JPH07151659A - 組織標本の処理方法 - Google Patents
組織標本の処理方法Info
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- JPH07151659A JPH07151659A JP5228017A JP22801793A JPH07151659A JP H07151659 A JPH07151659 A JP H07151659A JP 5228017 A JP5228017 A JP 5228017A JP 22801793 A JP22801793 A JP 22801793A JP H07151659 A JPH07151659 A JP H07151659A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 処理槽の圧力を一定に保持し、入れ換え溶液
を徐々に標本溶液に注入して組織標本の萎縮変形を起こ
さない処理方法を提供すること。 【構成】 本発明は、蠕動ポンプ（ｐｅｒｉｓｔａｔｉ
ｃ ｐｕｍｐ）の圧縮あるいは吸い出しを利用し、処理
槽において一定の圧力を保持し、入れ換え溶液Ｓａを攪
拌中の標本溶液Ｓｏに注入し、余った混合溶液を排水瓶
に流入させて標本溶液の濃度を漸次増加させるものであ
る。
を徐々に標本溶液に注入して組織標本の萎縮変形を起こ
さない処理方法を提供すること。 【構成】 本発明は、蠕動ポンプ（ｐｅｒｉｓｔａｔｉ
ｃ ｐｕｍｐ）の圧縮あるいは吸い出しを利用し、処理
槽において一定の圧力を保持し、入れ換え溶液Ｓａを攪
拌中の標本溶液Ｓｏに注入し、余った混合溶液を排水瓶
に流入させて標本溶液の濃度を漸次増加させるものであ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、組織学および病理診断
の広い分野において、有用な組織標本の処理方法に関す
るもので、特に、処理槽の圧力を一定に保持し、入れ換
え溶液を徐々に標本溶液に注入して組織標本の萎縮変形
を起こさない処理方法に関するものである。
の広い分野において、有用な組織標本の処理方法に関す
るもので、特に、処理槽の圧力を一定に保持し、入れ換
え溶液を徐々に標本溶液に注入して組織標本の萎縮変形
を起こさない処理方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】電子顕微鏡や走査電子顕微鏡による観察
のための従来の標本処理方法は、まず組織や細胞の標本
を脱水し、包理剤に包理した後硬化させ、切片を切り取
るものである。この方法において、溶液と包理剤の交換
は、段階式（ｓｔｅｐｗｉｓｅ）に濃度を変化させる方
法が使用されている。通常使用される濃度の変化は７０
％→９０％→１００％であり、濃度の変化率が比較的大
きいため、容易に標本の萎縮変形を生じやすい。そのた
め、濃度変化の段階を細分化し、例えば２０％→４０％
→６０％→８０％→９０％→１００％のようにしてい
る。
のための従来の標本処理方法は、まず組織や細胞の標本
を脱水し、包理剤に包理した後硬化させ、切片を切り取
るものである。この方法において、溶液と包理剤の交換
は、段階式（ｓｔｅｐｗｉｓｅ）に濃度を変化させる方
法が使用されている。通常使用される濃度の変化は７０
％→９０％→１００％であり、濃度の変化率が比較的大
きいため、容易に標本の萎縮変形を生じやすい。そのた
め、濃度変化の段階を細分化し、例えば２０％→４０％
→６０％→８０％→９０％→１００％のようにしてい
る。
【０００３】上記従来の段階式の標本処理方法には、パ
ラフィン包理方法、電子顕微鏡観察用の包理方法、およ
び走査式顕微鏡観察用の包理方法等がある。この標本処
理方法においては、標本溶液を撹拌して溶液の交換を速
める必要がある。以下、これら従来の標本処理方法の詳
細である。 （イ）パラフィン包理方法： (1) 標本を１０％のホルマリン溶液に２時間漬けること
により固定する。 (2) 固定した標本を７０％アルコールに２時間漬ける (3) 〃 ９０％ 〃 ２ 〃 (4) 〃 ９０％ 〃 １ 〃 (5) 〃 １００％ 〃 １ 〃 (6) 〃 １００％ 〃 １ 〃 (7) 〃 １００％ トルエン１ 〃 (8) 〃 １００％ トルエン１ 〃 (9) 〃 ６０℃のパラフィンに漬けて２時間置く (10) 〃 (11) 〃 １時間半 (12)包理、硬化、切片後顕微鏡で観察 （ロ）電子顕微鏡による観察用の包理方法： (1) 標本は２．５％グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒ
ａｌｄｅｈｙｄｅ）液で２時間固定した後、緩衝液で洗
い、四酸化オスミウム（化学式１）で３０分間固定す
