任素ｒ１な清宙１過段瘍緋はア叡性ＭＢＰペプチドに対し て反応性の上記Ｔ細胞中のＶβ１７、同じくｖβ１２、■β１４およびＶβ１５ の優先的使用。ブヒャープフェニフヒ他部「ミニリン由来タンパク質の免疫的優 勢領域に対する峻別されたヒトＴ細胞受容体Ｖβ使用」、５ｃｉｅｎｃｅ、２４ ８：１０１６　（１９９０）、これに加えて、Ｖβ１７°Ｔ細胞は、リウマチ様 関節炎（Ｒ，Ａ　）を伴う患者の滑液組織から単離された活性化Ｔ細胞の中に増 強されていることが報告された。ホウウェル他部「リウマチ様関節炎患者の滑液 組織中の活性化■β１７′″Ｔ細胞のクローン性浸潤物」、Ｊ、Ｃｅ１Ｉ　Ｂｉ ｏｃｈｅｍ、５ｕｐｐ１．．１５Ａ：　２９５　（１９９１）ｏその他の研究は 、Ｖβ１４’Ｔ細胞がリウマチ様関節炎患者の滑液Ｔ細胞の中に過剰表出されて いることを示している。バラードおよびウェスト、５ｃｉｅｎｃｅ、２５３：３ ２５−３２９　（１９９１）。

本発明の方法に従えば、非−クローン性ではあるが、ただし限定された、Ｔ細胞 の個体群へのｍＡｂは以下に提出する実施例中に詳細が述べられるようにしてつ くられる。要約すれば、Ｔ細胞は従来公知のいずれかの方法によって全血または 血漿から分離される。好ましい方法としては、これに限定されるものではないが 、非−Ｔ細胞から、５ＲＢＣでロゼッテを形成し、標準法に従いフィコールハイ パツク　グラジェント上で遠心分離する方法が含まれる。単離されたＴ細胞は、 次に任意のＳＡと、Ｔ細胞増殖をもたらずに十分なＳＡ濃度で培養される。

ひとたびＳＡが加えられると、細胞は、ある時点で外性のＩＬ−２を供給しなけ ればならなくなるほどｌ　Ｌ−２受容体を表出する。一般にＩ　Ｌ−２は当初は 加えられない。この理由は、少量の内性ＩＬ−２が生産され、これでＳＡに強い 反応性を示す細胞を刺激するのに十分だからである。外性Ｉ　Ｌ−２は約１週間 与えないでおき、ＳＡに反応が弱い細胞の増殖を防止する。ＳＡ処理の後、細胞 は適当な期間、通常は約２ないし３週間、好適な生長条件の下で放置生長させる 。

そのための抗体が既に提供されているＴＣＲＶβ遺伝子生産物を表出するＴ細胞 を除去４るために、Ｔ細胞は、非−■β特異性抗体で培養され、次いでヤギ抗− マウスイムノグロブリン抗体に曝される。抗−マウス抗体、Ｖβ特異性抗体およ びＶβ特異性抗体によって認識されるＴ細胞の間で形成される免疫複合体は、次 に例えば磁石ビーズおよび磁石によって、または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣれ たＤＮＡ配列化によって行うことができる。

ｋＺ＊　ｌ　１−＋鱈ホＩ＋　−１１’ｉ這遣１．−　）　Ｌチ鋳ノ（７ｒ１、 Ｊ　Ｆｌ　／＋’　＝　”ｆｆ　八に＋＝　ｋ　Ｌ　ｌ　１T　哨 よい。次に、全細胞が、抗体形成に好適な条件下に動物宿主に注射される。得ら れた抗体は、その動物が免疫された細胞系統に関して選別される。陰性の対照と して、同じ供与体から誘導され、ただし別種の非−交叉反応性ＳＡで処理された 細胞を用いることができる。

培養されたＴ細胞での免疫化は、これに限定されるものではないが、皮下、腹腔 内、静脈内、筋肉内または直接リンパ節内が含まれる方法によって行うことがで きる。

抗体を誘発する全゛Ｃの免疫原組成物と同様に、免疫原的に有効量のＴ細胞は実 験的に決定すべきである。考慮すべき因子は、Ｔ細胞が補体または担体タンパク 質またはその他の担体と複合し、またはこれに共有的に付着していてもいなくて も、そのＴ−細胞の免疫原性、投与の経路、および投与すべき免疫化服量数であ る。

これらの因子は、ワクチン技術として公知であり、経験ある免疫技術者にとって は過度の実験を行わなくても決定できる程度のものである。

抗体生産を刺激するに必要なＴ細胞の数は、上記の因子に加えて、そのＴ細胞の 性質（すなわち、どのＶβを表出するか）および動物種により幾分変化するであ ろう。ｌＸｌ０’細胞程度の少量でも、免疫反応を引き出すのに十分であるし、 また約２０−＋００ｘｌｏ’細胞まで、またはそれ以上も使用可能である。好ま しくは、抗体生産を確実にする有効量はマウスの場合約１０ＸＩＯ’細胞である 。Ｔ細胞は補助剤または吸着剤と混合されない。一般にこの細胞は、通常の生理 食塩水または哺乳動物への投与に好適な緩衝化合物などの生理学的に許容し得る 担体と、単に混合される。

本発明の抗体のび在は、多クロー７性であっても単クロー／性であっても、種々 な分析法によって測定することができる。この分析技術は、これに限定されるも のではないが、サイトフルオログラフ分析による、または細胞浸漬による免疫項 九分析（ＩＦ）、間接免疫蛍光分析、免疫沈澱分析、ＥＬＩＳＡ、凝集反応おヨ ヒウエスタ−７プロット分析を含む。Ｖβ遺伝子使用の分析は、好ましくは以下 に述べるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のようなりＮＡ増幅過程が加えらある 。要約すると、約Ｉ　Ｘ　１０６の末梢血液Ｔ細胞またはＳＡ反応性ＴＣＬ細胞 がハイブリドーマ培養上澄液と混合され、洗浄され、フルオレ１セン標識ヤギ抗 −マウス１５１ｇＧで対比染色され、洗浄され次いでサイトフルオログラフ、例 えばオル）ＩＩｓ上で免疫蛍光度が測定される。凝集反応分析の使用を含む方法 は、血液選別の分野でよく知られている。ウェスターン　プロットは基本的には 、タウピン他部、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ１．ＵＳＡ、７６：４３ ５０（１９７９）に記載された方法に従って行われる。

本発明の方法により得られる抗体は、ＴＣＲＶβ連鎖属の遺伝子生産物を保有す るＴ細胞の特定の個体群の存在の検出の方法に用いることができ、またＴ細胞の 全個体群におけるＴ細胞のこれら個体群のパーセンテージを定量するのに用いる ことが・できる。これは、Ｔ細胞の特に限定された個体群が全体のＴ細胞個体群 中で過剰−表出されている場合に、Ｔ細胞機能障害に関係する種々な疾病を診断 するのに有用である。検体中のＴ細胞の特定な型の存在を検出するために抗体を 使用する方法は、抗体と検体に存在するであろう特定のＴ細胞との間に免疫学的 １１合体が形成されるような条件下にこの検体を少なくともｌ橿の抗体と接触せ しめることを含む。検体中に特定Ｔ細胞型の存在を示す免疫学的複合体があれば 、その生成は次いで適当な手段で検出され測定される。

