JPH068820B2 - ヒト末梢血単球の鑑別方法 - Google Patents
ヒト末梢血単球の鑑別方法Info
- Publication number
- JPH068820B2 JPH068820B2 JP62295832A JP29583287A JPH068820B2 JP H068820 B2 JPH068820 B2 JP H068820B2 JP 62295832 A JP62295832 A JP 62295832A JP 29583287 A JP29583287 A JP 29583287A JP H068820 B2 JPH068820 B2 JP H068820B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peripheral blood
- human peripheral
- blood monocytes
- tnp
- igg
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はヒト末梢血単球の鑑別方法、更に詳細には、正
常人又は患者者の何れの末梢血単球であるかを鑑別する
方法に関する。
常人又は患者者の何れの末梢血単球であるかを鑑別する
方法に関する。
〔従来の技術およびその問題点〕 近年、癌の早期診断法として、血清を用いる方法あるい
はＸ線を用いる方法の研究がなされている。
はＸ線を用いる方法の研究がなされている。
しかしながら、血清の分析では未だ癌の早期発見は困難
であり、またＸ線を用いる方法は設備及び費用の面で多
くの問題があつた。
であり、またＸ線を用いる方法は設備及び費用の面で多
くの問題があつた。
斯かる実状において、本発明者は鋭意研究を行つた結
果、ヒト末梢血単球の免疫グロブリンのＦｃレセプター
刺激で生ずるフオトン量が、癌患者の単球の場合、正常
人のそれに比べ有意に高いこと、並びにこのフオトン量
を、ルミノールで増感して測定すれば、それぞれの単球
を鑑別することができ、ひいては早期に癌の診断を行う
ことができることを見出し、本発明を完成した。
果、ヒト末梢血単球の免疫グロブリンのＦｃレセプター
刺激で生ずるフオトン量が、癌患者の単球の場合、正常
人のそれに比べ有意に高いこと、並びにこのフオトン量
を、ルミノールで増感して測定すれば、それぞれの単球
を鑑別することができ、ひいては早期に癌の診断を行う
ことができることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、ヒト末梢血単球にルミノールの存
在下免疫複合体を作用させ、発生する化学ルミネツセン
ス量を測定することを特徴とするヒト末梢血単球の識別
方法を提供するものである。
在下免疫複合体を作用させ、発生する化学ルミネツセン
ス量を測定することを特徴とするヒト末梢血単球の識別
方法を提供するものである。
本発明において、ヒト末梢血単球の分離は公知の方法、
例えばフイコール・ハイパツク（Ficoll Hypaque）（フ
アルマシア・フアイン・ケミカル社製）を用いて行うこ
とができる。
例えばフイコール・ハイパツク（Ficoll Hypaque）（フ
アルマシア・フアイン・ケミカル社製）を用いて行うこ
とができる。
免疫複合体としては、ヒツジ赤血球（SRBC）にトリニト
ロベンゼンスルホン酸（TNP）を反応させて得られるTNP
−SRBC液に、抗TNP IgG2ａ又は抗TNP IgG2ｂを反応させ
て得られる抗TNP IgG2ａ−又は抗TNP IgG2ｂ−TNP−SRB
Cが挙げられる。
ロベンゼンスルホン酸（TNP）を反応させて得られるTNP
−SRBC液に、抗TNP IgG2ａ又は抗TNP IgG2ｂを反応させ
て得られる抗TNP IgG2ａ−又は抗TNP IgG2ｂ−TNP−SRB
Cが挙げられる。
本発明方法を実施するには、ヒト末梢血単球に、ルミノ
ールをジメチルスルホキシド等に溶解したものを加えて
ベース値を測定し、次いでこれに免疫複合体を加えて化
学ルミネツセンス量を測定することによつて行われる。
ここにおいてルミノールは最終濃度が２．５×-6〜４×
１０-5Ｍの範囲になるように加えるのが好ましい。
ールをジメチルスルホキシド等に溶解したものを加えて
ベース値を測定し、次いでこれに免疫複合体を加えて化
学ルミネツセンス量を測定することによつて行われる。
ここにおいてルミノールは最終濃度が２．５×-6〜４×
１０-5Ｍの範囲になるように加えるのが好ましい。
次に実施例を挙げて説明する。
