JPH0690775A - ジベレリン類の製造方法 - Google Patents
ジベレリン類の製造方法Info
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- JPH0690775A JPH0690775A JP23637192A JP23637192A JPH0690775A JP H0690775 A JPH0690775 A JP H0690775A JP 23637192 A JP23637192 A JP 23637192A JP 23637192 A JP23637192 A JP 23637192A JP H0690775 A JPH0690775 A JP H0690775A
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- Japan
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- gibberellins
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Abstract
(57)【要約】
【構成】ジベレラ属に属し、微生物由来のジベレリン生
産能力を有する微生物を、基質濃度０．００１％以上
０．１５％未満のｅｎｔ−カウレンおよび微量の植物生
長抑制剤を存在せしめた培地で培養し、該微生物にジベ
レリン類を産生させることを特徴とするジベレリン類の
製造方法に関する。 【効果】本発明の製造方法が提供されることにより、こ
れまで微量にしか生産あるいは入手できなかったジベレ
リン、すなわちジベレリンＡ3 、ジベレリンＡ4 以外の
ジベレリン類を、カウレンを出発物質（基質）とした微
生物変換（酵素反応）によって収率良く生産できるよう
になるとともに、著しい植物生長促進活性を示すジベレ
リン類を提供することが可能となった。本発明の製造方
法により得られるジベレリン類は植物生長促進剤として
有用である。
産能力を有する微生物を、基質濃度０．００１％以上
０．１５％未満のｅｎｔ−カウレンおよび微量の植物生
長抑制剤を存在せしめた培地で培養し、該微生物にジベ
レリン類を産生させることを特徴とするジベレリン類の
製造方法に関する。 【効果】本発明の製造方法が提供されることにより、こ
れまで微量にしか生産あるいは入手できなかったジベレ
リン、すなわちジベレリンＡ3 、ジベレリンＡ4 以外の
ジベレリン類を、カウレンを出発物質（基質）とした微
生物変換（酵素反応）によって収率良く生産できるよう
になるとともに、著しい植物生長促進活性を示すジベレ
リン類を提供することが可能となった。本発明の製造方
法により得られるジベレリン類は植物生長促進剤として
有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明はｅｎｔ−カウレンを出
発材料とした、天然に存在するジベレリンに属する化合
物の１種またはそれ以上の混合物（以下、ジベレリン類
と略する場合がある。）の製造方法に関する。
発材料とした、天然に存在するジベレリンに属する化合
物の１種またはそれ以上の混合物（以下、ジベレリン類
と略する場合がある。）の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術・発明が解決しようとする課題】ジベレリ
ンはすべての高等植物中に微量ながら自然に含まれる植
物ホルモンとしてよく知られており、植物の生育に対し
て強烈な影響を及ぼし多様化効果を有するので農業及び
園芸分野では極めて重要な化合物である。例えば、ある
種のジベレリンは大麦や小麦の面積あたりの収量を倍加
し、霜害や授粉不足に起因する作物の障害を回復させた
り、休眠状態を破ったり、老化や落果を遅らせたりする
作用があることが知られている。
ンはすべての高等植物中に微量ながら自然に含まれる植
物ホルモンとしてよく知られており、植物の生育に対し
て強烈な影響を及ぼし多様化効果を有するので農業及び
園芸分野では極めて重要な化合物である。例えば、ある
種のジベレリンは大麦や小麦の面積あたりの収量を倍加
し、霜害や授粉不足に起因する作物の障害を回復させた
り、休眠状態を破ったり、老化や落果を遅らせたりする
作用があることが知られている。
【０００３】ジベレリンは一般式（１）：
【０００４】
【化１】
【０００５】で示されるテトラサイクリック環構造を基
本とする化合物であって、該式（１）には環のナンバー
が表示されているものの、正確な立体構造は示されてい
ないのが現状である。現在、国内で主に使用されている
のは発酵法によって製造されているジベレリンＡ3 を主
成分とするジベレリンであり、種なしブドウの生産など
のような特定の商品の生産などに使われているにとどま
り、実際面では他の多くの農産物の生産には未だ使用さ
れていないのが現状である。
本とする化合物であって、該式（１）には環のナンバー
が表示されているものの、正確な立体構造は示されてい
ないのが現状である。現在、国内で主に使用されている
のは発酵法によって製造されているジベレリンＡ3 を主
成分とするジベレリンであり、種なしブドウの生産など
のような特定の商品の生産などに使われているにとどま
り、実際面では他の多くの農産物の生産には未だ使用さ
れていないのが現状である。
【０００６】現在までに知られているジベレリン類の工
業的な製造方法として、ジベレラ属に属し、ジベレリン
生産能力を有する微生物として知られているジベレラ・
フジクロイ菌を、炭素源として砂糖を用いて培養し、ジ
ベレリンＡ3 を主成分（他の成分としてジベレリン
Ａ4 、ジベレリンＡ7 を含む）とした混合物としての植
物生長ホルモン（Ｃ１９−ジベレリン）を製造する方法
が知られている（N. Takahashi, H. Kitamura, A. Kawa
rada, Y. Seta, S. Tamura & Y. Sumiki: Bull. Agric.
Chem. Soc. Japan,19, 267(1955). ）。更に、ジベレ
リンＡ3 の単位容積あたりの収量を上げるために、培地
にポリオキシアルキレングリコール化合物（特開昭４９
−１４６８８号公報）や１，３ジオキサン化合物（特開
昭４９−１４６８９号公報）を添加（２０〜５０％収率
上昇）する研究や、ジベレリンＡ4 を選択的に生産させ
る目的で培地にアルミニウム、銅、亜鉛化合物を添加す
ると効果があることが報告されている（特開昭５８−１
５２４９９号公報）。
業的な製造方法として、ジベレラ属に属し、ジベレリン
生産能力を有する微生物として知られているジベレラ・
フジクロイ菌を、炭素源として砂糖を用いて培養し、ジ
ベレリンＡ3 を主成分（他の成分としてジベレリン
Ａ4 、ジベレリンＡ7 を含む）とした混合物としての植
物生長ホルモン（Ｃ１９−ジベレリン）を製造する方法
が知られている（N. Takahashi, H. Kitamura, A. Kawa
rada, Y. Seta, S. Tamura & Y. Sumiki: Bull. Agric.
