JPH07191023A - 涙液を採取するためのサンプリングキット - Google Patents

涙液を採取するためのサンプリングキット

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JPH07191023A
JPH07191023A JP6254911A JP25491194A JPH07191023A JP H07191023 A JPH07191023 A JP H07191023A JP 6254911 A JP6254911 A JP 6254911A JP 25491194 A JP25491194 A JP 25491194A JP H07191023 A JPH07191023 A JP H07191023A
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JP
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sampling
eyes
liquid
adsorption
eye
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JP6254911A
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Juergen Roemisch
ユルゲン・レーミシユ
Eckhard Dr Schueler
エクハルト・シユーラー
Klaus Dr Habenstein
クラウス・ハーベンシユタイン
Juergen Dr Lindner
ユルゲン・リントナー
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Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Germany
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Behringwerke AG
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    • A61B3/10Objective types, i.e. instruments for examining the eyes independent of the patients' perceptions or reactions
    • A61B3/101Objective types, i.e. instruments for examining the eyes independent of the patients' perceptions or reactions for examining the tear film
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61BDIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B10/00Other methods or instruments for diagnosis, e.g. instruments for taking a cell sample, for biopsy, for vaccination diagnosis; Sex determination; Ovulation-period determination; Throat striking implements
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 眼に十分な耐容性がある液体およびサンプリ
ング用に成形した吸着材料を含有する涙液採取用のサン
プリングキット、眼に十分な耐容性がある液体の特定容
量を眼の表面または結膜嚢の内部に適用して増量させた
涙液の特定容量を採取することからなる涙液の取得方
法、このようにして得られた涙液の涙液中成分の測定の
ための使用、ならびに測定された成分値の診断のための
使用。 【効果】 眼を傷つけることのない穏やかな方法での迅
速な涙液の採取を可能にし、さらに特定容量の涙液の採
取が可能になることによって単離された涙液中の成分の
定性的および定量的測定における高度な再現性が達成さ
れる。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】本発明は、涙液の成分を再現性よく測定す
る目的で、特定容量の涙液を、迅速かつ穏やかな方法で
取得するためのサンプリングキットに関する。
【0002】眼科疾患の発病の過程においては、様々な
成分の濃度に変動が起こる。これらの成分には、酵素た
とえばプロテアーゼがあり、これらの活性の低下または
上昇は、眼のとくに前部領域における刺激または傷害に
対する指標を提供することができる。このようにして涙
液中の特定のパラメーターを定量すれば、疾患の診断お
よび治療経過のモニタリングの両方に使用することが可
能である。
【0003】涙液を取得する方法には、たとえば毛細管
を用いるサンプリングがあり、この方法は高レベルの涙
液を分泌する動物種には採用できる。この操作は、とく
にサンプリングを数分もしくはそれ以上続ける場合に
は、毛細管で眼を傷つける危険があるので練習を要す
る。これはとくに、ある種の疾患(たとえばドライアイ
症候群)の過程で、または元来極めて涙液のレベルが低
い動物種たとえばウサギで、涙液が小容量しかない場合
にいえる。
【0004】「シルメル試験」ストリップを用いる、ろ
紙または吸取紙中への吸い取りによる、涙液の取得方法
も、同様に最適ではない。この方法では、ろ紙ストリッ
プが数分間にわたり角膜または結膜に直接接触し、これ
らの組織を傷つける危険がある。これに加えて、細胞が
分離することがあり、それがろ紙ストリップに付着した
場合には、誤った測定結果を生じることになる。
【0005】これに加えて、ろ紙ストリップが大きな表
面積をもつことから特定容量のサンプルを採取すること
がほとんど不可能であるという事実によって、パラメー
ターの定量化はさらに困難になる。吸着された容量の測
定は可能ではあるが、これには微差の秤量が必要にな
る。これらの工程は時間の浪費を招き、試験すべきパラ
メーターの以後の測定にさらに誤差を生じる機会を与え
る。
【0006】したがって、本発明の基本的な目的は、涙
液の単離を、一つには、試験対象に対して穏やかな方法
で迅速に実施可能なように、他方では、試験において特
定容量の涙液の使用を可能にすることにより単離された
涙液中の成分の定性的および定量的測定における高度な
再現性を達成できるように、改良することにある。たと
えばウサギのような、涙液の分泌レベルが通常極めて低
い動物種の涙液の単離を改良することがとくに意図され
たものであった。この目的は、適当なサンプリングキッ
トおよび特定のサンプリング方法の提供によって達成さ
れる。
【0007】本発明は、特定容量の涙液を取得するため
のサンプリングキットに関し、このキットは、眼に十分
な耐容性がありびんに適当に充填された液体およびサン
プリング用に成形した吸着材料を含有する。
【0008】好ましくは、サンプリング用に成形した吸
着材料は、非吸着性担体材料および、その担体材料上に
固定されサンプリングの役割を担う吸着層からなる。と
くに好ましい実施態様においては、サンプリングキット
は、吸着層を有する可撓性のプラスチックストリップを