実施例１ (i)ヒト末梢血単球の分離 ヘパリン血５mlにRPMI１６４０（培地）を加え、フイコ
ール・ハイパツクに重層し遠心する（室温、４００ｇ、
３０分）。得られた単核球を冷RPMI１６４０で３回洗浄
後（1,100rpm、１０分１回、９００rpm５分２回）、２
〜５×１０5セル／mlとし、ＣＬチューブ（１２φ×４
７mm；西独ベルトールド社）に１mlずつ分注する。減菌
アルミ箔で軽くカバーし、ＣＯ2中で２時間培養する。
非付着細胞を血球計算盤を用いて計測し、３回洗浄して
非付着細胞を除去後、５％FCS（牛胎児血清）加RPMI１
６４０を添加する。測定時に、単球はハンクス液中で測
定する。
ール・ハイパツクに重層し遠心する（室温、４００ｇ、
３０分）。得られた単核球を冷RPMI１６４０で３回洗浄
後（1,100rpm、１０分１回、９００rpm５分２回）、２
〜５×１０5セル／mlとし、ＣＬチューブ（１２φ×４
７mm；西独ベルトールド社）に１mlずつ分注する。減菌
アルミ箔で軽くカバーし、ＣＯ2中で２時間培養する。
非付着細胞を血球計算盤を用いて計測し、３回洗浄して
非付着細胞を除去後、５％FCS（牛胎児血清）加RPMI１
６４０を添加する。測定時に、単球はハンクス液中で測
定する。
(ii)免疫複合体の調製 新鮮ヒツジ赤血球（SRBC，デンカ生研，東京）０．５ml
をリン酸緩衝液（PBS）で３回洗浄（2,500rpm,５分）後
PBS１mlに懸濁する。次にトリニトロベンゼンスルホン
酸〔（TNP，和光純薬、大阪），３mg／ml（PBS）〕１ml
をSRBC１mlに加え、３７℃１５分間の振盪で反応させ、
PBSで１回、更に５％FCS加RPMIで２回洗浄する。SRBCが
１０％になる様にゼラチン−ベロナール緩衝液（Ca 、
Mg 含有；GVB ）に懸濁する。次にこのTNP−SRBC液
０．２mlをGVB ４mlに加え、抗TNP IgG2ａ産生ハイブ
リドーマHy１・２の培養上清５０μ、又は抗TNP IgG2
ｂ産生ハイブリドーマGORKの培養上清１００μを別々
に加え、３７℃３０分反応させる（ただし培養上清の抗
体価は、ロツト毎にチエツクし、サブ凝集ドースで感作
する。）IgG−TNP−SRBCはGVB で３回洗い、最後にGVB
２mlに懸濁する。
をリン酸緩衝液（PBS）で３回洗浄（2,500rpm,５分）後
PBS１mlに懸濁する。次にトリニトロベンゼンスルホン
酸〔（TNP，和光純薬、大阪），３mg／ml（PBS）〕１ml
をSRBC１mlに加え、３７℃１５分間の振盪で反応させ、
PBSで１回、更に５％FCS加RPMIで２回洗浄する。SRBCが
１０％になる様にゼラチン−ベロナール緩衝液（Ca 、
Mg 含有；GVB ）に懸濁する。次にこのTNP−SRBC液
０．２mlをGVB ４mlに加え、抗TNP IgG2ａ産生ハイブ
リドーマHy１・２の培養上清５０μ、又は抗TNP IgG2
ｂ産生ハイブリドーマGORKの培養上清１００μを別々
に加え、３７℃３０分反応させる（ただし培養上清の抗
体価は、ロツト毎にチエツクし、サブ凝集ドースで感作
する。）IgG−TNP−SRBCはGVB で３回洗い、最後にGVB
２mlに懸濁する。
(iii)化学ルミネツセンス（CL）値の測定 測定機器はベルトールド社製Biolumat LB9500Tを用いた。ルミノール（東京化成社製）をジメ
チルスルホキシドに溶解し（１．８mg／２０ｕ）、PB
S１mlで希釈し（１×１０-2Ｍ）して−２０℃で保存す
る。これを同時PBSで１０倍に希釈したもの（１０μ
）を、単球のハンクス液懸濁液に最終濃度が１×１０
-5Ｍになるように加え、ベースＣＬ値を測定する。更に
これに抗TNP IgG2ａ−又は抗TNP IgG2ｂ−TNP−SRBCを
加え、ＣＬ値を測定する。
チルスルホキシドに溶解し（１．８mg／２０ｕ）、PB
S１mlで希釈し（１×１０-2Ｍ）して−２０℃で保存す
る。これを同時PBSで１０倍に希釈したもの（１０μ
）を、単球のハンクス液懸濁液に最終濃度が１×１０
-5Ｍになるように加え、ベースＣＬ値を測定する。更に
これに抗TNP IgG2ａ−又は抗TNP IgG2ｂ−TNP−SRBCを
加え、ＣＬ値を測定する。
(iv)切除術前の食道癌患者１４名及び正常人１７名から
分離した末梢血単球について、上記(iii)の如く操作し
てＣＬ値を測定した。その結果は次のとおりである。但
し、ＣＬ値は、cpm／１０5の単球の最大値で示した。
分離した末梢血単球について、上記(iii)の如く操作し
