JPH07501237A

JPH07501237A - ヒト受容体における抗体−仲介異種移植拒絶を弱めるための方法および組成物

Info

Publication number: JPH07501237A
Application number: JP5504611A
Authority: JP
Inventors: グッド，エイ．ヒーサー; クーパー，デビッド，ケイ．シー．; マルコム，アンドリュー，ジェイ．
Original assignee: アルバータ　リサーチ　カウンスル; インテグリス　バプティスト　メディカル　センター，インコーポレイテッド
Priority date: 1991-08-23
Filing date: 1992-08-21
Publication date: 1995-02-09
Anticipated expiration: 2016-08-20
Also published as: IL102916A0; US6607723B1; ATE232730T1; DE69232928D1; US5651968A; US5767093A; JP3201523B2; US5695759A; EP0661980A1; EP0661980A4; AU666128B2; AU2505992A; IL102916A; WO1993003735A1; EP0661980B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ヒト受容体における抗体−仲介異種移植拒絶を弱めるための方法および組成物本発明は移植免疫学の一般的分野におけるものであり、特％ｌｌ　ｌこ異種移植；こそして炭水化物異種抗原に対する曲成ヒト抗体の阻害および／まｔこ尤よ除去を通してヒトにおける異種移植を容易にするための組成物と方法（こ関連する。

１、　Ａｇａｓｈｉ、τ、：　ＰｒｔＳｅｎｗｔｉｏｎ　ａｔ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　Ｉｎ狽■窒獅≠■ Ｏｒｇｐｎｓ、　３７ｔｈ　Ａｎｎｕａｌ　Ｍｅｅｔｉｎｇ　ｉｎ　Ｃｈｉｃａｇｏ：　Ａｐｒｉｌ　２６．１９９１゜２、　Ｂａｎｎｅｔｔ、　Ａ、Ｄ、、　ＭｃＡｌａｃｋ、　Ｒ，Ｐ、、　Ｒａｊｌ、　Ｒ，、Ｂａｑｕｅｒｏ、　Ａ、、　ＭＣ５ｒｒｌＳ、@Ｍ、：Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、　Ｐｒｏｃ、　ＸＩＸ：４５４３−４５４６．１９８７゜３、　Ｂｅｎｓｉｎｇｅｒ、　Ｗ、！−，Ｂｕｃｋｎｅｒ、　Ｃ，Ｄ、、　Ｔｈｏｍｕ、　Ｅ、Ｄ、、　ＱｉＡ、　Ｒ，Ａ、：Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、　１１：４２７−４２９．１９８２゜４、　Ｃｈｉｅｎ、　Ｊ、Ｌ、、　Ｌｉ、　Ｓ、Ｃ，、Ｌｉ、　Ｙ、Ｔ、：　Ｊ、　Ｉｊｐｉｄ　Ｒｅｓ、　ＺＱ：６６９−６刀、　１９７X ５、　Ｄｕｂｏｉ３．　Ｍ、、　Ｇ１１ｌｅｓ、　Ｋ、、　ｌ（ａｍｉｌｔｏｎ　Ｊ、に、、　Ｒｅｂｅｒｓ、　Ｐ、入、、　Ｓｍｓ出、　e、：　Ａｎａｌ。

Ｃｈｅｍ、　ｉ：３５０−３５６．１９５６゜６、　Ｅｇｇｅ、　Ｈ，、Ｋｏｒｄｏｗｉｃｚ、　Ｍ、、Ｐｅｔｅｒ−Ｋａｔａｕｎｉｃ、Ｊ、、Ｈａｎｆｌａｎｄ、Ｐ、：　Ｊ、　Ｂｉｏ戟B Ｃｈｅｍ、　’Ｉｆρ：４９２７−４９３５．１９８５゜７、　Ｅｔａ、　Ｔ、、　Ｉｃｈｉｋｚｗａ、　Ｙ、、　Ｎｉｍｍｕｒａ、　Ｋ、、　Ａｎｄｏ、　Ｓ、、　Ｙａｍａｋａｗａ、　Ｔ、：　P゜Ｂｉｏｃｈｅｍ、　（ｒｏｋｙｏ）　ｆ！４：２０５−２１３．１９６１８、　Ｇａｌ市、　Ｕ、、　Ｃ１ａｒｋ、　Ｍ、Ｒ，、５ｈｏｈｅｔ、　Ｓ、Ｂ、、　Ｂｕｅｈｌｅｒ、　Ｊ、、　Ｍａｃｈｅｒ、　Ｅ、ＡA：Ｐｒｏｃ、　Ｎａ１１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｐ：　１３６９−１３７３．１９８７゜９、　Ｇａｍ、　Ｕ、、　Ｍａｃｈｅｒ、　Ｂ、Ａ、、　Ｂｕｅｈｌｅｒ、　Ｊ、、　５ｈｏｈｅｔ、　Ｓ、Ｂ、：　Ｊ、　ＥＸｐ、　ＭｅпB 皿：５７３−５８λ１９８５゜＋０．　Ｇａ１ｉｌｉ、　Ｕ、、　５ｈｏｈｅｔ、　Ｓ、Ｂ、、　Ｋｏｂｒｉｎ、　Ｅ、、　５ｔｕｌＬｓ、　Ｃ，Ｌ、、　Ｍａｃｈｅｒ、@Ｂ、Ａ、：　Ｊ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　フ」：１７７５５−１７７６２．１９８８゜Ｉｔ、Ｈｏｌｇｅｒｓｓｏｎ、Ｊ、、Ｃａ１ｒｎｓ、Ｔ、Ｄ、Ｈ，、Ｂｒｅｉｍｅｒ、Ｍ、Ｅ、、Ｔａｕｂｃ、Ｄ、、Ｗｅｌｓｈ、に、。

Ｓａｍｕｅｌｓｓｏｎ、　Ｒ，Ｅ、：　Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｊ、旦：１７２．１９９１゜１２、Ｈｏｌｇｅｒｘｓｏｎ、　Ｊ、、　Ｊｒｍｌｌ、　Ｐ、Ａ、、　Ｓａｍｕｅｌｍｎ、　Ｂ、Ｅ、、　Ｂｒｅａｍｅｒ、　Ｍ、Ｅ、：　i。

Ｂｉｏｅｈｅｍ、　（Ｔｏｋｙｏ）　１Ｑ１１ニア６６、１９９０゜１３、Ｌｅｍｊｅｕｘ、　Ｒ，Ｕ、、　Ｂａｋｅｒ、　Ｄ、、　Ｂｕｎｄｌｅ、　Ｄ、：　Ｕ、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ　Ｎｏ、　４，１３７，S０１゜１ｓｓｕｅｄＪａｎｕａｒｙ　３０．１９７９゜１４、Ｌｔｍｃｕｘ、　Ｒ，Ｕ、、　Ｂａｋｅｒ、　Ｄ、、　Ｂｕｎｄｌｅ、　Ｄ、：　Ｕ、に、　Ｐａｔｅｎｔ　Ｎｏ、　１５４４９０８K １ｓｓｕｅｄ　Ａｕｇｕｓｔ　２９．１９７９゜１５、　Ｉｚ＋ｎ１ｅｕｘ、　Ｒ，Ｕ、、　Ｂｕｎｄｌｅ、　Ｄ、、　Ｂａｋｅｒ、　Ｄ、Ａ、二Ｕ、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ　Ｎｏ、　４，２R８，４７３゜１ｓｓｕｅｄ　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　９．１９１１１０゜１６、ｌｚｍｉｅｕｘ、　Ｒ，Ｕ、、　Ｒａｔｃｌｉｆｆｅ、　Ｒ，Ｍ、：　Ｕ、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ　Ｎｏ、　４，３６２，７２０．　ｉ唐唐浮■■ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　７．１９８２゜１７、Ｍａｚｉｄ、Ｍ、Ａ、：ＥｕｒｏｐｅａｎＰａｔｅｎｔＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ、８９３１１５４０．２αｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ１０３７１６３６　Ａ２）、　ｆｉｌｅｄ　Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　８．１９ｇ９゜１１ｉ、Ｍａｚｉｄ、　Ｍ、＾、：　Ｕ、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｎｏ、　０７／２７０，９５０．　ｒｄｅｄＮｏｖｅｍｂｅｒ　９．１９８８゜１９、　Ｐｉｒｕｏ、Ｂ、Ｍ、、ＢｕｎｄＬｅ、Ｄ、Ｒ−：　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、Ｒｅｓ、■７ｄ：３１３−３１８．１’１３゜２０、Ｐｌａｔｔ、　ＬＬ、、　Ｌｉｎｄｍａｎ、　ＢＪ、、　Ｃｈｅｎ、　Ｈ，、５ｐｉｔａｌｎｉｋ、　Ｓ、Ｌ、、　Ｂａｃｈ、　Ｆ、g，：Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、　５［：８１７Ｊ１２２．１９９０゜２１、Ｒｘｐｐ、　Ｈ，１，、Ｂｏｒｓｏｓ、　Ｔ、：　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　ｉ：９１３− ９１９．１９６６−２２、　５Ｌｅｌｌｎｅｒ、　Ｋ、、　Ｈａｋｏｍｏｒｉ、　Ｓ、、　Ｗａｒｎｅｒ、　Ｇ、Ａ、：　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、 @Ｒｅｓ。

Ｃｏｍｍｕｎ、　５：Ｌ：４３９−４４５．１９７３゜２３、　５ｔｕｌｔｓ、　Ｃ，Ｌ、、　Ｓｗｅｅｌｅｙ、　Ｃ，Ｃ，、Ｍａｃｈｅｒ、　Ｂ、Ａ、：　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏ撃盾■■ Ｌ夕：１６７−２１３．１９８９゜２４、Ｗｅｅｔａｌｌ、　）（、Ｈ，：　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　ＸＬＩＭ：１４０．１９７６゜２６、Ｄａｈｍｅｎ、　Ｊ、、　Ｔｏｒｂｊｏｒｎ、　Ｆ、、　Ｍａｇｎｕｓｓｏｎ、　Ｇ、、　Ｎｏｏｒｉ、　Ｇ、、　Ｃａｒｌｓｅｒｏ香A　Ａ、：Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、　１２ｉ＋１５−２５．１９８４゜２７、Ｇａｒｅｇｇ、　ＰＪ、、　０ｓｃａｒｓｏｎ、　Ｓ、：　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、　ｌｌ：２０７−２１３．１９８５゜２８、Ｇａｒｅｇｇ、　ＰＪ、、　０ｓｃａｒｓｏｎ、　Ｓ、：　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒａ、　１１７：２７０−２７５．１９８５゜２９、Ｊａｃｑｕｉｎｅｔ、　Ｊ、、　Ｄｕｃｈｅｆ、　Ｄ、、　Ｍｕａ＋、　Ｍ、、　５ｉｎａｙ、　Ｐ、：　Ｊ、Ｃ，Ｓ、　Ｐｅｒｋｉ氏@ｉ：３２６− ３３０、１９１１１１゜３０、Ｋｏｉｋｅ、　Ｋ、、　Ｓｕｇｉｍｏｔｏ、　Ｍ、、　５ａｊｏ、　Ｓ、、　Ｉｔｏ、　Ｙ、、　Ｎａｋａｈａｒｉ、　Ｙ、、　Ｏｇ≠翌＝A　Ｔ、：（＝＝２１ｘ１ヒｘｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、　１ｆ１１：１８９−２０８．１９８７゜３１、Ｓｃｈ＠ｕｂａｃｈ、　Ｒ，、Ｈｅｍｂｅｒｇｅｒ、　Ｊ、、　Ｋｉｎｚｙ、　Ｗ、：　Ｌｉｅｂｉｇｓ　Ａｎｒ＋、　Ｃｈｅｍ、ωV− ６１４、１９９１゜３２、Ｌｌｕｓ、　Ｒ，、ｔＪｌｒｉｃｈｓ、　Ｋ、、　Ｍｕｕｅｒ−ＲｕｃｈｈｏｌＬｚ、　Ｗ−：　Ｉｎｔ、　Ａｒｃｈｓ、　Ａｌｌｅ窒■凵@Ａｐｐｌ。

