JPH07138261A - スピロ化合物及びその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 チロシナーゼ阻害を示すスピロ化合物を提
供する。 【構成】 式（Ｉ） 【化１】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ およびＲ⁵ はそ
れぞれ独立して、水酸基または低級アシルオキシ基であ
り、ｎは０または１を意味する。］で表わされるスピロ
化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、チロシナーゼ阻害剤に
関する。

【０００２】

【従来技術】シミ、ソバカスや日焼けによる皮膚の黒化
現象は、皮膚の表皮基底細胞層に存在するメラノサイト
におけるメラニン色素の生成によるものである。

【０００３】メラニンの生成については、メラノサイト
中の細胞質顆粒メラノソーム中で、チロシンがチロシナ
ーゼ酵素により酸化されて、ドーパ、ドーパキノン、イ
ンドールキノンを経て生成される経路が知られており、
また、この経路では紫外線による自動酸化により、メラ
ニンの生成は促進されることも知られている。

【０００４】従って、メラニンの生成を阻害し、シミ、
ソバカスや日焼けによる皮膚の黒化現象を防止する手段
としては、チロシナーゼ酵素による酵素反応を阻害する
方法と紫外線を遮断する方法が考えられる。

【０００５】また、魚介類、青果物等の生鮮食料品にお
ける表面の黒化現象も、メラニン色素の生成によるもの
であり、チロシナーゼによる酵素反応を阻害することに
よって、黒化現象を防止できる。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、チロシ
ナーゼによる反応を阻害するものであって、前述の種々
の用途に有用な新規化合物を提供する。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、以下の（Ａ）
から（Ｋ）に関するものである。 （Ａ） 式（Ｉ）

【０００８】

【化４】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ およびＲ⁵ はそ
れぞれ独立して、水酸基または低級アシルオキシ基であ
り、ｎは０または１を意味する。］で表わされるスピロ
化合物、

【０００９】（Ｂ） 式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ お
よびＲ⁴ は水酸基であり、ｎは０であるスピロ化合物、

【００１０】（Ｃ） 式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ お
よびＲ⁴ はアセトキシ基であり、ｎは０であるスピロ化
合物、

【００１１】（Ｄ） 式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、
Ｒ⁴ およびＲ⁵ は水酸基であり、ｎは１であるスピロ化
合物、

【００１２】（Ｅ） 式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、
Ｒ⁴ およびＲ⁵ はアセトキシ基であり、ｎは１であるス
ピロ化合物、

【００１３】（Ｆ） フロログルシノールに、五炭糖も
しくは六炭糖を反応させることを特徴とする式（Ｉ）

【００１４】

【化５】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ およびＲ⁵ は水
酸基であり、ｎは０または１を意味する。］で表わされ
るスピロ化合物の製法、

【００１５】（Ｇ） フロログルシノールに、五炭糖も
しくは六炭糖を反応させ、次いで所望によりアシル化す
ることを特徴とする式（Ｉ）

【００１６】

【化６】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ およびＲ⁵ はそ
れぞれ独立して、水酸基または低級アシルオキシ基であ
り、ｎは０または１を意味する。］で表わされるスピロ
化合物の製法、

【００１７】（Ｈ） 式（Ｉ）で表わされるスピロ化合
物を含有することを特徴とするチロシナーゼ阻害剤、

【００１８】（Ｉ） 式（Ｉ）で表わされるスピロ化合
物を含有することを特徴とする化粧料、

【００１９】（Ｊ） 式（Ｉ）で表わされるスピロ化合
物を含有することを特徴とする美白化粧料及び

【００２０】（Ｋ） 式（Ｉ）で表わされるスピロ化合
物を含有することを特徴とする食品の黒化防止剤。

【００２１】以下に、式（Ｉ）で表わされる本発明のス
ピロ化合物における置換基の１種である低級アシルオキ
シ基につき説明する。

【００２２】低級アシルオキシ基としては、アセトキシ
基、プロピオニルオキシ基、ブチリルオキシ基、イソブ
チリルオキシ基、バレリルオキシ基、イソバレリルオキ
シ基、ピバロイルオキシ基及びヘキサノイルオキシ基等
を挙げることができる。