Chem. Soc. Japan,19, 267(1955). ）。更に、ジベレ
リンＡ3 の単位容積あたりの収量を上げるために、培地
にポリオキシアルキレングリコール化合物（特開昭４９
−１４６８８号公報）や１，３ジオキサン化合物（特開
昭４９−１４６８９号公報）を添加（２０〜５０％収率
上昇）する研究や、ジベレリンＡ4 を選択的に生産させ
る目的で培地にアルミニウム、銅、亜鉛化合物を添加す
ると効果があることが報告されている（特開昭５８−１
５２４９９号公報）。
【０００７】また、ジベレラ・フジクロイ菌の休止菌体
を用い炭素源として大豆油、綿実油などの植物油を用い
てジベレリンＡ3 を生産する報告（特開昭４９−１３３
５９３号公報）、植物生長抑制剤を用いてジベレリン生
合成経路の中間体であるステビオールをジベレラ・フジ
クロイ菌の培地に添加し、植物由来のジベレリンＡ1、
Ａ18、Ａ19を生産する報告（特開昭５５−１２０７９４
号公報）が知られている。しかしながら、これらの方法
で得られるジベレリン類の主なものはジベレリンＡ1 、
Ａ3 、Ａ4 、Ａ7 、Ａ18、Ａ19などに限られ、現在知ら
れている８０種以上のジベレリンのうちのわずか数種類
にすぎない。更に、これらのジベレリン類のうち、実際
に産業上利用されているものはジベレリンＡ3 のみであ
る。これ以外のジベレリン類は各々特異的な生理活性を
有すると考えられるが、その生成量が微量であるために
広範な生理活性の試験もできず、応用も殆どされていな
いのが現状である。他のジベレリンを相当量で製造する
には菌の種類を変えて、別のジベレリンを主に生産する
菌を用いて発酵法を行うか、何らかの成分を出発材料で
ある基質として微生物を用いて生成物分布の異なるジベ
レリンに変換させる方法が考えられるが、菌の種類を変
えても生産物中のジベレリンの種類の分布は変わりにく
いので、目的にかなったジベレリンを産生するのは困難
である。また、現在入手しやすいジベレリンＡ3 やジベ
レリンＡ4 から化学的変換によって別のジベレリンある
いは天然に存在しないジベレリン骨格を持った化合物を
導くことも可能である。しかしながら、化学変換も煩雑
であり、自由に求める構造に変化することは容易でな
い。
を用い炭素源として大豆油、綿実油などの植物油を用い
てジベレリンＡ3 を生産する報告（特開昭４９−１３３
５９３号公報）、植物生長抑制剤を用いてジベレリン生
合成経路の中間体であるステビオールをジベレラ・フジ
クロイ菌の培地に添加し、植物由来のジベレリンＡ1、
Ａ18、Ａ19を生産する報告（特開昭５５−１２０７９４
号公報）が知られている。しかしながら、これらの方法
で得られるジベレリン類の主なものはジベレリンＡ1 、
Ａ3 、Ａ4 、Ａ7 、Ａ18、Ａ19などに限られ、現在知ら
れている８０種以上のジベレリンのうちのわずか数種類
にすぎない。更に、これらのジベレリン類のうち、実際
に産業上利用されているものはジベレリンＡ3 のみであ
る。これ以外のジベレリン類は各々特異的な生理活性を
有すると考えられるが、その生成量が微量であるために
広範な生理活性の試験もできず、応用も殆どされていな
いのが現状である。他のジベレリンを相当量で製造する
には菌の種類を変えて、別のジベレリンを主に生産する
菌を用いて発酵法を行うか、何らかの成分を出発材料で
ある基質として微生物を用いて生成物分布の異なるジベ
レリンに変換させる方法が考えられるが、菌の種類を変
えても生産物中のジベレリンの種類の分布は変わりにく
いので、目的にかなったジベレリンを産生するのは困難
である。また、現在入手しやすいジベレリンＡ3 やジベ
レリンＡ4 から化学的変換によって別のジベレリンある
いは天然に存在しないジベレリン骨格を持った化合物を
導くことも可能である。しかしながら、化学変換も煩雑
であり、自由に求める構造に変化することは容易でな
い。
【０００８】一方、橘らは、スギの葉に含まれる成分で
あり、ジベレリン正合成経路においてステビオールより
前段階に位置するｅｎｔ−カウレン（式（２））を出発
物質として植物生長抑制剤を培地に加え、ジベレラ・フ
ジクロイ菌を１０日間培養をすることによりジベレリン
Ａ15及びジベレリンＡ14−アルデヒドを主成分とするジ
ベレリン類が、１日〜７日培養をすることによりジベレ
リンＡ1 、Ａ3 、Ａ9、Ａ12−アルデヒド等を主成分と
するジベレリン類が生成するという報告を行っている
（日本木材学会誌、ｖｏｌ．３５、Ｎｏ．８、７６１
（１９８９））。
あり、ジベレリン正合成経路においてステビオールより
前段階に位置するｅｎｔ−カウレン（式（２））を出発
物質として植物生長抑制剤を培地に加え、ジベレラ・フ
ジクロイ菌を１０日間培養をすることによりジベレリン
Ａ15及びジベレリンＡ14−アルデヒドを主成分とするジ
ベレリン類が、１日〜７日培養をすることによりジベレ
リンＡ1 、Ａ3 、Ａ9、Ａ12−アルデヒド等を主成分と
するジベレリン類が生成するという報告を行っている
（日本木材学会誌、ｖｏｌ．３５、Ｎｏ．８、７６１
（１９８９））。
【０００９】
【化２】
【００１０】この方法ではＡ15、Ａ14−アルデヒド、Ａ
9 などの従来微量しか得られなかったジベレリン類が主
成分として得られるので、新たな生理活性を持つ植物ホ
ルモンの製法として期待が待たれている。また、前記報
告によれば、この系で得られたジベレリン混合物のバイ
オアッセイを矮性稲（短銀坊主）で行い、生長促進効果
を他の基質から出発した場合と比較したところ、ジベレ
リン無添加の場合の伸長率を（１．０）とした時に、ジ
ベレリンＡ3 では（２．８）であり、イソステビオール
を出発物質として用いた培養生成物では（１．５）、同
じくカウレン酸では（２．７）に対し、ｅｎｔ−カウレ
ンを用いた時は（４．１）であったとの報告がなされて
いる。従って、ｅｎｔ−カウレンを原料に用いて生成す
るジベレリン類は非常に強い植物生長活性を有するとい
える。
9 などの従来微量しか得られなかったジベレリン類が主
成分として得られるので、新たな生理活性を持つ植物ホ
ルモンの製法として期待が待たれている。また、前記報
告によれば、この系で得られたジベレリン混合物のバイ
オアッセイを矮性稲（短銀坊主）で行い、生長促進効果
を他の基質から出発した場合と比較したところ、ジベレ
リン無添加の場合の伸長率を（１．０）とした時に、ジ
ベレリンＡ3 では（２．８）であり、イソステビオール
を出発物質として用いた培養生成物では（１．５）、同
じくカウレン酸では（２．７）に対し、ｅｎｔ−カウレ
ンを用いた時は（４．１）であったとの報告がなされて
いる。従って、ｅｎｔ−カウレンを原料に用いて生成す
