JPH07333220A - 網状赤血球の測定方法及び網状赤血球測定装置 - Google Patents
網状赤血球の測定方法及び網状赤血球測定装置Info
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- JPH07333220A JPH07333220A JP11289594A JP11289594A JPH07333220A JP H07333220 A JPH07333220 A JP H07333220A JP 11289594 A JP11289594 A JP 11289594A JP 11289594 A JP11289594 A JP 11289594A JP H07333220 A JPH07333220 A JP H07333220A
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- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 網状赤血球の染色で好都合な染料を用い、感
度良く、正確に、且つ低コストで網状赤血球を測定する
ことができる手段を提供する。 【構成】 蛍光染料としてＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲ
Ｏ−３、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ
−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１、或いはＹＯＹＯ−３又はＹ
Ｏ−ＰＲＯ−３を含有する蛍光染色液で染色した血液試
料に対して、ＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３では赤
色、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３では緑色、ＹＯ
ＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１では青色、ＹＯＹＯ−３
又はＹＯ−ＰＲＯ−３では橙色の波長領域の光を照射
し、血液試料からの蛍光を測光することにより網状赤血
球を測定する。
度良く、正確に、且つ低コストで網状赤血球を測定する
ことができる手段を提供する。 【構成】 蛍光染料としてＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲ
Ｏ−３、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ
−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１、或いはＹＯＹＯ−３又はＹ
Ｏ−ＰＲＯ−３を含有する蛍光染色液で染色した血液試
料に対して、ＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３では赤
色、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３では緑色、ＹＯ
ＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１では青色、ＹＯＹＯ−３
又はＹＯ−ＰＲＯ−３では橙色の波長領域の光を照射
し、血液試料からの蛍光を測光することにより網状赤血
球を測定する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血液中の網状赤血球の
測定方法、詳細には網状赤血球中のリボ核酸（ＲＮＡ）
を染色するのに適した染料を用いた網状赤血球の測定方
法、並びにその方法を実施する網状赤血球測定装置に関
する。
測定方法、詳細には網状赤血球中のリボ核酸（ＲＮＡ）
を染色するのに適した染料を用いた網状赤血球の測定方
法、並びにその方法を実施する網状赤血球測定装置に関
する。
【０００２】
【従来の技術】血液中の未成熟の赤血球は網状赤血球
（レチクロサイト）と呼ばれ、急性内出血及び溶血性貧
血等の診断において、網状赤血球の計数は臨床検査の中
で非常に重要だと考えられている。それは、網状赤血球
が血球産生能（赤血球分化）の指標として用いられてい
るからである。
（レチクロサイト）と呼ばれ、急性内出血及び溶血性貧
血等の診断において、網状赤血球の計数は臨床検査の中
で非常に重要だと考えられている。それは、網状赤血球
が血球産生能（赤血球分化）の指標として用いられてい
るからである。
【０００３】また、網状赤血球はＲＮＡを含有すること
が知られており、網状赤血球の測定には従来はニューメ
チレンブルー（ＮＭＢ）、ブリリアントクレシルブルー
（ＢＣＢ）等の塩基性染料により染色された塗抹血液が
用いられ、染色された網状赤血球を検鏡観察により計数
することが行われてきた。或いは、アクリジンオレン
ジ、ピロニンＹ、チオフラビンＴ、オーラミンＯ、チア
ゾールオレンジ等の蛍光色素を用いて、手動又は自動化
法で測定されてきた。
が知られており、網状赤血球の測定には従来はニューメ
チレンブルー（ＮＭＢ）、ブリリアントクレシルブルー
（ＢＣＢ）等の塩基性染料により染色された塗抹血液が
用いられ、染色された網状赤血球を検鏡観察により計数
することが行われてきた。或いは、アクリジンオレン
ジ、ピロニンＹ、チオフラビンＴ、オーラミンＯ、チア
ゾールオレンジ等の蛍光色素を用いて、手動又は自動化
法で測定されてきた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】ニューメチレンブルー
による超生体染色法は網状赤血球測定の標準的方法とし
て用いられているが、この測定作業は手作業であるため
に、時間が掛かり、煩雑であり、検鏡する人による個人
差が生じ易いという欠点がある。アクリジンオレンジを
用いた測定では手作業及び自動化法の両方が用いられ、
例えば米国特許第４３３６０２９号、同第４３２５７０
６号、同第４２８４４１２号等でアクリジンオレンジに
よる網状赤血球の染色方法が開示されている。即ち、ア
クリジンオレンジは網状赤血球中のＲＮＡ成分に結合さ
れて赤色蛍光を発し、これを計測することにより網状赤
血球を計数してきた。しかしながら、ＲＮＡはアクリジ
ンオレンジにより沈殿し、細胞内で局在化するので、蛍
光量としての定量性に正確さを欠く場合がある。また、
フローサイトメータ中の送液経路の石英セルやプラスチ
ック材料と非常に親和性があるため、測定上バックグラ
ンドが高くなり易く、誤差を生じ易いという問題点もあ
る。
による超生体染色法は網状赤血球測定の標準的方法とし
て用いられているが、この測定作業は手作業であるため
に、時間が掛かり、煩雑であり、検鏡する人による個人
差が生じ易いという欠点がある。アクリジンオレンジを
用いた測定では手作業及び自動化法の両方が用いられ、
例えば米国特許第４３３６０２９号、同第４３２５７０
６号、同第４２８４４１２号等でアクリジンオレンジに
よる網状赤血球の染色方法が開示されている。即ち、ア
クリジンオレンジは網状赤血球中のＲＮＡ成分に結合さ
れて赤色蛍光を発し、これを計測することにより網状赤
血球を計数してきた。しかしながら、ＲＮＡはアクリジ
ンオレンジにより沈殿し、細胞内で局在化するので、蛍
光量としての定量性に正確さを欠く場合がある。また、
フローサイトメータ中の送液経路の石英セルやプラスチ
ック材料と非常に親和性があるため、測定上バックグラ
ンドが高くなり易く、誤差を生じ易いという問題点もあ
る。
【０００５】ピロニンＹを使用した測定では、ホルマリ
ンによる赤血球の事前固定を行う必要があり、煩雑な操
作や時間を要するという問題点があった。また、ピロニ
ンＹの蛍光量子効率は非常に低くて、感度が十分でなか
った。チオフラビンＴは特開昭５９−１４２４６５号に
おいて、網状赤血球の染色剤として開示されているが、
これは染色後に、非特異的な蛍光を減少させるための十
分な洗浄が必要であり、煩雑な操作と時間を要するとい
う欠点があった。
ンによる赤血球の事前固定を行う必要があり、煩雑な操
作や時間を要するという問題点があった。また、ピロニ
ンＹの蛍光量子効率は非常に低くて、感度が十分でなか
った。チオフラビンＴは特開昭５９−１４２４６５号に
おいて、網状赤血球の染色剤として開示されているが、
これは染色後に、非特異的な蛍光を減少させるための十
分な洗浄が必要であり、煩雑な操作と時間を要するとい
う欠点があった。
【０００６】オーラミンＯやチアゾールオレンジは、青
