JPH07159402A - Ｉｖ型コラゲナ−ゼ測定法 - Google Patents
Ｉｖ型コラゲナ−ゼ測定法Info
- Publication number
- JPH07159402A JPH07159402A JP34035793A JP34035793A JPH07159402A JP H07159402 A JPH07159402 A JP H07159402A JP 34035793 A JP34035793 A JP 34035793A JP 34035793 A JP34035793 A JP 34035793A JP H07159402 A JPH07159402 A JP H07159402A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mmp
- antibody
- metalloproteinase
- cancer
- metastasis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ＩＶ型コラゲナ−ゼ（一般名メタロプロテイ
ナ−ゼ−２及び−９、以下ＭＭＰと略記する）の検出及
び測定にＭＭＰに対する固定化抗体を使用し、表面プラ
ズモン（ＳＰＲ）で検出することを特徴とした新規な免
疫検定法に関する。 【構成】 メタロプロテイナ−ゼ−２（E.C.3,4,24,24)
又はメタロプロテイナ−ゼ−９（E.C.3,4,24,35)に対す
る抗体を固定化し、本抗体とメタロプロテイナ−ゼ−２
（E.C.3,4,24,24)又はメタロプロテイナ−ゼ−９（E.C.
3,4,24,35)を含む可能性のある生体試料調製液を接触さ
せ、表面プラズモン共鳴により、本抗体に結合したメタ
ロプロテイナ−ゼ−２（E.C.3,4,24,24)又はメタロプロ
テイナ−ゼ−９（E.C.3,4,24,35)量を測定する。
ナ−ゼ−２及び−９、以下ＭＭＰと略記する）の検出及
び測定にＭＭＰに対する固定化抗体を使用し、表面プラ
ズモン（ＳＰＲ）で検出することを特徴とした新規な免
疫検定法に関する。 【構成】 メタロプロテイナ−ゼ−２（E.C.3,4,24,24)
又はメタロプロテイナ−ゼ−９（E.C.3,4,24,35)に対す
る抗体を固定化し、本抗体とメタロプロテイナ−ゼ−２
（E.C.3,4,24,24)又はメタロプロテイナ−ゼ−９（E.C.
3,4,24,35)を含む可能性のある生体試料調製液を接触さ
せ、表面プラズモン共鳴により、本抗体に結合したメタ
ロプロテイナ−ゼ−２（E.C.3,4,24,24)又はメタロプロ
テイナ−ゼ−９（E.C.3,4,24,35)量を測定する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明はＩＶ型コラゲナ−ゼ
（一般名メタロプロテイナ−ゼ−２及び−９、以下ＭＭ
Ｐと略記する）の検出及び測定にＭＭＰに対する固定化
抗体を使用し、表面プラズモン（ＳＰＲ）で検出するこ
とを特徴とした新規な免疫検定法に関するものである。
（一般名メタロプロテイナ−ゼ−２及び−９、以下ＭＭ
Ｐと略記する）の検出及び測定にＭＭＰに対する固定化
抗体を使用し、表面プラズモン（ＳＰＲ）で検出するこ
とを特徴とした新規な免疫検定法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＭＭＰ−２やＭＭＰ−９の測定には、活
性測定又は免疫検定法が用いられている。活性測定に
は、基質としてＩＶ型コラ−ゲン（Liotta, L.A., Abe,
S.,Robey, P.G. and Martin, G.R.: Preferntial dige
stion ofbasement membranecollagen by an enzyme der
ived from a metastatic murine tumor. Proc. Natl.Ac
ad. Sci. USA, 76,2268-2272,1979）や、合成基質（Net
zel-Arnett. S.,Maliya, S.K., Van Wart, H.E.: Conti
nuously recording fluoresecent assaysoptimized for
five human matrix metalloproteinases.: Anal. Bioc
hem., 195,86-92,1991)を、また免疫検定法としては、
ＭＭＰ−２やＭＭＰ−９に対する抗体を作成し、従来一
般的に使用されているELISAやウエスタンブロツト法で
測定されている。
性測定又は免疫検定法が用いられている。活性測定に
は、基質としてＩＶ型コラ−ゲン（Liotta, L.A., Abe,
S.,Robey, P.G. and Martin, G.R.: Preferntial dige
stion ofbasement membranecollagen by an enzyme der