るジベレリン類は非常に強い植物生長活性を有するとい
える。
【００１１】しかしながら、前記報告では、ジベレリン
の収率が低く、工業的に利用し得る量のジベレリンを生
産するのが困難であるといった欠点を有する（ジベレラ
・フジクロイ菌の菌株としてＩＦＯ−３１２５１を使
用、ｅｎｔ−カウレンの培地に対する濃度０．１５％、
２４℃、７日間の培養条件で、ジベレリンのｅｎｔ−カ
ウレンに対する収率は６．７％と報告されている）。従
って、前記報告の方法は上記の問題点を改良することに
より、従来微量にしか得られなかった各種ジベレリンの
製造において工業的に有用な方法となり得ると考えられ
る。従って本発明の目的は、特定量のｅｎｔ−カウレン
を出発物質として、ジベレラ・フジクロイ菌を植物生長
抑制剤存在下に培養して、従来微量にしか得られなかっ
たジベレリン類を量産することであり、更には前記方法
により量産されたジベレリンを用いて産業的に有用な植
物生長促進剤を開発することである。
の収率が低く、工業的に利用し得る量のジベレリンを生
産するのが困難であるといった欠点を有する（ジベレラ
・フジクロイ菌の菌株としてＩＦＯ−３１２５１を使
用、ｅｎｔ−カウレンの培地に対する濃度０．１５％、
２４℃、７日間の培養条件で、ジベレリンのｅｎｔ−カ
ウレンに対する収率は６．７％と報告されている）。従
って、前記報告の方法は上記の問題点を改良することに
より、従来微量にしか得られなかった各種ジベレリンの
製造において工業的に有用な方法となり得ると考えられ
る。従って本発明の目的は、特定量のｅｎｔ−カウレン
を出発物質として、ジベレラ・フジクロイ菌を植物生長
抑制剤存在下に培養して、従来微量にしか得られなかっ
たジベレリン類を量産することであり、更には前記方法
により量産されたジベレリンを用いて産業的に有用な植
物生長促進剤を開発することである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】以上の問題点を考慮し、
解決すべく鋭意検討を行った結果、スギの葉から抽出し
て得られるｅｎｔ−カウレンを出発物質として、ジベレ
ラ属に属し、微生物由来のジベレリン生産能力を有する
微生物、例えばジベレラ・フジクロイ菌を微量の植物生
長抑制剤存在下で培養してジベレリン類を量産する方法
において、所定の濃度の基質カウレンを用いることによ
って大幅な収率向上を達成することにより、この発明を
完成するに至った。
解決すべく鋭意検討を行った結果、スギの葉から抽出し
て得られるｅｎｔ−カウレンを出発物質として、ジベレ
ラ属に属し、微生物由来のジベレリン生産能力を有する
微生物、例えばジベレラ・フジクロイ菌を微量の植物生
長抑制剤存在下で培養してジベレリン類を量産する方法
において、所定の濃度の基質カウレンを用いることによ
って大幅な収率向上を達成することにより、この発明を
完成するに至った。
【００１３】すなわち本発明の要旨は、ジベレラ属に属
し、微生物由来のジベレジン生産能力を有する微生物
を、基質濃度０．００１％以上０．１５％未満のｅｎｔ
−カウレンおよび微量の植物生長抑制剤を存在せしめた
培地で培養し、該微生物にジベレリン類を産生させるこ
とを特徴とするジベレリンの製造方法に関する。さらに
詳しくは、スギの葉から溶剤抽出して得られるｅｎｔ−
カウレンを、あらかじめ培養して増殖し集菌したジベレ
ラ・フジクロイ菌と共にジャーファーメンター中の培地
に入れ、菌糸の生育を促進するため微量の植物生長抑制
剤を添加して培養する方法において、培養では窒素含量
を０％にして菌体の増殖を抑え、酵素反応を促進させる
方法を用いて、基質濃度を低くして培養を行なう。この
方法によって、これまで量的に得ることが困難であった
ジベレリンＡ15、Ａ14−アルデヒド、Ａ9 などの植物生
長ホルモンを生産することに関する。
し、微生物由来のジベレジン生産能力を有する微生物
を、基質濃度０．００１％以上０．１５％未満のｅｎｔ
−カウレンおよび微量の植物生長抑制剤を存在せしめた
培地で培養し、該微生物にジベレリン類を産生させるこ
とを特徴とするジベレリンの製造方法に関する。さらに
詳しくは、スギの葉から溶剤抽出して得られるｅｎｔ−
カウレンを、あらかじめ培養して増殖し集菌したジベレ
ラ・フジクロイ菌と共にジャーファーメンター中の培地
に入れ、菌糸の生育を促進するため微量の植物生長抑制
剤を添加して培養する方法において、培養では窒素含量
を０％にして菌体の増殖を抑え、酵素反応を促進させる
方法を用いて、基質濃度を低くして培養を行なう。この
方法によって、これまで量的に得ることが困難であった
ジベレリンＡ15、Ａ14−アルデヒド、Ａ9 などの植物生
長ホルモンを生産することに関する。
【００１４】本発明で用いられるジベレラ属に属し、微
生物由来のジベレジン生産能力を有する微生物として
は、具体的には例えばジベレラ・フジクロイ菌が好適な
ものとして挙げられる。ジベレラ・フジクロイ菌の菌株
としてはＩＦＯ−６６０３〜６６０７、ＩＦＯ−９９７
６〜９９７７、ＩＦＯ−６６０５、ＩＦＯ−３０３３７
及びＩＦＯ−３１２５１等が入手可能な公知の菌株とし
て挙げられるが、同じ属であれば特に限定されるもので
はない。
生物由来のジベレジン生産能力を有する微生物として
は、具体的には例えばジベレラ・フジクロイ菌が好適な
ものとして挙げられる。ジベレラ・フジクロイ菌の菌株
としてはＩＦＯ−６６０３〜６６０７、ＩＦＯ−９９７
６〜９９７７、ＩＦＯ−６６０５、ＩＦＯ−３０３３７
及びＩＦＯ−３１２５１等が入手可能な公知の菌株とし
て挙げられるが、同じ属であれば特に限定されるもので
はない。
【００１５】本発明で用いられるｅｎｔ−カウレンは、
スギの生葉をヘキサン抽出後濃縮し、濃縮液を水蒸気蒸
留にかけて低沸点物質を除き、蒸留残査をシリカゲル充
填カラム−ヘキサン溶剤で精製したのち、ジエチルエー
テル／メタノール混合溶剤で再結晶して得られる融点４
９℃の無色結晶である。生のスギ葉から０．０５〜０．
１重量％のｅｎｔ−カウレンが上記の操作によって得ら
れる。本発明の製造方法において使用するｅｎｔ−カウ
レンの使用量は、基質濃度０．００１％以上０．１５％
未満、好ましくは０．０１％以上０．１５％未満であ
る。基質濃度が０．１５％を越えるとカウレンからのジ
ベレリン類の収率が低く、基質濃度が０．００１％未満
であると一定量のジベレリンを培養するための装置が大
型化し、ジベレリンを抽出するために大量の溶媒の使用
を必要とするので、経済的に好ましくない。
スギの生葉をヘキサン抽出後濃縮し、濃縮液を水蒸気蒸
留にかけて低沸点物質を除き、蒸留残査をシリカゲル充
