JPH07260789A - ポリアミド、ポリウレタンもしくはポリ尿素支持体を用いるイムノアッセイ並びに試験キット - Google Patents
ポリアミド、ポリウレタンもしくはポリ尿素支持体を用いるイムノアッセイ並びに試験キットInfo
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- JPH07260789A JPH07260789A JP9304593A JP9304593A JPH07260789A JP H07260789 A JPH07260789 A JP H07260789A JP 9304593 A JP9304593 A JP 9304593A JP 9304593 A JP9304593 A JP 9304593A JP H07260789 A JPH07260789 A JP H07260789A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は分析物検出用のイムノアッセイ及び
試験キットに関する。 【構成】 イムノアッセイは捕捉支持体として繊維形成
もしくはフィルム形成ポリマーを用いて実施される。ポ
リマーは、ポリマーのアミド、ウレタンもしくは尿素基
の窒素原子を介してポリマーに付着した活性化基を担持
するポリアミド、ポリウレタンもしくはポリ尿素であ
る。活性化基は、多様な化合物、例えば生物学的に有用
な化合物のアミンもしくはチオール基と反応性である。
イムノアッセイに有用な試験キットは、捕捉支持体及び
目的の分析物に向けられた直接標識された抗体類を包含
する。
試験キットに関する。 【構成】 イムノアッセイは捕捉支持体として繊維形成
もしくはフィルム形成ポリマーを用いて実施される。ポ
リマーは、ポリマーのアミド、ウレタンもしくは尿素基
の窒素原子を介してポリマーに付着した活性化基を担持
するポリアミド、ポリウレタンもしくはポリ尿素であ
る。活性化基は、多様な化合物、例えば生物学的に有用
な化合物のアミンもしくはチオール基と反応性である。
イムノアッセイに有用な試験キットは、捕捉支持体及び
目的の分析物に向けられた直接標識された抗体類を包含
する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、分析物検出用のイムノ
アッセイ及び試験キットに関する。本発明は診断法に有
用である。
アッセイ及び試験キットに関する。本発明は診断法に有
用である。
【０００２】
【従来の技術】アッセイ中に形成される免疫複合体の成
分がポリマー支持体に共有結合される多種イムノアッセ
イ技術が既知である。複合体が固定化されている支持体
は異なる形状を取ることができる。例えば、或る好まし
い支持体の形状は多孔質膜である。
分がポリマー支持体に共有結合される多種イムノアッセ
イ技術が既知である。複合体が固定化されている支持体
は異なる形状を取ることができる。例えば、或る好まし
い支持体の形状は多孔質膜である。
【０００３】Clin.Prod.Rev., 4, 1985, 33〜41は、ポ
リビニリデンジフルオリドポリマー由来のイモビロン(I
MMOBILON，商標) として既知である市販微孔質膜の使用
を記載する。エンザイム・リンクト・イムノソルベント
・アッセイ（ＥＬＩＳＡ）におけるその使用の具体例が
挙げられている。
リビニリデンジフルオリドポリマー由来のイモビロン(I
MMOBILON，商標) として既知である市販微孔質膜の使用
を記載する。エンザイム・リンクト・イムノソルベント
・アッセイ（ＥＬＩＳＡ）におけるその使用の具体例が
挙げられている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】イムノアッセイ用の別
のポリマー支持体材料についての必要性が存在する。ア
ッセイの感度を増強できるポリマー支持体類が特に必要
とされている。
のポリマー支持体材料についての必要性が存在する。ア
ッセイの感度を増強できるポリマー支持体類が特に必要
とされている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、（Ａ）支持体
上に、検出可能に標識された免疫学的複合体を形成せし
める工程、及び（Ｂ）標識された免疫学的複合体を検出
する工程、（ここで、支持体は、ポリマーのアミド基、
ウレタン基もしくは尿素基の窒素原子を介してポリマー
に付着された活性化基を含んで成る繊維形成もしくはフ
ィルム形成ポリアミド、ポリウレタンもしくはポリ尿素
ポリマー由来であり、活性化基は生物学的化合物のアミ
ノもしくはチオール基と反応でき、かつここで、検出可
能に標識された免疫学的複合体は、ポリマーの活性化基
及び免疫学的複合体の成分間のリンクの生成によりポリ
マーに共有結合される）を含んで成る分析物検出用イム
ノアッセイを提供する。
上に、検出可能に標識された免疫学的複合体を形成せし
める工程、及び（Ｂ）標識された免疫学的複合体を検出
する工程、（ここで、支持体は、ポリマーのアミド基、
ウレタン基もしくは尿素基の窒素原子を介してポリマー
に付着された活性化基を含んで成る繊維形成もしくはフ
ィルム形成ポリアミド、ポリウレタンもしくはポリ尿素
ポリマー由来であり、活性化基は生物学的化合物のアミ
ノもしくはチオール基と反応でき、かつここで、検出可
能に標識された免疫学的複合体は、ポリマーの活性化基
及び免疫学的複合体の成分間のリンクの生成によりポリ
マーに共有結合される）を含んで成る分析物検出用イム
ノアッセイを提供する。
【０００６】また本発明は、（ａ）製品に共有結合され
る分析物に特異的な抗体を担持する多孔質膜を含んで成
る水不溶性製品、及び（ｂ）分析物に特異的な検出可能
に標識された抗体、（ここで、多孔質膜は、ポリマーの
アミド基、ウレタン基もしくは尿素基の窒素原子を介し
てポリマーに付着された活性化基を含んで成る繊維形成
もしくはフィルム形成ポリアミド、ポリウレタンもしく
はポリ尿素ポリマー由来であり、活性化基は分析物に特
異的な抗体のアミノもしくはチオール基と反応して、ポ
リマーの活性化基及び抗体の間のリンクの生成により、
ポリマーに対する抗体の共有結合を達成できる）を含ん
で成る分析物検出用イムノアッセイのための試験キット
を提供する。
る分析物に特異的な抗体を担持する多孔質膜を含んで成
る水不溶性製品、及び（ｂ）分析物に特異的な検出可能
に標識された抗体、（ここで、多孔質膜は、ポリマーの
アミド基、ウレタン基もしくは尿素基の窒素原子を介し
てポリマーに付着された活性化基を含んで成る繊維形成
もしくはフィルム形成ポリアミド、ポリウレタンもしく
はポリ尿素ポリマー由来であり、活性化基は分析物に特
異的な抗体のアミノもしくはチオール基と反応して、ポ
リマーの活性化基及び抗体の間のリンクの生成により、
ポリマーに対する抗体の共有結合を達成できる）を含ん
で成る分析物検出用イムノアッセイのための試験キット
を提供する。
【０００７】
【具体的な態様】この発明の実施に際して有用な適する
ポリマー類は、繊維形成能もしくはフィルム形成能を有
するいずれかのポリアミド、ポリウレタン又はポリ尿素
を改質することにより製造できる。ポリマーはエラスト
マーであってもよく、そして好ましい態様では、ポリエ
ーテルウレタンが使用される。ポリマーの支持体が製造
できる適する市販ポリマーの具体例としては、限定され
るものではないが、バイオマー (BIOMER，商標）、ペレ
ザン (PELLETHANE，商標）、テコフレックス（TECOFLE
X，商標）及びエスタン (ESTANE，商標）ポリマーが挙
げられる。
ポリマー類は、繊維形成能もしくはフィルム形成能を有
するいずれかのポリアミド、ポリウレタン又はポリ尿素
を改質することにより製造できる。ポリマーはエラスト
マーであってもよく、そして好ましい態様では、ポリエ
ーテルウレタンが使用される。ポリマーの支持体が製造
できる適する市販ポリマーの具体例としては、限定され
るものではないが、バイオマー (BIOMER，商標）、ペレ
ザン (PELLETHANE，商標）、テコフレックス（TECOFLE
X，商標）及びエスタン (ESTANE，商標）ポリマーが挙
げられる。
【０００８】例えば、アミドもしくはチオエーテルリン
クの生成により、それぞれアミノもしくはチオール基含
有化合物と反応できる活性化基は既知である。
クの生成により、それぞれアミノもしくはチオール基含
有化合物と反応できる活性化基は既知である。
【０００９】好ましい活性化基としては、イソシアネー
ト基、イミダゾリルカルバメート基、１−メチル−２−
ピリジル基もしくは式−ＣＯＯＺ（式中、Ｚは電子求引
性基である）で示される基が挙げられる。官能基は、水
素と相対的に電子求引性基として分類される。例えば、
−ＮＯ2 及び−Ｉ基は、分子内の同位置を占有している
水素原子よりもそれら自体に対して電子を求引する(J.M
arch, Advanced Organic Chemistry, 第２版、 McGraw
Hill, 20及び246 ページ参照）。Ｚ基の特定の具体例と
しては、Ｎ−スクシンイミド、ベンジリデンアニリン、
ペンタフルオロフェニル、４−ニトロフェニル、４−シ
アノフェニル、４−アルキルスルホニルフェニル、アシ
ル、４−アシルフェニル、４−ジアルキルアミノカルボ
ニルフェニル、４−アルコキシカルボニルフェニル及び
４−アルコキシスルホニルフェニルが挙げられる。好ま
しくは、本発明のポリマーは次式で示される単位を含ん
で成る。
ト基、イミダゾリルカルバメート基、１−メチル−２−
ピリジル基もしくは式−ＣＯＯＺ（式中、Ｚは電子求引
性基である）で示される基が挙げられる。官能基は、水
素と相対的に電子求引性基として分類される。例えば、
−ＮＯ2 及び−Ｉ基は、分子内の同位置を占有している
水素原子よりもそれら自体に対して電子を求引する(J.M
arch, Advanced Organic Chemistry, 第２版、 McGraw
Hill, 20及び246 ページ参照）。Ｚ基の特定の具体例と
しては、Ｎ−スクシンイミド、ベンジリデンアニリン、
ペンタフルオロフェニル、４−ニトロフェニル、４−シ
アノフェニル、４−アルキルスルホニルフェニル、アシ
ル、４−アシルフェニル、４−ジアルキルアミノカルボ
ニルフェニル、４−アルコキシカルボニルフェニル及び
４−アルコキシスルホニルフェニルが挙げられる。好ま
しくは、本発明のポリマーは次式で示される単位を含ん
で成る。
【００１０】
【化１】
【００１１】上式中、−〔ＮＣＯ（Ｘ) p 〕−は、ポリ
マー主鎖中のアミド、ウレタンもしくは尿素基であり、
Ｘは−Ｏ−もしくは−ＮＨ−であり、ｐは０もしくは１
であり、Ｌ及びＬ′は各々独立して連結基であり、Ｒは
水素もしくはアルキルであり、Ｙは活性化基であり、ｍ
は０もしくは１であり、そしてｎは１０〜１５０、好ま
しくは３０〜１２０の整数である。
マー主鎖中のアミド、ウレタンもしくは尿素基であり、
Ｘは−Ｏ−もしくは−ＮＨ−であり、ｐは０もしくは１
であり、Ｌ及びＬ′は各々独立して連結基であり、Ｒは
水素もしくはアルキルであり、Ｙは活性化基であり、ｍ
は０もしくは１であり、そしてｎは１０〜１５０、好ま
しくは３０〜１２０の整数である。
【００１２】Ｌ及びＬ′は、それらを連結する原子と一
緒に、活性化基Ｙをポリマー主鎖から遠くへ間隔をあけ
るのに役立っている。各々Ｌ及びＬ′は、１つ以上の二
価炭化水素基、例えば、置換もしくは無置換の主鎖中の
炭素原子数１〜２０個のアルキレン及び炭素原子数６〜
１０個のアリーレン基を含んで成ってもよく、それら
は、ヘテロ原子もしくはヘテロ原子含有基、例えば、−
Ｏ−，−ＮＨ−，−Ｓ−，−ＮＨＣＯ−，−ＣＯＯ−及
び−ＣＯ−に接続しているか又はそこを末端基としてい
る。好ましくは、各々Ｌ及びＬ′が、活性化基もしくは
活性化基含有部分をポリマー主鎖から隔離する原子数４
〜５０個の鎖を含んで成る。
緒に、活性化基Ｙをポリマー主鎖から遠くへ間隔をあけ
るのに役立っている。各々Ｌ及びＬ′は、１つ以上の二
価炭化水素基、例えば、置換もしくは無置換の主鎖中の
