JPH069710A - 巨大リポソームの調製方法、ｌｂ膜製造装置及び該装置を用いたｌｂ膜の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 十分な機械的、物理的強度及び優れた安定性
を有する直径数十μｍ以上、なかでも数百μｍの巨大リ
ポソームを、簡便な工程、かつ緩和な条件下で多量に調
製できる方法を提供する。また、ＬＢ膜の成膜と種々の
酸化もしくは還元反応を同時に行なえるＬＢ膜製造装置
および該装置を用いたＬＢ膜製造方法を提供する。 【構成】 重合性脂質を含むリポソームを分散したアル
カリ金属塩水溶液を凍結、融解し、該アルカリ金属塩水
溶液よりも低い塩濃度の水溶液または緩衝液に対して透
析して得た巨大リポソームを更に一定温度条件下に保持
して、その複数を融合させてより大きな直径の巨大リポ
ソームを得たところで、膜中に含まれる重合性脂質を重
合させる。また、ＬＢ分子を展開する液相の表面または
相内に対極を設けて、該対極とＬＢ膜成膜用の基板との
間に通電しながらＬＢ膜を成膜する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、十分な機械的、物理的
強度と優れた安定性を有する直径数十μｍ以上、なかで
も数百μｍの巨大リポソームを、簡便な工程、かつ緩和
な条件下で多量に調製できる方法に関する。

【０００２】本発明は、また、基板上でラングミュア・
プロジェット膜を電気化学的に酸化もしくは還元する過
程を有するラングミュア・プロジェット膜の製造方法お
よび該方法に用いる装置に関する。

【０００３】

【従来の技術】脂質膜による閉鎖小胞であるリポソーム
は、その内腔中あるいは膜中に種々の物質を包含するこ
とができる。そこで、この特性を利用してリポソームを
薬物の生体内運搬体として用いるための数多くの研究が
行なわれている。また、リポソームは生体膜のモデルと
しても有用であり、リポソーム単独で、あるいは様々な
膜蛋白質を脂質膜に固定したプロテオリポソームとし
て、生体膜の生物物理的諸性質の研究に広く利用されて
いる。更に最近では、化粧品や食品分野においてもその
応用が進められている。

【０００４】リポソームの製法としては、種々の方法が
知られている。例えば、有機溶媒に脂質を溶かしナス形
フラスコなどのガラス容器中で有機溶媒を除去し容器内
面に脂質薄膜を形成した後、水溶液を加えてボルテック
ス処理を行うボルテックス法［K. Inoue; Biochim. Bio
phys. Acta., 339, 390 (1974)］、脂質薄膜に水溶液を
加えて超音波処理を行う超音波処理法［L. Saunders,
J. Perrin, D. B. Gammack; J. Pharm. Pharmacol., 1
4, 567 (1962) ］、脂質を溶解している有機溶媒中に水
溶液を加えエマルジョンを作成し、次いで有機溶媒を留
去する逆相蒸発法［F. Szoka, F.Olson, T. Heath, W,
Vail, E. Mayhew, D. Papahadjopoulos; Biochim. Biop
hys. Acta., 601, 559 (1980) ］、脂質と界面活性剤の
混合ミセルから透析により界面活性剤を除去する界面活
性剤除去法［L. T. Mimms, G. Zampighi, Y. Nozaki,
C. Tanford, J. A. Reynolds; Biochemistry, 20, 833
(1981) ］、超音波処理法を行った後に凍結融解を行う
凍結融解法［U. Pick; Arch. Biochem. Biophys., 212,
186 (1981) ］及び超音波処理法の後、ＣａＣｌ₂ を添
加しＥＤＴＡで処理するカルシウム融合法［D. Papahad
jopoulos, W. J. Vail,K. Jacobson, G. Poste; Biochi
m. Biophys. Acta., 394, 483 (1975) ］等が知られて
おり、これらの方法により多重層リポソーム、小さな一
枚膜リポソーム及び比較的大きな一枚膜リポソームなど
が作製できる。

【０００５】又、巨大リポソームの製法としては、脂質
薄膜を長時間かけて水和する静置水和法［A. Darszon,
C. A. Vandenberg, M. Schoufeld, M. H. Ellismau, N.
C.Spitzer, M. Montal; Proc. Natl. Acad. Sci., U.
S.A., 77, 239 (1980)］、高塩濃度存在下で凍結融解を
行った後、緩衝液に対して透析する凍結融解透析法［N.
Oku, R. C. MacDonald; Biochemistry, 22, 855 (198
3) ］等が挙げられ、これらの方法により一枚膜もしく
は一枚〜数枚膜の巨大リポソームを得ることができる。

【０００６】更に、最近では、リポソームの力学的強度
や安定性を増大させるために、リポソームを形成してい
る脂質を重合させたポリマーリポソームに関する研究も
盛んに行なわれており、例えば、予め高分子化したジア
ルキル化合物を脂質中に分散する方法（T. Kunitake;
J. Am. Chem., 103, 5945, 1981）や、モノマー脂質を
水に分散させてリポソームを形成させた後、重合する方
法（H. Koch; Macromol.Chem., 182, 255, 1981）等が
報告されている。

【０００７】一方、ラングミュア・プロジェット膜（以
下ＬＢ膜という）の製造は、トラフと呼ばれる水槽に純
水あるいはカドミウム塩等の水溶液からなる水性媒体を
入れ、一般にＬＢ分子と総称される両親媒性の単分子の
膜を水性媒体の液面に展開させ、これをバリアにより液
面（水平）方向に圧縮し、ガラスやシリコンウエハー等
の基板を液面に対して上下させて、基板面に単分子膜
（ＬＢ膜）を写し取る方法によって行われてきた（この
製造方法をＬＢ法と呼ぶ）。

【０００８】ＬＢ法の用途は種々の分野に拡大されつつ
あり、例えば、電気エネルギーを物質そのものとして、
あるいは構造変化や状態変化として膜内に蓄積でき、２
次電池としての用途が注目されている電界重合膜の作成
への応用が検討されてきた。従来技術におけるＬＢ法に
よる電界重合膜の作成は、導電性基板、例えば白金板や
導電性シリコンウエハーなどの基板上に電界重合用分子
のＬＢ膜をＬＢ法により成膜し、これを硫酸や塩酸等の
電界質水溶液中で電界重合を行ない電界重合ＬＢ膜を形
成する方法や、重合用分子の単分子膜を第二酸化鉄水溶
液の液面に展開して、液面で化学的な酸化反応を行ない
これを重合させて電界重合膜としての機能を有する重合
ＬＢ膜として、これを基板に移し取る方法によって行わ
れてきた。なお、電界重合ＬＢ膜の製法に用いる分子と
しては、電界重合用の分子を両親媒性に修飾したピロー
ル誘導体やアニリン誘導体などが利用されてきた。