【００２３】以下に、式（Ｉ）中、ｎは０を意味する場
合における本発明のスピロ化合物、式（II）の具体例を
挙げる。

【００２４】

【化７】

【００２５】（１） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ およびＲ
⁴ のすべてが水酸基である、式（II）で表わされるスピ
ロ化合物。

【００２６】（２） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ およびＲ
⁴ のうちいずれか１つの置換基が低級アシルオキシ基で
あり、その他の置換基が水酸基である、式（II）で表わ
されるスピロ化合物。

【００２７】（３） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ およびＲ
⁴ のうちいずれか２つの置換基が低級アシルオキシ基で
あり、その他の置換基が水酸基である、式（II）で表わ
されるスピロ化合物。

【００２８】（４） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ およびＲ
⁴ のうちいずれか３つの置換基が低級アシルオキシ基で
あり、その他の置換基が水酸基である、式（II）で表わ
されるスピロ化合物。

【００２９】（５） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ およびＲ
⁴ のすべてが低級アシルオキシ基である、式（II）で表
わされるスピロ化合物。

【００３０】以下に、式（Ｉ）中、ｎは１を意味する場
合における本発明のスピロ化合物、式（III）の具体例
を挙げる。

【００３１】

【化８】

【００３２】（６） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ お
よびＲ⁵ のすべてが水酸基である、式（III）で表わさ
れるスピロ化合物。

【００３３】（７） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ お
よびＲ⁵ のうちいずれか１つの置換基が低級アシルオキ
シ基であり、その他の置換基が水酸基である、式（II
I）で表わされるスピロ化合物。

【００３４】（８） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ お
よびＲ⁵ のうちいずれか２つの置換基が低級アシルオキ
シ基であり、その他の置換基が水酸基である、式（II
I）で表わされるスピロ化合物。

【００３５】（９） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ お
よびＲ⁵ のうちいずれか３つの置換基が低級アシルオキ
シ基であり、その他の置換基が水酸基である、式（II
I）で表わされるスピロ化合物。

【００３６】（１０） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴
およびＲ⁵ のうちいずれか４つの置換基が低級アシルオ
キシ基であり、その他の置換基が水酸基である、式（II
I）で表わされるスピロ化合物。

【００３７】（１１） 置換基Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴
およびＲ⁵ のすべてが低級アシルオキシ基である、式
（III）で表わされるスピロ化合物。

【００３８】上述の具体例のうち、低級アシルオキシ基
が複数の場合は、各低級アシルオキシ基はそれぞれ同じ
であってもよく、または異なっていてもよい。

【００３９】以下に、式（II）における本発明のスピロ
化合物の代表例を挙げる。

【００４０】（ａ） 4,6,3',4'−テトラヒドロキシ−
4',5'−ジヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3H),2'(3'H)
−ジヒドロフラン］

【００４１】（ｂ） 4−アセトキシ−6,3',4'−トリヒ
ドロキシ−4',5'−ジヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3
H),2'(3'H)−ジヒドロフラン］

【００４２】（ｃ） 4,6−ジアセトキシ−3',4'−ジヒ
ドロキシ−4',5'−ジヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3
H),2'(3'H)−ジヒドロフラン］

【００４３】（ｄ） 4−アセトキシ−6−イソバレリル
オキシ−3',4'−ジヒドロキシ−4',5'−ジヒドロスピロ
［ベンゾフラン−2(3H),2'(3'H)−ジヒドロフラン］

【００４４】（ｅ） 4,6,3'−トリアセトキシ−4'−ヒ
ドロキシ−4',5'−ジヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3
H),2'(3'H)−ジヒドロフラン］

【００４５】（ｆ） 4−アセトキシ−6−イソバレリル
オキシ−3'−ピバロイルオキシ−4'−ヒドロキシ−4',
5'−ジヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3H),2'(3'H)−
ジヒドロフラン］

【００４６】（ｇ） 4,6,3',4'−テトラアセトキシ−
4',5'−ジヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3H),2'(3'H)
−ジヒドロフラン］

【００４７】（ｈ） 4−アセトキシ−6−イソバレリル
オキシ−3'−ピバロイルオキシ−４'−プロピオニルオ
キシ−4',5'−ジヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3H),
2'(3'H)−ジヒドロフラン］