炭素原子数１〜２０個のアルキレン及び炭素原子数６〜
１０個のアリーレン基を含んで成ってもよく、それら
は、ヘテロ原子もしくはヘテロ原子含有基、例えば、−
Ｏ−，−ＮＨ−，−Ｓ−，−ＮＨＣＯ−，−ＣＯＯ−及
び−ＣＯ−に接続しているか又はそこを末端基としてい
る。好ましくは、各々Ｌ及びＬ′が、活性化基もしくは
活性化基含有部分をポリマー主鎖から隔離する原子数４
〜５０個の鎖を含んで成る。
【００１３】Ｌ及びＬ′基の特定の具体例は、ポリウレ
タンポリマー類の以下の概略図に示させれる（ここで、
「ポリマー」の語は、同様に置換された更なるウレタン
基を含有するポリウレタンポリマーの残部を示すのに用
いられる）
タンポリマー類の以下の概略図に示させれる（ここで、
「ポリマー」の語は、同様に置換された更なるウレタン
基を含有するポリウレタンポリマーの残部を示すのに用
いられる）
【００１４】
【化２】
【００１５】
【化３】
【００１６】
【化４】
【００１７】活性化基は、分析物のアミノもしくはチオ
ール基と又はそれに特異的な免疫反応体と直接反応す
る。好ましくはこのような反応が、周知である物理学的
反応条件下で実施されるであろう。
ール基と又はそれに特異的な免疫反応体と直接反応す
る。好ましくはこのような反応が、周知である物理学的
反応条件下で実施されるであろう。
【００１８】或るポリマーの製造方法は、繊維形成もし
くはフィルム形成ポリアミド、ポリウレタンもしくはポ
リ尿素をハロイソシアネートもしくはエチレン系不飽和
イソシアネートと反応せしめる工程、及び次いで活性化
基を含んで成るエチレン系不飽和モノマーを生成物上に
グラフトせしめる工程を含んで成る。
くはフィルム形成ポリアミド、ポリウレタンもしくはポ
リ尿素をハロイソシアネートもしくはエチレン系不飽和
イソシアネートと反応せしめる工程、及び次いで活性化
基を含んで成るエチレン系不飽和モノマーを生成物上に
グラフトせしめる工程を含んで成る。
【００１９】ハロイソシアネート類の具体例としては、
ハロアルキル及びハロアセチルイソシアネート類、例え
ば、２−クロロエチルイソシアネート及びトリクロロア
セチルイソシアネートが挙げられる。エチレン系不飽和
イソシアネート類の具体例としては、イソシアネートア
クリレートモノマー類、例えば、イソシアネートエチル
メタクリレートが挙げられる。
ハロアルキル及びハロアセチルイソシアネート類、例え
ば、２−クロロエチルイソシアネート及びトリクロロア
セチルイソシアネートが挙げられる。エチレン系不飽和
イソシアネート類の具体例としては、イソシアネートア
クリレートモノマー類、例えば、イソシアネートエチル
メタクリレートが挙げられる。
【００２０】活性化基を含んで成るエチレン系不飽和モ
ノマー類の具体例としては、Ｎ−アクリロイルオキシス
クシンイミド及び６−メタクリルアミドカプロン酸のス
クシンイミドエステルが挙げられる。
ノマー類の具体例としては、Ｎ−アクリロイルオキシス
クシンイミド及び６−メタクリルアミドカプロン酸のス
クシンイミドエステルが挙げられる。
【００２１】適当なポリマーの別の製造方法は、繊維形
成もしくはフィルム形成ポリアミド、ポリウレタンもし
くはポリ尿素をジイソシアネートと反応せしめる工程を
含んで成る。反応生成物の遊離イソシアネート基は活性
化基である。所望であれば、遊離イソシアネート基を含
有する生成物をヒドロキシ含有反応性エステルと反応せ
しめてもよい。又は遊離イソシアネート基を含有する生
成物をアルカノールアミンもしくは別のアミノアルコー
ル又はジオールと反応せしめてヒドロキシレート化もし
くはカルボキシレート化ポリマーを生成し、次いでそれ
を活性化してもよい。
成もしくはフィルム形成ポリアミド、ポリウレタンもし
くはポリ尿素をジイソシアネートと反応せしめる工程を
含んで成る。反応生成物の遊離イソシアネート基は活性
化基である。所望であれば、遊離イソシアネート基を含
有する生成物をヒドロキシ含有反応性エステルと反応せ
しめてもよい。又は遊離イソシアネート基を含有する生
成物をアルカノールアミンもしくは別のアミノアルコー
ル又はジオールと反応せしめてヒドロキシレート化もし
くはカルボキシレート化ポリマーを生成し、次いでそれ
を活性化してもよい。
【００２２】ジイソシアネート類の具体例としては、ア
ルキレン及びアリーレンジイソシアネート、例えば、ヘ
キサメチレンジイソシアネート及び２，４−トリレンジ
イソシアネートが挙げられる。
ルキレン及びアリーレンジイソシアネート、例えば、ヘ
キサメチレンジイソシアネート及び２，４−トリレンジ
イソシアネートが挙げられる。
【００２３】ヒドロキシ含有反応性エステル類の具体例
としては、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアリール、
ヒドロキシアルカリル及びヒドロキシアラルキル反応性
エステル類、例えば、Ｎ−〔３−（４−ヒドロキシフェ
ニル）プロピオニルオキシ〕スクシンイミドが挙げられ
る。
としては、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアリール、
ヒドロキシアルカリル及びヒドロキシアラルキル反応性
エステル類、例えば、Ｎ−〔３−（４−ヒドロキシフェ
ニル）プロピオニルオキシ〕スクシンイミドが挙げられ
る。
【００２４】ポリマーの遊離イソシアネート基をヒドロ
キシレート化形状に変換せしめるのに用いられる化合物
類の具体例としては、アルカノールアミン類、例えば、
エタノールアミン、６−アミノ−１−ヘキサノール及び
グルカミン並びにジオール類、例えば、ポリ（エチレン
グリコール）が挙げられる。
キシレート化形状に変換せしめるのに用いられる化合物
類の具体例としては、アルカノールアミン類、例えば、
エタノールアミン、６−アミノ−１−ヘキサノール及び
グルカミン並びにジオール類、例えば、ポリ（エチレン
グリコール）が挙げられる。
【００２５】ポリマーの遊離イソシアネート基をカルボ
キシレート化形状に変換せしめるのに用いられる化合物
類の具体例としては、アミン基含有カルボン酸、例え
ば、６−アミノカプロン酸が挙げられる。
キシレート化形状に変換せしめるのに用いられる化合物
類の具体例としては、アミン基含有カルボン酸、例え
ば、６−アミノカプロン酸が挙げられる。
【００２６】ヒドロキシレート化ポリマーを活性化する
のに用いられる化合物類の具体例は、１，１′−カルボ
ニルジイミダゾール（ＣＤＩ）及び２−フルオロ−１−
メチルピリジニウムトルエン４−スルホネート（ＦＭ
Ｐ）である。
のに用いられる化合物類の具体例は、１，１′−カルボ
ニルジイミダゾール（ＣＤＩ）及び２−フルオロ−１−
メチルピリジニウムトルエン４−スルホネート（ＦＭ
Ｐ）である。
【００２７】上記方法は、反応前にポリマーが溶解せし
められるような溶液中で実施してもよい。このようにし
て、活性化ポリマーは次いで所望の繊維状もしくはフィ
ルム状に形成せしめられるものに生成される。
められるような溶液中で実施してもよい。このようにし
て、活性化ポリマーは次いで所望の繊維状もしくはフィ
ルム状に形成せしめられるものに生成される。
【００２８】あるいは、ポリマーの表面のみを活性化せ
しめるために、固体状、例えば、繊維状もしくはフィル
ム状のポリマーを、反応体類の溶液で処理してもよい。
しめるために、固体状、例えば、繊維状もしくはフィル
ム状のポリマーを、反応体類の溶液で処理してもよい。
【００２９】本発明の好ましい態様では、支持体が繊維
膜である。繊維は既知技術を用いて静電紡糸により製造
してもよい。活性化ポリマーを繊維に紡糸してもよい。
あるいは、ポリマーを繊維に紡糸し次いで活性化基の付
着により改質してもよい。
膜である。繊維は既知技術を用いて静電紡糸により製造
してもよい。活性化ポリマーを繊維に紡糸してもよい。
あるいは、ポリマーを繊維に紡糸し次いで活性化基の付
着により改質してもよい。
【００３０】静電紡糸工程では、繊維は適当に設置され
た受容体上に多孔質マットとして収集される。このよう
にして、繊維の層を被覆せしめた支持体が製造できる。
あるいは、繊維状マットを受容体から剥離することがで
きる。
た受容体上に多孔質マットとして収集される。このよう
にして、繊維の層を被覆せしめた支持体が製造できる。
あるいは、繊維状マットを受容体から剥離することがで
きる。
【００３１】繊維状生成物は多様な形状に製造できる。
例えば、円筒形受容体を用いてチューブ状製品が製造で
きる。静電紡糸工程により得られる繊維は薄く、かつ直
径約０．１〜約２５μｍの程度でありうる。約０．５〜
約１０μｍの繊維直径、特に約１．０〜約５μｍの繊維
直径が好ましい。
例えば、円筒形受容体を用いてチューブ状製品が製造で
きる。静電紡糸工程により得られる繊維は薄く、かつ直
径約０．１〜約２５μｍの程度でありうる。約０．５〜
約１０μｍの繊維直径、特に約１．０〜約５μｍの繊維
直径が好ましい。
【００３２】ポリマーは、溶液から都合良く紡糸するこ
とができる。適する溶剤類としては、ジメチルホルムア
ミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジクロロメタン
及びメチルエチルケトンが挙げられる。溶剤混合物類、
例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及びメチルエチ
ルケトンの混合物（例えば、重量比約１．４５：１）
は、好ましいであろう。例えば、バイオマー (BIOMER，
商標）ポリマー、分子量約６０，０００を有する市販ポ
リ（エーテルウレタンウレア）、を用いてＮ，Ｎ−ジメ
チルアセトアミドに溶解せしめる場合に好ましい濃度
は、約１０〜約２０ｗ／ｗ％、例えば、約１６ｗ／ｗ％
である。
とができる。適する溶剤類としては、ジメチルホルムア
ミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジクロロメタン
及びメチルエチルケトンが挙げられる。溶剤混合物類、
例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及びメチルエチ
ルケトンの混合物（例えば、重量比約１．４５：１）
は、好ましいであろう。例えば、バイオマー (BIOMER，
商標）ポリマー、分子量約６０，０００を有する市販ポ
リ（エーテルウレタンウレア）、を用いてＮ，Ｎ−ジメ
チルアセトアミドに溶解せしめる場合に好ましい濃度
は、約１０〜約２０ｗ／ｗ％、例えば、約１６ｗ／ｗ％
である。
【００３３】いずれか都合の良い方法を使用してポリマ
ー溶液を紡糸用静電界と接触せしめてもよい。典型的に
は、繊維状生成物は直径約１μｍの極めて微細な繊維の
網状構造を含んで成る。繊維は多数の接触点で融合され
ており、かつ典型的な大きさが約０．５〜約１０μｍの
範囲内の不規則な穴もしくは孔を囲っている。繊維の総
表面領域は極めて大きい。
ー溶液を紡糸用静電界と接触せしめてもよい。典型的に
は、繊維状生成物は直径約１μｍの極めて微細な繊維の
網状構造を含んで成る。繊維は多数の接触点で融合され
ており、かつ典型的な大きさが約０．５〜約１０μｍの
範囲内の不規則な穴もしくは孔を囲っている。繊維の総
表面領域は極めて大きい。
【００３４】上記ポリマー支持体は、サンドウイッチア
ッセイ類、競合バインディングアッセイ類、直接バイン
ディングアッセイ類及びＥＬＩＳＡを包含する各種のイ
ムノアッセイ方法及び分析物に用いてもよく、またそれ
らの方法は当該技術分野で既知である。従って分析物を
支持体に結合せしめることができるか、又好ましくは分
析物に特異的な免疫反応体を支持体に結合せしめる。分
析物は、薬剤類、ハプテン類、ビタミン類、ホルモン
類、毒素類、炭水化物類、タンパク質類及び当業者に容
易に明白である別の化合物類を包含する、抗体を引き寄
せられる多種多様な抗原性物質を包含する。
ッセイ類、競合バインディングアッセイ類、直接バイン
ディングアッセイ類及びＥＬＩＳＡを包含する各種のイ
ムノアッセイ方法及び分析物に用いてもよく、またそれ
らの方法は当該技術分野で既知である。従って分析物を