填カラム−ヘキサン溶剤で精製したのち、ジエチルエー
テル／メタノール混合溶剤で再結晶して得られる融点４
９℃の無色結晶である。生のスギ葉から０．０５〜０．
１重量％のｅｎｔ−カウレンが上記の操作によって得ら
れる。本発明の製造方法において使用するｅｎｔ−カウ
レンの使用量は、基質濃度０．００１％以上０．１５％
未満、好ましくは０．０１％以上０．１５％未満であ
る。基質濃度が０．１５％を越えるとカウレンからのジ
ベレリン類の収率が低く、基質濃度が０．００１％未満
であると一定量のジベレリンを培養するための装置が大
型化し、ジベレリンを抽出するために大量の溶媒の使用
を必要とするので、経済的に好ましくない。
【００１６】また本発明で用いられる植物生長抑制剤と
しては、２−イソプロピル−４−ジメチルアミノ−５−
メチルフェニル−１−ピペリジンカルボキシレートメチ
ルクロライド（商品名ＡＭＯ−１６１８）、（２−クロ
ロエチル）トリメチルアンモニウムクロライド（商品名
ＣＣＣ）、塩化コリン（ＣＣ）等が挙げられる。植物生
長抑制剤の使用量としては、ｅｎｔ−カウレンに対して
０．０００１〜０．００３ｗｔ％であるが、好ましくは
０．０００６〜０．００３ｗｔ％が使用される。
しては、２−イソプロピル−４−ジメチルアミノ−５−
メチルフェニル−１−ピペリジンカルボキシレートメチ
ルクロライド（商品名ＡＭＯ−１６１８）、（２−クロ
ロエチル）トリメチルアンモニウムクロライド（商品名
ＣＣＣ）、塩化コリン（ＣＣ）等が挙げられる。植物生
長抑制剤の使用量としては、ｅｎｔ−カウレンに対して
０．０００１〜０．００３ｗｔ％であるが、好ましくは
０．０００６〜０．００３ｗｔ％が使用される。
【００１７】本発明におけるジベレリン生産能力を有す
る微生物の培養に用いる培地としては、菌体の増殖を抑
えるため、窒素分であるＮＨ4 ＮＯ3 ，（ＮＨ4 ）6 Ｍ
ｏ7Ｏ24・４Ｈ2 Ｏを添加しないことによって、窒素含
量を０％としたＩＣＩ培地（Ｃｈｏ，Ｋ．Ｙ．ｅｔ ａ
ｌ．：Ｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏ
ｌ．，２０，７５−８１（１９７９）等を用いることが
好ましい。
る微生物の培養に用いる培地としては、菌体の増殖を抑
えるため、窒素分であるＮＨ4 ＮＯ3 ，（ＮＨ4 ）6 Ｍ
ｏ7Ｏ24・４Ｈ2 Ｏを添加しないことによって、窒素含
量を０％としたＩＣＩ培地（Ｃｈｏ，Ｋ．Ｙ．ｅｔ ａ
ｌ．：Ｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏ
ｌ．，２０，７５−８１（１９７９）等を用いることが
好ましい。
【００１８】本発明におけるジベレリン類とは、天然に
存在するジベレリンに属する化合物の１種またはそれ以
上の混合物をさすものであり、具体的には、ジベレリン
Ａ1、Ａ3 、Ａ4 、Ａ7 、Ａ9 、Ａ12、Ａ12−アルデヒ
ド、Ａ14、Ａ14−アルデヒド、Ａ15、Ａ16、Ａ24等が、
また、これらの前駆体として７−βーヒドロキシカウレ
ン酸等が挙げられる。
存在するジベレリンに属する化合物の１種またはそれ以
上の混合物をさすものであり、具体的には、ジベレリン
Ａ1、Ａ3 、Ａ4 、Ａ7 、Ａ9 、Ａ12、Ａ12−アルデヒ
ド、Ａ14、Ａ14−アルデヒド、Ａ15、Ａ16、Ａ24等が、
また、これらの前駆体として７−βーヒドロキシカウレ
ン酸等が挙げられる。
【００１９】以下に本発明の製造方法について詳述す
る。例えば、まずジベレラ・フジクロイ菌の菌体を増殖
させることを目的とする前培養を２回行なうことにより
菌体を集菌する。この時に用いる菌株としては、例えば
ＩＦＯ−３０３３７及びＩＦＯ−３１２５１等が使用で
きる。
る。例えば、まずジベレラ・フジクロイ菌の菌体を増殖
させることを目的とする前培養を２回行なうことにより
菌体を集菌する。この時に用いる菌株としては、例えば
ＩＦＯ−３０３３７及びＩＦＯ−３１２５１等が使用で
きる。
【００２０】本発明の前培養に用いられる培地として
は、Ｉｍｐｅｒｉａｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓ
ｔｒｙ社で開発されたＩＣＩ培地（Ｃｈｏ，Ｋ．Ｙ．ｅ
ｔ ａｌ．：Ｐｌａｎｔ ａｎｄ ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓ
ｉｏｌ．，２０，７５−８１（１９７９）等を用いるこ
とができる。ＩＣＩ培地の調整は、Ａ培地（グルコース
８０．０ｇ、ＮＨ4 ＮＯ3 １．９２ｇ、ＫＨ2 ＰＯ
4 ５．０ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ１．０ｇ、蒸留水１
０００ｍｌ）にＢ培地（ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．１
ｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ ０．０１５ｇ、ＺｎＳＯ4
・７Ｈ2 Ｏ ０．０１６１ｇ、ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ
０．０１０ｇ、（ＮＨ4 ）6 Ｍｏ7 Ｏ24・４Ｈ2Ｏ
０．０１０ｇ、蒸留水１００ｍｌ）の液２ｍｌを加えて
調製する。この培地は窒素含量４０％である。
は、Ｉｍｐｅｒｉａｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓ
ｔｒｙ社で開発されたＩＣＩ培地（Ｃｈｏ，Ｋ．Ｙ．ｅ
ｔ ａｌ．：Ｐｌａｎｔ ａｎｄ ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓ
ｉｏｌ．，２０，７５−８１（１９７９）等を用いるこ
とができる。ＩＣＩ培地の調整は、Ａ培地（グルコース
８０．０ｇ、ＮＨ4 ＮＯ3 １．９２ｇ、ＫＨ2 ＰＯ
4 ５．０ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ１．０ｇ、蒸留水１
０００ｍｌ）にＢ培地（ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．１
ｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ ０．０１５ｇ、ＺｎＳＯ4
・７Ｈ2 Ｏ ０．０１６１ｇ、ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ
０．０１０ｇ、（ＮＨ4 ）6 Ｍｏ7 Ｏ24・４Ｈ2Ｏ