【００４８】以下に、式（III）における本発明のスピ
ロ化合物の代表例を挙げる。

【００４９】（ｉ） 4,6,3',4',5'−ペンタヒドロキシ
−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ［ベンゾフラン−2
(3H),2'(2'H)−ピラン］

【００５０】（ｊ） 4−アセトキシ−6,3',4',5'−テ
トラヒドロキシ−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ
［ベンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラン］

【００５１】（ｋ） 4,6−ジアセトキシ−3',4',5'−
トリヒドロキシ−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ
［ベンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラン］

【００５２】（ｌ） 4−アセトキシ−6−ブチリルオキ
シ−3',4',5'−トリヒドロキシ−3',4',5',6'−テトラ
ヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラ
ン］

【００５３】（ｍ） 4,6,3'−トリアセトキシ−4',5'
−ジヒドロキシ−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ
［ベンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラン］

【００５４】（ｎ） 4−アセトキシ−6−ブチリルオキ
シ−3',4'−ジヒドロキシ−5'−プロピオニルオキシ−
3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3
H),2'(2'H)−ピラン］

【００５５】（ｏ） 4,6,3',4'−テトラアセトキシ−
5'−ヒドロキシ−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ
［ベンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラン］

【００５６】（ｐ） 4−アセトキシ−6−ブチリルオキ
シ−3'−ヒドロキシ−4'−プロピオニルオキシ−5'−バ
レリルオキシ−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ［ベ
ンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラン］

【００５７】（ｑ） 4,6,3',4',5'−ペンタアセトキシ
−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ［ベンゾフラン−2
(3H),2'(2'H)−ピラン］

【００５８】上記記載の本発明のスピロ化合物の代表例
は、本発明のスピロ化合物における一例であり、本発明
のスピロ化合物はこれらにのみ限定されない。

【００５９】本発明のスピロ化合物は、以下に示すとお
り３個ないし４個の不斉炭素（＊）を有するため、種々
の光学異性体が存在するが、全ての光学異性体は本発明
の範囲に含まれ、これらの異性体は単一であってもまた
混合物であっても本発明に係る化合物に含まれる。

【００６０】

【化９】

【００６１】

【化１０】

【００６２】本発明のスピロ化合物は下記方法で製造す
ることができる。

【００６３】すなわち、フロログルシノールに、五炭糖
もしくは六炭糖を反応させ（反応工程［Ｉ］）、所望に
より、更にアシル化することにより、式（Ｉ）で表わさ
れるスピロ化合物を製造することができる。

【００６４】

【化１１】

【００６５】［式中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ およびＲ
⁵ はそれぞれ独立して、水酸基または低級アシルオキシ
基であり、ｎは０または１を意味する。］

【００６６】反応工程［Ｉ］は溶媒中で行うことができ
る。本反応工程［Ｉ］に用いられる溶媒としては、反応
の進行を妨げなければ、特に制限はないが、例えば、ジ
メチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド等の溶媒の
１種もしくは２種以上の任意の組み合わせの混合溶媒を
挙げることができる。

【００６７】反応工程［Ｉ］は、パラトルエンスルホン
酸等の有機スルホン酸、塩酸及び硫酸等の鉱酸、塩化亜
鉛及びトリフルオロ酢酸等を触媒として用いることがで
きる。

【００６８】反応工程［Ｉ］を行なうことができる温度
範囲は、通常数十度（℃）〜数百度（℃）の範囲である
が、５０℃〜１２０℃の範囲が好ましく、６０℃〜９０
℃の範囲が特に好ましい。

【００６９】反応工程［Ｉ］における反応時間は、糖の
種類（五炭糖及び六炭糖）によって、反応時間を適宜調
節でき、具体的には、フロログルシノールに五炭糖を反
応させる場合、該反応は通常数時間〜十数時間の範囲で
行うことができる。好ましい反応時間は１時間〜１０時
間の範囲であり、また、特に好ましい反応時間は２時間
〜８時間の範囲である。

【００７０】また、六炭糖を反応させる場合、該反応は
通常十数時間〜数十時間の範囲で行うことができる。好
ましい反応時間は１２時間〜７２時間の範囲であり、ま
た、特に好ましい反応時間は１２時間〜４８時間の範囲
である。