支持体に結合せしめることができるか、又好ましくは分
析物に特異的な免疫反応体を支持体に結合せしめる。分
析物は、薬剤類、ハプテン類、ビタミン類、ホルモン
類、毒素類、炭水化物類、タンパク質類及び当業者に容
易に明白である別の化合物類を包含する、抗体を引き寄
せられる多種多様な抗原性物質を包含する。
【００３５】支持体に共有結合せしめられた免疫反応体
の具体例としては、抗体、例えば、抗分析物抗体、非抗
体タンパク質、例えばプロテインＡ及び分析物自体が挙
げられる。
の具体例としては、抗体、例えば、抗分析物抗体、非抗
体タンパク質、例えばプロテインＡ及び分析物自体が挙
げられる。
【００３６】本発明の好ましい態様では、イムノアッセ
イは以下の工程を含んで成る。（ｉ）分析物を含有する
と疑われる水性被検体を、支持体に共有結合せしめられ
た抗分析物抗体を担持する支持体と接触せしめる工程、
（ii）工程（ｉ）の接触前に、同時に又は次いで、分析
物に特異的な検出可能に標識された抗体で分析物を標識
する工程、そして(iii) 抗分析物抗体と反応せしめて得
られた分析物の複合体を検出する工程。
イは以下の工程を含んで成る。（ｉ）分析物を含有する
と疑われる水性被検体を、支持体に共有結合せしめられ
た抗分析物抗体を担持する支持体と接触せしめる工程、
（ii）工程（ｉ）の接触前に、同時に又は次いで、分析
物に特異的な検出可能に標識された抗体で分析物を標識
する工程、そして(iii) 抗分析物抗体と反応せしめて得
られた分析物の複合体を検出する工程。
【００３７】検出可能に標識された抗体類としては、目
視的に又は分光光度計、放射計もしくは別の適当な装置
及び方法を用いて直接的又は間接的に検出できるものに
共有結合せしめられた部分又は別な方法で組み合わさっ
た部分を担持する抗体類が挙げられる。間接的検出は、
抗体上の所定部分を１回以上適当な試薬と反応せしめて
直接的に検出可能な生成物を得ることにより達成でき
る。
視的に又は分光光度計、放射計もしくは別の適当な装置
及び方法を用いて直接的又は間接的に検出できるものに
共有結合せしめられた部分又は別な方法で組み合わさっ
た部分を担持する抗体類が挙げられる。間接的検出は、
抗体上の所定部分を１回以上適当な試薬と反応せしめて
直接的に検出可能な生成物を得ることにより達成でき
る。
【００３８】有用な標識は周知であり、そしてそれらと
しては、酵素類、放射性同位体類及び特異的バインディ
ング物質類、例えば、ビオチン、アビジン、レクチン類
及び糖類が挙げられる。
しては、酵素類、放射性同位体類及び特異的バインディ
ング物質類、例えば、ビオチン、アビジン、レクチン類
及び糖類が挙げられる。
【００３９】支持体上の免疫複合体の検出は、標準検出
装置及び方法を用いて達成可能である。標識が酵素であ
る場合には、結合複合体は更に酵素の存在下で蛍光、比
色もしくは化学ルミネッセンスシグナルを提供するであ
ろう組成物と接触せしめられる。
装置及び方法を用いて達成可能である。標識が酵素であ
る場合には、結合複合体は更に酵素の存在下で蛍光、比
色もしくは化学ルミネッセンスシグナルを提供するであ
ろう組成物と接触せしめられる。
【００４０】本発明の好ましい態様では、ポリマー支持
体が、膜を保持するための水不溶性フレームもしくは構
造を有する水不溶性製品に配置又は取り付けられた多孔
質膜である。
体が、膜を保持するための水不溶性フレームもしくは構
造を有する水不溶性製品に配置又は取り付けられた多孔
質膜である。
【００４１】支持体ポリマー類の製造方法は以下に具体
的に説明される。以下の製造方法では、−（ＮＨＣＯ
Ｏ）−は用いたポリウレタンポリマー中のウレタン基を
表す。バイオマー (BIOMER，商標）ポリマーは次式で示
される市販ポリ（エチレンウレタンウレア）である。
的に説明される。以下の製造方法では、−（ＮＨＣＯ
Ｏ）−は用いたポリウレタンポリマー中のウレタン基を
表す。バイオマー (BIOMER，商標）ポリマーは次式で示
される市販ポリ（エチレンウレタンウレア）である。
【００４２】
【化５】
【００４３】ポリマーの分子量（Ｍn Ｗ）は約６０，０
００である。
００である。
【００４４】製造方法１ プレ活性化ポリエーテルウレタンの合成を下記３つの工
程で行った。
程で行った。
【００４５】１．ポリエーテルウレタンの機能化。ポリ
エーテルウレタン〔バイオマー (BIOMER，商標）、Ethi
con, Someville,NJ：３０ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルアセ
トアミド（ＤＭＡＣ）（５０mL）に溶解した。２−クロ
ロエチルイソシアネート（４mL）を得られた溶液に添加
した。反応混合物を３日間室温で放置し次いで水中へ沈
殿させた。沈殿後、ポリマーを濾取し、水で入念に洗浄
し、次いで減圧オーブン中で乾燥した。
エーテルウレタン〔バイオマー (BIOMER，商標）、Ethi
con, Someville,NJ：３０ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルアセ
トアミド（ＤＭＡＣ）（５０mL）に溶解した。２−クロ
ロエチルイソシアネート（４mL）を得られた溶液に添加
した。反応混合物を３日間室温で放置し次いで水中へ沈
殿させた。沈殿後、ポリマーを濾取し、水で入念に洗浄
し、次いで減圧オーブン中で乾燥した。
【００４６】ポリエーテルウレタンと２−クロロエチル
イソシアネートとの反応は、以下の等式により表される
ようなアロファネート生成物（Ｉ）を与えた。
イソシアネートとの反応は、以下の等式により表される
ようなアロファネート生成物（Ｉ）を与えた。
【００４７】
【化６】
【００４８】機能化ポリエーテルウレタン（Ｉ）の塩素
分析は、％Ｃｌ＝１．１２を示した。
分析は、％Ｃｌ＝１．１２を示した。
【００４９】２．立体活性エステルモノマー、６−メタ
クリルアミドカプロン酸のＮ−スクシンイミドエステル
（II）の合成。６−アミノカプロン酸（２６．２ｇ，
０．２モル）を水（２５mL）中水酸化ナトリウム（８．
０ｇ）の溶液に溶解した。トパノールＯＣ（TOPANOL Ｏ
Ｃ，商標）、４−メチル−２，６−tert−ブチルフェノ
ールを含んで成るＩＣＩ市販の界面活性剤、を添加し、
そして溶液を−１０℃まで冷却した。次いでジオキサン
（１５mL）中塩化メタクリロイル（２０．８ｇ，０．２
モル）の溶液を、水（２０mL）中水酸化ナトリウム
（８．０ｇ）の溶液と同時に１時間に亘って添加した。
後者の２つの溶液は、それらを添加する前に氷浴中で冷
却しておいた。添加完了後、反応混合物を更に２時間−
１０℃で撹拌した。次いで反応混合物を一晩冷蔵庫中で
放置した。
クリルアミドカプロン酸のＮ−スクシンイミドエステル
（II）の合成。６−アミノカプロン酸（２６．２ｇ，
０．２モル）を水（２５mL）中水酸化ナトリウム（８．
０ｇ）の溶液に溶解した。トパノールＯＣ（TOPANOL Ｏ
Ｃ，商標）、４−メチル−２，６−tert−ブチルフェノ
ールを含んで成るＩＣＩ市販の界面活性剤、を添加し、
そして溶液を−１０℃まで冷却した。次いでジオキサン
（１５mL）中塩化メタクリロイル（２０．８ｇ，０．２
モル）の溶液を、水（２０mL）中水酸化ナトリウム
（８．０ｇ）の溶液と同時に１時間に亘って添加した。
後者の２つの溶液は、それらを添加する前に氷浴中で冷
却しておいた。添加完了後、反応混合物を更に２時間−
１０℃で撹拌した。次いで反応混合物を一晩冷蔵庫中で
放置した。
【００５０】一晩放置後、反応混合物を希塩酸でpH４に
調整した。溶液をロータリーエバポレーターを用いて濃
縮し、そして残渣を酢酸エチルで抽出した。合わせた抽
出物を水で洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥し
た。溶液を濾過しそして溶剤をロータリーエバポレータ
ーで除去した。
調整した。溶液をロータリーエバポレーターを用いて濃
縮し、そして残渣を酢酸エチルで抽出した。合わせた抽
出物を水で洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥し
た。溶液を濾過しそして溶剤をロータリーエバポレータ
ーで除去した。
【００５１】酢酸エチル／石油エーテル（６０〜８０
℃）を（油状）残渣に添加した。すると、別個に油状層
及び曇った溶剤層が生じた。溶液を激しく振盪し、そし
て静置して曇った溶剤層を取り除き、そして保留した。
更なる酢酸エチル／石油エーテル（６０〜８０℃）を添
加しそして油状層がもはや認められなくなるまで上記操
作を引き続き繰り返した。合わせた抽出物を氷塩浴中で
冷却しそして引掻くことにより生成物を得た（収量：２
２．６ｇ，７０％）。
℃）を（油状）残渣に添加した。すると、別個に油状層
及び曇った溶剤層が生じた。溶液を激しく振盪し、そし
て静置して曇った溶剤層を取り除き、そして保留した。
更なる酢酸エチル／石油エーテル（６０〜８０℃）を添
加しそして油状層がもはや認められなくなるまで上記操
作を引き続き繰り返した。合わせた抽出物を氷塩浴中で
冷却しそして引掻くことにより生成物を得た（収量：２
２．６ｇ，７０％）。
【００５２】６−メタクリルアミドカプロン酸（１０
ｇ，０．０５モル）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド
（５．７５ｇ，０．０５モル）を、磁気撹拌機、エアー
コンデンサー（塩化カルシウムガードチューブ）及び滴
下漏斗を備えた３ツ口フラスコに入れた。ジクロロメタ
ン（５０mL）及びテトラヒドロフラン（１０mL）並びに
４−メチルアミノピリジン（４−ＤＭＡＰ）（０．１２
ｇ）を添加し、そして溶液を氷浴中で撹拌した。ジクロ
ロメタン（２０mL）中ジクロロヘキシルカルボジイミド
（ＤＣＣＩ）（１１．５ｇ）の溶液を滴下した。やがて
尿素が沈殿し、そして一晩反応を行った。
ｇ，０．０５モル）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド
（５．７５ｇ，０．０５モル）を、磁気撹拌機、エアー
コンデンサー（塩化カルシウムガードチューブ）及び滴
下漏斗を備えた３ツ口フラスコに入れた。ジクロロメタ
ン（５０mL）及びテトラヒドロフラン（１０mL）並びに
４−メチルアミノピリジン（４−ＤＭＡＰ）（０．１２
ｇ）を添加し、そして溶液を氷浴中で撹拌した。ジクロ
ロメタン（２０mL）中ジクロロヘキシルカルボジイミド
（ＤＣＣＩ）（１１．５ｇ）の溶液を滴下した。やがて
尿素が沈殿し、そして一晩反応を行った。
【００５３】固体（尿素）沈殿を濾取しそしてジクロロ
メタンで洗浄した。合わせた洗液及び濾液をロータリー
エバポレーターでストリッピングした。残留油状物をア
セトニトリルに溶解しそして溶液を冷蔵庫で２時間冷却
した。沈殿した少量の尿素を濾取し次いで溶剤を減圧下
で除去した。残留した油状物を酢酸エチルに溶解した。
氷塩浴中で放置すると固体生成物が沈殿し、そしてそれ
を濾過して乾燥した。
メタンで洗浄した。合わせた洗液及び濾液をロータリー
エバポレーターでストリッピングした。残留油状物をア
セトニトリルに溶解しそして溶液を冷蔵庫で２時間冷却
した。沈殿した少量の尿素を濾取し次いで溶剤を減圧下
で除去した。残留した油状物を酢酸エチルに溶解した。
氷塩浴中で放置すると固体生成物が沈殿し、そしてそれ
を濾過して乾燥した。
【００５４】分析的及び分光器データは、必要とされる
構造（II）と一致した。 収量：４．２９ｇ（２９％）；ｍｐ７７．５℃
構造（II）と一致した。 収量：４．２９ｇ（２９％）；ｍｐ７７．５℃
【００５５】
【化７】
【００５６】３．機能化ポリエーテルウレタン（Ｉ）へ
のモノマー（II）のグラフト化。機能化ポリエーテルウ
レタン（Ｉ）（７．５６ｇ）を純粋なＤＭＡＣ（６０m
L）に溶解した。次いでＤＭＡＣ（５mL）中モノマー（I
I）１．５６ｇの溶液を、ＤＭＡＣ（２mL）中Ｒｅ2(Ｃ
Ｏ)10 ０．０５３ｇの溶液と一緒にこれに添加した。次
いで反応混合物を減圧下で脱泡しそして密封した。 C.