ived from a metastatic murine tumor. Proc. Natl.Ac
ad. Sci. USA, 76,2268-2272,1979）や、合成基質（Net
zel-Arnett. S.,Maliya, S.K., Van Wart, H.E.: Conti
nuously recording fluoresecent assaysoptimized for
five human matrix metalloproteinases.: Anal. Bioc
hem., 195,86-92,1991)を、また免疫検定法としては、
ＭＭＰ−２やＭＭＰ−９に対する抗体を作成し、従来一
般的に使用されているELISAやウエスタンブロツト法で
測定されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】ＭＭＰ−２及びＭＭＰ
−９活性やその酵素に対する抗体を用いたELISA法は、
生体試料調製液中のＭＭＰ−２やＭＭＰ−９含量測定に
有効な方法であるが、結果を得るまでに、特殊な専門知
識を要し、操作が非常に煩雑であつたり、測定感度が低
かつたり、長時間を要する等、種々の解決を要する課題
が残されている。
−９活性やその酵素に対する抗体を用いたELISA法は、
生体試料調製液中のＭＭＰ−２やＭＭＰ−９含量測定に
有効な方法であるが、結果を得るまでに、特殊な専門知
識を要し、操作が非常に煩雑であつたり、測定感度が低
かつたり、長時間を要する等、種々の解決を要する課題
が残されている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】この発明は上記課題を、
50pgから60ngの高感度で測定できるＳＰＲ（笹井献一、
蛋白質核酸酵素、37,2977,2984,1992)を用いた免疫測定
法により解決した。すなわち、BIA core バイオセンサ
(フアルマシア社製)のセンサ部にＭＭＰ−２，又はＭＭ
Ｐ−９に対する抗体を固定化し、同装置にＭＭＰ−２又
はＭＭＰ−９を含む可能性のある生体試料調製液をセツ
トし、抗体と反応した物質の量をＳＰＲによつて検出す
る。
50pgから60ngの高感度で測定できるＳＰＲ（笹井献一、
蛋白質核酸酵素、37,2977,2984,1992)を用いた免疫測定
法により解決した。すなわち、BIA core バイオセンサ
(フアルマシア社製)のセンサ部にＭＭＰ−２，又はＭＭ
Ｐ−９に対する抗体を固定化し、同装置にＭＭＰ−２又
はＭＭＰ−９を含む可能性のある生体試料調製液をセツ
トし、抗体と反応した物質の量をＳＰＲによつて検出す
る。
【０００５】
【作用】この発明の測定法は癌の転移や悪性度の検出に
有効であると見られている。腫瘍細胞の転移は、腫瘍細
胞と正常組織及び細胞間の連続的な相互作用により成立
する。これらの過程は腫瘍原発部から周辺組織への侵
潤、血管又はリンパ管への侵入、遠隔臓器への着床及び
侵入、増殖などの各段階である。これらの各過程で、腫
瘍細胞がそれぞれの臓器に侵入するには、各臓器に存在
する基底膜を破壊しなければならない。この基底膜は主
にＩＶ型コラ−ゲン、ラミニン、ヘパラン硫酸プロテオ
グリカン（ＨＳＰＧ）やフイブロネクチンのネツトワ−
クにより構成されている。ＩＶ型コラ−ゲンは、その他
基底膜構成蛋白質や、プロテオグリカンとの相互作用に
関与している。したがつて、腫瘍細胞が種々の臓器へ侵
入するには、基底膜に存在するＩＶ型コラ−ゲンの破壊
が必須であると考えられ始めている。
有効であると見られている。腫瘍細胞の転移は、腫瘍細
胞と正常組織及び細胞間の連続的な相互作用により成立
する。これらの過程は腫瘍原発部から周辺組織への侵
潤、血管又はリンパ管への侵入、遠隔臓器への着床及び
侵入、増殖などの各段階である。これらの各過程で、腫
瘍細胞がそれぞれの臓器に侵入するには、各臓器に存在
する基底膜を破壊しなければならない。この基底膜は主
にＩＶ型コラ−ゲン、ラミニン、ヘパラン硫酸プロテオ
グリカン（ＨＳＰＧ）やフイブロネクチンのネツトワ−
クにより構成されている。ＩＶ型コラ−ゲンは、その他
基底膜構成蛋白質や、プロテオグリカンとの相互作用に
関与している。したがつて、腫瘍細胞が種々の臓器へ侵
入するには、基底膜に存在するＩＶ型コラ−ゲンの破壊
が必須であると考えられ始めている。
【０００６】ＭＭＰにはＭＭＰ−１，２，３，７，８，
９，１０及び１１の８種類が見いだされており、中でも
ＭＭＰ−２とＭＭＰ−９と癌の転移との関連が強いとさ
れている（Liotta, L.A.: Cancer cell invasion and m
etastasis. SCIENTIFICAMERICAN, 266, 34-41, 1992, M
urphy, G., Reynolds, J.J., Hembry, R.M.,Metallopro
teinases and cancer invasion and metastasis. Int.