これらの方法は、特に限定されるものではないが、例えば間接的イムノフルオレ ッセンスのような均−系または不均一系結合免疫分析、ラジオイムノア１セイ（ ＲＩＡ）、ＥＲＩＳＡおよび上記のウェスターン　プロット分析を含む。用いる 分析の方式に応じて、この抗体は標識されていてもいなくてもよい。抗体と結合 する標識は公知であり、限定されるものではないが、酵素、放射性ヌクレオチド 、蛍光発生原および色素原基質、補因子、ビオチン／アビジノ、金コロイドおよ び磁石粒子を含む。抗体は公知の手段で変性して、担体タンパク質またはペプチ ドまたは公知の支持体、例えばポリスチレンまたはポリビニルマイクロタイター 板、ガラスピーズまたはガラスピーズおよびクロマトグラフ支持体、例えば紙、 セルローズおよびセルローズ誘導体、および／リカに結合させることができ特に 患者のＴ細胞の大ｍＩＩな臨床的選別にとって好ましい分析手段は、これに限定 されるものではないが間接的イムノフルオレプセンスである。例えば、抗体を溶 液中またはそのまま組織学的標体中でＴ細胞様体と直接的に結合させ次いで蛍光 顕微鏡によりて検出することができる。

この抗体はまた、治療薬としての使用にも好適である。例えば抗体は、これに限 定されるものではないが未変性でまたはりチンおよびジフテリア毒素を含む毒素 に結合して用い、患者に投与することができる。単独で用いられる抗体は、補体 を固定し、標的細胞の細胞溶解を引き起こすことができるものである。ひとたび 抗体が特定下細胞に結合すると、そのＴ細胞の死または除去をもたらし、ここに Ｔ細胞によりもたれされる機能障害が軽減される。この抗体は一般に、そのため の薬学的に許容し得る担体または運搬体とともに投与される。薬学的に許容し得 る担体とは、投与に際して不利な生理的反応を起こさないものであり、かつ抗体 がその中に十分に溶解して、化合物の治療的有効量を運搬する活性を保持するも のである。抗体の治療的有効量および投与方法は個々の患者、処置される適用お よび当業界で普通のものである他の判断基準要件に応じて変えることができる。

抗体の治療的有効量は、特定Ｔ細胞の十分な数に死または除去をもたらし、例え ば不特定Ｔ細胞の溶解や器官損傷のような明白な副次効果を起こさずに機能障害 を軽減するものである。特定の適用における有用な投与の経路（群）は当該技術 者には明かである。

投与の経路は、これに限定されるものではないが非経口的、および患部への直接 注射を含む。投与の非経口的経路は、これに限定されるものではないが静脈内、 筋肉内、腹腔内および皮下を含む。はとんどのＴ細胞機能障害に関しては静脈内 投与が好ましい。しかし、機能障害が、例えば関節炎のように局部的であれば、 患部への直接注射が効果を高めかつ不特定器官損傷のような副次作用を減少させ る結果をもたらすであろう。

本発明はまた、ＳＡ反応性Ｔ細胞に反応するようにつくられ、かつＴＣＲＶβタ ンパク質を認識する抗体をも含むものである。このような抗体は多クローン性ま た単クローン性のいずれでもあり得る。この抗体の双方の型をつくる方法は当業 界でよく知られているゎ免疹化の方法および抗体午産、精製および特化は当冥界 で公知であって詳（５°１１説明を要しない、、好ましい抗体は単クローン性（ ｍＡｂ）であり、このものは任意の公知の方法、例えば本文でも参照するコーラ −およびミル／、タイン著［°予定した特異性のＭ合細胞分泌抗体の連続培養Ｊ 、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５−４９７　（１９７５）に記載された方法によ ってつくられる。

本発明は上記の、非経口投与に好適な、これに限定されるものではないが薬学的 に許容し得る無菌の等張溶液を含む抗体の組成物を含む。これら溶液は、これに 限定されるものではないが静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節または他の 患部域に直接注射するための生理食塩水およびリン酸塩で緩衝された生理食塩水 を含む。

治療に用いる抗体は例えば限定された半減期や免疫反応を誘発する傾向などいく つかの不利益を免れない。これらの不利益を克服するいくつかの方法が提案され ている。これらの方法でつくられた抗体は本発明の範囲内のものであり本発明に 含まれる。ζこて用いる「抗体ｊおよびｒｍＡｂＪの！西は、以下に説明する特 定の実施例を含むものである。これらの方法の一つは、抗体の抗原結合領域をエ ンコードする遺伝子分節を、抗体の残部をエンコードするヒト遺伝子分節にクロ ーニングすることによって、その抗体を「ヒト化」する方法を含む。このように して、抗体の結合領域のみが外来物と認識され、免疫反応がかなり起こり難（な る。このような抗体について記載した文献は、以下本文でも引用するが、リーチ マン他部［治療のためのヒト抗体の再構成Ｊ、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３− ３２７　（１９８８）である。抗体療法に見られる不利益を避けるもう一つの方 法は、抗体の抗原結合領域を擬しているがそれ自体は抗体でないペプチド同族体 の使用に見られる。これら抗体の擬似体について記載した文献は、以下本文でも 引用するが、サラゴビ他部「抗体相補性−決定領域からの擬似体の設計と合成」 、５ｃｉｅｎｃｅ、２５３ニア９２−７９５　（１９９１）である。

次に本発明の実施例を示すが、これらは本発明を限定するもので１まな％ｔ。

Ｌ五Ａ上 に　いる試 ブドー球菌性腸毒素ＳＥＡ％ＳＥＢ、ＳＥＣ，、ＳＥＣ，、ＳＥＣ，、およびＳ ＥＥは、毒素シーツク症候群毒素、ＴＳＳＴ−１とと６１こトキノンテクノロジ ー、マジンノ、ライスコンシンから人手し、製造業者の指定書に従って用（Ｘた 。部分的に精製したＭＡＭは、アトキン他（１９８６）が記載した方法ζこ従っ てＭ、アルトリチヂス培養液上澄液から単離した。全ての５ＡｌＩＴ細胞の増殖 １こ最適な予め決定した濃度、ＭＡＭに対してｌ　：　４０００およびブド−球 菌誘導ＳＡｉこ文４して１１０−２５ｎ／ｍｌの最終濃度で用いた。