含有し、吸着層はプラスチックストリップ上に固定さ
れ、その表面積および高さにおいて限定される。
【0009】本発明はさらに、涙液を取得する方法にお
いて、眼に十分な耐容性がある液体の特定容量を眼の表
面または結膜嚢の内部に適用し、このようにして増量さ
れた涙液の特定容量をついで採取する方法に関する。
【0010】眼に導入される容量、およびろ紙は、以後
の試験混合物中での使用が成分の検出を可能にするため
に要求される必要な涙の容量に適合させることができ
る。1〜500μlの容量(ヒトまたは他の動物種の眼
のサイズによる)が導入され、ヒト、霊長類、ウサギ、
ネコまたはイヌの場合には2〜200μlが好ましく、
3〜100μlがとくに好ましく、5〜30μlが最も
好ましい。
【0011】寸法の点で吸着させる容量に適合し、かつ
迅速なサンプルの採取を可能にする吸着材料による吸着
によって、特定の容量を得ることができる。これに関連
して、吸着材料の寸法は、その最大吸着可能容量よりも
常に涙液の増量された量の方が多くなるように設定され
なければならない。この方法でのみ、再現性ある容量の
涙液の採取が可能になるからである。吸着材料の大きさ
はまた、特定の動物種に元来期待される涙の容量に適合
させることが有利である。
【0012】実際に、上述の材料を用いる好ましいアプ
ローチは次の通りである。すなわち、眼に十分な耐容性
がある液体の特定容量を、眼の表面または結膜嚢の内部
に滴下して加える。眼を数回、好ましくは2〜4回開閉
して混合を確実にしたのち、ろ紙を好ましくは担体スト
リップ上に固定して、下眼臉の内表面上に担体ストリッ
プが眼臉に相対するように配置する。
【0013】涙の採取中には、眼は開いていても閉じて
いてもよいが、閉じている方が好ましい。2〜300秒
後、好ましくは30秒後にろ紙ストリップを取り除き、
成分の測定に使用することができる。
【0014】ろ紙から遠心分離により、たとえば細胞成
分の除去のためにろ紙を0.2μmの膜(“Centrico
nR”チューブ)上に置いて液体を得て、ついでその液体
をたとえばクロマトグラフィー、電気泳動、ELISA
またはRIAによって分析することも可能である。ま
た、ろ紙上またはろ紙中に試薬または色素を発生または
遊離させ、それらをたとえば反射測光法で定量すること
による使用も可能である。涙液は血液の構成たとえばグ
ルコースレベルも反映する−これらの液体は互いにろ過
系を通って連絡している−ので、記載の方法は可溶性の
血液構成成分の定量にも使用できる。
【0015】涙液の単離に続いて、成分の定量、好まし
くは酵素の活性または濃度、とくに好ましくはプロテア
ーゼ(たとえば、ウロキナーゼ、t−PA、プラスミ
ン、コラーゲナーゼ、カテプシン、トロンビンまたはカ
リクレイン)の活性または濃度を測定することができ
る。
【0016】本発明のサンプリングキットは、ヒトおよ
び他の動物種の両者から涙液を採取し、ついで測定パラ
メーターを定性的または定量的に測定するのに適してい
る。サンプリングキットおよびその使用方法は、プロテ
アーゼ、プラスミンの濃度および活性の測定を例として
以下に説明する。
【0017】例1: 材料ろ紙 (オートクレーブにより滅菌):MN818(RMac
herey−Nagel;Dueren/ドイツ、6×5mm)、プラスチ
ックストリップ(6×90mm)上に固定、ろ紙はプラス
チックストリップの端から1mm突出している。滴下液 滅菌等張性食塩溶液。緩衝液 40mM HEPES、280mM NaCl、8mM KCl、
2mM MgCl2、0.5g/l ポリオキシエチレングリ
コ−ルドデシルエーテル、pH7.5。酵素基質 H−D−Val−Leu−Lys−pNA×2HCl S−2251(Kabiより)プラスミン標準 サブ−標準BWロット:929891、第二IRP77
/588NIBSCによって検量。
【0018】涙液の採集: − 20μlの滅菌等張性NaCl溶液を眼の表面、ま
たは(裏返した)結膜嚢(下眼臉)内に滴加する。3回
まばたきをする(完全な混合)。 − 試験ストリップを下眼臉上に、プラスチック材料が
下方になる(眼臉上にある)ように置く。眼(角膜/結
膜)の表面は触れるべきではない。 − 眼を30秒間閉じる。 − 最大限に吸着が行われたろ紙ストリップを取り出
し、プラスチックに付着した液体を吸取紙で拭き取る。 − ろ紙ストリップを準備したキューベット内に、キュ
ーベットの「光路」に来ないように入れる。ろ紙はキュ
ーベットのルーメンに対面させる。キューベットを37
℃でインキュベートする。
【0019】プラスミン活性の測定 プラスミン活性は、発色原基質S−2251の切断およ
びパラ−ニトロアニリドの遊離により405nmにおいて
測光法により測定される。プラスミン活性は、標準プラ
スミンを用いて構築した検量曲線を用いて定量される。
【0020】標準曲線は、予め調製した標準溶液にろ紙
ストリップを約10秒間適用し(約1mm浸漬する)、過
剰の液体をプラスチックから拭い取り、ろ紙ストリップ
をキューベットに入れる。
【0021】キューベットは、それぞれ150μlの蒸
留水と240μlのHEPESをピペットで加えて準備
する。
【0022】100μlの基質溶液(4mM)を加えたの
ち、様々なインキュベーション時間後のOD 405nm
を測定する。光度計中への配置を容易にするため、キュ
ーベットの上端から突出した担体のプラスチック部分は
除去してもよい。
【0023】可能な限り広い測定範囲をカバーするため
に、標準曲線がいったん作られてしまえば、サンプルは
数種の時点で測定することが可能である。この例では、
プラスミン活性は0.05〜100μg/mlの測定範囲
で測定することができた。所定の条件を用いた場合、1
5、60および240分後に測定された(図1参照)。
【0024】プラスミン活性および濃度は標準曲線を用
いて定量される(容易に評価できる直線性の測定範囲に
おいて)。測定範囲が異なる場合には、インキュベーシ
ョン時間を変えることが薦められる。 15分インキュベーション 2.0IU/ml −0.2IU/ml 100.0μg/ml −10.0μg/ml 60分インキュベーション 0.2IU/ml −0.02IU/ml 10.0μg/ml −1.0μg/ml 240分インキュベーション 0.02IU/ml −0.002IU/ml 1.0μg/ml −0.1μg/ml 12時間以上インキュベートすれば、<0.002IU/m
l(<0.1μg/ml)のレベルのプラスミンでも定量す
ることが可能である。
【0025】結果: − 標準曲線(図1) − ヒトおよびウサギの「正常値」は図2に示すように
決定された。 個々の値のばらつきにもかかわらず、これらの正常値
は、異常値が数倍以上高いことから、病的状態との識別
に使用することができる。
【0026】類似のアプローチを、たとえば他のプロテ
アーゼおよび他の酵素についても、同様に使用すること
ができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】ヒトプラスミンの標準曲線を示す図。
【図2】涙液中プラスミンの検出を示す図。
フロントページの続き (72)発明者 エクハルト・シユーラー ドイツ連邦共和国デー−35041マルブルク. エーヴイゲスタール3 (72)発明者 クラウス・ハーベンシユタイン ドイツ連邦共和国デー−35083ヴエター. イム・ケツアーグルント13 (72)発明者 ユルゲン・リントナー ドイツ連邦共和国デー−35041マルブルク. ハーゼルヘケ60