J. Cancer,44, 757-760, 1989、津田とみ、津田道雄: I
V型コラゲナ-ゼ−“癌細胞の浸潤・転移”とＭＭＰ、実
験医学Vol 10. No18, 67-70, 1992、大北他；大腸癌肝
転移形質としてのMatrix Metalloproteinase−9（92KDa
gelatinase/type IVcollagenase)、第２回がん転移研
究会プログラムアブストラクト、27, 1993)。
９，１０及び１１の８種類が見いだされており、中でも
ＭＭＰ−２とＭＭＰ−９と癌の転移との関連が強いとさ
れている（Liotta, L.A.: Cancer cell invasion and m
etastasis. SCIENTIFICAMERICAN, 266, 34-41, 1992, M
urphy, G., Reynolds, J.J., Hembry, R.M.,Metallopro
teinases and cancer invasion and metastasis. Int.
J. Cancer,44, 757-760, 1989、津田とみ、津田道雄: I
V型コラゲナ-ゼ−“癌細胞の浸潤・転移”とＭＭＰ、実
験医学Vol 10. No18, 67-70, 1992、大北他；大腸癌肝
転移形質としてのMatrix Metalloproteinase−9（92KDa
gelatinase/type IVcollagenase)、第２回がん転移研
究会プログラムアブストラクト、27, 1993)。
【０００７】
抗体の作成と固定化：マウスル−イス肺癌細胞からLiot
taら(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 76,2268-2279,
1979)の方法に準じて精製したＭＭＰ−２，９を抗原と
し、ポリクロナ−ル抗体（横田ら、第79回日本病理学会
総会、vol 79, No.1, 139, 1990)と、モノクロナ−ル抗
体（片山ら、第51回日本癌学会総会記事、225, 1992、
日本病理学会誌、vol NO 1, 188, 1993)を作成した。こ
れらの抗体をBIA core バイオセンサ部のCMデキストラ
ンに、フアルマシア社指示の方法にしたがつて固定化し
た。
taら(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 76,2268-2279,
1979)の方法に準じて精製したＭＭＰ−２，９を抗原と
し、ポリクロナ−ル抗体（横田ら、第79回日本病理学会
総会、vol 79, No.1, 139, 1990)と、モノクロナ−ル抗
体（片山ら、第51回日本癌学会総会記事、225, 1992、
日本病理学会誌、vol NO 1, 188, 1993)を作成した。こ
れらの抗体をBIA core バイオセンサ部のCMデキストラ
ンに、フアルマシア社指示の方法にしたがつて固定化し
た。
【０００８】生成試料の調製： ａ．マウスル−イス肺癌細胞（１×１０6個）をC57ブラ
ツクマウスの右足しよう部に移植し、28日間経日的に血
液と腫瘍組織を採取した。血液は常法に基づいて血清に
し、組織は等量のヘペス緩衝液を加え、ポリトロンにて
均質化した後、遠心分離により不溶物を除去した。 ｂ．ヒト血清は正常群として、健康な28-60才迄での男
女50人、癌患者群として、癌患者男女50人、手術後群と
して、癌摘出手術後10年間再発の認められていない男女
10人のものを用いた。
ツクマウスの右足しよう部に移植し、28日間経日的に血
液と腫瘍組織を採取した。血液は常法に基づいて血清に
し、組織は等量のヘペス緩衝液を加え、ポリトロンにて
均質化した後、遠心分離により不溶物を除去した。 ｂ．ヒト血清は正常群として、健康な28-60才迄での男
女50人、癌患者群として、癌患者男女50人、手術後群と
して、癌摘出手術後10年間再発の認められていない男女
10人のものを用いた。
【０００９】ＭＭＰの測定：上記生体試料調製液をヘペ
ス緩衝液で１０倍に希釈し、フアルマシア社指示の方法
に準じてBIA coreバイオセンサ装置にセツトした。ポリ
クロナ−ル抗体とモノクロナ−ル抗体の結果において差
異が認められなかつたことから、モノクロナ−ル抗体を
用いた場合のマウスの結果を表１に、ヒト血清の結果を
表２に示す。
ス緩衝液で１０倍に希釈し、フアルマシア社指示の方法
に準じてBIA coreバイオセンサ装置にセツトした。ポリ
クロナ−ル抗体とモノクロナ−ル抗体の結果において差
異が認められなかつたことから、モノクロナ−ル抗体を
用いた場合のマウスの結果を表１に、ヒト血清の結果を
表２に示す。
【００１０】
【表１】
【００１１】
【表２】
【００１２】
【発明の効果】上述したようにＭＭＰ−２又はＭＭＰ−
９活性と腫瘍細胞の浸潤や転移には、非常に高い相関が
あり、転移能を獲得した腫瘍細胞や癌患者血清のＭＭＰ
−２及びＭＭＰ−９含量を、それらに対する抗体を用い
た免疫検定法により検出でき、癌の転移や悪性度の検定
に非常に有効であると考えられる。
９活性と腫瘍細胞の浸潤や転移には、非常に高い相関が
あり、転移能を獲得した腫瘍細胞や癌患者血清のＭＭＰ
−２及びＭＭＰ−９含量を、それらに対する抗体を用い
た免疫検定法により検出でき、癌の転移や悪性度の検定
に非常に有効であると考えられる。
Claims (3)
- 【請求項１】 メタロプロテイナ−ゼ−２（E.C.3,4,2
4,24)又はメタロプロテイナ−ゼ−９（E.C.3,4,24,35)
に対する抗体を固定化し、本抗体とメタロプロテイナ−
ゼ−２（E.C.3,4,24,24)又はメタロプロテイナ−ゼ−９
（E.C.3,4,24,35)を含む可能性のある生体試料調製液を
接触させ、表面プラズモン共鳴により、本抗体に結合し
たメタロプロテイナ−ゼ−２（E.C.3,4,24,24)又はメタ
ロプロテイナ−ゼ−９（E.C.3,4,24,35)量を測定するＩ
Ｖ型コラゲナ−ゼ測定法。 - 【請求項２】 抗体が、メタロプロテイナ−ゼ−２（E.
C.3,4,24,24)又はメタロプロテイナ−ゼ−９（E.C.3,4,
24,35)のいずれかを認識するモノクロナ−ル抗体である
ことを特徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 請求項１に記載の抗体が、ポリクロナ−
ル抗体であることを特徴とする請求項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34035793A JPH07159402A (ja) | 1993-12-09 | 1993-12-09 | Ｉｖ型コラゲナ−ゼ測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34035793A JPH07159402A (ja) | 1993-12-09 | 1993-12-09 | Ｉｖ型コラゲナ−ゼ測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07159402A true JPH07159402A (ja) | 1995-06-23 |