【０００９】

【発明が解決しようとしている課題】近年、膜を介した
物質移動の研究、生体膜モデルの形成、機能膜の開発な
どにおいてリポソームを人工的に形成する技術の有用性
が高まっている。特に、数μｍ超える直径の巨大リポソ
ームは、大きな保持容積が確保できる、高分子物質の保
持が可能である、光学顕微鏡での観察、マニピュレーシ
ョンが可能である等の利点を有し、極めて有用性が高
い。ところが、直径が数十ｎｍから数百ｎｍまでのリポ
ソームにおいては、上述の超音波処理法や界面活性剤除
去法など数々の調製法が提供されているのに対し、直径
が数十μｍを超える、特に数百μｍに達する巨大リポソ
ームに関しては、ごくわずかな調製法が知られているに
すぎない。

【００１０】前述の静置水和法によれば直径が数百μｍ
の巨大リポソームを調製することができるが、この方法
では調製溶液のイオン濃度が１０^-4Ｍ以下に制限されて
しまうこと、さらには、蛋白質やビタミン等の存在下で
はリポソームの形成が阻害される場合があるなどの問題
を有する。従って、蛋白質やビタミン等の種々の物質を
膜内や膜中に存在させたリポソームを形成することが困
難となる場合もあり、そのような用途に十分対応できる
ものとは言えない。

【００１１】また、前述の凍結融解透析法は調製時のｐ
Ｈにより生成するリポソームの大きさが異なり、生体内
や生化学的反応において多く利用されるｐＨ領域（中性
及びその付近）では最大５０μｍ程度のものしか調製で
きない。この凍結融解透析法においては調製時のｐＨを
２以下にすれば、直径が数百μｍの巨大リポソームも調
製可能であるが、この場合は調製溶液が強酸性であるた
め脂質の劣化やタンパク質の変性といった問題が生じ
る。

【００１２】更に、数十μｍ以上の直径を有する巨大リ
ポソームの場合、機械的強度や物理的強度が非常に弱い
場合が多く、遠心分離等の操作時にその条件によっては
膜構造が簡単に破壊されてしまうという問題があり、こ
の問題が巨大リポソームの実用面における解決すべき課
題となっていた。

【００１３】本発明の目的は、機械的強度、物理的強度
および安定性に優れた直径が数十μｍから数百μｍの巨
大プロテオリポソームを簡便な工程かつ緩和な条件下で
調製できる方法を提供することにある。

【００１４】一方、先に述べたＬＢ法による電界重合膜
の製造のうち、基板上に電界重合用分子のＬＢ膜を形成
した後、これを電界重合させる方法では、電界重合に伴
う体積変化によって分子密度が変化し、結果として充電
効率の低下の原因となる導電性の低下が生じる場合があ
るという問題点があった。更に、この方法では、電界重
合時の体積変化の影響とその際に発生するガスの影響
で、電界重合ＬＢ膜と基板との密着性が悪くなる場合が
あるという実用面での問題もあった。また、第二酸化鉄
水溶液の液面に重合用分子を展開して、化学的な酸化反
応により重合を行わせる方法では、単分子累積膜を基板
上に形成する場合に、良好な累積状態が得られない場合
があるという問題があった。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明の巨大プロテオリ
ポソームの調製方法は、（ａ）アルカリ金属塩水溶液を
主体とし、重合性脂質を含むリポソーム形成用混合液の
凍結、融解を行なう凍結融解工程と、（ｂ）該凍結融解
工程により得られた融解液を前記リポソーム形成用混合
液よりも低い塩濃度の水溶液または緩衝液からなる透析
用溶媒に対して透析する透析工程と、（ｃ）該透析工程
後の混合液を所望の粒径のリポソームが得られるまで保
持する成熟工程と、（ｄ）所望の粒径が得られたリポソ
ームに含まれる重合性脂質を重合させる重合工程とを有
することを特徴とする。

【００１６】本発明の方法は、凍結融解透析法を応用し
たものであり、具体的には凍結融解透析法で調製したリ
ポソームを、所望の直径がリポソームに得られるまでの
一定期間、定温においてそのまま保持すること、すなわ
ち熟成させることにより、直径数十μｍ〜数百μｍへと
巨大化させるものである。このように、リポソームが直
径数十μｍ〜数百μｍへと巨大化するのは、熟成工程中
にリポソームどうしが融合してより巨大なリポソームを
形成するためと推定される。

【００１７】なお、一般に、リポソームを形成している
脂質の相転移温度以下におかれたリポソーム、特に直径
が数十ｎｍ程度の小さい一枚膜リポソーム（ＳＵＶと略
す）は、その複数が融合して大きなマルチラメラリポソ
ーム（ＭＬＶと略す）に成長し易いことが知られてい
る。これは、ＳＵＶでは曲率が大きく、その歪が過剰の
膜表面エネルギーとなり、この過剰エネルギー解消のた
めにリポソームの融合が進行すると考えられている。

【００１８】ところが、このようなＳＵＶを融合させて
ＭＬＶを得る方法を利用して巨大リポソームを調製した
場合、所望の特性を維持させつつ巨大化させることが難
しいという問題がある。例えば、所定の水溶性物質を内
包するリポソームでは、ＭＬＶ化することで該水溶性物
質の保持効率が低下してしまう場合がある。また、所望
の機能を発現させるために膜蛋白質を膜中に含有させた
プロテオリポソームでは、ＭＬＶ化させることで膜蛋白
質の所望の機能が損なわれる場合がある。これに対し
て、本発明の方法によれば、例えば凍結融解透析法で調
製した巨大一枚膜リポソーム（ＧＵＶ）から成熟工程で
更に巨大化されたＧＵＶを得ることができ、その際所望
の機能を損なうことがない。この場合、ＭＬＶ化する割
合は実質的に無視できるほど小さく、ほとんどのＧＵＶ
が更に巨大化されたＧＵＶとなる。従って、本発明の方
法を用いることで、例えば所定の水溶性物質を内包する
リポソームにおいては、該水溶性物質の保持効率を低下
させることなく巨大リポソームの調製が可能であり、ま
たプロテオリポソームにおいても目的とする機能を低下
させることなく巨大プロテオリポソームの調製が可能と
なる。