Ｉｍｍｕｎ、　３１３：２０１−２０７．１９８８゜３３、ＲａＬｃｌｉｆｆｅ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｕ、Ｓ、　ＰａｔｅｎＩＮｏ、　５，０７９，３５３．１ｓｓｕｅｄ　Ｊａｎｕａｒｙ　７．P９９２．　ｆｏｒ ”５ｉａｌｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ、　Ａｎｔｉｇｅｎｓ、　Ｉｍｍｕｎｏａｄｓｏｒｂｅｔ＋ｔｓ、　ａｎｄ　Ｍｅｔｈｏр刀@ｆｏｒｔｈｅｉｒ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ”。

３４、　０ｋａｍｏｔｏ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｔｅｔｒａｈｃｄｒｏｎ、　Ｖｏｌ、　４６．　Ｎｏ、　１７．　ｐｐ、　５８３５−５８３７@（１９９０）。

３５・　Δｂｂａｓ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、　Ｊａｐａｎｅｓｅ−Ｇｅｒｍａｎ　Ｓｙｍｐ、　Ｂｅｒｌｉｎ、　ｐｐ、　２０−２１@（１９８８）。

３６、Ｐａｕｌｓｏｎ、　Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍ、　Ｉｎｋ、　Ｅｄ、　Ｅｎｇ、、　、］：］１５５−１７３（１９８２）。

３７、Ｓｃｈｍｉｄｔ、　Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍ、　Ｉｎｔ、　Ｅｄ、　Ｅｎｇ、、　ｐ：２１２−２３５　（１９８６）。

３８、Ｒ＋ｊｅｄｉ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ、　Ｊ、、　４：９７−１０８　（１９８７）３９、Ｋａｍｅｙａｍａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、　２Ｑ２：Ｃ，−Ｃ４（＋９９１）４０、Ｅｋｂａｒｇ　ｅｔ　ａＪ、、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、　、ＩＩＱ：５５−６７　（１９８２）。

４１、Ｄａｈｍｅｎ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、　■■ ２９２−３０１　（１９８３）。

４２几■ａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｃａｒｂｏｈｖｄｒ、　Ｒｅｓ、　Ｓ２１：１４９−１５７　（１９８１）。

４３、　Ａｍｖａｍ−Ｚｏｌｌｏ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、　】ニジ、Ｑ：１９９−２１２　（１９８６）。

４４、Ｐａｕｌｓｅｎｅｔａｌ、、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、Ｒｅｓ、ｌＱ４：１９５−２１９（１９８２）。

４５、　Ｃｈｅｍｙａｋ　ｅｔ　ａｌ、、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、Ｒｅｓ、１２ｆｌ：２６９−２８２　（１９８４）。

４６、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−５ａｎｔａｎａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｃｈｅｍ、　ｆｉ：５３１−５３７　（１’P１９）。

４７、Ｌｅｅｅｔａｌ、、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、Ｒｅｓ、、］：１９３ｅｔｓｅｑ、（１９７４）。

４８、Ｒａｔｃｌｉｆｆｅｅｔａｌ、、Ｕ、Ｓ、Ｐａｊｅｎ【Ａｐｐｌｉｃ、ｒｕｏｎＳｅｒｉａｌＮａ、’Ｇ７／２７８，１０６．ｆｉｌ■■ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　３０．１９８８゜本明細書中で言及するすへての出版および特許申請は、本発明に関連する技術の技術的熟練の水準を示している。すへての出版および特許申請はこの中に、あたかもそれぞれの出版または特許申請を特別にそして個々に完全な形で引用文献で取り入れられたのと同し程度の完全さをもって引用文献として取り入れられている。

背景１９９０年にアメリカ合衆国では１５，０００以上の臓器移植か実施された。

（臓器移植および臓器調達のだめの合衆国科学的登録および移植ネットワークの年次報告、＋９９０．）適当な臓器か６，０００人のトナーから得られ、そのうち４，５００以下か死体トナーからのものであった。アメリカ合衆国の臓器割当ての連合ネットワークの待機リストに載せられた患者数はいつの時点においても２３．０００人近くに上る。したかって、多くの潜在的受容体人口か適合臓器移植のために１年以上の期間待機することになるだろう。

臓器移植の成功か着実に増大するにつれ、ますます多くの患者がこの方法に対して差し向けられ、適合臓器の不足は従来より一層激しくなった。現在、腎臓移植では１年ｒＪＩの移植片生ｒγか優に９０％を超え、心臓移植では８０％以上、そして肝臓および膵臓の移植では移植片の生存率は８０％に近づきつつある。

適当なトナーの必要性に関して一般大衆および医学専門家を教育する努力が大いになされているにもかかわらず、適当な臓器への要求と利用できることとの間のギャップは増大しているよってある。この問題に対する一つの解答は動物臓器を使用することではないだろうか。このような状況の中で人間以外の霊長類をドナーとして用いることか８慮されている。

しかし、これらの動物は世界的に供給か不足しており、とくにより人望のサルに関していえはそれらはしはしは絶滅の危険にさらされた種となっている。したかって、臓器提供の役割を考えるには十分な数がなく、さらに、たとい広範な捕肺１育プログラムによるとしても数は容易に増やすことはできないだろう。他に不利な点として大きさか比較的小さいことかあり、ヒｌ−成人に対する臓器のドナーとしては不適切であり、またウィルス感染の危険もある。また、これらの動物をかなり大きなスケールで使用することに対する凹四一般のやかましい反対もあると思われる。

ブタのよ・うな、種として人間からより遠い哺乳類は多くの面で非常に適当と考えられる。というのはブタは適当な大きさに成長し、飼育か容易で、特別な病原菌なしのブタ群またはノドバイオ的（無菌）状態ですら飼育することかでき、またすてにヒトの消費目的のために特別に多数か飼育されているからである。しかしながら、ブタとヒトのように大きく隔たった種の間の臓器移植は、数分あるいは数時間内に抗体−仲介の通念性拒絶か起こり、この拒絶反応は現在利用できる免疫抑制法により田土または治療することはできない。抗体−仲介拒絶の問題を克服することかできるとすれば、毎年利用できるヒトト′ナーの数によって臓器移植が制限されることはなくなるかもしれない。

そうなれば社会にとっての利益は太きいてあろう。現在、心臓移植を待っている患者の３分のｌは適合した臓器か人手できないまま死んでいる。もし動物臓器か使用されるならば、必要と思われる時にてきるだけ早く移植を受けることかできるだろうし、緊急手続きの必要なしに理想的条件下て選択的に手術か実施できるであろう。さらに、入毛できる比較的少数のトナー臓器は理想的な患者に使用しなくてはならないと思われているので、患者か境界ぎりぎりの禁忌を有するときは、移植待機リストに書き入れられず、現在このような患者か多数ににってし）る。ドナー臓器の数に制限かないとずれば、よりずっと多くの候補者に対して臓器移植を確実に提供できるであろう。従って、異種移植を容易にすると思われる構成および方法は極めて？＋−用なものとなるてあろう。

ＡＢＯ−ミスマツチ個体間の非−異種移植を容易にすることについて幾分成功かなされている。ヒトにおける移植においていくつかの特許（Ｕ、　Ｓ、特許４゜１３７．４０１１３および４，２３８，４７３”：Ｕ、に、特許１５４４９０８ ′４：Ｕ、　Ｓ、特許申請出願番号０７／２７０，９５０”＋欧州特許申請番号８９３１１５４０．２１７）に記載されている方法と同じ方法を用いて天然に存在する抗−Ａおよび／または抗−Ｂ抗体を体外除去することによってＡＢＯ−ミスマツチ個体間の腎臓および骨髄移植を成功裡に行うことかできた（Ｂａｎｎｅｔｔ他、１９８７”。

Ｂｅｎｓｉｎｇｅｒ他、１９８２３）。

抗−八、抗−Ｂおよびその他の抗−炭水化物抗体は同種輸液反応および皮膚移植片と移植臓器の拒絶に関与している。したがって炭水化物決定基に対する抗体か異種移植の急性拒絶において重要な役割を演するかもしれないという仮説か提出されている。い（つかの研究によっである特定の炭水化物構造が異種抗体の標的であるということか示されている（Ｌａｕｓ他、　ｌ　９８８”、Ｐｌａｔｔ他、１９９０”。

Ｈｏ１ｇｅｒｓｓｏｎ他、１９９１”）。

たくさんの糖脂質か哺乳動物細胞から純化されこれらの構造の多くは５ｔｕｌ　ｔｓらによって論文中にレビューされている（１９８９）”。ウサギ、ウシ、および新世界サルから得た細胞から線形Ｂ梨２一様スフィンゴ糖脂質が精製された（Ｅｔａら、１９６７７、　５ｔｅｌｌｎｅｒら、１９７３”、Ｃｈｉｅｎ　ら、１９７９’　、Ｅｇｇｅら、　１９８５６およびＧａｌ山ら、１９８７＠）。

ヒトから得た血漿中に抗−炭水化物抗体のたくさんの特異性が同定されている。

Ｇａｌ山と共同研究者ら（１９８５）”は抗−αＧａｌ　（１−３）βＧａｌ抗体が循環ヒト［ｇＧの１％はとを占めることを確認した。この研究グループは生物的適合固状支持体に結合したａＧａ＋　（１−３）βＧａ１（１−４）βＧＩｃＮＡｃ（線形Ｂ型２）を用いてヒ１−ＡＢ血清から抗体を精製した。かれらは、これらの抗体はブタ内皮細胞（大動脈からの）、ブタ」二皮細胞（目の水晶体からの）および非−霊長哺乳類それに新世界サルから得た多くの他の組織には結合するが、健常な旧世界サル、定長サル、つまりヒトから得た組織には結合しないことを見いだした（Ｇａ１ｉ１ｉら、１９８８”）。

非−異種移植において、ヒト抗−へおよび抗−Ｂ抗体を体外除去するために免疫吸着剤の形て固状支持体に共有的に結合した、ＡおよびＢ血液型三糖を用いて抗 −炭水化物抗体を中和または除去すると、ＡＢＯ血液血液型壁障壁切って腎臓および骨髄移植が容易になることかわかった（Ｂａｎｎｅｔｔら、１９８７″。

Ｂｅｎｓｉｎｇｅｒら、１９８２’およびＡｇａｓｈｉ　ｌ　９９１　’　）、このアプローチは現在臨よびＢ血液型三糖の注射用剤形は現在前臨床開発段階にある。異種特異的抗体活性の研究で、固状支持体に共有結合て付着した他のオリゴ糖を用いた場合、抗炭水化物抗体をとくにうまく除去することができなかったことか報告されている本発明は異種の細胞、組織または臓器をヒトに移植するのを容易にするための２つの技法を含んでいる。１つの技法は受容体血液から異種抗体を体外除去することを含んでいる。もう１つはｉｎ　ｖｉｖｏて異種抗体を阻害することを含む。本発明はまたこれらの方法で用いられ、またはそれらから結果として生ずる組成物をも含む。

したがって、本発明の１つの局面は異種移植を受けるヒト受容体中での抗体−仲介異種移植拒絶を弱めるための方法でありそれは以下のことから成る　１個またはそれ以上の異種抗原を同定し、その（それらの）抗原を生物的適合固状支持体に付着させ、受容体から抗体−含有体液を取り出し、拒絶に関与する上述の異種移植の少くども１個の炭水化物抗原に対する曲成抗体を、適合リンカ−アームを通して１個または複数の抗原か結合している生物的適合固状支持体上で体液を体外潅流させることによってその体液から除去し、ついて潅流したその体液を受容体に戻してやる。

本発明の池の局面は、異種移植のヒト受容体における抗体−仲介異種移植拒絶を弱めるための方法であり、曲成抗体に対する少くとも１個の炭水化物異種抗原を同定することを含んでおり、受容体に対する拒絶に関与する１個またはそれ以上の抗体に結合できる少くとも１個の炭水化物異種抗原を、抗原に対する受容体の抗体を阻害するのに十分な量だけ投与する。

本発明のさらに別の局面は、異種移植のヒト受容体において抗体−仲介異種移植拒絶を弱めるのに有用な構成であり、これは少くとも１個の炭水化物異種抗原の注射可能な処方か含まれる。