H.Bamford in Reactivity Mechanism & Structure in P
olymer Chemistry ed.A.D.Jenkins & A.Ledwith, John
Wiley 1974, 第３章の教示に従って、室温で７時間光
化学的（λ＝３６５nm）にグラフト化を実施した。次い
でポリマー溶液を非常に乾燥したジエチルエーテル／酢
酸エチル（９：１）の混合物中へ沈殿せしめた。沈殿
後、ポリマー生成物を濾取しそしてジエチルエーテルで
洗浄し、減圧乾燥しそして重量を測定した。（Ｉ）上へ
の（II）のポリマーのグラフト化によりプレ活性化ポリ
エーテルウレタン(III) が生成したことに対応する、重
量増加は８．１４％であった。光化学的に開始されたグ
ラフト化反応は、以下の等式で表される。
のモノマー（II）のグラフト化。機能化ポリエーテルウ
レタン（Ｉ）（７．５６ｇ）を純粋なＤＭＡＣ（６０m
L）に溶解した。次いでＤＭＡＣ（５mL）中モノマー（I
I）１．５６ｇの溶液を、ＤＭＡＣ（２mL）中Ｒｅ2(Ｃ
Ｏ)10 ０．０５３ｇの溶液と一緒にこれに添加した。次
いで反応混合物を減圧下で脱泡しそして密封した。 C.
H.Bamford in Reactivity Mechanism & Structure in P
olymer Chemistry ed.A.D.Jenkins & A.Ledwith, John
Wiley 1974, 第３章の教示に従って、室温で７時間光
化学的（λ＝３６５nm）にグラフト化を実施した。次い
でポリマー溶液を非常に乾燥したジエチルエーテル／酢
酸エチル（９：１）の混合物中へ沈殿せしめた。沈殿
後、ポリマー生成物を濾取しそしてジエチルエーテルで
洗浄し、減圧乾燥しそして重量を測定した。（Ｉ）上へ
の（II）のポリマーのグラフト化によりプレ活性化ポリ
エーテルウレタン(III) が生成したことに対応する、重
量増加は８．１４％であった。光化学的に開始されたグ
ラフト化反応は、以下の等式で表される。
【００５７】
【化８】
【００５８】上記生成物を用いて、また機能化ポリマー
（Ｉ）はＮ−アクリルオキシスクシンイミドと反応して
別の活性化ポリマーを提供した。
（Ｉ）はＮ−アクリルオキシスクシンイミドと反応して
別の活性化ポリマーを提供した。
【００５９】プロテインの共有カプリング プレ活性化ポリマー(III) を大量のＤＭＡＣに溶解して
静電紡糸に適する濃度（１６ｗ／ｗ％）を得た。イギリ
ス特許第１，５３０，９９０号明細書に記載の方法に従
って溶液を最低湿度で紡糸すると、必要とされるシート
の繊維状プレ活性化ポリエーテルウレタンが生成した。
静電紡糸に適する濃度（１６ｗ／ｗ％）を得た。イギリ
ス特許第１，５３０，９９０号明細書に記載の方法に従
って溶液を最低湿度で紡糸すると、必要とされるシート
の繊維状プレ活性化ポリエーテルウレタンが生成した。
【００６０】そのシートを２×１cmの大きさのストリッ
プに切断した。ストリップのサンプルを放射性同位体で
標識したプロテインＡの溶液（１．０mL、プロテインＡ
１mg／０．１モル炭酸水素ナトリウム緩衝液 pH８，
１mL）に浸漬せしめた。ストリップを２時間室温でその
まま放置した。次いでストリップを取り除き、最初の過
剰の緩衝液で洗浄し次いでイオン交換水で洗浄しその後
濾紙上で吸取乾燥した。
プに切断した。ストリップのサンプルを放射性同位体で
標識したプロテインＡの溶液（１．０mL、プロテインＡ
１mg／０．１モル炭酸水素ナトリウム緩衝液 pH８，
１mL）に浸漬せしめた。ストリップを２時間室温でその
まま放置した。次いでストリップを取り除き、最初の過
剰の緩衝液で洗浄し次いでイオン交換水で洗浄しその後
濾紙上で吸取乾燥した。
【００６１】これらのストリップを硫酸ドデシルナトリ
ウム（ＳＤＳ）の溶液（５mL，２重量％）中で１時間室
温で放置した。次いでそれらをイオン交換水で洗浄しそ
して乾燥した。次いで各ストリップを１分間シンチレー
ションカウンターでカウントし、そして参照と比較して
ポリエーテルウレタンに共有結合したプロテインＡの量
を求めた。
ウム（ＳＤＳ）の溶液（５mL，２重量％）中で１時間室
温で放置した。次いでそれらをイオン交換水で洗浄しそ
して乾燥した。次いで各ストリップを１分間シンチレー
ションカウンターでカウントし、そして参照と比較して
ポリエーテルウレタンに共有結合したプロテインＡの量
を求めた。
【００６２】結果は、プロテインＡが約３４mg／ｍ2 の
レベルでポリマーに首尾よくカプリングしたことを示し
た。プロテインＡの代わりに放射性同位体で標識したヒ
トＩｇＧ（Sigma Chemical, １mg／mL）を用いて上記方
法を繰り返した。結果は、またヒトＩｇＧも約３４mg／
ｍ2 のレベルでポリマーに首尾よくカプリングしたこと
を示した。
レベルでポリマーに首尾よくカプリングしたことを示し
た。プロテインＡの代わりに放射性同位体で標識したヒ
トＩｇＧ（Sigma Chemical, １mg／mL）を用いて上記方
法を繰り返した。結果は、またヒトＩｇＧも約３４mg／
ｍ2 のレベルでポリマーに首尾よくカプリングしたこと
を示した。
【００６３】ポリマーにカプリングしたプロテインＡの
バインディング活性を以下のように評価した。プレ活性
化ポリエーテルウレタンの４つのストリップ（各々２×
１cm）を、カプリング緩衝液、０．１モル炭酸水素ナト
リウム、pH８、へのプロテインＡの溶液（２．５mL，
１．０mg／mL）に添加した。ストリップを２時間室温で
インキュベーションし、カプリング緩衝液で洗浄し続い
て水で洗浄し、そして濾紙上で吸取乾燥した。
バインディング活性を以下のように評価した。プレ活性
化ポリエーテルウレタンの４つのストリップ（各々２×
１cm）を、カプリング緩衝液、０．１モル炭酸水素ナト
リウム、pH８、へのプロテインＡの溶液（２．５mL，
１．０mg／mL）に添加した。ストリップを２時間室温で
インキュベーションし、カプリング緩衝液で洗浄し続い
て水で洗浄し、そして濾紙上で吸取乾燥した。
【００６４】次いでストリップをブロッキング試薬（１
モル エタノールアミン pH８，５mL）に添加しそして
室温で１時間放置した。ストリップを水で洗浄しそして
０．１５モルＰＢＳ中約４℃で保存した。
モル エタノールアミン pH８，５mL）に添加しそして
室温で１時間放置した。ストリップを水で洗浄しそして
０．１５モルＰＢＳ中約４℃で保存した。
【００６５】プロテインＡをカプリングしたポリエーテ
ルウレタンのストリップを、放射性同位体で標識したヒ
トＩｇＧの溶液（１．０mg／mL，１mL）中に室温で１時
間放置した。ストリップを取り出して水で洗浄し、そし
て０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界
面活性剤（５mL）を含有する０．１５モルＰＢＳ中に５
分間放置して、非特異的結合プロテインを除去した。ス
トリップを水で再洗浄し、そして濾紙上で吸取乾燥し
た。各ストリップを１分間シンチレーションカウンター
を用いてカウントすると特異的バインディングの測度が
得られた。
ルウレタンのストリップを、放射性同位体で標識したヒ
トＩｇＧの溶液（１．０mg／mL，１mL）中に室温で１時
間放置した。ストリップを取り出して水で洗浄し、そし
て０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界
面活性剤（５mL）を含有する０．１５モルＰＢＳ中に５
分間放置して、非特異的結合プロテインを除去した。ス
トリップを水で再洗浄し、そして濾紙上で吸取乾燥し
た。各ストリップを１分間シンチレーションカウンター
を用いてカウントすると特異的バインディングの測度が
得られた。
【００６６】（未標識の）プロテインＡをカプリングし
たポリエーテルウレタンの別のストリップを、１時間
０．１５モル（Ｍ）ＰＢＳ／トゥイーン(TWEEN, 商標)
２０非イオン性界面活性剤（上記）で調整された放射性
同位体で標識されたプロテインＡの溶液中でインキュベ
ーションして、プロテインの非特異的バインディングの
測度を提供した。
たポリエーテルウレタンの別のストリップを、１時間
０．１５モル（Ｍ）ＰＢＳ／トゥイーン(TWEEN, 商標)
２０非イオン性界面活性剤（上記）で調整された放射性
同位体で標識されたプロテインＡの溶液中でインキュベ
ーションして、プロテインの非特異的バインディングの
測度を提供した。
【００６７】既知量の放射性同位体で標識したヒトＩｇ
Ｇ（１mg／mL）をポリエーテルウレタンに吸着せしめる
ことにより、参照ストリップを製造し、そしてカウント
した。結果は、プロテインＡをカプリングしたポリエー
テルウレタンに対するヒトＩｇＧの特異的バインディン
グが約９２mg／ｍ2 であったことを示した。同一サンプ
ルに対するプロテインの非特異的バインディングは約１
８mg／ｍ2 であることが見い出された。
Ｇ（１mg／mL）をポリエーテルウレタンに吸着せしめる
ことにより、参照ストリップを製造し、そしてカウント
した。結果は、プロテインＡをカプリングしたポリエー
テルウレタンに対するヒトＩｇＧの特異的バインディン
グが約９２mg／ｍ2 であったことを示した。同一サンプ
ルに対するプロテインの非特異的バインディングは約１
８mg／ｍ2 であることが見い出された。
【００６８】製造方法２ 静電紡糸ポリエーテルウレタン（バイオマー、BIOMER，
商標）チューブを以下のように改質した。
商標）チューブを以下のように改質した。
【００６９】１．ポリエーテルウレタンの機能化 繊維状チューブを、トリクロロアセチルイソシアネート
（３ｇ，０．０１６モル）とヘキサン１５０mL中で２４
時間反応せしめた。その後、チューブを水で非常に入念
に洗浄し次いで水中に２日間浸漬せしめ、そして減圧乾
燥した。チューブは塩素試験陽性を示した。ポリエーテ
ルウレタン及びトリクロロアセチルイソシアネートの全
反応を、以下の等式に描いた。
（３ｇ，０．０１６モル）とヘキサン１５０mL中で２４
時間反応せしめた。その後、チューブを水で非常に入念
に洗浄し次いで水中に２日間浸漬せしめ、そして減圧乾
燥した。チューブは塩素試験陽性を示した。ポリエーテ
ルウレタン及びトリクロロアセチルイソシアネートの全
反応を、以下の等式に描いた。
【００７０】
【化９】
【００７１】２．Ｎ−アクリロイルオキシスクシンイミ
ドのグラフト化 機能化ポリエーテルウレタン（IV）の繊維状チューブを
反応ガマに入れ、そしてドライ酢酸エチル２５mL中Ｒｅ
2(ＣＯ)10 （０．０９５ｇ，０．０００１４モル）及び
Ｎ−アクリロイルオキシスクシンイミド（０．７５ｇ，
０．００４４モル）の溶液を添加した。反応混合物を減
圧下で脱泡しそして反応ガマを密封した。反応溶液をλ
＝３６５nm、周囲温度で２時間光分解した。次いで連続
的に回転させながら２４時間６０ワット（watt) のラン
プの下で照射を続けた。次いでチューブをドライ酢酸エ
チルで徹底的に洗浄しそして減圧乾燥した。グラフト化
ポリエーテルウレタン（Ｖ）の化学式を以下に示す。
ドのグラフト化 機能化ポリエーテルウレタン（IV）の繊維状チューブを
反応ガマに入れ、そしてドライ酢酸エチル２５mL中Ｒｅ
2(ＣＯ)10 （０．０９５ｇ，０．０００１４モル）及び
Ｎ−アクリロイルオキシスクシンイミド（０．７５ｇ，
０．００４４モル）の溶液を添加した。反応混合物を減
圧下で脱泡しそして反応ガマを密封した。反応溶液をλ
＝３６５nm、周囲温度で２時間光分解した。次いで連続
的に回転させながら２４時間６０ワット（watt) のラン
プの下で照射を続けた。次いでチューブをドライ酢酸エ
チルで徹底的に洗浄しそして減圧乾燥した。グラフト化
ポリエーテルウレタン（Ｖ）の化学式を以下に示す。
【００７２】
【化１０】
【００７３】製造方法３ ポリエーテルウレタン（バイオマー、BIOMER，商標）を
ＤＭＡＣに溶解して８ｗ／ｗ％溶液を生成した。溶液を
ガラス表面上に流してフィルムを生成した。溶剤の蒸発
後、フィルムを水中に浸漬しそしてガラス表面から剥離
した。フィルムを水で十分に洗浄しそして乾燥した。
ＤＭＡＣに溶解して８ｗ／ｗ％溶液を生成した。溶液を
ガラス表面上に流してフィルムを生成した。溶剤の蒸発
後、フィルムを水中に浸漬しそしてガラス表面から剥離
した。フィルムを水で十分に洗浄しそして乾燥した。
【００７４】ポリエーテルウレタンのフィルムを、製造
方法２の工程１及び２で繊維状チューブについて記載さ
れた方法と同一方法で処理した。
方法２の工程１及び２で繊維状チューブについて記載さ
れた方法と同一方法で処理した。
【００７５】製造方法４ ポリエーテルウレタン（バイオマー、BIOMER，商標）の
サンプルを、下記方法により静電紡糸後、活性化した。
静電紡糸ポリマーのシートをヘキサン中に１時間浸漬
し、その後ヘキサメチレンジイソシアネート１０ｇ（過
剰）を添加し、そして反応体を室温で４日間放置した。