【００１９】なお、リポソームを巨大化することで、リ
ポソーム１つ当りの内容積の増加に伴って１つのリポソ
ームへの物質の取り込み効率を向上させて所望の機能を
高めるという効果も期待できる。この効果は特にプロテ
オリポソームのような膜蛋白質等の機能性物質を付加し
た場合に特に有用である。例えば、高度好塩菌の紫膜中
に存在し、光によりプロトンを輸送する蛋白質として知
られるバクテリオロドプシンを含むプロテオリポソーム
では、巨大化による内容積の増加に伴ってリポソーム内
へのプロトンの取り込み効率が増大する。

【００２０】一方、リポソームの融合は、前記のＳＵＶ
の相転移温度以下における融合のほかに、セルダウイル
スやポリエチレングリコールなどの仲介物質の存在下に
おいても起こることが知られている。また、酸性脂質を
用いて調製したリポソームでは、カルシウムイオンＣａ
²⁺によって融合が引き起こされることも報告されてい
る。しかしながら、これらの融合方法では、仲介物質も
形成されるリポソームに一緒に取り込まれるので、これ
らの方法で融合させたリポソームをこれらの仲介物質の
存在が好ましくない用途に利用するとができず、その利
用範囲が制限されるという問題がある。また、酸性脂質
を用いる方法では、利用できる脂質の種類が限定されて
しまう。これに対して、本発明においては、上記の仲介
物質を利用することなくリポソームの融合が可能とな
り、上記のような制限を緩和できる。更に、蛋白質を脂
質とともに用いるプロテオリポソームの調製の場合、蛋
白質の存在自体がリポソームの融合を助長し融合速度を
高めるという効果を得ることができる。

【００２１】本発明の方法における凍結融解工程（ａ）
及び透析工程は（ｂ）は、公知の凍結融解透析法に従っ
て行なうことができる。凍結融解工程（ａ）に用いるリ
ポソーム形成用混合液は、リポソーム形成用材料として
の重合性脂質をアルカリ金属塩水溶液に加えて得ること
ができる。リポソーム形成用材料としての重合性脂質と
しては、プロテオリポソームを形成でき、かつ重合し得
る脂質であれば制限なく利用できるが、例えば以下のよ
うな公知の両親媒性の化合物が利用できる。 Ｉ．重合性官能基としてジアセチレン基を有するもの

【００２２】

【化１】 II．重合用官能基としてジエン基を有するもの

【００２３】

【化２】 III ．重合用官能基としてスチレン基を有するもの

【００２４】

【化３】 VI．重合用官能基としてチオール基を有するもの

【００２５】

【化４】 重合性脂質のリポソーム形成用混合液での濃度は、特に
限定されるものではないが、好ましくは３〜１００ｍ
Ｍ、より好ましくは１０〜３０ｍＭとすることが望まし
い。

【００２６】重合性脂質の重合方法は、用いる脂質の種
類によって異なるが、例えばジアセチレン基を有する脂
質の場合は２５４ｎｍなどの紫外光照射により、ジエン
基やアセチレン基を有する脂質の場合は紫外光照射やＡ
ＩＢＮ等のラジカル重合開始剤の作用により、またチオ
ール基を有する脂質の場合は過酸化水素等による酸化重
合が利用できる。重合性脂質の使用にあたっては、それ
が重合した際にプロテオリポソームの膜構造に乱れや損
傷を与えないように、必要に応じて、例えばアルキル基
の長さや重合部位を考慮して重合性脂質の種類を適宜選
定したり、また重合鎖の長さ等を調節するためのスペー
サー基を導入することもできる。重合条件はリポソーム
の所望とする特性や機能を損なわない範囲内で適宜設定
するとよい。

【００２７】更に、上記重合性脂質に加えて、所望の特
性を損なわない範囲内でリポソームを構成できる他の脂
質を添加することができ、そのような脂質として、例え
ば以下のような公知の両親媒性をもつリン脂質、糖脂質
及び４級アンモニウム塩からなる脂質などが利用でき
る。

【００２８】これらの膜形成能を持つ脂質分子は炭素が
８個以上の長鎖アルキル基と親水基とを有して構成さ
れ、親水基が例えば

【００２９】

【化５】 などのカチオン、例えば

【００３０】

【化６】 などのアニオン、例えば

【００３１】

【化７】 などの非イオン、例えば

【００３２】

【化８】 などの双性イオンのいずれでも良い。

【００３３】これらの脂質材料のうち、ホスファチジル
コリン（レシチン）やホスファチジルエタノールアミ
ン、ジホスファチジルグリセロールなどのグリセロリン
脂質；スフィンゴミエリンやセラミドシリアチン等のス
フィンゴリン脂質；セレブドシド、スルファチド、セラ
ミドオリゴヘキソシド等のスフィンゴ糖脂質；および親
水基として炭水化物を含むグリコシルジアシルグリセロ
ール等のグリセロ糖脂質は好ましいものであり、中でも
グリセロリン脂質、スフィンゴリン脂質等のリン脂質は
特に好ましいものである。

【００３４】アルカリ金属塩水溶液に用いるアルカリ金
属塩には、カリウム、ルビジウム及びナトリウムの塩が
好ましく用いられ、リチウム塩は好ましくない。アルカ
リ金属塩の濃度は、塩の種類により異なるが、リポソー
ムの形成に必要な十分なアルカリ金属イオン濃度が得ら
れるように設定され、用いるアルカリ金属塩の種類に応
じて適宜調節される。例えば、塩化カリウムを用いた場
合には、２Ｍ以上、４Ｍ以下が好ましい。また、塩化ル
ビジウムの場合は２Ｍ以上６Ｍ以下、塩化ナトリウムの
場合は２Ｍ以上４Ｍ以下が好ましい。

【００３５】なお、リポソーム形成用混合液には、所望
に応じて種々の物質をリポソームの形成を損なわない範
囲内で添加することができる。例えば、リポソームの膜
中または内腔中に含有させてその機能を利用する物質；
各種金属イオン；コレステロール、コレスタノールなど
のステロール類等の膜安定化剤；ステアリルアミン、ホ
スファチジン酸、ジセチルホスフェート等の荷電物質；
トコフェロール等の酸化防止剤等を挙げることができ
る。リポソームの脂質膜中にまたはその内腔中に含有さ
せてその機能を利用する物質としては、抗細菌性化合物
類、抗ウイルス性化合物類、抗真菌性化合物類、抗寄生
体化合物類、抗腫瘍性化合物類、ビタミン類、膜蛋白
質、酵素等の各種蛋白質、ホルモン類、放射線標識物
質、蛍光化合物類、多糖類、核酸類等を挙げることがで
きる。これらの添加物の含有量は、その使用目的に応じ
て決定される。膜安定化剤、荷電物質、酸化防止剤につ
いては、例えばリポソーム形成用材料１重量部に対し、
ステロール類を０〜２重量部、荷電物質を０〜０．５重
量部、酸化防止剤を０〜０．２重量部とするのが好まし
い。