てＣＬ値を測定した。その結果は次のとおりである。但
し、ＣＬ値は、cpm／１０5の単球の最大値で示した。
抗TNP IgG2ａ−TNP−SRBCを使用したとき：ＣＬ値 食道癌患者平均 30,498±14,506（ｎ＝１４） 正常人平均 7,451±3,145（ｎ＝１７） 抗TNP IgG2ｂ−TNP−SRBCを使用したとき：ＣＬ値 食道癌患者平均 5,685±7,406（ｎ＝１４） 正常人 648±619（ｎ＝１５）
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭54−151894（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−41356（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−220865（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−19663（ＪＰ，Ａ)
Claims (2)
- 【請求項１】ヒト末梢血単球にルミノールの存在下免疫
複合体を作用させ、発生する化学ルミネツセンス量を測
定することを特徴とするヒト末梢血単球の鑑別方法。 - 【請求項２】免疫複合体が、抗トリニトロベンゼンスル
ホン酸IgG2ａ−トリニトロベンゼンスルホン酸ヒツジ赤
血球又は抗トリニトロベンゼンスルホン酸IgG2ｂ−トリ
ニトロベンゼンスルホン酸ヒツジ赤血球である特許請求
の範囲第１項記載の鑑別方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62295832A JPH068820B2 (ja) | 1987-11-24 | 1987-11-24 | ヒト末梢血単球の鑑別方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62295832A JPH068820B2 (ja) | 1987-11-24 | 1987-11-24 | ヒト末梢血単球の鑑別方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01138459A JPH01138459A (ja) | 1989-05-31 |
| JPH068820B2 true JPH068820B2 (ja) | 1994-02-02 |
Family
ID=17825759
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62295832A Expired - Lifetime JPH068820B2 (ja) | 1987-11-24 | 1987-11-24 | ヒト末梢血単球の鑑別方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH068820B2 (ja) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4220450A (en) * | 1978-04-05 | 1980-09-02 | Syva Company | Chemically induced fluorescence immunoassay |
| JPS5719663A (en) * | 1980-07-10 | 1982-02-01 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Measuring method for lymphocyte population |
| CA1185177A (en) * | 1981-07-17 | 1985-04-09 | Larry E. Morrison | Non-radiative energy transfer immunochemical technique |
| JPS62220865A (ja) * | 1986-03-24 | 1987-09-29 | Yatoron:Kk | 均一系酵素免疫学的測定方法 |
-
1987
- 1987-11-24 JP JP62295832A patent/JPH068820B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01138459A (ja) | 1989-05-31 |
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