る。 (2) 固定した標本は４０％アルコールに漬けて１０分間置く (3) 〃 ７０％ 〃 １０分間〃 (4) 〃 ９０％ 〃 １０分間〃 (5) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (6) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (7) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (8) １：１のｓｐｕｒｒ／アルコールに漬けて１５分間置く (9) ３：１の 〃 １５分間〃 (10)１００％のｓｐｕｒｒに漬けて１５分間置く (11) 〃 ６０分間〃 (12)包理、硬化、切片し電子顕微鏡で観察 （ハ）走査電子顕微鏡による観察用の包理方法： (1) 標本は２．５％グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒ
ａｌｄｅｈｙｄｅ）液に２時間漬けて固定したのち緩衝
液で洗う。 (2) 固定した標本は４０％アルコールに漬けて１０分間漬ける (3) 〃 ７０％ 〃 １０分間〃 (4) 〃 ９０％ 〃 １０分間〃 (5) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (6) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (7) 〃 １００％アセトン（Ａｃｅｔｏｎｅ）に置いて１時間 (8) 〃 １００％ 〃 １時間 (9) 臨界点の温度で乾燥する。 (10)走査電子顕微鏡で観察する。
ラフィン包理方法、電子顕微鏡観察用の包理方法、およ
び走査式顕微鏡観察用の包理方法等がある。この標本処
理方法においては、標本溶液を撹拌して溶液の交換を速
める必要がある。以下、これら従来の標本処理方法の詳
細である。 （イ）パラフィン包理方法： (1) 標本を１０％のホルマリン溶液に２時間漬けること
により固定する。 (2) 固定した標本を７０％アルコールに２時間漬ける (3) 〃 ９０％ 〃 ２ 〃 (4) 〃 ９０％ 〃 １ 〃 (5) 〃 １００％ 〃 １ 〃 (6) 〃 １００％ 〃 １ 〃 (7) 〃 １００％ トルエン１ 〃 (8) 〃 １００％ トルエン１ 〃 (9) 〃 ６０℃のパラフィンに漬けて２時間置く (10) 〃 (11) 〃 １時間半 (12)包理、硬化、切片後顕微鏡で観察 （ロ）電子顕微鏡による観察用の包理方法： (1) 標本は２．５％グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒ
ａｌｄｅｈｙｄｅ）液で２時間固定した後、緩衝液で洗
い、四酸化オスミウム（化学式１）で３０分間固定す
る。 (2) 固定した標本は４０％アルコールに漬けて１０分間置く (3) 〃 ７０％ 〃 １０分間〃 (4) 〃 ９０％ 〃 １０分間〃 (5) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (6) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (7) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (8) １：１のｓｐｕｒｒ／アルコールに漬けて１５分間置く (9) ３：１の 〃 １５分間〃 (10)１００％のｓｐｕｒｒに漬けて１５分間置く (11) 〃 ６０分間〃 (12)包理、硬化、切片し電子顕微鏡で観察 （ハ）走査電子顕微鏡による観察用の包理方法： (1) 標本は２．５％グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒ
ａｌｄｅｈｙｄｅ）液に２時間漬けて固定したのち緩衝
液で洗う。 (2) 固定した標本は４０％アルコールに漬けて１０分間漬ける (3) 〃 ７０％ 〃 １０分間〃 (4) 〃 ９０％ 〃 １０分間〃 (5) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (6) 〃 １００％ 〃 １０分間〃 (7) 〃 １００％アセトン（Ａｃｅｔｏｎｅ）に置いて１時間 (8) 〃 １００％ 〃 １時間 (9) 臨界点の温度で乾燥する。 (10)走査電子顕微鏡で観察する。
【０００４】上記３つの標本処理方法は、いずれも小さ
い細胞の処理方法として適しており、しかも細胞は細胞
骨格（ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）により支持されてい
るため、標本の萎縮変形は見られない。しかし、胚胎な
どの比較的体積が大きな組織の標本を作る場合には、脱
水処理が難しく、変形し易いことが知られている。ま
た、同一種類の溶液を異なる濃度でいくつも用意しなけ
ればならない。一方、図２に示されるように、漸次濃度
を変化させる方法は、高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）などの生化学処理に適さない。なぜならば、組
織標本は構造が緻密で厚みを有するため、外表の濃度が
変化してもすぐには組織標本内部に浸透しない。このた
め漸次濃度変化させる方法は組織標本処理には適しない
とされていた。