さらに本発明の別の局面は、異種移植のヒト受容体の血液から異種抗体を除去するのに作用な構成で、これによって受容体による異種移植片に対する拒絶を弱めるためのものであり、少くとも１個の同定された異種抗原か適合リンカ−アームを通じて結合している生物的適合固状支持体を含んでいる。

また本発明のその他の局面は、上述の異種移植の拒絶を弱めるために異種移植のヒト受容体に輸液するのに有用なヒト血液または血漿であり、この血液または血漿は少くとも１個の同定された抗原に対する曲成抗体が除去されている。

図面の簡単な説明図ＩＡ−ＩＨはブタ心臓、ブタ腎臓および／またはブタ赤血球ストローマから溶出したヒト抗体の結合をしらべるのに用いた炭水化物構造を示す。

図２はブタ赤血球の抗体−仲介溶血が種々のマトリックス−結合炭水化物およびマトリックス一結合炭水化物構造体の混合物上へのヒト血漿の前吸着によって減少することを示す。

図３はヒツジ、ブタおよびウシ赤血球の抗体−仲介溶血が、マトリックス−結合炭水化物およびマトリックス一結合炭水化物構造によるヒト血漿の前−吸着によって減少することを示す。

図」Ａおよび４Ｂは種々のブタ細胞型の溶血が、ヒト血漿（０血漿（Ａ）およびＡＢ血’Ｉｆｆ　（Ｂ）　ｌをマトリックス−結合ａＧａｒ　（１−３）βＧａ１（１−４）βＧｌｃＮＡｃ　−Ｒ（線形Ｂ型２）またはαＧａ１（１−３）β Ｇａ１（１−４）。

βＧｌｃ−Ｒ（線形Ｂ型６）で前−吸着したとき減少することを示す。

図５はヒト血漿（０，Ａ、ＢおよびＡＢ）をいくつかのマトリックス−結合炭水化物抗原で前吸着したとき、ブタ腎臓細胞株（ＬＬＣ−ＰＫ、　）に対する溶血か減少することを示す。

図６は異なるヒ１−ＡＢ血漿をいくつかのマトリックス−結合炭水化物抗原で前吸着したとき、ブタ腎臓細胞株（ＬＬＣ−ＰＫ、）に対する溶血か減少することを示す。

図７はヒト血漿（０，Ａ、ＢおよびＡＢ）をいくつかのマトリックス−結合炭水化物抗原で前吸着したとき、ブタ腎臓細胞株（ＬＬＣ−ＰＫＩ　）に対する溶血か減少することを示す。

図８Ａおよび８Ｂはヒト血漿（０血漿（Ａ）およびＡ血漿（Ｂ））をいくつかの可溶性炭水化物抗原とインキュベートするとブタ腎臓細胞株（ＬＬＣ−ＰＫ、）に対する溶血か減少することを示す。

図９はヒト血漿（０，Ａ、ＢおよびＡＢ）をいくつかの可溶性炭水化物抗原とインキュベートするとブタ腎臓細胞株（ＬＬＣ−ＰＫＩ　）に対する溶血が減少することを示す。

図１Ｏは異なるヒトＡＢ血漿をいくつかの可溶性炭水化物抗原とインキュベートするとブタ腎臓細胞株（ＬＬＣ−ＰＫ、）に対する溶血が減少することを示す。

図１１Ａ−Ｄはヒト血漿（０，Ａ、ＢおよびＡＢ）をいくつかのマトリックス− 結合炭水化物抗原で前吸着すると、ＥＬＩＳＡで検出されるように抗体か除去されることを示す。

図１２Ａ−Ｄは異なるヒトＡ、Ｂ血漿をいくつかのマトリックス一結合炭水化物抗原で前吸着すると、ＥＬＩＳＡで検出されるように抗体か除去されることを示す。

ここで用いるときつぎの言葉は以下の意味をもつ・異種移植：ヒト受容体において通常拒絶反応をひき起こす非ヒト哺乳動物の細胞、組織、またはｔａ器の移植。

拒絶：異種移植片に対する体液性および／または細胞成分での免疫反応。

弱毒化：拒絶反応の成分のいずれか一方または両方の減少または除去。

抗体−仲介：抗原−抗体反応からの直接または間接の結果としての免疫反応。

阻害：拒絶反応を誘起する抗体の能力の低下または除去。

異種抗原：異種移植の炭水化物抗原で、とくに拒絶反応に含まれるもの、または異種移植の炭水化物抗原に結合し得る抗体と交叉反応する抗原。

異種抗体、拒絶反応の一部として異種抗原を認識しそして結合する曲成（存在）ヒト抗体。

生物的適合：ヒト抗体−含有体液に対する化学的不活性。

血液二全血、血漿または血清。

適合リンカ−アーム：生物的固状支持体からの炭水化物抗原に場所を提供する部分てあり、そこで１つの官能基は支持体の相互官能基と結合することかでき、８９体液からの異種抗体の体外除去上に示したように本発明の１つの局面には以下のステップが含まれる：すなわち、１個またはそれ以上の異種抗原を同定し、それらの異種抗原を生物的固状支持体に結合させ、抗体−含有体液をヒト異種移植受容体から取り出し、１個またはそれ以上の異種抗原に対する曲成抗体をアフィニティクロマトグラフにより体液から除去し、こうして得られた異種抗体−除去体液を受容体に戻すこと。

この技法はどんな抗体−結合体液にも適用できるかもしれないが、通常は血液に適用されるだろう。血液を通常行われる方法で取り出し、凝固を防ぐために抗凝固剤（たとえば、ヘパリン、クエン酸）をそれに加える。必要ならば、血液を異種抗体除去処理に付する前に血液から細胞を除去してもよい。

異種抗体除去は血液を１個またはそれ以上の異種抗原を結合させてもっている固状支持体上で潅流させて達成する。異種抗原は血液を異種移植材料上で潅流してヒト血液から異種抗体を分離することによって同定し、異種移植片から結合抗体を除去し、ついで適当なイムノアッセイによるなど、候補炭水化物をスクリーンするような抗体を用いる。このような異種抗原の例は表１の下部と図１に示した。

炭水化物異種抗原の合成のための化学的方法は技術的に知られている方法で行うことかできる。これらの材料は一般的には、好ましいグルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコースおよびラムノースまたはラクトース中間体を含む適宜防御された個々の単糖を用いて集められる。

用いられる特異な方法は合成すべきそれぞれの構造に対して全体的に適合させ最適化させる。一般的に、オリゴ糖配糖体の全部または一部の化学合成はまず還元する糖または単糖のアノマー炭素原子上に配糖体結合を形成することを含む。

すなわち、天然に存在するかまたは化学的に修飾した糖構造（グリコジルドナー）の適当に防護された形を、ハロゲン化物、トリクロロアセトイミデート、アセチル、チオグリコシドなどを含む脱離基を導入するために還元単位のアノマー中心で選択的に修飾する。つぎにドナーを技術的によく知られた触媒条件下て配糖体結合か生成するその位置に１個の遊離水酸基を有する炭水化物アクセプターの適当な形またはアグリコンと反応させる。技術的には非常に多種類のアグリコン部分か知られており、正しい配位をもって還元単位のアノマー中心に付着させることかできる。

炭水化物合成の技術においてよく知られている適合遮断基の適当な使用によって合成構造を選択的に修飾または追加糖ユニットあるいは糖ブロックをアクセプター構造にさらに追加的に付着させることかできる。

配糖体連鎖の生成後、糖配糖体は（７１加的な糖ユニットを共役させるのに用いることかてき、または選択的位置で化学的に修飾し、あるいは伝統的な方法て脱防護した後、酵素的合成に用いられる。一般に、天然に存在または化学的に修飾した糖ユニットの糖配糖体への化学共役は文献に十分に言及されて確立された化学を用いて行われる。たとえば以下を参照のこと：　ＯｋａｍＯｔＯら、４．　Ｒａｔｃｌｉｆｆｅら。

ｓ、　Ａｂｂａｓ　ら、”　、Ｐａｕｌｓｏｎ”、　Ｓｃｈｍｉｄｔ３７．　Ｆｕｇｅｄｉら、３′、およびＫａｍｅｙａｍａら、３Ｉ。

Ｕ、　Ｓ、特許番号、４，１３７，４０１”、４，２３８．４７３１Ｓ、および４゜３６２．７２０”およびＤａｈｍｅｎら、”、　５ｃｈａｕｂａｃｈら、” 　、　Ｇａｒｅｇｇら！？、　２８゜Ｊａｃｑｕｉｎｅｔ　ら、”、　Ｃｏｘら、、およびＫｏｉｋｅ　ら、′。

図１に示した単糖およびオリゴ糖配糖体中、Ｘは酸素、硫黄、−ＮＨ−または共存結合を表し、Ｙは水素またはアグリコン基（すなわち、配糖体の成分て糖てないもの）を表す。大部分の例においてＹは一般式−Ａ−Ｚの１つの基を表し、ここてＡは１つの結合、炭素原子か２−１０個のアルキレン基、または−（ＣＨ２ −ＣＲ，−Ｇ）　、−を表し、ここてｎは１から５まで（ｌと５を含めて）の整数である。Ｒ１は水素、メチルおよびエチルから成るグループから選択される：そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、フェニル、およびアミン、ヒドロキシル、ハロおよび炭素原子１個〜４個のアルキル基から成るグループから選択された炭素原子１〜３個の置換基で置換されたフェニルから成るグループから選択され、Ｚは水素、メチルから成るグループから選択され、Ｇか酸素、硫黄または窒素てなくＡか結合テナイ場合、ＺもＯＨ，ＳＨ，−ＮＨ２，ＮＨＲ２，−Ｃ（０）ＯＲ２，−Ｃ（０）ＮＨ□、　−Ｃ（０）ＮＨ−ＮＨＲ，、−Ｃ（０）ＮＨＲ２および−Ｃ（０）Ｎ（Ｒ２）２から成るグループから選択され、そこで各Ｒ７は独立に水素または炭素原子１〜４個のアルキル基である。

なるへくならＸは−０−を表しＹは−Ａ−Ｚを表し、ここてＡは２個から１０個ノ炭素原子ノアルキレンでアリ、ＺバーＣ（０）ＯＲ，、−Ｃ（０）ＮＨ，、オヨＣＦ−Ｃ（０）ＮＨＲｚから成るグループから選択され、そこでのＲ２は独立に水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。

図１に示した炭水化物の中てのとくに好ましい炭水化物は式１．　２．　３．　４゜＋３．　２５．　２６．　３１．および３２てあり、ここてＸは一〇−てＹは−Ａ−Ｚ。

そしてここてＡは炭素原子２個から１０個のアルキレンでＺは−Ｃ（０）ＯＲ２゜−Ｃ（０）ＮＨ２および−Ｃ（０）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、Ｒ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。

異種抗原か結合した固状支持体は連続した大きな表面の形または粒子の形になっている。技術的にはたくさんの種類の生物的適合固状支持体材料が知られている。その例としては珪素、穴のあるグラスのような合成珪酸塩、珪藻土のような生物生産の珪酸塩、カオリナイトのような珪酸塩−含有ミネラル、およびポリスチレン、ポリプロピレン、および多糖体のような合成高分子がある。好ましい支持体はＵ、　Ｓ、申請番号０７／２７０，９５０”、１９８８年１１月９日出願、に記乾されており、その開示は引１■文献としてここに組み入れられている。

異種抗原は固状支持体上に共有結合で結合するがまたは非共有結合的（受動的）に吸着する。共有結合は支持体上の官能基と異種抗原の適合リンカ−アームとの間の反応によって生成する。適合リンキングアームを通じて炭水化物抗原か生物的適合固状支持体に付着することによって効果的に抗炭水化物抗体を除去できることか思いもかけず見出された。間接的結合に用いられる結合部分は好ましくは、単に固状支持体の表面からの抗原の距離として働く適当な長さく少くともＩ炭素原子）の有機三機能分子である。特定のリンキングアームは決定的ではない。

