JPH0656891A - Ｈｃｖ非構造領域のペプチド - Google Patents
Ｈｃｖ非構造領域のペプチドInfo
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- JPH0656891A JPH0656891A JP4209201A JP20920192A JPH0656891A JP H0656891 A JPH0656891 A JP H0656891A JP 4209201 A JP4209201 A JP 4209201A JP 20920192 A JP20920192 A JP 20920192A JP H0656891 A JPH0656891 A JP H0656891A
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】ＨＣＶのＮＳ３領域のアミノ酸配列における、
1202−1241、1270−1303、1320−1342、1351−1375、13
76−1406、1417−1432、1437−1456、または1476−1504
番目に相当するアミノ酸配列のうちのいずれか１種の配
列の全体に一致するか、もしくはその一部に一致する少
なくとも６個の連続するアミノ酸からなる配列を有する
ペプチド。 【効果】ＨＣＶのＮＳ３領域に対する抗体を検出するこ
とが可能であるため、非特異反応を抑制し、ＨＣＶ感染
の有無を検出する際の診断漏れを少なくすることができ
る。また、ＨＣＶ感染の早期診断が可能となる。
1202−1241、1270−1303、1320−1342、1351−1375、13
76−1406、1417−1432、1437−1456、または1476−1504
番目に相当するアミノ酸配列のうちのいずれか１種の配
列の全体に一致するか、もしくはその一部に一致する少
なくとも６個の連続するアミノ酸からなる配列を有する
ペプチド。 【効果】ＨＣＶのＮＳ３領域に対する抗体を検出するこ
とが可能であるため、非特異反応を抑制し、ＨＣＶ感染
の有無を検出する際の診断漏れを少なくすることができ
る。また、ＨＣＶ感染の早期診断が可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、Ｃ型肝炎ウイルス遺
伝子の非構造領域にコードされるタンパク質の抗原部位
の一部に一致するペプチドに関する。この発明のペプチ
ドはＣ型肝炎ウイルスに対する抗体の検出に用いること
ができ、また、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子の非構造領域に
コードされるタンパク質に対するポリクローナル抗体も
しくはモノクローナル抗体を得る目的で哺乳動物に投与
される免疫源として利用することが可能である。
伝子の非構造領域にコードされるタンパク質の抗原部位
の一部に一致するペプチドに関する。この発明のペプチ
ドはＣ型肝炎ウイルスに対する抗体の検出に用いること
ができ、また、Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子の非構造領域に
コードされるタンパク質に対するポリクローナル抗体も
しくはモノクローナル抗体を得る目的で哺乳動物に投与
される免疫源として利用することが可能である。
【０００２】
【従来の技術】肝炎の原因としては、ウイルスによるも
の、アルコールによるもの、薬物によるものなどが挙げ
られる。この中で大きな比重を占めるのがウイルスによ
る肝炎である。
の、アルコールによるもの、薬物によるものなどが挙げ
られる。この中で大きな比重を占めるのがウイルスによ
る肝炎である。
【０００３】肝炎を起こすウイルスとして、経口的に感
染するＡ型肝炎ウイルス（以下ＨＡＶと略す）並びにＥ
型肝炎ウイルス（以下ＨＥＶと略す）、輸血により感染
するＢ型肝炎ウイルス（以下ＨＢＶと略す）並びにＤ型
肝炎ウイルス（以下ＨＤＶと略す）など、現在いくつか
のウイルスが知られている。
染するＡ型肝炎ウイルス（以下ＨＡＶと略す）並びにＥ
型肝炎ウイルス（以下ＨＥＶと略す）、輸血により感染
するＢ型肝炎ウイルス（以下ＨＢＶと略す）並びにＤ型
肝炎ウイルス（以下ＨＤＶと略す）など、現在いくつか
のウイルスが知られている。
【０００４】輸血後に起こる肝炎（輸血後肝炎）の原因
の一つとしてＨＢＶが知られているが、ＨＢＶによらな
い輸血後肝炎も数多く発生している。我国においては、
ＨＢＶを含有する血液を輸血用血液から排除することに
より輸血によるＨＢＶ感染者は激減したにもかかわら
ず、輸血後肝炎患者は後を絶っていない。この原因は長
い間不明のままであり、これを従来、非Ａ非Ｂ型肝炎と
呼んでいた。
の一つとしてＨＢＶが知られているが、ＨＢＶによらな
い輸血後肝炎も数多く発生している。我国においては、
ＨＢＶを含有する血液を輸血用血液から排除することに
より輸血によるＨＢＶ感染者は激減したにもかかわら
ず、輸血後肝炎患者は後を絶っていない。この原因は長
い間不明のままであり、これを従来、非Ａ非Ｂ型肝炎と
呼んでいた。
【０００５】近年になって、Choo,Q.L. ら（Science 24
4, 359-362, 1989）及びKuo,G.ら（Science 244, 362-3
62, 1989）によって非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの存在が明
らかにされた。これは輸血後肝炎を起こすものであり、
彼らはＣ型肝炎ウイルス（以下ＨＣＶと略す）と呼んで
いる。
4, 359-362, 1989）及びKuo,G.ら（Science 244, 362-3
62, 1989）によって非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの存在が明
らかにされた。これは輸血後肝炎を起こすものであり、
彼らはＣ型肝炎ウイルス（以下ＨＣＶと略す）と呼んで
いる。
【０００６】ＨＣＶの遺伝子ＲＮＡの同定方法は特開平
２−５００８８０号公報（国際公開番号ＷＯ８９／０４
６６９）に開示されている。ＨＣＶは、ウイルスが特定
される以前から人とチンパンジーにのみ感染することが
明らかになっていた。そこで、特開平２−５００８８０
号公報では以下の手順によりＨＣＶの同定を行なってい
る。
２−５００８８０号公報（国際公開番号ＷＯ８９／０４
６６９）に開示されている。ＨＣＶは、ウイルスが特定
される以前から人とチンパンジーにのみ感染することが
明らかになっていた。そこで、特開平２−５００８８０
号公報では以下の手順によりＨＣＶの同定を行なってい
る。
【０００７】まず、非Ａ非Ｂ型肝炎を起こしたと思われ
る血液凝固第VIII因子製剤と同じ製剤をチンパンジーに