い細胞の処理方法として適しており、しかも細胞は細胞
骨格（ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ）により支持されてい
るため、標本の萎縮変形は見られない。しかし、胚胎な
どの比較的体積が大きな組織の標本を作る場合には、脱
水処理が難しく、変形し易いことが知られている。ま
た、同一種類の溶液を異なる濃度でいくつも用意しなけ
ればならない。一方、図２に示されるように、漸次濃度
を変化させる方法は、高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）などの生化学処理に適さない。なぜならば、組
織標本は構造が緻密で厚みを有するため、外表の濃度が
変化してもすぐには組織標本内部に浸透しない。このた
め漸次濃度変化させる方法は組織標本処理には適しない
とされていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、各濃度の包
理溶液を用意する必要がなく、漸次標本溶液の濃度を変
化させることができ、標本の萎縮変形を起こさない、組
織標本の処理方法を提供することを課題とする。
理溶液を用意する必要がなく、漸次標本溶液の濃度を変
化させることができ、標本の萎縮変形を起こさない、組
織標本の処理方法を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】図３、４及び５に示され
るように、本発明は、蠕動ポンプ（ｐｅｒｉｓｔａｔｉ
ｃ ｐｕｍｐ）の圧縮あるいは吸い出しを利用し、処理
槽において一定の圧力を保持し、入れ換え溶液Ｓａを攪
拌中の標本溶液Ｓｏに注入し、余った混合溶液を廃水瓶
に流入させて標本溶液の濃度を漸次増加させるものであ
る。
るように、本発明は、蠕動ポンプ（ｐｅｒｉｓｔａｔｉ
ｃ ｐｕｍｐ）の圧縮あるいは吸い出しを利用し、処理
槽において一定の圧力を保持し、入れ換え溶液Ｓａを攪
拌中の標本溶液Ｓｏに注入し、余った混合溶液を廃水瓶
に流入させて標本溶液の濃度を漸次増加させるものであ
る。
【０００７】本発明は圧縮方法（図３）と吸い出し方法
（図４）および密閉式の方法（図５）があるが、そのう
ち圧縮方法（図３）は、蠕動ポンプの圧縮空気により処
理槽における一定の圧力を保持し、入れ換え溶液Ｓａを
攪拌中の標本溶液Ｓｏに徐々に注入し、溢れた混合溶液
を廃水瓶に流入させて標本溶液の濃度を漸次増加させる
ものである。そのうちＶ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４はバルブ
であり、溶液の入れ換えを円滑に行うために設ける。特
に、Ｖ４は容器Ｏ中の溶液を完全に流出させ、速やかに
標本溶液の交換を行うために設ける。
（図４）および密閉式の方法（図５）があるが、そのう
ち圧縮方法（図３）は、蠕動ポンプの圧縮空気により処
理槽における一定の圧力を保持し、入れ換え溶液Ｓａを
攪拌中の標本溶液Ｓｏに徐々に注入し、溢れた混合溶液
を廃水瓶に流入させて標本溶液の濃度を漸次増加させる
ものである。そのうちＶ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４はバルブ
であり、溶液の入れ換えを円滑に行うために設ける。特
に、Ｖ４は容器Ｏ中の溶液を完全に流出させ、速やかに
標本溶液の交換を行うために設ける。
【０００８】本発明の処理方法において、密閉式の方法
を使用する場合（図５）は、バルブＶ３を省くことがで
きる。また、バルブＶ３を利用して容器Ｏの有効体積Ｖ
ｏまたは液面高度を調節して直接バルブＶ４から廃液を
流出させてもよい。なお、この様な容器Ｏの有効体積Ｖ
ｏの調節は、標本の数量や体積に従って行い、試剤の使
用を節約できる。
を使用する場合（図５）は、バルブＶ３を省くことがで
きる。また、バルブＶ３を利用して容器Ｏの有効体積Ｖ
ｏまたは液面高度を調節して直接バルブＶ４から廃液を
流出させてもよい。なお、この様な容器Ｏの有効体積Ｖ
ｏの調節は、標本の数量や体積に従って行い、試剤の使
用を節約できる。
【０００９】本発明の吸い出し方法（図４）は、蠕動ポ
ンプの吸い出した空気により処理槽における一定の吸い
出し力を保持し、入れ換え溶液Ｓａを攪拌中の標本溶液
Ｓｏに徐々に注入し、余った混合溶液を廃水瓶に吸い出
すものである。
ンプの吸い出した空気により処理槽における一定の吸い
出し力を保持し、入れ換え溶液Ｓａを攪拌中の標本溶液
Ｓｏに徐々に注入し、余った混合溶液を廃水瓶に吸い出
すものである。
【００１０】
【作用】本発明の圧縮方法および吸い出し方法による容
器Ｏ中の濃度変化は図６、図７に示される通りであり、
濃度は後述の数式１により算出したものである。なお、
Ｘ軸の目盛りは１分あるいは１単位時間を表す。また注
入速度Ｒは、原始溶液の体積Ｖｏに対する相対値で表
す。
器Ｏ中の濃度変化は図６、図７に示される通りであり、
濃度は後述の数式１により算出したものである。なお、
Ｘ軸の目盛りは１分あるいは１単位時間を表す。また注
