JPH07106985B2 - ヒト免疫不全ウイルスのフエノールによる不活化 - Google Patents

ヒト免疫不全ウイルスのフエノールによる不活化

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JPH07106985B2
JPH07106985B2 JP63056488A JP5648888A JPH07106985B2 JP H07106985 B2 JPH07106985 B2 JP H07106985B2 JP 63056488 A JP63056488 A JP 63056488A JP 5648888 A JP5648888 A JP 5648888A JP H07106985 B2 JPH07106985 B2 JP H07106985B2
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明はフエノールを作用させることによるタンパク質
含有溶液中のヒト免疫不全ウイルス(以下HIVと略記す
る)の不活化法に関する。この方法で処理された製剤は
エイズ伝播の危険を内包しない。
他の原因と並んで、提供されたヒトの血液および患者に
投与されたヒト血漿タンパク質はエイズの強力な感染源
である。このようにして伝染されるエイズ病原体はレト
ロウイルスでありその最初の単離物はLAV、HTLV−IIIま
たはARVと呼ばれ、現在はヒト免疫不全ウイルス(HIV)
と呼ばれている。知られているように種々の血清型を有
するHIVが記載されている。本発明の範囲におけるHIVは
このウイルス群に属するすべてのウイルスを意味するこ
とが理解されるべきである。ヒトの血液によるHIVの感
染は、特別なウイルス不活化処理をされてない第VIII因
子濃縮物による感染と同様に疑う余地なく例証されてい
るが、ヒトイムノグロブリンによるHIV感染はこれまで
見出されていない。
しかしながらこれら所見とは関わりなく、ヒト患者治療
用のヒト血漿タンパク質の製造工程にHIVを不活化させ
る工程を含めるのが望ましい。HIV不活化工程を用いる
ことはヒト血漿タンパク質製剤の投与によるありうるエ
イズ感染の危険を排除するためには、たとえ提供された
血液をHIVに対する抗体についてルーチン検査する方法
が存在しておりそして抗−HIV陰性の提供血のみが使用
される場合においても望ましい。ヒトイムノグロブリン
の調製においてあらゆる可能なHIV不活化操作を用いる
ことは慣用のアルコール沈殿に加えて望ましいことであ
る。
かかるHIV不活化措置はHIVをそれがたとえ高濃度に存在
する場合においても不活化するものでありかつ処理すべ
き血漿タンパク質の生物学的活性および特異性が保有さ
れていなければならない。この方法は簡単でかつ血漿タ
ンパク質の活性の損失ができるだけ少なくなければなら
ない。Lucrarile Institutului de Cercetari Veterina
re si Biopreparate「Pasteur」16,69〜75(1982)に
は、レトロウイルスであるウシ白血病ウイルスが0.5%
のフエノールを含有する溶液中で15日間インキユベーシ
ヨンすることにより不活化されうることが記載されてい
る。
今、HIVが水性媒体中でフエノール、特に例えばイムノ
グロブリンの活性に害を及ぼさない低濃度のフエノール
により不活化されうることが見出された。
それゆえ本発明はタンパク質溶液中におけるヒト免疫不
全ウイルス(HIV)を不活化するにあたり、かかる溶液
にフエノールを濃度1g/100ml未満まで添加しそして24時
間まで作用せしめることからなる方法に関する。
「フエノール」とは、少くとも1個のヒドロキシル基が
芳香環に直接結合している有機化合物を指し、ここで例
えばクレゾールにおけるように他の置換基も存在できる
ものとする。
フエノールそれ自体が好ましい。
室温およびpH3.5〜4.5あるいは高められた温度でインキ
ユベーシヨンするのが好都合である。インキユベーシヨ
ン時間は0.5〜24時間が好ましい。溶液の感染力がなく
なるまでインキユベーシヨンする。
この方法を適用できるタンパク質溶液は例えばイムノグ
ロブリン溶液またはモノクローナル抗体溶液、天然物質
からまたは遺伝子操作により得られた「血漿タンパク
質」例えば第VIII因子、t−PA、ウロキナーゼ、プロウ
ロキナーゼ、第XIII因子およびAT III、細胞培養上澄み
液またはマウスの腹水液である。操作条件は、そのタン
パク質の性質が変化されないようなものでなければなら
ない。前記した量のフエノールは困難を伴うことなく標
準的方法により血漿タンパク質製剤からさえも除去され
うるので、本発明方法によりエイズに対して安全なヒト
に使用するための血漿タンパク質製剤を得ることができ
る。
さらに、本発明方法により得られる生成物は診断目的に
も同様に使用されうる。
実施例 高められた温度でのHIV不活化 HIVに対する抗体を含有しないヒトイムノグロブリン製
剤に感染力のあるHIVを加えた。この混合物のウイルス
力価は7.5log10ID50/mlであつた。次にこの混合物をpH4
に調整し、そしてフエノールを混合後のその濃度が0.3g
/100mlとなるように加えた。室温で30分間インキユベー
シヨンした後ウイルス力価を測定するために試料を採取
するとその力価はすでに3.5log10ID50/ml未満に低下し
ていた。このフエノール含有ウイルス/イムノグロブリ
ン混合物を水浴上40℃でさらに20時間インキユベーシヨ
ンして、感染性HIVについてアツセイした。試料1ml中に
は感染力のあるHIVが含有されていなかつた。このこと
は前記した条件下30分間インキユベーシヨンした後では
4.0log10ID50より大きいHIV不活化が達成され、そして4
0℃でさらに20時間インキユベーシヨンした後ではHIV不
活化は合計で7.5log10ID50より高くなることを意味す
る。
室温におけるHIV不活化 HIVに対する抗体を含有しないヒトイムノグロブリン製
剤をpH4に調整したのち所定量の感染性HIVを添加し(こ
の混合物の計算されたウイルス力価5log10ID50/ml)、
室温で15分間インキユベーシヨンしたのち感染製ウイル
スの力価を測定するために試料を採取した。この力価は
2.8log10ID50/mlであつた。このことから不活化は2.2lo
g10ID50であつた。次にこのウイルス/イムノグロブリ
ン混合物に最終濃度0.3g/100mlとなるまでフエノールを
添加し、そして得られる混合物を室温で30分間インキユ
ベーシヨンした。然る後にはこの混合物の試料1ml中に
は最早や何ら感染性HIVは検出されなかつた。低いpH値
でHIVの部分的不活化が惹起されるとしても、HIVの完全
な不活化(不活化105より上)はフエノールの使用によ
りはじめて可能であつた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 A61K 38/43 38/48 38/55 39/395 X K // A61K 37/465 37/547 37/64

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】タンパク質溶液中におけるヒト免疫不全ウ
    イルスを不活化するにあたり、かかる溶液にフェノール
    を最終濃度1g/100ml未満まで添加しそして24時間まで作
    用せしめることからなる方法。
  2. 【請求項2】室温およびpH3.5〜4.5で作用せしめること
    からなる請求項1記載の方法。
  3. 【請求項3】ヒト免疫不全ウイルス活性が何らそれ以上
    検出されなくなるまで15〜50℃で作用せしめることから
    なる請求項1記載の方法。
  4. 【請求項4】ヒト免疫不全ウイルス活性が何らそれ以上
    検出されなくなるまで35〜45℃で作用せしめることから
    なる請求項1記載の方法。
JP63056488A 1987-03-12 1988-03-11 ヒト免疫不全ウイルスのフエノールによる不活化 Expired - Lifetime JPH07106985B2 (ja)

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DE3707987.5 1987-03-12

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