投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎をそのチンパンジーに発症させ
る。次に、このチンパンジーの肝臓からの抽出物を別の
チンパンジーに投与し、同様に非Ａ非Ｂ型肝炎を発症さ
せる。このチンパンジーから得られた血奬をさらに別の
チンパンジーに投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎の発症を確認す
る。発症が確認された血奬に対し、目的とするウイルス
がフラビウイルスであると想定したウイルス粒子の濃縮
操作（Bradeley,D.W. ら、Gastroenterology 88, 773-7
79, 1989）を行い、ＲＮＡを抽出する。このＲＮＡから
ｃＤＮＡを合成し、λgt11ライブラリーを作製する。こ
れを非Ａ非Ｂ型肝炎回復期のチンパンジー血清や非Ａ非
Ｂ型慢性肝炎患者血清を用いてスクリーニングを行い、
反応するクローンの選択を行なう。
る血液凝固第VIII因子製剤と同じ製剤をチンパンジーに
投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎をそのチンパンジーに発症させ
る。次に、このチンパンジーの肝臓からの抽出物を別の
チンパンジーに投与し、同様に非Ａ非Ｂ型肝炎を発症さ
せる。このチンパンジーから得られた血奬をさらに別の
チンパンジーに投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎の発症を確認す
る。発症が確認された血奬に対し、目的とするウイルス
がフラビウイルスであると想定したウイルス粒子の濃縮
操作（Bradeley,D.W. ら、Gastroenterology 88, 773-7
79, 1989）を行い、ＲＮＡを抽出する。このＲＮＡから
ｃＤＮＡを合成し、λgt11ライブラリーを作製する。こ
れを非Ａ非Ｂ型肝炎回復期のチンパンジー血清や非Ａ非
Ｂ型慢性肝炎患者血清を用いてスクリーニングを行い、
反応するクローンの選択を行なう。
【０００８】特開平２−５００８８０号公報では、これ
らの操作の結果、5-1-1 およびＣ100-3 というクローン
がＨＣＶに由来するｃＤＮＡであることが明らかにな
り、ＨＣＶの遺伝子配列も明らかになったとしている。
らの操作の結果、5-1-1 およびＣ100-3 というクローン
がＨＣＶに由来するｃＤＮＡであることが明らかにな
り、ＨＣＶの遺伝子配列も明らかになったとしている。
【０００９】一方、本出願人は、特願平２−２７９６１
３号において、上述したクロ−ンが属する非構造領域の
一部であるペプチドを mokk-23と名付け、検出率の高い
ＨＣＶ抗体の診断用試薬を作製している。
３号において、上述したクロ−ンが属する非構造領域の
一部であるペプチドを mokk-23と名付け、検出率の高い
ＨＣＶ抗体の診断用試薬を作製している。
【００１０】さらに、本出願人は、特願平２−２８２４
３１号において、高度にアミノ酸配列が保存されている
構造領域であるコアタンパクの一部のペプチドを選択
し、これを mokk-c1と名付けて、やはり選択率の高いＨ
ＣＶ抗体の診断用試薬を作製している。
３１号において、高度にアミノ酸配列が保存されている
構造領域であるコアタンパクの一部のペプチドを選択
し、これを mokk-c1と名付けて、やはり選択率の高いＨ
ＣＶ抗体の診断用試薬を作製している。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、特開平
２−５００８８０号公報に開示される方法では、抗ＨＣ
Ｖ抗体の検出に、Ｃ100-3 を含むヒトスーパーオキシド
ディスムダーゼ遺伝子の一部を遺伝子組換え技術により
酵母にて発現させた融合タンパク質を用いている。この
Ｃ100-3 がコ−ドするタンパク質はＨＣＶの非構造タン
パクであり、コアやエンベロープといった構造タンパク
を構成するタンパク質ではない。このため、このタンパ
ク質に対する抗体は、ウイルスを体内から排除するいわ
ゆる中和抗体としての機能を持たない。
２−５００８８０号公報に開示される方法では、抗ＨＣ
Ｖ抗体の検出に、Ｃ100-3 を含むヒトスーパーオキシド
ディスムダーゼ遺伝子の一部を遺伝子組換え技術により
酵母にて発現させた融合タンパク質を用いている。この
Ｃ100-3 がコ−ドするタンパク質はＨＣＶの非構造タン
パクであり、コアやエンベロープといった構造タンパク
を構成するタンパク質ではない。このため、このタンパ
ク質に対する抗体は、ウイルスを体内から排除するいわ
ゆる中和抗体としての機能を持たない。
【００１２】また、慢性Ｃ型肝炎患者の多くがこのタン
パク質に対する抗体を保有しているので、このタンパク
質に対する抗体はＨＣＶに感染したことを示す機能は有
している。しかしながら、多いとは言え、この抗体を保
有している患者の割合はＨＣＶに感染した患者の約70％
程度であり、非特異的な反応が生じる恐れがある。
パク質に対する抗体を保有しているので、このタンパク
質に対する抗体はＨＣＶに感染したことを示す機能は有
している。しかしながら、多いとは言え、この抗体を保
有している患者の割合はＨＣＶに感染した患者の約70％
程度であり、非特異的な反応が生じる恐れがある。
【００１３】さらに、Ｃ100-3 がコ−ドするタンパク質
に対する抗体はＨＣＶ感染後３ケ月から６ケ月以上経過
しないと出現しない。また、発症しても抗体が検出され
なくなる場合もある。これらに加えて、ヒトスーパーオ
キシドディスムダーゼの一部を含むため、これに対する
非特異反応が生ずる恐れもある。
に対する抗体はＨＣＶ感染後３ケ月から６ケ月以上経過
しないと出現しない。また、発症しても抗体が検出され
なくなる場合もある。これらに加えて、ヒトスーパーオ
キシドディスムダーゼの一部を含むため、これに対する
非特異反応が生ずる恐れもある。
【００１４】したがって、この発明は、ＨＣＶ感染患者
の血清中に存在する抗ＨＣＶ抗体の検出に用いることが
可能なＨＣＶの抗原部位に相当するペプチドを提供する
ことを目的とする。
の血清中に存在する抗ＨＣＶ抗体の検出に用いることが
可能なＨＣＶの抗原部位に相当するペプチドを提供する
ことを目的とする。
【００１５】
【課題を解決するための手段および作用】合成したペプ
チドが抗体に対して抗原性を有することは、Geoffrey R
s (Nature 302, 490-495, 1983）により明らかにされて
いる。本発明者らは、従来明らかにされているＨＣＶの
非構造領域の一部であるＮＳ３領域遺伝子配列から求め
たアミノ酸配列を基に、各アミノ酸の疎水性値から抗原
性を強く有する部位を予測し、そのアミノ酸配列を有す
るペプチドを合成して抗原性の確認を行ない、上記目的
を達成するに至った。
チドが抗体に対して抗原性を有することは、Geoffrey R