入速度Ｒは、原始溶液の体積Ｖｏに対する相対値で表
す。
【数１】 なお、数式１において、 Ｖｏ：容器Ｏの有効使用体積 Ｖａ：容器Ａの有効使用体積 Ｖｔ：時間ｔ後の容器Ａから容器Ｏに注入した入れ換え
溶液Ｓａの注入量 Ｃａ：入れ換え容器Ｓａの濃度 Ｃｔ：時間ｔ後（Ｖｔ量注入後）の容器Ｏ中の混合溶液
の濃度 であり、ＶｔおよびＶｏを式１に代入することによりＣ
ｔが得られる。
溶液Ｓａの注入量 Ｃａ：入れ換え容器Ｓａの濃度 Ｃｔ：時間ｔ後（Ｖｔ量注入後）の容器Ｏ中の混合溶液
の濃度 であり、ＶｔおよびＶｏを式１に代入することによりＣ
ｔが得られる。
【００１１】図６に示されるように、入れ換え溶液の注
入速度を変化させ、濃度変化曲線を変化させることがで
きる。すなわち、注入速度がゆっくりになるほど、初期
の曲線の傾斜度（Ｓｌｏｐｅ）は低い。
入速度を変化させ、濃度変化曲線を変化させることがで
きる。すなわち、注入速度がゆっくりになるほど、初期
の曲線の傾斜度（Ｓｌｏｐｅ）は低い。
【００１２】図７は本発明の方法において、速度ＲをＶ
ｏ／２００とした場合の標本溶液の濃度変化の状態を示
しており、濃度は滑らかな曲線を描いて徐々に変化して
いることがわかる。以下の表１は、数式１によって得ら
れた数値を表にしたものであり、Ｖｏの何倍の容積の入
れ換え溶液Ｓａを注入すれば容器Ｏ中の混合溶液の濃度
が入れ換え溶液Ｓａの濃度に近くなるかを示す。 表 １ Ｖｔ／Ｖｏ Ｃｔ １．０ ６３．２１％ １．５ ７７．６８％ ２．０ ８６．４６％ ２．５ ９１．７９％ ３．０ ９５．０２％ ３．５ ９６．９８％ ４．０ ９８．１６％ ４．５ ９８．８８％ ５．０ ９９．３２％ ５．５ ９９．５９％ ６．０ ９９．７５％ ６．５ ９９．８４％ ７．０ ９９．９０％ 表１から判断して、容器Ａ中の溶液の体積ＶａはＶｏの
３倍程度とし、濃度が９５％に達した後は、容器Ｏ中の
溶液を完全に吸い出して、その後１００％のＳａ溶液を
注入して完全に溶液入れ換えの目的を達するのがよい。
さらに、１００％のＳａ溶液への入れ換えを２回あるい
はそれより多く行うことで入れ換えをさらに確実に行う
ことができる。また、密閉系統を使用する場合にはバル
ブＶ３を省き、直接Ｖ４から廃液を流出させる。またＶ
ｏの体積を標本の数量や体積に従って調節することによ
り、試剤を節約することができる。
ｏ／２００とした場合の標本溶液の濃度変化の状態を示
しており、濃度は滑らかな曲線を描いて徐々に変化して
いることがわかる。以下の表１は、数式１によって得ら
れた数値を表にしたものであり、Ｖｏの何倍の容積の入
れ換え溶液Ｓａを注入すれば容器Ｏ中の混合溶液の濃度
が入れ換え溶液Ｓａの濃度に近くなるかを示す。 表 １ Ｖｔ／Ｖｏ Ｃｔ １．０ ６３．２１％ １．５ ７７．６８％ ２．０ ８６．４６％ ２．５ ９１．７９％ ３．０ ９５．０２％ ３．５ ９６．９８％ ４．０ ９８．１６％ ４．５ ９８．８８％ ５．０ ９９．３２％ ５．５ ９９．５９％ ６．０ ９９．７５％ ６．５ ９９．８４％ ７．０ ９９．９０％ 表１から判断して、容器Ａ中の溶液の体積ＶａはＶｏの
３倍程度とし、濃度が９５％に達した後は、容器Ｏ中の
溶液を完全に吸い出して、その後１００％のＳａ溶液を
注入して完全に溶液入れ換えの目的を達するのがよい。
さらに、１００％のＳａ溶液への入れ換えを２回あるい
はそれより多く行うことで入れ換えをさらに確実に行う
ことができる。また、密閉系統を使用する場合にはバル
ブＶ３を省き、直接Ｖ４から廃液を流出させる。またＶ
ｏの体積を標本の数量や体積に従って調節することによ
り、試剤を節約することができる。
【００１３】
【実施例】以下、本発明の実施例１、すなわちパラフィ
ン包理方法のステップを述べる。 (1) 標本を１０％のホルマリン溶液中に入れて固定保存
する。２時間以下漬けることで完全に固定する。 (2) 固定した標本を処理容器内に置き、ポンプの圧縮空
気を利用して圧力を一定に保持し、１００％のアルコー
ルをゆっくりと攪拌中の標本溶液に注入する。なお、原
標本溶液の高度および入れ換え後の溶液の高度は標本を
完全に覆うものとする。余った混合溶液は、廃水瓶中へ
流出、あるいは吸い出される。使用する１００％アルコ
ールは原溶液量の３倍程度、所用時間は３時間である。 (3) 溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出し、１０
０％アルコール原高度まで注入し、１時間攪拌する。 (4) さらに、溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出
し、１００％アルコールを原高度まで注入し、１時間攪
拌する。 (5)-(7) ステップ(2)-(4) とほぼ同じであるが、溶液を
１００％トルエンとする。 (8)-(10)スップ(2)-(4) とほぼ同じであるが、溶液を６
０℃のパラフィンとし、関係部分の温度を６０度に保
ち、パラフィンが固まるのを防ぐ。なお、従来のパラフ
ィン包理方法のステップ(9)-(11)においては、パラフィ