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 眼に十分な耐容性がありびんに適当に充
    填された液体およびサンプリング用に成形した吸着材料
    からなる、特定容量の涙液を取得するためのサンプリン
    グキット。
  2. 【請求項2】 サンプリング用に成形した吸着材料が非
    吸着性担体材料とその担体材料上に固定された吸着層か
    らなる請求項1に記載のサンプリングキット。
  3. 【請求項3】 担体材料が可撓性のプラスチックストリ
    ップであり、そのプラスチックストリップに固定される
    吸着層がその表面積および高さにおいて限定される請求
    項2に記載のサンプリングキット。
  4. 【請求項4】 (a)眼に十分な耐容性がある液体の特
    定容量を眼の表面または結膜嚢の内部に適用し、そして
    (b)増量させた涙液の特定容量を採取することからな
    る涙液の取得方法。
  5. 【請求項5】 1〜500μlを導入する請求項4に記
    載の方法。
  6. 【請求項6】 涙液中の成分の測定するための、請求項
    4に記載のようにして得られた涙液の使用。
  7. 【請求項7】 請求項6に記載のようにして測定された
    成分値の診断のための使用。
JP6254911A 1993-10-21 1994-10-20 涙液を採取するためのサンプリングキット Pending JPH07191023A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4335961A DE4335961A1 (de) 1993-10-21 1993-10-21 Probenabnahmebesteck zur Gewinnung von Tränenflüssigkeit
DE4335961:2 1993-10-21

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH07191023A true JPH07191023A (ja) 1995-07-28

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ID=6500700

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JP6254911A Pending JPH07191023A (ja) 1993-10-21 1994-10-20 涙液を採取するためのサンプリングキット

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EP (1) EP0661021A3 (ja)
JP (1) JPH07191023A (ja)
KR (1) KR950010858A (ja)
AU (1) AU695935B2 (ja)
CA (1) CA2133924A1 (ja)
DE (1) DE4335961A1 (ja)

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