s (Nature 302, 490-495, 1983）により明らかにされて
いる。本発明者らは、従来明らかにされているＨＣＶの
非構造領域の一部であるＮＳ３領域遺伝子配列から求め
たアミノ酸配列を基に、各アミノ酸の疎水性値から抗原
性を強く有する部位を予測し、そのアミノ酸配列を有す
るペプチドを合成して抗原性の確認を行ない、上記目的
を達成するに至った。
【００１６】すなわち、この発明のペプチドは、Ｃ型肝
炎ウイルスに対する抗体に反応性を有するペプチドであ
って、このペプチドが、後掲の配列表において配列番号
１ないし配列番号８のいずれか１種に示されるアミノ酸
配列の一部に一致し、かつ少なくとも６個のアミノ酸か
らなる配列を含むことを特徴とする。以下、この発明を
詳細に説明する。
炎ウイルスに対する抗体に反応性を有するペプチドであ
って、このペプチドが、後掲の配列表において配列番号
１ないし配列番号８のいずれか１種に示されるアミノ酸
配列の一部に一致し、かつ少なくとも６個のアミノ酸か
らなる配列を含むことを特徴とする。以下、この発明を
詳細に説明する。
【００１７】ＨＣＶ遺伝子には、他のプラス鎖ＲＮＡウ
イルス（フラビウイルス、ペスチウイルス等）が有する
遺伝子との類似性から、そのＮ末端から1200〜1500番目
のアミノ酸配列中にＡＴＰ依存性ヘリカ−ゼ（ＲＮＡヘ
リカ−ゼ）と類似のアミノ酸配列が存在していることが
明らかとなっている。すなわち、この領域はＲＮＡの複
製時に必要な領域であるものと推定されている（下遠野
邦忠、土方誠、加藤宣之、「Ｃ型肝炎ウイルス研究の最
近の進歩」、蛋白質核酸酵素、vol.36、No.10、1679−1
691頁（1991）、および Kato N., Hijikata M., Nakaga
wa M., Otsuyama Y., Muraiso K., Ohkoshi S., Shimot
ohno K.、FEBS Lett.、vol.280 、 325−328 （199
1））。したがって、この範囲（Ｎ末端から1200〜1500
番目）を含むペプチドを診断薬として用いることによ
り、ＨＣＶの増殖に関与している酵素に対する抗体の検
出が可能となることが考えられる。すなわち、このよう
な診断薬は、ウイルスの増殖の有無を反映する診断薬と
なる可能性がある。
イルス（フラビウイルス、ペスチウイルス等）が有する
遺伝子との類似性から、そのＮ末端から1200〜1500番目
のアミノ酸配列中にＡＴＰ依存性ヘリカ−ゼ（ＲＮＡヘ
リカ−ゼ）と類似のアミノ酸配列が存在していることが
明らかとなっている。すなわち、この領域はＲＮＡの複
製時に必要な領域であるものと推定されている（下遠野
邦忠、土方誠、加藤宣之、「Ｃ型肝炎ウイルス研究の最
近の進歩」、蛋白質核酸酵素、vol.36、No.10、1679−1
691頁（1991）、および Kato N., Hijikata M., Nakaga
wa M., Otsuyama Y., Muraiso K., Ohkoshi S., Shimot
ohno K.、FEBS Lett.、vol.280 、 325−328 （199
1））。したがって、この範囲（Ｎ末端から1200〜1500
番目）を含むペプチドを診断薬として用いることによ
り、ＨＣＶの増殖に関与している酵素に対する抗体の検
出が可能となることが考えられる。すなわち、このよう
な診断薬は、ウイルスの増殖の有無を反映する診断薬と
なる可能性がある。
【００１８】この発明のペプチドは、いずれも、そのア
ミノ酸配列に一致する配列が上記範囲（Ｎ末端から1200
〜1500番目）内に含まれており、このようなウイルスの
増殖の有無を反映する診断薬として用いることができ
る。
ミノ酸配列に一致する配列が上記範囲（Ｎ末端から1200
〜1500番目）内に含まれており、このようなウイルスの
増殖の有無を反映する診断薬として用いることができ
る。
【００１９】また、Ｃ型肝炎患者の病状の時間的経過に
主眼をおくと、ＮＳ３領域のポリペプチドであり、カイ
ロン社がＣ33Ｃと称している遺伝子組換えタンパク質を
診断薬として用いた場合には、構造領域の組換えタンパ
クであるＣ22および非構造領域の組換えタンパクである
Ｃ100 と比較して、病状の初期に抗体を検出できる例が
存在することが報告されている（ C.L. van der Poel,
H.T.M. Cuypers. P.N.Lelie et al 、Confirmation of
hepatitis C virus infection by new four-antigen re
combinant immunoblot assay、THE LANCET、vol.337 、
317−319 （1991））。したがって、この発明のペプチ
ドを用いることによっても、Ｃ33Ｃと同様に、ＨＣＶ感
染の早期診断が可能になるものと考えられる。
主眼をおくと、ＮＳ３領域のポリペプチドであり、カイ
ロン社がＣ33Ｃと称している遺伝子組換えタンパク質を
診断薬として用いた場合には、構造領域の組換えタンパ
クであるＣ22および非構造領域の組換えタンパクである
Ｃ100 と比較して、病状の初期に抗体を検出できる例が
存在することが報告されている（ C.L. van der Poel,
H.T.M. Cuypers. P.N.Lelie et al 、Confirmation of
hepatitis C virus infection by new four-antigen re
combinant immunoblot assay、THE LANCET、vol.337 、
317−319 （1991））。したがって、この発明のペプチ
ドを用いることによっても、Ｃ33Ｃと同様に、ＨＣＶ感
染の早期診断が可能になるものと考えられる。
【００２０】この発明のペプチドは、その配列中に、後
掲の配列表において配列番号１ないし８のいずれか１種
に示されるアミノ酸配列の全てに一致する配列を有して
いることが好ましいが、その類似物、および配列番号１
ないし８のいずれか１種で示されるアミノ酸配列に含ま
れる、少なくとも６個のアミノ酸からなる配列に一致す
るペプチドもこの発明の範囲である。抗原決定基の最小
サイズが６個のアミノ酸からなる配列であることは、Im
munochemistry 12, 423-438, 1975 、および Proc. Nat
l. Acad. USA, vol.78, 3824-3828 により明らかにされ
ている。
掲の配列表において配列番号１ないし８のいずれか１種
に示されるアミノ酸配列の全てに一致する配列を有して
いることが好ましいが、その類似物、および配列番号１
ないし８のいずれか１種で示されるアミノ酸配列に含ま
れる、少なくとも６個のアミノ酸からなる配列に一致す
るペプチドもこの発明の範囲である。抗原決定基の最小