Family
ID=18336167
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34035793A Pending JPH07159402A (ja) | 1993-12-09 | 1993-12-09 | Ｉｖ型コラゲナ−ゼ測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07159402A (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998005970A1 (fr) * | 1996-08-01 | 1998-02-12 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Procedes d'analyse des reactions de rejet chroniques consecutives aux transplantations d'organes et de detection de composants urinaires |
| WO2001038558A3 (en) * | 1999-11-23 | 2001-11-08 | Univ Birmingham | Age-corrected mmp-assay for malignant pathologies |
| US6906036B2 (en) | 2001-08-16 | 2005-06-14 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Anti-aging and wound healing compounds |
| US7041787B2 (en) | 2000-12-29 | 2006-05-09 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Design and use of advanced zinc chelating peptides to regulate matrix metalloproteinases |
| US7071164B2 (en) | 2001-08-16 | 2006-07-04 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Anti-cancer and wound healing compounds |
| US7094754B2 (en) | 2001-08-16 | 2006-08-22 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Anti-aging and wound healing compounds |
| US7148194B2 (en) | 2002-12-30 | 2006-12-12 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Method to increase fibronectin |
| US7186693B2 (en) | 2001-08-16 | 2007-03-06 | Kimberly - Clark Worldwide, Inc. | Metalloproteinase inhibitors for wound healing |
| US7189700B2 (en) | 2003-06-20 | 2007-03-13 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Anti-chrondrosarcoma compounds |
-
1993
- 1993-12-09 JP JP34035793A patent/JPH07159402A/ja active Pending
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998005970A1 (fr) * | 1996-08-01 | 1998-02-12 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Procedes d'analyse des reactions de rejet chroniques consecutives aux transplantations d'organes et de detection de composants urinaires |
| AU726351B2 (en) * | 1996-08-01 | 2000-11-02 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Method for testing chronic rejection after organ transplantation and method for assaying urine components |
| US6210912B1 (en) | 1996-08-01 | 2001-04-03 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Method for examining chronic rejection reactions following organ transplantation and method for determining urine components |
| WO2001038558A3 (en) * | 1999-11-23 | 2001-11-08 | Univ Birmingham | Age-corrected mmp-assay for malignant pathologies |
| US7041787B2 (en) | 2000-12-29 | 2006-05-09 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Design and use of advanced zinc chelating peptides to regulate matrix metalloproteinases |
| US6906036B2 (en) | 2001-08-16 | 2005-06-14 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Anti-aging and wound healing compounds |