色光による励起で蛍光を発するが、フローサイトメータ
による測定で光源としてヘリウムカドニウムレーザを使
用すると、装置が大型で高額なものとなり、また色素自
体がＤＮＡやタンパク質に対してよりもＲＮＡに対して
相対的に特異性が低いという問題点がある。このよう
に、フローサイトメータを使用して網状赤血球を測定す
る従来の方法は、感度、正確さ、コストの点で各々問題
点を有している。
色光による励起で蛍光を発するが、フローサイトメータ
による測定で光源としてヘリウムカドニウムレーザを使
用すると、装置が大型で高額なものとなり、また色素自
体がＤＮＡやタンパク質に対してよりもＲＮＡに対して
相対的に特異性が低いという問題点がある。このよう
に、フローサイトメータを使用して網状赤血球を測定す
る従来の方法は、感度、正確さ、コストの点で各々問題
点を有している。
【０００７】従って、本発明の目的は、網状赤血球の染
色で好都合な染料を用い、感度良く、正確に、且つ低コ
ストで網状赤血球を測定することができる手段を提供す
ることにある。
色で好都合な染料を用い、感度良く、正確に、且つ低コ
ストで網状赤血球を測定することができる手段を提供す
ることにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段及び作用】上記課題を解決
するために、本発明の請求項１記載の網状赤血球の測定
方法は、蛍光染料としてＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ
−３を含有する蛍光染色液で染色した血液試料に対し
て、赤色の波長領域の光を照射し、前記血液試料からの
蛍光を測光することにより網状赤血球を測定することを
特徴とする。
するために、本発明の請求項１記載の網状赤血球の測定
方法は、蛍光染料としてＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ
−３を含有する蛍光染色液で染色した血液試料に対し
て、赤色の波長領域の光を照射し、前記血液試料からの
蛍光を測光することにより網状赤血球を測定することを
特徴とする。
【０００９】請求項５記載の網状赤血球の測定方法は、
蛍光染料としてＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３を含
有する蛍光染色液で染色した血液試料に対して、緑色の
波長領域の光を照射し、前記血液試料からの蛍光を測光
することにより網状赤血球を測定することを特徴とす
る。請求項９記載の網状赤血球の測定方法は、蛍光染料
としてＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１を含有する蛍
光染色液で染色した血液試料に対して、青色の波長領域
の光を照射し、前記血液試料からの蛍光を測光すること
により網状赤血球を測定することを特徴とする。
蛍光染料としてＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３を含
有する蛍光染色液で染色した血液試料に対して、緑色の
波長領域の光を照射し、前記血液試料からの蛍光を測光
することにより網状赤血球を測定することを特徴とす
る。請求項９記載の網状赤血球の測定方法は、蛍光染料
としてＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１を含有する蛍
光染色液で染色した血液試料に対して、青色の波長領域
の光を照射し、前記血液試料からの蛍光を測光すること
により網状赤血球を測定することを特徴とする。
【００１０】請求項１３記載の網状赤血球の測定方法
は、蛍光染料としてＹＯＹＯ−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３
を含有する蛍光染色液で染色した血液試料に対して、橙
色の波長領域の光を照射し、前記血液試料からの蛍光を
測光することにより網状赤血球を測定することを特徴と
する。請求項１記載の測定方法で用いる蛍光染料として
のＴＯＴＯ−３は、チアゾールオレンジ誘導体のホモダ
イマーであり、次に示す構造式（化学式１）を有する。
は、蛍光染料としてＹＯＹＯ−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３
を含有する蛍光染色液で染色した血液試料に対して、橙
色の波長領域の光を照射し、前記血液試料からの蛍光を
測光することにより網状赤血球を測定することを特徴と
する。請求項１記載の測定方法で用いる蛍光染料として
のＴＯＴＯ−３は、チアゾールオレンジ誘導体のホモダ
イマーであり、次に示す構造式（化学式１）を有する。
【００１１】
【化１】
【００１２】また、ＴＯ−ＰＲＯ−３は、キノリニウム
モノマー（Quinolinium Monomer ）であり、次に示す構
造式（化学式２）を有する。
モノマー（Quinolinium Monomer ）であり、次に示す構
造式（化学式２）を有する。
【００１３】
【化２】
【００１４】請求項５記載の測定方法で用いる蛍光染料
としてのＰＯＰＯ−３は、benzox-azolium-4-pyridiniu
m系化合物のダイマーであり、次に示す構造式（化学式
３）を有する。
としてのＰＯＰＯ−３は、benzox-azolium-4-pyridiniu
m系化合物のダイマーであり、次に示す構造式（化学式
３）を有する。
【００１５】
【化３】
【００１６】また、ＰＯ−ＰＲＯ−３は、benzoxazoliu
m-4-pyridinium系化合物の誘導体であり、次に示す構造
式（化学式４）を有する。
m-4-pyridinium系化合物の誘導体であり、次に示す構造
式（化学式４）を有する。
【００１７】
【化４】
【００１８】請求項９記載の測定方法で用いる蛍光染料
としてのＹＯＹＯ−１は、benzox-azolium-4-quinolini
um 系化合物のダイマーであり、次に示す構造式（化学
式５）を有する。
としてのＹＯＹＯ−１は、benzox-azolium-4-quinolini
um 系化合物のダイマーであり、次に示す構造式（化学
式５）を有する。
【００１９】
【化５】
【００２０】また、ＹＯ−ＰＲＯ−１は、benzoxazoliu
m-4-quinolinium 系化合物の誘導体であり、次に示す構
造式（化学式６）を有する。
m-4-quinolinium 系化合物の誘導体であり、次に示す構
造式（化学式６）を有する。
【００２１】
【化６】
【００２２】請求項１３記載の測定方法で用いる蛍光染
料としてのＹＯＹＯ−３は、benzox- azolium-4-quinol
inium 系化合物のダイマーであり、次に示す構造式（化
学式７）を有する。
料としてのＹＯＹＯ−３は、benzox- azolium-4-quinol
inium 系化合物のダイマーであり、次に示す構造式（化
学式７）を有する。
【００２３】
【化７】
【００２４】また、ＹＯ−ＰＲＯ−３は、benzoxazoliu
m-4-quinolinium 系化合物の誘導体であり、次に示す構
造式（化学式８）を有する。
m-4-quinolinium 系化合物の誘導体であり、次に示す構
造式（化学式８）を有する。
【００２５】
【化８】
【００２６】上記ＴＯＴＯ−３及びＴＯ−ＰＲＯ−３、
ＰＯＰＯ−３及びＰＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ−１及び
ＹＯ−ＰＲＯ−１、並びにＹＯＹＯ−３及びＹＯ−ＰＲ
Ｏ−３は、網状赤血球中のＲＮＡと結合しない場合に
は、蛍光を僅かに発するか、又は全く発しないが、ＲＮ
Ａと結合した場合には、蛍光を強く発するという利点を
持っている。
ＰＯＰＯ−３及びＰＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ−１及び
ＹＯ−ＰＲＯ−１、並びにＹＯＹＯ−３及びＹＯ−ＰＲ
Ｏ−３は、網状赤血球中のＲＮＡと結合しない場合に
は、蛍光を僅かに発するか、又は全く発しないが、ＲＮ
Ａと結合した場合には、蛍光を強く発するという利点を
持っている。
【００２７】従って本発明では、この利点を有効に活用
すべく、血液中の網状赤血球の染色に、少量のＤＭＳＯ
（Dimethyl Sulfoxide）を含む等張生理食塩水中のＴＯ
ＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ
−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１、或