【００７１】所望により、更にアシル化するには、アシ
ル化剤として、低級アシルオキシ基のアシル基に相当す
る酸、酸無水物または酸塩化物を作用させればよく、具
体的には、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草
酸、イソ吉草酸、ピバリン酸、無水酢酸、無水プロピオ
ン酸、無水酪酸、無水イソ酪酸、無水吉草酸、無水イソ
吉草酸、無水ピバル酸、塩化アセチル、塩化プロピオニ
ル及び塩化ブチリル等を挙げることができる。

【００７２】アシル化する際は脱酸剤を加えることが好
ましく、具体的には、ピリジン、トリエチルアミン及び
ジメチルアニリン等を挙げることができる。

【００７３】なお、選択（部分）的に、水酸基がアシル
化された化合物を所望する場合、式（Ｉ）で表わされる
スピロ化合物の置換基のうち、アシル化を所望しない水
酸基を予め公知の保護基で保護し、最終的に該保護基を
脱離させることにより、所望のスピロ化合物を得ること
ができる。

【００７４】本発明のスピロ化合物を製する原料である
五炭糖は、単糖類のうちで一般式C₅(H₂O)₅で表わされる
もので、アルドペントース及びケトペントースがある。
具体例としては、アラビノース、キシロース、リブロー
ス、キシルロース、リボース及びリキソース等を挙げる
ことができ、それらの中では、アルドペントースである
アラビノース、キシロース、リボース及びリキソースが
特に好ましい。

【００７５】また、本発明のスピロ化合物を製する原料
である六炭糖は、単糖類のうちで一般式C₆(H₂O)₆で表わ
されるもので、アルドヘキソース及びケトヘキソースが
ある。具体例としては、マンノース、グルコース、ガラ
クトース、フルクトース、タガトース及びソルボース等
を挙げることができ、それらの中では、アルドヘキソー
スであるマンノース、グルコース及びガラクトースが特
に好ましい。

【００７６】五炭糖及び六炭糖等の糖類は、Ｄ体及びＬ
体の２種類の異性体が存在するが、いずれも本発明のス
ピロ化合物を製する際の原料として用いることができ
る。

【００７７】本発明のスピロ化合物は、チロシナーゼ阻
害作用を有し、メラニンの生成を抑制するので、メラニ
ンの生成抑制を作用機作とする化粧品、医薬品、食品添
加物及び飼料等の分野で利用することができる。

【００７８】従って、本発明のスピロ化合物は、チロシ
ナーゼ阻害剤、すなわち、化粧料、特に好ましくは美白
化粧料として、メラノーマ等の黒色腫瘍に対する抗癌剤
として、また、食品の黒化防止剤、特に魚介類、青果物
等の生鮮食料品の黒化防止剤等として利用することがで
きる。

【００７９】本発明のチロシナーゼ阻害剤を化粧料、特
に美白化粧料として利用する場合、適用方法としては、
皮膚に塗布することが一般的であるが、その他の適用方
法としては、経口投与等の全身投与等の方法も可能であ
る。

【００８０】該化粧料として用いる場合の剤型は、軟膏
剤、クリーム、乳液、リニメント剤及びローション剤等
を挙げることができる。

【００８１】これら化粧料は、本発明のスピロ化合物
に、水性成分、粉末成分、保湿剤、界面活性剤、防腐
剤、増粘剤、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤及び香料等の
一般に用いられる各種成分を適宜配合して、公知の製剤
技術を用いて製造することができるが、これら各種成分
は、本発明の効果を損なわない程度の量的、質的範囲内
で用いることができる。

【００８２】本発明の化粧料、特に美白化粧料の適用量
及び適用方法は、本発明のスピロ化合物を化粧料中に、
０．０００２〜５％（W/W）、好ましくは、０．００５
〜１％（W/W）含有するように調製し、顔、首、腕及び
手等のシミ、ソバカス等のできやすい部位もしくは患
部、また日焼けのしやすい部位もしくは日焼けした部位
に１日１回ないし数回、適当量を塗布すればよい。

【００８３】また、本発明の食品の黒化防止剤の適用量
及び適用方法は、本発明のスピロ化合物を黒化防止剤中
に、０．０００２〜５％（W/W）、好ましくは、０．０
０５〜１％（W/W）含有するように水性溶剤を調製し、
食品が魚介類の場合には、飼料に適当量配合して摂取さ
せるか、あるいは魚介類に適当量を注射、噴霧、塗布、
浸漬等すればよく、食品が青果物の場合には、適当量を
噴霧、塗布、浸漬等すればよい。