【００３６】これらの中で、プロテオリポソームを形成
し得る蛋白質はリポソームの融合を促進する作用があ
り、その機能を利用しない場合でも、リポソーム融合促
進剤として使用することができる。このプロテオリポソ
ームを形成し得る蛋白質としては、紫膜、膜結合型ＡＴ
Ｐ分解酵素等の「膜蛋白質」と呼ばれている蛋白質や、
膜蛋白質以外でも、表面の一部に疎水性部分を有し脂質
膜と結合し得る蛋白質等が利用できる。蛋白質をリポソ
ーム融合促進剤として使用する場合の添加量は、０．５
〜２０ｍＭ、好ましくは１〜１０ｍＭとするのがよい。
なお、膜蛋白質を利用する場合、これは純粋な形に精製
されている必要はなく、例えば脂質膜断片が付着した状
態のものなどでも利用可能である。

【００３７】一方、リポソーム形成用混合液のｐＨは、
リポソームの形成に悪影響を及ぼさない範囲内でリポソ
ームの組成及びその用途などに応じて選択されるが、例
えば、好ましくは３以上、より好ましくは４以上とされ
る。また、機能性物質を添加する場合には機能性物質の
変成や破壊を生じないｐＨが選択される。蛋白質を添加
する場合にも、ｐＨは、例えば、好ましくは３以上、よ
り好ましくは４以上とされる。なお、本発明の方法によ
れば、中性及びその付近においても巨大リポソームの良
好な形成が可能であり、中性付近で行なわれる生体内や
生体外での各種生化学的反応に用いる種々の物質のリポ
ソームを介した利用が可能となる。

【００３８】凍結融解工程（ａ）における凍結工程は、
例えば液体窒素やアセトン−ドライアイスを用いて行う
ことができる。また、融解工程は、例えば５〜４０℃の
範囲、通常は室温に静置しながら、あるいは振盪しなが
ら行うことができる。なお、凍結融解工程は、凍結工程
と融解工程をこの順に１回行なって、あるいは２回以上
繰り返して実施することができるが、通常は３回以上繰
り返すのが好ましく、６回程度まで行なえば十分であ
る。更に、凍結融解のあとに、融解液をボルテックスミ
キサー等を用いた攪拌処理を行っても良い。

【００３９】凍結融解工程（ａ）において凍結物の融解
によって得られた融解液は、つぎに透析工程（ｂ）にお
いて、透析溶媒に対して透析処理される。この透析によ
って例えば直径数十μｍのＧＵＶを得ることができる。
透析溶媒としては、リポソーム形成用混合液よりも低い
塩濃度の水溶液や緩衝液が用いられる。この透析用溶媒
の塩濃度は、例えば８０ｍＭ以下、好ましくは５０ｍＭ
以下、より好ましくは１０ｍＭ以下とされる。この透析
用溶媒のｐＨは、リポソーム形成用混合液と同様に、リ
ポソームの形成に悪影響を及ぼさない範囲内でリポソー
ムの組成及びその用途などに応じて選択されるが、例え
ば、好ましくは３以上、より好ましくは４以上とされ
る。なお、透析はリポソーム形成用混合液の塩濃度が透
析用溶媒の塩濃度と同程度になった時に終了する。通常
は、リポソーム形成用混合液に対し２０００〜６０００
倍の透析用溶媒量を用いて２日間行う。

【００４０】最後に、成熟工程（ｃ）において、透析終
了後の液を、例えば０〜４０℃、好ましくは５〜２０℃
の範囲内の一定温度に保持し、該液に含まれているリポ
ソームを融合させて巨大リポソームを得る。なお、この
温度範囲とすることによってリポソームが分散している
液媒体の主成分である水を凝固させることなく、また脂
質膜の形態を破壊することなく良好なリポソームの融合
を行なわせることができる。また、この成熟工程は、静
置状態でも、振盪状態でも行なうことができる。この成
熟工程は所望の径がリポソームに得られたところで膜構
造を構成する重合性脂質を重合させる重合工程（ｄ）を
行なって終了させ、所望の用途に用いる。重合工程
（ｄ）には用いた重合性脂質の種類に応じて先に挙げた
各種重合工程が適宜用いられる。

【００４１】一方、本発明のＬＢ膜製造装置は、水性媒
体の相を形成するための槽と、該水性媒体の相の表面に
展開した単分子膜を写し取る基板とを有するラングミュ
ア・プロジェット膜製造装置において、前記基板に反応
極を、前記水性媒体相の表面または相中に対極を有し、
これら反応極と対極との間に通電可能としたことを特徴
とする。

【００４２】また、本発明のＬＢ膜の製造方法は、水性
媒体の相の表面に展開した単分子膜を基板に写し取るこ
とによるラングミュア・プロジェット膜の製造方法にお
いて、前記基板を反応極として構成し、該反応極と前記
水性媒体の相の表面または相内に設けた対極との間に通
電しながら単分子膜を基板へ写し取り、成膜と同時に該
反応極側で酸化もしくは還元反応を起こさせることを特
徴とする。

【００４３】本発明のＬＢ膜の製造装置の概要を図１及
び図２に示す。図１は該装置の平面図（液面上方から見
た図）であり、図２は液面に垂直な方向での断面図であ
る。該装置は、ＬＢ分子の単分子膜を展開する水性媒体
の液相１０を形成するためのトラフ（槽）１と、液相１
０の液面に展開した単分子膜の膜圧（表面圧）を調整す
るためのバリア２と、該表面圧を測定するための表面圧
測定部３と、基板保持手段６とを有する。トラフ１の内
壁、バリア２及び表面圧測定部３は一般にその表面が疎
水性であることが望ましい。一般に金属は酸化されない
状態では疎水性であるので、酸化されにくい貴金属から
これらの部分を形成するのが好ましい。

【００４４】トラフ１の底面には、基板保持手段６に保
持された基板５の浸漬操作（ディッピング）用の溝４が
設けられている。この溝４は、液相１０の深さが充分で
あるときは必要ないが、液相の深さをできるだけ浅くし
て、水性媒体の使用量等を節約する場合には有用であ
る。

【００４５】基板５は通電による反応極として機能する
もので、少なくともＬＢ膜が成膜される面は導電性を有
しており、基板全体が導電性を有するものであっても良
い。基板５の導電性を有する面は、抵抗率が１００Ω・
ｃｍ以下で平滑、清浄であるものが好ましい。

【００４６】基板保持手段６としては、例えば金メッキ
を施したクリップなど、これを介して通電手段（不図
示）によって基板５に電気的に安定に通電でき、かつ基
板５が落下しないようにこれをしっかり保持できる構造
を有するものが用いられる。