その後、シートを取り出しそしてヘキサンで入念に洗浄
し、そして減圧乾燥した。反応は以下のように具体的に
示される。
サンプルを、下記方法により静電紡糸後、活性化した。
静電紡糸ポリマーのシートをヘキサン中に１時間浸漬
し、その後ヘキサメチレンジイソシアネート１０ｇ（過
剰）を添加し、そして反応体を室温で４日間放置した。
その後、シートを取り出しそしてヘキサンで入念に洗浄
し、そして減圧乾燥した。反応は以下のように具体的に
示される。
【００７６】
【化１１】
【００７７】ポリマー（VI）のシートを、ドライアセト
ニトリル４０mL中Ｎ−〔３−（４−ヒドロキシフェニ
ル）プロピオニロイル〕スクシンイミド(Fluka) ０．４
ｇの溶液が入ったフラスコに入れた。フラスコをホイル
で包み、そして室温で５日間撹拌した。その後シートを
取り出し、そして過剰のアセトニトリルで入念に洗浄
し、そして減圧乾燥した。活性化ポリマーを以下の等式
に従って生成した。
ニトリル４０mL中Ｎ−〔３−（４−ヒドロキシフェニ
ル）プロピオニロイル〕スクシンイミド(Fluka) ０．４
ｇの溶液が入ったフラスコに入れた。フラスコをホイル
で包み、そして室温で５日間撹拌した。その後シートを
取り出し、そして過剰のアセトニトリルで入念に洗浄
し、そして減圧乾燥した。活性化ポリマーを以下の等式
に従って生成した。
【００７８】
【化１２】
【００７９】また、ヘキサメチレンジイソシアネートの
代わりに２，４−トリレンジイソシアネートを用いて上
記方法を実施すると活性化ポリマーが得られた。
代わりに２，４−トリレンジイソシアネートを用いて上
記方法を実施すると活性化ポリマーが得られた。
【００８０】プロテインの共有カプリング 放射性同位体で標識したプロテインＡの溶液を、０．１
モル 炭酸水素ナトリウム pH８ １mL当りプロテイン
Ａ １mgを含有するように調整した。得られた溶液のサ
ンプル（２mL）を、ポリマー(VII) のディスク（直径＝
２．５４cm）を含有するミリポア(Millipore) フィルタ
ーに、シリンジポンプを用いて流速１mL／時で通過せし
めた。２時間後、ディスクを取り出し、そして０．１モ
ル 炭酸水素ナトリウムで洗浄しそしてイオン交換水で
洗浄した。ディスクを１時間硫酸ドデシルナトリウム
（ＳＤＳ）（２％）１０mL中に放置し、イオン交換水で
洗浄しそして吸取乾燥した。次いでディスクを１分間バ
イアル中でシンチレーションカウンターを用いてカウン
トした。カウント(CPM) の結果、ポリマーに共有結合し
たプロテインＡの量及びまた対照として非活性化ポリマ
ー（バイオマー、BIOMER，商標）上に物理的に吸着した
プロテインＡの量、を、下記第１表に示す。
モル 炭酸水素ナトリウム pH８ １mL当りプロテイン
Ａ １mgを含有するように調整した。得られた溶液のサ
ンプル（２mL）を、ポリマー(VII) のディスク（直径＝
２．５４cm）を含有するミリポア(Millipore) フィルタ
ーに、シリンジポンプを用いて流速１mL／時で通過せし
めた。２時間後、ディスクを取り出し、そして０．１モ
ル 炭酸水素ナトリウムで洗浄しそしてイオン交換水で
洗浄した。ディスクを１時間硫酸ドデシルナトリウム
（ＳＤＳ）（２％）１０mL中に放置し、イオン交換水で
洗浄しそして吸取乾燥した。次いでディスクを１分間バ
イアル中でシンチレーションカウンターを用いてカウン
トした。カウント(CPM) の結果、ポリマーに共有結合し
たプロテインＡの量及びまた対照として非活性化ポリマ
ー（バイオマー、BIOMER，商標）上に物理的に吸着した
プロテインＡの量、を、下記第１表に示す。
【００８１】
【表１】
【００８２】製造方法５ ポリエーテルウレタン（バイオマー、BIOMER，商標）の
サンプルを下記方法により静電紡糸後活性化した。静電
紡糸ポリマーをイソシアネートエチルメタクリレートモ
ノマー（２０ｖ／ｖ％ヘキサン溶液）と室温で５日間反
応せしめた。その後、機能化ポリエーテルウレタンをヘ
キサン、メタノール、水そしてメタノールでそれぞれ洗
浄した。反応は以下のように示される。
サンプルを下記方法により静電紡糸後活性化した。静電
紡糸ポリマーをイソシアネートエチルメタクリレートモ
ノマー（２０ｖ／ｖ％ヘキサン溶液）と室温で５日間反
応せしめた。その後、機能化ポリエーテルウレタンをヘ
キサン、メタノール、水そしてメタノールでそれぞれ洗
浄した。反応は以下のように示される。
【００８３】
【化１３】
【００８４】マクロマー (VIII) （１．９ｇ）の被検体
をドライアセトニトリル１０mL中Ｎ−アクリロイルオキ
シスクシンイミド０．５ｇ及びアセトニトリル１０mL中
に溶解したアゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）
０．２ｇの混合物を入れた反応ガマに入れた。脱泡後、
重合を６０℃で４時間実施した。マクロマーシートを取
り出しそしてアセトニトリルで洗浄しそして減圧乾燥し
た。得られた生成物（IX) は、以下の反応に従って製造
した。
をドライアセトニトリル１０mL中Ｎ−アクリロイルオキ
シスクシンイミド０．５ｇ及びアセトニトリル１０mL中
に溶解したアゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）
０．２ｇの混合物を入れた反応ガマに入れた。脱泡後、
重合を６０℃で４時間実施した。マクロマーシートを取
り出しそしてアセトニトリルで洗浄しそして減圧乾燥し
た。得られた生成物（IX) は、以下の反応に従って製造
した。
【００８５】
【化１４】
【００８６】プロテインの共有結合 製造方法４で提供された方法に従って、プロテインＡを
ポリマー（IX) のサンプルに結合せしめた。結果を下記
第２表に示す。
ポリマー（IX) のサンプルに結合せしめた。結果を下記
第２表に示す。
【００８７】
【表２】
【００８８】製造方法６ ポリエーテルウレタン（バイオマー、BIOMER，商標）の
サンプルを下記方法により静電紡糸後活性化した。静電
紡糸ポリエーテルウレタンシートを２−クロロエチルイ
ソシアネート（ヘキサン２０mL中１ｇ）と室温で２４時
間反応せしめた。その後、シートをヘキサン、メタノー
ル、水そしてメタノールでそれぞれ洗浄しそして減圧乾
燥した。グラフトコポリマー（Ｘ）をＲｅ2(ＣＯ)10 の
存在下でクロロエチルイソシアネート化ポリエーテルウ
レタンにＮ−アクリロイルオキシスクシンイミドモノマ
ー（アセトニトリル１０mL中０．５ｇ）をグラフトせし
めることにより合成した。反応は以下のように示され
る。
サンプルを下記方法により静電紡糸後活性化した。静電
紡糸ポリエーテルウレタンシートを２−クロロエチルイ
ソシアネート（ヘキサン２０mL中１ｇ）と室温で２４時
間反応せしめた。その後、シートをヘキサン、メタノー
ル、水そしてメタノールでそれぞれ洗浄しそして減圧乾
燥した。グラフトコポリマー（Ｘ）をＲｅ2(ＣＯ)10 の
存在下でクロロエチルイソシアネート化ポリエーテルウ
レタンにＮ−アクリロイルオキシスクシンイミドモノマ
ー（アセトニトリル１０mL中０．５ｇ）をグラフトせし
めることにより合成した。反応は以下のように示され
る。
【００８９】
【化１５】
【００９０】プロテインの共有結合 製造方法４で提供された方法に従って、プロテインＡを
ポリマー（Ｘ）のサンプルに結合せしめた。結果を下記
第３表に示す。
ポリマー（Ｘ）のサンプルに結合せしめた。結果を下記
第３表に示す。
【００９１】
【表３】
【００９２】製造方法７〜１７ 合成 静電紡糸バイオマー（BIOMER，商標）ポリマーシートの
２つのサンプル（各々２ｇ）を、２つの反応ガマへ入れ
た。第一のものを、石油エーテル（b.p.６０〜８０℃）
への３０％ヘキサメチレンジイソシアネートと４０℃で
反応せしめ、そして第二のものを大量のトリレン２，４
−ジイソシアネートと室温で反応せしめた。これらのサ
ンプルの反応時間は５日間であった。その後、２つのサ
ンプルを石油エーテルで入念に洗浄し、そして減圧乾燥
した。
２つのサンプル（各々２ｇ）を、２つの反応ガマへ入れ
た。第一のものを、石油エーテル（b.p.６０〜８０℃）
への３０％ヘキサメチレンジイソシアネートと４０℃で
反応せしめ、そして第二のものを大量のトリレン２，４
−ジイソシアネートと室温で反応せしめた。これらのサ
ンプルの反応時間は５日間であった。その後、２つのサ
ンプルを石油エーテルで入念に洗浄し、そして減圧乾燥
した。
【００９３】各イソシアネート化バイオマー（BIOMER，
商標）ポリマーサンプルを、大量のエタノールアミン
（２５mL）と１７時間室温で反応せしめると、ヒドロキ
シレート化ポリマー類が得られた。
商標）ポリマーサンプルを、大量のエタノールアミン
（２５mL）と１７時間室温で反応せしめると、ヒドロキ
シレート化ポリマー類が得られた。
【００９４】ヘキサメチレンジイソシアネートでイソシ
アネート化されたヒドロキシレート化バイオマー（BIOM
ER，商標）のサンプル（１ｇ）１つを、トリエチルアミ
ン（０．２mL）の存在下ドライアセトニトリル１０mL中
に溶解したＦＭＰ ０．５ｇ（１．７ミリモル）と反応
せしめると、本発明の活性化ポリマーが得られた（製造
方法７）。反応は、室温で２４時間実施した。その後、
サンプルをドライアセトニトリルで洗浄しそして減圧乾
燥した。
アネート化されたヒドロキシレート化バイオマー（BIOM
ER，商標）のサンプル（１ｇ）１つを、トリエチルアミ
ン（０．２mL）の存在下ドライアセトニトリル１０mL中
に溶解したＦＭＰ ０．５ｇ（１．７ミリモル）と反応
せしめると、本発明の活性化ポリマーが得られた（製造
方法７）。反応は、室温で２４時間実施した。その後、
サンプルをドライアセトニトリルで洗浄しそして減圧乾
燥した。
【００９５】同じヒドロキシレート化バイオマー（BIOM
ER，商標）ポリマーの別のサンプル（１ｇ）を、アセト
ニトリルに溶解したＣＤＩ（０．５ｇ，３ミリモル）と
反応せしめると、本発明の活性化ポリマーが得られた
（製造方法８）。反応は室温で２４時間実施した。その
後、サンプルをドライアセトニトリルで洗浄しそして減
圧乾燥した。
ER，商標）ポリマーの別のサンプル（１ｇ）を、アセト
ニトリルに溶解したＣＤＩ（０．５ｇ，３ミリモル）と
反応せしめると、本発明の活性化ポリマーが得られた
（製造方法８）。反応は室温で２４時間実施した。その
後、サンプルをドライアセトニトリルで洗浄しそして減
圧乾燥した。
【００９６】トリレン２，４−ジイソシアネートでイソ
シアネート化されたヒドロキシレート化バイオマー（BI
OMER，商標）の２つのサンプルの活性化について、上記
方法と同様の方法を繰り返した。サンプルをＦＭＰで活
性化すると本発明の活性化ポリマーが得られた（製造方
法９）。同様に、サンプルをＣＤＩで活性化すると本発
明の活性化ポリマーが得られた（製造方法１０）。
シアネート化されたヒドロキシレート化バイオマー（BI
OMER，商標）の２つのサンプルの活性化について、上記
方法と同様の方法を繰り返した。サンプルをＦＭＰで活
性化すると本発明の活性化ポリマーが得られた（製造方
法９）。同様に、サンプルをＣＤＩで活性化すると本発
明の活性化ポリマーが得られた（製造方法１０）。
【００９７】上記方法に従ってヘキサメチレンジイソシ
アネート及び２，４−トリレンジイソシアネートでそれ
ぞれイソシアネート化された別のポリウレタンサンプル
をヒドロキシル状態に変換し、そしてＣＤＩで活性化し
た。より詳細には、ヘキサメチレンジイソシアネートで
イソシアネート化されたポリマーサンプルを、６−アミ
ノ−１−ヘキサノール（製造方法１１）及びグルカミン
（製造方法１４）との反応によりヒドロキシル状態に変
換せしめた。２，４−トリレンジイソシアネートでイソ
シアネート化されたポリマーサンプルは、６−アミノ−
１−ヘキサノール（製造方法１２）、ポリ（エチレング
リコール）（分子量４０００）（製造方法１３）及びグ
ルカミン（製造方法１５）との反応により、ヒドロキシ
ル状態に変換した。
アネート及び２，４−トリレンジイソシアネートでそれ
ぞれイソシアネート化された別のポリウレタンサンプル
をヒドロキシル状態に変換し、そしてＣＤＩで活性化し
た。より詳細には、ヘキサメチレンジイソシアネートで
イソシアネート化されたポリマーサンプルを、６−アミ
ノ−１−ヘキサノール（製造方法１１）及びグルカミン
（製造方法１４）との反応によりヒドロキシル状態に変
換せしめた。２，４−トリレンジイソシアネートでイソ
シアネート化されたポリマーサンプルは、６−アミノ−
１−ヘキサノール（製造方法１２）、ポリ（エチレング
リコール）（分子量４０００）（製造方法１３）及びグ
ルカミン（製造方法１５）との反応により、ヒドロキシ
ル状態に変換した。
【００９８】カルボキシレート化ポリマー類は、ヘキサ
メチレンジイソシアネート及び２，４−トリレンジイソ