サイズが６個のアミノ酸からなる配列であることは、Im
munochemistry 12, 423-438, 1975 、および Proc. Nat
l. Acad. USA, vol.78, 3824-3828 により明らかにされ
ている。
【００２１】したがって、配列番号１ないし８のいずれ
か１種に示される配列を有するペプチドの一部であって
も、６個以上の連続したアミノ酸からなる配列からな
り、上記配列を有するペプチドと交差反応性を有するペ
プチドはこの発明に含まれる。
か１種に示される配列を有するペプチドの一部であって
も、６個以上の連続したアミノ酸からなる配列からな
り、上記配列を有するペプチドと交差反応性を有するペ
プチドはこの発明に含まれる。
【００２２】ここで、配列番号１ないし８に示されるア
ミノ酸配列で特定されるペプチドの類似物とは、配列番
号１ないし８に示されるアミノ酸配列における１もしく
はそれ以上のアミノ酸が別のアミノ酸に置換されたも
の、削除されたもの、および配列番号１ないし８に示さ
れるアミノ酸配列に１もしくはそれ以上のアミノ酸が付
加されたものであって、配列番号１ないし８に示すペプ
チドと交差反応性を有するペプチドをいう。交差反応性
を有するかどうかは、そのペプチドとＨＣＶに対する抗
体との免疫反応性をテストすることで確認できる。
ミノ酸配列で特定されるペプチドの類似物とは、配列番
号１ないし８に示されるアミノ酸配列における１もしく
はそれ以上のアミノ酸が別のアミノ酸に置換されたも
の、削除されたもの、および配列番号１ないし８に示さ
れるアミノ酸配列に１もしくはそれ以上のアミノ酸が付
加されたものであって、配列番号１ないし８に示すペプ
チドと交差反応性を有するペプチドをいう。交差反応性
を有するかどうかは、そのペプチドとＨＣＶに対する抗
体との免疫反応性をテストすることで確認できる。
【００２３】この発明のペプチドは各種担体に固相化し
て抗ＨＣＶ抗体の分析を行うことができる。ここで用い
られる担体としては、例えば、牛血清アルブミン、ポリ
ペプチド、ポリスチレンやガラスなどで作られた試験管
やマイクロプレート、ボールまたは有機高分子等からな
る微粒子が挙げられる。
て抗ＨＣＶ抗体の分析を行うことができる。ここで用い
られる担体としては、例えば、牛血清アルブミン、ポリ
ペプチド、ポリスチレンやガラスなどで作られた試験管
やマイクロプレート、ボールまたは有機高分子等からな
る微粒子が挙げられる。
【００２４】
実施例１：ペプチドの製造
【００２５】図１ないし３にわたってＨＣＶのＮＳ３領
域のアミノ酸配列を示す。本発明者らは、これを基に抗
原部位を算出した。すなわち、各アミノ酸に固有の親水
性値を与え、図１ないし３のアミノ酸配列中の連続する
20個のアミノ酸の親水性値を合計し、その20個のアミノ
酸からなるペプチドの親水性値とした。この操作を、図
１ないし３に示すＨＣＶの一次構造のアミノ酸配列にお
ける全ての組み合わせについて行なった。その結果を、
図４に示す。図中、横軸はアミノ酸の位置を表わし、左
から右へＮ末端からＣ末端を表わす。縦軸は連続する20
個のアミノ酸からなるペプチドの疎水性値を表す。疎水
性が低いほど免疫系による抗原としての認識されやすさ
が高くなる。
域のアミノ酸配列を示す。本発明者らは、これを基に抗
原部位を算出した。すなわち、各アミノ酸に固有の親水
性値を与え、図１ないし３のアミノ酸配列中の連続する
20個のアミノ酸の親水性値を合計し、その20個のアミノ
酸からなるペプチドの親水性値とした。この操作を、図
１ないし３に示すＨＣＶの一次構造のアミノ酸配列にお
ける全ての組み合わせについて行なった。その結果を、
図４に示す。図中、横軸はアミノ酸の位置を表わし、左
から右へＮ末端からＣ末端を表わす。縦軸は連続する20
個のアミノ酸からなるペプチドの疎水性値を表す。疎水
性が低いほど免疫系による抗原としての認識されやすさ
が高くなる。
【００２６】図４より、ＨＣＶのＮＳ３領域に位置し、
かつ抗原性が高いと予測されるペプチドとして、ＣＶ 7
52、ＣＶ 820、ＣＶ 870、ＣＶ 901、ＣＶ 926、ＣＶ 9
67、ＣＶ 987およびＣＶ1026の８種類のアミノ酸配列を
選択した。これらは、ＨＣＶの全アミノ酸配列中、下記
の位置に相当する。 ＣＶ 752： 1202−1241 ＣＶ 820： 1270−1303 ＣＶ 870： 1320−1342 ＣＶ 901： 1351−1375 CV 926： 1376−1406 ＣＶ 967： 1417−1432 ＣＶ 987： 1437−1456 ＣＶ1026： 1476−1504
かつ抗原性が高いと予測されるペプチドとして、ＣＶ 7
52、ＣＶ 820、ＣＶ 870、ＣＶ 901、ＣＶ 926、ＣＶ 9
67、ＣＶ 987およびＣＶ1026の８種類のアミノ酸配列を
選択した。これらは、ＨＣＶの全アミノ酸配列中、下記
の位置に相当する。 ＣＶ 752： 1202−1241 ＣＶ 820： 1270−1303 ＣＶ 870： 1320−1342 ＣＶ 901： 1351−1375 CV 926： 1376−1406 ＣＶ 967： 1417−1432 ＣＶ 987： 1437−1456 ＣＶ1026： 1476−1504
【００２７】次に、図１ないし３に示すＨＣＶのＮＳ３
領域のペプチドを以下に示す方法で合成した。まず、Ap
plied Biosystems 430A Peptide Synthsizer を用い、
t-ブトキシカルボニル（t-ＢＯＣ）アミノ酸の対称性無
水物でペプチドを合成した。次いで、このペプチドをア
ニソール、ジメチルサルファイト、パラチオクレゾール
の混合溶液中に溶解し、 0〜 5℃にてフッ化水素の存在
下で１時間反応させて脱保護を行なった。この方法はS.
Sakakibara（Bull. Chem. Soc. Jpn. 40、2164、1967）
による方法である。得られた粗結晶を２Ｎ酢酸に溶解し
て抽出し、凍結乾燥した。これを液体逆相クロマトグラ
フにより精製した後、再び凍結乾燥した。 実施例２：酵素免疫測定法による抗ＨＣＶ抗体の検出 実施例１において作製したペプチドを用い、酵素免疫測
定法（ＥＩＡ）によりＨＣＶ感染者血清（血奬）中に含
まれる抗ＨＣＶ抗体の検出を行なった。 （ａ）ペプチド固相化マイクロプレートの作製
領域のペプチドを以下に示す方法で合成した。まず、Ap
plied Biosystems 430A Peptide Synthsizer を用い、
t-ブトキシカルボニル（t-ＢＯＣ）アミノ酸の対称性無
水物でペプチドを合成した。次いで、このペプチドをア
ニソール、ジメチルサルファイト、パラチオクレゾール
の混合溶液中に溶解し、 0〜 5℃にてフッ化水素の存在
下で１時間反応させて脱保護を行なった。この方法はS.