たくさんのアグリコンリンキングアームが技術的に知られている。たとえば、パラニトロフェニル基（すなわち、−ＹＲ＝−ＯＣ，Ｈ４ＰＮＯ２）を含むリンキングアームはＥｋｂｏｒｇら４０によって開示されている。合成の適当な時点で、二１・口塞をアミノ基に還元するとそれはＮ−トリフルオロアセトアミドとして防護することができる。支持体への共役に先立って、トリフルオロアセトアミド基を除去し、それによってアミノ基の保護か除かれる。

硫黄を含むリンギングアームはＤａｈｍｅｎら４１によって開示された。ずなオ）ち、リンキングアームは２−ブロモエチル基から導出され、それかチオヌクレオフィルとの置換反応て−ＯＣＨ，ＣＨ，５Ｃ１１２ＣＯ２ＣＨ，および−ＯＣＨ，ＣＨ□ＳＣ，ｌ＋、−ＰＮＩＩ２なとのような種々の末端官能基をもつリンキングアームに導かれることかわかった。

Ｒａ口ａら４２は６−ドリフルオロアセトアミドーへキシルリンキングアーム（ −〇−（ＣＩｌ、）、　−ＮＨＣＯＣＦ！　’）を開示しており、ぞこではトリフルオロアセトアミド保護基か除去できて共役に用いる１級アミノ基か現われる。

既知のリンキングアームのその他の例証として７−メドキシカルボニルー３゜６、ジオキサへブチルリンキングアーム”　（−０ＣＨ２−ＣＨ２）２０Ｃ１１２ＣＯ２ＣＨ２）　；　２−（４−メトギシカルポニルブタン力ルポギシアミノ）エチル”　（−００１２ＣＨ２ＮＨＣ（０）（ＣＨ，）、ＣＯ□ＣＨＩ）がある二またアリルリンギングアーム４５（−０ＣＨ，Ｃｌ１＝Ｃ１１□）かあり、これは適当なモノマーどラジカル共重合してコポリマーになる：その他のアリルリンキングアーム４６として（−０（Ｃ１１２ＣＩ＋２０）２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）か知られている。さらに、アリルリンキングアーＩ、は２−アミノエタンチオール１７の存在下で誘導体化することによってリンキングアーム−ＯＣＨ、ＣＨ２Ｃ１１２５ＣＩＩ　、ＣＩｌ　、ＣＨ２ＮＨ，を供給することかできる。その他適当なリンキングアームかＵ、Ｓ、特許番号４，１３７．４０１”、４，２３８，４７３１５．および４．　３６２．　７２０１′およびＤａｈｍｅｎら、。

とＧａｒｅ８ｇら２７に開示されている。

さらに、Ｒａｔｃｌｉｆｆｅら４８か開示したように、Ｒ基は１：ｊ加糖または還元糖末端にリンカ−アームを含むオリゴ糖でもよい。

てきうれば、アグリコン部分は疎水基で、最も好ましいのは、アグリコン部分か −（Ｃ１１□）、Ｃ０ＤＣ１１３，−（Ｃ１１２）、０ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２および−（ＣＨ２）　、ＣＨ２０Ｈがら成るグループから選択された疎水基である。

炭水化物抗原の官能リンキングアームはつぎに抗原を生物的適合固状支持体に付着させるのに用いられる。このようなイ：Ｊ着は技術的によく知られており、たとえはＶｅｎｏｔら、、Ｕ、Ｓ、出願番号０７／８８７，７４６に開示されており、それは弁護士名簿番号０００４７５−０２９として１９９２年５　Ｊ−１２２日に出願かなされ、完全な形で引用文献として本明細書に取り入れられている。

２個あるいはそれ以上結合した異種抗原の組合せを有する固状支持体は血液または血漿から特異性の異なる異種抗体を除去するのに使用されることがある。さもなければ、血液または血漿を、異なる特異性の異種抗体を除去するためにそれぞれか１個あるいはそわ以トの異種抗原を結合した一連の固状支持体上を順次通過させねばよい。そこで、実施例の結果に基づいて１個またはそれ以上の線形Ｂ型炭水化物異種抗原とほかの堅の炭水化物抗原（たとえば、Ａ型抗原、Ｆｏｒｓｓｍａｎ型抗摩、Ｒｈａｍｎｏｓｅ抗原、またはグルコサミン型抗原（図１参照）との組合せを用いるのか好ましいかもしれない。ブタの異種移植の場合、少くとも線形Ｂ壓２および線形Ｂ型６抗原か好ましいと思われる。抗原のこのような組合せは下に述べる異種抗体阻害方法においても用いてよいと思われる。

支持体に結合した異種抗原と血液または血漿中に存在する相補的な異種抗体との間の結合を促進させる条件下で血液を固状支持体と接触させる。体外血液潅流を実施するのに好ましい装置と技術は上述のＵ、　Ｓ、特許申請番号０７／２７０゜９５０”に述べられている。好ましい接触温度として３５°Ｃから４０°Ｃの範囲が用いられている。接触時間は典型的には１〜６時間の範囲になるだろう。

血液または血漿の非結合部分（すなわち、異種抗体−除去血液または血漿）はそのあと患者に再導入するために集められ、あるいは連続して直接再導入することかできる。異種移植片を異種抗体が実質的に存在しない中で、または異種抗体が比較的低い力価で存在する時に導入するために、受容体の血液からの異種抗体の除去を移植に先立って実施する（典型的には移植の前に毎日８回まで繰返す）。

受容体の異種抗体力価はイムノアッセイによりモニターできる。このような条件下で移植片を入れてやれは抗体−仲介超急性拒絶の起こる可能性を少なくすることができ（たとい抗体力価かそのあと増加するとしても）移植片の生存を長くさせる。

この現象は°゛順応゛、　”適応”、または”アネルギー”というようにいろいろに名付けられている。異種抗体の除去は必要に応して移植後も続けてよい。

アシクロスポリン、メチルブレドニフロン、およびアザチオプリンなどのような非特異的免疫抑制剤を使用する従来の薬理学的免疫抑制法を本発明の２つの方法のどちらかまたは両方と組合せて用いてもよい。

Ｃ，Ｉｎ　Ｖｉｖｏにおける異種抗体の阻害上に示したように、この方法は１個またはそれ以上の同定された異種抗原を異種移植受容体に非経口的に導入することを含んでいる。一旦血液循環中に導入されれば、これらの異種抗原は曲成抗体と結合してこれら異種抗体の活性を中和する。

異種抗体除去に用いたのと同し異種抗原を阻害法で用いてもよい。これらの異種抗原または薬理学的に許容しつるそれの誘導体（すなわちエステル）の１個またはそれ以上を従才法で使われている薬理学的に許容しうる賦形剤（たとえば注射用水）中に注射用として製剤化する。製剤化は典型的には以下の操作を含む。

すなわら抗原を賦形剤ど此合し、この混合物を限外濾過によって発熱物質を除去し、脱発熱混合物を滅菌濾過する。その混合物を貯蔵のために凍結乾燥し必要に応じて減菌賦形剤中で再構成する。

注射可能な製剤は断続的ポーラス注射または連続的静脈輸液によって投与してよい。投与は典型的には異種移植の血管再生の少し前に始められ移植浸種々の時間の間続けられる。移植の種類、年齢、体重、および受容者とドナーの病歴、および異種抗原の薬物動聾（ご従って特定の用量設定および投与法は異なるものとなる。典型的には、異種抗原を１〜２０日間にわたり約１００ｍｇ／ｈｒと１０００ｍｇ、／ｈｒの間の用量で連続的に投与する。同時に薬理学的免疫抑制を行うのかよい。

前に述△５たように異種抗体の対外除去を異種抗原の非経口投与と組合せて使用し以下の例は広い範囲のし１〜抗−非ヒト１１ｎ乳動物抗体かブタ異種移植片の細胞上の炭水化物抗原に対するものであること、これら抗体のいくつかは移植片の細胞に対して細胞毒性（溶＋ｍ的）であること、そして中糖および／またはオリゴ糖のいずれか一方、または両方の絹合せを投与すると、これら細胞溶解性の抗体を十分に中和することを示している。

これらの例においては、以下に別に定義しない限り、用いる略語は一般的に認められている意味である：ＥＬＩＳＡ−酵素＆鎖免疫吸着アッセイＢＳＡ−ウシ血清アルブミンＤＭＦ−ツメチルホルムアミ！・ＰＢＳ−燐酸緩衝生理食塩水＝７．８　ｎｆｉｌ　Ｎａ２１１ＰＯ，、２，２ｍＭ　ＫｔｌｚＰ０４．１５４蘭ＮａＣｌおよび１５　ｎｆＪ　ＮａＮｉ　、　ｐＨ７，１〜７．３ＧＩｃＮＡｃ＝Ｎ−アセチルグルコサミンＧａ１ＮＡｃ＝Ｎ− アセチルガラク１ヘサミンＦＢＳ＝ウシ胎児血清ｒｐｍ＝１分間当りの回転数Ｃｐｍ”１分間当りのカラン１へＵ−非吸着Ｐ　＝Ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｐ　Ｐによる吸着ＬａｃＮＡｃ＝βＧａｌ　（＋−４）βＧＩｃＮＡｃ−Ｒ，ここでＲは例３中のＲ＝−（ＣＨ，）、−ＣＯＮＨ−３ＹＮＳＯＲＢ　または例４中のＲ＝−（ＣＩ（、）、−ＣＯＯＣＲ。

５ＹＮＳＯＲＢ＝−（ＣＨ２）ｓ　−ＣＯＮＨ−リンキングアームを通してＣｈｒｏｍｏｓｏｒｐ　Ｐに結合した合成炭水化物構造図４Ａおよび４Ｂ、５−７．８Ａおよび８Ｂ、９．１Ｏ１ｌ　ＩＡ−Ｄ、および＋　２Ａ−Ｄ中の参照数字は図１に示した化合物の化学式を表してしする。

これらの例はいかなる仕方にせよ本発明の範囲を制限しようとするもので（よない。

する炭水化物化合物の同定ａ）　ヒト抗−ブタ抗体の分離ヒ１−抗−ブタ抗体を精製するのに２つのブタの集団からの臓器を使用した。そのブタの系統はボーラントチャイナとヨークシ４・−である。抗体調製物（よ１００−２００ｍ１のヒト血漿（０またはＡＢ）をブタ心臓、ブタ腎臓を通して潅流するかまたはブタ赤血球ストローマでコートした固状支持体を含むカラムを通すことによって得た。組織を０．　１５ＭＮａｃｌで十分に洗滌してのち、残った抗体を２゜Ｏｍｌの３ＭＮａ５ＣＮを用いて組織またはカラムから溶出した。

抗体を濃縮し、ついて蛋白含量を測定した。

ｂ）　炭水化物抗原炭水化物抗原はＰｉｎｔｏ　ａｎｄ　Ｂｕｎｄｌｅ　（１９８３）　”および／またはＬｅｍｉｅｕｘ。

Ｂｕｎｄｌｅ、　Ｂａｋｅｒ　（特許番号４，１３７，４０１）”（ＢＳＡの分子当りｌｏ〜２０ハブテン）により記載されたように、脂肪族リンカ−アーム（ＣＩ＋□’）　ＩＣ０ＯＣＨ２をつけた合成オリゴ糖をＢＳＡに共存結合させることによって作られた。実施例５の下面は、図１の炭水化物２に適用したこの方法について述へている。用いた単糖およびオリゴ糖のいくつかのものについての構造と簡略した名称を図１に示しである。抗体結合を検出するための合成炭水化物構造の使用については以前にＵ。

Ｓ、特許４，１３７，４０１”に記載されている。

Ｃ）　酵素連鎖免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）抗−炭水化物抗体を検出するためのＥＬＩＳＡアッセイに用いる技術はいくつかの研究グループの仕事を組合せたものである。９６の微小滴定プレー１−　（Ｆｌｏｗしａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ、、　ＭｃＬｅａｎ　Ｖｉｒｇｉｎｉａ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、）中の弁穴を１個当り２μｇのＢＳＡ−複合糖質またはＢＳＡ　（ＰＢＳ中ての希釈１ｍｌ当り２０μｇ　ＢＳＡ−抱合体）で室温１６時間のインキユベーシヨンによってコードンた。コー］・溶液を除去し、５％ＢＳＡを含む弁穴当り２００μｌのＰＢＳを添加した。４時間のインキユベーシヨン（２２°Ｃ）ののち、弁穴をＰＢＳて２回洗滌し、ついてＨ，Ｏで１回洗った。プレートを逆にし、乾燥させ、そのあと室温で保管した。