シアネートでそれぞれイソシアネート化されたポリウレ
タンサンプルより製造した。これらのイソシアネート化
ポリマーサンプルを６−アミノカプロン酸と反応せし
め、そして得られたカルボキシレート化ポリマー類をＣ
ＤＩを用いて活性化した（それぞれ製造方法１６及び１
７）。
メチレンジイソシアネート及び２，４−トリレンジイソ
シアネートでそれぞれイソシアネート化されたポリウレ
タンサンプルより製造した。これらのイソシアネート化
ポリマーサンプルを６−アミノカプロン酸と反応せし
め、そして得られたカルボキシレート化ポリマー類をＣ
ＤＩを用いて活性化した（それぞれ製造方法１６及び１
７）。
【００９９】活性化バイオマー（BIOMER，商標）ポリマ
ーへのプロテインＡのカプリング 製造方法７〜１７の各ポリマーのディスク（直径＝２．
５４cm）をプロテインＡ溶液で試験した。各ディスクを
ミリポア(Millipore) フィルターホルダーに設置しそし
て 125Ｉで標識したプロテインＡ（１mg／mL溶液、０．
１モル 炭酸水素ナトリウム pH８中プロテインＡ(Sig
ma) ２０mgで希釈したプロテインＡ 125Ｉ（Amersham,
１０mCi ）より調整した）３mLを、シリンジポンプを用
いて流速１mL／時でディスクを通過せしめた。３時間
後、各サンプルを０．１モル 炭酸水素ナトリウムで十
分に洗浄し、続いてイオン交換水で洗浄し、次いでＳＤ
Ｓ（２％）１０mL中に１時間放置した。次いで各サンプ
ルをイオン交換水で洗浄し、吸取乾燥しそして１分間、
オプチフェーズ・シンチラント(Optiphase scintillan
t) ８mLを含有するバイアル中でカウントした。カウン
トの結果(cpm) 及び活性化支持体類に共有結合したプロ
テインＡの量と共に対照を下記第４表に示す。
ーへのプロテインＡのカプリング 製造方法７〜１７の各ポリマーのディスク（直径＝２．
５４cm）をプロテインＡ溶液で試験した。各ディスクを
ミリポア(Millipore) フィルターホルダーに設置しそし
て 125Ｉで標識したプロテインＡ（１mg／mL溶液、０．
１モル 炭酸水素ナトリウム pH８中プロテインＡ(Sig
ma) ２０mgで希釈したプロテインＡ 125Ｉ（Amersham,
１０mCi ）より調整した）３mLを、シリンジポンプを用
いて流速１mL／時でディスクを通過せしめた。３時間
後、各サンプルを０．１モル 炭酸水素ナトリウムで十
分に洗浄し、続いてイオン交換水で洗浄し、次いでＳＤ
Ｓ（２％）１０mL中に１時間放置した。次いで各サンプ
ルをイオン交換水で洗浄し、吸取乾燥しそして１分間、
オプチフェーズ・シンチラント(Optiphase scintillan
t) ８mLを含有するバイアル中でカウントした。カウン
トの結果(cpm) 及び活性化支持体類に共有結合したプロ
テインＡの量と共に対照を下記第４表に示す。
【０１００】
【表４】
【０１０１】製造方法１８ プロテインＡカプリング 上記ポリマーVII 及び製造方法８のポリマーの３つのデ
ィスク（直径＝２．５４cm）を、各々ミリポア(Millipo
re) フィルターホルダーに設置し、そして０．１モル
炭酸水素ナトリウム（pH８）中プロテインＡ（１mg／mL
溶液）５mLを、シリンジポンプを用いて流速１mL／時で
通過せしめた。５時間後、サンプルを０．１モル 炭酸
水素ナトリウム、続いて水で洗浄し、そして濾紙上で吸
取乾燥した。次いでサンプルをブロッキング試薬（エタ
ノールアミン；pH８；１０mL）と反応せしめ、そして１
時間室温で放置した。サンプルを水で洗浄しそしてＰＢ
Ｓ中４℃で保存した。対照として未反応バイオマー（BI
OMER，商標）ポリマーを用いて同様の方法で実施した。
ィスク（直径＝２．５４cm）を、各々ミリポア(Millipo
re) フィルターホルダーに設置し、そして０．１モル
炭酸水素ナトリウム（pH８）中プロテインＡ（１mg／mL
溶液）５mLを、シリンジポンプを用いて流速１mL／時で
通過せしめた。５時間後、サンプルを０．１モル 炭酸
水素ナトリウム、続いて水で洗浄し、そして濾紙上で吸
取乾燥した。次いでサンプルをブロッキング試薬（エタ
ノールアミン；pH８；１０mL）と反応せしめ、そして１
時間室温で放置した。サンプルを水で洗浄しそしてＰＢ
Ｓ中４℃で保存した。対照として未反応バイオマー（BI
OMER，商標）ポリマーを用いて同様の方法で実施した。
【０１０２】ＩｇＧバインディング プロテインＡ／ポリマーVII 及びプロテインＡ／製造方
法８のポリマーの各サンプルにつき３つのディスクを、
ミリポア(Millipore) フィルターホルダーに設置し、そ
して０．１５モルＰＢＳ（pH７）中放射性同位体で標識
された(125Ｉで標識されたヒトＩｇＧの溶液（２．８mg
／mL，５mL）を流速１mL／時で通過せしめた。５時間
後、ディスクを取り出し、水で洗浄し、そして０．２％
トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤を
含有する０．１５モルＰＢＳ中に１時間置いて、非特異
的結合プロテインを除去した。ディスクを水で洗浄し、
そして濾紙で吸取乾燥した。各ディスクを１分間オプチ
フェーズ・シンチラント(Optiphase scintillant) ８mL
中でカウントした。カウントの結果(cpm) 及びプロテイ
ンＡ／ポリマー支持体類に結合したＩｇＧの量を対照に
ついての結果と共に下記第５表に示す。
法８のポリマーの各サンプルにつき３つのディスクを、
ミリポア(Millipore) フィルターホルダーに設置し、そ
して０．１５モルＰＢＳ（pH７）中放射性同位体で標識
された(125Ｉで標識されたヒトＩｇＧの溶液（２．８mg
／mL，５mL）を流速１mL／時で通過せしめた。５時間
後、ディスクを取り出し、水で洗浄し、そして０．２％
トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤を
含有する０．１５モルＰＢＳ中に１時間置いて、非特異
的結合プロテインを除去した。ディスクを水で洗浄し、
そして濾紙で吸取乾燥した。各ディスクを１分間オプチ
フェーズ・シンチラント(Optiphase scintillant) ８mL
中でカウントした。カウントの結果(cpm) 及びプロテイ
ンＡ／ポリマー支持体類に結合したＩｇＧの量を対照に
ついての結果と共に下記第５表に示す。
【０１０３】
【表５】
【０１０４】ＩｇＧカプリング ＩｇＧを、ポリマーVII 及び製造方法８のポリマーのサ
ンプルに直接カプリングせしめた。この場合、これらの
サンプル各々につき３つのディスクを２つのミリポア(M
illipore) フィルターホルダーに設置し、そして標識し
たＩｇＧ(125Ｉ）のＰＢＳ溶液（２mg／mL，５mL）を流
速１mL／時で通過せしめた。その後、ディスクを取り出
して水で洗浄し、そしてＳＤＳ（２％）１０mL中に１時
間置いた。次いで各ディスクを水で洗浄しそして１分間
オプチフェーズ・シンチラント(Optiphase scintillan
t) ８mLを含有するバイアル中でカウントした。支持体
類へのＩｇＧ結合の結果を下記第６表に示す。
ンプルに直接カプリングせしめた。この場合、これらの
サンプル各々につき３つのディスクを２つのミリポア(M
illipore) フィルターホルダーに設置し、そして標識し
たＩｇＧ(125Ｉ）のＰＢＳ溶液（２mg／mL，５mL）を流
速１mL／時で通過せしめた。その後、ディスクを取り出
して水で洗浄し、そしてＳＤＳ（２％）１０mL中に１時
間置いた。次いで各ディスクを水で洗浄しそして１分間
オプチフェーズ・シンチラント(Optiphase scintillan
t) ８mLを含有するバイアル中でカウントした。支持体
類へのＩｇＧ結合の結果を下記第６表に示す。
【０１０５】
【表６】
【０１０６】
【実施例】本発明に従うイムノアッセイ方法の具体例は
以下の通りである。これらの例は、本発明の範囲を限定
するものではなく、具体的な用途に関して提供される。
本明細書で用いられるすべての材料は、市販されていた
か又は本明細書に記載されるもしくは当業者に容易に既
知である方法及び材料を用いて製造された。
以下の通りである。これらの例は、本発明の範囲を限定
するものではなく、具体的な用途に関して提供される。
本明細書で用いられるすべての材料は、市販されていた
か又は本明細書に記載されるもしくは当業者に容易に既
知である方法及び材料を用いて製造された。
【０１０７】例１ ｉ）活性化 ５つのバイオマー（BIOMER，商標）膜のディスクを、４
０％ヘキサメチレンジイソシアネートのヘキサン溶液と
２４時間４０℃で反応せしめた。得られたイソシアネー
ト化膜を非常に入念にドライアセトニトリルで洗浄しそ
して減圧乾燥し、その後ＩｇＧカプリングに用いた。
０％ヘキサメチレンジイソシアネートのヘキサン溶液と
２４時間４０℃で反応せしめた。得られたイソシアネー
ト化膜を非常に入念にドライアセトニトリルで洗浄しそ
して減圧乾燥し、その後ＩｇＧカプリングに用いた。
【０１０８】ii）潅流によるＩｇＧのカプリング ヒトＩｇＧ（Ｉ−１２５）、（４mL、カプリング緩衝液
pH８．４中の濃度１mg／mL）を、２時間以内に２回各デ
ィスクに通過せしめた。その後、ディスクをカプリング
緩衝液続いて０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標) 非イオ
ン性界面活性剤のＰＢＳ溶液で十分に洗浄し、その後カ
ウントした。カプリングしたＩｇＧの重量を第７表に示
す。
pH８．４中の濃度１mg／mL）を、２時間以内に２回各デ
ィスクに通過せしめた。その後、ディスクをカプリング
緩衝液続いて０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標) 非イオ
ン性界面活性剤のＰＢＳ溶液で十分に洗浄し、その後カ
ウントした。カプリングしたＩｇＧの重量を第７表に示
す。
【０１０９】
【表７】
【０１１０】iii) エンザイム・リンクト・イムノアッ
セイ ヒトＩｇＧ（未標識）を、（ii）に記載の方法により活
性化膜のサンプルにカプリングせしめた。残りのイソシ
アネート基を、１モル重炭酸ナトリウムへのエタノール
アミンの１％溶液で洗浄することによりブロックした。
膜を最終的にＰＢＳで洗浄し、そして濾紙で吸取ること
により乾燥した。次いでそれをディスク状（直径０．６
３cm）に切断し、それらを９６ウェルマニホールドに入
れた。次いで、各ウェルに１ｖ／ｖ％脱脂粉乳のＰＢＳ
溶液２００μＬを添加し、続いてディスクをＰＢＳで洗
浄し次いで０．０２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非
イオン性ＰＢＳ溶液で洗浄することにより、更なるブロ
ッキングを（非特異的バインディングの能力を排除する
ために）実施した。
セイ ヒトＩｇＧ（未標識）を、（ii）に記載の方法により活
性化膜のサンプルにカプリングせしめた。残りのイソシ
アネート基を、１モル重炭酸ナトリウムへのエタノール
アミンの１％溶液で洗浄することによりブロックした。
膜を最終的にＰＢＳで洗浄し、そして濾紙で吸取ること
により乾燥した。次いでそれをディスク状（直径０．６
３cm）に切断し、それらを９６ウェルマニホールドに入
れた。次いで、各ウェルに１ｖ／ｖ％脱脂粉乳のＰＢＳ
溶液２００μＬを添加し、続いてディスクをＰＢＳで洗
浄し次いで０．０２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非
イオン性ＰＢＳ溶液で洗浄することにより、更なるブロ
ッキングを（非特異的バインディングの能力を排除する
ために）実施した。
【０１１１】iv) 抗ヒトＩｇＧペルオキシダーゼ結合体
のバインディング ２つのタイプのヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆab及びＦc に特異
的）ペルオキシダーゼ結合体を、 Sigmaより購入した。
各々を一組みの希釈度（１ｖ／ｖ％脱脂スキムミルクの
ＰＢＳ溶液中、１／１００，１／５００，１／２５０
０）で調製した。各希釈液２００μＬを、 (iii)で調整
したマニホールドのウェルに分配し、そして室温で１時
間インキュベーションした。次いでディスクを０．０２
％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤
のＰＢＳ溶液で十分に洗浄した。各ウェルに２００μＬ
ずつ色原体（基質ＡＢＴＳ）を添加した。室温で１５分
経過後、出現した青緑色をＥＬＩＳＡ読取り装置により
評定した。
のバインディング ２つのタイプのヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆab及びＦc に特異
的）ペルオキシダーゼ結合体を、 Sigmaより購入した。