| US7071164B2 (en) | 2001-08-16 | 2006-07-04 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Anti-cancer and wound healing compounds |
| US7094754B2 (en) | 2001-08-16 | 2006-08-22 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Anti-aging and wound healing compounds |
| US7186693B2 (en) | 2001-08-16 | 2007-03-06 | Kimberly - Clark Worldwide, Inc. | Metalloproteinase inhibitors for wound healing |
| US7196162B2 (en) | 2001-08-16 | 2007-03-27 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Anti-aging and wound healing compounds |
| US7148194B2 (en) | 2002-12-30 | 2006-12-12 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Method to increase fibronectin |
| US7189700B2 (en) | 2003-06-20 | 2007-03-13 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Anti-chrondrosarcoma compounds |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Celis et al. | Bladder squamous cell carcinomas express psoriasin and externalize it to the urine | |
| Harvey et al. | Chondrex: new marker of joint disease | |
| CA2575475C (en) | Method for diagnosing liver fibrosis | |
| US20150293131A1 (en) | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of sepsis | |
| Baydanoff et al. | Age-related changes in the level of circulating elastin-derived peptides in serum from normal and atherosclerotic subjects | |
| WO2006015873A1 (en) | Method for diagnosing liver fibrosis | |
| US20210172946A1 (en) | Kit for measuring anti-cyclic citrullinated peptide antibody, application thereof, and test method | |
| JPH07159402A (ja) | Ｉｖ型コラゲナ−ゼ測定法 | |
| CN100480703C (zh) | 幽门螺旋杆菌抗体及其抗原结合片段在传感器制备中的应用 | |
| Taniguchi et al. | Measurement of human serum immunoreactive γ-glutamyl transpeptidase in patients with malignant tumors using enzyme-linked immunosorbent assay | |
| Shijubo et al. | Pulmonary surfactant protein A in pleural effusions | |
| Verpooten et al. | Immunoassay in urine of a specific marker for proximal tubular S3 segment | |
| JPS5925184B2 (ja) | 免疫測定法における非特異的阻害作用の除去法 | |
| JPH07325083A (ja) | 糖タンパク質の特定糖鎖割合の測定方法 | |
| Ivnitski et al. | Hand-held amperometric sensor for saliva and other oral fluid-based diagnostics | |
| Ignjatović et al. | Biochemical evaluation of patients with acute pancreatitis | |
| CN208537565U (zh) | C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白a免疫层析定量联合检测试纸条 | |
| JP2000193662A (ja) | 尿中シスタチンｃ測定試薬及び診断方法並びにキット | |
| EP3311164B1 (en) | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of appendicitis and differentiation of causes of abdominal pain | |
| Knapp | Partial Characterisation of an Oncofetal Pancreatic Antigen: Its Role in the Differential Diagnosis and Therapy of Patients with Pancreatic Cancer | |
| JPH0772149A (ja) | 肝癌又は肝硬変の診断薬及び診断法 | |
| WO2002037105A1 (fr) | Trousse destinee au diagnostic de la schizophrenie | |
| JP2866151B2 (ja) | カルパスタチン異常症の検出方法及びキット | |
| CA1193192A (en) | Method of determinination of human urine kallikrein and kit for the same | |
| Kumari et al. | Biosensors in the Diagnosis of Oral Cancer: A Systematic Review |