ｊｔｌｌＬ匠主 ｒンパ　の 新鮮な末梢血液または扁桃腺リンｌ（球は、フィコール−！・イノ（ツク遠Ｃ１ 分離を製造業者の指定書に従って用いて単離した。Ｔ細胞は、非−Ｔ細胞カ）ら 、カブランおよびクラーク著「ヒト１９７７４球の検出のための改良されたロゼ 、テ分析法」、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔ、、５：　１３１−１３５　（１９ ７４）＋こｇ８載された方法に従い、二ｊ−ルアミニダーゼー処理ヒツジ赤血球 を用ｔ）ｔこＥ−ロゼｙテ形成、次いで第二のフィコール＝７−イｔ＜ツク遠心 分離によって単離しｔコ。残余のＴ細胞は非−Ｔ細胞画分から、ＡＴＣＣから得 られたハイブリドーマＡＴＣＣＣＲＬ８００１　（ＯＫＴ３）から得られた抗− Ｔ３抗体で処理し、次ｔ＼で製造業者げイナル社、グレートネ１り、ニューヨー ク）の指定釦こ従ってヤギ抗マウス抗体で被覆した磁石ビーズを添加しモしてピ ース゛に結合しｔこＴ細胞を磁石を用いて物理的に分離して取り出した。

瓦籠五ユ ５Ａ−１応　Ｔヘルパー　Ｔ　胞７、統の発生実施例２に記したようにして得た 無選択Ｔ細胞個体群ｈ１ら、Ｔ細胞を過剰１の抗−ＣＤ８ｍＡｂで培養し次いで 洗浄し、製造業者（ダイナｌしン土）の指定書（こ従（１、ヤギ抗マウス抗体で 被覆した磁石ビーズと磁石とを用−）てＣＤ８１こ′ｉ１するＴ細胞結合抗体を 物理的に除去して、ＣＤ４’末梢血液Ｔ細胞をｌ１ｌｌシｔこ。このＣＤ４”− 強化個体群をＸ！！照射した自発性抗原提供細胞（ＡＰ（）およびＭＡＭかＳＥ Ｅかのいずれかと共生培養した。５日後、半一精製したヒトＩＬ−２（エレクト ロヌクレオエックス社、フェアフィールド、ニューシャーシー）を、最Ｒｆｉ度 が５％となるように加えた。培養液を毎週ＡＰＣ，および適切なＳＡで再トリガ ーし、Ｉ　Ｌ−２の存在下に増大した。細胞系統は、１０％０％ラン血清（ｆ　 ｂ　ａ）（ホイッタ、カー、Ｍ、Ａ、バイオプログクツ社、ウォーカースピル、 メリーラッド）、ペニシリンおよびストレプトマイシン（５０μｇ／ｍｌ、ジブ コ社）を含むＲＰＭ１１６４０（ジブコラボラトリーズ社、グランドアイランド 、ニー−ヨーク）、および２ｍＭのグルタミン（ジブコ社）からなる培養媒体中 で維持した。

友り烈工 旦Ｄ２３誘１すＬ吐 ＳＡ−反応性ＣＤ４”　ヒ）Ｔ細胞とＳＡ−担持Ｂ細胞との特異性交互作用は、 得られたＢ細胞蓄積の両分上にＣＤ２３活性化抗原の急速な表出をもたらす。フ リートマン他［全身系自己免疫病の発病学における微生物的超抗原のための潜在 的役割Ｊ、Ａｒｔｈｒ、＆Ｒｈｅｕｍ、　、３４：　４６８　（１９９１）。

Ｔｈ細胞によるＢ細胞表面ＣＤ２３表出の誘発については既に詳しく説明した。

クロウ他（１９８６）。概要は、５ＸＩＯ’精製扁桃腺系Ｂ細胞を１．５Ｘ１０ ５Ｘ線照射ＣＤ４”ＭＡＭ−または５ＥＥ−反応性ＴＣＬ細胞と共に最終媒体中 で培養した。培養液は、最終媒体単独かまたは種々なＳＡの最適濃度（ＭＡＭは ｌ：４，０００希釈で用い、一方他のＳＡは＋００ｎｇ／ｍ＋で用いた）を含む 媒体で補った。１６時間後に、Ｂ細胞をｍ　Ａ　ｂ　Ｅ　ｎ　Ｖ　ＣＳ　２　（ ビル　サグチン博士およびスタン　メノンエノバーグ、マノラン、ウイスフ／／ ンにより真人にも贈与された）を用いた間接イムノフルオレッセンス染色によっ てかつ製造業者（タボ社、バーリンガム、カリフォリニア〉の指定書に従ってヤ ギ非−マウスＩｇＧのフルオレノセフ−接合したＦ（ａｂ’）２断片で対比染色 して、ＣＤ２３表出について分析した。陽性に染色した細胞のパーセンテージは オーツＩｔｓサイトフルオログラフ（オーツ　ダイアグ／スティック　／ステム 社、ウェスドウ１ド、マサチスーセノソ）上で分析して測定した。得られた結果 は、ＣＤ４°５ＥＥ−反応性ＴＣＬ細胞が、ＴＳＳＴ−１または任意のＳＥ群を 担持するＢ１１１胞上で最高のＣＤ２３表出を誘発するが、しかし実施例７に示 すように、ＭＡＭ担持Ｂ細胞によってはほとんどＣＤ２３表出をトリガーしない ことを示している。このＳＡ−活性化ＴＣＬＩＩ＠による交叉反応性の機能的な 証拠は、活性化されたし）Ｔ細胞がブドー球菌性−誘発ＳＡに対する増殖性反応 において幾分無差別的であるという報告に基づいている。７ラインヤー他（１９ ９１）。しかし重要なことは、観察された（０２３表出のパター７が、ＭＡＭお よび５ＥＥ−特異性ヒトＴｍ胞がほとんど交叉−反応性を示さず、またそれ故に 興なるＴＣＲＶβ遺伝子生産物を使用しているであろうことを示唆している点に ある。すなわち、５ＥＥ−反応性ＴＣＬは、ＭＡＭ−％異性ＴＣＲｍＡｂ類を選 別する優れた対照を提供する。