ンが固まる心配はない。 (11)包理、硬化、切片、顕微鏡観察を行う。 以下、本発明の実施例２、すなわち電子顕微鏡による観
察のための包理方法のステップを述べる。 (1) 標本２．５％グルタルアルデヒド溶液中に入れ、２
時間で固定し、緩衝液で洗う。その後以下の化学式１に
よりさらに３０分間固定する。
ン包理方法のステップを述べる。 (1) 標本を１０％のホルマリン溶液中に入れて固定保存
する。２時間以下漬けることで完全に固定する。 (2) 固定した標本を処理容器内に置き、ポンプの圧縮空
気を利用して圧力を一定に保持し、１００％のアルコー
ルをゆっくりと攪拌中の標本溶液に注入する。なお、原
標本溶液の高度および入れ換え後の溶液の高度は標本を
完全に覆うものとする。余った混合溶液は、廃水瓶中へ
流出、あるいは吸い出される。使用する１００％アルコ
ールは原溶液量の３倍程度、所用時間は３時間である。 (3) 溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出し、１０
０％アルコール原高度まで注入し、１時間攪拌する。 (4) さらに、溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出
し、１００％アルコールを原高度まで注入し、１時間攪
拌する。 (5)-(7) ステップ(2)-(4) とほぼ同じであるが、溶液を
１００％トルエンとする。 (8)-(10)スップ(2)-(4) とほぼ同じであるが、溶液を６
０℃のパラフィンとし、関係部分の温度を６０度に保
ち、パラフィンが固まるのを防ぐ。なお、従来のパラフ
ィン包理方法のステップ(9)-(11)においては、パラフィ
ンが固まる心配はない。 (11)包理、硬化、切片、顕微鏡観察を行う。 以下、本発明の実施例２、すなわち電子顕微鏡による観
察のための包理方法のステップを述べる。 (1) 標本２．５％グルタルアルデヒド溶液中に入れ、２
時間で固定し、緩衝液で洗う。その後以下の化学式１に
よりさらに３０分間固定する。
【化１】Ｏｓ０4 (2) 標本を処理容器内に置き入れポンプの圧縮空気を利
用して圧力を一定に保持し、１００％のアルコールをゆ
っくりと攪拌中の標本溶液に注入する。なお、原標本溶
液の高度および入れ換え後の溶液の高度は標本を完全に
覆うものとする。余った混合溶液は、廃水瓶中への流
出、あるいは吸い出される。使用する１００％アルコー
ルは原溶液量の３倍程度、所用時間は３０分である。 (3) 溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出し、１０
０％アルコールを原高度まで注入し、１０分間攪拌す
る。 (4) さらに、溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出
し、１００％アルコールを原高度まで注入し、１０分間
攪拌する。 (5)-(7) ステップ(2)-(4) とほぼ同じであるが、溶液を
１００％Ｓｐｕｒｒとする。 (8) 包埋、硬化、極薄く切片し、電子顕微鏡で観察す
る。 以下、本発明の実施例３、すなわち走査電子顕微鏡観察
のための包埋方法のステップを述べる。 (1) 標本を２．５％グルタルアルデヒド溶液中に入れ、
２時間で固定し、緩衝液で洗う。 (2) 標本を処理容器内に置き入れ、ポンプの圧縮空気を
利用して圧力を一定に保持し、１００％のアルコールを
ゆっくりと攪拌中の標本溶液に注入する。なお、原標本
溶液の高度および入れ換え後の溶液の高度は標本を完全
に覆うものとする。余った混合溶液は、廃水瓶中へ流
出、あるいは吸い出される。使用する１００％アルコー
ルは原溶液量の３倍程度、所要時間は３０分である。 (3) 溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出し、１０
０％アルコールを原高度まで注入し、１０分間攪拌す
る。 (4) さらに、溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出
し、１００％アルコールを原高度まで注入し、１０分間
攪拌する。 (5)-(7) ステップ(2)-(4) とほぼ同じであるが、溶液を
１００％アセトンとする。 (8) 臨界点で乾燥処理を行う。 (9) 走査電子顕微鏡で観察を行う。
用して圧力を一定に保持し、１００％のアルコールをゆ
っくりと攪拌中の標本溶液に注入する。なお、原標本溶
液の高度および入れ換え後の溶液の高度は標本を完全に
覆うものとする。余った混合溶液は、廃水瓶中への流
出、あるいは吸い出される。使用する１００％アルコー
ルは原溶液量の３倍程度、所用時間は３０分である。 (3) 溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出し、１０
０％アルコールを原高度まで注入し、１０分間攪拌す
る。 (4) さらに、溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出