いはＹＯＹＯ−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３（以下、これら
を蛍光染色液と称す）を使用する。血液は蛍光染色液と
混合することにより染色され、染色された血液は、ＴＯ
ＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３では赤色、ＰＯＰＯ−３
又はＰＯ−ＰＲＯ−３では緑色、ＹＯＹＯ−１又はＹＯ
−ＰＲＯ−１では青色、ＹＯＹＯ−３又はＹＯ−ＰＲＯ
−３では橙色の波長領域の光の照射により蛍光を発する
ので、血液中の網状赤血球を検出・計数することができ
る。
すべく、血液中の網状赤血球の染色に、少量のＤＭＳＯ
（Dimethyl Sulfoxide）を含む等張生理食塩水中のＴＯ
ＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ
−ＰＲＯ−３、ＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１、或
いはＹＯＹＯ−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３（以下、これら
を蛍光染色液と称す）を使用する。血液は蛍光染色液と
混合することにより染色され、染色された血液は、ＴＯ
ＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３では赤色、ＰＯＰＯ−３
又はＰＯ−ＰＲＯ−３では緑色、ＹＯＹＯ−１又はＹＯ
−ＰＲＯ−１では青色、ＹＯＹＯ−３又はＹＯ−ＰＲＯ
−３では橙色の波長領域の光の照射により蛍光を発する
ので、血液中の網状赤血球を検出・計数することができ
る。
【００２８】ＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３は約６
４２ｎｍに励起スペクトルのピークを持ち、約６６０ｎ
ｍに蛍光の最大ピークを有する。従って、フローサイト
メータを用いる場合、光源としては６３３ｎｍのヘリウ
ム−ネオンレーザが安価で、好適であるが、６１５ｎｍ
の輝線を有する水銀ランプ、赤色の高輝度ＬＥＤ、赤色
半導体レーザ、水銀キセノンランプ等を使用しても差し
支えない。
４２ｎｍに励起スペクトルのピークを持ち、約６６０ｎ
ｍに蛍光の最大ピークを有する。従って、フローサイト
メータを用いる場合、光源としては６３３ｎｍのヘリウ
ム−ネオンレーザが安価で、好適であるが、６１５ｎｍ
の輝線を有する水銀ランプ、赤色の高輝度ＬＥＤ、赤色
半導体レーザ、水銀キセノンランプ等を使用しても差し
支えない。
【００２９】ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３は約５
４０ｎｍに励起スペクトルのピークを持ち、約５７０ｎ
ｍに蛍光の最大ピークを有する。従って、フローサイト
メータによる測定では、その光源として５４０ｎｍ近傍
に励起スペクトルのピークを有する緑色ヘリウムネオン
レーザ（λｐ＝５４３ｎｍ）、緑色高輝度ＬＥＤ（λｐ
＝５６７ｎｍ）、又は緑色半導体レーザは、廉価で好適
である。
４０ｎｍに励起スペクトルのピークを持ち、約５７０ｎ
ｍに蛍光の最大ピークを有する。従って、フローサイト
メータによる測定では、その光源として５４０ｎｍ近傍
に励起スペクトルのピークを有する緑色ヘリウムネオン
レーザ（λｐ＝５４３ｎｍ）、緑色高輝度ＬＥＤ（λｐ
＝５６７ｎｍ）、又は緑色半導体レーザは、廉価で好適
である。
【００３０】ＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１は約４
９０ｎｍに励起スペクトルのピークを持ち、約５１０ｎ
ｍに蛍光の最大ピークを有する。従って、フローサイト
メータによる測定では、その光源として４９０ｎｍ近傍
に励起スペクトルのピークを有するアルゴンイオンレー
ザ（λｐ＝４８８ｎｍ）、青色高輝度ＬＥＤ（日亜化学
工業製、λｐ＝４５０ｎｍ）、又は青色半導体レーザは
好適である。
９０ｎｍに励起スペクトルのピークを持ち、約５１０ｎ
ｍに蛍光の最大ピークを有する。従って、フローサイト
メータによる測定では、その光源として４９０ｎｍ近傍
に励起スペクトルのピークを有するアルゴンイオンレー
ザ（λｐ＝４８８ｎｍ）、青色高輝度ＬＥＤ（日亜化学
工業製、λｐ＝４５０ｎｍ）、又は青色半導体レーザは
好適である。
【００３１】ＹＯＹＯ−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３は約６
１２ｎｍに励起スペクトルのピークを持ち、約６３０ｎ
ｍに蛍光の最大ピークを有する。従って、フローサイト
メータによる測定では、その光源として６１２ｎｍ近傍
に励起スペクトルのピークを有するオレンジヘリウムネ
オンレーザ（λｐ＝５９４ｎｍ）、橙色高輝度ＬＥＤ、
又は橙色半導体レーザは、簡便で廉価であるので好適で
ある。
１２ｎｍに励起スペクトルのピークを持ち、約６３０ｎ
ｍに蛍光の最大ピークを有する。従って、フローサイト
メータによる測定では、その光源として６１２ｎｍ近傍
に励起スペクトルのピークを有するオレンジヘリウムネ
オンレーザ（λｐ＝５９４ｎｍ）、橙色高輝度ＬＥＤ、
又は橙色半導体レーザは、簡便で廉価であるので好適で
ある。
【００３２】勿論、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−
３、ＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１、或いはＹＯＹ
Ｏ−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３の光源として、ハロゲンラ
ンプや水銀キセノンランプ等を使用しても差し支えな
い。又、本発明における蛍光染色液はＲＮＡを沈殿させ
ず、従って染色された網状赤血球は細胞内で均一に分布
した蛍光を発するので、個々の網状赤血球の有する蛍光
強度と、そのＲＮＡ含有量との間に、ほぼ一次式で表さ
れる関係を有する。
３、ＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１、或いはＹＯＹ
Ｏ−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３の光源として、ハロゲンラ
ンプや水銀キセノンランプ等を使用しても差し支えな
い。又、本発明における蛍光染色液はＲＮＡを沈殿させ
ず、従って染色された網状赤血球は細胞内で均一に分布
した蛍光を発するので、個々の網状赤血球の有する蛍光
強度と、そのＲＮＡ含有量との間に、ほぼ一次式で表さ
れる関係を有する。
【００３３】そして臨床的には、ＲＮＡ量は赤血球分化
の指標となるので、単に網状赤血球数のみならず、蛍光
強度の情報で新たな赤血球分化の臨床的知見を提供でき
る。これらのことから、フローサイトメータによる測定
を行えば、高速で簡便に且つ客観的に、網状赤血球数と
蛍光強度の分布が求められるという利点が得られる。勿
論、本発明の方法は、自動的に網状赤血球の計数を行え
るだけでなく、手動によっても実現できる。
の指標となるので、単に網状赤血球数のみならず、蛍光
強度の情報で新たな赤血球分化の臨床的知見を提供でき
る。これらのことから、フローサイトメータによる測定
を行えば、高速で簡便に且つ客観的に、網状赤血球数と
蛍光強度の分布が求められるという利点が得られる。勿
論、本発明の方法は、自動的に網状赤血球の計数を行え
るだけでなく、手動によっても実現できる。
【００３４】実際にフローサイトメータの使用による網
状赤血球の測定は、未染色対照試料を使用して赤色、緑
色、青色又は橙色蛍光の閾値（スレッシュホールド）を
設定した後、染色試料を測定して閾値の条件を満たした
網状赤血球を計数する。なお、フローサイトメータは当
該技術でよく知られており、本発明は特定のフローサイ
トメータの使用に限定されるものではない。
状赤血球の測定は、未染色対照試料を使用して赤色、緑
色、青色又は橙色蛍光の閾値（スレッシュホールド）を
設定した後、染色試料を測定して閾値の条件を満たした
網状赤血球を計数する。なお、フローサイトメータは当
該技術でよく知られており、本発明は特定のフローサイ
トメータの使用に限定されるものではない。
【００３５】上記測定方法を実施するための本発明の測
定装置は、次の構成〜を備えることを特徴とする。
即ち、この測定装置は、 血液試料を採血管より直接分取・分注する血液試料分