実上［ クローン　の　− Ｔ細胞のクローン性個体群にｍＡｂを発生させるために、４事例について、１０ ０μ里のリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ＋　ｌ０ｍＭのＮ　ａ　Ｐ　Ｏａ、１ ５０ｍＭのＮａＣ１、ｐＨ７，２）中、ｌＸｌ０’のＭＡＭ−反応性ＴＣＬＳｉ 胞でＢａ１ｂ／Ｃマウスを免疫化した。このＭＡＭ−反応性ＴＣＬ細胞は、実施 例２に記したようにして、外性のＡＰＣおよびＭＡＭで弱く再刺激して長期間（ ７週間）培養して増大したものである。基本的には、コーラ−およびミル／１タ イン（１９７５）によって記載された方法を用いてｍＡｂをつくった。概要は、 最終免疫化の３日後に、マウスを層殺しその胛細胞をＨＧ　Ｐ　ＲＴ不足骨髄腫 細胞系統５Ｐ２１０またはＮ５−１と融合した。新たにｊｔ！ＩＩした５（休眠 ）末梢Ｔ細胞の小分画との反応性が示されたハイブリドーマを、免疫化に用いた ＭＡＭ−反応性ＴＣＬおよび同じ供与体から誘導された５ＥＥ＝反応性ＴＣＬに 対して選別した。抗体の存在は間接イムノフルオレッセンスにより検出した。概 要は、最初に５ｘｌＯ’の種々なｍＡｂを有する細胞を室温で３０分間培養して ２色のイムノフルオレ１セノスを間型した。次いでこれを、Ｐ　Ｂ　Ｓ−Ｂ　Ｓ へ１％、アジ化合物０．２％およびヤギ抗−マウスＩＧ−ＦＩＴＣ（ＧＡＭ−Ｆ ＩＴＣ）中、室温で３０分間にわたり３回洗った。細胞を３回洗い、室温で３０ 分間陰性対ＰＢ、ＩｇＧＩ　ｍＡｂで培養し、ｉｎ離したＧＡＭ−Ｆ［ＴＣ結合 部位を滅失させた。細胞を３＠洗い、室温で３０分間、藻紅素（ファイフコリス リン、ＰＥ）標識抗−ＣＤ４ｔたは抗−ＣＤ８　ｍＡｂ　（ＬＩＢ　［／ｎリン バス、レークサクセス、ニューヨーク）で培養した。細胞を最後に３回洗い、オ ーツ　サイト−フルオログラフ上で分析した。

表１に示された結果は、全ＣＤ４ｔたはＣＤ８陽性細胞について＝１ｉ１陽性（ ＦＩＴ（＋ＰＥ）の比率をノ′−セノテージで表している。この方法で、ｃｌと 呼ばれるｍＡｂを同定した。

図３Ａ、３０．３ｃおよび３１）に示したように、ｃｌは３−６％の間の大１１ Ｔ細胞、〉６０％の抗原として用いるＭＡＭ−反応性ＴＣＬを染色し、実際上５ ＥＥ−反応性ＴＣＬＩＢ胞を染色しない。免疫゛沈澱検査（図４）は、ｍＡｂｃ ｌがα／βＴＣＲを有するジサルファイドー結合の異二置体構成を認識したこと を示している。最後に、■遺伝子生産物に特異性の他のＴＣＲｍＡｂと同様に、 Ｃ１は末梢Ｔ細胞の小さいサブセｌトをｌＩ：ＷＩ血液の検体を含む試験した全 ての供与体から認識する。ＣＩ　”＠胞はＣＤ　４　”ｋよびＣＤＢ’Ｔ細胞の 双方の中に見いだされるが、ある供与体は、！または他のＴ細胞サブセット中に ＣＩ’Ｔ細胞の選択的増強を示す（表Ｉ）。

ｍＡｂ　Ｃ１を、試験管中で繁殖したＳＡ−反応性ＴＣＬの数を選別するのに用 いた。ＰＢＬを毎週、Ｘ線−照射した６発性ＡＰＣおよびその指示されたＳＡで 活性化１、た。それぞれの抗−ＴＣＲｍＡｂで染色するＴ細胞のパーセンテージ を毎週６日、Ｘ線−照射したＡＰＣとＳＡとで再トリガーした後で査定した。

腰帯血液リンパ球および正常な成体供与体がら得たＰＢＬを、ＣＤ４°およびＣ Ｄ８”Ｔ細胞サブセット中のＣＩ”Ｔ細胞の分布を染め分ける２色イムノフルオ レッセンスにより分析した。単色イムノフルオレ１セノスは、クララ他（＋９８ ６）記載の方法に従って行った。

［以下余白］ 表１１に示ｒように、ＳＡのパネルでの末梢Ｔ細胞の短期間活性化は、ＭＡＭお よびＭＡＭ−特異性ＴＣＬ細胞がＣＤ２３誘発試験中に交叉反応するいくつかの ＳＥ、特に、ＳＥＢ、５ＥＣＴ＋５ＥＣ２，５ＥＣ３によって活性化されたＴ細 胞の中でＣＩ”細胞の明かな増強を示している。対照的に、ＣＩ　’Ｔ細胞は非 −交叉反応性ＴＳＳＴ−１または５ＥＥ−活性化Ｔ細胞の中ではあまり表出され ない。ＳＥＢまたは５ＥＣＩおよび自発性ＡＰＣで毎週再トリガーすることによ って増大したＴ細胞は、ＣＩ”Ｔ細胞のパーセンテージにおいて著しい減衰を示 す（表夏１）。

上記の結果は、ＳＥＢのようなＳＡは、その中ではＣＩ”Ｔ細胞がＳＥＢに対し て比較的低い結合親和性を示す小部成分であるようないくつかのＴＣＲＶββ遺 伝子牛生産物表出するＴ細胞によって認識されることを示している。対照的に、 ＣＩ”Ｔ細胞はＭ　Ａ　Ｍ−活性化Ｔ細胞の短期間培養において著しく増大され かつ良好に表出され続ける。表ＩＩ＋　（実施例８に記載）に示した実験におい て、０１１Ｔ細胞のパーセンテージはＭＡＭによって毎週刺激された培養液中で 時間とともに幾分低Ｆしている。しかし、はとんどの実験においては、ＣＩ’Ｔ 細胞はＭＡＭで繰り返しトリガーしたＴＣＬの５０および６０％の間で表出して いる（図３）。

図３Ａ、３Ｂ、３Ｃおよび３Ｄにおいて、右上に示された＋＋　Ｂ　Ｌ　；右下 に示された免疫化に用いたＣＤ４’ＭＡＭ−反応性Ｔ細胞系統：または左下に示 された同じ供与体から誘導されたＣＤ４°５ＥＥ−反応性Ｔ細胞は、ＣＩとの反 応性に関して間接イムノフルオしｙセンス染色によって分析した。ＰＢＳおよび 蛍光化抗−マウス＋ｇでのｒ’１３Ｌの背景染色は左上に示されている。

得られた結果は、ＣＩ”ｒ細胞がＴＣＩ、細胞と反応性の５ＥＣ２の１５−２０ ％の安定な個体群からなることを示している。これらの結果は、ＣＩ”Ｔ細胞が ＭＡＭと反応性のヒ）Ｔ細胞の大凱部の個体群、および５ＥＥ２反応性Ｔ細胞蓄 積の相当な画分を代表していることを示唆している。