し、１００％アルコールを原高度まで注入し、１０分間
攪拌する。 (5)-(7) ステップ(2)-(4) とほぼ同じであるが、溶液を
１００％Ｓｐｕｒｒとする。 (8) 包埋、硬化、極薄く切片し、電子顕微鏡で観察す
る。 以下、本発明の実施例３、すなわち走査電子顕微鏡観察
のための包埋方法のステップを述べる。 (1) 標本を２．５％グルタルアルデヒド溶液中に入れ、
２時間で固定し、緩衝液で洗う。 (2) 標本を処理容器内に置き入れ、ポンプの圧縮空気を
利用して圧力を一定に保持し、１００％のアルコールを
ゆっくりと攪拌中の標本溶液に注入する。なお、原標本
溶液の高度および入れ換え後の溶液の高度は標本を完全
に覆うものとする。余った混合溶液は、廃水瓶中へ流
出、あるいは吸い出される。使用する１００％アルコー
ルは原溶液量の３倍程度、所要時間は３０分である。 (3) 溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出し、１０
０％アルコールを原高度まで注入し、１０分間攪拌す
る。 (4) さらに、溶液を全て廃水瓶中に流出させるか吸い出
し、１００％アルコールを原高度まで注入し、１０分間
攪拌する。 (5)-(7) ステップ(2)-(4) とほぼ同じであるが、溶液を
１００％アセトンとする。 (8) 臨界点で乾燥処理を行う。 (9) 走査電子顕微鏡で観察を行う。
【００１４】
（イ） 図８に示されるように、漸次に溶液濃度を変化
させる方法（指数曲線に示される）により、標本の萎縮
変形を防ぐことができる。 （ロ） 入れ換え溶液Ｓａの利用体積Ｖａを容器Ｏの有
効使用体積Ｖｏの３倍程度にし、注入する総体積Ｖｔが
Ｖｏの３倍となったとき、濃度は９５％に達する。その
後、直接１００％のＳａ溶液を注入することにより、Ｓ
ａ溶液の浪費並びに時間の浪費を防ぎ、また変形が起こ
ることなく標本処理が行える。 （ハ） 蠕動ポンプおよび圧送する空気の気圧および重
力を利用し、Ｓａ溶液をＳｏ中に注入する速度を等し
く、しかもゆっくりにする。 （ニ） 直接ポンプで溶液を注入しないために、溶液の
圧縮管に対する不良作用を防ぐことができる。不良作用
には、例えばキシレンによりシリコンチューブ（ｓｉｌ
ｉｃｏｎｅ ｔｕｂｉｎｇ）が膨脹弯曲する例がある。 （ホ） 多種の異なる濃度の溶液を異なる容器にいれて
準備する必要がない。 （ヘ） 毎回の処理で完全に新しいＳａ溶液を使用する
が、キシレンの代替物であるＨｅｍｏ−Ｄｅ，Ｈｉｓｔ
ｏ−Ｃｌｅａｒ，Ａｍｅｒｉ Ｃｌｅａｒ等を使用して
ｘｙｌｅｎｅ等の溶剤使用による人体への危険を防ぐ場
合には、２回目以上の使用においても混濁現象（Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７：７５２−５
１９８６による）を発生しない。 （ト） 溶液の交換回数を減らし、作業能率を高める。 （チ） 本発明の方法は、光学顕微鏡および電子顕微鏡
による観察のための標本処理に使用できるばかりでな
く、切片あるいは塗抹標本にも用いることができる。な
お、図９に示されるのは、人体の肝臓細胞および植物の
トマトの細胞を本発明の方法により処理し、パラフィン
で包埋したものの切片を光学顕微鏡で観察したものであ
り、本発明の特徴および効果を明らかにみることができ
る。
させる方法（指数曲線に示される）により、標本の萎縮
変形を防ぐことができる。 （ロ） 入れ換え溶液Ｓａの利用体積Ｖａを容器Ｏの有
効使用体積Ｖｏの３倍程度にし、注入する総体積Ｖｔが
Ｖｏの３倍となったとき、濃度は９５％に達する。その
後、直接１００％のＳａ溶液を注入することにより、Ｓ
ａ溶液の浪費並びに時間の浪費を防ぎ、また変形が起こ
ることなく標本処理が行える。 （ハ） 蠕動ポンプおよび圧送する空気の気圧および重
力を利用し、Ｓａ溶液をＳｏ中に注入する速度を等し
く、しかもゆっくりにする。 （ニ） 直接ポンプで溶液を注入しないために、溶液の
圧縮管に対する不良作用を防ぐことができる。不良作用
には、例えばキシレンによりシリコンチューブ（ｓｉｌ
ｉｃｏｎｅ ｔｕｂｉｎｇ）が膨脹弯曲する例がある。 （ホ） 多種の異なる濃度の溶液を異なる容器にいれて
準備する必要がない。 （ヘ） 毎回の処理で完全に新しいＳａ溶液を使用する
が、キシレンの代替物であるＨｅｍｏ−Ｄｅ，Ｈｉｓｔ
ｏ−Ｃｌｅａｒ，Ａｍｅｒｉ Ｃｌｅａｒ等を使用して
ｘｙｌｅｎｅ等の溶剤使用による人体への危険を防ぐ場
合には、２回目以上の使用においても混濁現象（Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７：７５２−５
１９８６による）を発生しない。 （ト） 溶液の交換回数を減らし、作業能率を高める。 （チ） 本発明の方法は、光学顕微鏡および電子顕微鏡
による観察のための標本処理に使用できるばかりでな
く、切片あるいは塗抹標本にも用いることができる。な
お、図９に示されるのは、人体の肝臓細胞および植物の
トマトの細胞を本発明の方法により処理し、パラフィン