０．０１０ｇ、蒸留水１００ｍｌ）の液２ｍｌを加えて
調製する。この培地は窒素含量４０％である。
【００２１】次に、ｅｎｔ−カウレン（基質）を酵素反
応によりジベレリンへ変換するために前述のようにして
集菌したジベレラ・フジクロイ菌の培養を行う。この培
地としては、菌体の増殖を抑えるため、窒素分のＮＨ4
ＮＯ3 ，（ＮＨ4 ）6 Ｍｏ7Ｏ24・４Ｈ2 Ｏを添加しな
いＩＣＩ培地（窒素含量０％）等を用いることが好まし
い。ジャーファーメンターの中に前記培地を載置し、該
培地にジベレラ・フジクロイ菌、ｅｎｔ−カウレンおよ
び植物生長抑制剤を添加して培養が行われる。培養に用
いるジャーファーメンターとしては、例えば、東京理化
器械（株）製ＭＢＦ型２．５リットル及び１０リットル
の培養槽を用いることができ、培養温度２４〜２５℃、
攪拌速度２００〜５００ｒｐｍ、通気量０．１〜５リッ
トル／分、培養日数は目的とするジベレリン類の種類お
よび必要量に応じて任意の日数、例えば１〜１０日間程
度の条件で培養を行なうことができる。
応によりジベレリンへ変換するために前述のようにして
集菌したジベレラ・フジクロイ菌の培養を行う。この培
地としては、菌体の増殖を抑えるため、窒素分のＮＨ4
ＮＯ3 ，（ＮＨ4 ）6 Ｍｏ7Ｏ24・４Ｈ2 Ｏを添加しな
いＩＣＩ培地（窒素含量０％）等を用いることが好まし
い。ジャーファーメンターの中に前記培地を載置し、該
培地にジベレラ・フジクロイ菌、ｅｎｔ−カウレンおよ
び植物生長抑制剤を添加して培養が行われる。培養に用
いるジャーファーメンターとしては、例えば、東京理化
器械（株）製ＭＢＦ型２．５リットル及び１０リットル
の培養槽を用いることができ、培養温度２４〜２５℃、
攪拌速度２００〜５００ｒｐｍ、通気量０．１〜５リッ
トル／分、培養日数は目的とするジベレリン類の種類お
よび必要量に応じて任意の日数、例えば１〜１０日間程
度の条件で培養を行なうことができる。
【００２２】培養終了後、培養液から通常のＣｈｏ，
Ｋ．Ｙ．等の方法（Ｃｈｏ，Ｋ．Ｙ．ｅｔ ａｌ：Ｐｌ
ａｎｔ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２０，
７５−８１（１９７９））により菌体を分離した後、酢
酸エチル、メタノール、ブタノール、アセトン−水（７
０：３０〜４０：６０）、クロロホルム−メタノール−
酢酸などの混合溶媒等により１種以上のジベレリンの混
合物、すなわちジベレリン類として抽出することができ
る。
Ｋ．Ｙ．等の方法（Ｃｈｏ，Ｋ．Ｙ．ｅｔ ａｌ：Ｐｌ
ａｎｔ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２０，
７５−８１（１９７９））により菌体を分離した後、酢
酸エチル、メタノール、ブタノール、アセトン−水（７
０：３０〜４０：６０）、クロロホルム−メタノール−
酢酸などの混合溶媒等により１種以上のジベレリンの混
合物、すなわちジベレリン類として抽出することができ
る。
【００２３】抽出後のジベレリン類は、クロマトグラフ
ィーで分離した後、メチルエステル−トリメチルエーテ
ル化（Ｃｈｏ，Ｋ．Ｙ．ｅｔ ａｌ：Ｐｌａｎｔ ａｎ
ｄＣｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２０，７５−８１（１
９７９）、Ｆｕｊｉｓａｗａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．：Ａｇ
ｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４９，２７−３３（１
９８５））を行うことによって、ガスクロマトグラフィ
ー（ＧＣ）、ガスクロマトグラフ−質量分析法（ＧＣ−
ＭＳ）等の方法で分析を行なうことができる。上記のよ
うな分析方法を用いた場合、本発明の製造方法により得
られるジベレリン類は、ジベレリンＡ1 、Ａ3 、Ａ4 、
Ａ7 、Ａ9 、Ａ12、Ａ12−アルデヒド、Ａ14、Ａ14−ア
ルデヒド、Ａ15、Ａ16、Ａ24、前駆体７−βーヒドロキ
シカウレン酸を含むが、本発明の方法により生成される
ジベレリン類のうち、ジベレリンＡ3 は１％以下であ
り、ジベレリンＡ9 、Ａ14−アルデヒド、Ａ15、および
Ａ1 、Ａ4 、Ａ7 などが大部分を占めるものであること
が、後述の実施例により明らかとなっている。この結果
は橘らの報告（日本木材学会誌、ｖｏｌ．３５，Ｎｏ
８，７６１（１９８９））の生成物分布と類似するもの
であり、ジベレリンＡ 3 以外のジベレリン類の製造法と
して新しい方法として有効である。
ィーで分離した後、メチルエステル−トリメチルエーテ
ル化（Ｃｈｏ，Ｋ．Ｙ．ｅｔ ａｌ：Ｐｌａｎｔ ａｎ
ｄＣｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２０，７５−８１（１
９７９）、Ｆｕｊｉｓａｗａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．：Ａｇ
ｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４９，２７−３３（１
９８５））を行うことによって、ガスクロマトグラフィ
ー（ＧＣ）、ガスクロマトグラフ−質量分析法（ＧＣ−
ＭＳ）等の方法で分析を行なうことができる。上記のよ
うな分析方法を用いた場合、本発明の製造方法により得
られるジベレリン類は、ジベレリンＡ1 、Ａ3 、Ａ4 、
Ａ7 、Ａ9 、Ａ12、Ａ12−アルデヒド、Ａ14、Ａ14−ア
ルデヒド、Ａ15、Ａ16、Ａ24、前駆体７−βーヒドロキ
シカウレン酸を含むが、本発明の方法により生成される
ジベレリン類のうち、ジベレリンＡ3 は１％以下であ
り、ジベレリンＡ9 、Ａ14−アルデヒド、Ａ15、および
Ａ1 、Ａ4 、Ａ7 などが大部分を占めるものであること
が、後述の実施例により明らかとなっている。この結果
は橘らの報告（日本木材学会誌、ｖｏｌ．３５，Ｎｏ
８，７６１（１９８９））の生成物分布と類似するもの
であり、ジベレリンＡ 3 以外のジベレリン類の製造法と
して新しい方法として有効である。
【００２４】また、本発明の製造方法により得られるジ
ベレリン類のバイオアッセイ法としては、矮性稲（短銀
坊主）を用いた滴下法（文献：山根久和、高橋信孝；
“生理活性物質のバイオアッセイ”、講談社、１９８
４，ｐ１０５−１１６）及びウニコナゾールを用いる方
法（文献：Ｔ．Ｎｉｓｈｉｊｉｍａ，Ｎ．Ｋａｔｓｕｒ
ａ，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３０