大１■亙 ＴＣＲＶ’　−−旦めニ＋　されたＴＣＬΔ！底扁桃腺Ｔ細胞の適量を室温で、 上記の非−交叉反応性ＴＣＲＶ遺伝子特異性ｍＡｂの飽和している濃縮物と共φ ご培養した：Ｃ３７（ＶＦ５２７・’５．　３）ワング他部「ヒトＴ細胞抗原受 容体分子について切断した測定子を検出する単クローン性抗体」、Ｈｙｂｒｌｃ ｌｏｍａ、５：　１７９　（＋９８６）、０Ｔ１４５　（ＶＦ６．７ａ）ポスネ メト他部「単クローン性抗体によって検出されたヒトＴ細胞抗原受容体の遺伝し た多形性」、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ１．１３３Ａ、８３ニア８８ ８　（１９８６）：およびり他部「ヒトＴ細胞受容体Ｖβ６．７遺伝子生産物に おける対立形質的変異」、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、１７１　：　２２１　（＋９ ９０）およびＣ１，３０分後に細胞を３回洗い、最終媒体に再懸濁し、製造業者 （ダイナル）の指示書に従い、ヤギ抗−マウス抗体−被覆磁石ビーズの存在下に ０．５Ｘ１０”／Ｍ＋の最終濃度で培養した。このビーズは！標的Ｔ細胞当り２ ０ビーズの比率で加えた。５日後、磁石ビーズを除去し、Ｔ細胞を洗い次いでＩ 　Ｌ−２単独で４８時時間項養した。培養物をＩ　Ｔ、、−２中に保ち、毎週過 ヨウ素酸塩処理した同種性非−丁細胞フィーダー細胞を供給した。

これらの培養物は、刺激に用いた最初のｍＡｂに応じて、適切なＶβ遺伝子を表 出するＴ細胞が高度に増強されて（る。通常、これは６−日期間にわたって起こ る。時には、９５％以上の特異性Ｖβ表出を達成するために第二の周期の刺激を 必要とする場合もある。このときは、これらＴＣＬは、細胞溶解分析におけるエ フェクターとしてまたは実施例１０記載のようにＲＮＡ単離のために用いられ、 それぞれは適当するＴＣＲＶ遺伝子生産物を表出するＴ細胞の実質的に１００％ であった。

火ｍ 互Ｊ二」ばｌ劃ｌ鹿届旦分丘 ＭＡＭ−反応性Ｔ細胞個体群がＴ細胞のＣｒとＣＩ−と両方の個体群を含むこと を示すために、機能分析を行った。抗−ＴＣＲｍａｂは有糸分裂生殖性である： この特性を用いて、適切なＴＣＲＣｌエピトープ出するＴ細胞の選択的な活性化 と増大とを行なわしめることによってＣＩ”Ｔ細胞がＭＡＭ−反応性であること を正式に証明した。扁桃腺系Ｔ細胞の適量を、Ｃ１または２種の非−交叉反応性 ＴＣＲＶβ遺伝子生産物特異性ｍＡｂ、Ｃ３７（ＶＦ５．　２／’５．　３）　 ％および０Ｔ１４５（ＶＦ６，７ａ）のいずれか、の飽和しているａ縮物と共に 培養した。ＴＣＬは実施例２に記載したようにして生成させた。これらの系統は 適切な抗−ＴＣＲｍＡｂとの反応性に関して実質的に純粋である（図４）。

本文で引用するフリートマン他Ｈ［クローン化した変異特異性ヒトＴヘルツイー 細胞による交替した自己−反応性細胞溶解性Ｔリン／（球反応の増幅」、Ｊ、Ｃ ｌＩｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、、８２：１７２２　（＋９８８）に記載された４時間［ ５１（ｒ］放出試験において、ＭＨＣクラスＩ＋抗原担持標的細胞系統、Ｂ細胞 リンノく芽球腸性細胞系統８８６６を用い、ＴＣＬ細胞の細胞溶解性分析を行っ た。概要は、８８６６細胞を、最終媒体中独か、または指定したＳＡの存在下１ こ０．１ｍＣｌ［”ＣＦ３と共に３７℃で２時間培養した。

ＣＩ”ＴＣＬを発生させるために末梢血液Ｔ細胞を、ｍＡｂ　Ｃ１，ヤギ抗−マ ウスＩｇ−被覆磁石ビーズ、およびＩＬ−２で毎週活性化して培養液中（こ増大 した。加えて、適量の末ＷＩＴ細胞個体群を磁石ビーズを用いてＣ１１細胞力） ら消耗し、次いでＭＡＭ、自発性Ｘ線−照射ＡＰＣ群、およびＩＬ−２で活性化 した。

このＭＡＭ−反応性ＣＩ−ＴＣＬを毎週再処理し、残余のＣＩ”　Ｔ細胞の完全 な消耗を確実にした。このとき、これらのＴＣＬは（４週間の培養の後）ＣＩで 染色したｒＣＬの０．５％以下で細胞溶解試験のエフェクターとして用０た。Ｍ ＡＭ−反応性ＣＩ−ＴＣ１，およびＣ１’ＴＣＬの双方を、細胞溶解試験にお（ １て無処理かまたは上記のようにＳＡで「ノイルス」されたか、いずれかの［６ １Ｃｒ　］　−１１ｍ８８６６標的細に対してエフェクター細胞として用％ｓた 。双方のＴＣＬ力（効果的にかつ特異的にＭＡＭ担持標的細胞を溶解し、ＭＡＭ 反応性ＣＩ−Ｔ細胞個体群を示唆した。

図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃに示すように、ＭＡＭ−反応性ＴＣＬおよびＣＩ”ＴＣ Ｉ、の双方が特異的にかつ効果的にＭ　Ａ　）＋（担持８８６６桿的細胞を溶解 する。データは標的細胞の平均溶解パーセントを標的細胞に対する各エフェクタ ーの比として示している。これらのデータはＣＩ’Ｔ細胞がｌｖｌＡＭ反応性で あることを確認している。総じて、これらの発見はＣｌエピトープを表出するも のから区別されるＭＡＭ−反応性ヒｌ　Ｔ　Ｉ８１胞個体ｌｉｔのｒＩ在を支持 している。

図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃは、扁桃腺系Ｔ細胞が、毎週抗−ＴＣＲｍＡｂ、ヤギ抗 −１ｇ−被覆磁石ビーズ、およびＩＬ−２で図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃζこ示した 対標的エフェクター比において３通りに活性化されて培養液中で増大されるとき 、（ｓ＋ｃｒｌ放出試験における細胞毒活性に関して得られた結果を示している 。

標的細胞は、無処理（８８６６）か、または３７℃で１時間ＭＡＭ　（８８６６ ，。

、）またはＴＳＳＴ−１（８８６６”ｓＴ”畜）テ「ハルレス」シタ力、Ｌ’ｆ ｔＬカッ＋７７パ芽球腫性Ｂ細胞系統８８６６からなっていた。概要は、精製し た扁桃腺系Ｂ細胞を媒体単独でかまたは、ＭＡＭを除外して、１１００ｎ／ｍｌ の指定されたＳＡと共に、これは１／４０００の希釈倍率で用いて、培養した。

ＣＤ４”ＭＡＭ−反応性Ｔ　ＣＬ細胞またはＣＤ４°５ＥＥ−反応性ＴＣＬ細胞 を加え、培養物を１６時間培養し、次いで間接イムノフルオレッセンス染色によ ってＣＤ２３表出に関して分析した。Ｃ３７活性化Ｔ細胞；ｍＡｂ　０Ｔ１４５ 活性化Ｔ細胞：およびＣ１活性化Ｔ細胞の細胞毒活性を示す。これら３細胞系統 の分析時における表現型を以下に示す。