Sakakibara（Bull. Chem. Soc. Jpn. 40、2164、1967）
による方法である。得られた粗結晶を２Ｎ酢酸に溶解し
て抽出し、凍結乾燥した。これを液体逆相クロマトグラ
フにより精製した後、再び凍結乾燥した。 実施例２：酵素免疫測定法による抗ＨＣＶ抗体の検出 実施例１において作製したペプチドを用い、酵素免疫測
定法（ＥＩＡ）によりＨＣＶ感染者血清（血奬）中に含
まれる抗ＨＣＶ抗体の検出を行なった。 （ａ）ペプチド固相化マイクロプレートの作製
【００２８】実施例１において調製したペプチドＣＶ 7
52、ＣＶ 820、ＣＶ 870、ＣＶ 901、ＣＶ 926、ＣＶ 9
67、ＣＶ 987およびＣＶ1026をそれぞれリン酸緩衝生理
食塩水（ＰＢＳ）に溶解してＮＵＮＣ社の96穴マイクロ
ウェルプレートの別個のウェルに分注し、室温で 1時間
反応させた。その後、ウェル内の溶液を除去し、ＰＢＳ
にてウェル内壁を 3回洗浄した。次に 1％のゼラチンを
含有するＰＢＳを分注し、室温で 1時間反応させた。そ
の後、ウェル内の溶液を除去し、ＰＢＳにてウェル内壁
を 3回洗浄した。これを室温にて乾燥することによりペ
プチド固相化マイクロプレートを得た。 （ｂ）検体の測定
52、ＣＶ 820、ＣＶ 870、ＣＶ 901、ＣＶ 926、ＣＶ 9
67、ＣＶ 987およびＣＶ1026をそれぞれリン酸緩衝生理
食塩水（ＰＢＳ）に溶解してＮＵＮＣ社の96穴マイクロ
ウェルプレートの別個のウェルに分注し、室温で 1時間
反応させた。その後、ウェル内の溶液を除去し、ＰＢＳ
にてウェル内壁を 3回洗浄した。次に 1％のゼラチンを
含有するＰＢＳを分注し、室温で 1時間反応させた。そ
の後、ウェル内の溶液を除去し、ＰＢＳにてウェル内壁
を 3回洗浄した。これを室温にて乾燥することによりペ
プチド固相化マイクロプレートを得た。 （ｂ）検体の測定
【００２９】慢性非Ａ非Ｂ型肝炎患者から得た血清であ
って従来の試薬に反応性を有する20検体を、牛血清アル
ブミン（ＢＳＡ）およびTween 20を含有するＰＢＳにて
希釈した後、（ａ）で作製したペプチド固相化マイクロ
プレートに分注し、37℃で60分間反応させた。その後、
Tween 20を含有するＰＢＳでウェル内壁を 3回洗浄し
た。次に、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧを10
00倍希釈したものを各ウェルに分注し、37℃で60分間反
応させた後、Tween 20を含有するＰＢＳでウェル内壁を
6回洗浄した。さらに、過酸化水素およびo-フェニレン
ジアミンを含有するクエン酸緩衝液を分注し、室温で30
分間反応させた後、 5Ｎ硫酸を分注して反応を停止させ
た。これを、プレートリーダーを用いて吸光度の測定を
行なった。その結果を下記表１に示す。ここで、ＮＣ
（negative control）とは、予めＨＣＶ抗体陰性と判明
している血清をＢＳＡおよび Tween 20 を含有するＰＢ
Ｓにて希釈した後に上記と同様に反応させて得た吸光度
の値である。また、ＢＬ（blank control ）とは、ＢＳ
Ａおよび Tween 20 を含有するＰＢＳのみを上記と同様
に反応させて得た吸光度である。
って従来の試薬に反応性を有する20検体を、牛血清アル
ブミン（ＢＳＡ）およびTween 20を含有するＰＢＳにて
希釈した後、（ａ）で作製したペプチド固相化マイクロ
プレートに分注し、37℃で60分間反応させた。その後、
Tween 20を含有するＰＢＳでウェル内壁を 3回洗浄し
た。次に、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧを10
00倍希釈したものを各ウェルに分注し、37℃で60分間反
応させた後、Tween 20を含有するＰＢＳでウェル内壁を
6回洗浄した。さらに、過酸化水素およびo-フェニレン
ジアミンを含有するクエン酸緩衝液を分注し、室温で30
分間反応させた後、 5Ｎ硫酸を分注して反応を停止させ
た。これを、プレートリーダーを用いて吸光度の測定を
行なった。その結果を下記表１に示す。ここで、ＮＣ
（negative control）とは、予めＨＣＶ抗体陰性と判明
している血清をＢＳＡおよび Tween 20 を含有するＰＢ
Ｓにて希釈した後に上記と同様に反応させて得た吸光度
の値である。また、ＢＬ（blank control ）とは、ＢＳ
Ａおよび Tween 20 を含有するＰＢＳのみを上記と同様
に反応させて得た吸光度である。
【００３０】
【表１】 表１より、実施例１において作製したペプチドは、慢性
非Ａ非Ｂ型肝炎患者血清との反応性を有することが明ら
かである。 実施例３：酵素免疫測定法による抗ＨＣＶ抗体の検出
非Ａ非Ｂ型肝炎患者血清との反応性を有することが明ら
かである。 実施例３：酵素免疫測定法による抗ＨＣＶ抗体の検出
【００３１】実施例１において作製したペプチド、並び
に本発明者らが先に出願した特願平2-279613 号に記載
のペプチド mokk-23および特願平 2-282431 号に記載の
ペプチド mokk-c1を用い、実施例２（ａ）と同様にして
ペプチド固相化マイクロプレ−トを作製し、次いで実施
例２（ｂ）と同様にして慢性非Ａ非Ｂ型肝炎患者血清15
検体と反応させて抗体の測定を行なった。その結果を下
記表２に示す。
に本発明者らが先に出願した特願平2-279613 号に記載
のペプチド mokk-23および特願平 2-282431 号に記載の
ペプチド mokk-c1を用い、実施例２（ａ）と同様にして
ペプチド固相化マイクロプレ−トを作製し、次いで実施
例２（ｂ）と同様にして慢性非Ａ非Ｂ型肝炎患者血清15
検体と反応させて抗体の測定を行なった。その結果を下
記表２に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】表２より明らかなように、この発明のペプ
チドは全ての検体に対して高い反応性を有しており、な
かでも従来のペプチド mokk-c1および mokk-23を用いた
場合には反応性が弱く測定が困難であった検体（検体番
号２および５）に対しても、十分な反応性を有してい
る。したがって、この発明のペプチドを用いることによ
り、従来の診断薬では診断漏れの恐れがある検体につい
ても確実に検出することが可能となる。
チドは全ての検体に対して高い反応性を有しており、な
かでも従来のペプチド mokk-c1および mokk-23を用いた
場合には反応性が弱く測定が困難であった検体（検体番
号２および５）に対しても、十分な反応性を有してい
る。したがって、この発明のペプチドを用いることによ
り、従来の診断薬では診断漏れの恐れがある検体につい
ても確実に検出することが可能となる。
【００３４】
【発明の効果】以上のように、この発明のペプチドによ
ると、従来法では検出することが不可能であったＨＣＶ
のＮＳ３領域に対する抗体を検出することが可能となる
ため、ＨＣＶ感染の有無を検出する際の診断漏れを少な
くすると共に、ＨＣＶ感染の早期診断が可能となる。 ［配列表］ 配列番号：1 配列の長さ：40 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro 1 5 10 15 Pro Val Val Pro Gln Ser Phe Gln Val Ala His Leu His Ala Pro 20 25 30 Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro 35 40 配列番号：2 配列の長さ：34 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Lys Ala His Gly Ile Asp Pro Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr 1 5 10 15 Ile Thr Thr Gly Ser Pro Ile Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe 20 25 30 Leu Ala Asp Gly 配列番号：3 配列の長さ：23 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Ser Thr Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp 1 5 10 15 Gln Ala Glu Thr Ala Gly Ala Arg 20 配列番号：4 配列の長さ：25 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Pro Pro Gly Ser Val Thr Val Pro His Pro Asn Ile Glu Glu Val 1 5 10 15 Ala Leu Ser Thr Thr Gly Glu Ile Pro Phe 20 ２５ 配列番号：５ 配列の長さ：31 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Gly Lys Ala Ile Pro Leu Glu Val Ile Lys Gly Gly Arg His 1 5 10 15 Leu Ile Phe Cys His Ser Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu Ala Ala 20 25 30 Lys 配列番号：6 配列の長さ：16 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser Val Ile Pro Thr Ser Gly Asp 1 5 10 15 Val 配列番号：7 配列の長さ：20 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Phe Asp Ser Val 1 5 10 15 Ile Asp Cys Asn Thr 20 配列番号：8 配列の長さ：28 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Leu Pro Gln Asp Ala Val Ser Arg Thr Gln Arg Arg Gly Arg 1 5 10 15 Thr Gly Arg Gly Lys Pro Gly Ile Tyr Arg Phe Val Ala Pro 20 25 配列番号：9 配列の長さ：609 