【００４７】基板５への電気的な導通だけなら基板保持
手段６に導電性を付与する必要はなく、リード線等を基
板５に直接接続して導通を行ってもよいが、電界重合に
要する大電力を接触不良なく基板５に供給するという電
気的な安定性のためには、基板保持手段６に導電性を付
与して用いるのが好ましい。

【００４８】なお、基板保持手段６は、基板５との間で
電気化学反応が起こりにくくするために、基板保持手段
自体が貴金属性であるか、または少なくとも液相１０中
に浸漬される部分に貴金属によるメッキが施されている
ことが望ましい。

【００４９】トラフ１内には、基板５（反応極）に対す
る対極が設けられる。対極を設ける位置は、基板５に形
成するＬＢ膜の種類に応じて液相１０と接触する適当な
位置とされる。例えばピロール誘導体やアニリン誘導体
などの電界重合性の化合物を両親媒性に修飾してＬＢ分
子としたものを用いて電界重合ＬＢ膜を形成する場合に
は、液相１０の液面に展開された単分子膜に接触できる
位置とされる。対極は、別途設けてもよいが、図２に示
すように、バリア２、表面圧測定部３またはトラフ１の
内壁面の適当な面を導電性に加工して、その部分を対極
として利用しても良い。すなわち、バリア２で圧縮され
た単分子膜に接触するのは、原則として、バリア２、表
面圧測定部３及びトラフ１の内壁面の３箇所であるの
で、液相１０の表面に展開されたＬＢ分子の配列及び配
向を乱さないために、あるいは不純物の混入を避けるた
めには、これらの３部材のいずれかに対極を設けるのが
好ましい。また、例えば、基板５に液相１０から金属を
析出させる場合には、液相１０の表面に展開された単分
子膜に対極が接触する必要はないので、対極は適当な位
置に設ければ良いが、この場合でも上記同様の理由から
トラフ１の内壁面に対極を設けるのが好ましい。

【００５０】対極は電気化学的に安定な物質から構成さ
れているのが好ましく、例えば貴金属製あるいは貴金属
によるメッキが施されているのが好ましい。また、液相
１０をカドミウム塩等の金属塩の水溶液で形成した場合
には、対極側に金属が還元されて析出することがあるの
で、対極を再利用する場合には酸によるエッチング等の
剥離清掃処理に耐えられる金、白金などから対極を構成
するのが好ましい。

【００５１】本発明のＬＢ膜製造方法では、ＬＢ分子の
単分子膜の液相１０の液面への展開、表面圧の調整、基
板の操作は常法に従って行うことができる。その際、対
極１１と基板（反応極）５との間を電気的に絶縁できる
構成とし、例えば、図２の基板５側の端子７と、対極１
１側の端子８−１、８−２または８−３を通電手段（不
図示）を介して接続することで基板５と対極（１１−
１、１１−２または１１−３）との間に通電しつつＬＢ
膜の成膜を行う。

【００５２】液相１０は、目的とするＬＢ膜の種類に応
じて適宜選択される。例えば、純水やカドミウム塩等の
金属塩の水溶液などが用いられる。

【００５３】また、ＬＢ膜形成用化合物としては、電界
重合ＬＢ膜の形成の場合には、従来法によって利用され
ているピロール誘導体やアニリン誘導体などの電界重合
性の化合物を両親媒性に修飾してＬＢ分子としたものな
どが利用できる。ピロール誘導体やアニリン誘導体を用
いる場合には、陽極側で重合するので、基板５の極性を
陽極とする必要がある。更に、還元反応を起こす分子を
用い、基板５を陰極とすることによって還元性電界重合
ＬＢ膜を得ることができる。また、アニリンＬＢ分子を
金属塩水溶液の液面に展開して、電極極性を高周波に切
り替えることによって、金属分子がドープされた電界重
合ＬＢ膜を得ることもできる。一方、ＬＢ分子と基板の
構成材料の種類の組合せによっては、いわゆるＺ膜と呼
ばれる累積膜、すなわち基板を浸漬したときのみ累積す
る膜を形成させることもできる。また、アニリンＬＢ分
子を金属塩水溶液の液面に展開して、基板を引き上げる
ときには基板を陽極とし、浸漬するときには陰極とする
低周波の極性切り替えを行うことで、電界重合ＬＢ膜と
金属膜が交互に累積した膜を形成することができる。

【００５４】上記の方法において、基板（反応極）５と
対極１１に印加した電圧は、液相１０内に没している基
板５の部分に対して一様である。ＬＢ分子として電界重
合用分子を用いた場合には、液面に浮かぶ分子が電気化
学的反応を起こして基板５上に成膜（または累積）し、
この電気化学反応によって反応極と対極との間に電流が
流れる。すなわち、単分子の電界重合と基板５への重合
膜の成膜（累積）が同時に行われる。従って、本発明の
方法によって基板５上に電界重合膜を形成した場合、成
膜後電界重合を行う従来の方法で問題となる電界重合膜
の体積変化が起こらず、高密度で基板への密着性が良好
な電界重合ＬＢ膜を得ることができる。また、本発明の
方法において、電界重合時にガスが発生したとしても、
基板５、液相１０およびＬＢ膜相互の表面張力および基
板５の液相１０に対する浸漬や引き上げといった移動操
作により、基板５と基板５に移し取られる膜との間にガ
スが混入することがなく、基板５とその上に移し取られ
るＬＢ膜との間に極めて良好な密着性を得ることができ
る。

【００５５】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
する。 実施例１ まず、H. Koch ら（Makromol. Chem., 182, 255(1981)
）らの方法によって、下記構造の重合性脂質を合成し
た。

【００５６】

【化９】 次に、２０ｍＭの上記重合性脂質のクロロホルム溶液
０．５ｍｌをナス型フラスコに入れ、ロータリーエバポ
レーターで溶媒を留去した後、これをデシケータで真空
乾燥させ、フラスコ内壁面に脂質薄膜を形成した。更
に、３Ｍの塩化カリウム水溶液（ｐＨ５．６）１ｍｌを
加え、ボルテックスミキサーによって２分間処理して脂
質薄膜を溶媒中に分散させた後、６０℃で水浴型超音波
発振装置（ソニファイアーＢ−１５型、ホップホーン使
用：Branson 社製）で３０分間処理してリポソーム分散
液を得た。

【００５７】このリポソーム分散液を、液体窒素での凍
結、室温での融解、ボルテックスミキサー処理３０秒と
いう操作をこの順に３回繰り返した。この後、前記処理
液を透析チューブに移し、１０ｍＭ塩化カリウム水溶液
４リットルに対して２日間透析を行ない、ＧＵＶを調製
した。透析処理後の液体（透析チューブ内液）からサン
プリングしたＧＵＶの位相差光学顕微鏡観察による最大
粒径は３１μｍ、平均粒径は１０．１μｍ、標準偏差
４．９６μｍ（サンプル数２５０）であった。