で包埋したものの切片を光学顕微鏡で観察したものであ
り、本発明の特徴および効果を明らかにみることができ
る。
【図１】従来の段階式（ｓｔｅｐｗｉｓｅ）濃度変化方
法を示す図である。
法を示す図である。
【図２】ＨＰＬＣ等の生化学処理において使用される従
来の漸次濃度変化方法を示す図である。
来の漸次濃度変化方法を示す図である。
【図３】本発明の処理方法のうち、圧縮方法を示す図で
ある。
ある。
【図４】本発明の処理方法のうち、吸い出し方法を示す
図である。
図である。
【図５】本発明の処理方法のうち、密閉系統を使用した
方法を示す図である。
方法を示す図である。
【図６】本発明の方法による容器Ｏ中の濃度変化を示す
図である。
図である。
【図７】本発明による、速度ＲをＶｏ／２００とした場
合の容器Ｏ中の濃度変化と、点線で示される従来の段階
式濃度変化方法による濃度変化を示す図である。
合の容器Ｏ中の濃度変化と、点線で示される従来の段階
式濃度変化方法による濃度変化を示す図である。
【図８】本発明の方法と従来の方法の標本への影響を１
５０倍に拡大して比較する図であり、Ａは光学顕微鏡で
脱水処理を行わないミクロカプセルを観察したものであ
る。Ｂは走査電子顕微鏡で観察した本発明方法により処
理したミクロカプセルである。Ｃ，Ｄは、従来の方法で
脱水処理を行ったミクロカプセルを、それぞれ光学顕微
鏡での切片を観察したもの（Ｃ）、および走査電子顕微
鏡で観察したもの（Ｄ）である。
５０倍に拡大して比較する図であり、Ａは光学顕微鏡で
脱水処理を行わないミクロカプセルを観察したものであ
る。Ｂは走査電子顕微鏡で観察した本発明方法により処
理したミクロカプセルである。Ｃ，Ｄは、従来の方法で
脱水処理を行ったミクロカプセルを、それぞれ光学顕微
鏡での切片を観察したもの（Ｃ）、および走査電子顕微
鏡で観察したもの（Ｄ）である。
【図９】本発明の方法により処理の後、光学顕微鏡で観
察した人体の肝臓細胞の写真（Ａ）（×４００）、およ
びトマトの細胞（Ｂ）（×１６０）である。
察した人体の肝臓細胞の写真（Ａ）（×４００）、およ
びトマトの細胞（Ｂ）（×１６０）である。
Ａ…ホルマリン Ｂ…アルコール Ｃ…組織標本
Ｄ…絶対アルコール Ｅ…トルエン（以上図１） Ａ…フィルター Ｂ…蠕動ポンプ Ｃ…組織標本
Ｄ…スタント Ｅ…磁石攪拌器 Ｆ…廃料（以上図３，４，５）
Ｄ…絶対アルコール Ｅ…トルエン（以上図１） Ａ…フィルター Ｂ…蠕動ポンプ Ｃ…組織標本
Ｄ…スタント Ｅ…磁石攪拌器 Ｆ…廃料（以上図３，４，５）
【手続補正書】
【提出日】平成６年１１月９日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】従来の段階式（Ｓｔｅｐｗｉｓｅ）濃度変化方
法を示す図である。
法を示す図である。
【図２】ＨＰＬＣ等の生化学処理において使用される従
来の漸次濃度変化方法を示す図である。
来の漸次濃度変化方法を示す図である。
【図３】本発明の処理方法のうち、圧縮方法を示す図で
ある。
ある。
【図４】本発明の処理方法のうち、吸い出し方法を示す
図である。
図である。
【図５】本発明の処理方法のうち、密閉系統を使用した
方法を示す図である。
方法を示す図である。
【図６】本発明の方法による容器Ｏ中の濃度変化を示す
図である。
図である。
【図７】本発明の方法による、速度ＲをＶｏ／２００と
した場合の容器０中の濃度変化と、点線で示される従来
の段階式濃度変化方法による濃度変化を示す図である。
した場合の容器０中の濃度変化と、点線で示される従来
の段階式濃度変化方法による濃度変化を示す図である。
【図８】本発明の方法と従来の方法の標本への影響を１
５０倍に拡大して比較する写真であり、Ａは光学顕微鏡
で脱水処理を行わないミクロカプセルを観察した写真で
ある。Ｂは走査電子顕微鏡で観察した本発明方法により
処理したミクロカプセルの写真である。Ｃ、Ｄは、従来
の方法で脱水処理を行ったミクロカプセルを、それぞれ
光学顕微鏡での切片を観察した写真（Ｃ）、および走査
電子顕微鏡で観察した写真（Ｄ）である。
５０倍に拡大して比較する写真であり、Ａは光学顕微鏡
で脱水処理を行わないミクロカプセルを観察した写真で
ある。Ｂは走査電子顕微鏡で観察した本発明方法により
処理したミクロカプセルの写真である。Ｃ、Ｄは、従来
の方法で脱水処理を行ったミクロカプセルを、それぞれ
光学顕微鏡での切片を観察した写真（Ｃ）、および走査
電子顕微鏡で観察した写真（Ｄ）である。
【図９】本発明の方法により処理の後、光学顕微鏡で観
察した人体の肝臓細胞の写真（Ａ）（×４００）、およ
びトマトの細胞（Ｂ）（×１６０）である。 ─────────────────────────────────────────────────────
察した人体の肝臓細胞の写真（Ａ）（×４００）、およ
びトマトの細胞（Ｂ）（×１６０）である。 ─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成６年１１月９日