【００８４】

【発明の効果】本発明にかかるスピロ化合物は、チロシ
ナーゼ阻害作用を有することから、この阻害作用に基づ
く種々の用途に有用である。具体的には、化粧料、特に
美白化粧料、黒色腫瘍に対する抗癌剤、食品の黒化防止
剤、特に生鮮食料品等の食品の黒化防止剤等として大変
有用である。

【００８５】以下に実施例及び試験例を挙げて、本発明
を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定される
べきものではない。

【００８６】

【実施例】

【００８７】実施例１ 4,6,3',4',5'−ペンタヒドロキ
シ−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ［ベンゾフラン
−2(3H),2'(2'H)−ピラン］（フラクションＡ）

【００８８】フロログルシノール ５ｇ、Ｄ−グルコー
ス ５ｇ及びパラトルエンスルホン酸 ３００ｍｇをジ
メチルスルホキシド １０ｍｌに加え、８０℃にて１６
時間、反応を実施した。この反応液をシリカゲル及びセ
ファデックスＬＨ２０クロマトグラフィーにて精製し、
フラクションＡ及びフラクションＢをそれぞれ微量の微
黄色粉末 １００ｍｇを得た。得られたフラクションＡ
の物性は以下の通りであった。

【００８９】［α］_D ²⁴ -157（C 1.64,MeOH） ｍｐ 148.5〜151.5℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）： 2.88(1H,d)、 3.35(1H,d)、 3.66(1H,d)、 3.86〜3.95(3H,
m)、 4.06(1H,d)、 5.88(1H,s)、 5.90(1H,s)

【００９０】実施例２ 4,6,3',4',5'−ペンタアセトキ
シ−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ［ベンゾフラン
−2(3H),2'(2'H)−ピラン］

【００９１】実施例１にて調製した、4,6,3',4',5'−ペ
ンタヒドロキシ−3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ
［ベンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラン］（フラクシ
ョンＡ）の粉末 ５５ｍｇにピリジン １．５ｍｌと無
水酢酸 １ｍｌを加えて、４８時間室温にて放置し、反
応液を氷水に注ぎ、クロロホルムにて抽出した。有機層
を水洗し、無水硫酸ナトリウムで脱水して濃縮乾固し、
メタノール−エタノール混液により結晶化を行い、標記
の無色プリズム状化合物 ６８ｍｇを得た。得られた化
合物の物性は以下の通りであった。

【００９２】ｍｐ 167.5〜168.5℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）： 1.97(3H,s)、 2.00(3H,s)、 2.16(3H,s)、 2.23(3H,s)、 2.
26(3H,s)、 3.05(1H,d)、 3.11(1H,d)、 3.79(1H,dd)、 4.24(1H,d)、
5.42(1H,m)、 5.46(1H,dd)、 5.57(1H,d)、 6.49(1H,d)、 6.55(1H,d)

【００９３】実施例３ フラクションＢアシル化物

【００９４】実施例２と同様の操作を行い、フラクショ
ンＢのアシル化物の微量の白色粉末を得た。得られた化
合物の物性は以下の通りであり、該化合物は実施例２で
得られた化合物のジアステレオマーと推定された。

【００９５】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）： 2.08(3H,s)、 2.16(3H,s)、 2.17(3H,s)、 2.26(3H,s)、 2.
27(3H,s)、 3.09(1H,d)、 3.23(1H,d)、 4.21(1H,dd)、 4.37(1H,m)、
5.02(1H,d)、 5.44(1H,dd)、 6.50(1H,d)、 6.55(1H,d)

【００９６】実施例４ 4,6,3',4'−テトラアセトキシ
−4',5'−ジヒドロスピロ［ベンゾフラン−2(3H),2'(3'
H)ジヒドロフラン］

【００９７】フロログルシノール５ｇ、Ｄ−キシロース
５ｇ及びパラトルエンスルホン酸２７０ｍｇをなす型フ
ラスコにとり、ジメチルスルホキシド１０ｍｌを加え、
８０℃にて６時間反応を実施した。得られた反応液を冷
却した後、シリカゲル及びセファデックスＬＨ２０クロ
マトグラフィーにて精製して、目的化合物を含む分画を
得た。この分画にピリジン５ｍｌ、無水酢酸３ｍｌを加
え、２４時間室温にて放置し、アセチル化を行った。ア
セチル化分画を氷水に注ぎ、クロロホルム抽出した後、
有機層を濃縮した。得られたあめ状物質をセファデック
ス及びシリカゲルカラムクロマログラフィーにて精製し
て、微量の標記化合物を得た。得られた化合物の化学的
性質は以下の通りであった。