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Arg Glu Ile Leu Leu Gly Pro Ala Asp Gly Met Val Ser Lys 1 5 10 15 Gly Trp Arg Leu Leu Ala Pro Ile Thr Ala Tyr Ala Gln Gln Thr 20 25 30 Arg Gly Leu Leu Gly Cys Ile Ile Thr Ser Leu Thr Gly Arg Asp 35 40 45 Lys Asn Gln Val Glu Gly Glu Val Gln Ile Val Ser Thr Ala Ala 50 55 60 Gln Thr Phe Leu Ala Thr Cys Ile Asn Gly Val Cys Trp Thr Val 65 70 75 Tyr His Gly Ala Gly Thr Arg Thr Ile Ala Ser Pro Lys Gly Pro 80 85 90 Val Ile Gln Met Tyr Thr Asn Val Asp Gln Asp Leu Val Gly Trp 95 100 105 Pro Ala Pro Gln Gly Ser Arg Ser Leu Thr Pro Cys Thr Cys Gly 110 115 120 Ser Ser Asp Leu Tyr Leu Val Thr Arg His Ala Asp Val Ile Pro 125 130 135 Val Arg Arg Arg Gly Asp Ser Arg Gly Ser Leu Leu Ser Pro Arg 140 145 150 Pro Ile Ser Tyr Leu Lys Gly Ser Ser Gly Gly Pro Leu Leu Cys 155 160 165 Pro Ala Gly His Ala Val Gly Ile Phe Arg Ala Ala Val Cys Thr 170 175 180 Arg Gly Val Ala Lys Ala Val Asp Phe Ile Pro Val Glu Asn Leu 185 190 195 Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro 200 205 210 Pro Val Val Pro Gln Ser Phe Gln Val Ala His Leu His Ala Pro 215 220 225 Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro Ala Ala Tyr Ala Ala 230 235 240 Gln Gly Tyr Lys Val Leu Val Leu Asn Pro Ser Val Ala Ala Thr 245 250 255 Leu Gly Phe Gly Ala Tyr Met Ser Lys Ala His Gly Ile Asp Pro 260 265 270 Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr Ile Thr Thr Gly Ser Pro Ile 275 280 285 Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly Cys Ser 290 295 300 Gly Gly Ala Tyr Asp Ile Ile Ile Cys Asp Glu Cys His Ser Thr 305 310 315 Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala 320 325 330 Glu Thr Ala Gly Ala Arg Leu Val Val Leu Ala Thr Ala Thr Pro 335 340 345 Pro Gly Ser Val Thr Val Pro His Pro Asn Ile Glu Glu Val Ala 350 355 360 Leu Ser Thr Thr Gly Glu Ile Pro Phe Tyr Gly Lys Ala Ile Pro 365 370 375 Leu Glu Val Ile Lys Gly Gly Arg His Leu Ile Phe Cys His Ser 380 385 390 Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu Ala Ala Lys Leu Val Ala Leu Gly 395 400 405 Ile Asn Ala Val Ala Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser Val Ile 410 415 420 Pro Thr Ser Gly Asp Val Val Val Val Ala Thr Asp Ala Leu Met 425 430 435 Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Phe Asp Ser Val Ile Asp Cys Asn Thr 440 445 450 Cys Val Thr Gln Thr Val Asp Phe Ser Leu Asp Pro Thr Phe Thr 455 460 465 Ile Glu Thr Ile Thr Leu Pro Gln Asp Ala Val Ser Arg Thr Gln 470 475 480 Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Lys Pro Gly Ile Tyr Arg Phe 485 490 495 Val Ala Pro Gly Glu Arg Pro Ser Gly Met Phe Asp Ser Ser Val 500 505 510 Leu Cys Glu Cys Tyr Asp Ala Gly Cys Ala Trp Tyr Glu Leu Thr 515 520 525 Pro Ala Glu Thr Thr Val Arg Leu Arg Ala Tyr Met Asn Thr Pro 530 535 540 Gly Leu Pro Val Cys Gln Asp His Leu Glu Phe Trp Glu Gly Val 545 550 555 Phe Thr Gly Leu Thr His Ile Asp Ala His Phe Leu Ser Gln Thr 560 565 570 Lys Gln Ser Gly Glu Asn Leu Pro Tyr Leu Val Ala Tyr Gln Ala 575 580 585 Thr Val Cys Ala Arg Ala Gln Ala Pro Pro Pro Ser Trp Asp Gln 590 595 600 Met Trp Lys Cys Leu Ile Arg Leu Lys 605
ると、従来法では検出することが不可能であったＨＣＶ
のＮＳ３領域に対する抗体を検出することが可能となる
ため、ＨＣＶ感染の有無を検出する際の診断漏れを少な
くすると共に、ＨＣＶ感染の早期診断が可能となる。 ［配列表］ 配列番号：1 配列の長さ：40 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro 1 5 10 15 Pro Val Val Pro Gln Ser Phe Gln Val Ala His Leu His Ala Pro 20 25 30 Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro 35 40 配列番号：2 配列の長さ：34 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Lys Ala His Gly Ile Asp Pro Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr 1 5 10 15 Ile Thr Thr Gly Ser Pro Ile Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe 20 25 30 Leu Ala Asp Gly 配列番号：3 配列の長さ：23 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Ser Thr Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp 1 5 10 15 Gln Ala Glu Thr Ala Gly Ala Arg 20 配列番号：4 配列の長さ：25 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Pro Pro Gly Ser Val Thr Val Pro His Pro Asn Ile Glu Glu Val 1 5 10 15 Ala Leu Ser Thr Thr Gly Glu Ile Pro Phe 20 ２５ 配列番号：５ 配列の長さ：31 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Gly Lys Ala Ile Pro Leu Glu Val Ile Lys Gly Gly Arg His 1 5 10 15 Leu Ile Phe Cys His Ser Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu Ala Ala 20 25 30 Lys 配列番号：6 配列の長さ：16 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser Val Ile Pro Thr Ser Gly Asp 1 5 10 15 Val 配列番号：7 配列の長さ：20 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Phe Asp Ser Val 1 5 10 15 Ile Asp Cys Asn Thr 20 配列番号：8 配列の長さ：28 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Leu Pro Gln Asp Ala Val Ser Arg Thr Gln Arg Arg Gly