テストの直前に、Ｉ％ＢＳＡ　（１％ＢＳＡ／ＰＢＳ）を含むＰＢＳ　２００μ ｌ・　を弁穴の各々に加え環境温度で１０〜２０分間放置した。ヒト抗−ブタ製剤を１９（ｉＢＳＡ／ＰＢＳの１ｍｌ当り１５〜７０μｇの間の溶出蛋白質にまで希釈した。

ＢＳＡ／ＰＢＳを除去し希釈した抗−ブタ製剤１００μｌを適当な弁穴に添加し、ついて１６時間４°Ｃてインギュへ一トシた。抗体製剤を除去し、ついて弁穴をＰＢＳ　（１回の洗滌当り２００μｌ）で４回洗滌した。Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　Ｍｉｓｓｏｕｒｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、）から入手したアルカリフォスファターゼ−抱合試薬（抗−ヒト多価（α、γおよびμ鎖特異的）、抗−ヒｌ−１ｇＧ（γ鎖特異的）および抗−ヒＨｇＭ（μ鎖特異的）をそれぞれ１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中１１５００に希中口１５００混合物の１００μｌを各弁穴に添加した。２時間後、弁穴をＰＢＳＴ４回洗滌し、１％ＢＳＡと５００　ｔｌＭ　ＭｇＣ１１を含むＩＭ（７）ジェタノールアミン−ＨＣｌ　（ｐＨ９，，８）　１ｍｌ当り１．Ｏｍｇのｐ　−＝−ｈロフェ＝ル燐酸塩を弁穴当り１００μｌ添加した。１時間後、４０５ｎｍての光学密度（０，Ｄ、　）をＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ　Ａｕｊｏｒｅａｄｅｒ　（Ｍｏｄｅｌ　Ｅ　Ｌ　３０９．　Ｂ　１Ｏ−ＴＥＫ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ。

Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、　Ｖｅｒｍｏｎｔ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、）を用いて測定した。ＢＳＡ−コート弁穴についての０、　Ｄ、　［は各製剤についての複合糖質−ＢＳＡ−コート弁穴についての値がら差引いた。アッセイは二本立てて実施した。アルカリフォスファターゼに抱合した抗−ヒトイムノグリプリンはテストした構造のいずれにも有意には結合しなかった。結果は表１に報告されている。

多数の炭水化物構造を結合した抗体がブタ心臓、ブタ腎臓：５よび／またはブタ赤血球ストローマから溶出された。これらの構造のいくつかを表１に示した。表１にみられるように、Ｂ一様炭水化物分子（と（に線形Ｂ型２および線形Ｂ型６）は、抗−ブタ心臓および抗−ブタ腎臓を含めて、テス］・シた大部分の試料に関して最も大きな活性を示した。

個々の溶出抗体製剤に関して、ＡまたはＡ一様炭水化物（すなわちへ二糖、へ三糖、種々のＡ四糖および線形Ａ型５　）　；　Ｆｏｒｓｓｍａｎ二糖およびＦｏｒｓｓｍａｎ三糖、α−Ｌ−ＲｈａｍｎｏｓｅおよびＲｈａｍｎｏｓｅ−含有構造：Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド（βＧＩｃＮＡｃ）およびβＧ］ｃＮＡｃ−含有構造（表１）を含むその他の炭水化物抗原か抗体を結合する。しかし、これらの抗原のすべてか全製剤に関して有意な抗体量を結合するわけてはない。

抗−炭水化物抗体の数は特別の組織および吸着する血清に従って異なるが、抗− 線形Ｂ型２、抗−線形Ｂ型６および抗−Ｂ三糖抗体はテストした抗体の製剤のいずれにも存在した（表１）。ＥＬＩＳＡアッセイに基づいて、これら抗−線形Ｂ型２、抗−線形Ｂ型６および抗−Ｂ三糖抗体は抗−ブタ炭水化物抗体の最も重要なグループのように思われる。

ブタ組織から分離され、そして／または特性化された多くのＡまたは八一様糖脂質および糖蛋白に関してたくさんの論文が発表されていることから、八−関連構造と結合できる抗体の存在か期待された。Ａおよび０表現型がブタについて報告されており（Ｈｏｌｇｅｒｓｓｏｎら、１９９０”）、また０または８表現型をもつ抗−Ａかヒトの血清および血漿中にかなりの濃度で見出された。合成Ａ構造に結合できる抗体についてのＯ，Ｄ、測定値のいくつかは期待したよりは低かった。たとえば、ヒト０血漿抗−ブタ腎臓（表１中の試料８Ａ０）に対して、ブタ赤血球とヒト抗−Ａ血液型試薬との凝集の結果からブタは八−表現型を有していたか、０゜Ｄ、の測定値はへ三糖、Ａ型４、Ａ型５およびＡ型６に関して０．２以下であった。しかし、ヒト０血漿抗−ブタ腎臓（表１中の試料７Ｂ０）についての０、Ｄ。

測定値はへ三酸、Ａ型４、Ａ型５およびＡ型６に対して比較的高かった（ＯＤ。

＞１．０）。

ヒ）・抗−ブタ心臓製剤の大部分において最高の測定値のいくつかかＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド（βＧ］　ｃＮＡｃ）　、βＧｌ　ｃＮＡｃ　（１ −４）βＧＩｃＮＡｃ、ａ　−Ｌ　−Ｒｈａｍｎｏｓｅ　（ａ　−Ｌ　−Ｒｈａ　）およびａ−Ｌ　−Ｒｈａ　（＋　−３）βＧ］ｃＮＡｃ　（１−２）　ａ　 −Ｌ　−Ｒｈａ　（表１）に対して得られた。ある臓器にとってより重要な抗− 炭水化物異種抗体かある数だけ存在するかもしれない。

１つまたはそれ以上の製剤からのブタ心臓、ブタ腎臓および／またはブタ赤血球ストローマ（１時間後の４０５ｎｍての光学密度≧０．５）から溶出したヒト抗体のかなりの量を結合した単糖およびオリゴ糖構造のいくつかを表Ｉに列挙した。

炭水化物構造にはいろいろのものがあって製剤ごとにこれらがかなり高い抗体結合能をもつように思われた（４０５ｎｍでの０．Ｄ、≧０．５）。ヒト血漿の型、個々の血漿、それから抗体を溶出した個々の動物および／または臓器のすべてが多様性をつくり出すように思われた。

本申請中に示した知見はまだ研究されていない他の臓器や細胞に適用されるであろう。本発明によって企画されている１つの特異な態様は膵臓高細胞異種移植に関連してそれを用いることである。

別に記さない限り熱不活化ヒト血清または血漿を用いた。補体を不活化するためにそれをウォーターバス中５６°Ｃ１３０分間加熱した（熱−不活化）。

実施例２のための血清の調製：ヒト０型血清の一部（１，２ｍ１）を０．４ｇ＋Ｏ，Ｏ１ｇのＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　Ｐ（Ｍａｎｖ目１ｅ　Ｃｏｒｐ、、　Ｄｅｎｖｅｒ、　Ｃｏ１ｏｒａｄｏ）、　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　Ｐに結合した合成炭水化物構造（以後これをＣｈｅｍｂｉｏｍｅｄ　Ｌｔｄ、の商標である５ＹＮＳＯＲＢと呼ぶ）、またはＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　Ｐに結合した炭水化物構造の混合物（ＳＹＮＳＯＲＢ）；そして０゜３ｍｌのＰＢＳを含む試験管に移す。実施例６の下面に、図１の化合物２に適用されたようなＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　Ｐへの炭水化物の共役の技法を記述する。試料を混合し４°Ｃで１６時間インキュベートした。これらの調製物を１１００Ｏｒｐで遠心し上清を採取した。

赤血球の調製。

ブタ、ウシおよびヒツジの赤血球を過剰のＰ　Ｂ　Ｓで３回洗滌しく各洗滌ののぢ１１０００Ｘて１分間遠心を用いて）、そのあとＰ　Ｂ　Ｓ　１月％ＢＳＡで３回洗滌した。最終細胞ペレットをＰＢＳｉ１１９６ＢＳＡ中で１％（ｖ／ｖ）に希釈した。

溶血アッセイ。

ついてＲａｐｐ　ａｎｄ　Ｂｏｒｓｏｓ　（１９６６）　”に記載されているアッセイに基づいて溶血アッセイを行なった。吸着および非吸着血清試料をＰＢＳ中１％ＵＳＡ中で１／４に希釈し、つぎに５０μｌを適当な弁穴に添加した（図２結果）；または吸着および非吸着ヒト血清状＄４を希釈しないかあるいはＰＢＳ中１％ＢＳＡて１１　／２または１／４に希釈し、ついて適当な弁穴に１００ μｌを添加した（図３結果）。ブタ赤血球の１％懸濁液（図２）またはブタ、ヒツジまたはウシ赤血球の２９６懸濁液（図３）をＶ型９６弁穴徹量滴定プレートの適当な弁穴に添加した。

いくつかの対照弁穴として５０ｕｌの赤血球懸濁液およびＰＢＳ中１９６ＢｓＡ５０μ！または１００μ！を含むものを調製した。２２°Ｃて１時間インキュベー１・・　後、プレートをＢｅｃｋｍａｎ　ＴＪ　−６Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ　（Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ｔｎｃ、。

Ｐａ１ｏＡＩｔｏ、　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ　（Ｕ、Ｓ、Ａ、）中１１．０　Ｏｒｐｍで５分間遠心した。１ｍｌの冷たい、精製水１ｍｌで再構成した凍結乾燥ＬＯＷＴＯＸ−Ｍウサギ補体（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｌｔｄ、、Ｈｏｒｎｈｙ、　０ｎｔａｒｉｏ、　Ｃａｎａｄａ）　１ｍｌを用いて補体製剤を調製し、ついてセラチンへロナール緩衝液（Ｓｉｇｎ′１ａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）で１１５に希釈した。上清を除去し、つぎに希釈補体２００μβ、セラチンへロナール緩衝液、または水を弁穴に添加した。ｊＴ￥潔なピペット先端を用いて各弁穴について試料を混合し、そのあと３７°Ｃて１時間インキュベートシた。プレートを２００Ｏｒｐｍで３分間遠心し、ついて１５０ μｌの上清／弁穴を平たい底のプレートに移してＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ　Ａｕｔｏｒｅａｄｅｒ　（Ｍｏｄｅｌ　ＥＬ　３０９．　Ｂ　１Ｏ−ＴＥＫ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ。

Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、　Ｖｅｒｍｏｎｔ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、）を用いて４０５ｎｍての光学密度（０，Ｄ、　）を読み取った。

溶血百分率（％）を以下のものを基にしてｔｉ算した　０％溶血＝赤血球、ＰＢＳ中１％ＢＳＡおよび補体を添加した弁穴からの平均０．Ｄ、（無血清）；１００％溶血＝赤血球、非吸着血清またはＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　Ｐて吸着した血清および補体を添加した弁穴からの平均０．　Ｄ、　）。

マトリックスに結合した特定の炭水化物構造およびマトリックス−結合炭水化物の組合せをヒト血清に吸着させるとブタ、ヒツジおよびウシ赤血球の溶血が減少する（図２および３）。

図２の試料に以下の５ＹＮＳＯＲＢ−結合炭水化物を吸着させた：線形Ｂ型６、Ａ三糖、Ｂ三糖およびβＧＩｃＮＡｃの組合せ（１）；線形ＢＷ６およびβＧｌｃＮＡｃの組合せ（２）、線形１６およびＢ三糖の組合せ（３）、線形Ｂ型６およびへ三糖の組合せ（４）、βＧ］ｃＮＡｃ（５）；線形Ｂ！！２２（６）　；線形Ｂ型６（７）；Ｂ三糖（８）：Ａ三糖（９）；ＬａｃＮＡｃ（１０）；およびＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　Ｐ単独（１１）。図１にそれらの構造を示す。