【００９８】ｍｐ 88.5〜91.5℃¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）： 2.24(6H,s)、 2.25(3H,s)、 2.26(3H,s)、 3.04(1H,d)、 3.
56(1H,d)、 3.72(1H,dd)、 3.82(1H,s)、 3.84(1H,d)、 4.98(1H,d)、
6.44(1H,d)、 6.48(1H,d)

【００９９】

【０１００】

【試験例】

試験例１ 比色法によるチロシナーゼ阻害

【０１０１】Ｍ／１５ リン酸緩衝液（ｐＨ６．８）で
所定の最終濃度になるように調製した検体溶液（実施例
１で得た化合物（以下、化合物Ｘ）、実施例２で得た化
合物（以下、化合物Ｙ）及びアルブチン）０．２ｍｌ
に、該リン酸緩衝液で０．２５ｍｇ／ｍｌになるように
調製したマッシュルーム由来チロシナーゼ溶液０．２ｍ
ｌを加え、３７℃で１０分間インキュベートした。次
に、該リン酸緩衝液で０．３ｍｇ／ｍｌになるように調
製したドーパ溶液０．２ｍｌを加えて、最終反応液を
０．６ｍｌとした。最終反応液をさらに１分間インキュ
ベートした後、ドーパキノンの特異吸収である４７５ｎ
ｍの吸光度を分光光度計（Ｕｂｅｓｔ−５０、日本分光
株式会社製）で測定した。チロシナーゼ阻害率を以下の
式により算出した。

【０１０２】チロシナーゼ阻害率（％）＝（（Ａ−Ｂ）
／Ａ）×１００ Ａ：検体無添加時の吸光度、Ｂ：検体添加時の吸光度

【０１０３】

【表１】

【０１０４】表１から明らかなように、化合物Ｘ及び化
合物Ｙは、アルブチンと同程度にチロシナーゼ反応を阻
害した。

【０１０５】試験例２ 酸素電極法によるチロシナーゼ
阻害

【０１０６】酸素電極反応層（オリエンタル電気製）
に、Ｍ／１５ リン酸緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍｌ、該
リン酸緩衝液で約２０００単位／ｍｌの濃度になるよう
に調製したマッシュルーム由来チロシナーゼ液２０μｌ
及び該リン酸緩衝液で所定の最終濃度になるように調製
した検体溶液（化合物Ｘ）１０μｌを加えた。更に、該
リン酸緩衝液で１ｍｇ／ｍｌの濃度になるように調製し
たＬ−ドーパ溶液６０μｌを加えて、５分間反応させ
た。反応終了後、試料溶液の酸素消費量を求め、次式に
より阻害率を算出した。

【０１０７】チロシナーゼ阻害率（％）＝（（Ｃ−Ｄ）
／Ｃ）×１００ Ｃ：検体無添加時の酸素消費量、Ｄ：検体添加時の酸素
消費量

【０１０８】

【表２】

【０１０９】表２から明らかなように、化合物Ｘはチロ
シナーゼによる反応を濃度依存的に阻害した。

【０１１０】試験例３ マウスメラノーマＢ−１６細胞
によるメラニン生成抑制

【０１１１】直径６０ｍｍシャーレに、マウスメラノー
マＢ−１６細胞を１×１０^５（ディシュ当たり）植え込
み、イーグルＭＥＭ培地５ｍｌ（１０％ＦＢＳを含む）
中で３７℃、２４時間インキュベートした。次いで、検
体（化合物Ｘ及び化合物Ｙ）を含む溶液４０μｌ（検体
の最終濃度が、０．０１ｍＭ、０．１ｍＭ、１．０ｍ
Ｍ）を同培地５ｍｌ中に加え、添加から２日後に細胞を
回収した。細胞数測定後、遠心分離して得られたペレッ
トに、５％トリクロル酢酸２ｍｌを加えた。さらに、エ
ーテル処理により、得られた沈殿に０．８５Ｎ水酸化ナ
トリウム１ｍｌを加え、１００℃で３０分間加熱し、４
００ｎｍにおける吸光度からメラニン生成量を算出し
た。検体無添加時のメラニン量と比較して、メラニン生
成抑制率を算出した。