（５），６２３（１９８９））に従ってテストを行なう
ことができる。
ベレリン類のバイオアッセイ法としては、矮性稲（短銀
坊主）を用いた滴下法（文献：山根久和、高橋信孝；
“生理活性物質のバイオアッセイ”、講談社、１９８
４，ｐ１０５−１１６）及びウニコナゾールを用いる方
法（文献：Ｔ．Ｎｉｓｈｉｊｉｍａ，Ｎ．Ｋａｔｓｕｒ
ａ，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３０
（５），６２３（１９８９））に従ってテストを行なう
ことができる。
【００２５】以上のような、本発明の方法により得られ
るジベレリン類は、植物の生育に対して強烈な影響を及
ぼし多様化効果を有するため、農業及び園芸分野におい
て作物の収量の調節等に有効に利用することができる。
るジベレリン類は、植物の生育に対して強烈な影響を及
ぼし多様化効果を有するため、農業及び園芸分野におい
て作物の収量の調節等に有効に利用することができる。
【００２６】
【実施例】以下、実施例および比較例により本発明をさ
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等によ
りなんら限定されるものではない。 実施例１ （１）ジベレラ・フジクロイ菌（ＩＦＯ−３０３３７及
びＩＦＯ−３１２５１の菌株）の前培養：２個の３００
ｍｌ三角フラスコ各々に、窒素含量４０％のＩＣＩ溶液
６０ｍｌを入れ、加熱減菌後、ＩＦＯ−３０３３７及び
３１２５１菌株をそれぞれ１白金耳植菌した。これを２
５℃で３日間１５０ｒｐｍで振盪培養した。
らに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等によ
りなんら限定されるものではない。 実施例１ （１）ジベレラ・フジクロイ菌（ＩＦＯ−３０３３７及
びＩＦＯ−３１２５１の菌株）の前培養：２個の３００
ｍｌ三角フラスコ各々に、窒素含量４０％のＩＣＩ溶液
６０ｍｌを入れ、加熱減菌後、ＩＦＯ−３０３３７及び
３１２５１菌株をそれぞれ１白金耳植菌した。これを２
５℃で３日間１５０ｒｐｍで振盪培養した。
【００２７】（２）上記（１）で得た培養液２４ｍｌを
無菌的にとり、新たに調製した窒素含量４０％のＩＣＩ
溶液１．２リットルを４個の５００ｍｌ三角フラスコに
分取したものに加え、２５℃において（１）と同条件で
培養した。このとき菌糸の生育を促進させるため植物生
長抑制剤ＡＭＯ−１６１８を２０ｍｇ添加した。
無菌的にとり、新たに調製した窒素含量４０％のＩＣＩ
溶液１．２リットルを４個の５００ｍｌ三角フラスコに
分取したものに加え、２５℃において（１）と同条件で
培養した。このとき菌糸の生育を促進させるため植物生
長抑制剤ＡＭＯ−１６１８を２０ｍｇ添加した。
【００２８】（３）上記（２）で得た培養液を無菌的に
濾過し、菌体を分離した。 （４）ジベレラ・フジクロイ菌による本培養：（３）で
得た菌体を、減菌済みの２．０リットルのＩＣＩ溶液
（窒素分０％）、植物生長抑制剤として２０ｍｇのＡＭ
Ｏ−１６１８および２００ｍｇのカウレン（２ｍｌの酢
酸エチル溶液として）の入った培養槽に移した。培養は
２５℃、攪拌速度３００ｒｐｍ、無菌フィルターを通し
た空気０．１リットル／分で１〜１０日間行った。経時
的に培養液のサンプリングを行って生成されるジベレリ
ン類を抽出し、分析した。
濾過し、菌体を分離した。 （４）ジベレラ・フジクロイ菌による本培養：（３）で
得た菌体を、減菌済みの２．０リットルのＩＣＩ溶液
（窒素分０％）、植物生長抑制剤として２０ｍｇのＡＭ
Ｏ−１６１８および２００ｍｇのカウレン（２ｍｌの酢
酸エチル溶液として）の入った培養槽に移した。培養は
２５℃、攪拌速度３００ｒｐｍ、無菌フィルターを通し
た空気０．１リットル／分で１〜１０日間行った。経時
的に培養液のサンプリングを行って生成されるジベレリ
ン類を抽出し、分析した。
【００２９】（５）代謝物の抽出・分析：サンプルとし
て採取した培養液（１００ｍｌ）から菌体を分離した
後、濾液に１５０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
を加え、酢酸エチル（１５０ｍｌ×３）で抽出した。酢
酸エチル層は芒硝で乾燥後減圧濃縮し、中性部抽出物
（中性部）を得た。水層は更に希塩酸でｐＨ２．５と
し、酢酸エチル（１５０ｍｌ×３）で抽出し、酸性中性
物（酸性部）を得た。ジベレリンはＴＬＣ上で８０％硫
酸を噴霧後加熱（１２０℃、１０分）する事によりＵＶ
ランプ（３６５ｎｍ）照射下に青色の蛍光を発するの
で、この方法を抽出物について行ったところ、酸性部に
ジベレリンのスポットを検出した。酸性部は前述のＣｈ
ｏらの方法でメチルエステル−トリメチルシリルエーテ
ル（Ｍｅ−ＴＭＳ）化し、ＧＣおよびＧＣ−ＭＳで分析
するとともに、酸性部からＴＬＣ分取によりジベレリン
呈色を示すフラクションを分取し、これも上記と同様に
分析した。Ｍｅ−ＴＭＳ化酸性抽出部またはＴＬＣ分取
したジベレリンフラクションのメタノール溶液（１００
μｌ）にジアゾメタンのエーテル溶液を加えてエステル
化した後、溶媒を留去し、減圧乾燥の後これにＮ，Ｏ−
ビス−トリメチルシリルアセトアミド（１０μｌ）、ト
リメチルシリルクロライド（５μｌ）、ピリジン（１０
μｌ）を加えてＴＭＳ化した。 ＧＣ条件：Silicone OV-101,キャピラリーカラム(25m×
0.25mm,IDO.20mm),150→300 ℃(5℃/min) 昇温, Det &
Inj 270 ℃, キャリヤーガス(He)0.7ml/m, FIDH2 1.3kg
/cm2 , Split Ratio 1:30。 ＧＣ−ＭＳ条件：Shimadzu QP-1000を用い、ＧＣと同条
件にて行った。但し、キャリヤーガスはヘリウムを用い
た。 生成したジベレリン類のサンプルを分析した結果をまと
めて表１に示した。
て採取した培養液（１００ｍｌ）から菌体を分離した
後、濾液に１５０ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
を加え、酢酸エチル（１５０ｍｌ×３）で抽出した。酢
酸エチル層は芒硝で乾燥後減圧濃縮し、中性部抽出物
（中性部）を得た。水層は更に希塩酸でｐＨ２．５と
し、酢酸エチル（１５０ｍｌ×３）で抽出し、酸性中性
物（酸性部）を得た。ジベレリンはＴＬＣ上で８０％硫
酸を噴霧後加熱（１２０℃、１０分）する事によりＵＶ
ランプ（３６５ｎｍ）照射下に青色の蛍光を発するの
で、この方法を抽出物について行ったところ、酸性部に
ジベレリンのスポットを検出した。酸性部は前述のＣｈ
ｏらの方法でメチルエステル−トリメチルシリルエーテ