Ｃ３７活性化＝９９％Ｃ３７９，２２％ＣＤ４°、７７％ＣＤ８゜０Ｔ１４５活 性化；１００％０Ｔ１４５”；１６％（Ｄ４”；８５％ＣＤ８”ＣＩ活性化＝９ ９％ＣＩ’、４３％ＣＤ４’、６１％ＣＤ８’″。

各系統ともＣＤ　４　’Ｔ細胞画分を含んではいるが、ＣＤ８”Ｔ細胞がＴＣＬ 個体群の６０−８０％を占めて優勢である。そこで、ＣＤ　８　’Ｔ細胞−依存 の機能を、ＳＡ依存の場合の方法で、これらＴＣＬ細胞がＭＨＣクラス１１陽性 標的細胞を溶解するか測定することによって評価した。図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃ に示した実験では、これらのいずれのＴＣＬによっても無処理８８６６標的の明 かな溶解は観察されなかった。しかし、Ｃ１’ＴＣＬは選択的にＭＡＭ担持８８ ６６細胞を溶解し、一方０Ｔ１４５°および３７”ｒｃＬＩＩ胞の双方はＴＳＳ Ｔ−１担持、ただしＭ　Ａ　Ｍ非担持標的を効果的に溶解する。ヒ）Ｔ細胞のＴ ＳＳＴ−１に対する増殖的反応が■β２９両分によって明確に主導されることは 注目に値する。チ１イ他部「毒物／ヨノク症候群におけるＴ細胞表出Ｖβ２の選 択的増大」、Ｊ、Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ　＋　１７２；９８１　（＋９９０）、従って、ＶＦ６．７ａ”およびＶ Ｆ５゜２／’５．３°ＴＣＬ細胞によるＴＳＳＴ−１担持樟的の溶解は、Ｓ、ア ウレウス−誘導ＳＡに反応する活性化Ｔ細胞の交叉反応性の他の例を表している 。フライ／ヤー池著［微生物的毒素によるＴ細胞活性化の進化論的に保存された 機構、Ｔ細胞受容体毒素交互作用の異なる親和性にり１する証拠」、Ｊ、Ｉｍｍ ｕｎｏｌ、　、１　４６：　ｌ　Ｉ　（＋９９１）。

図４に示した実験は、翼なる供与体から独立に誘導されたＣＩ”ＴＣＬを用（１ 三つの別の機会（１行）た。全ての実験において、結果は図５に示したものと同 様である。すなわち、ＣＩで活性化されかつ増大されたＣＩ’Ｔ細胞はＭＡＭに 対して機能的なＩ＋９異性を表す。

Ｋｈ匠ｌ ＣＩを　いるＴＣＲへ灸良広厘 ６０％ＣビＴｌ１ｌ胞を有する！Ｊ　Ａ　Ｍ−反応性ＴＣＬを、２５ＸＩＱ’ａ ｌｌ胞オヨび２．５ｍＣｌ　［Ｉ２’Ｉ］を用いてラクトベルオキシダーゼおよ び過酸化物で放射性ヨード化した。細胞溶解試験およびＳ　Ｐ　ｆｉ、−セファ ローズおよび単クローン性抗体での免疫沈澱を、すでにボスネ、）他部［抗ペプ チド抗体を生産する新規方法。

Ｔ細胞抗原受容体β鎖への部位−特異性抗体の生産Ｊ　Ｊ、Ｂｌｏｔ、Ｃｈｅｍ 、、２６３：１７１９　（１９８８＞に記載されているように行った。

ＳＥ−活性化Ｔｌｌ胞の短期培養におけるｃｔ’ｍ胞の増大（表１１）は、Ｃ１ “細胞がＭＡＭ−反応性ＴＣＬと連合したＳＡ反応性の図形（図２）を取り得る ことを示している。しかし、これらのデータは、ＣＩ−ＭＡＭ−反応性Ｔ細胞の 存在を除外していない。事実、ＭＡＭ−反応性Ｔｉ１ｌｌｆｉのＭＡＭでの繰り 返しトリが−が最大で５０−６０％ＣＩ’（Ｆ）ＴＣＬをもたらすという観察は 、Ｃ１−ＭＡＭ−反応性Ｔ細胞個体群が存在することの間接的証拠を提供してい る。この点を示すために、適量の新鮮な末梢Ｔ細胞から、これを適当なｍＡｂで 処理し次ｔ１でヤギ抗−マウスＩｇＧを担持する磁石ビーズを用い反応性Ｔ細胞 を物理的に除去してＣビ、Ｃ３７”ｌたは０ＴＩ４５°を消耗した。末梢（２） 液Ｔリン／ｆ球から、抗−マウスＩｇＧで被覆しｊコ磁石ビーズを用い、抗−Ｔ ＣＲｍＡｂ　Ｃ１またｉｔ　Ｃ３７と反応するＴ細胞を消耗した。無処理または ｍａｂ−消耗下細胞は、媒体単独、自発性ＡＰＣ１またはｇ発性ＡＰＣの存在下 での指定ＳＡＩこ対する増殖的反応を３通りに分析した。各反応体Ｔ細胞個体群 中に存在するＣビＴ細胞のＩく−セノテージをイム／フルオレｌセノス染色によ って検出した。表ＩＩ＋にお０て、実験■および２は二つのｎなる正常供与体を 含む別の実験の結果を示して（Ｘる。

［以下余白］ れたように、ＣＩ　”Ｔ細胞蓄積を効果的に減少または除去しているが、ＭＡＭ に対する増殖的反応は影響を受けていない。ＣＰ細胞が消耗されたＴ細胞個体群 が広範なＭＡＭ１度（６１ｏｇ希釈）にわたって強い増殖的反応を維持している ことは注目に値する。付加的な研究において、同じ供与体から誘導されたＣ　Ｉ 　＋ＴＣＬおよびＣビ細胞が消耗されたＭＡＭ−反応性ＴＣＬの双方の細胞溶解 活性が比較された。

裏直匹主 ボ１メ　−ゼ　ＰｃＲによるＴＲＶ　の実施例８記載のようにして、０Ｔ１４５ 　（Ｖ／３６．７）、Ｃ３７（ＶＦ５．２１５．３）またはＣ１ｍＡｂのいずれ かで正常末稍血液丁細胞を刺激して三つのＴ細胞系統をつくった。全細胞のＲＮ Ａを各細胞系統から酸グアニジニウムチオ／アネートーフェノール−クロロホル ム法でＩ！離した。コムチノスキーおよびサツキ著「グアニジニウム　チオシア ネート−フェン−ルークロロポルム抽出によるＲＮＡ１ｌｌＮの１段法」、Ａｎ ａｌ、Ｂｌｏｃｈｅｍ、、１６５：１５６　（＋９８７＞。