各々を一組みの希釈度（１ｖ／ｖ％脱脂スキムミルクの
ＰＢＳ溶液中、１／１００，１／５００，１／２５０
０）で調製した。各希釈液２００μＬを、 (iii)で調整
したマニホールドのウェルに分配し、そして室温で１時
間インキュベーションした。次いでディスクを０．０２
％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤
のＰＢＳ溶液で十分に洗浄した。各ウェルに２００μＬ
ずつ色原体（基質ＡＢＴＳ）を添加した。室温で１５分
経過後、出現した青緑色をＥＬＩＳＡ読取り装置により
評定した。
【０１１２】市販微孔質膜、イモビロン(IMMOBILON, 商
標）（ミリポア、Millipore)を用いて、厳密に同様の一
連の実験を実施した。
標）（ミリポア、Millipore)を用いて、厳密に同様の一
連の実験を実施した。
【０１１３】ポリウレタン膜を用いると、抗ヒトＩｇＧ
のより低い希釈度（１／１００，１／５００）では測定
するには強すぎる色彩を迅速に提供し、同様に市販材料
を用いると発色はより遅かった。最も高い希釈度（１／
２５００）では、ポリウレタン膜を用いる吸収が１．８
１であり、そしてイモビロン(IMMOBILON, 商標）では
１．１であった。
のより低い希釈度（１／１００，１／５００）では測定
するには強すぎる色彩を迅速に提供し、同様に市販材料
を用いると発色はより遅かった。最も高い希釈度（１／
２５００）では、ポリウレタン膜を用いる吸収が１．８
１であり、そしてイモビロン(IMMOBILON, 商標）では
１．１であった。
【０１１４】ヒトＩｇＧを用いずに、抗ヒトＩｇＧペル
オキシダーゼを用いた対照は、いずれの試験においても
十分な色彩を提供しなかった。
オキシダーゼを用いた対照は、いずれの試験においても
十分な色彩を提供しなかった。
【０１１５】例２ （ｉ）拡散的バインディング ヒトＩｇＧ（未標識）を、例１に記載の活性化バイオマ
ー（BIOMER，商標）膜の４つディスク（各々直径２．５
４cm）に、そこに記載された方法によりカプリングさせ
た。未反応イソシアネート基を１モル重炭酸ナトリウム
へのエタノールアミンの１％溶液で洗浄することにより
ブロックした。
ー（BIOMER，商標）膜の４つディスク（各々直径２．５
４cm）に、そこに記載された方法によりカプリングさせ
た。未反応イソシアネート基を１モル重炭酸ナトリウム
へのエタノールアミンの１％溶液で洗浄することにより
ブロックした。
【０１１６】これらのディスクを０．２％トゥイーン(T
WEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液で
洗浄し、そして最後にＰＢＳで洗浄した。次いで各ディ
スクに１ｖ／ｖ％脱脂粉乳のＰＢＳ溶液１．２mLを添加
することにより、更なるブロッキングを（非特異的バイ
ンディングの能力を排除するために）実施した。これに
続いてディスクを０．０２％トゥイーン(TWEEN, 商標)
２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液で洗浄した。
WEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液で
洗浄し、そして最後にＰＢＳで洗浄した。次いで各ディ
スクに１ｖ／ｖ％脱脂粉乳のＰＢＳ溶液１．２mLを添加
することにより、更なるブロッキングを（非特異的バイ
ンディングの能力を排除するために）実施した。これに
続いてディスクを０．０２％トゥイーン(TWEEN, 商標)
２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液で洗浄した。
【０１１７】２つのタイプのヤギ抗ヒトＩｇＧペルオキ
シダーゼ（ＡＨＩＰ）結合体（Ｆab及びＦc に特異的）
を、１ｖ／ｖ％脱脂スキムミルクのＰＢＳ溶液中、１／
２５００及び１／５０００の２つの希釈度で調製した。
各希釈液１．２mLをＩｇＧカプリング膜の各ディスク上
に添加し、そして１時間室温でインキュベーションし
た。次いでディスクを潅流方法により０．２％トゥイー
ン(TWEEN, 商標) のＰＢＳ溶液６０mLで十分に洗浄し
た。次いで各ディスクを３つのディスク（直径０．６３
cm）に切断し、それをＥＬＩＳＡ読取り装置用９６ウェ
ルマニホールドに入れた。各ウェルに２００μＬずつ色
原体（基質ＡＢＴＳ）を添加した。室温で１５分経過
後、出現した緑色の吸光度（４０５nm）をＥＬＩＳＡ読
取り装置により測定した。非活性化バイオマー（BIOME
R）の対照ディスクを、ヤギ抗ヒトＩｇＧペルオキシダ
ーゼと共にインキュベーションし、ヒトＩｇＧを用いず
に上記と同様に処理し、そしてＥＬＩＳＡ技術により試
験した。吸光度の結果を第８表に示す。
シダーゼ（ＡＨＩＰ）結合体（Ｆab及びＦc に特異的）
を、１ｖ／ｖ％脱脂スキムミルクのＰＢＳ溶液中、１／
２５００及び１／５０００の２つの希釈度で調製した。
各希釈液１．２mLをＩｇＧカプリング膜の各ディスク上
に添加し、そして１時間室温でインキュベーションし
た。次いでディスクを潅流方法により０．２％トゥイー
ン(TWEEN, 商標) のＰＢＳ溶液６０mLで十分に洗浄し
た。次いで各ディスクを３つのディスク（直径０．６３
cm）に切断し、それをＥＬＩＳＡ読取り装置用９６ウェ
ルマニホールドに入れた。各ウェルに２００μＬずつ色
原体（基質ＡＢＴＳ）を添加した。室温で１５分経過
後、出現した緑色の吸光度（４０５nm）をＥＬＩＳＡ読
取り装置により測定した。非活性化バイオマー（BIOME
R）の対照ディスクを、ヤギ抗ヒトＩｇＧペルオキシダ
ーゼと共にインキュベーションし、ヒトＩｇＧを用いず
に上記と同様に処理し、そしてＥＬＩＳＡ技術により試
験した。吸光度の結果を第８表に示す。
【０１１８】
【表８】
【０１１９】（ii）ドットバインディング 活性化バイオマー（BIOMER，商標）膜のディスク（直径
＝２．５４cm）１つを、ヒトＩｇＧ（１mg／カプリング
緩衝液pH８．５ １mL）４００μＬに対して１時間室温
でドットバインディングモードによって暴露した。次い
で残りのイソシアネート化基を１モル重炭酸ナトリウム
へのエタノールアミンの１ｖ／ｖ％溶液と反応せしめ、
そして０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン
性界面活性剤のＰＢＳ溶液で及びＰＢＳ溶液でそれぞれ
洗浄した。次いでディスクを１％脱脂スキムミルクへの
ＡＨＩＰ（Ｆabに特異的）の１／１００希釈液に対して
ドットバインディングにより暴露し、そして０．２％ト
ゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤のＰ
ＢＳ溶液で洗浄しそして最後にＰＢＳで洗浄した。
＝２．５４cm）１つを、ヒトＩｇＧ（１mg／カプリング
緩衝液pH８．５ １mL）４００μＬに対して１時間室温
でドットバインディングモードによって暴露した。次い
で残りのイソシアネート化基を１モル重炭酸ナトリウム
へのエタノールアミンの１ｖ／ｖ％溶液と反応せしめ、
そして０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン
性界面活性剤のＰＢＳ溶液で及びＰＢＳ溶液でそれぞれ
洗浄した。次いでディスクを１％脱脂スキムミルクへの
ＡＨＩＰ（Ｆabに特異的）の１／１００希釈液に対して
ドットバインディングにより暴露し、そして０．２％ト
ゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤のＰ
ＢＳ溶液で洗浄しそして最後にＰＢＳで洗浄した。
【０１２０】非活性化バイオマー（BIOMER，商標）膜の
対照ディスクをヒトＩｇＧを含まないＡＨＩＰ ４００
μＬに対して暴露しそして上記のように洗浄した。
対照ディスクをヒトＩｇＧを含まないＡＨＩＰ ４００
μＬに対して暴露しそして上記のように洗浄した。
【０１２１】色原体（基質ＡＢＴＳ）を各ディスクに２
mLずつ添加し、そして１５分間インキュベーションし
た。その後、対照の白色バックグラウンドに対して暗紫
色スポットとして陽性抗体反応が認められた。
mLずつ添加し、そして１５分間インキュベーションし
た。その後、対照の白色バックグラウンドに対して暗紫
色スポットとして陽性抗体反応が認められた。
【０１２２】例３ エンザイム・リンクト・イムノアッセイ（フルサンドウ
イッチアッセイ）用ポリ（エーテル−ウレタン）膜 ひと腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）抗原の検出は、
フルサンドウイッチイムノアッセイにより実施した。こ
のようなアッセイの基本的な工程は以下の通りである。
イッチアッセイ）用ポリ（エーテル−ウレタン）膜 ひと腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）抗原の検出は、
フルサンドウイッチイムノアッセイにより実施した。こ
のようなアッセイの基本的な工程は以下の通りである。
【０１２３】方法 （１）例１に記載された活性化バイオマー（BIOMER，商
標）膜のディスク（直径＝２．５４cm）を、カプリング
緩衝液（pH９．２）（０．１モル硫酸ナトリウム及び
０．１５モル塩化ナトリウム）２mL中マウスモノクロー
ナル抗体ＩｇＧ１（ＪＩＤ９）２００μｇの溶液と反応
せしめた。ＪＩＤ９の膜との反応は、室温で２時間潅流
することにより実施され、次いで４℃で１７時間浸漬せ
しめた。次いでディスクを０．２％トゥイーン(TWEEN,
商標) ２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液及び最後
にＰＢＳで非常に入念に洗浄した。
標）膜のディスク（直径＝２．５４cm）を、カプリング
緩衝液（pH９．２）（０．１モル硫酸ナトリウム及び
０．１５モル塩化ナトリウム）２mL中マウスモノクロー
ナル抗体ＩｇＧ１（ＪＩＤ９）２００μｇの溶液と反応
せしめた。ＪＩＤ９の膜との反応は、室温で２時間潅流
することにより実施され、次いで４℃で１７時間浸漬せ
しめた。次いでディスクを０．２％トゥイーン(TWEEN,
商標) ２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液及び最後
にＰＢＳで非常に入念に洗浄した。
【０１２４】（２）未反応イソシアネート化基を１モル
重炭酸ナトリウムへのエタノールアミンの１％溶液次い
で１ｖ／ｖ％脱脂粉乳のＰＢＳ溶液でブロックした。こ
れに続いて、０．０２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０
非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液でディスクを洗浄し
た。
重炭酸ナトリウムへのエタノールアミンの１％溶液次い
で１ｖ／ｖ％脱脂粉乳のＰＢＳ溶液でブロックした。こ
れに続いて、０．０２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０
非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液でディスクを洗浄し
た。
【０１２５】（３）ＪＩＤ９がカプリングされている膜
を、ヒトＴＮＦα（特異的活性６×１０7 ユニット／m
g）５μｇを含有するＰＢＳ ２mL中に室温で２時間浸
漬せしめた。次いで膜を取り出しそして０．２％トゥイ
ーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ
溶液そして最後にＰＢＳで洗浄した。
を、ヒトＴＮＦα（特異的活性６×１０7 ユニット／m
g）５μｇを含有するＰＢＳ ２mL中に室温で２時間浸
漬せしめた。次いで膜を取り出しそして０．２％トゥイ
ーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ
溶液そして最後にＰＢＳで洗浄した。
【０１２６】（４）膜上にＴＮＦ抗原を固定化された膜
を、ウサギ抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体（ＰＢＳ
−トゥイーン(TWEEN, 商標) への１／１００の希釈液）
に対して暴露しそして室温で１時間バインディングせし
めた。ディスクを、０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標)
２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液及びＰＢＳで、
それぞれ非常に入念に洗浄した。
を、ウサギ抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体（ＰＢＳ
−トゥイーン(TWEEN, 商標) への１／１００の希釈液）