【００５８】次に、透析チューブ内液を容器に移し、１
５℃に３０日間保持してＧＵＶを熟成させた。成熟した
ＧＵＶの位相差光学顕微鏡観察による最大粒径は４２μ
ｍ、平均粒径は１６．３μｍ、標準偏差５．８８μｍ
（サンプル数２５０）となった。これらの結果の比較か
ら明らかなように、ＧＵＶの粒径は時間経過とともに増
大し、直径数十μｍの巨大リポソームを多量に調製する
ことができた。

【００５９】更に、成熟後のＧＵＶに紫外線ランプ（コ
スモバイオ社、ＣＳＶ ＣＳＬ−３０Ｇ フィルター無
しタイプ、３０Ｗ）を３０分間照射し、ＧＵＶの膜構造
を構成する重合性脂質を重合させた。重合によるＧＵＶ
の粒径の変化を位相差光学顕微鏡観察によって検査した
ところ、粒径変化はほとんどみられなかった。重合処理
後のＧＵＶの膜安定性を調べるために、重合処理後のＧ
ＵＶ分散液に同容量のエタノールを添加し、攪拌した
後、位相差光学顕微鏡観察を行なってところ、ＧＵＶが
破壊されることなく維持されていることが確認された。

【００６０】比較例１ 実施例１における重合処理前のＧＵＶ分散液に同容量の
エタノールを添加し、攪拌した後、位相差光学顕微鏡観
察を行なってその安定性を調べたところ、ＧＵＶが破壊
されてその存在が確認できなかった。

【００６１】実施例２ 成熟温度を１５℃から３０℃に変更する以外は実施例１
と同様にして重合脂質膜を有するリポソームを得た。な
お、本実施例における成熟工程終了時のＧＵＶの位相差
光学顕微鏡観察による最大粒径は１６０μｍ、平均粒径
は４０．２μｍ、標準偏差８．１３μｍ（サンプル数２
５０）であり、重合処理後も粒径の変化は認められなか
った。

【００６２】実施例３ 実施例１で合成した重合性脂質を、２０ｍＭの濃度で含
むクロロホルム溶液０．５ｍｌをナス型フラスコに入
れ、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去した後、こ
れをデシケータで真空乾燥させ、フラスコ内壁面に脂質
薄膜を形成した。更に、３Ｍの塩化カリウム水溶液（ｐ
Ｈ５．６）１ｍｌを加え、ボルテックスミキサーによっ
て２分間処理して脂質薄膜を溶媒中に分散させた後、６
０℃で水浴型超音波発振装置（ソニファイアーＢ−１５
型、ホップホーン使用：Branson 社製）で３０分間処理
してリポソーム分散液を得た。

【００６３】これとは別に、P. Oesterhelt および W.
Stoeckenius の方法（Method. Enzymol., 31, (1974),
667-678 ）によって、高度好塩菌 Halobacterium hal
obium RJ 株から抽出した紫膜を、K. Huang の方法
（Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 77, (1980) , 323 ）
にしたがって界面活性剤Triton X-100（和光純薬工業社
製）で処理し、紫膜を脱脂した状態の膜蛋白質バクテリ
ロドプシン（ｂＲと略す）を得た。このｂＲの１２０μ
ｇを先に得たリポソーム分散液に加えて、これに液体窒
素での凍結、２０℃での融解、ボルテックスミキサー処
理３０秒という操作をこの順に３回繰り返した。この
後、前記処理液を透析チューブに移し、１０ｍＭ塩化カ
リウム水溶液４リットルに対して２日間透析を行ない、
バクテリオロドプシン巨大プロテオプロテオリポソーム
（ｂＲ−ＧＵＶと略す）を調製した。透析後の透析チュ
ーブ内からサンプリングしたｂＲ−ＧＵＶの位相差光学
顕微鏡観察による最大粒径は２１μｍ、平均粒径は１
０．４μｍ、標準偏差５．１８μｍ（サンプル数２５
０）であった。

【００６４】透析チューブ内液を容器に移し、これを１
５℃に１５日間保持し、ｂＲ−ＧＵＶを熟成させた。成
熟したｂＲ−ＧＵＶの位相差光学顕微鏡観察による最大
粒径は４６μｍ、平均粒径は１９．７μｍ、標準偏差
６．６７μｍ（サンプル数２５０）となった。以上の結
果の比較から明らかなように、ｂＲ−ＧＵＶの粒径は時
間経過とともに増大し、上記の条件で直径が約２倍とな
っ巨大なプロテオプロテオリポソームを多量に調製する
ことができた。

【００６５】次に、成熟後のｂＲ−ＧＵＶに実施例１と
同様の条件で紫外線を照射し、ｂＲ−ＧＵＶの膜構造を
構成する重合性脂質を重合させた。重合によるｂＲ−Ｇ
ＵＶの粒径の変化を位相差光学顕微鏡観察によって検査
したところ、粒径変化はほとんどみられなかった。さら
に、重合処理後のｂＲ−ＧＵＶ分散液を１００００×
ｇ、１０分間の遠心処理にかけ、沈澱物とｂＲを含む上
清とを分離した。沈澱物からサンプリングした試料を位
相差光学顕微鏡観察によって観察したところ、所望の粒
径のｂＲ−ＧＵＶが観察された。また、上清を分析した
ところｂＲ−ＧＵＶの膜中に組み込まれなかったｂＲが
検出された。

【００６６】比較例２ 重合処理を行なわない以外は実施例１と同様にしてｂＲ
−ＧＵＶを調製し、ｂＲ−ＧＵＶと膜中に組み込まれな
かったｂＲとの分離のための遠心処理を行なった。とこ
ろが、遠心処理によってｂＲ−ＧＵＶが破壊されて消失
してしまい、ｂＲ−ＧＵＶの沈澱物を得ることができな
かった。

【００６７】実施例４ 成熟工程を３０℃で２０日間行なう以外は実施例３と同
様にして重合脂質膜を有するｂＲ−ＧＵＶを得た後、ｂ
Ｒ−ＧＵＶと膜中に組み込まれなかったｂＲとの分離の
ための遠心処理を行なった。なお、本実施例における成
熟工程終了時のｂＲ−ＧＵＶの位相差光学顕微鏡観察に
よる最大粒径は１６７μｍ、平均粒径は４３．３μｍ、
標準偏差９．８７μｍ（サンプル数２５０）であり、重
合処理後も粒径の変化は認められなかった。また、ｂＲ
を除くための遠心処理もｂＲ−ＧＵＶの膜構造は破壊さ
れずに維持され、重合後のｂＲ−ＧＵＶの安定性が確認
された。