取分注手段と、 前記血液試料分取分注手段により分注された血液試料
に、前記蛍光染料のうち、少なくともいずれか１つの蛍
光染料を含有する蛍光染色液を添加して染色する血液試
料染色手段と、 前記血液試料染色手段により染色された血液試料が流
されるフローセルと、 前記フローセル内を流れる血液試料に光ビームを照射
する光源と、 前記光ビームが照射された血液試料より発せられる少
なくとも２つ以上の細胞光情報を検出する細胞光情報検
出手段と、 前記細胞光情報検出手段で検出された細胞光情報を処
理する細胞光情報処理手段と、 前記細胞光情報処理手段の処理結果を出力する出力手
段と、を備える。
定装置は、次の構成〜を備えることを特徴とする。
即ち、この測定装置は、 血液試料を採血管より直接分取・分注する血液試料分
取分注手段と、 前記血液試料分取分注手段により分注された血液試料
に、前記蛍光染料のうち、少なくともいずれか１つの蛍
光染料を含有する蛍光染色液を添加して染色する血液試
料染色手段と、 前記血液試料染色手段により染色された血液試料が流
されるフローセルと、 前記フローセル内を流れる血液試料に光ビームを照射
する光源と、 前記光ビームが照射された血液試料より発せられる少
なくとも２つ以上の細胞光情報を検出する細胞光情報検
出手段と、 前記細胞光情報検出手段で検出された細胞光情報を処
理する細胞光情報処理手段と、 前記細胞光情報処理手段の処理結果を出力する出力手
段と、を備える。
【００３６】
【実施例】以下、本発明の網状赤血球の測定方法及び測
定装置を実施例に基づいて説明する。 ＜実施例１＞１ｍＭの蛍光染料（ＴＯＴＯ−３又はＴＯ
−ＰＲＯ−３）／ＤＭＳＯ貯蔵液を調製する。ｐＨ７．
４のリン酸等張緩衝液で貯蔵液を１：２０の比率で希釈
し、希釈蛍光染色液１ｍｌに全血５μｌを室温状態で約
３０分間インキュベートし、この血液試料を励起波長６
３３ｎｍのヘリウム−ネオンレーザによってフローサイ
トメータで測定する。
定装置を実施例に基づいて説明する。 ＜実施例１＞１ｍＭの蛍光染料（ＴＯＴＯ−３又はＴＯ
−ＰＲＯ−３）／ＤＭＳＯ貯蔵液を調製する。ｐＨ７．
４のリン酸等張緩衝液で貯蔵液を１：２０の比率で希釈
し、希釈蛍光染色液１ｍｌに全血５μｌを室温状態で約
３０分間インキュベートし、この血液試料を励起波長６
３３ｎｍのヘリウム−ネオンレーザによってフローサイ
トメータで測定する。
【００３７】次に、本発明の測定方法を用いて測定した
結果、即ち上記蛍光染色液で染色した血液試料中の網状
赤血球について分析したデータを図１及び図２に、蛍光
染色液を用いないで同様に網状赤血球について分析した
分析データを図３に示す。但し、図１は、染色された正
常血液（ニューメチレンブルー染色で１．６％の検体）
についてのデータを示し、正常血液検体の前方散乱光及
び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒストグ
ラムを表している。図２は、染色された異常血液（ニュ
ーメチレンブルー染色で４．９％の検体）についてのデ
ータを示し、同様に異常血液検体の前方散乱光及び赤色
蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを
表している。又、図３は、未染色の正常血液検体につい
てのデータを示し、同様にその前方散乱光及び赤色蛍光
のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを表し
ている。測定値の計算では、図３のスレッシュホールド
が図１と図２で用いられ、スレッシュホールドを超えた
ものを網状赤血球としている。
結果、即ち上記蛍光染色液で染色した血液試料中の網状
赤血球について分析したデータを図１及び図２に、蛍光
染色液を用いないで同様に網状赤血球について分析した
分析データを図３に示す。但し、図１は、染色された正
常血液（ニューメチレンブルー染色で１．６％の検体）
についてのデータを示し、正常血液検体の前方散乱光及
び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒストグ
ラムを表している。図２は、染色された異常血液（ニュ
ーメチレンブルー染色で４．９％の検体）についてのデ
ータを示し、同様に異常血液検体の前方散乱光及び赤色
蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを
表している。又、図３は、未染色の正常血液検体につい
てのデータを示し、同様にその前方散乱光及び赤色蛍光
のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを表し
ている。測定値の計算では、図３のスレッシュホールド
が図１と図２で用いられ、スレッシュホールドを超えた
ものを網状赤血球としている。
【００３８】図１乃至図３において、図３は未染色の結
果を示しており、図１及び図２の測定結果の対照とな
る。ここで、染色した場合と未染色の場合との決定的な
違いは、染色による分析領域Ａ（グラフ１中ではＧａｔ
ｅＡ）中の細胞分布状態である。図３ではほぼ単一の集
団であるが、染色により主集団は若干右方に移動すると
共に、主集団の右に副集団が出現する。図１、図２の陽
性領域に表れる１．９％、５．７％の細胞集団がその副
集団であり、本発明による蛍光染色により特異的に染色
された集団である。この測定結果は、従来法（ニューメ
チレンブルー染色）による結果と極めて近い値であり、
本発明による有効性が示唆される。 ＜実施例２＞１ｍＭの蛍光染料（ＰＯＰＯ−３又はＰＯ
−ＰＲＯ−３）／ＤＭＳＯ貯蔵液を調製する。ｐＨ７．
４のリン酸等張緩衝液で貯蔵液を１：２０の比率で希釈
し、希釈蛍光染色液１ｍｌに全血５μｌを室温状態で約
３０分間インキュベートし、これを試料として励起波長
５４３ｎｍの緑色ヘリウムネオンレーザ、緑色高輝度Ｌ
ＥＤ又は緑色半導体レーザを光源とするフローサイトメ
ータで測定する。
果を示しており、図１及び図２の測定結果の対照とな
る。ここで、染色した場合と未染色の場合との決定的な
違いは、染色による分析領域Ａ（グラフ１中ではＧａｔ
ｅＡ）中の細胞分布状態である。図３ではほぼ単一の集
団であるが、染色により主集団は若干右方に移動すると
共に、主集団の右に副集団が出現する。図１、図２の陽
性領域に表れる１．９％、５．７％の細胞集団がその副
集団であり、本発明による蛍光染色により特異的に染色
された集団である。この測定結果は、従来法（ニューメ
チレンブルー染色）による結果と極めて近い値であり、
本発明による有効性が示唆される。 ＜実施例２＞１ｍＭの蛍光染料（ＰＯＰＯ−３又はＰＯ
−ＰＲＯ−３）／ＤＭＳＯ貯蔵液を調製する。ｐＨ７．
４のリン酸等張緩衝液で貯蔵液を１：２０の比率で希釈
し、希釈蛍光染色液１ｍｌに全血５μｌを室温状態で約
３０分間インキュベートし、これを試料として励起波長
５４３ｎｍの緑色ヘリウムネオンレーザ、緑色高輝度Ｌ
ＥＤ又は緑色半導体レーザを光源とするフローサイトメ
ータで測定する。
【００３９】そして、実施例１と同様に、本発明の測定
方法を用いて測定した結果の分析データを図４乃至図６
に示す。但し、図４は、染色された正常血液（ニューメ
チレンブルー染色で１．６％の検体）についてのデータ
を示し、正常血液検体の前方散乱光及び橙色蛍光のサイ
トグラム、並びに橙色蛍光のヒストグラムを表してい
る。図５は、染色された異常血液（ニューメチレンブル
ー染色で５．３％の検体）についてのデータを示し、同
様に異常血液検体の前方散乱光及び橙色蛍光のサイトグ
ラム、並びに橙色蛍光のヒストグラムを表している。
又、図６は、未染色の正常血液検体についてのデータを
示し、同様にその前方散乱光及び橙色蛍光のサイトグラ
ム、並びに橙色蛍光のヒストグラムを表している。 ＜実施例３＞１ｍＭの蛍光染料（ＹＯＹＯ−１又はＹＯ
−ＰＲＯ−１）／ＤＭＳＯ貯蔵液を調製する。ｐＨ７．
４のリン酸等張緩衝液で貯蔵液を１：２０の比率で希釈
し、希釈蛍光染色液１ｍｌに全血５μｌを室温状態で約
３０分間インキュベートし、これを試料として励起波長
４８８ｎｍの青色アルゴンイオンレーザ、青色高輝度Ｌ
ＥＤ又は青色半導体レーザを光源とするフローサイトメ
ータで測定する。
方法を用いて測定した結果の分析データを図４乃至図６
に示す。但し、図４は、染色された正常血液（ニューメ
チレンブルー染色で１．６％の検体）についてのデータ
を示し、正常血液検体の前方散乱光及び橙色蛍光のサイ
トグラム、並びに橙色蛍光のヒストグラムを表してい