Arg 1 5 10 15 Thr Gly Arg Gly Lys Pro Gly Ile Tyr Arg Phe Val Ala Pro 20 25 配列番号：9 配列の長さ：609 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Arg Glu Ile Leu Leu Gly Pro Ala Asp Gly Met Val Ser Lys 1 5 10 15 Gly Trp Arg Leu Leu Ala Pro Ile Thr Ala Tyr Ala Gln Gln Thr 20 25 30 Arg Gly Leu Leu Gly Cys Ile Ile Thr Ser Leu Thr Gly Arg Asp 35 40 45 Lys Asn Gln Val Glu Gly Glu Val Gln Ile Val Ser Thr Ala Ala 50 55 60 Gln Thr Phe Leu Ala Thr Cys Ile Asn Gly Val Cys Trp Thr Val 65 70 75 Tyr His Gly Ala Gly Thr Arg Thr Ile Ala Ser Pro Lys Gly Pro 80 85 90 Val Ile Gln Met Tyr Thr Asn Val Asp Gln Asp Leu Val Gly Trp 95 100 105 Pro Ala Pro Gln Gly Ser Arg Ser Leu Thr Pro Cys Thr Cys Gly 110 115 120 Ser Ser Asp Leu Tyr Leu Val Thr Arg His Ala Asp Val Ile Pro 125 130 135 Val Arg Arg Arg Gly Asp Ser Arg Gly Ser Leu Leu Ser Pro Arg 140 145 150 Pro Ile Ser Tyr Leu Lys Gly Ser Ser Gly Gly Pro Leu Leu Cys 155 160 165 Pro Ala Gly His Ala Val Gly Ile Phe Arg Ala Ala Val Cys Thr 170 175 180 Arg Gly Val Ala Lys Ala Val Asp Phe Ile Pro Val Glu Asn Leu 185 190 195 Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro 200 205 210 Pro Val Val Pro Gln Ser Phe Gln Val Ala His Leu His Ala Pro 215 220 225 Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro Ala Ala Tyr Ala Ala 230 235 240 Gln Gly Tyr Lys Val Leu Val Leu Asn Pro Ser Val Ala Ala Thr 245 250 255 Leu Gly Phe Gly Ala Tyr Met Ser Lys Ala His Gly Ile Asp Pro 260 265 270 Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr Ile Thr Thr Gly Ser Pro Ile 275 280 285 Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly Cys Ser 290 295 300 Gly Gly Ala Tyr Asp Ile Ile Ile Cys Asp Glu Cys His Ser Thr 305 310 315 Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala 320 325 330 Glu Thr Ala Gly Ala Arg Leu Val Val Leu Ala Thr Ala Thr Pro 335 340 345 Pro Gly Ser Val Thr Val Pro His Pro Asn Ile Glu Glu Val Ala 350 355 360 Leu Ser Thr Thr Gly Glu Ile Pro Phe Tyr Gly Lys Ala Ile Pro 365 370 375 Leu Glu Val Ile Lys Gly Gly Arg His Leu Ile Phe Cys His Ser 380 385 390 Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu Ala Ala Lys Leu Val Ala Leu Gly 395 400 405 Ile Asn Ala Val Ala Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser Val Ile 410 415 420 Pro Thr Ser Gly Asp Val Val Val Val Ala Thr Asp Ala Leu Met 425 430 435 Thr Gly Tyr Thr Gly Asp Phe Asp Ser Val Ile Asp Cys Asn Thr 440 445 450 Cys Val Thr Gln Thr Val Asp Phe Ser Leu Asp Pro Thr Phe Thr 455 460 465 Ile Glu Thr Ile Thr Leu Pro Gln Asp Ala Val Ser Arg Thr Gln 470 475 480 Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Lys Pro Gly Ile Tyr Arg Phe 485 490 495 Val Ala Pro Gly Glu Arg Pro Ser Gly Met Phe Asp Ser Ser Val 500 505 510 Leu Cys Glu Cys Tyr Asp Ala Gly Cys Ala Trp Tyr Glu Leu Thr 515 520 525 Pro Ala Glu Thr Thr Val Arg Leu Arg Ala Tyr Met Asn Thr Pro 530 535 540 Gly Leu Pro Val Cys Gln Asp His Leu Glu Phe Trp Glu Gly Val 545 550 555 Phe Thr Gly Leu Thr His Ile Asp Ala His Phe Leu Ser Gln Thr 560 565 570 Lys Gln Ser Gly Glu Asn Leu Pro Tyr Leu Val Ala Tyr Gln Ala 575 580 585 Thr Val Cys Ala Arg Ala Gln Ala Pro Pro Pro Ser Trp Asp Gln 590 595 600 Met Trp Lys Cys Leu Ile Arg Leu Lys 605
【図１】ＨＣＶのＮＳ３領域のアミノ酸配列であって、
ＨＣＶの1007−1230番目のアミノ酸の配列を示す図。
ＨＣＶの1007−1230番目のアミノ酸の配列を示す図。
【図２】ＨＣＶのＮＳ３領域のアミノ酸配列であって、
ＨＣＶの1231−1470番目のアミノ酸の配列を示す図。
ＨＣＶの1231−1470番目のアミノ酸の配列を示す図。
【図３】ＨＣＶのＮＳ３領域のアミノ酸配列であって、
ＨＣＶの1471−1615番目のアミノ酸の配列を示す図。
ＨＣＶの1471−1615番目のアミノ酸の配列を示す図。
【図４】図１に示すＨＣＶのＮＳ３領域のアミノ酸配列
における、連続する20個のアミノ酸の親水性値の合計を
示すグラフ。
における、連続する20個のアミノ酸の親水性値の合計を
示すグラフ。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年１月２５日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００９】一方、本出願人は、特願平２−２８２４３
１号において、上述したクロ−ンが属する非構造領域の
一部であるペプチドを mokk-33と名付け、検出率の高い
ＨＣＶ抗体の診断用試薬を作製している。
１号において、上述したクロ−ンが属する非構造領域の
一部であるペプチドを mokk-33と名付け、検出率の高い
ＨＣＶ抗体の診断用試薬を作製している。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３１】実施例１において作製したペプチド、並び
に本発明者らが先に出願した特願平2-282431 号に記載
のペプチド mokk-33および特願平 2-282431 号に記載の
ペプチド mokk-c1を用い、実施例２（ａ）と同様にして
ペプチド固相化マイクロプレ−トを作製し、次いで実施
例２（ｂ）と同様にして慢性非Ａ非Ｂ型肝炎患者血清15
検体と反応させて抗体の測定を行なった。その結果を下
記表２に示す。
に本発明者らが先に出願した特願平2-282431 号に記載
のペプチド mokk-33および特願平 2-282431 号に記載の
ペプチド mokk-c1を用い、実施例２（ａ）と同様にして
ペプチド固相化マイクロプレ−トを作製し、次いで実施
例２（ｂ）と同様にして慢性非Ａ非Ｂ型肝炎患者血清15
検体と反応させて抗体の測定を行なった。その結果を下
記表２に示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３２】
【表２】
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３３】表２より明らかなように、この発明のペプ
チドは全ての検体に対して高い反応性を有しており、な
かでも従来のペプチド mokk-c1および mokk-33を用いた
場合には反応性が弱く測定が困難であった検体（検体番
号２および５）に対しても、十分な反応性を有してい
る。したがって、この発明のペプチドを用いることによ
り、従来の診断薬では診断漏れの恐れがある検体につい
ても確実に検出することが可能となる。
チドは全ての検体に対して高い反応性を有しており、な
かでも従来のペプチド mokk-c1および mokk-33を用いた
場合には反応性が弱く測定が困難であった検体（検体番