【００６８】比較例３ 重合処理を行なわない以外は実施例４と同様にしてｂＲ
−ＧＵＶを調製し、ｂＲ−ＧＵＶと膜中に組み込まれな
かったｂＲとの分離のための遠心処理を行なった。とこ
ろが、遠心処理によってｂＲ−ＧＵＶが破壊されて消失
してしまい、ｂＲ−ＧＵＶの沈澱物を得ることができな
かった。

【００６９】実施例５ 実施例１で合成した重合性脂質を、２０ｍＭの濃度で含
むクロロホルム溶液０．５ｍｌをナス型フラスコに入
れ、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去した後、こ
れをデシケータで真空乾燥させ、フラスコ内壁面に脂質
薄膜を形成した。更に、３Ｍの３Ｍ塩化ルビジウム水溶
液（ｐＨ５．７）１ｍｌを加え、ボルテックスミキサー
によって２分間処理して脂質薄膜を溶媒中に分散させた
後、６０℃で水浴型超音波発振装置（ソニファイアーＢ
−１５型、ホップホーン使用：Branson 社製）で３０分
間処理してリポソーム分散液を得た。

【００７０】これとは別に、The Journal of BIOLOGICA
LCH EMISTRY Vol. 250, No.19, p7910-7916 、および p
7917-7923 (1975)に準じて好熱性細菌であるＰＳ３の培
養ならびにＡＴＰ分解酵素の抽出、精製を行ない、ＡＴ
Ｐ分解酵素ＴＦ₀ Ｆ₁ を調製した。前記リポソーム分散
液に、ＴＦ₀ Ｆ₁ １５０μｇを加えて、これに液体窒素
での凍結、２０℃での融解、ボルテックスミキサー処理
３０秒という操作をこの順に３回繰り返した。この後、
前記処理液を透析チューブに移し、５０ｍＭ塩化ルビジ
ウム水溶液４リットルに対して２日間透析を行ない、Ｔ
Ｆ₀ Ｆ₁ 巨大プロテオリポソーム（ＴＦ₀ Ｆ₁ −ＧＵＶ
と略す）を調製した。透析処理後の透析チューブ内液か
らサンプリングしたＴＦ₀ Ｆ₁ −ＧＵＶの位相差光学顕
微鏡観察による最大粒径は１３μｍ、平均粒径は６．９
μｍ、標準偏差３．２４μｍ（サンプル数２５０）であ
った。上記の透析チューブ内液を容器に移し、更に６３
℃に１０日間保持し、ＴＦ₀ Ｆ₁ −ＧＵＶを熟成させた
ところ、ＴＦ₀ Ｆ₁ −ＧＵＶの位相差光学顕微鏡観察に
よる最大粒径は２１１μｍ、平均粒径は６２．２μｍ、
標準偏差１４．９４μｍ（サンプル数２５０）となっ
た。

【００７１】次に、成熟後のＴＦ₀ Ｆ₁ −ＧＵＶに実施
例１と同様の条件で紫外線を照射し、その膜構造を構成
する重合性脂質を重合させた。重合によるＴＦ₀ Ｆ₁ −
ＧＵＶの粒径変化はほとんどみられなかった。更に、実
施例３と同様にして重合処理後のＴＦ₀ Ｆ₁ −ＧＵＶと
膜中に組み込まれなかったＴＦ₀ Ｆ₁ との分離のための
遠心処理を行なったところ、遠心処理によるＴＦ₀ Ｆ₁
−ＧＵＶの膜構造の破壊は認められず、重合後のＴＦ₀
Ｆ₁ −ＧＵＶの安定性が確認された。

【００７２】比較例４ 重合処理を行なわない以外は実施例５と同様にしてＴＦ
₀ Ｆ₁ −ＧＵＶを調製し、得られたＴＦ₀ Ｆ₁ −ＧＵＶ
と膜中に組み込まれなかったｂＲとの分離のための遠心
処理を行なった。ところが、遠心処理によってｂＲ−Ｇ
ＵＶが破壊されて消失してしまい、ｂＲ−ＧＵＶの沈澱
物を得ることができなかった。

【００７３】実施例６ 図１、２に示す装置を用いて電界重合ＬＢ膜を形成し
た。ＬＢ分子としては、３−ヘキサデシルピロールを用
いた。基板５としては、幅１ｃｍ、長さ５ｃｍ、厚さ
０．３ｍｍの白金板を硝酸及び純水でこの順に洗浄し、
乾燥させたものを用意した。トラフ１内壁面に金メッキ
を施し対極（陰極）１１−１を形成し、そこに純水で液
相１０を形成してから、該液相１０の表面にＬＢ分子の
０．５８ｍｇ／ｍｌクロロホルム溶液を展開した。クロ
ロホルムが蒸発するまで約１０分間静置した後、表面圧
が３０ｍＮ／ｍとなるまでバリア２で圧縮した。上下方
向に可動な電極クリップ６で基板５を鋏んでつり下げ、
基板５を陽極とし、トラフ１の内壁面１１−１を陰極と
して１．２Ｖの電圧を不図示の通電手段により印加しな
がら基板５を液相１０の液面に対して垂直な方向で上下
に往復運動させて基板上に電界重合ＬＢ膜を３０層累積
した。その際、表面圧はバリア２を基板５の方向へ移動
させることで上記の値に維持した。得られたＬＢ累積膜
を洗浄、乾燥させ、サイクリックボルタメトリーで該累
積膜の酸化還元電位を測定したところ、単位体積当りの
充放電電荷量は従来の製造法と比べて５割ほど向上して
いた。

【００７４】また、液相１０を構成する純水内に未修飾
のピロールをほぼ飽和となるように溶解させる以外は上
記と同様の操作を行ったところ、基板５上にピロール分
子と修飾ピロール分子が交互に重合した電界重合ＬＢ累
積膜を得ることができ、更に電荷量を改善することがで
きた。

【００７５】更に、ピロール分子をＬＢ分子に修飾せず
に、ステアリン酸分子との混合状態で液相１０の液面に
展開する以外は上記と同様の操作を行うことによって、
ピロールが重合して基板５上に析出するのと同時に、そ
こにステアリン酸が吸着されたハイブリッド膜を形成す
ることができた。