る。図５は、染色された異常血液（ニューメチレンブル
ー染色で５．３％の検体）についてのデータを示し、同
様に異常血液検体の前方散乱光及び橙色蛍光のサイトグ
ラム、並びに橙色蛍光のヒストグラムを表している。
又、図６は、未染色の正常血液検体についてのデータを
示し、同様にその前方散乱光及び橙色蛍光のサイトグラ
ム、並びに橙色蛍光のヒストグラムを表している。 ＜実施例３＞１ｍＭの蛍光染料（ＹＯＹＯ−１又はＹＯ
−ＰＲＯ−１）／ＤＭＳＯ貯蔵液を調製する。ｐＨ７．
４のリン酸等張緩衝液で貯蔵液を１：２０の比率で希釈
し、希釈蛍光染色液１ｍｌに全血５μｌを室温状態で約
３０分間インキュベートし、これを試料として励起波長
４８８ｎｍの青色アルゴンイオンレーザ、青色高輝度Ｌ
ＥＤ又は青色半導体レーザを光源とするフローサイトメ
ータで測定する。
【００４０】その後、同様に、本発明の測定方法を用い
て測定した結果の分析データを図７乃至図９に示す。但
し、図７は、染色された正常血液（ニューメチレンブル
ー染色で１．６％の検体）についてのデータを示し、正
常血液検体の前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、
並びに緑色蛍光のヒストグラムを表している。図８は、
染色された異常血液（ニューメチレンブルー染色で５．
３％の検体）についてのデータを示し、同様に異常血液
検体の前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、並びに
緑色蛍光のヒストグラムを表している。又、図９は、未
染色の正常血液検体についてのデータを示し、同様にそ
の前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、並びに緑色
蛍光のヒストグラムを表している。 ＜実施例４＞１ｍＭの蛍光染料（ＹＯＹＯ−３又はＹＯ
−ＰＲＯ−３）／ＤＭＳＯ貯蔵液を調製する。ｐＨ７．
４のリン酸等張緩衝液で貯蔵液を１：２０の比率で希釈
し、希釈蛍光染色液１ｍｌに全血５μｌを室温状態で約
３０分間インキュベートし、これを試料として励起波長
５９４ｎｍの橙色オレンジヘリウムネオンレーザ、橙色
高輝度ＬＥＤ又は橙色半導体レーザを光源とするフロー
サイトメータで測定する。
て測定した結果の分析データを図７乃至図９に示す。但
し、図７は、染色された正常血液（ニューメチレンブル
ー染色で１．６％の検体）についてのデータを示し、正
常血液検体の前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、
並びに緑色蛍光のヒストグラムを表している。図８は、
染色された異常血液（ニューメチレンブルー染色で５．
３％の検体）についてのデータを示し、同様に異常血液
検体の前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、並びに
緑色蛍光のヒストグラムを表している。又、図９は、未
染色の正常血液検体についてのデータを示し、同様にそ
の前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、並びに緑色
蛍光のヒストグラムを表している。 ＜実施例４＞１ｍＭの蛍光染料（ＹＯＹＯ−３又はＹＯ
−ＰＲＯ−３）／ＤＭＳＯ貯蔵液を調製する。ｐＨ７．
４のリン酸等張緩衝液で貯蔵液を１：２０の比率で希釈
し、希釈蛍光染色液１ｍｌに全血５μｌを室温状態で約
３０分間インキュベートし、これを試料として励起波長
５９４ｎｍの橙色オレンジヘリウムネオンレーザ、橙色
高輝度ＬＥＤ又は橙色半導体レーザを光源とするフロー
サイトメータで測定する。
【００４１】その後、同様に、本発明の測定方法を用い
て測定した結果の分析データを図１０乃至図１２に示
す。但し、図１０は、染色された正常血液（ニューメチ
レンブルー染色で１．６％の検体）についてのデータを
示し、正常血液検体の前方散乱光及び赤色蛍光のサイト
グラム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを表している。
図１１は、染色された異常血液（ニューメチレンブルー
染色で５．３％の検体）についてのデータを示し、同様
に異常血液検体の前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラ
ム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを表している。又、
図１２は、未染色の正常血液検体についてのデータを示
し、同様にその前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラ
ム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを表している。
て測定した結果の分析データを図１０乃至図１２に示
す。但し、図１０は、染色された正常血液（ニューメチ
レンブルー染色で１．６％の検体）についてのデータを
示し、正常血液検体の前方散乱光及び赤色蛍光のサイト
グラム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを表している。
図１１は、染色された異常血液（ニューメチレンブルー
染色で５．３％の検体）についてのデータを示し、同様
に異常血液検体の前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラ
ム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを表している。又、
図１２は、未染色の正常血液検体についてのデータを示
し、同様にその前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラ
ム、並びに赤色蛍光のヒストグラムを表している。
【００４２】但し、上記実施例１〜４に係る図１乃至図
１２において、それぞれＧｒａｐｈＮｏ．１（１番目の
グラフ）では、 ＦＷ−ＳＣ（Forward Scatter ）：前方散乱光強度、 ＲＤ−ＦＬ（Red Fluorescence）：赤色蛍光強度、 ＯＲ−ＦＬ（Orange Fluorescence ）：橙色蛍光強度、 ＧＲ−ＦＬ（Green Fluorescence）：緑色蛍光強度、 Ｇａｔｅ：図中のＡで囲まれた部分で、分析対象となる
領域、 Ｃｏｕｎｔ：細胞数、 Ｔｏｔａｌ：Ｔｏｔと略する時もある。Ｔｏｔａｌ％は
グラフ１に表示される全細胞数に対する比率、 ＭｅａｎＸ：Ｘ軸パラメータの平均値、 ＭｅａｎＹ：Ｙ軸パラメータの平均値、 ＣＶ％Ｘ：Ｘ軸パラメータの変動係数（標準偏差／平均
値）、 ＣＶ％Ｙ：Ｙ軸パラメータの変動係数（標準偏差／平均
値）、 又、Ｇｒａｐｈ Ｎｏ．２及びＮｏ．３（２番目及び３
番目のグラフ）では、 Ｃｏｕｎｔｓ：測定対象となったグラフに表される細胞
数、 ＲＤ−ＦＬ（Red Fluorescence）：赤色蛍光強度、 ＯＲ−ＦＬ（Orange Fluorescence ）：橙色蛍光強度、 ＧＲ−ＦＬ（Green Fluorescence）：緑色蛍光強度、 ＲＥＧ：データ解析の対象となる領域。この場合は陽性
領域（＋）と陰性領域（−）とがある。
１２において、それぞれＧｒａｐｈＮｏ．１（１番目の
グラフ）では、 ＦＷ−ＳＣ（Forward Scatter ）：前方散乱光強度、 ＲＤ−ＦＬ（Red Fluorescence）：赤色蛍光強度、 ＯＲ−ＦＬ（Orange Fluorescence ）：橙色蛍光強度、 ＧＲ−ＦＬ（Green Fluorescence）：緑色蛍光強度、 Ｇａｔｅ：図中のＡで囲まれた部分で、分析対象となる
領域、 Ｃｏｕｎｔ：細胞数、 Ｔｏｔａｌ：Ｔｏｔと略する時もある。Ｔｏｔａｌ％は
グラフ１に表示される全細胞数に対する比率、 ＭｅａｎＸ：Ｘ軸パラメータの平均値、 ＭｅａｎＹ：Ｙ軸パラメータの平均値、 ＣＶ％Ｘ：Ｘ軸パラメータの変動係数（標準偏差／平均
値）、 ＣＶ％Ｙ：Ｙ軸パラメータの変動係数（標準偏差／平均
値）、 又、Ｇｒａｐｈ Ｎｏ．２及びＮｏ．３（２番目及び３
番目のグラフ）では、 Ｃｏｕｎｔｓ：測定対象となったグラフに表される細胞
数、 ＲＤ−ＦＬ（Red Fluorescence）：赤色蛍光強度、 ＯＲ−ＦＬ（Orange Fluorescence ）：橙色蛍光強度、 ＧＲ−ＦＬ（Green Fluorescence）：緑色蛍光強度、 ＲＥＧ：データ解析の対象となる領域。この場合は陽性
領域（＋）と陰性領域（−）とがある。