ｃＤＮＡを、抗−感作Ｃβプライマーを用い逆トランスクリブターゼで合成した 。その手順は、す他（＋９９０）記載の方法に従い下記のように行った。

Ｖβ特異性感作プライマーのパネルで、各ＶβプライマーがＣ領域の５′端から ５５ｂｐに位置するＣＩ抗−感作プライマーと対応するような平行反応において ＰＣＲを行った。配位調整として二つのＣβプライマーの組合せを用いた。各Ｃ ＤＮＡｊｌ製物は最適希釈濃度について試験した。ＰＣＨの条件は次の通りであ る。プライマー０．５μｍ、しブリナーゼ（テ゛ユボノン土）２ｔＪ、３．０ｍ ＭのＭｇｃＩ２を含む緩衝液（２ｏｔＨｉ液、デーデフ社）、（３２ｐｌ　−ｃ ＋ｃｒｐ２ｏ、ｃｌ、＠０．２ｍＭにおいて冷ｄＮＴＰ、最終容積２０７７１０ 増幅は、９４℃で１分、５夏’Ｃで１分次いで７２℃で１分、を２５回行った。

１’ＣＲ生産物は５％ポリアクリルアミドゲル上でポリアクリルアミドケル　エ レクトロフォレンスを用いて分析した。ゲルを乾燥し、フィルムに露光した。

実験に用いたＰＣＲＣβプライマーの通り。

−−−−−−−−−−−り’　ＣＴｒＣＴＧＡＴＧＧＣＴＣＡＡＡＣＡＣ３’Ｃ α５′　（１ｌｆｉ　作）　Ｓ　’　ＧＡＡＣＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＣＧＴ　 ３　’Ｃα３’　（抗−感作）　ｓ　′ＴＣＡＴＡＡＡＴｒＣＧＧＧＴＡＧＧＡ ＴＣ３’Ｖβ２　（感作）　５　’　ＧＴｒＴＣＴＣＡＴＣＡＡＣＣＡＴＧＣＡ Ａ　３　’ｙβ６　（感作）　５’　ＴＣＡＧＧＴＧＴＧＡＴＣＣＡＡＴＴＴＣ ３’Ｖβ５．　３１５．　２　（感作）　Ｓ’　ＧＴＣＡＧＧＧＧＣＣＣＣＡＧ ＴｒＴＡＴ　３’ｖβ、　７（、作）Ｓ’　ＡＣＡＧＣＧＴＣＴＣＴＣＧＧＧＡ ＧＡ　３’ＣＩ＋ＴＣＬからのＶβ１７遺伝子生産物の特異性ＰＣＲ増幅を行っ た。３細胞系統（ＯＴ１４５’、Ｃ３７’、ＣＩ”）からのＰＣＲ増幅ＣＤＮＡ を、Ｃαプライマー（陽性対照）、ＣＩ−Ｖβ２プライマー（陰性対照）、ＣＩ −ＶＦ５．２１５．３プライマー、ＣＩ−Ｖβ６プライマーまたはＣＩ−■β１ ７プライマーを用いて得た。特異性のバンドは矢印で示す。それぞれの場合に、 バンドは増幅された分節の予定された大きさに基づいて期待通りに移行した。

ＴＣＬは前記のように３種のｍＡｂ：０Ｔ１４５　（ＶＦ６．７ａ）、Ｃ３７（ ＶＦ５．　２１５．　３）、およびＣＩを用いて調製した。これらのそれぞれの 多クローン性Ｔ細胞は、適切なｍＡｂに関して陽性な細胞を〉９８％含んでいた 。ＲＮＡを単離し次いでＣＤＮＡを逆トランスクリブターゼを用いて合成した。

ｊ！ｉＩのＣＤＮＡを異なるプライマーの組合せを用いてＰＣＲ増幅した。得ら れた結果は、それぞれの細胞系統が特異性Ｖβを表出したことを示していた。予 期されたように、０Ｔ１４５’細胞はＶＦ６を表出し、またＣ３７４細胞は■β ５．２１５゜３を表出した。ＣＩ″″細胞はＶＦ１７を表出した。これらＴＣＬ のいずれもＶＦ２を表出せずかつこれらの全てがＣαを表出した。他の実験にお いて、ＣＩ”細胞系統を、■βＩ−Ｖβ２０に特異性のプライマーを用いて分析 した。ＶＦ１７−Ｃβ以外のいずれのプライマーの組合せもβ−鎖生産物を増幅 しなかった。このように、ＶＦ１７はＣ１によって認識される全Ｖβ遺伝子生産 物を代表しているように思われる。ＶＦ１７はサウザーン　プロット上で計数さ れるバンドに基づいて単一遺伝子複写を有するＶβ属を代表すると考えられる。

ロビンノン著［ヒトＴ細胞受容体β鎖遺伝子複合体ＩＪ少なくと６５７の可変遺 伝子分節を含む二四つの新規遺伝千成における６ｖβ遺伝子の同定］、Ｊ、Ｉｍ ｍｕｎｏｌ、、１４６：４３９２　（＋９９１）；コノキャノノ他部「ヒトＴ細 胞受容体β鎖可変領域遺伝子の多様性と構造」、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ 、Ｓｃ１．ＵＳＡ、８３：６５９８　（１９８６）；および牛ムラ他部「胸腺細 胞におけるヒトＴ細胞受容体ａおよびβ鎖可変領域遺伝子の序列とレパートリ− 」、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１７：　３７５　（１９８７）参照。