【００７６】実施例７ 実施例６において、基板５上にＬＢ膜が累積されるに従
って電極間の電流が低下するという現象が見られた。そ
こで、バリア２の表面を金メッキして、これを陰極とし
て、実施例６と同様の操作によって電界重合ＬＢ累積膜
を基板５上に成膜したところ、基板５へのＬＢ膜の累積
に従ってバリア２が基板５に近ずいていくので、実施例
６のような電流の低下はなく、定電圧かつ定電流での電
界重合が可能となった。

【００７７】実施例８ 実施例６と同様の装置を用い、０．１Ｍ硫酸ニッケル水
溶液をトラフ１内に入れて液相１０を形成し、そこにス
テアリン酸の０．５ｍｇ／ｍｌクロロホルム溶液を展開
し、バリア２によって２０ｍＮ／ｍの表面圧とした。白
金板からなる基板５を陰極として、基板５とトラフ内壁
面の対極１１−１（陽極）の間に電圧（２Ｖ）を印加し
て、基板５を１ｃｍ／ｍｉｎの速度でゆっくりと浸漬し
たところ、基板５の表面にニッケルが析出し、それを覆
う形でＬＢ膜が成膜した。基板上に析出したニッケル薄
膜はＬＢ膜で保護され、酸化されることはなかった。

【００７８】一般にＬＢ法における金属イオンの使用
は、ＬＢ分子の成膜性を向上させるという目的で用いら
れる添加物であったが、本発明の方法によれば、金属イ
オンから金属への還元反応をＬＢ膜の成膜と同時に行
い、金属薄膜上にＬＢ膜が積層した構造を一括して形成
できる。この金属薄層上にＬＢ膜を成膜する方法は、ニ
ッケルだけでなく、酸化され易い金属、例えばアルミニ
ウムや鉄等にも利用でき、例えば金属薄膜上にＬＢ膜を
金属の酸化を防止する保護膜として形成した構造を得る
ことができる。

【００７９】

【発明の効果】本発明の巨大リポソームの調製方法によ
り、十分な機械的、物理的強度及び優れた安定性を有す
る直径数十μｍから数百μｍの巨大リポソームを、簡便
な工程、かつ緩和な条件下で多量に調製することができ
る。また、本発明によれば、所望の機能を損なうことな
く巨大リポソームの調製が可能であり、更に、中性ある
いはその付近のｐＨでも良好な巨大リポソームの調製が
可能となり、生体内反応や生化学反応のための各種物質
の巨大リポソームを介した利用や研究を効率良く、また
効果的に行なうことができ、リポソームの用途の拡大が
可能となる。

【００８０】一方、本発明のＬＢ膜の製造方法によれ
ば、ＬＢ膜の成膜と種々の酸化もしくは還元反応を同時
に行なうことができ、例えば電界重合ＬＢ膜を液相から
基板への単分子膜の写し取り操作を行なうことで一度に
成膜でき、従来の方法のようにＬＢ膜と電界重合とを別
工程で行なう必要がない。また、本発明で得られた電界
重合膜は、従来の方法によって得られたものに比較して
高品質で高性能である。さらに、本発明によれば、種々
の酸化もしくは還元反応によって得られる各種の化学的
修飾をＬＢ膜に付与することができる。また、金属薄膜
上にＬＢ膜の保護膜を有する構造等の特異な構造を簡単
に得ることも可能である。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のＬＢ膜製造装置の概要を示す平面図で
ある。

【図２】図１の装置の液相に垂直な方向での断面図であ
る。

【符号の説明】

１ 槽（トラフ） ２ バリア ３ 表面圧測定部 ４ 溝 ５ 基板 ６ 基板保持手段 ７ 基板側端子 ８−１、８−２、８−３ 対極側端子 ９ ＬＢ分子 １０ 液相 １１−１、１１−２、１１−３ 対極

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０８Ｆ 12/26 ＭＪＹ 7211−4Ｊ 36/14 ＭＰＬ 8416−4Ｊ 38/00 ＭＰＵ 8416−4Ｊ (72)発明者 川口 正浩 東京都大田区下丸子３丁目30番２号 キヤ ノン株式会社内 (72)発明者 山本 伸子 東京都大田区下丸子３丁目30番２号 キヤ ノン株式会社内 (72)発明者 富田 佳紀 東京都大田区下丸子３丁目30番２号 キヤ ノン株式会社内

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （ａ）アルカリ金属塩水溶液を主体と
   し、重合性脂質を含むリポソーム形成用混合液の凍結、
   融解を行なう凍結融解工程と、（ｂ）該凍結融解工程に
   より得られた融解液を前記リポソーム形成用混合液より
   も低い塩濃度の水溶液または緩衝液からなる透析用溶媒
   に対して透析する透析工程と、（ｃ）該透析工程後の混
   合液を所望の粒径のリポソームが得られるまで保持する
   成熟工程と、（ｄ）所望の粒径が得られたリポソームに
   含まれる重合性脂質を重合させる重合工程とを有するこ
   とを特徴とする巨大リポソームの調製方法。
2. 【請求項２】 前記透析用溶媒の塩濃度が８０ｍＭ以下
   である請求項１に記載の巨大リポソームの調製方法。
3. 【請求項３】 前記透析用溶媒の塩濃度が５０ｍＭ以下
   である請求項１に記載の巨大リポソームの調製方法。
4. 【請求項４】 前記透析用溶媒の塩濃度が１０ｍＭ以下
   である請求項１に記載の巨大リポソームの調製方法。
5. 【請求項５】 前記リポソーム形成用混合液のｐＨが３
   以上である請求項１に記載の巨大リポソームの調製方
   法。
6. 【請求項６】 前記リポソーム形成用混合液のｐＨが４
   以上である請求項１に記載の巨大リポソームの調製方
   法。
7. 【請求項７】 前記リポソーム形成用混合液がプロテオ
   リポソーム形成用の蛋白質を含む請求項１〜６に記載の
   巨大リポソームの調製方法。
8. 【請求項８】 水性媒体の相を形成するための槽と、該
   水性媒体の相の表面に展開した単分子膜を写し取る基板
   を保持する基板保持手段とを有するラングミュア・プロ
   ジェット膜製造装置において、前記基板に反応極を、前
   記水性媒体相の表面または相中に対極を有し、これら反
   応極と対極との間に通電可能としたことを特徴とするラ
   ングミュア・プロジェット膜製造装置。
9. 【請求項９】 水性媒体の相の表面に展開した単分子膜
   を基板に写し取ることによるラングミュア・プロジェッ
   ト膜の製造方法において、前記基板を反応極として構成
   し、該反応極と前記水性媒体の相の表面または相内に設
   けた対極との間に通電しながら単分子膜を基板へ写し取
   り、成膜と同時に該反応極側で酸化もしくは還元反応を
   起こさせることを特徴とするラングミュア・プロジェッ
   ト膜の製造方法。