【００４３】Ｐｏｓｉ：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ％の略。陽性
率を表す。 Ｃｏｕｎｔ：各々の領域に存在する細胞数、 Ｍｅａｎ：各々の領域に存在する細胞のＸ軸パラメータ
の平均値、 ＳＤ：上記の標準偏差、 ＣＶ％：上記の変動係数〔（標準偏差／平均値）×１０
０〕、をそれぞれ表している。
率を表す。 Ｃｏｕｎｔ：各々の領域に存在する細胞数、 Ｍｅａｎ：各々の領域に存在する細胞のＸ軸パラメータ
の平均値、 ＳＤ：上記の標準偏差、 ＣＶ％：上記の変動係数〔（標準偏差／平均値）×１０
０〕、をそれぞれ表している。
【００４４】次に、上記測定方法を実施するための測定
装置について説明する。図１３はその一例に係る装置の
構成を示す図である。試料となる血液は予めオートサン
プラ２中に装填された複数本の採血管３にそれぞれ入れ
られており、キャップピアサ４が適当な駆動機構（図示
せず）によって駆動され、任意の採血管３に貫通され、
その採血管３内の一定量の血液が血液分注ポンプ５によ
って分取され、この分取血液が血液試料１とされる。
装置について説明する。図１３はその一例に係る装置の
構成を示す図である。試料となる血液は予めオートサン
プラ２中に装填された複数本の採血管３にそれぞれ入れ
られており、キャップピアサ４が適当な駆動機構（図示
せず）によって駆動され、任意の採血管３に貫通され、
その採血管３内の一定量の血液が血液分注ポンプ５によ
って分取され、この分取血液が血液試料１とされる。
【００４５】分取後、三方弁６が切り換えられ、血液試
料は反応槽７に送られ、その一定量が分注される。染色
液ボトル８には前記各種の蛍光染色液が入っており、こ
の蛍光染色液は、染色液ポンプ９によって分取され、分
取後に三方弁１０が切り換えられて反応槽７に送られ
る。反応槽７において、血液試料と染色液は、所定時間
インキュベートされ、その後に試料ポンプ１１によって
分取され、分取後に三方弁１２が切り換えられてフロー
セル１３に送られる。フローセル１３にはシース液ポン
プ１４も接続されており、流体力学的焦点合せの原理に
より、血液試料１がフローセル１３の中心軸上を一列に
なって流れるようになっている。
料は反応槽７に送られ、その一定量が分注される。染色
液ボトル８には前記各種の蛍光染色液が入っており、こ
の蛍光染色液は、染色液ポンプ９によって分取され、分
取後に三方弁１０が切り換えられて反応槽７に送られ
る。反応槽７において、血液試料と染色液は、所定時間
インキュベートされ、その後に試料ポンプ１１によって
分取され、分取後に三方弁１２が切り換えられてフロー
セル１３に送られる。フローセル１３にはシース液ポン
プ１４も接続されており、流体力学的焦点合せの原理に
より、血液試料１がフローセル１３の中心軸上を一列に
なって流れるようになっている。
【００４６】フローセル１３の側方には、半導体レーザ
等の光源１５が配置されており、光源１５より出たビー
ムＬは、フローセル１３中の血液試料１に照射され、ビ
ームＬの進行方向に配置された前方散乱光検出器１６と
ビームＬの進行方向と直角方向に配置された蛍光検出器
１７により、それぞれ光信号として検出される。検出
後、血液試料１は、フローセル１３より送出され、排液
タンク１８に導かれる。
等の光源１５が配置されており、光源１５より出たビー
ムＬは、フローセル１３中の血液試料１に照射され、ビ
ームＬの進行方向に配置された前方散乱光検出器１６と
ビームＬの進行方向と直角方向に配置された蛍光検出器
１７により、それぞれ光信号として検出される。検出
後、血液試料１は、フローセル１３より送出され、排液
タンク１８に導かれる。
【００４７】なお、フローセル１３と前方散乱光検出器
１６との間には、直射光を避けるためのビームブロッカ
１９と、光を検出器１６に集光させるための集光レンズ
２０とが配置されている。又、フローセル１３と蛍光検
出器１７との間には、光を検出器１７に集光させるため
の集光レンズ２１と、干渉フィルタ２２とが配置されて
いる。
１６との間には、直射光を避けるためのビームブロッカ
１９と、光を検出器１６に集光させるための集光レンズ
２０とが配置されている。又、フローセル１３と蛍光検
出器１７との間には、光を検出器１７に集光させるため
の集光レンズ２１と、干渉フィルタ２２とが配置されて
いる。
【００４８】前方散乱光検出器１６と蛍光検出器１７の
受光信号は、信号処理回路部２３でノイズ除去と増幅が
行われた後、Ａ／Ｄ変換器２４によりデジタル信号化さ
れて、ＭＰＵ２５に取り込まれる。ＭＰＵ２５は、各種
の入出力装置であるフロッピーディスクドライブ２６、
キーボード２７、ＣＲＴ２８、プリンタ２９等と接続さ
れている。又、ＭＰＵ２５は、血液分注ポンプ５、染色
液ポンプ９、試料ポンプ１１、シース液ポンプ１４、及
び反応槽７を洗浄するために洗浄ボトル３０より洗浄液
を反応槽７に送る洗浄液ポンプ３１等を駆動制御する機
能を有している。なお、反応槽７に洗浄液が送られ、洗
浄がなされた後には、切換弁３２がオープンとなり、反
応槽７内の排液が排出される。
受光信号は、信号処理回路部２３でノイズ除去と増幅が
行われた後、Ａ／Ｄ変換器２４によりデジタル信号化さ
れて、ＭＰＵ２５に取り込まれる。ＭＰＵ２５は、各種
の入出力装置であるフロッピーディスクドライブ２６、
キーボード２７、ＣＲＴ２８、プリンタ２９等と接続さ
れている。又、ＭＰＵ２５は、血液分注ポンプ５、染色
液ポンプ９、試料ポンプ１１、シース液ポンプ１４、及
び反応槽７を洗浄するために洗浄ボトル３０より洗浄液
を反応槽７に送る洗浄液ポンプ３１等を駆動制御する機
能を有している。なお、反応槽７に洗浄液が送られ、洗
浄がなされた後には、切換弁３２がオープンとなり、反
応槽７内の排液が排出される。
【００４９】
【発明の効果】本発明の網状赤血球の測定方法は、以上
説明したように蛍光染料としてＴＯＴＯ−３又はＴＯ−
ＰＲＯ−３、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯ
ＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１、或いはＹＯＹＯ−３又
はＹＯ−ＰＲＯ−３を含有する蛍光染色液で染色した血
液試料に対して、ＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３で
は赤色、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３では緑色、
ＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１では青色、ＹＯＹＯ
−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３では橙色の波長領域の光を照
射し、前記血液試料からの蛍光を測光することにより網
状赤血球を測定するので、血液中の網状赤血球を高感度
に正確に且つ低コストで測定することができる。
説明したように蛍光染料としてＴＯＴＯ−３又はＴＯ−
ＰＲＯ−３、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３、ＹＯ
ＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１、或いはＹＯＹＯ−３又
はＹＯ−ＰＲＯ−３を含有する蛍光染色液で染色した血
液試料に対して、ＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３で
は赤色、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３では緑色、
ＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１では青色、ＹＯＹＯ
−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３では橙色の波長領域の光を照
射し、前記血液試料からの蛍光を測光することにより網
状赤血球を測定するので、血液中の網状赤血球を高感度
に正確に且つ低コストで測定することができる。
【００５０】又、フローサイトメータにおいて本発明の
上記蛍光染色液で染色した網状赤血球を測定するため、
蛍光のバックグランドが少なくて感度良く、簡便に測定
できるという大きな利点がある。しかも、上記蛍光染料
を含有する蛍光染色液で染色するため、網状赤血球の細