図３の試料に以下の５ＹＮＳＯＲＢ−結合炭水化物を吸着させた：線形Ｂ型６、ＡＥ糖、Ｂ三糖およびβＧ］ｃＮＡｃの組合せ（１）、線形Ｂ型６およびＢ三糖の組合せ（２）：線形Ｂ型６およびβＧＩｃＮＡｃの組合せ（３）、線形Ｂ型６およびＡＥ糖の組合せ（４）、線形Ｂｕ２（５）；βＧ］ｃＮＡｃ（６）；線形Ｂ型６（７）；Ｂ三糖（８１Ａ三糖（９）；ＬａｃＮＡｃ（１０）：およびＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　Ｐ単独（１１）。

図３にみられるように、Ａ三糖−５ＹＮＳＯＲＢと線形Ｂ望６−８ＹＮＳＯＲＢの組合せは線形Ｂ型６−３ＹＮＳＯＲＢまたはへ三糖別々の場合のいずれよりもブタおよびヒツジ赤血球に対する溶血活性の低下についてより効果的であった。

す−＼での血清か抗−Ａ活性を仔するわけてはなく、種々の血液型をもつ個体から得た抗体の特異性と濃度には多様性かみられ、同じ血液型の個体間でもそれがみられた。したかって細胞溶解性抗体の大半を低下させるためには単糖および／またはオリゴ糖の組合せを用いることか必要かもしれない。このことから人から人、種から種、そして臓器から臓器にわたる炭水化物構造か最良の組合せになると思本実験においては、標的細胞としてブタ赤血球、リンパ球および粘着性のブタ腎臓細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、　Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、　Ｍａｒｙｌａｎｄ、　Ｕ、r、Ａ。

：Ｃａｔ、＃　ＣＲＬ１３９２−ＣＬＩＯＩからのＬＬＣＰＫ＋）を使用した。

赤血球およびリンパ球はＦｉｃｏｌｌ　−Ｐａｑｕｅ　（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＬＫＢ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｃ。

Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、　Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　：Ｃａｔ、＃　１７−０８４０−０２）で全ヘパリン処理したブタ血液から分離した。ブタ腎臓細胞株は１０％ＦＢＳ　（Ｈｙｂｒｉ−ＭａｘｆｒｏｍＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ、：Ｃａｔ、＃　ＣＰＳＲ−３）を含むＭｅｄｉｕｍ　Ｉ　９（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ　Ｃａｎａｄａ、　Ｂａｒｌｉｎｇｔｏｎ、　０ｎｔａｒｉｏ、　Ｃａｎａｄａ）中て培養した。これらの標的細胞の各々を３７°Ｃ１時間のインキュベーションによりクロミウム−５１（Ａｍｅｒｓｈａｍ、　０ａｋｖｉｌｌｅ、　０ｎｔａｒｉｏ、　Ｃａｎａｄａ　：Ｃａｔ、＃　ＣＪＳ、１１）で標識した（クロミウム１００μｆ（１００μＣｉ）て１０６個細胞）。細胞を培地で１回洗滌し、３７°Ｃて１時間インキュベートシ、ついて取り込まれなかったクロミウムを除去するために２回洗滌した。

非希釈熱−不活化血ＴＪＪ（１００μりを９６井六Ｖ底微小滴定プレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ　Ｌａｂ、、Ｃｈａｎｔｉｌｌｙ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ、Ｕ、Ｓ、Ａ、：Ｃａｔ、　＃　１−２２０−２５Ｘ）中３７°Ｃて１時間振とう（２Ｏｒｐｍ）Ｌｚながら１００μｌのクロミウムー標識標的細胞　（２Ｘ　ｌ　Ｏ’細胞）とインキュベートした。各弁穴に１／１５に希釈したウサギ補体（ＬＯＷＴＯＸ　−Ｍ　ｆｒｏｍ　Ｃｅｄａｒｌａｎｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｌｔｄ、。

Ｈｏｒｎｂｙ、　０ｎｔａｒｉｏ、　Ｃａｎａｄａ　：Ｃａｔ、＃　ＣＬ３０５１）を添加した。プレートを再度３７°Ｃて１時間振とうしなからインキュペ− １−１，た。ついでプレートを１１００Ｏｒｐで回転し上ｌｎについてそのクロミウム含量をＢｅｃｋｍａｎγ４０００カウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ　ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、　Ｉｎｃ、、　Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、）でカウ■ トした。天然および全遊離対照も実施した。天然カウントは常に全カウントの５％以下であり、細胞の典型的な全カウントは１０，０００から２０，０００の範囲にあった。

図４Ａおよび４Ｂに示した結果かられかるように、非吸着ヒｌ−０およびＡＢ血漿はクロミウム標識ブタリンパ球、赤血球およびブタ腎臓細胞株を溶解させることかできる抗体を含４ＴＩ、ている。これらの血漿試料を心臓を通して潅流すると細胞毒性活性か低下したか（図４Ａおよび４Ｂ）これはおそら（細胞毒性抗体かブタ組織に結合するためと思われる。移植する際に、これら抗体の結合か超急性拒絶を起こす可能性かある。

５ＹＮＳＯＲＢ上に共役した炭水化物（Ａ三糖、Ｂ三糖、ＬａｃＮＡｃ（βｃａｌ（１−４）βＧ１　ｃＮＡｃ−Ｒ）　、線形Ｂ型２および線形Ｂ型６）のヒト抗−ブタ細胞毒性抗体を除去する能力をしらべるために、血Ｊ１ｍｌを０．２ｇの異なる５ＹＮＳＯＲＢと４°Ｃで一夜吸着させた。ついて吸着血漿をクロミウム放出アッセイでテストした。これらの例ではＡ三糖−３ＹＮＳＯＲＢ、Ｂ三糖 −３ＹＮＳＯＲＢ、Ｌａｃ−ＮＡｃ７ＳＹＮＳＯＲおよびＣｈｒｏｆｆｌｏｓｏｒｂ　Ｐはほとんどなんの効果も示さなかった（図４Ａおよび４Ｂ）。線形Ｂ型２−３ＹＮＳＯＲＢおよび線形Ｂ型６−３ＹＮＳＯＲＢは細胞毒性活性を有意に低下させた。これらの結果は明らかに５ＹＮＳＯＲＢに結合した線形Ｂ型２または線形Ｂ型６かヒト抗−ブタ細胞毒性抗体を結合するのに効果的であることを示している。

以下の実験は、使用した血漿か熱不活化でないことを除いて、上に述べた実験方法を用いて実施した。前に述へたように、ウサギ補体を各弁穴に添加した。

ヒト抗−ブタ細胞毒性抗体を除去するためにヒト血漿（Ａ、Ｂ、　ＯおよびＡＢ）試料をマトリックス−結合炭水化物（ＳＹＮＳＯＲＢ）で吸着させた（用いた炭水化物化合物の構造については図１を参照）。吸着血漿はクロミウム放出アッセイでテストした。これらの結果を図５に示したか、明らかにＢ三糖（図１の式４）および線形Ｂ型６（図１の式２）ＳＹＮＳＯＲＢＳはすへてのヒト血液型における細胞毒性活性を有意に低下させることを示している。

ヒト抗−ブタ細胞毒性抗体を除去するために４つの異なるＡＢヒト血漿型をマトリックス−結合炭水化物（ＳＹＮＳＯＲＢＳ）で吸着させた（用いた炭水化物化合物の構造については図１を参照）。吸着血漿をクロミウム放出アッセイでテスｌ−ｔ、た。結果を図６に示す。Ｂ三糖および線形Ｂ型５ＹＮＳＯＲＢＳは１つの特定のＡＢ血漿（１８０８０３５）中の細胞毒性活性を有意に低下させた。他の血漿試料（１−９０１４２２）では、これらの５ＹＮＳＯＲＢＳは細胞毒性活性をごく僅か低下させた。試料＋８０９４５１では、線形Ｂ型５ＹＮＳＯＲＢは細胞毒性活性を低下させたか、Ｂ三糖５ＹＮＳＯＲＢＳは低下させなかった。試料７７０８２１３については、Ｂ三糖５ＹＮＳＯＲＢも線形Ｂ型６ＳＹＮＳＯＲＢもいずれも細胞毒性活性を有意に減少させなかった。この例は集団中の不均質性を示すものである　というのはある血漿中で見出された細胞毒性抗体は明らかにαＧａｌ　（＋　−３）βＧａ１（１−４）βＧｌｃ構造を必要とするのに対して、Ｂ三糖（αＧａ１（１−３）βＧａ１）の線形Ｂバックボーンは池の血漿中の細胞毒性抗体を吸着するのに十分だからである。

ヒト抗−ブタ細胞毒性抗体を除去するためにヒト血漿（Ａ、Ｂ、　Ｏ，およびＡＢ）試料をマ］・リックスー結合炭水化物（ＳＹＮＳＯＲＢＳ）で吸着させた。

（用いた炭水化物化合物の構造については図！参照）。吸着血漿をクロミウム放出アッセイでテス１〜した。結果を図７に示す。線形ＢＷ６および線形Ｂ型■　（図１の式３）ＳＹＮＳＯＲＢはヒト血漿試料中の細胞毒性活性を有意に低下させた。

Ｐ−に三糖（図１の式３７）ＳＹＮＳＯＲＢはテストしたＡＢ型およびＢヒト血漿中の細胞毒性活性を僅かに低下させた。ｐ−を三糖（図１中の式４０）ＳＹＮＳＯＲＢはこのＡ型ヒト血漿中の細胞毒性活性を僅かに低下させた。Ｐ−におよびＰ−１三糖５ＹＮＳＯＲＢＳはこの０型ヒト血漿中の細胞毒性活性を低下させなかった。これらの結果は、線形Ｂ構造は細胞毒性抗体に特異的であるか、他の炭水化物は他の抗体特異性を除去またはブロックするかもしれないことを示している。

ヒトの曲成細胞毒性抗体を炭水化物ハブテンによって阻害する可能性をしらへるためにこの方法を行った。ヒトの熱不活化血Ｊ（１ｍｌ）を０．２１５ｇのＡ− 三糖−Ｘ−Ｙ、Ｂ−三糖−Ｘ−Ｙ、　βＧｌｃＮＡｃ−Ｘ−Ｙ、ＬａｃＮＡｃ− Ｘ−Ｙ。

線形Ｂ型２−Ｘ−Ｙ、または線形Ｂ型６−　Ｘ　−Ｙ　（Ｘ　−Ｙ＝−０−（ＣＨ２）ｇ−ＣＯＯＣＩ−１ｇまたは一〇−（ＣＨ２＞　、　−ＣＯＯＣＨ２ＣＨ２で、図１におけるように、Ｃｈｅｍｂｉｏｍｅｄ、　Ｌｔｄ、の商標である５ＹＮＪＥＣＴとして引用されている）と４°Ｃて一夜インキュベートした。

ついて処置および非処置血漿についてクロミウム放出アッセイを実施した；ブタ腎臓細胞株（ＬＬＣ−ＰＫ、）を標的細胞として使用した。図８Ａおよび８Ｂに図示したように、線形Ｂ型２−Ｘ−Ｙおよび線形Ｂ型６−Ｘ−Ｙはブタ細胞株に対する抗体の細胞毒性作用を完全に阻害した。他のハプテンはこれら細胞毒性抗体を部分的に阻害した（すなわち、Ｂ三糖）。これらの結果は、可溶性炭水化物して有効かもしれないことを示している。

使用した血漿が熱不活化したものでないことを除いて、上述の実験方法を用いて以下の実験を行なった。上述の実施例３のように、各弁穴にウサギ補体を添加した。

ヒト血漿（Ａ、Ｂ、　ＯおよびＡＢ）試料を炭水化物ハブテンとインキュベートしてヒ１−抗−ブタ細胞毒性抗体を不活化した（用いた炭水化物化合物の構造については図」参照）。インキュベートした血漿をクロミウム放出アッセイでテストした。結果を図９に示す。Ｂ三糖および線形Ｂ壓６ノ１ブテンはすべての血液型における細胞毒性活性を低下させた。