号２および５）に対しても、十分な反応性を有してい
る。したがって、この発明のペプチドを用いることによ
り、従来の診断薬では診断漏れの恐れがある検体につい
ても確実に検出することが可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39/29 9284−4Ｃ Ｃ０７Ｋ 13/00 8619−4Ｈ Ｃ０７Ｋ 99:00
Claims (4)
- 【請求項１】 Ｃ型肝炎ウイルスに対する抗体に反応性
を有するペプチドであって、該ペプチドが、少なくとも
６個のアミノ酸からなり、かつ下記（ａ）ないし（ｈ）
で表わされるアミノ酸配列のいずれか１種の一部に一致
する配列を含むペプチド。 （ａ）ＣＶ７５２ Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro Val Phe Thr 10 Asp Asn Ser Ser Pro Pro Val Val Pro Gln 20 Ser Phe Gln Val Ala His Leu His Ala Pro 30 Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro 40 （ｂ）ＣＶ８２０ Lys Ala His Gly Ile Asp Pro Asn Ile Arg 10 Thr Gly Val Arg Thr Ile Thr Thr Gly Ser 20 Pro Ile Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe 30 Leu Ala Asp Gly 34 （ｃ）ＣＶ８７０ Ser Thr Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile 10 Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala Glu Thr Ala 20 Gly Ala Arg 23 （ｄ）ＣＶ９０１ Pro Pro Gly Ser Val Thr Val Pro His Pro 10 Asn Ile Glu Glu Val Ala Leu Ser Thr Thr 20 Gly Glu Ile Pro Phe 25 （ｅ）ＣＶ９２６ Tyr Gly Lys Ala Ile Pro Leu Glu Val Ile 10 Lys Gly Gly Arg His Leu Ile Phe Cys His 20 Ser Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu Ala Ala 30 Lys 31 （ｆ）ＣＶ９６７ Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser Val Ile 10 Pro Thr Ser Gly Asp Val 16 （ｇ）ＣＶ９８７ Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Tyr Thr Gly 10 Asp Phe Asp Ser Val Ile Asp Cys Asn Thr 20 （ｈ）ＣＶ１０２６ Thr Leu Pro Gln Asp Ala Val Ser Arg Thr 10 Gln Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Lys 20 Pro Gly Ile Tyr Arg Phe Val Ala Pro 29 - 【請求項２】 タンパク質の３次構造に起因するＣ型肝
炎ウイルスの抗体に対する免疫反応性が維持される範囲
内において、上記（ａ）ないし（ｈ）のいずれかで表わ
されるアミノ酸配列の１もしくはそれ以上のアミノ酸を
置換または削除し、あるいは１もしくはそれ以上のアミ
ノ酸を付加した請求項１記載のペプチド。 - 【請求項３】 タンパク質の３次構造に起因するＣ型肝
炎ウイルスの抗体に対する免疫反応性が維持される範囲
内において、化学的に合成された請求項１記載のペプチ
ド。 - 【請求項４】 少なくとも２以上のペプチドの混合物で
あって、該ペプチドの各々が、下記（ａ）ないし（ｈ）
で表わされるアミノ酸配列のいずれか１種の一部に一致
する配列を有する混合物。 （ａ）ＣＶ７５２ Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro Val Phe Thr 10 Asp Asn Ser Ser Pro Pro Val Val Pro Gln 20 Ser Phe Gln Val Ala His Leu His Ala Pro 30 Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro 40 （ｂ）ＣＶ８２０ Lys Ala His Gly Ile Asp Pro Asn Ile Arg 10 Thr Gly Val Arg Thr Ile Thr Thr Gly Ser 20 Pro Ile Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe 30 Leu Ala Asp Gly 34 （ｃ）ＣＶ８７０ Ser Thr Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile 10 Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala Glu Thr Ala 20 Gly Ala Arg 23 （ｄ）ＣＶ９０１ Pro Pro Gly Ser Val Thr Val Pro His Pro 10 Asn Ile Glu Glu Val Ala Leu Ser Thr Thr 20 Gly Glu Ile Pro Phe 25 （ｅ）ＣＶ９２６ Tyr Gly Lys Ala Ile Pro Leu Glu Val Ile 10 Lys Gly Gly Arg His Leu Ile Phe Cys His 20 Ser Lys Lys Lys Cys Asp Glu Leu Ala Ala 30 Lys 31 （ｆ）ＣＶ９６７ Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser Val Ile 10 Pro Thr Ser Gly Asp Val 16 （ｇ）ＣＶ９８７ Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Tyr Thr Gly 10 Asp Phe Asp Ser Val Ile Asp Cys Asn Thr 20 （ｈ）ＣＶ１０２６ Thr Leu Pro Gln Asp Ala Val Ser Arg Thr 10 Gln Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Lys 20 Pro Gly Ile Tyr Arg Phe Val Ala Pro 29
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4209201A JPH0656891A (ja) | 1992-08-05 | 1992-08-05 | Ｈｃｖ非構造領域のペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4209201A JPH0656891A (ja) | 1992-08-05 | 1992-08-05 | Ｈｃｖ非構造領域のペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0656891A true JPH0656891A (ja) | 1994-03-01 |
Family
ID=16569030
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4209201A Pending JPH0656891A (ja) | 1992-08-05 | 1992-08-05 | Ｈｃｖ非構造領域のペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0656891A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996006355A1 (fr) * | 1994-08-19 | 1996-02-29 | Dainabot Co., Ltd. | Reactif pour le dosage d'un anticorps dirige contre un antigene reduit et procede de dosage |
| EP0744467A2 (en) * | 1995-03-30 | 1996-11-27 | Eisai Co., Ltd. | Multiple antigenic peptide comprising at least two hepatitis C virus-associated peptides |
-
1992
- 1992-08-05 JP JP4209201A patent/JPH0656891A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996006355A1 (fr) * | 1994-08-19 | 1996-02-29 | Dainabot Co., Ltd. | Reactif pour le dosage d'un anticorps dirige contre un antigene reduit et procede de dosage |
| EP0744467A2 (en) * | 1995-03-30 | 1996-11-27 | Eisai Co., Ltd. | Multiple antigenic peptide comprising at least two hepatitis C virus-associated peptides |
| EP0744467A3 (en) * | 1995-03-30 | 1997-07-09 | Eisai Co Ltd | Multi-antigenic peptide comprising at least two peptides associated with the hepatitis C virus |
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