ル（Ｍｅ−ＴＭＳ）化し、ＧＣおよびＧＣ−ＭＳで分析
するとともに、酸性部からＴＬＣ分取によりジベレリン
呈色を示すフラクションを分取し、これも上記と同様に
分析した。Ｍｅ−ＴＭＳ化酸性抽出部またはＴＬＣ分取
したジベレリンフラクションのメタノール溶液（１００
μｌ）にジアゾメタンのエーテル溶液を加えてエステル
化した後、溶媒を留去し、減圧乾燥の後これにＮ，Ｏ−
ビス−トリメチルシリルアセトアミド（１０μｌ）、ト
リメチルシリルクロライド（５μｌ）、ピリジン（１０
μｌ）を加えてＴＭＳ化した。 ＧＣ条件：Silicone OV-101,キャピラリーカラム(25m×
0.25mm,IDO.20mm),150→300 ℃(5℃/min) 昇温, Det &
Inj 270 ℃, キャリヤーガス(He)0.7ml/m, FIDH2 1.3kg
/cm2 , Split Ratio 1:30。 ＧＣ−ＭＳ条件：Shimadzu QP-1000を用い、ＧＣと同条
件にて行った。但し、キャリヤーガスはヘリウムを用い
た。 生成したジベレリン類のサンプルを分析した結果をまと
めて表１に示した。
【００３０】
【表１】
【００３１】表１から、基質濃度を低下させると明らか
に収率が向上することが判る。即ち、カウレンの基質濃
度を橘らの以前の報告の基質濃度である０．１５％から
０．０１％に変え、また菌株も新しくＩＦＯ−３０３３
７に変えて微生物変換を行なった場合、１０日間の培養
でカウレンに対する収率は５３％と上昇し、高い収率で
ジベレリン類を生産することができた。また上と同条件
でＩＦＯ−３１２５１を用いて培養した場合も、３日間
の培養でジベレリンのカウレンに対する収率は３９％と
上昇した。また、ＩＦＯ−３０３３７菌株とＩＦＯ−３
１２５１菌株より得られる、ジベレリン類の各成分の組
成を表２と表３に示す。
に収率が向上することが判る。即ち、カウレンの基質濃
度を橘らの以前の報告の基質濃度である０．１５％から
０．０１％に変え、また菌株も新しくＩＦＯ−３０３３
７に変えて微生物変換を行なった場合、１０日間の培養
でカウレンに対する収率は５３％と上昇し、高い収率で
ジベレリン類を生産することができた。また上と同条件
でＩＦＯ−３１２５１を用いて培養した場合も、３日間
の培養でジベレリンのカウレンに対する収率は３９％と
上昇した。また、ＩＦＯ−３０３３７菌株とＩＦＯ−３
１２５１菌株より得られる、ジベレリン類の各成分の組
成を表２と表３に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】
【表３】
【００３４】表２から、この実施例により生じたジベレ
リン類は、ジベレリンＡ1 、Ａ3 、Ａ4 、Ａ7 、Ａ9 、
Ａ12、Ａ12−アルデヒド、Ａ14、Ａ14−アルデヒド、Ａ
15、Ａ16、Ａ24、前駆体７−βーヒドロキシカウレン酸
を含んでいるが、生成ジベレリン類のうちＡ3 は１％以
下であり、ジベレリンＡ9 、Ａ14−アルデヒド、Ａ15、
およびＡ1 、Ａ4 、Ａ7 などが大部分を占めている。こ
の結果は橘らの報告（日本木材学会誌、ｖｏｌ１３５，
Ｎｏ８，７６１（１９８９））の生成物分布と類似する
ものであり、ジベレリンＡ3 以外のジベレリン類の製造
法として新しい方法であることが判明した。 実施例２ （植物生長抑制剤の添加量） 菌株としてＩＦＯ−３０３３７を使用し、植物生長抑制
剤（ＡＭＯ−１６１８）の添加量を変えて抑制剤無添
加、２０ｍｇ添加、６０ｍｇ添加とする以外は実施例１
と同条件でジベレリン類の収率を測定した。表４にその
結果を示す。
リン類は、ジベレリンＡ1 、Ａ3 、Ａ4 、Ａ7 、Ａ9 、
Ａ12、Ａ12−アルデヒド、Ａ14、Ａ14−アルデヒド、Ａ
15、Ａ16、Ａ24、前駆体７−βーヒドロキシカウレン酸
を含んでいるが、生成ジベレリン類のうちＡ3 は１％以
下であり、ジベレリンＡ9 、Ａ14−アルデヒド、Ａ15、
およびＡ1 、Ａ4 、Ａ7 などが大部分を占めている。こ
の結果は橘らの報告（日本木材学会誌、ｖｏｌ１３５，
Ｎｏ８，７６１（１９８９））の生成物分布と類似する
ものであり、ジベレリンＡ3 以外のジベレリン類の製造
法として新しい方法であることが判明した。 実施例２ （植物生長抑制剤の添加量） 菌株としてＩＦＯ−３０３３７を使用し、植物生長抑制
剤（ＡＭＯ−１６１８）の添加量を変えて抑制剤無添
加、２０ｍｇ添加、６０ｍｇ添加とする以外は実施例１
と同条件でジベレリン類の収率を測定した。表４にその
結果を示す。
【００３５】
【表４】
【００３６】この結果から、ＡＭＯ−１６１８は２リッ
トルＩＣＩ培地に対して２０ｍｇ程度添加すれば良いこ
とが判った。
トルＩＣＩ培地に対して２０ｍｇ程度添加すれば良いこ
とが判った。
【００３７】実施例３ （植物生長抑制剤の種類） 植物生長抑制剤の種類を変えた場合のジベレリン類の収
率を実施例２と同条件で測定した。表５にその結果を示
す。
率を実施例２と同条件で測定した。表５にその結果を示
す。
【００３８】
【表５】
【００３９】この結果から、植物生長抑制剤としてはＡ
ＭＯ−１６１８が好ましいことが判った。
ＭＯ−１６１８が好ましいことが判った。
【００４０】実施例４ （攪拌速度の影響） 培養槽の攪拌速度のジベレリン生成に対する影響をみ
た。菌株としてＩＦＯ−３０３３７を使用し、攪拌羽根
を２００〜８０ｒｐｍと変化させる以外は実施例１と同
条件でジベレリン類の収率を測定した。表６にその結果
を示す。
た。菌株としてＩＦＯ−３０３３７を使用し、攪拌羽根
を２００〜８０ｒｐｍと変化させる以外は実施例１と同
条件でジベレリン類の収率を測定した。表６にその結果
を示す。
【００４１】
【表６】
【００４２】この結果から、攪拌速度は３００ｒｐｍ以
上は必要ないと考えられた。
上は必要ないと考えられた。
【００４３】実施例５ （空気量の影響） 培養槽へ吹き込む空気量のジベレリン収率に対するの影
響を、使用カウレンに対する重量％で示した。菌株とし
てＩＦＯ−３１２５１を使用し、培養槽へ吹き込む空気
量を変化させる以外は実施例１と同条件でジベレリン類
の収率を測定した。表７にその結果を示す。
響を、使用カウレンに対する重量％で示した。菌株とし
てＩＦＯ−３１２５１を使用し、培養槽へ吹き込む空気
量を変化させる以外は実施例１と同条件でジベレリン類
の収率を測定した。表７にその結果を示す。
【００４４】
【表７】
【００４５】この結果から、培養槽へ吹き込む空気量
は、２リットルの系では０．５リットル／分で充分と考
えられる。
は、２リットルの系では０．５リットル／分で充分と考
えられる。