ヒト抗−ブタ細胞毒性抗体を除去するために２つの異なるＡＢＬ＋−血漿型を炭水化物ハブテンとインキュベートした（用いた炭水化物化合物の構造については図１参照）。インキュベートした血漿をクロミウム放出アッセイでテストした。

結果を図１０に示す。Ｂ三糖ハブテンだけか両血漿型における細胞毒性活性を僅かに低下させた。線形Ｂ型６およびＢ型６ハブテンはそれぞれ１つの血漿型の細胞毒性活性を低下させたが、池の血漿については低下させなかった。この例はさらに集団中の不均質性を証明するものである。

Ｇｌｃ　０−（ＣＨ２）８ＣＯＯＣＲ−）の６０ｍｇを１．　５ｍｌのヒドラジン水和物中に溶解した。

２時間後、ヒドラジン水和物を高真空中で除去し残渣を水と共−蒸発させ、ついて水和物をＣＩ８逆相カラム（Ｗａｔｅｒｓ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、　ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＣｏｒｐ、、　Ｍｉｌｆｏｒｄ　ＭＡ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、）上で精製しそのあと凍結−乾燥した。合成ノ１ブテン水和物１９ｍｇを０．　２ｍｌの乾燥アミンなしのＤＭＦ中に溶かし不活性大気下−２０°Ｃて冷却した。ジオキサン中３．６ＭのＨＣＩ溶液（３１μｍ）と第三ブチル亜硝酸塩５．　３　ｕ　Ｉ　（４５ｕ　ｍｏｌｅｓ）を添加し、その溶液を２０°Ｃて３０分間攪拌した。ＤＭＦ中のスルファミン酸（１，４ｍｇ）を添加してさらに１５分間攪拌した。このアンルアシト溶液を直接（水中０．２ＭのＮ− 千オールジエタノールアミン３ｍｌ中３０ｍｇのＢＳＡ、ｐＨ８，９８，０〜４ °Ｃ）の溶液に添加した。４°Ｃで１６時間後、その溶液を水に対して透析し、ついで凍結−乾燥した。白色粉末３６ｍｇが回収された。ハブテンの取り込みはフェノール−硫酸法（Ｄｕｂｏｉｓら１９５６′）によって測定しＢ５Ａ１モル当りハブテン１７モルと計算された。

この調製物を抗−線形Ｂ型６抗体を検出するために実施例１で使用した。

図１の化合物２の水和物型４０ｍｇを実施例５て述べたようにして調製して０゜３ｍｌＤＭＦ中に溶解した。この溶液を不活性大気下−２０°Ｃで冷却した。ジオキサン中ＨＣＩの３．６Ｍ溶液（６２μＩ）と第三ブチル亜硝酸塩１１μｌ　（９０μｍｏｌｅｓ）を添加し、その溶液を３０分間攪拌した。Ｈｕｎｉｇｓ塩基（Ａｌｄｒｉｃｈ　ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ、、Ｉｎｃ、、　Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ　、　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　Ｕ、Ｓ、Ａ、から入手のＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン：Ｃａｔ、＃Ｄ１２．５８０．６）（４５μｌまたは２５８　μｍｏｌｅｓ）を添加してさらに２分間攪拌した。このアシルアジド溶液をアセトニトリル（１５０ｍｌ）中４°Ｃてシリルアミノ化してか焼した珪藻±（Ｍａｎｖｉｌｌｅ　Ｃａｒｐ、、　Ｄｅｎｖｅｒ。

Ｃｏ１ｏｒａｄｏ）のスラリーに直接添加した。（シリルアミノ化はＷｅｅｔａｌｌ　（＋　９７６）！４により記載されたプロトコールを用いて実施した）。

４°Ｃで２時間さらに室温で２時間攪拌してのち、固状物を濾過て採取し、メタノール中５％の無水醋酸を用いて未反応アミンをＮ−アセチル化し、静かに１時間攪拌し、ついて室温で一夜インキユベートした。そのあとメタノールとエチルエーテルを用いて固状部分を洗滌し、ついて風乾した。ハブテンの取り込みをフェノール−硫酸法を用いて測定しマトリックスＩｇ当りハブテン０．８７μｍｏｌｅｓと決められた。

この調製物を抗−線形Ｂ型６抗体を除去するために実施例２および３て使用した。

平板底の９６井穴免疫−ブレ−１−（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ　、　Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ　、　０ｎｔａｒｉｏ　。

Ｃａｎａｄａ）をＩＯμｇ／ｍｌ　ＢＳＡまたは００５Ｍ炭酸塩−重炭酸塩コーティング緩衝液（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）、ｐＨ９，６中で希釈した炭水化物−ＢＳＡ抱合体の１００μｌ／井穴でコートした。プレートを４ °Ｃで１８時間インキュベートし、ついで空にして、室温で１時間ＰＢＳ中１％Ｂ　Ｓ　Ａ　（Ｓｉｇｍａ）のｘ５０μｌ／井穴てブロックした。つぎに０．０５％ポリオキシエチレン−ソルビタンモノラウリン酸塩（ｔｗｅｅｎ　２０　；　Ｓｉｇｍａ）を含むＰＢＳで３回洗滌した。

血液型Ａ、Ｂ、　ＡＢ、およびＯからのヒト血漿の、非吸着またはＣｂｒｏｍｏｓｏｒｂＰ、　Ｂ三糖５ＹＮＳＯＲＢ、または線形Ｂ型６ＳＹＮＳＯＲＢて吸着したもののいずれかをＰＢＳ　−ｔｗｅｅｎ　２０でＩ　：　１００に希釈し、炭水化物−ＢＳＡコート井穴上のＢＳＡ対照に三つに分けて割りつけた。室温で２時間インキュベーションとＰＢＳ−ｔｗｅｅｎ　２０で３回洗滌ののち、すべての用穴に対してＰＢＳ−ｔｗｅｅｎ　２０中１：３５０に希釈したヤギ抗−ヒト多価（α、γ、およびμ鎖特異的）−アルカリ性フォスフェート抱合体（Ｓｉｇｍａ）を１００μｌづつ添加した。もう一度プレートを室温で２時間インキュベートしてのちＰ　Ｂ　Ｓ　−ｔｗｅｅｎ　２０で３回洗滌した。１０％（ｖ／ｖ）ジェタノールアミン緩衝液、９．　８　（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中１ｍｇ／ｍｌに希釈し、０．０１％（Ｗ／Ｖ）ａ化マグネシウム（Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むジソジウムＰ−二トロフェニルフォスフエート（Ｓｉｇｍａ）　Ｉ　００　ｕ　Ｉを各用穴に添加した。イムノプレートを室温で３０分間暗所でインキュベートシｆコ、　Ｔｉｔｅｒｔｅｋ　Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ　（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　、　ＭｃＬｅａｎ　。

Ｖｉｒｇｉｎｉａ）を用いて各用穴に関して４０５ｎｍての吸収を読み取った。

ＢＳＡのみてコードンだ用穴に対する血漿の非−特異的結合の測定値を図１１Ａ −Ｄおよび１２Ａ−Ｄ中に示した値から差引いた。

５ＹＮＳＯＲＢて吸着したヒトＡ、Ｂ、Ｏ，およびＡＢ血漿をハブテン−ＢＳＡ抱合体のパネルに対してテストした。用いた炭水化物化合物の構造については図１を参照のこと。図１１Ａ−Ｄに示したように、Ｂ三糖または線形Ｂ型６ＳＹＮＳＯＲＢＳて吸着した血漿は、非吸着血漿またはＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　Ｐで吸着した血漿と比較した場合Ｂ三糖、線形Ｂ型６および線形Ｂ型２ＢＳＡ抱合体に対する結合か顕著に減少している。これらの５ＹＮＳＯＲＢＳはＮ−アセチル− β−Ｄ−グルコサミニド（図１の式２５）およびα−Ｌ−ラムノース（図１の式３１）ＢＳＡ抱合体への結合を減少させなかった。これらの結果からＢ三糖および線形Ｂ型６ＳＹＮＳＯＲＢＳが血漿から特異的抗体を除去または減少させることができることか証明された。

５ＹＮＳＯＲＢＳで吸着したヒトＡＢ血漿をハブテン−ＢＳＡ抱合体のパネルに対してテストした。用いた炭水化物化合物の構造については図１参匙図１２Ａ− Ｄに示すように、Ｂ三糖または線形Ｂ型６ＳＹＮＳＯＲＢＳて吸着した血漿は、非吸着血漿またはＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂ　Ｐて吸着した血漿と比較した場合、Ｂ三糖、線形Ｂ型６および線形Ｂ型２ＢＳＡ抱合体に対する結合か減少しているのかわかる。これらの５ＹＮＳＯＲＢＳは他のハブテン−ＢＳＡ抱合体に対する結合を減少させなかった。これらの結果はＢ三糖および線形Ｂ型６ＳＹＮＳＯＲＢＳは血１　漿から特異的抗体を除去または減少させることができたことを示している。

上に述へた態様の修飾で、移植免疫学、炭水化物化学分野、および関連諸分野における技量の修飾であることか明らかなものは以下の特許請求の範囲内にあるものとみなされる。

浄側内容に変更なし）巳氾胆ユＡ助四茂」ヱ旦閲兵」ｓ刊加更見１旦Ｈ６０＋−１ ■ 旦聞」」上旦四四」上医囮５四」ユ旦社 η 巳忠江Ｃ月匹Ｆｉｇｕｒｅ　２：％溶血Ｆｉｇｕｒｅ　３：％溶血Ｆｉｇｕｒｅ　４ＡＳＹＮＳＯＲＢＳまたはブタ心臓組織で吸着したヒト血漿クロミウム放出百分率一ブタ胃臓細胞　ロブタＲＢＣロブタリンパ球Ｕ８非吸着血漿　Ｐ＝クロモソルプＰ　ＰＨ丁：ブタ心ＩＩ＆［Ｉ織Ｒｇｕｒ＊　４ＢＳＹＮＳＯＲＢＳまた１よブタ心臓Ｍ織で吸着したヒト血漿クロミウム放出百分率 ■ブタ腎贋紬胞　ロブタＲＢＣロプダルバ球ｌＪ＝非吸着血漿　Ｐ：クロモソルブＰＰＨＴ：ブタ心Ｉ［Ｍ４ａＦｉｇｕｒｅ　５°　５ＹＮＳＯＲＢＳで吸着したヒｈｌｔ０．２０　４０　６０　８０　１００クロミウム放出百分率Ｆｉｇｕｒｅ　６：５ＹＮＳＯＲＢＳで吸着したＡＢ型ヒト血漿クロミウム放出百分率Ｆｉｇｕｒｅ　７：５ＹＮＳＯＲＢＳで吸着したヒト血漿クロミウム放出百分率Ｆｉｇｕｒｅ　８Ａ　ハプテンとインキュベートしたヒト血漿クロミウム放出百分率Ｆｉｇｕｒｅ　８Ｂ　ハプテンとインキュベートしたヒト血漿クロミウム放出百分率クロミウム放出百分率 ”ｕｒ８１０’　ｔ、ｌ？＞Ｉ＝イ：ｚ＃−：ｘべ−ｈし７：ＡＳ型ｅｈｍ漿クロミウム放出百分率吸光度４０５　ｎｍ　吸光度４０５　ｎｍ吸光ａ　ａｏｓ　ｎｍ　吸光度４０５　ｎｍ吸光度。。、。□　吸光Ｉｔ　４０５　ｎｍ吸光ａ４０５　ｎｍ　吸光度４０５　ｎｍ補正書の写しく翻訳文）提出書（曲法第１８４条の８）