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図６】
【図７】
【図８】
【図５】
【図９】
Claims (4)
- 【請求項１】 気圧を利用し、処理槽において均等で安
定した圧力を生じ、入れ換え溶液を徐々に標本溶液に注
入して余った混合後の溶液を廃水瓶へ排出して標本溶液
の濃度を徐々に増加する、標本の萎縮変形を防ぐ組織標
本の処理方法。 - 【請求項２】 処理槽における安定した圧力はポンプに
よる空気の吸引および圧縮により得ることを特徴とする
請求項１に記載の組織標本の処理方法。 - 【請求項３】 標本の数量によって容積を調整できる請
求項２に記載の組織標本の処理方法。 - 【請求項４】 入れ換え溶液の容積は標本溶液の３倍程
度とし、入れ換え溶液の濃度は９５％以下とし、その後
直接濃度１００％の入れ換え溶液を注入できる請求項２
に記載の組織標本の処理方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5228017A JPH07151659A (ja) | 1993-08-20 | 1993-08-20 | 組織標本の処理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5228017A JPH07151659A (ja) | 1993-08-20 | 1993-08-20 | 組織標本の処理方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07151659A true JPH07151659A (ja) | 1995-06-16 |
Family
ID=16869890
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5228017A Pending JPH07151659A (ja) | 1993-08-20 | 1993-08-20 | 組織標本の処理方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07151659A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020523597A (ja) * | 2017-07-25 | 2020-08-06 | ライカ ビオズュステムス ヌスロッホ ゲーエムベーハー | 組織試料を調製する、特に組織試料を含むワックスブロックを作製する方法 |
| CN112945657A (zh) * | 2021-01-22 | 2021-06-11 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种制备植物材料石蜡切片的前处理装置及方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6267422A (ja) * | 1985-09-19 | 1987-03-27 | Toyota Motor Corp | 車両のパタ−ン走行試験用ロボツト |
| JPH0552453A (ja) * | 1991-08-26 | 1993-03-02 | Sanyo Electric Co Ltd | エンジン駆動ヒートポンプにおけるエアー抜き方法 |
-
1993
- 1993-08-20 JP JP5228017A patent/JPH07151659A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6267422A (ja) * | 1985-09-19 | 1987-03-27 | Toyota Motor Corp | 車両のパタ−ン走行試験用ロボツト |
| JPH0552453A (ja) * | 1991-08-26 | 1993-03-02 | Sanyo Electric Co Ltd | エンジン駆動ヒートポンプにおけるエアー抜き方法 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020523597A (ja) * | 2017-07-25 | 2020-08-06 | ライカ ビオズュステムス ヌスロッホ ゲーエムベーハー | 組織試料を調製する、特に組織試料を含むワックスブロックを作製する方法 |
| CN112945657A (zh) * | 2021-01-22 | 2021-06-11 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种制备植物材料石蜡切片的前处理装置及方法 |
| CN112945657B (zh) * | 2021-01-22 | 2023-08-25 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种制备植物材料石蜡切片的前处理装置及方法 |
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