ｌｌＩ 図３Ａ　図３Ｂ 比比較色蛍光　比較緑色蛍光 図。。　図３Ｄ 比比較色蛍光　比較緑色蛍光 （ＬＯＧＩ　（ＬＯＧ） フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｋ　１６／１２ ＧＯＩＮ　３３１５３　Ｙ　８３１０−２Ｊ３３１５７７　Ｂ　９０１５−２Ｊ ／／　Ｃ１２Ｎ　１５１０２ （Ｃ１２Ｐ　２１１０８ Ｃ１２Ｒ１：９１） （７２）発明者　クロウ、マーク　ケイアメリカ合衆国　ニューヨーク　１０１ ２８ニユーヨーク　イースト　８９ス　ストリート　１７ Ｉ （７２）発明者　ボズネットデヴイッドアメリカ合衆国　ニューヨーク　１００ ２８ニユーヨーク　イースト　８６ス　ストリート（番地なし）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．共通ＴＣＲＶβ遺伝子使用Ｖβを有するＴ細胞のサブセットに特異性の多ク ローン性抗体を得るに際して、 （ａ）Ｔ細胞を有効量の超抗原と共に、この超抗原と反応し得るＴ細飽の分裂と 生長とをもたらすに十分な条件と時間の下に培養し；（ｂ）過程（ａ）からの培 養されたＴ細胞を噛乳動物中に注射し；かっ（ｃ）抗体を含む血清をこの哺乳動 物から取り出す：過程群からなる方法。 ２．超抗原が細菌およびレトロウイルスからなる群から選ばれた供給源から誘導 されたものである特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３．細菌源誘導超抗原がブドー球菌類、マイコプラズマ類および連鎖球菌類から なる群から選ばれたものである特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４．超抗原がミコプラズマアルトリチジス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａａｒｔｈｒｉ ｔｌｄｉｓ）−誘導超抗原ＭＡＭである特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５．共通ｔＣＲＶβ遺伝子使用Ｖβを有するＴ細胞のサブセットに特異性の単ク ローン性抗体を得るに際して、 （８）Ｔ細胞を有効量の超抗原と共に、この超抗原と反応し得るＴ細胞の分裂と 生長とをもたらすに十分な条件と時間の下に培養し；（ｂ）過程（ａ）からの培 養されたＴ細胞を哺乳動物中に注射し；（ｃ）このアウスからの脾細胞をプラズ マサイトーマ細胞系統と融合し；か（ｄ）融合した細胞を培養して抗−Ｔ細胞抗 体を分泌するハイブリドーマを生産する： 過程群からなる方法。 ６．超抗原が細菌およびレトロウイルスからなる群から選ばれた供給源から誘導 されたものである特許請求の範囲第５項記載の方法。 ７．細菌源誘導超抗原がブドー球菌類、マイコプラズマ類および連鎖球菌類から なる群から選ばれたものである特許請求の範囲第５項記載の方法。 ８．超抗原がミコプラズマアルトリチジス（ＭｙｃｏｐＩａｓｍａａｒｔｈｒｉ ｔｉｄｉｓ）−誘導超抗原ＭＡＭである特許請求の範囲第５項記載の方法。 ９．特許請求の範囲第１項に従い、更に（ａ）培養した細胞を過程（ｃ）で得ら れた抗体と接触させ；（ｂ）この細胞と抗体とを、この抗体と細胞との間に免疫 複合体が形成されるに十分な時間および条件下に培養し；（ｃ）この免疫複合体 を除去して、抗体によって認識きれないＴ細胞を増強したＴ細胞試料を得； （ｄ）過程（ｃ）から得た試料を有効量の超抗原と共に、Ｔ細胞の分裂と生長と をもたらすに十分な条件と時間の下に培養し；（ｅ）過程（ｄ）から得られたＴ 細胞を哺乳動物中に注射し；かつ（ｆ）抗−Ｔ細胞Ｖβ抗体を得る： 過程群からなる方法。 １０．特許請求の範囲第９項に従い、更に各抗体がそれぞれ別のＶβ遺伝子生産 物を認識する抗−Ｔ細胞抗体のパネルを出現させるように過程（ａ）ないし（ｆ ）を繰り返すことからなる方法。 １１．特許請求の範囲第１項に従い、更に（ａ）培養した細胞を過程（ｃ）で得 られた抗体と接触させ；（ｂ）この細胞と抗体とを、この抗体と細胞との間に免 疫複合体が形成されるに十分な時間および条件下に培養し；（ｃ）この免疫複合 体を除去して、抗体によって認識されないＴ細胞を増強したＴ細胞試料を得； （ｄ）過程（ｃ）から得た試料を有効量の超抗原と共に、Ｔ細胞の分裂と生長と をもたらすに十分な条件と時間の下に培養し；（ｅ）過程（ｄ）から得られた丁 細胞を哺乳動物中に注射し；（ｆ）このマウスからの脾細胞をプラズマサイトー マ細胞系統と融合し；か（ｇ）融合した細胞を培養して抗−Ｔ細胞抗体を分泌す るハイブリドーマを生産する：過程群からなる方法。 １２．特許請求の範囲第１１項に従い、更に各抗体がそれぞれ別のＶβ遺伝子生 産物を認識する抗−Ｔ細胞抗体のパネルを出現させるように過程（８）ないし（ ｆ）を繰り返すことからなる方法。 １３．特許請求の範囲第５項に従い、更に（ａ）培養した細胞を過程（ｃ）で得 られた抗体と接触させ；（ｂ）この細胞と抗体とを、この抗体と細胞との間に免 疫複合体が形成されるに十分な時間および条件下に培養し：（ｃ）この免疫複合 体を除去して、抗体によって認識されないＴ細胞を増強したＴ細胞試料を得； （ｄ）過程（ｃ）から得た試料を有効量の超抗原と共に、Ｔ細胞の分裂と生民と をもたらすに十分な条件と時間の下に培養し；（ｅ）過程（ｄ）から得られたＴ 細胞を哺乳動物中に注射し；（ｆ）このマウスからの脾細胞をプラズマサイトー マ細胞系統と融合し；かつ（ｇ）融合した細胞を培養して抗−Ｔ細胞抗体を分泌 するハイブリドーマを生産する： 過程群からなる方法。 １４．特許請求の範囲第５項に従い、更に各抗体がそれぞれ別のＶβ遺伝子生産 物を認識する抗−Ｔ細胞抗体のパネルを出現させるように過程（ａ）ないし（ｆ ）を繰り返すことからなる方法。 １５．Ｔ細胞Ｖβタンパク質のサブセットに特異性の多クローン性抗体であって 、（ａ）Ｔ細胞を有効量の超抗原と共に、この超抗原と反応し得るＴ細胞の分裂 と生長とをもたらすに十分な条件と時間の下に培養し；（ｂ）過程（ａ）から得 られたＴ細胞を哺乳動物中に注射し；かつ（ｃ）この哺乳動物から抗体を含む血 清を取り出す：過程群からなる方法から得られた多クローン性抗体。 １６．Ｔ細胞Ｖβタンパク質のサブセットに特異性の単クローン性抗体であって 、（ａ）Ｔ細胞を有効量の超抗原と共に、この超抗原と反応し得るＴ細胞の分裂 と生長とをもたらすに十分な条件と時間の下に培養し；（ｂ）過程（ａ）から得 られたＴ細胞を哺乳動物中に注射射し；（ｃ）このマウスからの脾細胞をプラズ マサイトーマ細胞系統と融合し；か（ｄ）融合した細胞を培養して抗−Ｔ細胞抗 体を分泌するハイブリドーマを生産する： 過程群からなる方法から得られた単クローン性抗体。 １７．Ｔ細胞の限定された個体群に特異性の単クローン性抗体であって、この抗 体がＡＴＣＣ受理番号ＨＢ１０８７４で与えられるものである単クローン性抗体 。 １８．Ｔ細胞機能障害を診断するに際して、（ａ）患者から生物学的検体を得； （ｂ）この検体を特許請求の範囲第１項記載の方法に従い得られた抗体と接触さ せ； （ｃ）この抗体と、存在するならこの抗体によって認識されるＴ細胞との間に免 疫複合体を形成させ：かつ （ｄ）存在するならこの免疫複合体を検出する：過程群からなる方法。 １９．Ｔ細胞の限定された個体群に特異性の抗体およびそのための薬学的に許容 し得る担体からなる組成物。 ２０．Ｔ細脂の限定されたセットの増大（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）に起因するＴ細 胞機能障害を有する患者を処置するに際して、（ａ）患者に、抗体がその機能障 害に含まれるＴ細胞の限定されたセットに対して特異性である特許請求の範囲第 １項または第６項に記載の方法に従って得られる抗体を注射し：かつ （ｂ）この限定されたＴ細胞個体群の溶解または除去を監視する：過程群からな る方法。