胞内ＲＮＡが沈殿しない利点ばかりでなく、ＲＮＡ量と
蛍光強度との関係が一次式で表されるので、臨床上有用
な情報を提供できる利点もある。
上記蛍光染色液で染色した網状赤血球を測定するため、
蛍光のバックグランドが少なくて感度良く、簡便に測定
できるという大きな利点がある。しかも、上記蛍光染料
を含有する蛍光染色液で染色するため、網状赤血球の細
胞内ＲＮＡが沈殿しない利点ばかりでなく、ＲＮＡ量と
蛍光強度との関係が一次式で表されるので、臨床上有用
な情報を提供できる利点もある。
【００５１】更に、蛍光染色液の励起波長に合致した光
源として、ＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３では赤色
ヘリウムネオンレーザ、赤色高輝度ＬＥＤ又は赤色半導
体レーザを、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３では緑
色ヘリウムネオンレーザ、緑色高輝度ＬＥＤ又は緑色半
導体レーザを、ＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１では
青色アルゴンイオンレーザ、青色高輝度ＬＥＤ又は青色
半導体レーザを、ＹＯＹＯ−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３で
はオレンジヘリウムネオンレーザ、橙色高輝度ＬＥＤ又
は橙色半導体レーザを、それぞれ利用することができる
ので、従来の例えば放電型レーザを光源とした場合に比
べ、測定に使用する装置を小型化、安価且つ簡便に構成
することができる。
源として、ＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３では赤色
ヘリウムネオンレーザ、赤色高輝度ＬＥＤ又は赤色半導
体レーザを、ＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３では緑
色ヘリウムネオンレーザ、緑色高輝度ＬＥＤ又は緑色半
導体レーザを、ＹＯＹＯ−１又はＹＯ−ＰＲＯ−１では
青色アルゴンイオンレーザ、青色高輝度ＬＥＤ又は青色
半導体レーザを、ＹＯＹＯ−３又はＹＯ−ＰＲＯ−３で
はオレンジヘリウムネオンレーザ、橙色高輝度ＬＥＤ又
は橙色半導体レーザを、それぞれ利用することができる
ので、従来の例えば放電型レーザを光源とした場合に比
べ、測定に使用する装置を小型化、安価且つ簡便に構成
することができる。
【００５２】一方、本発明の網状赤血球測定装置は、血
液試料染色手段により、前記蛍光染料のうち、少なくと
もいずれか１つの蛍光染料を含有する蛍光染色液が血液
試料に添加されて血液試料が染色され、染色された血液
試料からの細胞光情報を検出する構成であるため、上記
測定方法を容易に実施することができる。又、光源とし
て半導体レーザ、高輝度ＬＥＤ、ヘリウムネオンレー
ザ、又はアルゴンイオンレーザを使用できるので、小型
化、安価且つ簡便な構成とすることが可能となる。
液試料染色手段により、前記蛍光染料のうち、少なくと
もいずれか１つの蛍光染料を含有する蛍光染色液が血液
試料に添加されて血液試料が染色され、染色された血液
試料からの細胞光情報を検出する構成であるため、上記
測定方法を容易に実施することができる。又、光源とし
て半導体レーザ、高輝度ＬＥＤ、ヘリウムネオンレー
ザ、又はアルゴンイオンレーザを使用できるので、小型
化、安価且つ簡便な構成とすることが可能となる。
【図１】蛍光染色液で染色した正常血液検体についての
前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
【図２】蛍光染色液で染色した異常血液検体についての
前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
【図３】未染色の正常血液検体についての前方散乱光及
び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒストグ
ラムを示す図である。
び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒストグ
ラムを示す図である。
【図４】蛍光染色液で染色した正常血液検体についての
前方散乱光及び橙色蛍光のサイトグラム、並びに橙色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
前方散乱光及び橙色蛍光のサイトグラム、並びに橙色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
【図５】蛍光染色液で染色した異常血液検体についての
前方散乱光及び橙色蛍光のサイトグラム、並びに橙色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
前方散乱光及び橙色蛍光のサイトグラム、並びに橙色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
【図６】未染色の正常血液検体についての前方散乱光及
び橙色蛍光のサイトグラム、並びに橙色蛍光のヒストグ
ラムを示す図である。
び橙色蛍光のサイトグラム、並びに橙色蛍光のヒストグ
ラムを示す図である。
【図７】蛍光染色液で染色した正常血液検体についての
前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、並びに緑色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、並びに緑色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
【図８】蛍光染色液で染色した異常血液検体についての
前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、並びに緑色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
前方散乱光及び緑色蛍光のサイトグラム、並びに緑色蛍
光のヒストグラムを示す図である。
【図９】未染色の正常血液検体についての前方散乱光及
び緑色蛍光のサイトグラム、並びに緑色蛍光のヒストグ
ラムを示す図である。
び緑色蛍光のサイトグラム、並びに緑色蛍光のヒストグ
ラムを示す図である。
【図１０】蛍光染色液で染色した正常血液検体について
の前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色
蛍光のヒストグラムを示す図である。
の前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色
蛍光のヒストグラムを示す図である。
【図１１】蛍光染色液で染色した異常血液検体について
の前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色
蛍光のヒストグラムを示す図である。
の前方散乱光及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色
蛍光のヒストグラムを示す図である。
【図１２】未染色の正常血液検体についての前方散乱光
及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒスト
グラムを示す図である。
及び赤色蛍光のサイトグラム、並びに赤色蛍光のヒスト
グラムを示す図である。
【図１３】一実施例に係る測定装置の構成を示す図であ
る。
る。
１ 血液試料 ７ 反応槽 ８ 染色液ボトル １３ フローセル １５ 光源 １６ 前方散乱光検出器 １７ 蛍光検出器 ２５ ＭＰＵ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 時田 宗雄 京都市右京区山ノ内山ノ下町24番地 株式 会社オムロンライフサイエンス研究所内
Claims (18)
- 【請求項１】蛍光染料としてＴＯＴＯ−３又はＴＯ−Ｐ
ＲＯ−３を含有する蛍光染色液で染色した血液試料に対
して、赤色の波長領域の光を照射し、前記血液試料から
の蛍光を測光することにより網状赤血球を測定すること
を特徴とする網状赤血球の測定方法。 - 【請求項２】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の網
状赤血球をフローサイトメータ中のヘリウム−ネオンレ
ーザからの光で測定することを特徴とする請求項１記載