【０１１２】

【表３】

【０１１３】表３から明らかなように、化合物Ｘ及び化
合物Ｙはメラニン生成を強く抑制した。

【０１１４】

【処方例】

【０１１５】処方例１ 軟膏剤 次の処方に従って、常法により軟膏剤を製した。

【０１１６】 白色ワセリン ２５．０ｇ ステアリルアルコール ２５．０ｇ プロピレングリコール １１．５ｇ ラウリル硫酸ナトリウム ２．０ｇ 4,6,3',4',5'−ペンタヒドロキシ −3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ ［ベンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラン］ ０．０５ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．０２５ｇ パラオキシ安息香酸プロピル ０．０１５ｇ 精製水 全量１００ｇ

【０１１７】処方例２ ローション剤 次の処方に従って、常法によりローション剤を製した。

【０１１８】 ステアリルアルコール ３．０ｇ 軽質流動パラフィン ２４．５ｇ ラウリル硫酸ナトリウム １．５ｇ プロピレングリコール 4,6,3',4',5'−ペンタヒドロキシ −3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ ［ベンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラン］ ０．０５ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．０２５ｇ パラオキシ安息香酸プロピル ０．０１５ｇ 精製水 全量１００ｇ

【０１１９】処方例３ 黒化防止剤 次の処方に従って、常法により黒化防止剤を製した。

【０１２０】 Ｌ−アスコルビン酸 １．０ｇ Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム ４．５ｇ 乳糖 １４．０ｇ 4,6,3',4',5'−ペンタヒドロキシ −3',4',5',6'−テトラヒドロスピロ ［ベンゾフラン−2(3H),2'(2'H)−ピラン］ ０．０５ｇ ソルビトール １．５ｇ ミョウバン １．３ｇ 精製水で全量を１００ｍｌに調整した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 7/48 31/34 9454−4Ｃ 31/35 ＡＤＡ 9454−4Ｃ Ｃ１２Ｎ 9/99

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ およびＲ⁵ はそ
   れぞれ独立して、水酸基または低級アシルオキシ基であ
   り、ｎは０または１を意味する。］で表わされるスピロ
   化合物。
2. 【請求項２】 式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ および
   Ｒ⁴ は水酸基であり、ｎは０である請求項１記載のスピ
   ロ化合物。
3. 【請求項３】 式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ および
   Ｒ⁴ はアセトキシ基であり、ｎは０である請求項１記載
   のスピロ化合物。
4. 【請求項４】 式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴
   およびＲ⁵ は水酸基であり、ｎは１である請求項１記載
   のスピロ化合物。
5. 【請求項５】 式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴
   およびＲ⁵ はアセトキシ基であり、ｎは１である請求項
   １記載のスピロ化合物。
6. 【請求項６】 フロログルシノールに、五炭糖もしく
   は六炭糖を反応させることを特徴とする式（Ｉ） 【化２】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ およびＲ⁵ は水
   酸基であり、ｎは０または１を意味する。］で表わされ
   るスピロ化合物の製法。
7. 【請求項７】 フロログルシノールに、五炭糖もしく
   は六炭糖を反応させ、次いで所望によりアシル化するこ
   とを特徴とする式（Ｉ） 【化３】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ 、Ｒ² 、Ｒ³ 、Ｒ⁴ およびＲ⁵ はそ
   れぞれ独立して、水酸基または低級アシルオキシ基であ
   り、ｎは０または１を意味する。］で表わされるスピロ
   化合物の製法。
8. 【請求項８】 請求項１記載のスピロ化合物を含有す
   ることを特徴とするチロシナーゼ阻害剤。
9. 【請求項９】 請求項１記載のスピロ化合物を含有す
   ることを特徴とする化粧料。
10. 【請求項１０】 請求項１記載のスピロ化合物を含有す
    ることを特徴とする美白化粧料。
11. 【請求項１１】 請求項１記載のスピロ化合物を含有す
    ることを特徴とする食品の黒化防止剤。