Claims

【特許請求の範囲】

１．異種移植のヒト受容体における抗体−仲介異種移植拒絶を弱めるための方法であって、（ａ）前成抗体に対する少くとも１個の炭水化物抗原を同定すること；（ｂ）上述の同定された抗原を適合リンカーアームを通じて生物的適合固体支持体に結合させる；（ｃ）受容体から抗体−含有体液を取り出す；（ｄ）拒絶に関与する上述移植片の少くとも１個の炭水化物抗原に対する前成抗体を、ステップ（ｂ）の生物的適合固体支持体上で体液を体外灌流することによって取り出した体液から除去する；（ｅ）灌流した体液を受容体に再導入する、ことからなる方法。
２．請求項１の方法で、そこでの炭水化物抗原が単糖配糖体またはオリゴ糖配糖体であるもの。
３．請求項１の方法で、そこでの体液が血液であるもの。
４．請求項１の方法で、そこでの異種移植片がブタ異種移植片であるもの。
５．請求項１の方法で、そこでの抗原は図１に示した配糖体から成るグループから選択されたものであり、またそこでＸはＯ，Ｓ，ＮＨおよび結合から成るグループから選択され、Ｙはアグリコン基である。
６．請求項５の方法で、そこでＹは−（Ａ）−Ｚ基を表わし、そこでのＡは結合、炭素２〜１０個のアルキレン基、または（ＣＨ２−ＣＲ１−Ｇ）ｎ−でありそこでｎは１から５までの整数；Ｒ１は水素、メチルおよびエチルから成るグループから選択される；そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、フェニール、およびアミン、ヒドロキシル、ハロおよび炭素原子１〜４個のアルキルから成るグループから選択された炭素原子１〜３個の置換基で置換されたフェニールから成るグループから選択され、Ｚは水素、メチルから成るグループから選択され、そしてＧが酸素、硫黄または窒素でなくてＡが結合でない場合、そのときはＺもまたＯＨ，ＳＨ，−ＮＨ２，−ＮＨＲ２，−Ｃ（（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＮＨＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）２から成るグループから選択され、そこでのＲ２は独立に水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
７．請求項５の方法で、そこでのＸは−Ｏ−でＹは−Ａ−ＺでありＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンであり、Ｚは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択されＲ２は水素原子または炭素原子１〜４個のアルキルである。
８．請求項１の方法で、そこでの抗原は図１の式１の配糖体でＸは−Ｏ−、Ｙは −Ａ−ＺでここでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンであり、Ｚは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでＲ２は水素原子または炭素原子１〜４個のアルキルである。
９．請求項１の方法で、そこでの抗原は図１の式２の配糖体でＸは−Ｏ−、Ｙは −Ａ−ＺでここでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでありＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、そしてＲ２は水素原子または炭素原子１〜４個のアルキルである。
１０．請求項１の方法で、そこでの抗原は図１の式４の配糖体でＸは−Ｏ−、Ｙは−Ａ−ＺでここでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでありＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、そしてＲ２は水素原子または炭素原子１〜４個のアルキルである。
１１．請求項１に従う方法でさらに従来の免疫抑制療法を施すステップを含んでいる。
１２．異種移植のヒト受容体における抗体−仲介異種移植拒絶を弱めるための方法であって、（ａ）前成抗体に対する少くとも１個の炭水化物抗原を同定すること；そして（ｂ）上記抗原のうちの少くとも１個を、抗原に対する受容体の抗体を阻害するのに十分な量だけ受容体に非経口的に投与する、ことからなる方法。
１３．請求項１２の方法でそこでの抗原が単糖配糖体またはオリゴ糖配糖体であるもの。
１４．請求項１２の方法でそこでの異種移植片がブタ異種移植片であるもの。
１５．請求項１２の方法で、そこでの抗原は図１に示した配糖体から成るグループから選択され、そこでＸはＯ，Ｓ，ＮＨおよび結合から成るグループから選択され、Ｙはアグリコン基である。
１６．請求項１５の方法で、そこでＹは−（Ａ）−Ｚ基を表わし、そこでのＡは結合、炭素２〜１０個のアルキレン基、または（ＣＨ２−ＣＲ１−Ｇ），−を表しそこでｎは１から５までの整数；Ｒ１は水素、メチルおよびエチルから成るグループから選択される；そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、フェニール、およびアミン、ヒドロキシル、ハロおよび炭素原子１〜４個のアルキルから成るグループから選択された炭素原子１〜３個の置換基で置換されたフェニールから成るグループから選択され、Ｚは水素、メチルから成るグループから選択され、そしてＧが酸素、硫黄または窒素でなくてＡが結合でない場合、そのときはＺもまたＯＨ，ＳＨ，−ＮＨ２，−ＮＨＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２，− Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）２から成るグループから選択され、そこでＲ２は独立に水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
１７．請求項１５の方法で、そこでのＸは−Ｏ−でＹは−Ａ−Ｚであり、そこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
１８．請求項１２の方法で、そこでの抗原は図１に示した式１の配糖体でありＸは−Ｏ−およびＹは−Ａ−ＺでありここでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択されここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
１９．請求項１２の方法で、そこでの抗原は図１の式２の配糖体でありＸは−Ｏ −およびＹは−Ａ−ＺでありここでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでＺは −Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択されここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
２０．請求項１２の方法で、ここでの抗原は図１の式４の配糖体でありＸは−Ｏ −−およびＹは−Ａ−ＺでありここでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでありＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択されここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
２１．請求項１２の方法でさらに従来の免疫抑制療法を施すステップを含んでいる。
２２．ヒト受容体への異種移植における抗体−仲介異種移植拒絶に弱めるのに有用な組成物であって、拒絶に関与する異種移植片の少くとも１個の炭水化物抗原の注射用製剤からなる組成物。
２３．請求項２２の組成物で、そこでの抗体は図１に示した配糖体から成るグループから選択され、ここでＸはＯ，Ｓ，ＮＨおよび結合から成るグループから選択され、Ｙはアグリコン基である。
２４．請求項２３の組成物で、そこでＹは−（Ａ）−Ｚ基を表わし、そこでのＡは結合、炭素２〜１０個のアルキレン基、または（ＣＨ２−ＣＲ１−Ｇ）ｎ−でありそこでｎは１から５までの整数；Ｒ１は水素、メチルおよびエチルから成るグループから選択される；そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、フェニール、およびアミン、ヒドロキシル、ハロおよび炭素原子１〜４個のアルキル基から成るグループから選択された炭素原子１〜３個の置換基で置換されたフェニールから成るグループから選択され、Ｚは水素、メチルから成るグループから選択され、そしてＧが酸素、硫黄または窒素でなくてＡが結合でない場合、そのときはＺもまたＯＨ，ＳＨ，−ＮＨ２，−ＮＨＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＲ２）２から成るグループから選択され、そこでＲ、は独立に水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
２５．請求項２３の組成物で、そこでのＸは−Ｏ−、Ｙは−Ａ−Ｚであり、そこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでありＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、そこでＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
２６．請求項２２の組成物で、そこでの抗原は図１の式１の配糖体でありＸは− Ｏ−そしてＹは−Ａ−ＺでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
２７．請求項２２の組成物でそこでの抗原は図１の式２の配糖体でありＸは−Ｏ −そしてＹは−Ａ−ＺでありそこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでありＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
２８．請求項２２の組成物でそこでの抗原は図１の４式の配糖体でありＸは−Ｏ −−そしてＹは−Ａ−ＺでありそこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでありＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
２９．ヒト受容体による異種移植の拒絶を弱めるために異種移植のヒト受容体の血液から異種抗体を除去するのに有用な免疫吸着組成物であって、前成抗体に対する少くとも１個の同定された異種抗原が適合線形アームを通じて結合している生物的適合固体支持体からなる組成物。
３０．請求項２９の組成物で、ここでの抗原は図１の式３，２１，２２，２３，２４，２６，２７，２８，２９，３０，３１および３２の配糖体の少くとも１つを含み、ここでＸはＯ，Ｓ，ＮＨおよび結合から成るグループから選択され、Ｙはアグリコン基である。
３１．請求項３０の組成物で、そこでのＹは−（Ａ）−Ｚから成る基を表わし、そこでのＡは結合、炭素２〜１０個のアルキレン基、または（ＣＨ２−ＣＲ１− Ｇ）ｎ−を表し、そこでｎは１から５までの整数；Ｒ１は水素、メチルおよびエチルから成るグループから選択される；そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、フェニール、およびアミン、ヒドロキシル、ハロおよび炭素原子１〜４個のアルキル基から成るグループから選択された炭素原子１〜３個の置換基で置換されたフェニールから成るグループから選択され、Ｚは水素、メチルから成るグループから選択され、そしてＧが酸素、硫黄または窒素でなくてＡか結合でない場合、そのときはＺもまたＯＨ，ＳＨ，−ＮＨ２，−ＨＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＮＨＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）２から成るグループから選択され、そこでＲ２は独立に水素または炭素原子１〜４個のアルキル基である。
３２．請求項３０の組成物で、そこでのＸは−Ｏ−そしてＹは−Ａ−Ｚであり、ここでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレン、Ｚは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、そこでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
３３．請求項２９の組成物で、そこでの抗原は図１の式１の配糖体でありＸは− Ｏ−、Ｙは−Ａ−ＺでそこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでありＺは− Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここてのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルキルである。
３４．請求項２９の組成物で、そこでの抗原は図１の式２の配糖体でありＸは− Ｏ−、Ｙは−Ａ−ＺでそこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでありＺは− Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
３５．請求項２９の組成物で、そこでの抗原は図１の式４の配糖体でありＸは− Ｏ−、Ｙは−Ａ−ＺでそこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでありＺは− Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
３６．上述の異種移植の拒絶を弱めるために異種移植のヒト受容体中に輸液するのに有用なヒト血液または血漿であって、この血液または血漿は少くとも１個の同定した抗原に対する前成抗体が除去されているヒト血液または血漿。
３７．請求項３６の組成物で、そこでの抗原は図１の式３，２１，２２，２３，２４，２６，２７，２８，２９，３０，３１および３２の配糖体のうちの少くとも１個を含み、そこでＸはＯ，Ｓ，ＮＨ，および結合から成るグループから選択され、Ｙはアグリコン基である。
３８．請求項３７の組成物で、そこでのＹは−Ａ−Ｚから成る基から選択され、そこでのＡは結合、炭素原子２〜１０個のアルキレン基、および−（ＣＨ２−ＣＲ１−Ｃ）ｎを表わし、そこでｎはＩから５までの整数；Ｒ１は水素、メチルおよびエチルから成る基から選択される；そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、フェニール、およびアミン、ヒドロキシル、ハロおよび炭素原子１〜４個のアルキル基から成るグループから選択された炭素原子１〜３個の置換基で置換されたフェニールから成るグループから選択され、Ｚは水素、メチルから成るグループから選択され、そしてＧが酸素、硫黄または窒素でなくてＡが結合でない場合、そのときはＺもまたＯＨ，ＳＨ，−ＮＨ２，−ＮＨＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）２から成るグループから選択され、そこでＲ２は独立に水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
３９．請求項３７の組成物で、そこでのＸは−Ｏ−、Ｙは−Ａ−ＺでありそこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでＺは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
４０．請求項３６の組成物で、そこでの抗原は図１の式１の配糖体であり、Ｘは −Ｏ−でＹは−Ａ−ＺでありそこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでＺは −Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
４１．請求項３６の組成物で、そこでの抗原は図１の式２の配糖体であり、Ｘは −Ｏ−でＹは−Ａ−ＺでありそこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでＺは −Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
４２．請求項３６の組成物で、そこでの抗原は図１の式４の配糖体であり、Ｘは −Ｏ−でＹは−Ａ−ＺでありそこでＡは炭素原子２〜１０個のアルキレンでＺは −Ｃ（Ｏ）ＯＲ２，−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２から成るグループから選択され、ここでのＲ２は水素または炭素原子１〜４個のアルキルである。
４３．異種移植のヒト受容体における抗体−仲介超急性異種移植拒絶を弱める方法であって、（ａ）前成抗体に対する少くとも１個の炭水化物抗原を同定すること；（ｂ）上記同定抗原を適合リンカーアームを通じて生物的適合固状支持体へ結合させる；（ｃ）受容体から抗体−含有体液を取り出す；（ｄ）拒絶に関与する上記異種移植片の少くとも１個の炭水化物抗原に対する前成抗体を、体液をステップ（ｂ）の生物的適合固状支持体上で体外灌流することによって取り出した体液から除去する；そして（ｅ）灌流した体液を受容体に再導入する、ことからなる方法。
４４．異種移植のヒト受容体における抗体−仲介異種移植拒絶を弱める方法であって、請求項１の方法と請求項１２の方法との組合せからなる方法。