の網状赤血球の測定方法。 - 【請求項３】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の網
状赤血球をフローサイトメータ中の赤色高輝度ＬＥＤか
らの光で測定することを特徴とする請求項１記載の網状
赤血球の測定方法。 - 【請求項４】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の網
状赤血球をフローサイトメータ中の赤色半導体レーザか
らの光で測定することを特徴とする請求項１記載の網状
赤血球の測定方法。 - 【請求項５】蛍光染料としてＰＯＰＯ−３又はＰＯ−Ｐ
ＲＯ−３を含有する蛍光染色液で染色した血液試料に対
して、緑色の波長領域の光を照射し、前記血液試料から
の蛍光を測光することにより網状赤血球を測定すること
を特徴とする網状赤血球の測定方法。 - 【請求項６】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の網
状赤血球をフローサイトメータ中の緑色ヘリウム−ネオ
ンレーザからの光で測定することを特徴とする請求項５
記載の網状赤血球の測定方法。 - 【請求項７】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の網
状赤血球をフローサイトメータ中の緑色高輝度ＬＥＤか
らの光で測定することを特徴とする請求項５記載の網状
赤血球の測定方法。 - 【請求項８】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の網
状赤血球をフローサイトメータ中の緑色半導体レーザか
らの光で測定することを特徴とする請求項５記載の網状
赤血球の測定方法。 - 【請求項９】蛍光染料としてＹＯＹＯ−１又はＹＯ−Ｐ
ＲＯ−１を含有する蛍光染色液で染色した血液試料に対
して、青色の波長領域の光を照射し、前記血液試料から
の蛍光を測光することにより網状赤血球を測定すること
を特徴とする網状赤血球の測定方法。 - 【請求項１０】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の
網状赤血球をフローサイトメータ中のアルゴンイオンレ
ーザからの光で測定することを特徴とする請求項９記載
の網状赤血球の測定方法。 - 【請求項１１】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の
網状赤血球をフローサイトメータ中の青色高輝度ＬＥＤ
からの光で測定することを特徴とする請求項９記載の網
状赤血球の測定方法。 - 【請求項１２】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の
網状赤血球をフローサイトメータ中の青色半導体レーザ
からの光で測定することを特徴とする請求項９記載の網
状赤血球の測定方法。 - 【請求項１３】蛍光染料としてＹＯＹＯ−３又はＹＯ−
ＰＲＯ−３を含有する蛍光染色液で染色した血液試料に
対して、橙色の波長領域の光を照射し、前記血液試料か
らの蛍光を測光することにより網状赤血球を測定するこ
とを特徴とする網状赤血球の測定方法。 - 【請求項１４】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の
網状赤血球をフローサイトメータ中のオレンジヘリウム
イオンレーザからの光で測定することを特徴とする請求
項１３記載の網状赤血球の測定方法。 - 【請求項１５】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の
網状赤血球をフローサイトメータ中の橙色高輝度ＬＥＤ
からの光で測定することを特徴とする請求項１３記載の
網状赤血球の測定方法。 - 【請求項１６】前記蛍光染色液で染色した血液試料中の
網状赤血球をフローサイトメータ中の橙色半導体レーザ
からの光で測定することを特徴とする請求項１３記載の
網状赤血球の測定方法。 - 【請求項１７】血液中の網状赤血球を蛍光染色して分析
する網状赤血球測定装置において、 血液試料を採血管より直接分取・分注する血液試料分取
分注手段と、 前記血液試料分取分注手段により分注された血液試料
に、蛍光染料としてＴＯＴＯ−３又はＴＯ−ＰＲＯ−３
又はＰＯＰＯ−３又はＰＯ−ＰＲＯ−３又はＹＯＹＯ−
１又はＹＯ−ＰＲＯ−１又はＹＯＹＯ−３又はＹＯ−Ｐ
ＲＯ−３のうち、少なくともいずれか１つの蛍光染料を
含有する蛍光染色液を添加して染色する血液試料染色手
段と、 前記血液試料染色手段により染色された血液試料が流さ
れるフローセルと、 前記フローセル内を流れる血液試料に光ビームを照射す
る光源と、 前記光ビームが照射された血液試料より発せられる少な
くとも２つ以上の細胞光情報を検出する細胞光情報検出
手段と、 前記細胞光情報検出手段で検出された細胞光情報を処理
する細胞光情報処理手段と、 前記細胞光情報処理手段の処理結果を出力する出力手段
と、を備えることを特徴とする網状赤血球測定装置。 - 【請求項１８】前記光源は、半導体レーザ、高輝度ＬＥ
Ｄ、ヘリウムネオンレーザ、又はアルゴンイオンレーザ
であることを特徴とする請求項１７記載の網状赤血球測
定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11289594A JPH07333220A (ja) | 1993-05-28 | 1994-05-26 | 網状赤血球の測定方法及び網状赤血球測定装置 |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12665193 | 1993-05-28 | ||
| JP5-126651 | 1994-04-14 | ||
| JP7553994 | 1994-04-14 | ||
| JP6-75539 | 1994-04-14 | ||
| JP11289594A JPH07333220A (ja) | 1993-05-28 | 1994-05-26 | 網状赤血球の測定方法及び網状赤血球測定装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07333220A true JPH07333220A (ja) | 1995-12-22 |
Family
ID=27301863
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11289594A Pending JPH07333220A (ja) | 1993-05-28 | 1994-05-26 | 網状赤血球の測定方法及び網状赤血球測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07333220A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH11508353A (ja) * | 1995-04-21 | 1999-07-21 | アボット・ラボラトリーズ | 網状赤血球を迅速に分析するための組成物及び方法 |
| JP2006258776A (ja) * | 2004-04-08 | 2006-09-28 | Nippon Koden Corp | 粒子分類装置 |
| JP2012514211A (ja) * | 2008-12-30 | 2012-06-21 | キヤノン ユー．エス． ライフ サイエンシズ， インコーポレイテッド | 高解像度核酸融解分析用の非対称シアニン色素 |
-
1994
- 1994-05-26 JP JP11289594A patent/JPH07333220A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH11508353A (ja) * | 1995-04-21 | 1999-07-21 | アボット・ラボラトリーズ | 網状赤血球を迅速に分析するための組成物及び方法 |
| JP2006258776A (ja) * | 2004-04-08 | 2006-09-28 | Nippon Koden Corp | 粒子分類装置 |
| JP2012514211A (ja) * | 2008-12-30 | 2012-06-21 | キヤノン ユー．エス． ライフ サイエンシズ， インコーポレイテッド | 高解像度核酸融解分析用の非対称シアニン色素 |
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