に対して暴露しそして室温で１時間バインディングせし
めた。ディスクを、０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標)
２０非イオン性界面活性剤のＰＢＳ溶液及びＰＢＳで、
それぞれ非常に入念に洗浄した。
【０１２７】（５）膜−結合ポリクローナル抗体を、Ｐ
ＢＳ−トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活
性剤で１／５０００に希釈したペルオキシダーゼ抗ウサ
ギＩｇＧ（ＡＲＩＰ）(Silenus製造）とインキュベーシ
ョンし、そして室温で１時間バインディングせしめた。
ディスクを０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イ
オン性界面活性剤のＰＢＳ溶液及び最後にＰＢＳで洗浄
した。
ＢＳ−トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イオン性界面活
性剤で１／５０００に希釈したペルオキシダーゼ抗ウサ
ギＩｇＧ（ＡＲＩＰ）(Silenus製造）とインキュベーシ
ョンし、そして室温で１時間バインディングせしめた。
ディスクを０．２％トゥイーン(TWEEN, 商標) ２０非イ
オン性界面活性剤のＰＢＳ溶液及び最後にＰＢＳで洗浄
した。
【０１２８】（６）得られた膜から、４つのディスク
（直径０．６３cm）を切断し、次いでそれを９６ウェル
マイクロタイタープレートに入れ、そして０．０２％Ｈ
2 Ｏ2 を含有する０．１モル クエン酸緩衝液pH４．０
中２，２−アジノ−ビス（３−エチルベンゼンチアゾリ
ンスルホン酸）（ＡＢＴＳ）０．３mg／mLの色原体２０
０μＬと共にインキュベーションした。発色した緑色溶
液の４０５nmにおける吸光度をＥＬＩＳＡ読取り装置に
より測定した。吸光度のデータを第９表に示す。
（直径０．６３cm）を切断し、次いでそれを９６ウェル
マイクロタイタープレートに入れ、そして０．０２％Ｈ
2 Ｏ2 を含有する０．１モル クエン酸緩衝液pH４．０
中２，２−アジノ−ビス（３−エチルベンゼンチアゾリ
ンスルホン酸）（ＡＢＴＳ）０．３mg／mLの色原体２０
０μＬと共にインキュベーションした。発色した緑色溶
液の４０５nmにおける吸光度をＥＬＩＳＡ読取り装置に
より測定した。吸光度のデータを第９表に示す。
【０１２９】（７）未反応バイオマー（BIOMER，商標）
膜の対照ディスクを、上記工程（１），（５）及び
（６）のように処理して抗体の非特異的吸着を求め、そ
して吸光度データを第９表に示す。
膜の対照ディスクを、上記工程（１），（５）及び
（６）のように処理して抗体の非特異的吸着を求め、そ
して吸光度データを第９表に示す。
【０１３０】
【表９】
【０１３１】材料 組換えヒトＴＮＦ、モノクローナル抗体ＪＩＤ９及びポ
リクローナル抗体は、Dr P.J. McLaughlin、免疫学科、
リバプール(Liverpool) 大学より入手した。
リクローナル抗体は、Dr P.J. McLaughlin、免疫学科、
リバプール(Liverpool) 大学より入手した。
【０１３２】
【発明の効果】本発明は幾つかの利点を提供する。或る
重要な利点は、本明細書に記載される繊維の使用によ
り、膜サイズ比に対して非常に好ましい表面領域が得ら
れることである。例えば、直径１μｍである繊維につい
て、材料１ｇは総表面領域約４ｍ 2 を有すると計算され
る。更に、本明細書に記載される分析用支持体が膜であ
る場合には、支持体は別の可能な支持体類と比較して物
理学的安定性、耐久性及び強度を提供する一体式共有結
合構造を有する。本発明のまた別の利点は、別の既知ポ
リマー支持体の使用と比較して本明細書に記載される特
定のポリマー支持体を用いて達成できるアッセイ感度に
おける改良である。
重要な利点は、本明細書に記載される繊維の使用によ
り、膜サイズ比に対して非常に好ましい表面領域が得ら
れることである。例えば、直径１μｍである繊維につい
て、材料１ｇは総表面領域約４ｍ 2 を有すると計算され
る。更に、本明細書に記載される分析用支持体が膜であ
る場合には、支持体は別の可能な支持体類と比較して物
理学的安定性、耐久性及び強度を提供する一体式共有結
合構造を有する。本発明のまた別の利点は、別の既知ポ
リマー支持体の使用と比較して本明細書に記載される特
定のポリマー支持体を用いて達成できるアッセイ感度に
おける改良である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マルコルム ドナルド パーブリック イギリス国，ハートフォードシャー ダブ リュディー２ ３エヌエックス，ブシェ イ，ゴールドハーバー レーン 84 (72)発明者 トレバー ジョン ウェアー イギリス国，ミドルセックス エイチエー ２ ８ティーディー，サウス ハロー，バ ルモラル ロード 22
Claims (2)
- 【請求項１】 （Ａ）支持体上に、検出可能に標識され
た免疫学的複合体を形成せしめる工程、及び（Ｂ）標識
された免疫学的複合体を検出する工程、 （ここで、支持体は、ポリマーのアミド基、ウレタン基
もしくは尿素基の窒素原子を介してポリマーに付着され
た活性化基を含んで成る繊維形成もしくはフィルム形成
ポリアミド、ポリウレタンもしくはポリ尿素ポリマー由
来であり、活性化基は生物学的化合物のアミノもしくは
チオール基と反応でき、 かつここで、検出可能に標識された免疫学的複合体は、
ポリマーの活性化基及び免疫学的複合体の成分間のリン
クの生成によりポリマーに共有結合される）を含んで成
る分析物検出用イムノアッセイ。 - 【請求項２】 （ａ）製品に共有結合される分析物に特
異的な抗体を担持する多孔質膜を含んで成る水不溶性製
品、及び（ｂ）分析物に特異的な検出可能に標識された
抗体、 （ここで、多孔質膜は、ポリマーのアミド基、ウレタン
基もしくは尿素基の窒素原子を介してポリマーに付着さ
れた活性化基を含んで成る繊維形成もしくはフィルム形
成ポリアミド、ポリウレタンもしくはポリ尿素ポリマー
由来であり、活性化基は分析物に特異的な抗体のアミノ
もしくはチオール基と反応して、ポリマーの活性化基及
び抗体の間のリンクの生成により、ポリマーに対する抗
体の共有結合を達成できる）を含んで成る分析物検出用
イムノアッセイのための試験キット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB929208548A GB9208548D0 (en) | 1992-04-21 | 1992-04-21 | An immunoassay and test kit |
| GB9208548:9 | 1992-04-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07260789A true JPH07260789A (ja) | 1995-10-13 |
Family
ID=10714261
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9304593A Pending JPH07260789A (ja) | 1992-04-21 | 1993-04-20 | ポリアミド、ポリウレタンもしくはポリ尿素支持体を用いるイムノアッセイ並びに試験キット |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0567187A1 (ja) |
| JP (1) | JPH07260789A (ja) |
| CA (1) | CA2094490A1 (ja) |
| GB (1) | GB9208548D0 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008510164A (ja) * | 2004-08-19 | 2008-04-03 | バイオセプト インコーポレイテッド | ヒドロゲルを用いるマイクロアレイ |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6690963B2 (en) | 1995-01-24 | 2004-02-10 | Biosense, Inc. | System for determining the location and orientation of an invasive medical instrument |
| US7368296B2 (en) | 2002-01-17 | 2008-05-06 | Applied Biosystems | Solid phases optimized for chemiluminescent detection |
| ITMI20031483A1 (it) * | 2003-07-21 | 2005-01-22 | Bartholdy Consultadoria E Servicos Lda | Fibre marcate e metodi immunochimici per la loro rivelazione |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0164889A3 (en) * | 1984-05-07 | 1986-12-17 | HSC Research Development Corporation | Surface-treated polymeric substrates |
| US4693985A (en) * | 1984-08-21 | 1987-09-15 | Pall Corporation | Methods of concentrating ligands and active membranes used therefor |
| DE3582926D1 (de) * | 1984-10-29 | 1991-06-27 | Memtec Ltd | Verfahren zur herstellung von polyamidtraegern, die zur reaktion mit antikoerpern und enzymen faehig sind, und die so hergestellten traeger. |
| US4806546A (en) * | 1985-09-30 | 1989-02-21 | Miles Inc. | Immobilization of nucleic acids on derivatized nylon supports |
| US4680338A (en) * | 1985-10-17 | 1987-07-14 | Immunomedics, Inc. | Bifunctional linker |
| US5094962A (en) * | 1988-06-13 | 1992-03-10 | Eastman Kodak Company | Microporous article having a stabilized specific binding reagent, a method for its use and a diagnostic test kit |
| US5200462A (en) * | 1991-01-25 | 1993-04-06 | Eastman Kodak Company | Succinimide containing polymers and lattices prepared from same |
-
1992
- 1992-04-21 GB GB929208548A patent/GB9208548D0/en active Pending
-
1993
- 1993-04-15 EP EP93201091A patent/EP0567187A1/en not_active Withdrawn
- 1993-04-20 JP JP9304593A patent/JPH07260789A/ja active Pending
- 1993-04-20 CA CA 2094490 patent/CA2094490A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008510164A (ja) * | 2004-08-19 | 2008-04-03 | バイオセプト インコーポレイテッド | ヒドロゲルを用いるマイクロアレイ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB9208548D0 (en) | 1992-06-03 |
| CA2094490A1 (en) | 1993-10-22 |
| EP0567187A1 (en) | 1993-10-27 |
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