【００４６】実施例６ （温度の影響） 培養温度のジベレリン収率に対する影響を調べた。菌株
としてＩＦＯ−３０３３７を使用し、培養温度を変化さ
せる以外は実施例１と同条件でジベレリン類の収率を測
定した。表８にその結果を示す。
としてＩＦＯ−３０３３７を使用し、培養温度を変化さ
せる以外は実施例１と同条件でジベレリン類の収率を測
定した。表８にその結果を示す。
【００４７】
【表８】
【００４８】この結果から、培養温度は２５℃付近が適
温であると考えられる。
温であると考えられる。
【００４９】 実施例７ （スケールアップ条件下での培養） １０リットル培養槽を用いて試験を行った。薬剤、培
地、空気量などはすべて実施例１（２リットルスケー
ル）の５倍の量を用いた。その他の培養条件はすべて実
施例１と同条件とし、菌株はＩＦＯ−３０３３７および
ＩＦＯ−３１２５１を使用して試験を行い、ジベレリン
類の収率を測定した。その結果を表９に示した。
地、空気量などはすべて実施例１（２リットルスケー
ル）の５倍の量を用いた。その他の培養条件はすべて実
施例１と同条件とし、菌株はＩＦＯ−３０３３７および
ＩＦＯ−３１２５１を使用して試験を行い、ジベレリン
類の収率を測定した。その結果を表９に示した。
【００５０】
【表９】
【００５１】この結果から、スケールアップ条件下での
培養においても実施例１と同様の結果がえられることが
判る。
培養においても実施例１と同様の結果がえられることが
判る。
【００５２】実施例８ （植物生長促進効果の検定） 実施例１の試験において得られたジベレリンを用いて矮
性稲（短銀坊主）で生長促進効果を測定した。結果を表
１０〜１２に示す。
性稲（短銀坊主）で生長促進効果を測定した。結果を表
１０〜１２に示す。
【００５３】
【表１０】
【００５４】この結果から、本発明の製造方法により得
られるジベレリン類は、矮性稲の第２子葉の伸長に対し
て著しい生長促進効果を有するものであることが判る。
られるジベレリン類は、矮性稲の第２子葉の伸長に対し
て著しい生長促進効果を有するものであることが判る。
【００５５】
【表１１】
【００５６】
【表１２】
【００５７】
【発明の効果】本発明の製造方法が提供されることによ
り、第１に、これまで微量にしか生産あるいは入手でき
なかったジベレリン、すなわちジベレリンＡ3 、ジベレ
リンＡ4 以外のジベレリン類を、カウレンを出発物質
（基質）とした微生物変換（酵素反応）によって収率良
く生産できるようになった。第２に、ジベレリンＡ3 単
独の場合と比較して１．５倍の植物生長促進活性を示す
ジベレリン類を提供することが可能となった。本発明の
製造方法により得られるジベレリン類は植物生長促進剤
として有用である。
り、第１に、これまで微量にしか生産あるいは入手でき
なかったジベレリン、すなわちジベレリンＡ3 、ジベレ
リンＡ4 以外のジベレリン類を、カウレンを出発物質
（基質）とした微生物変換（酵素反応）によって収率良
く生産できるようになった。第２に、ジベレリンＡ3 単
独の場合と比較して１．５倍の植物生長促進活性を示す
ジベレリン類を提供することが可能となった。本発明の
製造方法により得られるジベレリン類は植物生長促進剤
として有用である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:645）
Claims (2)
- 【請求項１】 ジベレラ属に属し、微生物由来のジベレ
リン生産能力を有する微生物を、基質濃度０．００１％
以上０．１５％未満のｅｎｔ−カウレンおよび微量の植
物生長抑制剤を存在せしめた培地で培養し、該微生物に
ジベレリン類を産生させることを特徴とするジベレリン
類の製造方法。 - 【請求項２】 産生されるジベレリン類がジベレリンＡ
1、ジベレリンＡ3 、ジベレリンＡ4 、ジベレリンＡ7 、
ジベレリンＡ9 、ジベレリンＡ12、ジベレリンＡ12−ア
ルデヒド、ジベレリンＡ14、ジベレリンＡ14−アルデヒ
ド、ジベレリンＡ15、ジベレリンＡ16、 ジベレリンＡ24
及びこれらの前駆体である７−β−ヒドロキシカウレン
酸からなる群より選ばれる１種以上である請求項１記載
の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23637192A JP3183722B2 (ja) | 1992-08-11 | 1992-08-11 | ジベレリン類の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| JP23637192A JP3183722B2 (ja) | 1992-08-11 | 1992-08-11 | ジベレリン類の製造方法 |
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| Publication Number | Publication Date |
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| JPH0690775A true JPH0690775A (ja) | 1994-04-05 |
| JP3183722B2 JP3183722B2 (ja) | 2001-07-09 |
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Family Applications (1)
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| JP23637192A Expired - Fee Related JP3183722B2 (ja) | 1992-08-11 | 1992-08-11 | ジベレリン類の製造方法 |
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| JP (1) | JP3183722B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102260274B (zh) * | 2011-06-14 | 2013-10-30 | 华南理工大学 | 一种抗癌化合物的制备方法与应用 |
-
1992
- 1992-08-11 JP JP23637192A patent/JP3183722B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| JP3183722B2 (ja) | 2001-07-09 |
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